ACE NH2 使用指南

氨基柱可在正相、反相、弱阴离子交换和 HILIC 模式下使用。其出厂时保存在纯异丙醇溶剂中，对不同的使用模式我们给出如下建议：

运行参数：

1. pH 范围：2.0-7.0

2.压力：ACE NH2 不得超过 4000psi（275bar）；

ACE Excel NH2 不得超过 15000psi（1000bar）

3.柱温：不得超过 60°C

样品溶液的制备：

1.如可以的话，用流动相来溶解或稀释样品；如不可以，请先检查溶解后的样品在流动相中的溶解度；

2.进样前需使用 0.45 或 0.22μm 的滤膜过滤样品；

3.具有强酸或强碱性的样品，应将 pH 调节到色谱柱范围内再进样；

4.含蛋白样品要预先去除蛋白质，避免对氨基柱使用醛类和酮类化合物。

分析还原糖使用前后注意事项（特别重要）：

保存好的 ACE  NH2 柱（包括新柱），每次拿出来用于分析还原糖（异头物）之前，应按下列步骤进行操作来去除硅胶表面的质子，以便在开始分析之前获得最佳的峰形。

1.乙腈/水（7:3）,冲洗 20 倍柱体积；

2.乙腈/水（7:3），加 0.1% v/v  氨水溶液（氨水溶液浓度约 32%）,冲洗 50 倍柱体积；

3.乙腈/水（7:3）,冲洗 20 倍柱体积；

冲洗前：                                    冲洗后：

图 1. ACE 5μm NH2(50 x 2.1mm)，用含有 0.1% v/v NH3 的乙腈/水（75:25）冲洗前后的糖分析对比图。

0.21mL/min, 35℃,RID. 峰 1=果糖，峰 2=蔗糖，峰 3=乳糖.

ACE NH2 柱长期保存条件：

为了最大程度上延长色谱柱使用寿命，使用后先用乙腈/水（1：1）冲洗 20 倍柱体积，再用 100%异丙醇冲洗 20 倍柱体积，然后取下柱子塞紧柱堵头放置。

正相条件下使用：

1.使用前：提前将系统管路内溶剂正确替换至将要使用的正相流动相，避免盐析出、溶剂不互溶等问题，再连接色谱柱，用流动相冲洗至少 10 倍柱体积，将封存溶剂替换掉，待基线平稳后进样；

2.使用后：适当增大流动相中的强洗脱溶剂比例进行清洗，最后保存在异丙醇或正己烷中；

3.再生：依次用 10 倍柱体积的氯仿、异丙醇、二氯甲烷、流动相分别进行冲洗（如有压力高的现象， 可按此程序进行反冲色谱柱）；

反相、弱阴离子交换或 HILIC 条件下使用：

1.使用前：如色谱柱正保存在正相溶剂中，使用反相方法，必须先用两通连接系统和管路，用异丙醇冲洗，除去其中的乙腈、甲醇或水等。然后，再连接色谱柱，用至少 20 倍柱体积的异丙醇低流速冲洗过渡（一般对 250*4.6mm 色谱柱，0.5mL/min，需至少 3 小时；其它规格色谱柱请相应放大或缩小流速及时间），以除去正相保存溶液；再用至少 10 倍柱体积水/乙腈或甲醇(95:5)冲洗（不含缓冲盐的流动相可省去），最后用流动相平衡好即可使用。如色谱柱正保存在反相溶剂中，更换流动相时请确保新流动相与柱子原保存溶液可互溶，并不会导致盐析出。此步骤非常重要，如果没有充分过渡，会对柱效及保留时间等产生影响；

2.使用后：先用 95％水/有机相冲洗至少 10 倍柱体积，除去所用缓冲盐（不含缓冲盐的流动相可省去），再用 95%有机相/水冲洗至少 10 倍柱体积并保存。短期不用的话，可保存在反相溶剂中；若长期不用，用异丙醇保存。

3.再生：如正常清洗无效果并伴有压力升高的现象，可参照使用后清洗程序对色谱柱进行反冲；如果依然没有效果，可再用异丙醇低流速反冲。

色谱柱测试：

测试混标：咖啡因（140μg/mL）、尿嘧啶（85μg/mL）、尿苷（280μg/mL）混标溶剂：乙腈-水（90：10）

液相条件：见包装内测试报告进样量：2μL