ClearFirst-2000M型蛋白纯化系统

上海闪谱-蛋白纯化系统-组氨酸标签蛋白纯化介质的合成及其分离纯化

蛋白质的分离纯化是发展蛋白组学，研究蛋白质结构功能与应用的前提和基础。 本文研发了一种基于亲和性离子液体（AIL）/离子液体（IL）的组氨酸标签蛋白的纯化体系，经螯合金属离子（Cu2+、Zn2+、Ni2+）后应用于从大肠杆菌细胞裂解物中纯化组氨酸标签增强型绿色荧光蛋白。 结果表明：Cu2+-AIL/IL 对目标蛋白的亲和性能最高， 为 62%， 然而含有较多的杂蛋白成分；Zn2+-AIL/IL 的亲和效率约为 51%， 且纯化后目标蛋白的纯度高达90%，Ni2+-AIL/IL 的亲和能力最弱。 进一步将 Zn2+-AIL/IL 体系应用于直接纯化大肠杆菌中表达的组氨酸标签青霉素结合蛋白的细菌裂解液，所得目标蛋白纯度高达 95%。 这种方法为新型组氨酸标签蛋白纯化介质，从基础 研究拓展到产业化应用提供了理论依据，并可望将此类新型亲和介质应用到其它蛋白质的分离纯化。

上海闪谱-蛋白纯化系统-重组人促红细胞生成素纯化的研究进展

促红素能促进人前体红细胞的增殖和分化，从而使人体内红细胞数量增加。临床上主要用于贫血、组织断离以及癌症患者透析后的恢复。促红细胞生成素自1971年在羊的尿液中被提取出后，近30年以来人们不断对其进行研究。促红素蛋白纯化工艺从Myake的七步法完善到现在的三步纯化法。本文综述了促红细胞生出素蛋白纯化的发展历史以及促红素未来的发展方向。

上海闪谱-蛋白纯化系统-重组人IL_31蛋白纯化方法的比较研究

目的 比较两种方法纯化 rhIL-31 的效果。方法 将含 pET32a/rhIL-31 的重组菌 E.coli.BL21(DE3)经 IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果 镍琼脂糖凝胶 FF 层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论 比较重组人 IL-31 蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。

上海闪谱-蛋白纯化系统-重组蛋白纯化研究进展

随着基因工程技术的快速发展，重组蛋白表达技术越来越成熟，然而重组蛋白的分离纯化技术相对落后限制了重组蛋白的应用。本文着重介绍了目前重组蛋白分离纯化的主要技术及其特点和应用范围。

上海闪谱-蛋白纯化系统-藻蓝蛋白纯化的研究进展

文章综述了几种传统的分离纯化藻蓝蛋白的方法。重点介绍了双水相萃取法，分析了双水相萃取技术分离提纯藻蓝蛋白的优缺点，讨论了双水相萃取技术应用的技术难点和研究前景，同时阐明了双水相萃取技术的发展对分离纯化藻蓝蛋白具有重要意义。

上海闪谱-蛋白纯化系统-液相层析法在人血浆蛋白纯化中的应用

本文作者从4个方面讨论了液相层析法的优越性及其在血浆蛋白分离纯化中应用的可能性。层析法吸附剂特异性强，操作简单，周期短，易自动化，往往一两步层析就能替代多步沉淀。

上海闪谱-蛋白纯化系统-天然藻胆蛋白纯化技术研究进展

藻胆蛋白是蓝藻、红藻、隐藻和少数甲藻中的一类色素复合蛋白，在食品、化妆品、医疗诊断和生物工程方面有重要的应用。本文综述了国内外天然藻胆蛋白提取时的分离纯化方法，并通过比较指出了各种方法的优缺点，以期为高纯度藻胆蛋白的规模化提取技术的发展提供依据。

上海闪谱-蛋白纯化系统-疏水色谱法在蛋白复性方面的应用

疏水色谱与蛋白作用温和, 适用于活性蛋白的分离及复性, 是色谱复性中应用较多的方法。本文对疏水色谱法的保留机制、疏水固定相中柱型、无机填料、有机填料、均一孔填料的发展以及疏水色谱法在蛋白纯化和复性方面的应用作一综述。

上海闪谱-蛋白纯化系统-疏水层析技术及应用

疏水层析（Hydrophobic chromatography）是指固定相由非极性物质（如烃类、苯基等）组成的层析。本文综述了疏水层析技术的基本原理、常用介质、技术综合应用，探讨和展望了其发展方向和前景。

上海闪谱-蛋白纯化系统-生物技术领域中的制备用层析

最近对制备用层析材料的结构和层析操作方式的研究取得了一些重要进展。本文综述了制备用层析近来在生物技术方面的应用情况以及最新的固相层析介质和操作技术。

上海闪谱-蛋白纯化系统-人血清白蛋白纯化技术研究进展

本文综述了国内外关于血浆人血清白蛋白(pHSA)和基因重组人血清白蛋白(rHSA)分离纯化的进展和发展趋势。以冷乙醇沉淀为主的 pHSA 分离方法仍是目前多数工业采用的工艺, 但近年来发展的离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等多种色谱分离技术具有自动化程度高、生产周期短、更符合 GMP 等特点, 正在逐步取代传统的冷乙醇沉淀法。 当前用基因工程技术表达的人血清白蛋白对分离纯化提出了新的挑战。 为获得高纯度、安全、稳定的产品, 各种色谱分离技术得到更多的应用, 其中扩张床离子交换色谱可以省去离心、过滤等传统固液分离操作。 尽管 rHSA 的纯化技术已有一定的发展, 但纯化过程仍需进一步优化以提高产品纯度及收率。

上海闪谱-蛋白纯化系统-浅谈蛋白纯化技术的研究进展

本文根据蛋白质的特性，从其分子的带电性质，溶解度，分子大小以及配体特异性四个方面，对蛋白质纯化的方法进行研究。希望能为这一技术制备提供参考，并为其应用研究总结理论根据。

上海闪谱-蛋白纯化系统-胡萝卜细胞壁中伸展蛋白纯化的研究

主要研究了通过 CM-纤维素柱和 Sephadex G-75 柱色谱纯化胡萝卜细胞壁中的伸展蛋白。用 CM-纤维素柱色谱纯化胡萝卜细胞壁蛋白时，得到两个组分；对某个组分进一步采用 Sephadex G-75 柱色谱纯化。并对这些组分进行氨基酸含量及分子量测定，再根据各组分的氨基酸含量及其分子量来初步鉴定属于伸展蛋白的组分。

上海闪谱-蛋白纯化系统-豆渣细胞壁中伸展蛋白纯化的研究

本文主要研究了通过 CM- 纤维素柱和 Sephadex G-75 柱色谱纯化豆渣细胞壁中的伸展蛋白。用 CM- 纤维素柱色谱纯化豆渣细胞壁蛋白时，得到 3 个组分；对某个组分进一步采用 Sephadex G-75 柱色谱纯化。并对这些组分进行氨基酸含量及分子量测定, 再根据各组分的氨基酸含量及其分子量来初步鉴定属于伸展蛋白的组分。

上海闪谱-蛋白纯化系统-淀粉样蛋白纯化方法的研究进展

淀粉样纤维是一种富含 β 折叠的高度有序的由淀粉样蛋白前体聚集而成的蛋白聚集体。由于淀粉样蛋白较普通蛋白具有不稳定、易于聚集的特性，此类蛋白的表达和纯化与常规方法有较明显的差别，主要体现在更为严格的技术和过程要求。基于近年来淀粉样蛋白分离纯化技术领域取得的进展，并结合作者的相关研究，总结淀粉样蛋白的分析和制样方法，为淀粉样蛋白沉积疾病的分子机理研究提供理论依据和技术支撑。

上海闪谱-蛋白纯化系统-低温胁迫小麦苗冰结构蛋白纯化的研究

以研究低温胁迫小麦苗冰结构蛋白( ISP) 纯化为目的，以小麦苗为对象，经低温胁迫，并采用粗分离、饱和硫酸铵溶液沉淀、DEAE－Cellulose 52 层析、sephadex－G75 凝胶层析 4 个步骤对其中 ISP 进行纯化，分别采用差示扫描量热法( DSC) 、热休克处理法和聚丙烯酰氨凝胶电泳( SDS－PAGE) 测定各纯化步骤所得 ISP 的热滞活性( THA) 、冰晶重结晶抑制能力( ICP) 和分子质量( MW) ，并计算小麦苗存活率和各纯化步骤的得率。实验结果表明，梯度低温胁迫的小 麦苗存活率与恒温低温胁迫相比提高了 240% ，小麦苗提取物( AWSE) 中蛋白质含量与未低温胁迫小麦苗提取物( NAWSE) 相比提高了 7.8% ; 以 THA 表征的纯化倍数( T1 ) 和以 ICP 表征的纯化倍数( T2 ) 分别为 451.15 和 137.60，得率为 2.85% ，THA 为 0.180 ℃ ( 5 mg /mL) ，ICP 为 70.03% ，分子质量范围为 20.1～31.0 ku; 与 THA 相比，ISP 在较低浓度下即可达到 ICP 的峰值。小麦苗可作为制备冰结构蛋白的天然植物资源。

上海闪谱-蛋白纯化系统-蛋白质纯化的方法选择

随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对于上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白，重复性良好。这就要求应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的最好方法去纯化蛋白。在实验室条件下的好方法却可能在大规模生产应用中失败，因为后者要求规模化，且在每日的应用中要有很好的重复性。本文综述了蛋白质纯化的基本原则和各种蛋白纯化技术的原理、优点及局限性，以期对蛋白纯化的方法选择及整体方案的制定提供一定的指导。

上海闪谱-蛋白纯化系统-蛋白纯化方法和上样量对玉米叶片蛋白双向电泳图谱的影响

以玉米(Zea mays L.)中糯二号为材料， 采用改进的 TCA(三氯乙酸)- 丙酮沉淀法提取玉米叶片的 蛋 白质， 并从蛋白样品纯化和上样量 2 个方面对玉米叶片双向电泳体系进行优化。 结果表明： 蛋白纯化后且上样量为 150 μg 时， 能获得背景清晰， 横条纹、 竖条纹少， 蛋白点多的双向电泳图谱。 这为开展玉米中糯二号的蛋白 质组学研究提供技术支持。

上海闪谱-蛋白纯化系统-蛋白A亲和层析法纯化单克隆抗体工艺的优化

治疗性单克隆抗体药物已成为生物医药领域市场最主要的产品类别。蛋白 A 亲和层析作为第一步捕获抗体蛋白最为有效的手段仍然在现有单克隆抗体纯化平台中占据主导地位。在本研究中，首先开发了一种基于低 pH 处理抗体细胞回收液的新型细胞液回收技术，该技术能有效去除宿主相关污染物 (非组蛋白宿主杂质蛋白、组蛋白、DNA、蛋白聚合物等)，同时保证较高的抗体回收率。通过该技术有效预处理后，蛋白 A 纯化效率可提高 10 倍左右，并且有效避免了抗体洗脱液中和后浊度的上升，大大减轻了后续蛋白纯化的压力。同时我们也对酸性处理中各种宿主杂质去除机制进行了研究。然后，预处理的洗脱液再经一步 Capto adhere 色谱纯化，非组蛋白宿主杂质蛋白降低至 5 ppm、DNA小于 1 ppb、组蛋白降低至检测限以下、蛋白聚合物小于 0.01%。总过程抗体蛋白收率 87%。该两步法抗体纯化技术可有效集成至当前主流抗体纯化平台，具有良好的大规模应用价值。

上海闪谱-蛋白纯化系统-包涵体蛋白纯化方法的探讨

目的：探讨包涵体蛋白的表达条件及纯化方法。方法：将PQE30-Cystatin转化大肠杆菌M15，通过IPTG诱导蛋白表达。未来能够获得可溶的且有活性的Cystatin C(Cys C)，本文摸索了Cys C包涵体的复杂条件及蛋白表达条件。结果：改变缓冲体系pH值及离子强度等多种方法均不能减少蛋白在复性过程中的沉淀；同时，改变蛋白表达的OD600、培养基pH值、表达时间等均未得到可溶性的表达蛋白；而改变诱导蛋白表达所用的IPTC浓度后发现在低浓度（0.005mM）的IPTC诱导条件下，该蛋白有少量的表达，但是表达量明显低于1mM IPTC的诱导条件。结论：对于包涵体蛋白进行方法摸索的过程中，既要对包涵体蛋白本身进行研究，更要对蛋白表达条件进行进一步的优化，以表达可溶的蛋白。

上海闪谱-蛋白纯化系统-包涵体蛋白3种纯化方法的比较

目的：比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型（EV71）VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法：分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析（IMAC）及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化，蛋白垂直（SDS-PAGE）电泳检测蛋白纯化效果。结果：差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化，纯化效果较好，但存在蛋白损失较多，且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高，且蛋白性状稳定，但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论：差速离心法可用于大批量蛋白纯化，纯化蛋白应避免反复冻融，可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白，其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。