实验记录手册|细胞培养实验的离心机选择

实验记录手册|细胞培养实验的离心机选择

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

细胞培养实验室组建的基本要求:
1、细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。
2、细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。
3、细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为10万级洁净环境的洁净室。而洗刷消毒工作设在洁净室外，避免物品污染洁净室内环境。细胞洁净室需要一个空调系统并对外界保持一定的正压。
4、解剖实验室主要用于对器官组织的分离，需要有无菌操作台、解剖显微镜、各种手术器材等。 

组织细胞培养室除一般实验室的普通常规设备外，尚有一些特殊需要的设备。基本可分为两大类：
 
I. 细胞培养实验室常用的基本仪器设备
1.显微镜：倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
2.培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37℃，温差变化一般不应超过±0.5℃，细胞在温度升高2℃ 时，持续数小时即不能耐受，40℃以上将很快死亡。因此需要有能控制温度的培养箱，如具有较高灵敏度的恒温培养箱及CO2培养箱。
3.干燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。
4.水纯化装置：细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。
5.冰箱：细胞培养室必须配备。
a、普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水等培养用的物品及短期保存组织标本。
b、低温冰箱（-20℃）——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。
6.细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。
7.离心机：进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用实验室离心机。一般可常规配置4000rpm的台式离心机，例如细胞沉降，使用低速离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。

8.天平：常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。
9.消毒器：一般为高压蒸汽灭菌锅，直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。
10.滤器：目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。目前常使用的滤器有玻璃滤器和微孔滤器，各种滤器有其使用原理和特点。
 
常用的培养器皿：
 

培养用器皿是供细胞接种、生长等用的器皿，可由透明度好、无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。细胞培养中需要的各种耗材,各类细胞培养板，细胞培养瓶，平皿移液管等。
培养瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。
培养皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。培养板分为各种规格，常用的规格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

 
II、细胞培养实验室特殊设备
细胞培养实验室除了应配备上述的常用基本设备以外，如有条件，可添置一些特殊或先进的设备仪器，以便更有效、更精确、更深入地进行实验室工作。例如：
（1）酶联免疫检测仪——可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。
（2） 超低温冰箱（-80℃）——便于储存某些试剂及标本。
（3）旋转培养器——用于某些特殊细胞或需要收获大量细胞的培养。
（4） 荧光显微镜——进行荧光染色样本的观察。
（5） 流式细胞仪——可更精确及快速检测细胞。
（6）用于检测细胞培养条件的各种仪器，例如专门为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培养分析仪、手提式CO2浓度测定仪等。

很多人会询问，细胞培养获得成功的关键要素是什么? 小编的经验就是：

1.了解所培养细胞的生长周期；

2 细心+实验条件允许

3 培养细胞需要有备份的条件下去尝试新的培养方式，否则实验失败了导致细胞株也没了。实验记录详细完整也是很关键的

4.选择合适的实验室仪器。

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