2024年8月8-9日，由丹纳赫生命科学与精科医学联合举办的“类器官培养与成像分析技术高级培训班”在广州国际生物岛丹纳赫中国生命科学平台大湾区总部圆满落下帷幕。本次培训汇聚了来自全国各地的生命科学研究者和行业从业者，从理论到实践全面探讨类器官技术的前沿应用，为参会者提供了深度学习和实践操作的机会。   开班仪式：为期两天的知识盛宴拉开序幕开班仪式上，李宏教授介绍了此次培训班的背景和意义。他指出，类器官技术作为一种创新的体外模型，正在迅速崛起并广泛应用于肿瘤研究、药物筛选和再生医学等领域。这种高度模拟体内组织和器官的技术，不仅提高了科学研究的精度，也推动了个性化医疗的发展。因此，掌握类器官的培养与成像分析技术，已经成为当今生命科学研究者的重要技能。  广州市精科生命科学研究院首席科学家/类器官事业部总监 李宏教授理论知识培训1          类器官技术的发展与应用开场后的首个讲座由精科医学类器官事业部医学部总监郭翠滨带来，讲座题为“类器官技术的发展与应用”。其中她详细阐述了类器官技术如何在肿瘤研究中发挥关键作用，通过多个案例研究，展示了类器官模型在药物筛选、靶向治疗研究中的应用实例。她指出，类器官能够更好地模拟肿瘤微环境，为药物敏感性测试和抗癌药物的开发提供了一个强有力的平台。通过类器官模型，研究者可以更精准地预测药物在人体内的反应，这对于个性化治疗的实施具有重大意义。  精科医学类器官事业部医学部总监  郭翠滨2          类器官培养的观察与检测技术随后，由丹纳赫生命科学旗下美谷分子仪器应用专家侯昊丽主讲“类器官培养的观察与检测技术”，进一步深入探讨了类器官培养与观察分析的细节。她从类器官培养方法的选择、培养条件的优化，到类器官的成像观察及用于药敏分析的相关技术，逐一进行讲解。她还分享了美谷分子仪器提供的前沿分析设备，比如微孔板读板机、高内涵成像分析设备以及自动化类器官培养设备在类器官培养与分析中的相关应用，为参会者提供了宝贵的经验。  美谷分子仪器应用专家  侯昊丽3          类器官鉴定与抗体选择丹纳赫生命科学旗下Abcam中国大客户经理李泰霖博士就“类器官鉴定与抗体选择”进行了深入讲解。他通过详细的方案分析了当前类器官的主要鉴定技术，包括形态学分析、流式细胞术分析、基因测序等。在这些技术应用中，抗体担当了重要的角色，选择合适的抗体可以提高检测的准确性和灵敏性，降低背景带来的假信号。Abcam中国可提供多种抗体以辅助类器官分析研究。此外，李博士进一步介绍了如何使用Abcam的官网检索相关的抗体，以及如何阅读关于抗体的产品参数信息和注意事项。这些经验分享将有助于研究者提高类器官的鉴定分析能力。  Abcam中国大客户经理 李泰霖博士4          类器官在临床和科研上的应用精科医学类器官事业部高级工程师胡琼为我们介绍了类器官技术在临床和科研中的应用。她讲解的内容涵盖了类器官的分类、研究方向、实验流程及其在肿瘤研究、药物筛选、精准医疗等方面的具体应用，并介绍了类器官技术在乳腺癌、胰腺癌等疾病治疗中的临床案例，展示了类器官在新药研发、毒性研究等领域的潜力。  精科医学类器官事业部高级工程师 胡琼5          类器官在病理全流程制片的方法与技巧来自丹纳赫临床诊断旗下徕卡生物系统的应用专家周环则聚焦讲解了类器官的病理制片相关技术，并提供了有价值的经验信息。在类器官的鉴定与分析中，通过病理制片染色是常见的技术方法，而制片的过程中需要注意的地方较多。周环介绍了常见的石蜡包埋样本与冰冻切片样本的制样与切片过程，尤其对类器官的制片方法进行了详细讲解。另一方面，她针对制片过程中常见的问题，比如切片破裂、切片中产生皱纹等现象进行了描述，并提供了相应的解决方法。这些经验都有助于研究者克服制片的困难，同时利用徕卡生物系统提供的先进制片设备，能有效提高制片的效率。  徕卡生物系统应用专家 周环6          类器官共培养技术和应用精科医学类器官事业部实验室总监李婷婷带来了题为“类器官共培养模型研究与应用”的分享：共培养技术是一种基于类器官培养开发的创新生物技术，通过类器官与其他细胞类型一起培养，模拟人体内部环境，以便研究不同细胞类型之间的相互作用，在医学研究中其已经展现了在模拟肿瘤微环境及评估免疫治疗效果方面的潜力。分享从类器官共培养的类型、应用方向及面临的技术挑战等问题进行分析，详细讲解了类器官共培养的培养方式、实验评价及共培养应用方案。  精科医学类器官事业部实验室总监  李婷婷7          类器官深度成像丹纳赫生命科学旗下徕卡显微系统的产品经理南希介绍了最新的光片成像技术。通过利用徕卡Viventis LS2 Live活体光片显微镜，可以对活体的类器官进行多角度、多位置的成像，尽可能地观察类器官的立体结构与细节。同时，利用徕卡STELLARIS共聚焦显微镜，可以进一步对类器官中的细微结构、亚细胞结构进行成像分析。通过精确的成像，研究者可以获得更多的细胞层次信息，从而对类器官的功能性进行更深入的研究。  徕卡显微系统产品经理 南希8          类器官共培养长时程观察技术介绍针对类器官共培养，长时间的拍摄观察能够直观的反映外周细胞与类器官的相互作用及运动轨迹，这种信息将有助于我们从整个类器官的培养过程中分析类器官与共培养细胞的作用机制及作用强度。丹纳赫生命科学旗下徕卡显微系统的产品经理童昕，为我们展示了利用MICA全场景成像分析系统进行类器官共培养的成像方案，及实际的共培养案例。通过进一步地解读这些成像结果，可以让我们对类器官共培养有更为直观的理解。        9          类器官共培养科研案例分享精科医学高级工程师陈雅婷介绍了类器官共培养技术在肿瘤研究中的应用，特别是与免疫细胞共培养以模拟肿瘤微环境的策略。她分享了多个共培养案例，包括骨肉瘤与工程菌、膀胱癌与免疫细胞共培养等，通过这些案例展示了共培养模型在评估癌症免疫治疗、药物筛选和研究肿瘤免疫逃逸机制方面的潜力。此外，她还探讨了共培养模型的局限性，如无法完全复制体内环境等，但其在优化免疫疗法和高通量药物筛选方面具有重要应用价值。  精科医学类器官事业部高级工程师 陈雅婷10          类器官共培养技术中的流式细胞术应用来自丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特生命科学的应用专家贺姮详细地讲解了流式细胞术的原理，以及在类器官研究中的应用。在类器官培养中，流式细胞术可以实现传统细胞培养过程中需要的分析应用，包括细胞周期、细胞凋亡分析等。同时针对类器官共培养，利用流式细胞术还可以进一步分析类器官的细胞亚型、外周免疫细胞种类等。她还展示了利用贝克曼库尔特的CytoFLEX流式细胞仪进行免疫细胞类器官共培养的分析结果。流式细胞术的应用将有助于研究者从细胞层面进一步分析类器官共培养过程中的细胞反应。  贝克曼库尔特生命科学应用专家 贺姮11          类器官的高级图像数据分析随着人工智能技术的进一步发展和普及，AI图像分析技术逐渐被应用到科研中。来自丹纳赫生命科学旗下徕卡显微系统的产品经理李丹展示了徕卡Aivia图像分析软件在类器官分析方面的应用，包括细胞计数、细胞类群分割、三维图像构建等。在这一环节中，学员们还亲自参与到成像数据的处理与分析中。在讲师的指导下，学员们利用VR设备体验了AI软件的三维图像构建功能，进而实际观察类器官中的每个细胞结构和空间分布。这一环节帮助学员们更好地掌握了数据分析的基本技能，同时也为他们未来的研究提供了实用的工具和方法。  徕卡显微系统产品经理 李丹  学员体验VR细胞观察技术实验操作培训为了加深学员对理论知识的理解，课程还安排了两天的实操环节，实操培训包括：类器官培养、复苏与传代、类器官共培养体系搭建等。讲师们在现场进行演示，并手把手带领学员们进行相关步骤的操作。在实验台前，学员们专注地按照讲师的指示进行每一步操作，沉浸式地学习这些实操技术。实操环节不仅让大家将理论与实践相结合，还为他们未来的实验工作打下了坚实的基础。实验操作现场  通过徕卡显微系统的Ivesta 3格林诺夫体视显微镜观察待收集的组织        精科医学技术员手把手指导学员进行类器官培养的实验操作        现场指导如何分辨类器官以及关键的观察指标        离心分离淋巴细胞用于类器官共培养体系搭建        学习使用徕卡显微系统的MICA全场景成像分析系统进行类器官共培养的长时间观察，以及徕卡Mateo FL进行类器官共培养体系的荧光成像观察        部分学员的类器官共培养体系荧光成像结果，拍摄自徕卡Mateo FL荧光倒置显微镜结语：未来类器官研究的无尽可能培训班的最后，我们为学员们安排了统一的答疑环节，并颁发了结业证书。通过这次培训，学员们不仅掌握了类器官培养与成像分析的关键技术，还拓宽了自己的研究视野，更重要的是结识了许多志同道合的同行朋友。            李宏教授现场答疑和为学员颁发结业证书本次培训班内容紧凑、实用性强，学员们的积极参与和高度评价，充分体现了类器官技术在现代生命科学研究中的重要性和关注度。丹纳赫生命科学与精科生物将继续致力于推动该前沿技术的普及与应用，期待在未来能够为广大科研工作者提供更多的学习与交流机会。相信通过不断的学习与实践，类器官技术将为生命科学的研究与应用带来更加深远的影响。          充实的学习，难忘的相聚        关于丹纳赫生命科学      在丹纳赫，我们汇集科学、技术和运营的能力，让未来科技对今日生活的影响得以加速实现。我们携手全球客户，构建方案，解决他们最为复杂的挑战，将科学的力量变为现实。我们的全球团队正在创造生命科学、医学诊断、生物技术等领域的未来。丹纳赫生命科学平台服务全球领先的生命科学公司，加速突破创新，实现人类更健康的生活。我们与科研、临床及政府机构的科学家们长期保持合作，应用我们在科学和运营领域的所长，助力他们深入理解疾病原理和机制，研发更有效的治疗方法和开发更高效的工作流程。我们齐心协力，加速生命科学对人类生活的积极影响。丹纳赫中国生命科学平台成立于2019年6月1日，旨在扎根中国市场，为中国的用户提供更好的产品和服务，着力于打造全方位的精准医学和生物制药整体化解决方案。平台目前拥有IDT埃德特、Abcam艾博抗、贝克曼库尔特生命科学、美谷分子仪器、IDBS、SCIEX、艾杰尔-飞诺美、徕卡显微系统、Aldevron和颇尔等诸多知名品牌。在精准医学和生物药领域，丹纳赫生命科学基于中国客户的实际需求场景，不断开发及完善相关分析解决方案和工作流程，目前在合成生物学、多组学研究、类器官研究、肿瘤精准诊疗、抗感染检测、母婴保健检测等方面拥有多维度丰富的解决方案，在抗体药物、基因治疗药物、细胞治疗药物、核酸药物、新型疫苗等众多生物药领域拥有从研发到质控分析等全方位成熟且颇具优势的综合方案。关于精科医学      精科医学作为中国类器官技术转化先行者，在类器官培养上积累了丰富的经验，涵盖了肿瘤类器官疾病模型 (乳腺癌、肺癌、胃肠癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、肾癌、甲状腺癌、卵巢癌、宫颈癌、骨肉瘤以及脑肿瘤等)、非肿瘤类器官疾病模型以及正常组织类器官模型。其中基于活检组织的微量建模培养成功率极高，同时可以实现穿刺标本的“一样两检”(类器官药敏+NGS)。精科拥有自主研发的类器官培养技术和试剂盒，能够有效地延长样本保护期，扩大地域覆盖面。此外精科医学还和多家医院、科研机构和药企开展科研、临床和CRO服务等深度合作。目前精科医学已经在类器官建模方法、类器官鉴定、药物敏感性检测方法、类器官共培养等多个重要技术上实现突破，同时是中国首个乳腺类器官团体标准制定者。    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                        关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。         

   徕卡显微系统的 DLS 显微镜系统是一种创新概念，将光片显微技术集成到共聚焦平台中。由于其独特的光学结构，样本可以安装在标准玻璃底培养皿上，与传统的安装程序相比，几乎不需要或只需很少的适应。在这里，我们介绍了一种便捷的方法，能够快速准备样本以进行光片成像。在光片显微镜中，样本准备是至关重要的。理想情况下，样本准备应尽可能简单和快速。DLS 系统的优势在于其支持水平安装并提供了便捷的样本触达。样本准备有两个基本要求：一是样本需要放置在检测物镜的焦平面内（位于 TwinFlect 镜子之间）；二是样本需稍微高于培养皿底部，以确保镜子或光片可以到达样本的远端部分。  图1展示了样本在检测物镜的自由区域中的最佳放置位置定制的 U 型玻璃毛细管，可适用于不同尺寸的 TwinFlect 镜子，有助于用户以直观的方式满足这些样本准备要求。  图2展示了通过使用U型玻璃毛细管实现样本的最佳定位。工作流程视频剪辑将引导您了解使用U型玻璃毛细管进行样本准备的完整工作流程。材料与方法U型毛细管有两种不同的尺寸可供选择：外径：1.5毫米；内径：1.03毫米，长度20毫米（订单号158007061，50根毛细管）→ 适用于TwinFlect 2.5毫米、TwinFlect 5毫米和TwinFlect 7.8毫米。长度为20毫米的U型玻璃毛细管非常适合与直径为35毫米的玻璃底培养皿（如Greiner、ibidi、Matek等）配合使用。相关产品  Viventis LS2 Live 双视野光片荧光显微镜点击此处申请样机试用    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                        关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。          

      (图片来自网络）瑞典皇家科学院宣布，将2014年诺贝尔化学奖授予埃里克•白兹格（Eric Betzig）、斯蒂芬•黑尔（Stefan W. Hell）和威廉•莫尔纳（William E. Moerner），以表彰他们为发展超高分辨率荧光显微镜所作的贡献。 获奖理由很长时间以来，人们都认为光学显微技术无法突破一条极限：它永远不可能获得比所用光的半波长更高的分辨率，这被称为“阿贝衍射极限”。然而，2014年诺贝尔化学奖的得主使用荧光分子，巧妙地绕开了这一极限。他们突破性的工作将光学显微技术带到了纳米尺度。成果解析埃里克•白兹格、斯蒂芬•黑尔和威廉•莫尔纳由于超越了0.2微米这个极限而被授予2014年的诺贝尔化学奖。由于他们的贡献，现在通过光学显微镜我们可以观察到纳米世界。此次诺贝尔化学奖授予两项不同的工作。其中一项是斯蒂芬•黑尔在2000年开发的STED显微镜技术。这项技术同时使用两束激光，其中一束激发荧光分子发光，另外一束将除了一个纳米尺寸之外的荧光全部猝灭掉。这样，通过一个纳米一个纳米地扫描样品，我们可以获得分辨率高于阿贝衍射极限的图像。另一项工作来自于埃里克•白兹格和威廉•莫尔纳，他们各自独立地建立了单分子显微镜(single molecule microscopy)的基础。这项成果可以将单个分子的荧光打开或者关掉。科学家们对同一区域反复成像，每次只允许几个分散的分子发光。将这些图像叠加就获得了分辨率达到纳米尺 度的图像。在2006年，埃里克•白兹格首次使用了这种方法。获奖者简介      斯蒂芬•黑尔（StefanW. Hell）：德国人。1962年出生于罗马尼亚的阿拉德（Arad），1990年在德国海德堡大学获得博士学位。现为哥廷根马克斯•普朗克生物物理化学研究所主任，和位于德国海德堡的德国癌症研究中心部门负责人。早在2004年徕卡显微系统就与Stefan Hell合作推出了商业化4Pi超高分辨显微镜，开启了超高分辨产品商业化的先河。2007年,他将STED专利技术授权徕卡研发STED超高分辨显微镜，推向市场后，该系列产品广受好评。      埃里克•白兹格（Eric Betzig）：美国人。1960年生于美国密歇根州安阿伯（Ann Arbor）市，1988年获康奈尔大学博士学位。现为美国弗吉尼亚州阿什伯恩市（Ashburn）霍华德•休斯医学研究所珍莉亚农场研究园区研究组长。      威廉•莫尔纳（William E. Moerner）：美国人。1953年出生于加利福尼亚州的普莱森顿（Pleasanton），1982年在康奈尔大学获博士学位。现为斯坦福大学哈里•莫舍化学教授和应用物理学兼职教授。2014年诺贝尔化学奖获奖者们利用荧光分子为细小的物体“标记”，让它们在显微镜下变得五彩缤纷，轮廓清晰，使科学家能在显微镜下一瞥纳米级别的微小世界。今天，纳米显微技术已经在全球被广泛使用，并且不断在为人类做出新的贡献。  诺贝尔化学奖评选委员会在声明中说，科学家的发现在真正意义上扩大了科学家们的视野，从此以后，科学家们就能在显微镜下看到生物细胞内纳米级别的粒子运动的情况。他们可以看到微小的粒子是如何在神经细胞之间形成突触的，也可以看到那些在帕金森症、阿茨海默症等等疾病的萌发中起到关键作用的微小蛋白质粒子，还能跟踪胚胎分裂时单个蛋白质分子的运动轨迹。参加问卷调研，领取精美小礼品！    8月底活动截止届时答题满分的小伙伴会收到我们的小礼品    问卷答案的答案可以在之前的推文内寻找哦~徕卡175周年：徕卡品牌的发展历程，也是显微技术的发展史          徕卡显微咨询电话：400-877-0075                        关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。          

       本文介绍了一种配备自动化和可重复的 DIC（微分干涉对比）成像的 6 英寸晶圆检测显微镜，无论用户的技能水平如何。制造集成电路（IC）芯片和半导体组件需要进行晶圆检测，以验证是否存在影响性能的缺陷。这种检测通常使用光学显微镜进行质量控制、故障分析和研发。为了有效地可视化晶圆上结构之间的细微高度差异，可以使用 DIC 。在半导体器件生产过程中，晶圆检验对于识别和减少可能影响器件性能的缺陷至关重要。为了提高检验的精确性和效率，光学显微镜方案应结合不同的对比方法，提供关于图案化晶圆上可能存在的任何缺陷的准确可靠信息。其中，在晶圆检验中起重要作用的一种对比方法是微分干涉对比（DIC）。什么是 DIC 以及为什么要使用它？微分干涉对比（DIC） ，也被称为诺马斯基对比，有助于可视化样品表面的高度差异[1,2]。DIC 使用沃拉斯顿棱镜、起偏器和检偏器（参见图1A）。起偏器和检偏器的偏振面相互垂直（交叉于 90° )   。通过棱镜的偏振光被分割成两束具有 90° 偏振差异的广播。在离开棱镜后，这两束光波从样品表面反射，并朝着物镜返回。由于样品表面形态或光学性质的差异，光线可能经历不同的光学路径长度，导致一束光与另一束光相比发生相移。经过物镜棱镜和分析器的再次通过后，光线重新合并成一束，然后它们之间可以发生干涉。DIC 图像显示出强度和颜色的变化，从而呈现出纹理的外观。DIC 使得通常使用明场或暗场等其他类型的照明无法轻易观察到的高度差异变得明显可见。有关 DIC 的更多信息，请参考参考文献1和2。下图是一个使用微分干涉对比（DIC）与明场和暗场照明相比，增强样品表面高度差异的示例（见图1）。DIC 被用来拍摄一 个图案化的晶圆样品。在 DIC 下，特征之间的高度差异更加明显可见。                        图1:用 DIC、明场和暗场照明成像的图案化晶圆样品图像：A) 显微镜光学中的入射光路径用于 DIC 和B) 样品图像；C) 明场的入射光路径和D) 样品图像；以及E) 暗场的入射光路径和F) 样品图像。使用 DIC 时的挑战：DIC 能够让使用者观察到晶圆上结构之间的微小高度差异，但对许多用户来说，使用起来可能相当复杂。正确调整 DIC 棱镜对于实现最佳对比度和准确、可重复的结果至关重要。例如，在 DIC 图像中，样品结构的垂直方向（进入或离开样品的水平面）在很大程度上取决于棱镜对光波的剪切。因此，剪切影响观察到的结构之间的任何高度差异，即图像中的一个结构是否看起来比另一个更高或更低。剪切通常表示为具有正向或负向的偏差（参见下文图2） ，但偏差通常不与实际的高度差异相关。对于大多数光学显微镜，除了起偏器和检偏器的交叉之外，还需要手动调整 DIC 棱镜。然而，用户应该具有高水平的经验才能获得可比较、一致的 DIC 结果。获得具有非常好 DIC 对比度的图像可能需要用户花费大量的时间和精力进行手动调整。  图2:使用 DIC 拍摄的图案化晶圆区域的图像，具有：A) 负偏差，B) 无偏差，和 C) 正偏差。加号和正方形形状的边框在负偏差时看起来像是从表面升起，在正偏差时则 像是陷入表面。自动化和可重复的 DIC 成像的优势对于手动 DIC 操作，显微镜的照明和对比度设置必须始终由用户直接进行调整。图像结果在很大程度上取决于用户的经验和技能水平。然而，通过提供自动化 DIC 操作的显微镜，可以高效地实现用于质量控制（QC）、失效分析和研发（R&D）的晶圆检查工作流程。即使是经验较少的用户也可以轻松地进行可重复的 DIC 成像，只需进行最少的设置更改。只需按下按钮，就可以选择适当的棱镜并调整其位置以实现所需的入射光波的剪切，此外，设置会自动存储并易于调用。当使用 DIC 时，这一特性对于可靠的文档记录也是必不可少的。徕卡的可重复 DIC 解决方案使用 DM6 M 显微镜（参见图3） ，可以快速可靠地检查6英寸晶圆。由于以下特点，它提供了晶圆和半导体组件的自动化和 可重复的 DIC 成像：专为 6 英寸晶圆设计的载物台；优化十字交叉的起偏器和检偏器（称为 ICR 滤光片）；通过棱镜的电动编码定位准确回忆 DIC 设置；由于专用的 DIC 棱镜和 ICR 滤光片，实现均匀的对比度；由于自动化的显微镜操作，正确选择和调整棱镜和 ICR 滤块，使用起来快速且容易。在工作区域节省空间方面还有额外的好处，因为 DM6 M 的占地面积比通常用于晶圆检查的显微镜要小。  图3:使用安装了 6 英寸晶片平台的 DM6 M 显微镜进行晶片检测的示例。图4展示了使用 DM6 M 显微镜和可重复 DIC 技术拍摄的图案化晶圆图像。为了比较的目的，图5也展示了同一晶圆在明场和暗场照明下记录的图像。                图4：使用 DM6 M 显微镜，采用具有负偏移（A和C）和正偏移（B和D）的光波剪切的差分干涉对比（DIC）技术，对图 案化晶圆的不同区域进行成像。                图5: 图4中显示的图案化晶圆的相同区域，但这次是使用DM6 M显微镜在A)明场和B)暗场照明下成像。总结和结论描述了一种带有自动化和可重复的微分干涉对比（DIC）技术的 6 英寸晶圆检查显微镜，即带有晶圆载物台的 DM6 M。在半导体行业中，晶圆检查用于质量控制（QC）、失效分析和研发（R&D） ，通常需要使用各种对比方法的光学显微镜。DIC 技术能够高效地可视化图案化晶圆上结构之间的微小高度差异。即使是经验较少的用户，使用自动化和可重复的 DIC 也能在检查期间高效地进行 DIC 成像。参考文献：1. D. Diez, J. DeRose，《超越明场》章节，《金相学 - 简介：如何揭示金属和合金的微观结构特征》，   Science Lab （2020 年）徕卡显微系统。2. J. DeRose, D.R. Barbero，《使用显微镜对比方法进行快速半导体检测：通过光学显微镜揭示关键细节，在电子行业 中高效可靠地进行半导体质量控制》，  Science Lab（2023 年）徕卡显微系统。《晶圆上的光刻胶残留和有机污染物的可视化》      点击免费下载《6英寸晶圆检测显微镜：可靠观察细微高度差异》      点击免费下载    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                        关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。          

       深入了解锂电池系统需要高质量的表面处理，以评估其内部结构和形态。然而，快速简单地制备原始横截面可能由于所涉及材料的性质和电池结构而变得困难。多数材料系统通常使用切割、包埋、研磨、抛光等纯机械方法制备横截面。在这种情况下，单纯的机械制备不足以对电池进行高分辨率的 SEM 分析。具体而言，电池正极的脆性材料在切割时可能会过度碎裂，而较软的材料(例如锂)在抛光时可能会涂抹掉多孔结构和膜结构，导致样品结构模糊、孔隙被覆盖并出现空隙。在这里，我们详细讨论了用于 SEM 分析的锂离子电池制备步骤，以及如何通过宽离子束研磨消除机械制备中的伪影。宽离子束研磨介绍宽离子束研磨利用离子化氩气轰击样品，并从样品中物理溅射原子。在横截面中进行切割(也称为斜面切割)时，如这里所示，碳化钨掩模位于离子束和样品之间，用于定义横截面的位置，并保护样品的前表面。如果操作得当，无论样品材料的性质或成分如何，斜面切割过程都会产生原始横截面。电子显微镜分析用锂电池的分步制备在本应用注意事项中，机械制备和宽离子束研磨相结合，用于制备电池系统的两个组件——锂镍锰钴氧化物/铝 (Li-NMC/Al) 电极和铅 (Pb) 板栅。对于两种样品，机械制备和离子研磨遵循相似的方案。使用徕卡显微系统 EM TXP 靶表面处理系统进行机械制备，这是一种高精度的台式设备，可用于锯、磨、抛光和碾磨样品，并可进行原位样品观察。在徕卡 EM TIC3X 宽离子束研磨系统上进行离子研磨，以获得最终的原始横截面。  图 1：EM TXP 机械制备系统(左)和 EM TIC3X 宽离子束研磨机(右)。制备方案Li-MNC 极片材料和铅栅板这两个样本都使用双组分环氧树脂安装在载玻片之间，然后固定在徕卡 TIC3X 样品架上，再使用 TXP 制备。将样品固定在载玻片之间为样品提供了额外支撑，也不必将样品完全包埋在环氧树脂等其他固定材料中。这也减少了需要削洗和抛光的表面积，并使样品在整个工作流程中都安装在单个样品托上。a机械制备然后将样品安装在 TXP 夹头上，并使用金刚石研磨箔在 TXP 上研磨至 9 微米光洁度。然后将样品倾斜至 60° 角，并使用 400 粒度的碳化硅砂纸在正面载玻片上磨出斜面。这从横截面表面移除了多余的玻璃，减少了离子研磨器工作量，因此加快了离子研磨过程并增加了产量。制备时间大约 20 分钟。b用三离子束研磨仪进行研磨然后将样品托直接安装在 TIC3X 适配器上，用于室温下斜面切割标准阶段中的离子研磨。每个样品在 8 kV 下研磨。Li-MNC 电极的研磨时间是 3 小时，铅栅板是 6 小时。样品尺寸不同导致研磨时间有差异。扫描电镜分析图 1 和 2 展示了 Li-MNC 电极样品的SEM图像。图 1 显示了该样品完整的层级堆叠，包括用于安装样品的两片玻璃和电极的氧化物/金属夹层结构。图 2 显示了感兴趣的样品材料更高倍数的放大图像。这些图像中样品光滑无缺的表面体现出卓越的制备品质。这些结果可用于确定电极材料中的颗粒尺寸和分布。此外，可以对整个电极样品以及各层进行精确的厚度测定。同样令人感兴趣的是结构中央位于多孔膜和金属膜之间的界面。这些图像显示了金属膜如何与多孔层的纹理保持一致(用红色箭头表示)，如果结构中存在分层，也可以从这些图像中看出。  图 2：Li-NMC 电极完整样品的 SEM 图像展示了位于结构中央的两个多孔层和金属膜。  图 3：Li-MNC 电极结构更高放大倍数的 SEM 图像。适用于多色报告线成像的显微技术图 3 显示了铅栅板样品的 SEM 图像。从这些图像中可以观察到高质量的横截面。样品表面处于原始状态，铅栅板的颗粒结构清晰可见，没有任何额外的蚀刻。从这个样品中，可以分析粒度和定位，虽然没有在该样品上拍摄到，但是这种处理质量通常适合于电子背散射衍射 (EBSD) 分析。在这些图像中，我们可以清楚地看到粒度变化很大的区域——有些区域的晶粒相当粗，有些区域的晶粒结构非常细。晶界也很容易看到。  图 4：铅栅板样品的低倍放大(左)和高倍放大(右) SEM 图像。样品由东宾夕法尼亚制造公司提供。样本制备和图像由 JH 技术公司的 Jerome Pons 提供。相关产品  EM TIC 3X三离子束切割仪点击此处申请样机试用    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                        关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。                      

       本文解释了如何利用人工智能（AI）进行高效、精确的 2D 细胞培养汇合度评估。准确评估细胞培养的汇合度，即表面积覆盖的百分比，对于可靠的细胞研究至关重要。传统方法使用视觉检查或简单算法，使结果不客观和精确，尤其是对于用于药物发现、组织工程和再生医学的复杂细胞系。利用自动化图像分析和深度学习算法的方法提供更好的精度，并可以增强实验结果。传统与 AI 汇合度评估方法通过人工主观经验评估进行汇合度评估存在显著局限性。这种劣势在处理细胞形态复杂、细胞边界不清晰以及实验环境多变的情况下尤为明显。人工评估容易受到主观性误差的影响，因此存在不一致结果的严重风险。这种显著局限性可能影响汇合度测量的精度和可靠性。因此，需要采用 AI 技术，如自动图像分析和深度学习，提供先进解决方案，使汇合度评估变得高效且可重复，尤其是在处理动态和多样化的细胞环境时。AI 汇合度测量的优势基于 AI 的汇合度评估提供以下优势：01由于先进模型如卷积神经网络（CNN），能够适应多样化的细胞形态；02在处理复杂和多样化细胞系时具有实验灵活性；03对变化的实验条件动态响应，使研究人员能够更细致地了解动态细胞环境中的汇合度；04用于复杂和拥挤培养物的边缘检测，使细胞边界能够清晰识别；05优于人工评估的稳健可靠分析。AI 的额外好处与使用人工评估相比，高效确定汇合度并节省宝贵时间；即使对于独特或复杂的细胞系，也能进行准确的汇合度分析；由于标准化的汇合度测量，增加了再现性和一致的结果；优化的实验条件用于细胞培养，在充实分析期间提供实时反馈。下面显示了使用 Mateo FL 显微镜进行的手动和基于 AI 的细胞汇合度测量。汇合度数值来自对细胞培养传统相差显微图像的手动评估（左）和AI辅助分析（右）。  图 1：细胞培养传统相位对比图像手动评估的汇合度数值（左）和AI辅助分析（右）。了解Mateo FL如何通过 AI 辅助的汇合度测量消除主观猜测引起的误差扫描二维码下载白皮书        中文版    相关产品  Mateo FL 数字显微镜    徕卡显微咨询电话：400-630-7761                        关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。                

 类器官是由来源于健康个体或患者的多能干细胞或成体干细胞培育而成的三维立体微型结构，通过将3D器官型系统培养与微流控技术相结合，产生“器官芯片”。这些芯片模型在可控的干细胞微环境中，能够模拟更为复杂的器官结构和功能，从而促进了类器官的发展和成熟[1]。相比传统的二维培养模型，类器官代表着一种能够概括整个生物体生理过程的创新技术，具有更接近生理细胞组成和行为、更稳定的基因组、更适合于生物转染和高通量筛选等优势。与动物模型相比，类器官模型的操作更简单，还能用于研究疾病发生和发展等机理。类器官技术提供了模拟由诱导突变引起的人类遗传疾病的理想模型。通过使用CRISPR/Cas9等基因编辑技术，可以研究某些和遗传缺陷相关的疾病。此外，为高通量药物发现提供潜在的研究工具，实现准确的毒性测试和临床前研究。因此在疾病模型构建、神经退行性疾病研究、癌症研究、毒性研究等领域均有着广泛的应用。    疾病模型构建类器官可以在器官水平上模拟疾病病理学特征，并为后续的转化研究提供有效的疾病模型。例如，通过建立患者胃肠道肿瘤的类器官库，使用从穿刺活检组织中解离的细胞，悬浮于基质胶中培养产生患者来源的类器官，与原始体内肿瘤显示出高度的基因型和表型相似性[2]。神经退行性疾病研究通过构建基底干细胞衍生的嗅觉上皮类器官作为阿尔茨海默病的研究模型，采用多模态时空监测技术，将阻抗生物传感器和实时成像相结合，记录类器官组织的生长发展及阿尔茨海默病的发展进程。利于深入探索神经退行性疾病的发展机制，并助力开发新的治疗方法[3]。 癌症机制探索通过将肿瘤组织来源的癌症类器官与微流控设备相结合，“癌症芯片”可以模拟重建肿瘤及其微环境，有助于更好地了解其在体内的行为，改善药物疗效的临床前评估。通过构建微流控肿瘤-血管界面模型，可以进一步研究肿瘤组织与其他器官之间的相互作用。例如，构建模拟肿瘤和血管之间的3D界面模型，以研究肿瘤细胞侵入血管的过程；使用实时成像跟踪不同隔室之间的相互作用，发现巨噬细胞介导的血管损伤促进了肿瘤细胞的侵入[4]。毒性研究类器官和器官芯片被广泛应用于毒性研究，以提高药物研发的效率，减少对动物的依赖，同时提高药物的安全性和有效性。器官芯片通过构建体内细胞和器官的关键生物学特征，重现更具生理学特性、更加接近于人体的微环境。例如，通过构建肝脏类器官芯片用于毒性研究：模拟肝脏的代谢、解毒和药物代谢功能，评估化合物对肝脏的毒性[5]。 未来展望类器官是在细胞和分子水平上对人体组织和器官进行模拟的强大工具，被认为是个性化医学中的替身。类器官的应用可为疾病模型构建、神经退行性疾病研究、癌症研究、毒性研究等方面提供很好的辅助，对于精准医疗与转化医学研究是有价值的研究材料与资源。在丹纳赫，我们汇集科学、技术和运营的能力，让未来科技对今日生活的影响得以加速实现。丹纳赫生命科学提供类器官研究多维的综合解决方案，旗下运营公司的先进设备助力类器官和器官芯片的研究开发。        CellXpress.ai体外模型智能化工厂赋能类器官研究和应用以标准化、自动化、智能化为导向，通过整合液体工作站、显微镜、培养箱等全套设备，利用人工智能辅助监测、培养、成像和调度，提高类器官等细胞模型培养的一致性、稳定性和规模，使检测更加可靠和可重现。►人工智能软件辅助培养，真正无人值守，提高培养一致性►内置标准化实验方案，提高标准化和培养成功率►统一直观的软件界面，使用方便，节省培训时间►高度灵活，便于接入其他上下游设备►全自动工作流程，提高效率，减少人工误差应用方向：生物医学基础科学研究（发育机制、疾病发生发展机制、罕见病模型构建、传染病、基因编辑等），肿瘤类器官药敏检测，新药研发（模型构建、药效、毒性评估、适应症拓展等），再生医学以及类器官样本库构建。    美谷分子仪器的CellXpress.ai体外模型智能化工厂        MICA多模态显微成像中枢助力更好地了解分子或细胞级别的时空过程结合了密闭箱式培养环境中的宽场和共聚焦成像，使得科研人员能够深入、长时间持续观察复杂的细胞与细胞间的相互作用。适用于多种需求的类器官成像研究，助力揭示生物样本的细微结构和复杂的生物过程。►快速设置、简易成像，对实验新手友好，可在MICA系统中直接培养并观察细胞►宽场、共聚焦、LIGHTNING检测模式快速切换，满足不同检测精细度及应用目的需要►多荧光指标同时检测，无延迟的成像效果    徕卡显微系统的MICA多模态显微成像中枢        CytoFLEX流式细胞仪用于类器官表型、细胞构成及质控分析在类器官研究中广泛应用于细胞表型、构成及质控分析，为细胞亚型的精确鉴定及细胞功能和状态的综合分析提供有利支撑。►出色的灵敏度和分辨率让细胞分群更清晰►优异的线性度实现更准确的自动补偿调节和补偿库功能►简单直观的软件操作帮助初学者快速掌握和使用►最高至6激光21色和通道灵活升级，满足常规流式检测需求    贝克曼库尔特生命科学的CytoFLEX LX流式细胞分析仪参考文献1. Yan HHN, Chan AS, Lai FP, Leung SY. Organoid cultures for cancer modeling. Cell Stem Cell. 2023, 30(7): 917. 2. Sun WJ, Luo ZM, Lee JM, et al. Organ-on-a-Chip for Cancer and Immune Organs Modeling. Advanced healthcare materials. 2019, 8: 1801363.3. Liu MX, Jiang N, Qin CL, et al. Multimodal spatiotemporal monitoring of basal stem cell-derived organoids reveals progression of olfactory dysfunction in Alzheimer's disease. Biosens Bioelectron. 2024, 246: 115832.4. Zervantonakis IK, Hughes-Alford SK, Charest JL, etal. Three-dimensional microfluidic model for tumor cell intravasation and endothelial barrier function. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012, 109: 13515.5. Messelmani T, Morisseau L, Sakai Y, etal. Liver organ-on-chip models for toxicity studies and risk assessment. Lab Chip. 2022, 22: 2423.                      关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。       

                                    关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。               

 荧光显微镜先驱Johan Sebastiaan Ploem    自上世纪中叶以来，荧光显微镜发展成为一种生物科学工具，对我们了解生命产生了最大的影响。在荧光分子的帮助下观察细胞和蛋白质是当今几乎所有生命科学学科的标准方法。这种广泛的应用可以追溯到一些研究人员的技术工作，他们希望改进和简化荧光显微镜下的劳动。荷兰医生约翰-塞巴斯蒂安-普洛姆（Johann Sebastiaan Ploem）就是其中的一位参与者。外荧光显微镜约翰-塞巴斯蒂安-普洛姆（Johann Sebastiaan Ploem）于 1927 年出生在苏门答腊岛的泽兰托（Sawahlunto），是一名荷兰煤矿工程师的儿子。幼年时，他随父母回到荷兰，并在那里将绘画作为自己的爱好之一。高中毕业后，他发现了另一个令人着迷的色彩领域，我们稍后会了解到。Ploem 决定学习医学，并在乌得勒支、哈佛和阿姆斯特丹接受教育。随后，他开始了学术生涯，曾在迈阿密大学和阿姆斯特丹大学工作，后晋升为荷兰莱顿大学医学系教授。在研究活动中，他发现荧光显微镜是一种强大的工具。20 世纪 60 年代，一种特殊的标本照明方式开始流行，事实上，早在 1925 年，对丝虫自发荧光事件感兴趣的 Policard 和 Paillot 就已经知道并描述了这种照明方式（Policard 和 Paillot，1925 年）。一些研究人员重新启动了这两位法国科学家的项目，将荧光照明和样品检测放在显微镜的同一侧。这种利用入射光的原理被称为 "Epi-Illumination"，与透射显微镜形成鲜明对比。在荧光显微镜中使用这种技术的一大好处是可以避免检测光源发出的发射光（图 1）。另一个优点是机械性更强：在透射照明中，聚光器和物镜有两个独立的光轴，必须仔细对准。而在外延照明中，物镜既是聚光器，又是集光物镜。这样就可以避免对准问题。  图 1：外延照明在荧光显微镜中的优势：在透射照明的情况下（左图），光源和图像检测位于物镜的两侧。在这种设置下，一个明显的限制就是无法检测到激发光（浅蓝色）。相比之下，Epi-Illumination（右图）使用物镜进行照明和图像检测。对于荧光显微镜来说，这意味着用户不会受到激发光的照射。二向色分光镜早在几年前，前苏联的两位研究人员就为荧光外延照明显微镜提供了非常重要的投入。Brumberg 和 Krylova 开发了一种所谓的二向色分光器，用于入射光的紫外激发（Brumberg 和 Krylova，1952 年）。二向色材料能够让特定波长范围的光通过，而其他波长的光则被反射（图 2）。这一原理对于荧光外延照明是不可或缺的，因为激发光必须以某种方式融合到显微镜的光路中（图 3）。更确切地说，二向色分光镜无法穿透光源发出的所需激发光的波长，只能将激发光反射到样品上。样品发出的荧光反过来又可以通过二向色分光器到达检测端。  图 2：透射图说明了二向色分光镜的功能。波长较短的光（蓝色箭头）会被反射，而波长较长的光（红色箭头）则可以通过滤光器。  图 3：荧光外延照明需要一个二向色镜（灰色），它能够将激发光（蓝色）反射到试样上，并将发射光（绿色）传递到检测端。激发光的波长可通过相应的滤光片（橙色）进行预选。朝向检测侧的滤光片（紫色）只允许荧光团的波长通过，并排除激发光的残余杂散光。遗憾的是，由于铁幕之间缺乏信息交流，Ploem 并不知道俄罗斯的发展情况。尽管如此，他还是自己开始使用二向色分光镜。针对 Ploem 的特殊情况，他与著名的特种玻璃生产商肖特公司（美因茨）共同开发了一种可反射蓝光和绿光的分光镜（Ploem，1965 年）。之后，他用 Leitz 公司提供的中性分光镜改装了一台 "Opak" 外延照明器，通过引入一个带有四个不同二向色分光镜的滑块，他可以在紫外线、紫光、蓝光和绿光之间非常快速、方便地改变激发光的波长（Ploem，1967 年）（图 4）。  图 4：荧光多波长外延照明器，带有四个安装在滑块中的二向色分光镜，用于紫外、紫光、蓝光和绿光的入射照明。由阿姆斯特丹大学制造（Ploem，1965 年）。荧光滤光器立方体开发二向色分光镜以产生不同波长的激发光具有重要的优势。当时，紫外光谱（约 100 nm - 380 nm）的激发光非常普遍，但却有一个恼人的副作用：自发荧光。很多组织物质都会被紫外线激发，从而产生微弱的背景光（图 5）。通过将二向色镜的反射波长调整到绿色或蓝色范围，Ploem 能够达到当时非常常用的两种荧光染料 FITC（494 纳米）和 TRITC（541 纳米）的激发最大值，而不会产生自发荧光。FITC（异硫氰酸荧光素）和 TRITC（四甲基罗丹明-5（和 6）-异硫氰酸酯）可与抗体耦合，目前仍用于免疫荧光显微镜。通过在较小范围内达到其激发最大值，组织标本的对比度得到了显著增强（图 5）。使用 Ploem 的二向色分光器产生的激发光束能有效地与 FITC 的激发最大值相匹配，即使是发射光谱很差的光源也能使用。  图 5：左图：用宽波段紫外激发光照射标记有免疫标记（FITC）的组织细胞。注意带有蓝色自发荧光的组织结构。右图 使用窄波段蓝光（490 纳米）外延照明，对相同的组织和相同的 FITC 标记进行免疫染色。注意图像对比度的增加（Ploem，1967 年）。有鉴于此，现在可以利用外延照明的优势，使用普通的高压汞弧光灯提供蓝光和绿光的窄带激发。这一改进满足了生命科学和医学领域对荧光显微镜的需求。根据 Ploem 的发明，Leitz 设计出了一种新型多波长荧光外延照明器，它带有四个旋转式二向色分光镜，可在紫外、紫光、蓝光和绿光范围内激发标本，这就是 Leitz PLOEMOPAK。莱茨员工卡夫（W. Kraft）取得了更大的成就，他将二向色分光器与适当的激发和发射滤光器组合在一个工件上，即所谓的滤光器立方体或滤光器块（卡夫，1969 年和卡夫，1972 年）（图 6）。他的研究成果是设计出了一种外延照明器，该照明器带有多组四个这样的滤光器立方体，如今几乎所有的多波长荧光显微镜都是以这些滤光器立方体为基础的。  图 6：左：1970 年左右，Leitz 员工 W. Kraft 将激发滤光片（橙色）、二色分光镜（灰色）和发射滤光片（紫色）集成在一个工件上 - 滤光片立方体。中间：滤光器立方体的工程图。右图 在现代显微镜中，荧光滤光片立方体可以很方便地点入和点出。研究人员甚至可以根据自己的需要，用不同的滤光片和二向色分光器改装一个立方体。总 结有了 Ploem 及其同代人和后继者建立起来的技术基础，我们今天就可以通过将适当的滤光器立方体放入外延照明器（图 7），观察到无数不同的荧光团。研究人员甚至可以根据自己的需要定制激发和发射参数。由于现代研究显微镜的自动化，在实验过程中切换滤光器立方体只需点击一下按钮。科学家们可以在一瞬间切换不同的荧光团，从而观察到即使是活体标本也被荧光标记为不同的荧光团。    图 7：荧光显微镜的演变。左图：透射光荧光显微镜的基本问题是检测激发光。中图 这就是人们利用外延照明并将光源移到显微镜检测侧的原因。这种方法需要二向色分光镜。右图 将激发滤光片、发射滤光片和二向色分光器放在一个区块中，可以快速切换不同的区块，专用于某些荧光团。参考文献：1.Brumberg, E. M., Krylova, T. N.: O fluoreschentnykh mikroskopopak. Zh. obshch. biol. 14, 461, 1953.2.Ploem, J. S.: Die Möglichkeit der Auflichtfluoreszenzmethoden bei Untersuchungen von Zellen in Durchströmungskammern und Leightonröhren. Xth Symposium d. Gesellschaft f. Histochemie, 1965. Acta Histochem. Suppl. 7, 339–343, 1967.3.Ploem, J. S.: The use of a vertical illuminator with interchangeable dichroic mirrors for Fluorescence microscopy with incident light. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie 68, 129–142, 1967.4.Kraft, W.: Die Technologie des Fluoreszenzopak, Leitz Mitt. Wiss. u. Techn. IV/6, 239–242, 1969.5.Kraft, W.: Fluorescence Microscopy and Instrument Requirements. Leitz Mitt. Wiss. u. Techn. V/7, 193–206, 1972.6.Policard, A., Paillot, A.: Etude de la sécrétion de la soie à I'aide des rayons ultraviolets filtrés (lumière de Wood). Comptes Rendus de l'Académie des Sciences Paris 181, 378–380, 1925.参加问卷调研，领取精美小礼品！    8月底活动截止届时答题满分的小伙伴会收到我们的小礼品    问卷答案的答案可以在之前的推文内寻找哦~      徕卡175周年：徕卡品牌的发展历程，也是显微技术的发展史                    相关产品      DMi8 S 高速成像平台 倒置显微镜成像解决方案      STELLARIS共聚焦显微镜平台      正置双目生物显微镜 徕卡DM4 B & 徕卡DM6 B    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                                 关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。                    

 利用AI在几秒钟内获得准确的细胞计数  本文描述了利用AI进行精确和高效的细胞计数。准确的细胞计数对于 2D 细胞培养的研究至关重要，例如细胞动力学、药物发现和疾病建模。精确的细胞计数对于确定细胞存活率、增殖速率和实验条件的影响至关重要。这些因素对于可靠和稳健的结果至关重要。描述了基于人工智能的方法如何显著提高细胞计数的准确性和速度，从而对细胞研究产生重大影响。    手动与基于人工智能的细胞计数细胞的手动计数是费力、耗时且容易受主观性和人为错误影响，导致结果不一致。对高通量和可重复性的不断增长需求意味着需要技术解决方案来克服手动细胞计数的局限性。在 2D 细胞培养的细胞计数中，一种提高精度和效率的解决方案AI。该方法可以简化细胞计数过程，减少人为错误，并提供比手动计数更高水平的准确性和效率。AI细胞计数基于AI的细胞计数方法利用：1具有深度学习的最先进图像分析算法2高效细胞分割和计数的图像分析算法3数据预处理以确保AI模型的最佳输入4使用预训练的深度学习模块进行细胞识别因此，AI细胞计数提供了更高效率，让使用者可以投入更多时间和精力用于其他研究任务。AI模型适应常见实验条件和常用细胞类型。使用 Mateo FL 进行细胞计数本文中呈现的 AI 细胞计数结果是通过 Mateo FL 显微镜获得的。结果显示，AI 细胞计数仅需 5 秒，而手动计数需要 15 分钟。因此，使用 Mateo FL 进行 AI 细胞计数比手动计数快 180 倍。  使用 Mateo FL 进行细胞计数只需 5 秒，而手动计数需要 15 分钟，因此使用 Mateo FL 计数比手动计数快 180 倍。✦•✦了解 Mateo FL 如何帮助您在短短 5 秒内获得准确的细胞计数。扫描下载应用白皮书  （英文版）相关产品      Mateo FL数字显微镜    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                            关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。       

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       晶圆或 LCD 和 TFT 的检验、过程控制和缺陷分析必须快速、精确并符合人体工学。LeicaDM8000M和 DM12000M晶圆检测显微镜提供了一个创新而高性价的系统解决方案，帮助客户充满信心地应对现在和未来的检验挑战。除了大视野和高分辨率光学部件，系统还采用了高度人性化的设计和全内置的 LED 照明，可以从不同角度照亮样品。DM8000 M / DM12000 M 是一个模块化大型平台检测显微镜平台，可用于 8"/200 mm 和 12"/300 mm 样品检测。    手动检测版本    电动版本DM8000 M/DM12000 M01进入检测领域的第一步查看样品表面的更多信息，在更短的研究时间内改进产品质量决策。  宏观物镜（Plan APO 0.7x）4倍与常规扫描物镜的视野，用于快速浏览样品紫外照明可获得更高分辨率，可与斜照明技术相结合，从任意角度以高分辨率查看样品，获得更多样品表面信息，且检验结果精确符合人体工程学的设计和自动化功能可实现快速、低疲劳操作，避免在重复性样品检测过程中注意力不集中通过手动、编码和电动功能支持智能工作流程，加快样品检测速度02快速样品详览从用于快速浏览样本的微距物镜（Plan APO 0.7x）到用于观察最精细细节的微距物镜。  使用 25 mm (FOV) 目镜，可看到 35.7 毫米的样品表面一目了然地看到在高倍放大镜下 "看不见 "的宏观缺陷，如材料样品中的曝光缺失区域、鲨鱼齿结构或流动结构需要检测宏观结构时，无需对样品进行耗时的扫描只需切换到更高倍率（Obj. HC PL APO 150x/0.90 IVIS BD）即可看到最细微的细节03在更短时间内获得更多样品表面信息紫外照明可获得更高分辨率，可与斜照明技术相结合，获得更多样品表面信息。  以高倍率（150 倍）的彩色模式，通过明场、暗场或DIC模式检查样品，以发现样品缺陷通过激活紫外线照明来提高光学分辨率，以观察最精细的结构以高分辨率将对比度较低的表面转化为清晰的结构拓扑图，快速发现缺陷04通过智能功能支持工作流程通过手动、编码和电动功能支持智能工作流程，加快样品检测速度。            只需点击一下按钮，即可根据所选方法自动调整照明和对比度设置，从而节省时间并避免出错集成的 LED 可见光和紫外照明可在几秒钟内切换不同的照明技术，保证污染不会进入无尘间保持，确保洁净室的清洁内置聚焦探测器，用于检测高反射表面，可快速、轻松地找到正确的聚焦位置相关产品     DM8000 M     DM12000M    徕卡显微咨询电话：400-877-0075                            关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。      

 光片显微镜（Light-Sheet Microscopy, LSM）是一种强大的三维成像技术，广泛应用于生物学研究。本文将为您科普光片显微镜中的不同光片技术，重点介绍主瓣、光切片、长度、分辨率、对比度和激光强度等关键性能指标及其相互关系。光片显微镜简介光片显微镜通过在样品上形成一层薄而均匀的光片来照明，从而获得样品的二维图像。通过移动样品或光片，可以快速获取整个三维样本的图像。这种方法不仅减少了光漂白和光毒性，还提高了成像速度和深度。  主瓣与光切片：光片的“心脏”与“躯体在光片显微镜中，主瓣是指光片中强度最高的区域，它直接影响着显微镜的轴向分辨率。主瓣越薄，理论上分辨率越高。然而，光片的光切片，即整个光片的厚度，同样对成像质量有着决定性的影响。光切片不仅包括主瓣，还包括可能影响对比度的旁瓣或次要结构。在许多先前的出版物中，未能区分光片厚度和主瓣厚度可能会导致混淆，例如在提到“通过扫描贝塞尔光束产生的超薄平面照明”或“超薄贝塞尔光片”时，主瓣比相同长度的传统高斯光片更薄【19,25】。对于最常用的具有高斯分布的光片来说，只有一个光片，主瓣厚度和光片厚度的测量值严格成比例。但如图1 所示，这对于具有辅助结构（如侧瓣或多条平行光片）的多瓣光束并不适用。对于多瓣光束，当仅考虑主瓣厚度时，样品暴露的总照明功率中有相当一部分被忽略。这种额外的曝光会在光片显微镜中贡献到检测到的荧光信号，从而可能降低图像对比度。因此，考虑以下几点非常重要：通常显示的沿检测轴的 PSF 切片可以用来推断轴向分辨率。然而，它们使观察者无法计光学分层性能或光片厚度。  图 1. 不同光束形状对光片显微镜中轴向分辨率 dz 和光学切片 OS 影响的示意图。照明点扩散函数（PSF，蓝色）表示照明光的强度。检测点扩散函数（PSF，绿色）表示荧光光子的位置依赖性检测概率。虚线表示等强度表面，例如，峰值的 37%。虚红线表示结合照明和检测 PSF 的等表面（照明强度和检测概率的乘积）。它沿检测轴的范围与系统的轴向分辨率成比例。绿色阴影区域表示荧光分子被照明并收集荧光的体积。光学切片测量该体积沿检测轴的范围。在 a) 中，显示了单瓣照明光束，分辨率是各向异性的，即横向分辨率优于轴向分辨率，但光学切片接近轴向分辨率。在 b) 中，显示了多瓣照明光束，分辨率是各向同性的，但从旁瓣照明区域收集到额外的荧光信号。光学切片劣于轴向分辨率。旁瓣照亮离焦平面，使图像模糊。 光片长度：决定视野的关键光片的长度是另一个关键参数，它决定了可以均匀照明的样本区域大小。较长的光片可以覆盖更大的视野，但可能会牺牲一些分辨率。分辨率与对比度：成像质量的双重奏分辨率是衡量显微镜性能的基石，它决定了我们能看到的最小细节。而对比度则是图像中亮区与暗区的差异，高对比度意味着更清晰的图像细节。在光片显微镜中，主瓣的厚度和光切片的均匀性共同决定了分辨率和对比度：轴向分辨率取决于显微镜点扩散函数（PSF）沿检测轴的分布宽度图像对比度取决于光片的整体厚度激光强度：照亮微观世界的光源激光强度是生成光片的基础。不同强度的激光可以产生不同特性的光片。例如，高强度激光可以生成更薄的主瓣，但也可能增加样品的光漂白和光毒性。  图 2. 主峰厚度和光学分层的定义。展示了单峰光束 (a) 和多峰光束 (b) 的强度在 yz 方向上的横截面。在焦点处 (紫色线) 和距离 y = L 处 (厚度加倍的地方, 蓝色线) 的相应剖面显示在 c-j 中。c, d 和 e, f 分别说明了单峰光束 (c, d) 和多峰光束 (e, f) 的主峰厚度，定义为在焦点处强度高于最大强度 37% 的范围，分别在焦点处 (c, e) 和距离 y = L 处 (d, f)。子图 g-j 相应地说明了光学切片厚度 wOS ，定义为包含光束功率 63% 的范围。观察由扫描光束形成的光片时，相关的测量包括：在检测轴上强度首次下降到峰值强度的一部分的距离在距离检测焦平面一定距离内由光片产生的总荧光量第一个测量标准提供轴向分辨率，而第二个提供对比度。轴向分辨率是沿检测 z 轴可以分辨出两个物体的最小距离。对比度是聚焦特征信号与背景信号（主要来自失焦特征）的差异。图 2a 显示了由单峰光束形成的光片的示例。图 2c 和 2d 显示了在光束传播轴上两个位置处以 1/e=37% 峰值强度测量的分布宽度，图 2g 和 2h 显示了标记光束总能量 63% 的积分轮廓。在强度大于峰值强度 37% 的范围内，高斯强度分布的光片携带其总能量的 84%。原因在于光片不是一个圆对称光束，而是主要沿检测轴向一个方向扩展。在比较不同光片时，第一个测量标准（强度下降）与第二个测量标准（区域内包含的能量）之间的比例与任何长度的单峰光片的比例数值无关。对于多峰光片来说，第一个和第二个测量标准得到的值可能会有显著差异，因为它们表现出更复杂的结构。如图 2 右侧所示，强度分布降到峰值的 1/e 的距离仅反映了主峰的厚度（图 2e, f）。因此，作者引入了“主峰厚度”这个术语来表示这个测量标准。图 2i, j 中标示的光学分层 wOS 考虑到主峰可能不具备足够的能量来贡献总检测信号的 63%。这一测量标准给出的值明显大于主峰厚度，更接近反映了光片的真实厚度。性能间的关系：协同与权衡在实际应用中，这些性能参数之间存在着协同与权衡。例如，追求更薄的主瓣以提高分辨率可能需要牺牲一些光切片的均匀性，从而影响对比度。同样，增加激光强度以改善信噪比，也可能带来光漂白的风险。不同光片技术的原理与应用1. 高斯光片最常见的光片类型，以其简单的高斯强度分布而著称。适用于需要均匀照明的大视场成像。2. 聚焦平坦顶光片在焦点处提供均匀的照明，但边缘有较弱的环状结构，适用于需要高对比度的成像。3. 贝塞尔光片具有自我重建的特性，即使在复杂介质中也能保持形状不变，适用于需要高分辨率的成像。4. 艾里光片通过特定的相位调制产生，具有在特定方向上传播的特性，适用于需要高对比度和高分辨率的成像。5. 双光束光片通过两个子光束的干涉产生，形成一系列光片，适用于深层样品成像。  图2. 各种光束类型相对于高斯光束的光学分层（蓝色）和主瓣厚度（橙色）的比率。所有值均为光束长度 L 约为 30 µm 计算得出。插图显示了解释图表的方案。值大于 100% 表示主瓣或光学分层比高斯光束更厚。对于所有类型的光片显微镜，光学切片和轴向分辨率取决于光片的长度。因此，仅在长度相等的情况下比较光片特性是至关重要的。在大多数情况下，长度是由样品或研究人员希望在单帧中观察的视野决定的。因此，作者选择首先定义光片长度的方法，然后根据它们提供的轴向分辨率和光学切片来比较光片。将高斯光束设为参考值，作者计算了相同光束长度下不同光束类型在厚度和光学切片方面的相对增益或损失。图2显示了长度为30 µm的光片的结果。数值超过100%表明光片厚度 wOS 或主瓣宽度wML大于高斯光束。总体而言，作者发现对于所有光束类型，在这两个特性之间存在权衡：制造薄光片会以高斯光束的长度或其他光片类型的光学切片为代价。光片显微镜的技术选择是一个综合考量的过程，需要在分辨率、对比度、光切片质量和激光强度之间找到最佳的平衡点。通过深入理解这些技术参数及其相互关系，您可以更加自信地选择和优化适合自己研究的光片显微镜技术。    光片模拟软件软件作者的光片模拟器应用程序*数值计算光片的 3D 强度分布并量化其尺寸。它可以生成高斯光束、聚焦平顶光束、艾里光束、贝塞尔光束、贝塞尔光束晶格、双光束和球差光束，以及用户引入的任意类型光片。该算法将光束在后焦平面的电场幅度和相位作为初始条件，使用光束传播方法计算其在焦平面周围的传播。* E. Remacha “Light Sheet Simulator” (2019) [retrieved 5 November 2019]https://github.com/remachae/beamsimulator操作步骤在Matlab环境中运行LightSheet_Simulator.mlapp，图3显示了GUI示例。有三种可能的操作：仿 真允许可视化光片的截面以及后焦平面的强度和相位。要模拟本文讨论的光片，请在选项卡面板中选择光束类型并输入所需参数。要模拟自定义光片，请选择“创建光片”选项卡。输入包含后焦平面幅度和相位的文件路径。这些文件必须以 tiff 格式提供。分 析在模拟光片后，按“分析”以获得本文定义的主瓣宽度wML、光学切片厚度 wOS 和长度L 的值。保 存在指定的目录下创建文件 simulated_lightsheet.m。该文件包含 3D 强度矩阵以及计算中使用的数值和物理参数。  图3. 光束模拟器用户界面图3展示了光束模拟器的用户界面，通过这个界面，用户可以选择不同类型的光束进行仿真，分析结果，并保存数据。阅读原文：Elena Remacha, Lars Friedrich, Julien Vermot, and Florian O. Fahrbach, "How to define and optimize axial resolution in light-sheet microscopy: a simulation-based approach," Biomed. Opt. Express 11, 8-26 (2020)相关产品      Viventis LS2 Live 双视野光片荧光显微镜    徕卡显微咨询电话：400-877-0075              关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。            

     为促进我国细胞生物学领域研究人员的交流与合作，推动中国细胞生物学学科的发展，“中国细胞生物学学会 中国干细胞第十四届年会”将于2024年8月23-25日在黑龙江省哈尔滨市举行。    徕卡显微系统一直以其专业的技术和创新精神在显微科学领域树立着标杆。我们将携新品Mateo FL数字型智能倒置荧光显微镜首次亮相，诚邀各位嘉宾体验参与。欢迎大家在冰城韵味的哈尔滨相聚。Mateo FL数字型智能倒置荧光显微镜AI赋能的高阶细胞检查让实验结果可靠、可重现；电动多模态成像让您省时省力；操作步骤更简单，成像细节更丰富；无需手动拆来更换相机，且机身可以支持酒精、过氧化氢和UV照射消毒，从而防止样本受到污染，获得一致的结果。Mateo FL上市活动8月24日 10:20-10:40徕卡展台A05号 (哈尔滨万达文华酒店一层)微信扫码参与抽奖，100%中奖日程安排10:20开场郑晓业徕卡显微系统产品经理10:22特邀专家寄语柴人杰东南大学生命健康高等研究院执行院长10:25徕卡领导致辞方策徕卡显微系统产品管理高级经理10:28产品揭幕仪式柴人杰 院长 & 方策 高级经理10:30产品介绍郑晓业徕卡显微系统产品经理10:40微信扫码参与抽奖，100%中奖    参与现场抽奖，有机会获取Mateo显微镜积木  相关产品      Mateo FL数字显微镜                                              关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。     

 光片显微镜（LSFM）已成为生命科学研究中不可或缺的工具，特别是在需要长时间观察活体培养时。选择合适的光束类型可以显著提高成像效果，确保获得高分辨率和高对比度的图像。本文将为您介绍几种主要的光束类型，包括高斯光束、贝塞尔光束、Airy光束、晶格光束、聚焦平顶光束、双光束和球差光束，并探讨它们在光片显微镜中的各自优势、轴向分辨率、潜在的假象微影及其适用场景。    图 1 显示了比较中包含的六种光片类型的示意图。利用照明物镜后焦平面电场的幅度和相位来模拟样品体积中光束的强度分布。展示了光束扫描或光片抖动产生的光片在照明和检测轴（YZ）以及扫描轴和检测轴（XZ）上的截面。光片截面：YZ 轴：沿照明和检测轴的截面 XZ 轴：沿扫描轴和检测轴的截面    六种光片类型    1高斯光束光片简介：激光理想情况下发射高斯光束，高斯光束的强度分布沿径向方向遵循高斯分布，并在传播方向上保持这种分布。生成方法：通过圆柱透镜生成，或通过在检测物镜的焦平面扫描高斯光束生成。特点：这种光片类型最为常见，具有保守的强度分布。2聚焦平顶光束光简介：通过均匀照明物镜的后焦平面生成，焦平面中的强度分布称为“艾里盘”。生成方法：扩展高斯光束，使其直径远大于物镜后焦平面。特点：更多的光以较大的角度进入焦点，从而实现更紧的聚焦，但代价是产生附加的环状结构。3贝塞尔光束晶格光片简介：等间距贝塞尔光束的相干叠加形成的光片。生成方法：根据光束间隔的距离，产生不同的干涉图样，如方形晶格和六边形晶格。特点：通过调整参数b，可以在主瓣厚度和光学切片之间进行权衡。4艾里光束光片简介：具有“香蕉状”弯曲形状的光束，通过对高斯光束施加三次相位生成。生成方法：例如，使用空间光调制器。特点：具有自重构特性，可以在散射或吸收障碍物后恢复其初始强度分布。5球差光束光片简介：当用于聚焦平行光的物镜用于聚焦散焦或聚焦光时，焦点远离物镜的本地焦平面，产生球差光束。生成方法：通过径向依赖的双二次相位掩模模拟。特点：唯一一个在沿照明轴的剖面不对称的光束。6双光束光片简介：由两个光束（“子光束”）聚焦通过物镜，然后相对于彼此和物镜的光轴以一定角度传播，并在物镜的焦平面产生干涉图案。生成方法：通过分裂激光光束，将两个子光束对称地送入后焦平面。特点：生成一个光片堆栈，中央和最强的光片放置在检测透镜的焦平面上，辅助光片照亮平行平面。图 1 通过展示不同类型光片在样品体积中的强度分布，比较了这些光片在实际应用中的效果和特点。通过对比，可以更直观地了解每种光片类型在特定应用中的优缺点。高斯光束简单高效的经典选择高斯光束以其生成和控制的简便性著称。通过标准的圆柱透镜或聚焦透镜即可生成高斯光束，光束能量集中在中心，呈高斯分布。高斯光束在轴向分辨率方面表现出色，能够清晰分辨样品中的细节。其单一主瓣结构减少了成像中的背景噪声，提高了图像对比度。在厚样品中成像时，高斯光束产生的散射伪影较少，图像清晰度更高。因此，对于需要高分辨率和高对比度、光敏感或标记密集的样品，高斯光束是理想的选择。贝塞尔光束大视野成像的利器贝塞尔光束通过相位调制装置生成，具有自重建特性，能够在遇到障碍后重建其初始强度分布。这使得贝塞尔光束在较大范围内保持高分辨率成像成为可能。贝塞尔光束在大视野范围内提供高分辨率成像，特别是在双光子激发下，其轴向分辨率显著提高，适合三维大尺度样品的成像。然而，贝塞尔光束的旁瓣结构可能引入更多背景信号，降低图像对比度。对于需要在大范围内保持高分辨率成像的实验，如三维大尺度样品成像，贝塞尔光束是最佳选择。Airy光束复杂环境中的成像专家Airy光束通过施加立方相位调制生成，具有“香蕉”形的弯曲形态和自重建特性，能够在遇到散射或吸收障碍时部分恢复其初始形态。Airy光束在复杂环境中成像表现优异，特别是在高散射介质中。尽管其旁瓣增加了光片厚度，可能降低图像对比度，但在特定应用中的优势依然明显。Airy光束适用于需要在复杂环境中成像的实验，尤其是在高散射介质中的应用。晶格光束高时空分辨率的理想选择晶格光束是贝塞尔光束的衍生，利用多个贝塞尔光束的相干叠加形成。其优势在于提供了更高的时空分辨率和更好的光片均匀性。这种光束能够在较大的视野范围内保持一致的分辨率，但生成复杂，需要精确的光学控制。对于需要高时空分辨率的实验，如观察细胞内部动态过程，晶格光束是理想选择。聚焦平顶光束均匀照明的可靠选项聚焦平顶光束通过均匀照明背焦平面生成，光束在焦平面上形成均匀的亮斑，通常称为Airy盘。这种光束在轴向和横向分辨率之间提供了良好的平衡，适用于需要均匀照明的实验。虽然生成相对复杂，但在需要高均匀性的成像应用中，聚焦平顶光束表现出色。双光束灵活调控的成像工具双光束通过两个相互干涉的光束生成，能够形成交替的亮暗条纹结构。这种结构在光片显微镜中生成多个平行光片，增加了成像的灵活性。双光束适用于需要高分辨率和大视野成像的应用，尤其是需要频繁调节光束参数的实验。在复杂样品的三维成像中，双光束能够提供独特的优势。球差光束应对折射率失配的利器球差光束通过施加球面相位调制生成，能够在折射率失配的情况下保持较长的焦深。其优势在于在不同介质中保持一致的成像质量。对于需要在不同介质中成像的实验，尤其是需要在透明介质和高折射率介质之间切换的应用，球差光束是理想选择。推荐与结论          综合考虑不同光束的特性和优势，高斯光束以其高分辨率和高对比度，适用于大多数成像应用；贝塞尔光束在大视野高分辨率成像中表现出色，适合三维大尺度样品；Airy光束在复杂环境中成像具有独特优势；晶格光束、聚焦平顶光束、双光束和球差光束则在特定应用中提供了不可替代的优势。选择合适的光束类型，将帮助研究人员获得最佳的成像效果，从而更好地观察和研究活体培养。光片显微镜的光束选择不仅是技术的选择，更是科研成功的关键。    阅读原文：Elena Remacha, Lars Friedrich, Julien Vermot, and Florian O. Fahrbach, "How to define and optimize axial resolution in light-sheet microscopy: a simulation-based approach," Biomed. Opt. Express 11, 8-26 (2020)相关产品      Viventis LS2 Live 双视野光片荧光显微镜    学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。        

       新款 Mateo FL 数字式智能倒置荧光显微镜为研究人员提供可靠、可重复的进阶细胞培养日常检查。      2024年7月26日，德国韦茨拉 – 显微镜和科学仪器领域的先驱者徕卡显微系统发布了 Mateo FL，这是一款基于人工智能的数字式倒置荧光显微镜，被应用于在高阶研究中的细胞培养检测。Mateo FL 结合了透射光进行相差无标记成像和多通道荧光以及自动化分析工具，优化了实验室日常细胞培养的工作流程。此外，Mateo FL的彩色和单色双600万像素的摄像头可以帮助使用者从明场、相差和荧光这三种观察方式都获得高质量的成像。与徕卡不断增长的数字显微镜系列中的姐妹产品 Mateo TL 类似，Mateo FL 将易用性与现代紧凑简约的设计相结合。Mateo FL 提供更高级细胞检测功能，包括多模态能力、基于人工智能的细胞汇合度检测、快速准确的细胞计数以及转染效率的智能测量。Mateo 家族中的这两款产品为研究人员提供了灵活性，可以选择最符合其实验需求的解决方案。Mateo FL 是一种智能数字式解决方案，为所有级别的研究人员提供了无与伦比的工作便利，使他们能够立即获得结果，来自徕卡显微系统生命科学与应用解决方案副总裁詹姆斯·奥布莱恩（James O’Brien）的说道。“Mateo FL 帮助科学家加速实验，解决污染问题，保护数据完整性，确保实验室中一致、可靠和可重复的结果。”Mateo FL 的一系列自动化工作流程提供可重复的结果，即使在具有挑战性的细胞培养样本中也是如此。用户可以在 5 秒内获得准确的自动化细胞计数，平均节省15分钟的手动细胞计数时间。新的自动相差功能还可以节省图像获取过程中的时间和精力。该仪器紧凑简约的设计，将污染风险降低至少 50%。通过在实验过程中捕获单色和彩色图像而无需物理上交换设备，工作流程效率可以提高一倍。Mateo FL 具有内置的审计跟踪和用户管理功能，支持 FDA 21 CFR Part 11 合规性，使其成为需要安全数据跟踪的工作的理想选择，例如制药研究行业。                   关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。           

   感谢参与2024年7月23日举办的Aivia14新产品发布会，会上我们介绍了Aivia14从数据可视化，细胞检测分割，到表型分析，数据探索的完整3D空间分析全流程。如果您错过了此次直播，可通过“徕卡学院 – 课程回顾”查看录屏，或点击下方视频观看回放。          讲课内容简介回顾：通过使用AI而无需编码，轻松学习使用Aivia，解锁对3D空间生物学的更深洞察力。  如何使用人工智能准确地分割具有不同形态的3D细胞利用您的专业知识和人工智能来识别图像中已知的表型使用自动聚类探索未知的表型通过树状图、小提琴图、降维等方法获得对3D组织的更深层次的空间洞察力  如需使用Aivia软件 请扫码登记获取如您希望了解更多 Aivia 的使用方法，欢迎扫描下方二维码收藏课堂合集，方便随时查看。                 关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。        

       2024年08月07-14日深圳两年一度的郭可信冷冻电镜会议和暑期冷冻电镜研修班的命名源自20世纪80年代的中国电子显微学巨擘、准晶研究领域先驱——郭可信院士。郭可信先生同时也是一位受人景仰的育人导师，他在国内、乃至世界范围培养、启迪了一代又一代的冷冻电镜人才。自2008年起，郭可信冷冻电镜会议和暑期冷冻电镜研修班不断地为年轻一代的科研工作者提供了进入领域的“敲门砖”，青年科研人员在会议和研修班期间可以面对面聆听学界翘楚，问对学术新知。历经十余年，郭可信会议逐步在世界范围内展现愈发深远的影响力。    2024年郭可信冷冻电镜会议和暑期冷冻电镜研修班将由中国生物物理学会冷冻电子显微学分会主办，南方科技大学承办，中国电子显微镜学会低温电镜专业委员会协办，兹定于2024年8月7至14日在深圳市南方科技大学召开（展位5）。会议将邀请国内外著名的专家学者，聚焦冷冻电镜的新技术与新方法、复杂体系生物结构研究、原位结构生物学的新方法及应用、以及AI助力冷冻电子显微学飞跃等前沿领域，为冷冻电镜的长期发展与繁荣提供持续驱动力。热忱欢迎各位专家、学者、企业代表莅临本次学术盛会！会议时间2024年08月07-14日会议地点南方科技大学会议中心( 广东省深圳市南山区学苑大道1088号 )徕卡展位展位号：5展示样机                  UC Enuity 超薄切片机    徕卡冷冻光电联用解决方案                  STELLARIS 5 Cryo 冷冻共聚焦光学显微镜               关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。        

           古人曾叹道：大江东去，浪淘尽，千古风流人物。江山如画，一时多少豪杰。今天的金相人豪迈地宣告：俱往矣，数风流人物，还看今朝。恰同学少年，风华正茂；书生意气，挥斥方遒。2024年7月25日至29日，第十三届全国大学生金相技能大赛决赛阶段比赛在黄冈师范学院举行。  本届大赛包括了两个赛道的比赛，分别是徕卡杯第十三届全国大学生金相技能大赛和永新杯第二届全国大学生金相大会。大赛分预赛、复赛和决赛三个阶段依次进行。共计571所高校报名参加了徕卡杯第十三届全国大学生金相技能大赛。40488名在校大学生参加了各参赛高校在4月至6月期间先后举办的校内预赛。各参赛高校在预赛基础上选出优秀选手分别在26个分赛区参加了复赛。最终，来自530所高校的1458名选手进入了决赛阶段的比赛。  经过紧张激烈的争夺，徕卡杯第十三届全国大学生金相技能大赛共产生个人一等奖250名，个人二等奖625名，个人三等奖1037名。昆明冶金高等专科学校王国会、吉林大学杨雯博和南昌工学院赵雅美获得了本届比赛的徕卡优胜奖，南昌大学科学技术学院彭飞云获得本届大赛的徕卡特别奖。  此外，本届徕卡杯技能大赛还产生了团体一等奖25个，团体二等奖53个，团体三等奖107个。上届大赛徕卡杯得主江西科技师范大学以团体总分第一名再次捧走徕卡杯。三峡大学和南昌工学院分获团体第二名和团体第三名。  继去年第十二届大赛新增了全国大学生金相大会赛道之后，永新杯第二届全国大学生金相大会在本届大赛上再度亮相，比赛内容和比赛形式进一步丰富，吸引了268所高校的7250名选手参赛。  经过各参赛高校组织的校内预赛和全国复赛，438名选手进入了决赛阶段的比赛，并最终产生了个人一等奖53名、个人二等奖78名和个人三等奖198名；团体一等奖3个，团体二等奖5个和团体16个。湘潭大学吴湘获得本届比赛个人最高奖永新特别奖，西安交通大学石丽婷、华中科技大学林朝明和河海大学李宗翰获得永新优胜奖；华中科技大学获得团体决赛第一名，中国石油大学(华东)获得团体最高奖永新杯。  大赛开幕式上一场由参赛师生代表和承办单位志愿者联袂表演的快闪《明天会更好》预示了第十三届大赛的承前启后继往开来再创辉煌。第十三届大赛的成功举办，得益于承办单位黄冈师范学院周到细致的筹备工作，黄冈师范学院举全校之力为大赛提供了全方位的保障。决赛阶段比赛期间，黄冈市政府也协调了各方面力量，从住宿、餐饮、交通、安保、医疗等方面为大赛顺利进行提供了服务。短短五天的比赛，黄冈师范学院的筹备工作组团队和志愿者团队给3400余名参赛师生留下了难忘的回忆。  在深情悠扬的《难忘今宵》乐曲声中，第十三届全国大学生金相技能大赛在黄冈师范学院体育中心落下帷幕，参赛师生争先恐后地在主席台背景板前合影留念，久久不忍离去，大家相约着来年在四川宜宾再见。    扫码回看直播内容一号裁判室回看      二号裁判室回看      三号裁判室回看                                         关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。        

本文转载自神外前沿公众号*仅供医疗卫生专业人士参考    神外前沿讯，《神刀三人行》第二辑主题为“攻坚复杂颅底肿瘤”。我们有幸邀请到国内颅底领域三位专家与会，分别是首都医科大学三博脑科医院副院长张宏伟教授（专访链接）、首都医科大学附属北京同仁医院神经外科主任康军教授（专访链接）、北京大学第一医院神经外科主任伊志强教授（专访链接）。复杂颅底肿瘤手术难度高、风险大，但恰恰这个部位的病变良性居多，很多患者可以通过手术获得治愈机会。而对术者而言，开展复杂颅底手术，要承担着巨大的挑战甚至压力，要“全副武装”上阵，要同时掌握显微镜和内镜下的操作，要精通颅底及周围的解剖结构，要能够处理各种血管风险，要能守住手术安全红线，还要能够在术后进行各种类型的修复。要手术，要技术，更要情怀。播出目录    第1期：复杂颅底的情怀  追求手术巅峰与治愈机会 第2期：颅底手术安全红线 绕不开颈内动脉第3期：鼻咽癌放疗后复发困境  大出血的手术救治（本期）第4期：复杂颅底的双镜联合  进退之间的思考本专辑第3期内容如下：谈话内容康军： 说到复杂颅底手术，我们前一段时间处理了一些鼻咽癌大出血。张宏伟：做放疗了？康军： 那肯定是放疗，是放疗以后的鼻咽癌的大出血，这种我们遇到好多了，需要神经介入治疗。伊志强：大概我每个月都会有一例到几例的类似患者，都是从口腔医院来的，他们做完了，有时候颞下窝的肿瘤，还有一些经舌也是靠近颅底的，初步做过放疗。往往是颌内动脉、还有颈内动脉就破了，大出血，我们救过来好多，也有还没来得救，就去世的。康军：其实鼻咽癌主要是耳鼻科的常见病，手术主要是明确诊断，然后就放疗为主。南方这样的病比较多，尤其广东地区。因为我们医院的耳鼻喉科是重点学科，所以他们处理这样病人比较多，但是耳鼻喉科医生通常不做神经介入。康军： 神经介入主要是咱们神经外科来做，但是包括血管搭桥，甚至用血管搭桥，把颈内动脉给跨过去，然后这边的颈内动脉连着病变都可以切掉，不管是鼻内镜还是开颅手术，但是大部分我们还是用介入方法都可以把这种鼻出血治愈。最近一个月，可能我们就也和鼻科合作做了两三个这样的手术了，用覆膜支架。现在支架相对来说比较容易，比我们搭在创伤上要小的多。如果真的不能这样处理，那可能就需要搭桥了。那血管搭桥的技术，肯定是我们神经外科的首当其冲，因为涉及到颅内搭桥，不管是高流量搭桥，如果是颈总动脉或者颈内动脉跨过去的话，那搭桥到颅内，那就要做大脑中动脉搭桥、Fukushima搭桥等。所以我觉得如果说真的有这样的病人，需要处理的话，那就需要多一个多学科的合作。康军： 鼻咽癌的治疗不是我们的长项，但是出了并发症，就得找神经外科了，这就是今天我们讨论复杂颅底的话题。复杂颅底包括多种技术，神经介入技术、血管搭桥技术，而且我们现在很多手术都在杂交手术室完成，包括术前栓塞，术前先栓一下，然后切肿瘤，这种很常见。伊志强：鼻咽癌出血的还是比较多，我们术前大概能判断有可能会出血。放疗之后再出血，我觉得有些问题要考虑。对于这些做过放疗之后已经累及动脉，因为出血在颈外的分支不可怕，最可怕是颈内的。因为一旦大出血之后，未必有机会去做手术。所以对于这种高风险手术，可能要提前要做些工作，比如说我们提前要做造影，做压颈试验 ，看看交叉代偿，如果代偿很好，但还不放心，还可以做一下球囊闭塞实验。如果球囊实验，确实非常好的话，有这么一个基础，将来如果真的破了，有几个选择。第一个就像康军主任说的，我们有这个技术，也有材料，血管支架提起准备好，因为这个支架在放的时候还要判断破口。第二，要是正好在一个拐弯，而且贴壁还存在问题，嗯，如果贴壁贴不好，内漏了，可能会出血。贴完了之后我们一般拿球囊再挤一下，贴住，这是很好的。如果没这个技术，没这个材料，你如果提前做了很好的评估的话，那为了救命，上去赶紧闭掉，这是最靠谱的。否则可能就不给你第二次机会了。伊志强：还有一个，肿瘤切除也好、放疗也好，现在有一些覆膜支架也有提前预制的。比如说我觉得这个地方不结实了，那我提前拿一个长的覆膜支架铺过来。那可能会延缓破裂或不破裂了。血管外科通道做颈动脉体瘤，有这做的，直接先放一个类似钢管的东西，然后切到这，觉得是金属，那这个地方可能就保护住了，而且也知道了，可能就不至于破了。如果真的是出血急症做的话，其实还是一些大的中心，有经验有条件才行。如果是不是在综合医院，如果没有那成熟的血管介入，就是搞神经介入的团队，而且还有人有准备材料，其实风险还是蛮高的。康军： 其实即使在大医院也是非常凶险的，我们病房就有这样的病人，比如明天要给做造影了，今天就出血了，而且出血很大，一看就是休克前期那种状态，赶紧输血和压迫，然后再急诊去做。而且多次放疗以后是恶液质状态，本身身体就很差，种病人真的是非常危险。张宏伟：但对这个处理，我感觉略有不同，就是说一旦发生这种大出血，无论是颈内还是颈外，我感觉已经说明一个问题，就是如果是介入能解决的，肯定是小的一个破口，或者放疗早期，神经介入可能会肯定是起作用。但是如果病人已经发生大出血了。张宏伟： 往往需要综合风险，患者岩骨段和周围的骨质，已经完全坏死。在加上血管壁的放射性损伤。这种情况之下再用覆膜支架，我觉得可能就次要考虑了。这个时候就要先救命，但是救完命之后怎么根本解决。所以我现在处理的方式是什么，就是把周围坏死骨质全部拿掉，然后从外边给给新生的固定，比如用一些肌肉去做，然后必要的时候，再从里边辅助。所以我感觉，对于这种严重伴有骨质坏死的出血，是否就是以外边的为主，介入作为一个评估的手段？因为弹簧圈和覆膜支架，还比较贵，最终可能还没有解决根本问题，有没有这个问题存在？康军： 张宏伟院长说太对了，就是要先止住血，先救命。不止住血的话，就没有别的机会了。放疗以后鼻咽部的慢性骨髓炎、黏膜都是一种放射性坏死状态，都是破破糟糟的，所以我们如果有搭桥技术，那一定要把周围的坏死病灶之类的清掉，否则感染也是麻烦事。这种我们也都做过。张宏伟： 搭桥就是终极手段了，在不能断血管的情况下。康军：还有一个，如果之前的实验能闭塞，在闭塞就可以牺牲掉血管，因为颈内动脉必须得处理好，否则就出血了。本期嘉宾简介    张宏伟，主任医师、教授、博士研究生导师，首都医科大学三博脑科医院副院长，首都医科大学第十一临床医学院副院长，首都医科大学垂体瘤临床诊疗与研究中心副主任，首都医科大学三博脑科医院神经外科主任，首都医科大学三博脑科医院神经外科教研室 主任。多年来主要从事脑肿瘤的临床治疗，如听神经瘤、脑膜瘤、三叉神经鞘瘤、脊索瘤等的手术切除、胶质瘤等中枢神经系统恶性肿瘤以手术为主的综合治疗等，特别是对以垂体瘤为主的鞍区肿瘤、松果体区肿瘤、复杂的大型颅底肿瘤的诊断及手术治疗有自己独到的经验，其中大型听神经瘤面神经的保留上也积累了丰富的经验，2014年入选“中国名医百强榜”。主持科技部、国家自然科学基金委、卫生部、北京市科委、北京市教委重点项目等课题6项;主持国家重点研发计划关于胶质瘤的免疫治疗和老年人多病共患子课题2项，在Neurosurgery、Aging-US、J mol neuroscience、 Neurological Research、Neurosurgical Review、《中华外科杂志》、《中华神经外科杂志》等中外杂志上发表专业学术论文40余篇;已培养博士、硕士研究生10余名。行业任职：中国医师协会神经外科医师分会微侵袭神经外科专家委员会委员、中国垂体瘤协作组专家委员会委员、中华医学会北京分会委员、《中国微侵袭神经外科》杂志第六届编辑委员会 编委、《中华外科杂志》第十二届、十三届编辑委员会 通讯编委、《临床神经外科杂志》 编委《中国脑科疾病与康复》杂志第一届编辑委员会 编委。    康军 教授，首都医科大学附属北京同仁医院神经外科 主任, 主任医师，硕士研究生导师，医学博士，博士后。专业领域：从事神经外科专业30年，治疗各类神经外科疾病，尤其内镜和显微镜处理颅底外科病变，复杂颅面创伤、脑脊液漏、各类颅神经尤其是视神经相关疾病、颅内肿瘤、功能神经外科疾病、脑血管病和脊柱神经外科疾病。在复杂颅底沟通性病变，鞍区肿瘤，复杂颅面创伤，视神经损伤，复杂脑脊液漏等疾病的诊疗上具有丰富的经验和较高的水平。学术及社会兼职：世界华人神经外科学会委员、中国医师协会神经内镜专业委员会委员、中国医药教育协会神经外科专业委员会常务委员、中华医学会神经外科分会微侵袭与内镜学组委员、中华医学会北京市神经外科分会常委及神经内镜学组副组长、中国医师协会北京市神经外科分会常委及常务理事、中国垂体瘤协作组委员, 中国医师协会神经修复专业委员会委员及颅底神经修复学组副组长、中国医药教育协会内镜与微创医学专业委员会第一、二届常务委员、北京市第二届住培专业委员会外科学组委员、中国人体健康科技促进会临床神经科学技术转化专业委员会常务委员、国家发改委医疗器械中心评审专家、北京转化医学学会理事、北京市自然科学基金评审专家、《中国医药》、《现代神经外科杂志》编委、《中华医学杂志》特邀审稿专家等。学术成绩：以第一作者及通讯作者发表文章40余篇，SCI收录15篇，参编、主译及副主译著作多部，主持北京市科委，北京市自然基金，首发基金课题各一项。    伊志强，医学博士，主任医师，北京大学第一医院神经外科主任。从事神经外科工作20余年，擅长神经外科各类疾病的诊治，在颅内外沟通肿瘤的诊治方面有丰富经验。参加及主持国自然、教育部、十一五、十二五等科研课题多项。在国内外核心期刊发表论文80余篇，其中SCI收录20余篇。主译、参译及参编神经外科专著10余部。2010年被评为北京大学抗震救灾优秀共产党员。2019年获教育部高等学校科学研究优秀成果奖科学技术进步奖二等奖。2021年获王忠诚中国神经外科医师青年医师奖。受聘为备战2024巴黎奥运会医疗专家。目前担任中国医师协会神经外科分会青年委员，中华医学会医疗鉴定专家，中华医学会运动医疗分会医务监督学组委员，北京医学会神经外科分会青年委员及颅底学组委员，北京医师协会神经介入专科医师分会常务理事，北京大学医学部神经外科学系青年委员会主任委员，北京慢性病防治及健康教育研究会神经外科分会副主任委员，中国医师协会神经修复专业委员会听觉修复学组副主任委员，欧美同学会颅底外科分会副秘书长，中国人体健康科技促进会神经调控与康复委员会常委，中国解剖学会神经外科分会常委。任《中国微侵袭神经外科杂志》, 《中华神经外科疾病研究杂志》，《国际神经病学神经外科学杂志》，Chinese journal of traumatology，Journal of Aging and Rehabilitation，Brain Science Advances等多家期刊编委及审稿专家。               点击此处申请样机试用                    

 开发用于生命科学应用的多波长落射或入射照明荧光显微镜和反射对比显微镜。    多年来，荧光显微镜一直仅使用透射光和暗场照明。随着时间的推移，对改进照明的需求不断增长，这导致了落射照明（也称为入射光照明）的发展。经过 40 年的发展和改进，落射照明荧光显微镜已成为生命科学、临床医学诊断和材料科学领域常规实验室工作和研究的实用方法。大部分开发工作由 Ploem 集团和 Leitz 公司（现为 Leica Microsystems）完成。荧光和显微镜荧光既可以是生物和无机结构的自发荧光，也可以是用特殊染料（荧光染料、荧光标记）处理标本后产生的所谓二次荧光 [1-3]。要在显微镜中进行荧光成像，必须满足以下要求：强光源（LED 或气弧灯）、用于准确选择激发和发射光的适当透射滤光系统，以及适合的荧光成像的光学部件，即聚光镜、照明部件、分光镜、物镜、镜筒透镜、目镜和照相机 [4]。使用共聚焦显微镜系统可以进行多光子荧光显微镜观察，使用比发射光波长更长的 2 个或更多光子进行激发[5]。与今天相比，荧光显微镜的首次应用是在透射光和暗视野显微镜的基础上进行的，这是因为当时荧光显微镜的应用范围有限。但是，随着荧光显微镜在组织学、细胞学、分子生物学和免疫诊断等领域的应用日益重要，人们越来越需要从根本上改进照明和观察技术。这一需求催生了落射光显微镜或入射光荧光显微镜的诞生 [6]。 经过近 40 年的发展和改进，这项技术已成为生物学、医学、材料科学和工业领域常规和研究工作的基本工具之一。入射光荧光显微技术的进步主要得益于 Ploem 小组的研究工作及其引领潮流的作用，同时也得益于 Leitz（现为 Leica Microsystems）在开发所需光学仪器方面的前瞻性战略。本文将介绍这一发展历程。落射光荧光显微镜的早期发展关于荧光显微镜的历史回顾，读者可参阅 Kasten [7]。Policard 和 Paillot [8] 早已使用落射（垂直入射激发光）。Leitz （现为 Leica Microsystems）、Bausch & Lomb、Reichert 和 Zeiss 制造了一些仪器，这些仪器部分是根据 Ellinger 和 Hirt [9,10]、Singer [11] 以及 Mehler 和 Pick [12,13] 的建议制造的。Haitinger [14] 描述了早期的徕兹荧光落射照明系统。关于落射荧光显微镜发展的更多细节，读者可参阅 Rost [15]，关于入射光荧光显微镜的早期应用，可参阅 Hauser [16]。Brumberg 和 Krylova [17]对落射照明荧光显微镜的一大贡献是引入了二色分光镜（简称：二向色镜），用于紫外线（UV）入射照明。落射具有明显的光学优势。透射照明的聚光器和物镜具有独立的光轴，必须完全对准，而落射照明则不同，物镜既是聚光器，又是集光物镜，避免了所有对准问题。与透射荧光显微镜相比，使用二向色镜将荧光发射与激发光分离要容易得多。而研发人员缺乏兴趣的主要原因可能是透射光暗场紫外激发在大多数荧光显微镜应用中已经取得了极佳的效果[18]。用紫外落射激发取代它不会带来明显的优势。直到 60 年代末，使用暗视野聚光器的透射光仍是行业标准。然而，随着人们对分子生物学的兴趣迅速增长，许多用于检测细胞中重要大分子的单克隆抗体也应运而生。为了研究细胞器中几种大分子的详细形态位置，人们越来越多地使用不同颜色的荧光标记。传统上用于荧光显微镜的紫外线激发并不适合同时检测细胞中的多种荧光色素。1962 年左右，Ploem 开始与肖特公司合作开发二向色光束发射器，用于反射蓝光和绿光，利用落射照明进行荧光显微镜观察。在 1965 年发表第一篇关于使用窄带蓝光和绿光进行落射照明的文章[19]时，他还不知道 Brumberg 和 Krylova [20] 开发出了用于入射光紫外激发的二向色镜。徕兹公司也不知道，他从该公司获得了一个带有中性分光镜的"Opak"落射照明部件。他必须对这种照明部件进行改装，以便在入射光路径上安装一个滑块，滑块上有四个二向色镜，分别用于紫外线、紫光、蓝光和绿光的激发。这种装置由阿姆斯特丹大学开发，可以方便地在入射光路中更换不同的二向色镜（图 1a）。激发光的波长可以轻松快速地改变。  图 1：a) 荧光多波长落射光源，四个二向色镜安装在滑块中，用于紫外、紫光、蓝光和绿光激发光的入射照明。b) Leitz 多波长落射光源原型（未商业化），带有四个安装在滑块中的二向色镜[20]。很快，人们发现使用窄波段蓝光和绿光激发为检测广泛使用的免疫荧光标记--异硫氰酸荧光素（FITC）和异硫氰酸四甲基罗丹明（TRITC）提供了最佳可能性。使用蓝光和绿光激发还能最大限度地减少组织成分的自发荧光，这是传统的紫外线透射照明达不到的效果。现在，FITC 可以使用窄带蓝光（使用半宽为 16 纳米的带干扰滤光片）激发，接近 490 纳米（长蓝波长）的激发最大值，并能清楚地观察到 520 纳米的绿色荧光发射峰。组织成分的自发荧光被降至最低（图 2a 和 b），从而获得高对比度。  图 2：a) 用 FITC 对组织细胞进行免疫标记，并用宽波段紫外线激发光照射。b) 与 2a 相同的组织和免疫印迹，使用窄波段蓝光（490 纳米）进行落射照明。注意图像对比度的增加 [19]。将 FITC 激发至其激发最大值附近可实现高效激发，甚至可以使用在蓝色波长范围内没有强发射峰的汞灯。此外，使用绿色反射二色镜进行落射照明，还首次实现了用 546 纳米的强汞发射线激发 Feulgen-pararosaniline （图 3a 和 b）。  图 3：a) 肝组织。用 Feulgen-parosanilin 对 DNA 进行染色，并用透射绿光观察细胞核。这种染色剂被称为吸收性染色剂，不具有荧光性。用窄带绿光（546 纳米）照射其中一个细胞核，产生红色荧光。使用窄波段绿光（546 纳米）和反射绿光的二向色镜进行落射。这可能是第一个用绿光激发显微镜的例子[19]。注意图像对比度大。在描述带有四个二分束片的徕兹（Leitz）原型多波长落射照明部件的第二篇文章中（图1b），Ploem [20]承认了Brumberg和Krylova [17]的贡献。由于当时俄罗斯的研究还处于起步阶段，而且俄罗斯或东德在落射荧光显微镜方面还没有任何重大的工业发展，因此徕兹公司早先并没有意识到这一发展。采用紫外光进行落射照明的可能性虽然在一些应用中非常有用，但并不是徕兹公司进行新技术开发的动机，因为他们已经有了出色的透射暗场紫外光激发技术。然而，随着全球范围内常规免疫荧光显微镜在医疗诊断和分子生物学研究中的应用日益广泛，使用蓝光和绿光窄带激发的新型落射照明技术也将从中受益标准的高压汞弧灯的使用让其成为了一个切实可行的提案。随后，Leitz 开发出一种新型的多波长荧光落射照明部件（PLOEMOPAK），带有四个可旋转的二向色分光镜，分别用于紫外光、紫外光、蓝光和绿光[22]。在连续几代徕兹照明部件（包含四个二向色镜）中，又增加了阻隔滤光器和用于激发片的旋转转塔。最后，卡夫（Kraft）[21] 设计了一种优雅的落射照明部件，包含多组激发滤光片、二色分光镜、阻挡滤光片或发射滤光片，安装在一个滤光片立方体或滤光片块中（图 4）。  图 4：用于荧光显微镜的完整徕兹滤光块，包含激发滤光片、二向色镜和发射（屏障）滤光片。由于这种照明部件可将滤光块快速转入光路，因此对同一组织切片进行多波长照明成为现实。此外，用户还可以更换照明部件中的四个滤光块（图 1c）。用户可以从许多滤光块中选择不同的四组滤光块进行组装，这些滤光块包含激发片、发射片和二向色镜的组合，是为不同应用而开发的。根据 Ploem 的建议，Leitz 还生产了一种带落射照明的倒置显微镜（图 5a 和 b）。有关用于多波长荧光显微镜的 PLOEMOPAK 照明部件的综述，请参阅 Pluta [23] 的综述。  图 5：a) 带有多波长落射照明部件的徕卡倒置荧光显微镜。b) 在移植研究中，用装有落射照明部件的倒置显微镜对在Terasaki®塑料皿中的人类淋巴细胞的荧光细胞毒性检测试验进行成像。c) 8滤光块的Leitz电动落射照明部件。Leitz滤光块系统非常高效，即使在今天，大多数显微镜制造商仍将类似类型的滤光块用于多波长荧光显微镜。这一发展最终促成了自动多波长荧光落射照明部件的开发，它可容纳八个滤光块，用于不同的波长范围（图 5c）。在滤光块之间切换时，由于采用了 0 像素位移技术，电脑显示器上的像素位移得以避免，或保持在 35 毫米胶片的分辨力以下。这种照明部件还可用于研究染色体的荧光原位杂交方法（FISH）。Ploem [24,25,26,27,28]、van der Ploeg 和 Ploem [29] 以及 Nairn 和 Ploem [30]进一步探索了许多生物医学应用必须开发的滤光片组合。这是 Schott 和 Leitz 合作完成的。Rygaard 和 Olson [31] 开发了一种新型短波通高透射干扰滤光片，对蓝光具有极高的透射率，对波长长于 490 nm 的波长具有敏锐的过滤功能。Ploem [32]将这种短波通（SP）滤光片与肖特（Schott）公司生产的 1 毫米 Y（黄色）455 滤光片结合使用，后者可以阻挡紫外线的激发，并建议 Balzers 公司开发一种类似的滤光片（SP 560），用于绿光激发，另一种滤光片（长波通（LP）425）用于紫光激发。后一种滤光片被应用于神经递质的研究[25]。在图 6a 和 b 中可以观察到由此产生的蓝色荧光。  图 6：a) 大鼠肠系膜，小血管周围有蓝色荧光肾上腺素能（CA）神经丛和黄色荧光肥大细胞（5-HT）。b) 与 6a 相同的组织和染色，采用落射照明和窄带紫光激发光（LP 3 mm、Y 400 和 SP 425 干涉滤光片），495 nm 的二向色镜反射紫光，以及 LP 460 nm 的屏障滤光片。这个滤光块首次观察到了蓝色荧光肾上腺素能神经纤维，与黄色荧光肥大细胞截然不同[25]。在光学行业方面，Kraft [33]、Walter [34,35]、Trapp [36]、和Herzog [37]等人撰写了有关这些发展的早期文章和评论。用于落射荧光显微镜的滤光片主要分为两类：(a) 主激发滤光片 LP（长通）和 SP（短通）（在德国文献中称为 KP 滤光片）；(b) 次级滤光片，如屏障滤光片和发射滤光片[32]。后者也被称为荧光选择滤光片，例如用于限制 FITC 在 520 纳米波长处的荧光峰值。Reichman [38]对荧光显微镜用滤光片进行了广泛的综述。Cormane[39]首次证明，在人类皮肤病的免疫荧光研究中，荧光标签 FITC 的窄带蓝光落射照射可产生最佳对比度。过去，用紫外线透射光激发皮肤中的弹性纤维会产生强烈的自发荧光，从而严重阻碍了荧光抗体的观察。70 年代，随着免疫荧光和其他分子生物学方法（如 FISH）在医学诊断和研究中的应用在全球范围内不断增加，徕兹在落射照明荧光显微镜方面的开创性工作也应运而生。Hijmans 等人[40.41]率先证明了新型多波长激发外发光器的实用性，他们使用与绿色荧光染色剂 FITC 和红色荧光染色剂 TRITC 的抗体，选择性地检测细胞中某些类别的免疫球蛋白。他们采用蓝光和绿光双波长激发法，并通过 520 纳米的发射滤光片选择 FITC 的荧光峰值（图 7）。Brandtzaeg [42] 和 Klein 等人[43]在使用 Leitz 落射部件的双波长激发法鉴定免疫学上重要的细胞类型时也有类似的发现。在"花环"形成的血液染色中，使用紫外光和绿光的双波长激发法可以显示单核细胞周围的红细胞（图 8）。  图 7：用抗 kappa TRITC 结合物和抗 IgG FITC 结合物对骨髓细胞进行染色。用窄波段绿光和蓝光外显，含有 TRITC 的细胞发出红色荧光，含有 FITC 的细胞发出绿色荧光。有些细胞同时含有 FITC 和 TRITC。  图 8： "莲座状 "的人类血细胞。用紫外光落射照射用蓝色荧光染料石炭酸染色的红细胞。曙红染色的淋巴细胞经绿光激发后用发射出橘红色的荧光[19]。落射照明在落射照明中，使用二向色镜将入射光偏转到样本上。二向色镜的光谱特性是这样设计的：只有所需的激发波长才能通过物镜向下偏转到样本上，而不需要的波长则会被二向色镜透射并收集到二向色镜后面的光阱中[21]。消除这些不需要的激发光可显著减少杂散光，从而提高图像对比度。二色镜可将所需的（短波长）激发光通过物镜偏转到样本上，但对较长的荧光波长是透明的。抑制滤光片（屏障滤光片）可吸收（或反射）从标本和物镜透镜表面反射的激发光，但对荧光高度透明，荧光随后可到达目镜或相机传感器。落射照明的效率与物镜数值孔径（NA）的四次方有关，物镜首先用作聚光器，然后作为聚光镜用于观察。在第一台多波长落射照明设备上市时，只有高 NA（0.95、1.30）的高倍率物镜（70x、100x）可供选择。根据 Ploem [19,20]的建议，Leitz 成为第一家生产中等功率物镜的制造商，如 NA 为 1.30 的油浸 40x 物镜（图 9）。这种新型物镜专为落射照明荧光显微镜而设计，可产生非常明亮的图像，从而缩短了常规荧光显微摄影的曝光时间。  图 9：早期的 Leitz 40x 油浸物镜原型（"Versuchs"），NA 值为 1.30，用于荧光落射照明技术的试验[20]。物镜入瞳孔（孔径）的优化填充落射荧光显微镜的一个问题是如何以最佳方式使光源图像充满物镜的入口瞳孔。典型的光源中等放大倍率约为 8 倍。这一结果与各种高压汞灯和氙弧灯的电弧大小不同有关。此外，物镜的入口瞳孔也有很大差异，例如 100 倍、NA 0.90 的物镜入口瞳孔为 3.6 毫米，而 10 倍、NA 0.30 的物镜入口瞳孔为 12 毫米。此外，如果只有部分弧光能进入入口瞳孔，所获得的荧光强度就会减弱。Schönenborn [44] 报告了 DMR（HCS）显微镜中创新的入射光的路径。现在，落射光路的设计允许根据不同应用的特定光源对光路径进行单独调整。假定在入射光光路中使用科勒照明，则需要将照明光学部件和聚光镜组合起来，以便在物镜的入射孔中对光源成像。对于特定物镜，光源放大倍率的选择直接取决于其几何尺寸。卤素灯的调节应该非常精确，因为灯丝的线圈对于灯丝调整的不准确非常敏感。因此建议使用相对较低的放大倍率。徕卡显微系统公司进一步改进了荧光显微镜的物镜。选择自发荧光特性低的光学玻璃可提高图像对比度。宽场照明荧光显微镜的一个问题是，相对较厚的标本无法获得清晰的图像。造成这种结果的原因是，在使用高数值孔径物镜时，相邻光学平面的散射光会对最终显微镜图像造成不必要的失焦。不过，徕卡共聚焦显微镜可以利用光片技术，从样本内的一个或多个焦平面获得高横向和纵向分辨率的清晰图像。光谱拆分进一步提高了样本中多种荧光染料的颜色分离效果。在生物医学和材料研究领域，计算机辅助光谱共聚焦扫描显微镜已成为荧光显微镜的强大工具。最近，一种名为 Mica 的成像系统问世。它统一了多种荧光成像模式，包括宽场、共焦、Thunder、LIGHTNING、多重标记等。用于分子生物学各种应用的滤光块在过去的十年中，分子生物学的应用急剧增加，因此开发出了许多适用于各种应用的滤光片组合，其被安装在各种滤光块支架中。荧光落射照明可通过手动或电动方式切换2至8个滤光块。在此不对各种滤光快的多种应用进行全面详细的讨论。抗反射-对比显微镜 (RCM)徕兹公司开发的落射光显微镜还带来了进一步的发展：反射-对比显微镜（RCM）[45,46]。反射-对比显微镜可从过氧化物酶-DAB、免疫金银和免疫磷酸酶等常规标记物染色的标本中获得强信号（图10和11）。由于强信号增强了图像对比度，且图像质量不会因前后焦点的偏移而变差， RCM 可以用来观察超薄的样品并可获得高清的图像。  图 10：使用反射-对比显微镜（RCM）观察和拍摄的附着在载玻片上的被单克隆抗体标记的小鼠腹腔巨噬细胞。单克隆抗体对该样本的表面抗原进行了标记，然后使用了免疫过氧化物酶染色。由于DABox染料的强反射，可以看到在普通显微镜下无法观察到的细胞突起的细长部分。  图 11：用过氧化物酶 DAB 染色法制备的肾组织超薄切片（约 35 纳米厚）。与荧光显微镜相比，用反射对比显微镜观察肾小球的线性染色模式能获得更清晰的图像。电子显微镜（EM）中使用的大多数免疫染色物质的强反射提供了如此高对比度，以至于这种染色可以与许多经典的（吸收性的）组织化学染色物质结合在一起，用于显示适度强反射的重要大分子。后者的染色通常用于增强细微的形态定位，并且在许多情况下，比仅使用荧光标记物更精确地确定了免疫标记物的位置。此外，这样的光学显微镜观察结果可以通过使用具有相同免疫染色的下一个超薄切片进行电子显微镜检查来进行确认。  图 12：用于反射对比显微镜的滤光块包含一个偏振镜、一个中性（50%）分光镜和一个分析器。该滤光块可插入 Leica 荧光显微镜中落射照明部件的一个位置。通过共聚焦激光扫描显微技术，可以在不需要特殊物镜或其他减少杂散光光学措施的情况下执行反射式对比显微（RCM），得益于通过小孔照明消除杂散光的效果。大多数具有吸收特性的免疫染色剂对激光有着非常强的反射作用，并且其褪色现象极为有限。这些染色剂常允许采用更小的小孔尺寸（例如，10微米），此尺寸比在共聚焦荧光激光扫描显微中使用的大多数荧光染料所能接受的小孔尺寸小（为其五分之一到十分之一）。因此，反射型免疫标记的使用可显著提高光学分辨率。使用荧光染料双重染色并通过Leica共聚焦激光扫描显微镜成像的样本，提供了同时检测多个标记物和一个反射型免疫标记物的可能性。RCM 使用荧光显微镜架、落射照明部件和高强度光源（如气体弧光灯）。在荧光落射照明部件中，必须插入一个额外的偏振滤光块，其包含偏振片、反射器和分析器（图 12）。此外，还必须将反射对比（RC）光阑模块（包含中央光阑系统）置于入射光路径中。该RC光阑模块适配具有中央光阑和/或孔径光阑的滑动组。此外，应该将专门为反射对比显微镜开发的特殊目镜添加到显微镜目镜套装中。反射光显微镜的对比度基于反射强度（反射率）的差异。对于这种显微镜，光的反射发生在每一个光学边界，即当折射率和/或吸收率发生变化时。对于反射率小于 1%（大部分小于 0.2%）的生物标本，由于显微镜管内存在不必要的反射，因此使用传统显微镜几乎不可能获得反射光图像。 第一种方法是在入射光路径上与物镜后焦平面（孔径）相接的平面上插入中心挡片（带有中心挡片的光圈光阑，形成环形孔径），使入射光成为环形光锥。第二种方法是使用“防反射”方法减少不必要的散射光或反射光。通过使用交叉偏振片来抑制显微镜内部的反射光，从而使只有从标本反射的光才能传递到目镜或相机传感器。因此，物镜的前透镜上装有四分之一波板。光线通过四分之一波板时（向下到达样本，从样本反射后向上），光线的偏振方向会改变为 2 x 45° = 90°。    参加问卷调研，领取精美小礼品！    8月底活动截止届时答题满分的小伙伴会收到我们的小礼品    问卷答案的答案可以在之前的推文内寻找哦~     徕卡175周年：徕卡品牌的发展历程，也是显微技术的发展史                    相关产品      DMi8 S 高速成像平台 倒置显微镜成像解决方案      正置双目生物显微镜 徕卡DM4 B & 徕卡DM6 B      STELLARIS共聚焦显微镜平台      MICA全场景显微成像分析平台            

     电子显微镜是现代科学研究中一种非常重要的工具，尤其在纳米技术和材料科学领域发挥着不可或缺的作用。在纳米材料研究领域，电镜可以用于观察和分析纳米级别的材料结构和特性，这对于研究新材料、改进现有材料以及开发新型功能材料具有重要意义。在生物医学研究领域，电镜被广泛应用于观察细胞和生物分子的微观结构，这有助于理解疾病的发病机制，以及开发新的治疗方法。在环境科学领域，电镜可以用于研究污染物在环境中的行为和影响，以及评估环境修复技术的效果。在工业应用领域，电镜可以帮助检查产品的微观缺陷，确保产品质量。此外，它还可以用于研究和开发新的生产工艺。总之，电镜的应用非常广泛，几乎涵盖了自然科学和工程技术的各个领域，它为我们提供了一个观察和研究物质微观结构的窗口，推动了科学的发展和技术的进步。为了实现表征更好效果、发挥电镜更佳性能、维护电镜持久使用，制样仍需要满足一定的要求。否则，见非所见，而且污染、积碳、荷电、损伤、漂移等意外也会接踵而至，让人步履艰难。为了解决电镜制样过程中遇到的一系列问题，徕卡显微系统(上海)贸易有限公司、上海主流贸易有限公司与甬江实验室材料分析与检测中心于2024年8月22日至8月23日在甬江实验室联合主办先进电镜制样技术高阶培训会，本次培训会针对材料科学和工业领域常见的电镜制样手段进行分析与介绍，结合具体样品讨论仪器操作技巧，维护保养和制样参数，旨在从样品出发，解决实际问题。本次会议诚邀从事电镜、纳米技术、材料科学、新能源、生物医学、环境科学、半导体等相关领域的企业研发人员、品控人员；从事高校、科研院所等分析测试中心负责人、技术负责人、仪器应用专家、以及科研团队。指导单位：镇海区科学技术局主办单位：徕卡显微系统(上海)贸易有限公司、上海主流贸易有限公司、甬江实验室材料分析与检测中心、镇海科技市场协办单位：宁波科技大市场、全国分析测试技术联盟    时间地点TIME AND PLACE会议时间 2024年8月22日  09:00-12:00；13:30-17:002024年8月23日  09:00-12:00会议地点 浙江省宁波市慈海南路1792号甬江实验室N114会议议程AGENDA2024年8月22日（第一天）08:45-09:00签到09:00-09:30先进分析测试与表征技术介绍——高钟伟 甬江实验室材料分析与检测中心 博士09:30-10:00制样技术迭代开启捷径之门——谢佩松 徕卡显微系统（上海）贸易有限公司 高级工程师10:00-10:30FIB-TEM强强联手解决材料新问题——张诗佳 甬江实验室材料分析与检测中心 工程师10:30-10:45茶歇+合影10:45-11:30无损制样新方法-氩离子抛光技术在新能源和失效分析方面的应用——包沈源 徕卡显微系统（上海）贸易有限公司 应用经理11:30-12:00自动机械磨抛技术应用和经验分享——谢佩松 徕卡显微系统（上海）贸易有限公司 高级工程师12:00-13:30午餐13:30-14:15“软”材料制样利器-冷冻超薄切片技术简介——庞一烜 徕卡显微系统（上海）贸易有限公司 应用工程师14:15-15:00敏感样品表征新技术-真空冷冻传输技术的最新进展及应用——包沈源 徕卡显微系统（上海）贸易有限公司 应用经理15:00-15:30实验室参观15:30-16:30自由讨论客户可自带典型样品现场讨论制样解决方案16:30-17:00现场制样：精研一体机、氩离子抛光仪和超薄切片机工程师：包沈源、谢佩松2024年8月23日（第二天）时间人员分组内容9:00-12:00 扫描电镜观察内容：观察试样，并针对样品讨论制样方法的优势和应用面工程师：张诗佳、包沈源氩离子抛光内容：仪器操作技巧，维护保养，制样参数优化，样品讨论工程师：包沈源精研一体机内容：仪器操作技巧，维护保养，制样参数优化，样品讨论工程师：庞一烜冷冻超薄切片机内容：仪器操作技巧，维护保养，制样参数优化，样品讨论工程师：谢佩松参会对象ATTENDEES本次会议诚邀从事电镜、纳米技术、材料科学、新能源、生物医学、环境科学、半导体等相关领域的企业研发人员、品控人员；从事高校、科研院所等分析测试中心负责人、技术负责人、仪器应用专家、以及科研团队。会议联系人CONTACTS侯小刚  13524792547  Houxiaogang@weipugroup.com谢佩松  13816624531  Peisong.xie@leica-microsystems.com报名方式REGISTRATION请扫描填写下方二维码，参与报名  甬江实验室材料分析与检测中心简介BRIEF INTRODUCTION甬江实验室材料分析与检测中心（以下简称“中心”）是甬江实验室于 2022 年 6 月建成运行的首个重要平台，是支撑科技创新、服务产业发展的重要利器，承载着甬江实验室“前瞻创新、从 0 到 1、厚植产业、造福社会”的使命责任。中心汇聚了高精尖的仪器设备，引进了一支专业化技术队伍，以高效的管理模式，为企业提供量身定制的“诊”“疗”一体化服务，不止于提供专业化测试服务，还将根据客户需求提供整套的解决方案。中心现有化学分析与理化检测、显微结构与表面分析、可靠性及失效分析等四大专业实验室，集成了化学成分分析、物性测试、显微结构与表面分析、可靠性测试、失效分析等个性化定制、一站式“诊”“疗”服务的专业能力，可针对用户实际需求，为新材料及器件产业技术升级和产品质量提升提供解决方案。目前，服务已覆盖电子信息材料与器件、新能源材料与零部件、高端合金与磁性材料、绿色化工与高端化学品、先进高分子与复合材料、新型医药及医用材料、极端环境使役材料、高端装备材料等面向国民经济和重大战略需求的领域。中心由甬江实验室与国内知名的研究型检测机构——微谱联合组建专业化团队负责运营。秉承“服务赋能，不止于检测”的理念，为客户提供精准、高效、专业和可靠的服务，致力于成为为企业提供创新解决方案的全球领导者，让科技进步更快，让产品质量更好，让人类生活更安全、更健康！    关于徕卡显微系统徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。          

175周年 2024年是徕卡显微成立第175周年。 这175年，既是徕卡品牌的发展历程，也是世界光学显微技术的发展史。 这175年，徕卡始终满怀热忱，以创新将可视化、分析能力推向更高更远。徕卡的愿景是瞰见未知，赋能客户，同创世界健康与美好。 趣 味 小 调 研 点击参加问卷调研 或 扫码参加徕卡175周年庆趣味小调研 让我们共同回顾 徕卡品牌走过的百年风雨历程 感受人类在光学显微技术领域的不断开拓创新 阅读更多 徕卡175周年：徕卡品牌的发展历程，也是显微技术的发展史

引言，时长00:10大型多细胞系统的实时成像是现代生物学研究中的一个重要挑战。传统显微镜技术在提供高分辨率三维图像方面常有不足，尤其是对于需要最小光毒性的深层样本。开发开放式多样本双视角光片显微镜在这一领域取得了显著进展。本文探讨了这一创新显微镜系统的功能和应用。肠类器官利用光片显微镜对模拟肠道上皮的复杂结构——肠类器官进行成像，追踪细胞动态和分化过程。显微镜详细展示了数天内的隐窝和绒毛形成，为细胞周期动态和类器官内不同细胞类型成熟提供了见解。图一：a.表达hGem-mVenus和hCdt1-mCherry的肠类器官（左），染色显示溶菌酶（Lys）和DLL1（中）。b.表达hCdt1-mCherry的肠类器官的最大投影图（MIP），叠加了反向追踪细胞的轨迹，以时间进行颜色编码。虚线对应于z投影。c.对肠类器官的检测1、检测2及融合数据的z投影，叠加了反向追踪细胞的轨迹，显示时间进程。d.肠隐窝的放大图，星号表示同时阳性表达hCdt1、Dll1和溶菌酶的细胞。e.单个细胞的hCdt1、溶菌酶和Dll1强度随时间的定量分析：阳性隐窝细胞（e）；f.阳性绒毛细胞（f）和阳性隐窝细胞（g）。图二：e) 对在最后时间点位于隐窝中的三重阳性细胞（hCdt1、Dll1和溶菌酶）的hCdt1强度随时间的量化。每种颜色代表一个单细胞（n = 4）。f) 对在最后时间点位于绒毛中的hCdt1阳性细胞的hCdt1强度随时间的量化。每种颜色代表一个单细胞（n = 7）。g) 对在最后时间点位于隐窝中的hCdt1阳性细胞的hCdt1强度随时间的量化。每种颜色代表一个单细胞（n = 9）。文中对表达FUCCI2的肠类器官进行了活体成像，并进行了终点固定和免疫荧光评估其细胞类型组成。通过3D配准将最后一个活体成像时间点与染色后的类器官叠加，使用Paneth细胞标记溶菌酶（Lys）和分泌细胞标记Dll1来检测感兴趣的细胞。三重阳性细胞（hCdt1+/Lys+/Dll1+）被反向追踪以监测Paneth细胞的成熟及其在G0/G1期的细胞周期停滞。成熟Paneth细胞的初始位置预测了类器官隐窝的最终位置。接下来，比较了隐窝中的hCdt1+/Lys+/Dll1+ Paneth细胞与hCdt1+/Lys−/Dll−细胞（主要是肠干细胞）和类器官绒毛中的细胞（主要是肠细胞）。进一步识别了那些在记录开始前已经终末分化的肠细胞和Paneth细胞。对于其他细胞，特别是在隐窝中的细胞，确定了它们出现的时间，从而能够追踪它们的完整成熟过程，固定时的平均细胞周期长度为21.9小时。评估细胞类型特定的出现时间，得出结论，Paneth细胞比单阳性hCdt1细胞出现得更早，表明特定的细胞周期长度和特定的分化顺序。这种对细胞行为和成熟过程的洞见在没有活体成像和免疫荧光结合整个类器官体积的情况下是无法实现的。胚状体胚状体是模拟早期胚胎发育的三维干细胞聚集体。光片显微镜捕捉到这些致密结构的单细胞分辨率图像，揭示了细胞运动和形态变化。追踪胚状体内单个细胞的能力突显了光片显微镜在研究动态发育过程中的应用潜力。图三：h. 表达Lck-GFP的胚体在三个时间点（42小时Wnt前期，66小时Wnt中期和90小时Wnt后期）的z平面图像。i. 在h中部分突出显示的胚体细胞，分别为种植后42小时、66小时和90小时。箭头指示细胞的突起。j. 使用Cellpose软件对种植后42小时的Lck-GFP阳性细胞进行的3D代表性分割。k. 比较种植后42小时、66小时和90小时的细胞长轴和短轴的比率，图中显示了中位数、第一和第三四分位数。l. 胚体的最大投影图（MIP），叠加了随时间追踪的细胞。m. 细胞速度（μm/h）的小提琴图，以观察窗口分组，图中显示了中位数、第一和第三四分位数。n. 在42小时、66小时和90小时种植后拍摄的胚体细胞轨迹，中心对齐到坐标系原点，并以颜色编码表示时间进程。o. 在各个成像窗口中，Lck-GFP胚体细胞的轨迹长度。细胞速度（μm/h）的分组小提琴图，图中显示了中位数、第一和第三四分位数。p. Lck-GFP嵌合胚体在各个成像窗口中，所有细胞的平均均方位移（m.s.d.）。比例尺：50 μm（a–d, h, j, l）；20 μm（i）。图四：h) 对悬浮状态下成像的胚体在三个不同时间窗口中长轴和短轴比率的比较。测量在每个成像窗口（42小时、66小时或90小时）内的3个胚体的3D体积上进行，共33个时间点。分别对3753个数据点（42小时）、3340个数据点（66小时）和8861个数据点（90小时）进行了分析。图中显示了中位数、第一和第三四分位数。i) 胚体发育过程中在三个不同时间窗口内成像的细胞速度的小提琴图，显示了中位数（图中数值）及第一和第三四分位数。每个观察窗口中追踪的数据点数量（来自3个单独的胚体）如下：n = 622（42小时），n = 562（66小时），n = 539（90小时）。胚体在悬浮状态下成像。与其他样本不同，胚状体是密集结构，因此难以单细胞分辨率成像。文中使用这个模型系统展示显微镜获取单个细胞运动和形态特征的能力。标准胚状体实验方案使用Wnt激活剂（Chiron99021）以提高中胚层形成效率。这可能会诱导类似上皮-间质转化的行为并增加细胞迁移。为了分析胚状体内的细胞形态，文中生成了嵌合体，其中一部分细胞（约10%）表达膜报告基因（Lck-GFP）。记录胚状体在Wnt脉冲前、中和后的动态。此外，将胚状体嵌入40%的Matrigel中，以防止样本腔室中的机械旋转。使用Cellpose对单个细胞进行3D分割，从而计算长轴/短轴比率，显示细胞伸长在Chir处理期间达到峰值。后期阶段，部分细胞显示出较长的细胞突起。这一观察结果提出了细胞运动性在胚状体发育过程中增加的假设。使用Fiji插件Mastodon，追踪了Lck-GFP阳性细胞，发现迁移的中位速度在胚状体发育过程中增加。在Wnt脉冲期间，迁移速度的中位数增加了1.4倍。Wnt激活后成像的胚体展示了最长的轨迹长度。对3D均方位移的评估表明，从90小时开始追踪的细胞速度增加，并且迁移行为发生了变化。这些发现共同表明，迁移增加，提示Wnt激活增强了细胞运动性并可能在胚体中促进了协调迁移。观察到的细胞形态变化和运动性增加，部分表明了类似上皮-间质转化的过程。这一趋势在嵌入Matrigel中的胚体和悬浮状态下的胚体之间保持一致。开放式多样本双视角光片显微镜设计和特点开放式多样本双视角光片显微镜结合了双重照明和双重检测镜头，以实现多角度的高分辨率成像。其主要特点包括：双重照明和检测系统采用两个相对的照明镜头和两个检测镜头，从不同方向捕捉图像。这种配置最小化了伪影，特别适用于厚大标本的高质量成像。开放式设计这种设计允许从顶部轻松访问样本，便于在成像过程中进行样本操作和添加试剂。多孔安装系统可定制的多孔样本支架使得多样本的高通量成像成为可能，这对于需要并行处理和比较的实验至关重要。相较传统显微镜的优势高通量和低光毒性光片显微镜通过薄光片照明样本，固有地减少了光毒性，这对于长期的实时成像至关重要。双视角设置在保持低光曝光的同时进一步提升了图像质量。多孔系统允许同时成像多个样本，与传统显微镜方法相比显著提高了通量。详细的单细胞分析显微镜的高分辨率和双视角功能使得在大而厚的样本中进行详细的单细胞分析成为可能。这一特性对研究异质生物过程尤其有价值，因为需要在长时间内观察细胞行为和相互作用。灵活性和定制化开放式设计和可定制的样本支架提供了处理不同类型样本和实验设置的灵活性。这种适应性使显微镜适用于从类器官研究到发育生物学和癌症研究的广泛生物学研究。开放式多样本双视角光片显微镜代表了实时成像技术的重大进展。未来的增强可能包括整合自适应光学以进一步提升图像质量，以及结合激光消融或光遗传刺激技术以在成像过程中操纵样本。此外，该系统处理光学透明标本的能力可能扩展其在深层组织成像中的应用。开放式多样本双视角光片显微镜的开发和成功应用标志着生物成像领域的关键一步。通过在长时间内提供大型多细胞系统的高分辨率三维图像，这一技术为理解细胞水平上的复杂生物过程开辟了新的途径。阅读原文：Moos, F., Suppinger, S., de Medeiros, G. et al. Open-top multisample dual-view light-sheet microscope for live imaging of large multicellular systems. Nat Methods 21, 798–803 (2024). https://doi.org/10.1038/s41592-024-02213-w参考文献：（上下滑动查看更多）1. Suppinger, S. et al. Multimodal characterization of murine gastruloid development. Cell Stem Cell 30, 867–884.e11 (2023). 2. Beccari, L. et al. Multi-axial self-organization properties of mouse embryonic stem cells into gastruloids. Nature 562, 272–276 (2018). 3. van den Brink, S. C. & van Oudenaarden, A. 3D gastruloids: a novel frontier in stem cell-based in vitro modeling of mammalian gastrulation. Trends Cell Biol. 31, 747–759 (2021). 4. Pachitariu, M. & Stringer, C. Cellpose 2.0: how to train your own model. Nat. Methods 19, 1634–1641 (2022). 5. Mastodon v.1.0.0-beta-26. GitHub https://github.com/mastodon- sc/mastodon (2022). 6. Hashmi, A. et al. Cell-state transitions and collective cell movement generate an endoderm-like region in gastruloids. eLife 11, e59371 (2022). 7. de Medeiros, G. et al. Multiscale light-sheet organoid imaging framework. Nat. Commun. 13, 4864 (2022). 17. Serra, D. et al. Self-organization and symmetry breaking in intestinal organoid development. Nature 569, 66–72 (2019). 8. Abe, T. et al. Visualization of cell cycle in mouse embryos with Fucci2 reporter directed by Rosa26 promoter. Development 140, 237–246 (2013). 相关产品Viventis LS2 Live 双视野光片荧光显微镜

7月27日至29日，由教育部高等学校材料类专业教学指导委员会主办、黄冈师范学院承办的第十三届“徕卡杯“全国大学生金相技能大赛在黄冈师范学院体育运动中心举行，来自548所高校的2500多名选手参加此次大赛。 全国大学生金相技能大赛始终坚持“以赛促教，以赛促改，以赛促学”的宗旨，为参赛学生提供了展示专业技能和才华的舞台，同时也为他们提供了与同行交流学习的机会。     左右滑动查看更多     7月27日下午，伴随着歌声《明天会更好》，第十三届“徕卡杯”全国大学生金相技能大赛正式开幕。黄冈师范学院党委书记陈向军、全国大学生金相技能大赛竞赛委员会主任委员孙建林等竞赛委员会专家，各校教师、参赛学生代表共同出席开幕式。     左右滑动查看更多     开幕式上还举行了样品抽签仪式，宣誓仪式。     左右滑动查看更多     8位嘉宾共同宣布第十三届“徕卡杯”全国大学生金相技能大赛开幕。 Leica DM6 M全自动材料分析显微镜凭借其出色、稳定的成像与分析能力，连续十年被选为金相大赛的裁判用机，为赛事提供专业裁判支持，高效应对重复性工作任务。 2024年，值徕卡杯与全国大学生金相技能大赛合作十周年之际，徕卡显微系统将持续为大赛输送先进设备与技术后盾，并全面参与赛事的评分、颁奖等关键环节，为大赛的成功举办贡献卓越力量。     左右滑动查看更多     目前，徕卡裁判机团队与技术专家已整装待发，准备在大赛期间为参赛者提供专业、严谨的服务与支持。我们衷心预祝每位参赛者都能取得优异成绩。 相关产品 Leica DM6 M全自动材料分析显微镜 徕卡显微咨询电话：400-630-7761 关于徕卡显微系统 徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。 徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。

利用徕卡显微系统仪器探索复杂生物体的发育过程 发育生物学探索复杂生物体从胚胎到成年的发育过程，以详细了解疾病的起源。图库的这一类别显示有关发育生物学的图像，即通常以昆虫、蠕虫、动物和植物为研究对象的图像。 使用THUNDER成像仪 拍摄的发育生物学图像 了解徕卡显微系统仪器如何帮助对不同生物的发育、再生、繁殖、生长、分化和变态进行成像。经常研究的生物包括小鼠、大鼠、鸡、高线虫（蛔虫）、果蝇（果蝇）、授粉花、斑马鱼和人类。 Axolotl 神经管闭合 这段视频捕捉了使用THUNDER模式生物体立体显微镜拍摄的一个发育中的美西钝口螈（Axolotl）胚胎的全天延时记录。 作为著名的冷泉港实验室（CSHL）爪蛙课程的一部分，这段视频标志着在该课程中首次使用美西钝口螈胚胎。通过将美西钝口螈的神经发生与常见的爪蛙胚胎进行比较，学生们能够比较和对比两种两栖动物的发育过程。神经管闭合是发育的重要部分，不仅在两栖动物中，在人类中也是如此。当神经管不能正确闭合时，会导致人类出生缺陷，如脊柱裂和无脑畸形。这段视频由加州大学旧金山分校的Kate McCluskey提供。 神经嵴（NC）胚胎细胞群 神经嵴（NC）是一种胚胎细胞群，具有显著的多能性和迁移能力，能够形成多种器官系统，包括颅面骨骼和周围神经系统。美国加州理工学院的布朗纳实验室对了解多种脊椎动物胚胎中神经嵴细胞的规范、迁移和分化机制很感兴趣。 图为鸡胚中脑水平的横截面，显示神经嵴细胞（洋红色）经历上皮到间质的转变并开始迁移。神经嵴细胞通常会下调细胞粘附分子 Cadherin-6B（绿色）的水平，然后开始横向迁移（图像左侧）。在实验中阻断了上皮细胞向间质细胞转变的神经嵴细胞（图像右侧）中，Cadherin-6B 水平仍然很高，神经嵴无法离开神经管上皮细胞。 该图像使用THUNDER 3D细胞培养成像仪，1.3 NA 40x plan apo oil 物镜拍摄。上图为原始宽场数据。下图是应用徕卡专有的小体积Computational Clearing (SVCC) 技术去除焦外模糊并更好地显示样本内部潜在结构后的结果。图片由美国加利福尼亚州帕萨迪纳市加州理工学院布朗纳实验室 Michael Piacentino 提供。 自噬与年龄相关病症 - C. elegans 了解 DNA 损伤的积累与神经变性等与年龄有关的病症之间的相互作用非常重要。自噬是一个高度调节的动态过程，可清除细胞中不需要的细胞器和蛋白质聚集体。被称为自噬体的双层膜会吞噬注定要被降解的货物。自噬体与溶酶体融合，形成自溶酶体，降解自噬体运送的货物。随着年龄的增长，自噬功能会受到损害，而且已知在几种与年龄有关的病症中，自噬功能会出现失调。 菌株MAH215（Chang等人，Elife，2017）是一种双荧光mCherry::GFP::LGG-1蛋白，通过可视化自噬体（APs）以及自溶酶体（ALs）来监测秀丽隐杆线虫的自噬通量。绿色点状物（GFP）是自噬体，而自噬体在酸性环境中会淬灭 GFP，只发出 mCherry 信号。图片由美国宾夕法尼亚州匹兹堡大学 Aditi U. Gurkar 博士提供。 小鼠胚胎 在这只 E12-13 muose（wt 样品）中，神经纤维被染成红色，以评估神经元的生长情况。小鼠已用 ScaleS 试剂清除。用THUNDER成像仪模式生物成像。样本由法国 IGBMC 成像中心的 Yves Lutz 提供。 转基因围产期小鼠心脏 夏威夷大学马诺阿分校米歇尔-塔尔奎斯特实验室的研究人员以发育中的小鼠胚胎为模型，旨在加深我们对人类先天缺陷和疾病的了解。在胚胎发育过程中，细胞的运动、增殖和分化必须紧密配合，才能产生健康的后代。塔尔奎斯特小组主要研究血小板衍生生长因子受体（PDGFRα和PDGFRβ）在哺乳动物发育和疾病中的功能。 发育生物学的一大挑战是追踪体内相关蛋白质或细胞。此外，像心脏这样的器官往往具有很强的自发荧光，这就模糊了荧光标记蛋白质的可视化。利用THUNDER成像仪3D细胞培养技术，围产期小鼠心脏的高背景荧光被大大降低，从而更容易识别 PDGFRα 阳性细胞。 这段视频显示的是表达 PDGFRα-GFP 的转基因围产期第 5 天小鼠心脏。将固定的心脏置于玻璃底皿中，用THUNDER 3D 细胞培养成像仪和 10X/0.32 物镜进行成像。图像为合并的 12 层马赛克、740 微米厚 Z 叠的最大强度投影。图片由夏威夷大学马诺阿分校 Michelle Tallquist 博士提供。 C.elegans. 转基因 GFP C.elegans. 转基因 GFP。视频由中南大学生命科学学院马龙教授提供。 斑马鱼胚胎 斑马鱼胚胎 6 dpf，HPCs 稳定表达 mCherry，VEC 稳定表达 GFP。THUNDER模式生物成像仪成像。中国闽南师范大学 Yu Xue 博士提供。 果蝇胚胎 在中枢神经系统中表达 GCaMP 的果蝇胚胎，用于观察发育过程中的神经活动。视频由美国 Arnaldo Carreira-Rosario 提供。 果蝇卵泡 卵泡在 THUNDER 3D细胞培养成像系统上以 63X/1.4 油浸物镜成像。上面的图像是 27.5 微米厚 Z 叠的三维最大投影。图片由美国加州大学伯克利分校 Mark Khoury 和 David Bilder 提供。 脂肪组织的发育和扩张 对整块脂肪标本进行清晰成像 使用 EDoF 通过 23 幅图像（总高度为 186 微米）的 z 叠加拍摄的表达 RFP 的脂肪组织图像：A）原始宽场图像；B）THUNDER图像（使用带有 LVCC 的THUNDER模式生物成像仪拍摄）。图片由美国达拉斯德克萨斯大学西南医学中心试金石糖尿病中心 Rana Gupta 博士提供。 花粉 用 20x/0.8 物镜拍摄，面积为 6mm²，深度为 100μm。15 幅 4 种颜色（DAPI/GFP/TRITC/Cy5）的拼接图像，共计 13020 幅图像。视频由美国徕卡显微系统公司 James Marr 提供。 成年小鼠卵巢 - 生殖细胞发育 加州大学旧金山分校戴安娜-莱尔德（Diana Laird）博士的研究小组主要研究三个相互关联的问题：是否所有发育中的生殖细胞都具有产生功能性卵子或精子的同等潜力；环境因素在发育过程中如何影响生殖细胞；生殖细胞在卵巢和全身衰老中的作用是什么？他们利用小鼠模型和人类细胞，在产前暴露于干扰内分泌的化学物质和社会心理压力以及脆性X原发性卵巢发育不全等不孕症遗传原因的现实环境中探索这些问题。 大容量Computational Clearing 莱尔德实验室的一个研究领域是衰老和卵巢储备。博士后研究员 Bikem Soygur 博士以小鼠卵巢为模型，研究从胚胎发育到成年各个时间点的生殖细胞维持和衰老。其中一个挑战是成年卵巢很难成像，即使用光学折射率匹配方法也很难清除。NOBOX是一种卵母细胞特异性同工酶基因，在早期卵泡生成过程中起着关键作用，是非综合征性卵巢功能衰竭的候选基因。 利用THUNDER成像仪的3D细胞培养技术，可以在几分钟内对整个小鼠卵巢成像，然后进行大体积计算清除（LVCC），以获得对比度更高的图像，而不会出现传统宽场图像的混浊现象。 将成年小鼠卵巢固定并用抗-NOBOX 染色，然后用改良 3DISCO 清除。将卵巢放入一个自制的孔中，孔底铺上盖玻片，然后在THUNDER成像仪三维细胞培养成像系统上用 10X/0.32 物镜进行成像。视频显示了合并的 4 层马赛克、586µm 厚的 Z 叠的三维投影，即原始外荧光图像和 LVCC 后的THUNDER处理图像。视频由美国加州大学旧金山分校 Diana Laird 和 Bikem Soygur 博士提供。 ★ 相关产品 THUNDER Imager Model Organism 全自动宏观显微成像系统 THUNDER Imager Tissue全景组织显微成像系统 徕卡显微咨询电话：400-630-7761 关于徕卡显微系统 徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。 徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。

19 世纪现代显微镜制造技术的突破 本文概述了从 1600 年至今体视显微镜的发展和演变。直到 19 世纪中叶，所有光学显微镜都是手工制作的。由于无法准确预测透镜的特性，因此必须通过反复试验来制作和测试透镜，直到达到理想的效果。恩斯特-阿贝（Ernst Abbe）提出的图像形成理论最终为可靠、高效地设计和制造高性能体视显微镜提供了科学依据。 显微镜的改进带来医学上的突破性发现 显微镜的设计标准逐渐形成，在工业化大规模生产的早期，许多光学仪器制造商都采用了这些标准（参见图 1）。显微镜设计的进步使植物学、组织学、细胞学、细菌学和医学领域的突破性发现成为可能，例如罗伯特-科赫[1]和鲁道夫-维尔肖[2]的医学进步。与此同时，用于标本固定、包埋和切片（如使用显微切片机）的合适方法以及专用染色剂和防腐剂也应运而生。 图 1：1883 年左右由德国韦茨拉尔的恩斯特-莱茨制造的标准显微镜，具有当时的典型特征：马蹄形支架和带有纤维素漆面的发黑黄铜部件。当时，所有显微镜制造商的产品线中都至少有一个马蹄形支架。黄铜取代了早期显微镜的纸板、木材和象牙。最近，各种塑料也被广泛使用。 一位僧侣设计了第一台体视显微镜 真正的体视显微镜允许观察者的每只眼睛通过单独的专用光路观察样品，类似于将两台单目显微镜合二为一。在开发单目望远镜和显微镜的同时，17 世纪人们已经开始设计双眼仪器。受 1645 年卡普钦修道士安东尼-玛丽亚-德-莱塔对双目显微镜描述的启发，他的同修道士 Chérubin d'Orléans 于 1677 年将人们熟悉的双目望远镜原理应用到显微镜的设计中，使双眼可以同时观察微小物体（参见图 2）。他的目标并不是三维图像或深度知觉；他认为双眼同时观察物体可以提高图像质量。英国物理学家查尔斯-惠斯通（Charles Wheatstone）于 1832 年首次描述了立体视觉的原理，但当时人们还不知道立体视觉的原理。 图 2：1671 年左右由 Chérubin d'Orléans 研发的双目显微镜。它由两台完整的单目显微镜组成，每只眼睛一台[3]。 1853 年，约翰-莱昂哈德-里德尔（John Leonhard Riddel），一位化学教授和新奥尔良的邮政局长，提出了一种带有单物镜和棱镜系统的双目显微镜（参见图 3）。图像是三维的，但令人困惑，因为浮雕看起来是相反的（假视）。 图 3：约翰-莱昂哈德-里德尔于 1853 年左右开发的双目显微镜[4]。 格林诺夫和回旋光学原理 当时的双目显微镜采用简单的透镜系统，设计与传统的复式显微镜相同。这些显微镜只能达到较低的放大倍率，而且工作距离较远。这种解剖显微镜当时主要用于生物学中的解剖目的，在当时并没有技术应用。 1890 年左右，美国生物学家和动物学家 Horatio S. Greenough（他是美国著名同名雕塑家的儿子，见图 4）提出了一种设计原理，至今仍被所有主要光学仪器制造商所采用。基于“格林诺夫原理”的体视显微镜（参见图 5）可以提供真正的高质量立体图像。 1957 年，美国光学公司推出了具有共享主物镜的现代体视显微镜设计，并将其命名为 Cycloptic（参见图 6）。其现代化的铝制外壳包含两个平行光束通道和主物镜，以及一个五级放大倍率转换器。这种体视显微镜基于望远镜或 CMO（共用主物镜）原理（见图 7），除格林诺夫型外，所有制造商都采用了这种体视显微镜，并将其用于模块化高性能仪器。两年后，另一家美国公司博士伦推出了其体视变焦格林诺夫设计，并进行了突破性的创新：无级放大倍率转换器（变焦）。 图 4：Horatio S. Greenough 的父亲是著名雕塑家 Horatio Greenough。大约在 1832 至 1841 年间，他根据美国国会的命令，为美国首任总统乔治-华盛顿创作了一座巨型雕像。这座新古典主义雕塑引发了一场关于将华盛顿描绘成美国宙斯是否合适的激烈争论[5]。 图 5：格林诺夫原理：两个完全相同的独立光学系统以10°至16°的角度固定在同一个支架上。光束路径上的两个图像校正棱镜（多孔棱镜）可确保图像直立且方向正确。 图 6：一台Cycloptic显微镜，第一台基于望远镜或共同主物镜 (CMO) 原理的现代体视显微镜。 图 7：望远镜或 CMO 原理：光学系统由两条平行光束路径和一个共用主物镜组成，因此被称为 CMO（共用主物镜）系统。这种类型的体视显微镜有一个可拆卸的观察管，并且在观察管透镜区域有通用的定制选项。 当今的体视显微镜 虽然基本的体视显微镜已经存在了很长时间，但最近它的作用更加重要。显微镜经常参与许多日常产品的制造或开发，尤其是涉及移动设备等高科技应用的产品。同样的道理也适用于手表，无论它们是豪华型还是经济型。体视显微镜还用于医疗技术产品，如人工心脏、除颤器或支架。 不过，体视显微镜的用途并不局限于制造业。此外，体视显微镜还经常用于其他应用领域，如法医领域，用于收集微观层面的证据，如用于给罪犯定罪的小颗粒材料或纺织纤维，以及用于生命科学和材料科学研究。 参考文献：（上下滑动查看更多） 1.Robert Koch was a main pioneer in the fields of medical microbiology and bacteriology, discovered the bacteria anthrax bacillus, tuberculosis bacillus, and cholera bacillus, and was awarded the Nobel Prize for Medicine and Physiology in 1905. 2.Rudolf Virchow was a main pioneer in the fields of cytopathology (study of disease at the cellular level), comparative pathology (study of diseases common to humans and animals), anthropology (study of humanity), and ethnology (anthropology focusing on cultures). He proposed the third dictum of cell theory: "Omnis cellula e cellula” (All cells come from cells). 3.W.B. Carpenter, W.H. Dallinger, The Principles and Theory of Vision with the Compound Microscope, Ch. II in The Microscope and Its Revelations, 8th Ed. (P. Blakiston's Son & Co, Philadelphia, 1901) fig. 71, p. 96. 4.W.B. Carpenter, W.H. Dallinger, The History and Development of the Microscope, Ch. III in The Microscope and Its Revelations, 8th Ed. (P. Blakiston's Son & Co, Philadelphia, 1901) fig. 98, p. 131. 5.Frances Benjamin Johnston Photograph Collection, USA Library of Congress, Prints & Photographs Division, Reproduction number LC-DIG-ppmsc-04904. 徕卡的体式显微镜可以满足全方面的观测需求。 相关产品 Ivesta 3 格林诺夫体视显微镜 M50, M60, M80 Leica M165 FC 荧光体视显微镜 Leica EZ4 W & EZ4 E 用于高校教学的体视显微镜 参与徕卡175周年问卷调研 看看你对徕卡的了解有多少  赢取你的幸运奖品   问卷答案的答案可以在之前的推文内寻找哦~ 徕卡175周年：徕卡品牌的发展历程，也是显微技术的发展史 徕卡显微咨询电话：400-630-7761 关于徕卡显微系统 徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。 徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。

2024年7月16日至17日，徕卡显微系统在位于上海长宁区的客户体验中心成功举办2024徕卡FRET & FRAP共聚焦高端应用客户培训班及技术交流会。 徕卡显微系统生命科学应用工程师张恩康分享FRET在分子相互作用领域的技术原理、发展和最新应用 此次交流会旨在汇聚领域内的精英学者与科研人员，共同探讨共聚焦显微技术的最新进展、高端应用以及未来发展趋势，促进学术交流与合作。 徕卡显微系统生命科学应用工程师张恩康讲解FRET上机操作要点和实验经验 来自南昌大学第一附属医院、复旦大学、临港实验室、中国农业大学、天津大学、北京理工大学、浙江大学附属第一医院、西湖大学、上海交通大学等国内生命科学领域顶尖科研院校的课题组老师和平台老师参加了本次交流会。 徕卡显微系统生命科学应用工程师刘继红讲解FRET数据的LASX分析流程 为期两天的培训班包括以下内容： 前沿技术分享 徕卡应用专家分享了FRET（荧光共振能量转移）、FRAP（荧光漂白恢复技术）与FLIM-FRET在生命科学领域的最新研究成果与应用案例。 实操培训 提供了共聚焦上机培训，内容包括FRET、FRAP、FLIM的数据采集和分析。 技术交流 搭建平台，促进与会者之间的深入交流与合作，共同探索科研新方向。 徕卡显微系统生命科学应用工程师王文静讲解FRAP实验操作要点和实验技巧 培训结束后，徕卡显微系统为全程参与培训的老师们颁发了“2024 FRET & FRAP知识与技能”证书。参会老师们纷纷表示： “本次技术交流会让我结识了很多同行，让我们彼此建立联系，交流经验，对我的科研工作很有帮助。” “徕卡显微系统组织的本次培训，让我对FRET & FRAP共聚焦技术有了更加深刻的理解，必将帮助我推进将来的科研课题。” “希望今后能有更多的机会和徕卡应用专家就显微成像进行进一步交流。” 培训圆满结束，参会老师与徕卡应用工程师们合影留念 相关阅读 1. 荧光寿命成像与荧光共振能量转移  2. 荧光寿命成像显微镜（FLIM）指南  3. FRAP实验步骤式指南 4. TauInteraction——TauSense新成员，研究分子间相互作用 5. STELLARIS 8 FALCON 荧光寿命成像 共聚焦显微镜 徕卡显微咨询电话：400-630-7761 关于徕卡显微系统 徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。 徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。

1 （5.25~5.26） 第五届国际绿色植保技术创新会议 展会全景图 易拉宝展示图 现场图 彩页展示     左右滑动查看更多     由华中师范大学绿色农药全国重点实验室承办的第五届国际绿色植保技术创新会议在武汉召开。本次大会以“绿色、智能、创新、发展”为主题，聚焦绿色植保科技的国际前沿和热点。宋宝安、康振生、李培武、柏连阳、王乔等来自中国、美国、英国、澳大利亚、意大利、瑞士、新西兰、斯里兰卡等国家和地区的300多位院士、专家及企业代表参会，会议代表踊跃交流，共同探讨植保科技新理论、新技术、新成果，为加速绿色植保技术创新与应用和农业高质量绿色发展出谋献策。武汉贝徕美生物科技有限公司，作为备受瞩目的展商，全程深度参与此次盛会。在现场，我们用心打造了产品展示区，借助精心设计的展示架以及彩页资料的陈列，令每一款产品都闪耀夺目。与此同时，我们还预备了极为详尽的物料资料，以便参观者能够全方位地知晓产品的特性、优势以及应用范畴。整个展示流程不但展现出徕卡产品的超凡品质，还凸显了武汉贝徕美生物科技有限公司对于科技创新和品质追求的执着信念。 2 （6.3~6.5） 2024武汉医学病毒学峰会 展位图 展会全景图 现场图 现场图     左右滑动查看更多     本次峰会由武汉大学泰康医学院(基础医学院)主办。会议旨在汇聚领域内知名病毒学专家、学者和行业精英，共同探讨病毒学及相关学科的最新进展和发展动向，促进交叉学科的交流与融合，推动病毒学学科的发展。 武汉贝徕美生物科技有限公司，作为徕卡显微在湖北地区的独家代理商，积极响应并赞助了这次的学术会议。我们于会议现场设立了展位，展示了徕卡显微系统的多款产品及其详尽资料，成功吸引了众多与会者的浓厚兴趣。 我们在展位热情地接待了每一位到访的师生，用专业知识详细阐述了徕卡显微产品的独特特性和卓越性能，以及它们如何在科学研究与教育领域中发挥关键作用。通过面对面的交流，不仅显著增强了品牌影响力，同时也深化了与本地学术界的关系，为未来的合作探索了新的机遇。 此次积极参与，不仅彰显了我们致力于推进科学教育的坚定承诺，更为与会师生提供了一次难得的学习体验，使他们能够深入了解前沿显微技术，从而在科研道路上获得新的启迪与技能提升。 3 （6.4~6.7） 代谢的时空调控会议 会议手册品牌展示 仪器彩页展示 现场图 宋宝亮院士亲临展台     左右滑动查看更多     本次重要学术会议在风光旖旎的武汉东湖国际会议中心隆重召开，吸引了来自全球各地的顶尖专家学者齐聚一堂，他们带着最新的研究成果和独到的见解，旨在分享各自领域的前沿动态，共同探讨行业未来的发展趋势与挑战。 武汉贝徕美生物科技有限公司作为会议的重要展商之一，全程深度参与了此次盛会。在展位上，贝徕美不仅展示了徕卡显微的产品，还准备了详实的技术资料和产品手册，以便与会者深入了解。此外，徕卡显微的名字也被醒目地印制在会议手册上，这也是一种品牌形象的展示。 我们在现场提供了专业的咨询服务，与参会者进行了深入的交流，解答了关于显微技术在科研中应用的各种疑问。这种直接的互动不仅加深了与学术界人士的联系，也为潜在的科研合作开启了大门。通过此次会议，不仅展现了我们在生物科技领域的专业实力，也表达了对推动科技进步和教育发展的坚定承诺，为与会的专家学者提供了一个了解最新显微技术进展的窗口，助力他们在各自的科研道路上不断前行。 4 （7.11） 统计科研大楼校园巡展 展会全景图 仪器展示 易拉宝打卡 易拉宝打卡     左右滑动查看更多     2024年7月11日，贝徕美生物策划的新一轮校园巡展活动正式拉开帷幕。作为此次巡展的首个站点，我们选择了同济科研大楼，携手国内外诸多科研仪器品牌，深入高校，全面展示尖端科研仪器与技术，旨在为科研工作者们带来更为周详、专业的支持与服务。 此次活动不仅是一场科研仪器的盛会，更是一次融合知识、趣味与传统文化于一体的精彩体验。活动现场，我们精心布置了各类科研仪器的展示区，与时俱进的开展了DIY徕卡漆扇行，让参与者感受到了科研与艺术的完美结合。 在这个充满科技气息的活动中，参与者们有机会近距离接触并了解各种先进的科研仪器，感受科技的魅力。同时，通过DIY徕卡漆扇行的开展，大家不仅锻炼了动手能力，还领略了中国传统文化的独特魅力。 活动现场，工作人员细心地为参与者讲解了科研仪器的工作原理和应用领域，使大家在参观过程中受益匪浅。此外，我们还准备了丰富的互动环节，让参与者们亲自动手操作科研仪器，体验科研的乐趣。 师生们可以近距离感受这些高科技产物的魅力。同时，我们还为师生们带来了Mateo TL样机的现场演示，通过详细解读其工作原理和操作指南，使得大家对其有了更为深刻的理解。令人欣喜的是，当天即有众多师生表达了对Mateo TL样机的浓厚兴趣，并积极申请试用。 此次贝徕美生物的校园巡展活动，无疑为高校师生们搭建了一个交流与学习的平台，我们期待通过这一平台，能够推动科研领域的交流与合作，为科研事业的繁荣发展贡献一份力量。 徕卡显微咨询电话：400-630-7761 关于徕卡显微系统 徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。 徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有7大产品研发中心与6大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。

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