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移液器在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用
2023/02/28 09:24
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方案摘要：
产品配置单：
WHEATON Dounce型 组织研磨器
型号： WHEATON Dounce
产地： 美国
品牌： WHEATON
¥2000 - 1万
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WIGGENS WB-350 加热制冷恒温器（干浴器）
型号： WB-350
产地： 德国
品牌： WIGGENS
¥1.68万
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WIGGENS WOV-65真空干燥箱
型号： WOV-65
产地： 德国
品牌： WIGGENS
¥5.2万
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WIGGENS DPM24 数字式脉冲高速涡旋振荡器
型号： DPM 24
产地： 德国
品牌： WIGGENS
¥1.68万
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WIGGENS BIOCEN 22R微量台式离心机
型号： BIOCEN 22R
产地： 德国
品牌： WIGGENS
¥4.79万
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WIGGENS MFC 90T数字式超细研磨仪
型号： MFC 90T
产地： 德国
品牌： WIGGENS
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SOCOREX Stepper 416连续注射移液器
型号： Stepper 416
产地： 瑞士
品牌： SOCOREX
¥4143
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方案详情：
移液器在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用
（根据中华人民共和国国家标准GB/T30988-2014）
一、原理
在液氮条件下，通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞，利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧气褐变。适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA提取及纯化。
二、使用仪器
1. 冷冻研磨机（样品冷冻，研磨都处于液氮条件下）
2. 离心机（可以在4℃下进行离心，离心转速10000r/min以上）
3. 水浴锅（工作范围60℃～70℃）
4. 涡旋器
5. 平板电泳仪
6. 凝胶成像系统
7. 可调移液器
8. 紫外分光光度计
9.天平（精度为0.1mg）
WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机 WIGGENS WA8 通用水浴槽
SOCOREX Stepper 416连续注射移液器 WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪
3、 分析步骤
1. 取植物新鲜嫩叶，用无菌超纯水冲洗1皿，70%乙醇消毒2min，最后用无菌超纯水冲 洗2min，无菌吸水纸吸干水分，称取约0.5g（精确至0.1mg）。
2. 将干净的样本放于灭菌的样品研磨瓶中，使用WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪 将样品研磨成粉状，迅速用无菌玻璃棒将磨碎的样品用SOCOREX Stepper 416连续注射移液器转移至预冷的含有5mlDNA提取液的15ml离心管中，加入0.09gNa2S2O5,02gPVP,500ul巯基乙醇，颠倒混匀，放入WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机于4℃下5000r/min离心5min。
3. 去上清液，加入5ml预热65℃的DNA提取液，温和颠倒混匀，使用WIGGENS WA8 通用水浴槽于65℃温浴1h，期间每10min摇动一次。
4. 离心管放在冰上冷却，加入1ml预冷的NaAc溶液。
5. 混匀后加入5mL氯仿：异戊醇:乙醇溶液,温和颠倒混勾(需带手套,防止损伤皮肤),冰上静置5~10 min,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。在4℃10000r/min离心10min，移取上清液至-无菌15mL离心管中,重复该步骤。
6. 将絮状DNA沉淀转入含有600ulTE的无菌离心管中。
7. 加入RNaseA溶液至浓度为10ug/ml，37℃温浴30min，加入0.1gPVP,加入等体积的氯仿：异戊醇:乙醇溶液，温和颠倒混匀，10000r/min离心10mi。
8. 取上清液于1.5ml的灭菌离心管内，充抽提一次，加入1/10体积的NaAc溶液，加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20℃放置20min左右。
9. 在4℃10000r/min离心10min，弃上清液，加1ml70%乙醇，温和颠倒离心管数次，洗涤沉沦，重复2次。
10.向沉淀中加入500ul预冷的无水乙醇，在4℃10000r/min离心5～8s。
11.弃去乙醇溶液，将离心管开盖放置于室温下，待乙醇挥发干后将DNA重溶解于200ulTE缓解液。
四、注意事项
1.使用离心机时，注意规定的温度和转速。
2.制作试样时，要将水分完全吸干，重量精准到0.1mg。
3.使用仪器时注意规范使用
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公司名称： 维根技术（北京）有限公司（Wiggens中国）
公司地址： 北京市朝阳区酒仙桥东路1号院M8号楼426室 联系人： 市场部 邮编： 100015 联系电话： 400-885-7985
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