2023/02/28 09:31
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方案摘要:
产品配置单:
WIGGENS MFC 90T数字式超细研磨仪
型号: MFC 90T
产地: 德国
品牌: WIGGENS
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WIGGENS WMF-05 马弗炉
型号: WMF-05/WMF-05H
产地: 德国
品牌: WIGGENS
¥4.37万
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WIGGENS BIOCEN 22R微量台式离心机
型号: BIOCEN 22R
产地: 德国
品牌: WIGGENS
¥4.79万
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WHEATON Dounce型 组织研磨器
型号: WHEATON Dounce
产地: 美国
品牌: WHEATON
¥2000 - 1万
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WIGGENS WSI-50 常温型可叠加振荡培养箱
型号: WSI-50
产地: 德国
品牌: WIGGENS
¥4.6万
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WIGGENS WCI-850C细胞工厂 / CO2 培养箱
型号: WCI-850C
产地: 德国
品牌: WIGGENS
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WIGGENS WHT-150恒温恒湿箱
型号: WHT-150
产地: 德国
品牌: WIGGENS
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方案详情:
研磨仪在多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法中的应用
(根据中华人民共和国国家标准GB/T30988-2014)
一、 原理
在液氮条件下,通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞,利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧气褐变。适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA提取及纯化。
二、使用仪器
1. 冷冻研磨机(样品冷冻,研磨都处于液氮条件下)
2. 离心机(可以在4℃下进行离心,离心转速10000r/min以上)
3. 水浴锅(工作范围60℃~70℃)
4. 涡旋器
5. 平板电泳仪
6. 凝胶成像系统
7. 可调移液器
8. 紫外分光光度计
9. 天平(精度为0.1mg)
三、分析步骤
1. 取植物新鲜嫩叶,用无菌超纯水冲洗1皿,70%乙醇消毒2min,最后用无菌超纯水冲 洗2min,无菌吸水纸吸干水分,称取约0.5g(精确至0.1mg)。
2. 将干净的样本放于灭菌的样品研磨瓶中,使用WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪 将样品研磨成粉状,迅速用无菌玻璃棒将磨碎的样品用SOCOREX Stepper 416连续注射移液器转移至预冷的含有5mlDNA提取液的15ml离心管中,加入0.09gNa2S2O5,02gPVP,500ul巯基乙醇,颠倒混匀,放入WIGGENS BIOCEN 22R 低温微量台式离心机于4℃下5000r/min离心5min。
3. 去上清液,加入5ml预热65℃的DNA提取液,温和颠倒混匀,使用WIGGENS WA8 通用水浴槽于65℃温浴1h,期间每10min摇动一次。
4. 离心管放在冰上冷却,加入1ml预冷的NaAc溶液。
5. 混匀后加入5mL氯仿:异戊醇:乙醇溶液,温和颠倒混勾(需带手套,防止损伤皮肤),冰上静置5~10 min,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。在4℃10000r/min离心10min,移取上清液至-无菌15mL离心管中,重复该步骤。
6. 将絮状DNA沉淀转入含有600ulTE的无菌离心管中。
7. 加入RNaseA溶液至浓度为10ug/ml,37℃温浴30min,加入0.1gPVP,加入等体积的氯仿:异戊醇:乙醇溶液,温和颠倒混匀,10000r/min离心10mi。
8. 取上清液于1.5ml的灭菌离心管内,充抽提一次,加入1/10体积的NaAc溶液,加入2倍体积预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置20min左右。
9. 在4℃10000r/min离心10min,弃上清液,加1ml70%乙醇,温和颠倒离心管数次,洗涤沉沦,重复2次。
10.向沉淀中加入500ul预冷的无水乙醇,在4℃10000r/min离心5~8s。
11.弃去乙醇溶液,将离心管开盖放置于室温下,待乙醇挥发干后将DNA重溶解于200ulTE缓解液。
四、注意事项
1.使用离心机时,注意规定的温度和转速。
2.制作试样时,要将水分完全吸干,重量精准到0.1mg。
3.使用仪器时注意规范使用
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