石蜡切片的制备指南（中）

文章源自徕卡

前言:

制备高质量的病理切片需要一定的技巧和经验。

该教程的目的是协助初学者熟悉石蜡切片的制备，以及作为经验更丰富的技术专家的进修课程。涵盖轮转式切片机制备石蜡切片的设置和操作相关的基本内容。同时对切片过程中的部分常见故障进行具体说明，并提供故障排除建议。

06 设定最佳刀片间隙角

刀片间隙角可调,必须进行恰当设定以达到最佳性能。

间隙角可防止刀面和蜡块表面接触。

切面角是形成切削刃的两个切面之间的角度。对于常规使用的刀片和可调换式刀片,切面角大约为35°°,但该角度可能因刀片类型和制造商的不同而发生

因此,必须针对每种刀片类型设定最佳间隙角。

在进行角度设定时,应遵循切片机制造商指南。对于Leica生物系统的刀片和刀片架,推荐的设定角度为1至5°

07刀片最长使用寿命

采用一些简单的策略可使每个刀片均达到最长的使用寿命。
 

清洁刀片时,避免沿刀刃拖动任何物品。即使是纤维素纤维亦可以对刀片造成损坏。
避免刀刃接触任何硬质物体,如钳子或刷子。

有条不紊的使用刀片,从一端工作至另一端。这将使刀片的每一部分均达到最大使用寿命。

使用刀片的一部分进行修块,使用另一部分进行最终切片,或者使用独立刀片进行此两个步骤。

回缩式切片机可在刀片上行运动过程中使蜡块与刀片脱离接触,从而使刀片寿命最大化,且可防止刀片复位过程中产生碎片。

08确定定向蜡块

切割冲程中蜡块与刀片的定向可以影响获取带状物的难易程度,并可直接影响切片的质量。

在大多数实验室,所有包埋盒均按照相同的方向被置于样本夹上(如东-西方向且标签向左,或北南方向且标签向上)。这样处理的目的在于在制备高质量切片之前对多个蜡块进行粗修,并允许对组织进一步切割或再切割。且不会造成组织损耗过大。因此,在包埋阶段即必须考虑到蜡块与刀片的相对方向,此要求经常被忽视。

图A为部分典型蜡块的最佳取向。针对特定的蜡块类型,何种取向为最佳可能存在不同意见,但必须意识到取向的重要性并加以考虑。

例A.肠:刀片持续性通过粘膜

例B子宫颈:最好是将组织致密处呈递至刀片,而非直边。

例C皮肤:刀片持续性通过表皮

切片机(如RM2235)还配备有可进行校准控制的精密定位装置,可以在x/y轴上很容易找到零点或可测量的变量。此项功能非常有助于对其他实验室制备的蜡块或已经过其他切片机切割的蜡块进行再切割,因为其需要精确对齐以防止不必要的组织损失。同时对多个蜡块进行切割时应常规使用,重要的是在开始切割之前夹持架应被设定至x/y轴的零位置。通过采用指示器(红色)、切口点(点击停止)和指示标记即可非常容易地实现此设定。

（图A）

09了解切片机的设计特点及其使用方法

回缩式切片机的设计理念在于标本上行冲程中回缩,让蜡块远离刀片。重要的是要知道您所使用的切片机是否具备此功能。

回缩是切片机的设计特点之一,可在切片过程中提供独特的优势并可延长刀片寿命。

当使用回缩式切片机时,蜡块下行冲程中必须将蜡块表面对齐刀口(即处于前出位置,而非退缩位置)。

当标本夹处于退缩位置时,如果蜡块仍然与刀口非常接近,在手轮下一次完整旋转时,蜡块将前出,前出量为退缩量+选定的切片厚度。这将导致切片厚度增加,并可能导致损坏蜡块和刀片。

切片机也可以手动、半自动或全自动。

自动化设备可减少重复动作,而这些动作可能导致肌肉骨骼疾病。

10“修块”、“表面加工”或“初步加工”时应注意

切片机的该阶段需要非常小心，因为样本表面具有诊断学意义的组织很容易丢失或损坏。

在您开始修块之前,请务必确保所有的夹持机械均已得到安全加固。

正确修块的目的在于将组织保守暴露至一定水平,在该水平可以获得目标性切片。

当厚度为10至30μm时,通常应进行修块。

对脆性组织进行快速粗修可能破坏标本表面。在30μm厚度使用机械修块设备时应特别注意。

最后一步则通过轻柔切割少许薄切片对蜡块进行磨光。

在对蜡块进行修块之前,持刀架底部夹架A、侧向位移夹B和x-y定位夹C均应该牢固锁定。如果不执行此操作,可能会损坏蜡块和刀片。

当进行初步加工时,机械修块设备时应谨慎使用,尤其是较低)设定被激活时可导致30μm的前出。

当初步加工时,粗进刀轮需要谨慎使用,以避免从样品表面意外切割较厚切片并造成损害。

11考虑切片厚度的影响因素

按照需要设定切片机,但请注意,有许多因素均可影响实际的切片厚度。

4μm厚的粘性切片会比2μm厚的严重破坏切片提供更多的信息。

当对冷冻蜡块进行切片时,条带中第一对切片的实际厚度可能比预期值厚。主要原因是由于热膨胀(请参见下文第1、2和3节)。

其他因素，如旋转速度、间隙角设置和刀刃的情况,均会影响获得的实际切片厚度。

12确保蜡块冷冻

当标本和石蜡的硬度匹配良好时,切片质量通常可得到改善。正是由于该原因,大多数石蜡块在切片时必须冷冻。用于冷冻蜡块的方法亦非常重要。

冷冻石蜡可为标本中的较硬成分提供更好的支持,以获得更薄的切片。

将蜡块置于冷却台或湿冷表面,持续几分钟(比如融冰的表面)。

水将小幅度渗透进入蜡块,使组织肿胀,因此更适合进行切片。对于过度脱水、过度干燥或易碎的组织,这将非常重要。

如果组织与周围石蜡存在接触不良,将蜡块置于冰箱中会导致此处的表面开裂,可能更难以获得粘性切片。

左边的切片源自于一块未进行冷冻的温度相对较高的蜡块。右边的切片源自于一块相同、但在融冰表面进行了冷却的蜡块。

以上便是本期教程内容。该教程列出的切片机照片为RM2235手动切片机，但所提供的建议和意见均可应用于最先进的轮转式切片机。本期教程已结束，敬请期待下期《石蜡切片的制备指南（下）》。

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