石蜡切片的制备指南（上）

文章源自徕卡

前言：制备高质量的病理切片需要一定的技巧和经验—但我们都须从头开始学习。

该教程的目的是协助初学者熟悉石蜡切片的制备，以及作为经验更丰富的技术专家的进修课程。涵盖轮转式切片机制备石蜡切片的设置和操作相关的基本内容。同时对切片过程中的部分常见故障进行具体说明，并提供故障排除建议。

01 正确固定标本

固定是组织学标本制备技术中最重要的一步。即使在对组织标本进行处理和切片的过程中做到了很细致,但只有当组织被及时且充分固定时，才能显示出组织基本形态的细节。

1）通常情况下,相比于固定良好的标本,未进行良好固定的标本在切片时可能存在问题。

2）对于未能良好固定的组织,即使采用最优化处理方法并仔细切片,还是有可能得到质量较差的形态学结果。

02 正确处理组织

采用适当的方法对已良好固定的标本进行合理的处理,才能获得良好的组织切片。

1）标本处理不足(标本太大、处理时间过短)或处理过度(对于标本的大小和性质而言,处理的时间过长)。这两种情况均可能导致难以切片或者不能切片。

2）目前有多种技术可用于从问题蜡块中获取切片

3）如果蜡块因组织较硬或易碎而难以进行切片,可将其暴露面浸于冷水或柔软剂(弱洗涤剂溶液、织物柔软剂或 Mollifex)中。

4)对于含钙标本,将表面脱钙剂应用于暴露组织10分钟或更长时间)可以获得几张切片。在将蜡块置入切片机标本架之前应对蜡块进行良好漂洗和再切片,因为即使痕量的脱钙剂亦将损坏刀片架的压盘。

5)推荐采用石蜡胶带-传输系统从困难蜡块(固定、处理或浸润错误)获取切片,因为正常的切片方法不能成功获得切片。

6)如果在处理过程中第一时间末对标本进行充分处理,而导致不能从蜡块中获取切片,那么可以对标本进行再处理。

该胰腺蜡块未进行充分固定，因此根据固定时间不够的处理方案进行再处理。该图所示为处理不足的典型案例，即导致标本在周围石蜡中出现相当大的收缩。组织柔软且呈糊状因此不能进行切片，需要进行再处理。

03 仔细包埋标本

嵌入是非常重要的一步,需要一个成熟的方案。包埋不细致可能导切片更加困难。

1)避免包埋盒填充不足，因为这可能导致切片机夹持不稳定，从而导致切片“厚薄不均”等现象。

2)避免过度填充包埋盒，因为其可影响蜡块切面的正确对齐。

3)在夹持之前，应去除包埋盒之外存在的多余石蜡，以确保蜡块在切片过程中的稳定性。

4)标本的定位非常重要。

填充不足(左)、填充过度(右)以及包埋盒正确填充(中)示意图。包埋盒填充不足和填充过度均可导致切片过程中出现问题。

04 正确定位切片机

实验室中切片机的位置非常重要。

1)将切片机置于稳定工作台上,并且应远离通风口、门口和员工通道。来自空调的任何空气流动或其他原因均可导致切片操作非常困难。

2)首选高度可调的工作台以及符合人体工程学的椅子。

3)非常重要的是,工作人员在使用切片机时不应分心,因为刀片极其锋利,存在受伤的风险。当在实验室中放置切片机时,应考虑到与其他工作人员可能存在的潜在一些影响。

4)最好在切片机周围安装防滑地板,因为蜡块碎片将不可避免的落在地板上,从而导致地板表面十分光滑。许多实验室均采用防滑垫使切片机周围环境更加安全。

05 正确使用安全特性

您必须熟悉您正在使用切片机的安全特性，并在切片时遵守一些基本规则。

1)切片机的刀具和刀片均非常锋利,可造成严重伤害,工作时应特别注意。事故往往发生于切片机使用者分心或未集中注意力时。

2)请使用钳子或刷子拾取切片或来自蜡块或蜡块表面的石蜡碎片,切勿直接使用您的手指。

3)轮转式切片机配备有防护装置(刀片防护套或指套)、手轮锁和手轮制动,从而保证安全运行。

4)防护装置可以覆盖刀片的整个长度。

5)手轮锁将锁定切削冲程顶部的物体头端,在更换蜡块时必须使用。

6)当需要将蜡块置入包埋盒夹架或从包埋盒夹架中取出时,或在刀片就位时对蜡块进行任何操作之前,防护装置必须到位且手轮锁必须处于工作状态。当切片机无人值守时,也必须使用防护装置。

7)当对蜡块表面进行重新对线或对粗进刀进行校准时,如果手柄处于任意位置且正在被使用,那么手轮制动会锁定切片机。

8)如果切片机无人值守或者进行清洁时,应从切片机上取下刀片。最好是先松开刀片,然后使用防护装置左侧的刀片推出器,使刀片横向移出刀片夹。然后使用钳子(而非手指)或尾端含磁性的刷子拾取,从而安全移除刀片。使用后的刀片应置于锐器盒中或刀片分发器底部的“使用后刀片”专用槽中。

9)切勿将刀片尖端朝上地置于工作台上或盒子中。如果您不小心碰掉刀片,请任其掉于地面上。切勿试图抓住刀片(您必须防范此自然反射动作)。

RM2235切片机的红色防护装置如图所示。该装置可完全覆盖刀片的整个刀刃。

手轮锁如图所示,手轮处于12点位置手轮锁处于锁定状态。仅当该手轮锁处于切削冲程顶部的该位置时,方处于锁定状态。

如图所示,RM2235的手轮制动处于锁定位置。不论手轮处于任何位置,制动均可以激活。手轮锁或手轮制动均可以用于固定切片机。

以上便是本期教程内容。该教程列出的切片机照片为RM2235手动切片机，但所提供的建议和意见均可应用于最先进的轮转式切片机。

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