毛细管无胶筛分电泳分离SDS-蛋白质复合物

1. 实验原理

   毛细管电泳是离子或荷电离子以电场为驱动力，在毛细管中根据淌度或/和分配系数的差异进行高效快速分离的一种电泳技术。毛细管电泳和传统电泳的根本区别在于前者设法使电泳过程在散热效率极高的毛细管内进行，从而可以引入高的电场强度，全面改善分离质量。

    

   电泳时，毛细管内部首先充满分离缓冲溶液，样品从毛细管的一端导入，当毛细管两端加上一定的电压后，荷电溶质便朝与其极性相反的电极方向移动，由于样品各组分间淌度不同，引起迁移速度的差异，因而经过一定时间后，各组分按其淌度大小顺序，依次到达检测器被检出，得到按时间分布的电泳图谱。

   本实验系采用无胶筛分原理分离SDS-蛋白质复合物，并用于蛋白质的相对分子质量测定，电泳分离SDS-蛋白质及测定相对分子质量的原理。无胶筛分是在常规CGE技术基础上发展起来的，后者与传统的平板凝胶电泳分离的原理无异，都是根据分子的大小分离。我们知道，凝胶筛分介质是指以化学交联方式形成的胶状多孔物质，一旦成型，即很难改变，如聚丙烯酰胺。所谓无胶筛分介质是由缠绕的聚合物以物理方式组成的分离介质 ，如线形聚丙烯酰胺、纤维素衍生物等，在溶液中形成一定大小的动态孔径，在CGE中，凝胶毛细管柱制备困难，寿命短，进样易堵塞等缺点，在CE的应用受到很大限制。而采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度的交联聚合物，可克服上述缺点，其物理参数可通过线性聚合物的种类、浓度等予以调节，而且每次分离后毛细管中的筛分缓冲液都要重新更换，因此，重现性很高。

    

   目前，无胶筛分技术已广泛用于分离寡核甘酸、核酸片段、PCR产物，DNA测序以及分离SDS-蛋白质复合物，后者已成为鉴定蛋白质纯度和测定蛋白质相对分子质量的一个重要手段。

    

   二、实验用品

   （一）器材

   （1）毛细管电泳仪。

   （2）微型离心机。

   （3）恒温水浴锅

   （二）试剂  

   （1）CE-SDS蛋白样品缓冲液。

   （2）0.1mol/L NaOH。   

   （3）0.1mol/L HCL。

         (4)CE-SDS蛋白电泳缓冲液。

       （5)CE-SDS内标（1mg/mL苯甲酸）。

       （6）CE-SDS蛋白标准：包括8种蛋白（20mg/mL）。

      （三）材料

         电泳纯的牛血清白蛋白、卵蛋白溶菌酶和细胞色素C。