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离心机在细胞培养及外源基因中的应用

2009-03-27 14:41

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资料摘要:

以分析其表达,测定表达对细胞生长的影响,或将高表达的基因产物纯化。将外源DNA导入哺乳动物细胞有两种途径:稳定(永久)或暂时性转染。稳定转染的目的是将转移基因整合到细胞染色体DNA上,形成稳定表达转移基因的细胞系。一般需要共转染一个选择标记,用于追踪转染成功的细胞或转染效率。暂时性转染的目的是为了分析转移基因的暂时转录或表达,一般在转染后1-4天内进行。针对培养细胞的外源DNA导入已发展出多种技术,其中常用的有磷酸钙介导的转染,DEAE-葡聚糖介导的转染,脂质体介导的转染,电穿孔法等。这4种方法除DEAE-葡聚糖法外,均可用于暂时性转染和永久性转染。但它们有各自适用的细胞系。培养的细胞不同,其在摄取和表达外源DNA的能力上可能存在几个数量级的差异。因此针对细胞系优化并比较几种不同方法的效率很重要。

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离心机大量应用于化工、石油、食品、制药、选矿、煤炭、水处理和船舶等部门。 中国古代,人们用绳索的一端系住陶罐,手握绳索的另一端,旋转甩动陶罐,产生离心力挤压出陶罐中蜂蜜,这就是离心分离原理的早期应用。 工业离心机诞生于欧洲,比如19世纪中叶,先后出现纺织品脱水用的三足式离心机,和制糖厂分离结晶砂糖用的上悬式离心机。这些最早的离心机都是间歇操作和人工排渣的。 由于卸渣机构的改进,20世纪30年代出现了连续操作的离心机,间歇操作离心机也因实现了自动控制而得到发展。 离心机有一个绕本身轴线高速旋转的圆筒,称为转鼓,通常由电动机驱动。悬浮液(或乳浊液)加入转鼓后,被迅速带动与转鼓同速旋转,在离心力作用下各组分分离,并分别排出。通常,转鼓转速越高,分离效果也越好。 离心机是利用离心力,分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。 离心机主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开;或将乳浊液中两种密度不同,又互不相溶的液体分开(例如从牛奶中分离出奶油);它也可用于排除湿固体中的液体,例如用洗衣机甩干湿衣服;特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物;利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点,有的沉降离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。

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可以引起重大的离心机设备的破坏及人员伤亡。我们应当清楚地认识到高速旋转的离心机如果使用不当会发生机毁人亡的事故。 当离心机高速旋转当中,如果发现离心机出问题了,我们已经无能为力,因为停机的操作并不能完全避免事故的发生,原因是转子高速旋转时的巨大惯性使转子不能马上停转。但也要知道,只要按说明书的要求操作,而且所使用的离心机质量是可靠的,这些事故是完全可以避免的。当今的国际大品牌的产品和国内有信誉企业

甩开转子绝不能在缺少吊篮的情况下运转,即使不装样品,也要对号挂上。转子各吊篮内的离心管应轴对称地相互保证平衡。 区带转子盖必须上紧,以免O形密封圈变形。 不能用蒸馏水或密度不同的溶液平衡对应管,也不能用均匀溶液来平衡梯度管。 保持梯度仪处于良好的工作状态。 离心机在运转过程中,除了离心机启动时的低速振动外,不应有高速振

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