登革热病毒的稀释度计算方法

登革热（dengue fever）是登革病毒经蚊媒传播引起的急性虫媒传染病。登革病毒感染后可导致隐性感染、登革热、登革出血热，登革出血热我国少见。典型的登革热临床表现为起病急骤，高热，头痛，肌肉、骨关节剧烈酸痛、部分患者出现皮疹、出血倾向、淋巴结肿大、白细胞计数减少、血小板减少等。本病主要在热带和亚热带地区流行，我国广东、香港、澳门等地是登革热流行区。由于本病系由伊蚊传播，故流行有一定的季节性，一般在每年的5～11月份，高峰在7～9月份。在新流行区，人群普遍易感，但发病以成人为主，在地方性流行区，发病以儿童为主。
  上海现首例登革热病例出现，发现患者曾有蚊虫叮咬史。一只不起眼的蚊子叮咬就能让人患病，小编在这里提醒大家，一定要保持好室内的卫生，注意灭蚊虫。
   在登革热的背后，科研人员早已研究出新的抗体去对付此病毒。其中有一项病毒的稀释尤为重要。我翻阅了杨佩英，秦鄂德老师的《登革热和登革出血热》上面说的计算方法一般算出的都是病毒的稀释度，一般在10的几次方稀释度出现50％病变，TCID50就是它的方次数。而我看见很多论文上都出现了10 7.9～8.1。这到底是怎么回事呢？下面小编给大家讲一下登革热病毒的稀释计算方法。
   病毒半数组织细胞感染量（TCID50）的测定：

1、 病毒培养和收获 将伪狂犬病毒接种于长成单层的BHK-21细胞，接种量为液体培养基量的10%,37℃培养，待出现病变后，冻融，收获病毒。

2、 病毒的滴定 用DMEM培养基将伪狂犬病病毒作连续10倍稀释，即10—1、10—2……每个稀释度取100μL加入96孔细胞培养板中，随后加入经0.25%胰酶消化的BHK-21细胞100μL（细胞含量以105/mL左右 为宜），每个稀释度作8个重复，并设空白细胞培养对照。置37℃ 5%CO2培养箱中。 

3、 TCID50计算 逐日观察细胞病变，并记录细胞病变孔数，直到对照细胞老化脱落为止。按照Reed-Muench法计算病毒的TCID50

病毒半数组织培养感染量TCID50的计算按（Reed-Muench两氏法）

　　举例说明：

病毒稀释度 细胞病变 累计孔数 细胞孔数 出现CPE百分比

出现CPE孔数 不出现CPE孔数 出现CPE 不出现CPE 

10—1 8 0 27 0 27 100

10—2 8 0 19 0 19 100

10—3 7 1 11 1 12 91．6

10—4 3 5 4 6 10 40

10—5 1 7 1 13 14 7．1

10—6 0 8 0 21 21 0

从上表可见该病毒的TCID50在10—3（91.6%）和10—4（40%）之间，首先按下列公式计算距离比：

91.6(高于50%的百分数)-50 41.6

距离比＝ —————————————————————— ＝ ———— ＝ 0.8

91.6(高于50%的百分数)-40(低于50%的百分数) 51.6

将上式获得的距离比（0.8）加在高于50%死亡的病毒稀释度的对数（3）上，因此该病毒的TCID50应是0.1ml 10—3。8稀释的病毒液，查反对数，得6310，即该病毒6310倍稀释液0.1ml等于1个TCID50。

以上是登革热研究背后很小的一项实验步骤，向伟大的科研人员致敬，有这些科研人员，大家才不会怕这些病毒。