2024/06/05 16:43
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多参数表面等离子体共振分析仪(分子互作分析仪) MP-SPR 410A
型号: MP-SPR Navi 410A KAURIS
产地: 芬兰
品牌: Bionavis
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方案详情:
简介
人血清白蛋白(HSA)是血浆中最重要的蛋白质,其含量丰富。HSA的主要功能是携带脂肪酸和维持血液胶体渗透压,是许多激素和药物尤其是疏水药物的重要载体。药物与HSA结合增加了药物的半衰期,降低了血液中游离药物的浓度,对临床护理具有极其重要的意义。在药物发现早期,确定血浆蛋白结合是很重要的,因为它用于评估药物的剂量需求和从体内的清除。
材料和方法
羧基甲基葡聚糖(CMD)包被的传感器载玻片通过胺偶联化学固定HSA(图2)。固定在21°C下进行,使用5 mM MES (2-(N-morpholino)乙磺酸)pH 5.0作为运行缓冲液。表面用EDC/NHS活化,用5mM乙醇胺(pH 8.0)灭活。
采用SPR Navi 220A型仪器测定小分子药物吲哚美辛、奎尼丁和萘普生(357.8、324.4和230.3 g/mol)与固定化HSA的相互作用。实验采用pH为7.4的PBS(磷酸盐缓冲盐水)作为运行缓冲液,温度为21℃。测量5个样品浓度系列(0.1 ~ 50 μM)。奎尼丁是较弱的结合剂,因此测定了较高的浓度(10 ~ 500 μM)。样品中含有3%的二甲基亚砜(DMSO),以提高药物的溶解度。用TraceDrawer分析了反应的动力学和亲和性。
结果和讨论
根据BioNavis固定方案,成功重复多次固定化HSA。传感器表面固定HSA的平均量为2000 ng/cm2。通过MP-SPR测量,成功测定了三种小分子量药物对HSA的稳态亲和力和结合动力学(表1)。吲哚美辛的亲和力图和动力学分析如图3和图4所示。分别测定两次奎尼丁的结合度,得到的等结合值证实了结果的重复性。
结论
MP-SPR仪器是测量小分子直接亲和力的优良工具。通过仪器的实时和无标签测量,不仅可以有效地确定结合的稳态,还可以有效地确定结合的动力学。这些类型的测量可用于临床前药物筛选和生化药物开发。
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