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激子耦合圆二色测试应用
激子耦合圆二色测试应用
一、概述
激子耦合圆二色发生于大分子两个手性生色团之间。当两个生色团位置合适（距离短、角度合适、环境合适等），它们互相电子转移产生两个不同的CD带，如图1所示。激子耦合圆二色灵敏度和识别度高，它与给定的空间结构相关，可以获得复杂结构的绝对构型信息。激子耦合圆二色经常用在高分子、手性有机凝胶或其他手性大分子的可见光区，也可用于蛋白的近紫外区，是传统远紫外圆二色谱的补充。
图1：激子耦合能级说明
二、实验条件
2-氨基嘌呤是经典的荧光标记物，它与胸腺嘧啶或胞嘧啶配对。当两个2-氨基嘌呤相距较近，它们手性中心相互作用，大分子会扭曲并改变构象，这会产生激子耦合圆二色。本应用说明了在DNA和蛋白相互作用中，由2-氨基嘌呤导致的激子耦合圆二色。测试仪器为MOS-500圆二色光谱仪，波长范围为300-360 nm，狭缝为2 nm，采样速度为每点0.5 s。样品浓度为10 uM，石英比色池光程为1 cm，室温，没有氮气吹扫。空白采用同条件测试并自动扣减。
图2：2-氨基嘌呤
三、结果
含有2-氨基嘌呤的DNA-蛋白复合物的圆二色谱如图3所示。由于DNA自身的圆二色吸收信号一直到310 nm，所以DNA-蛋白复合物的圆二色谱中只看得到正的克顿效应。最大信号在330 nm处为1.2 mdeg，可以看出MOS-500圆二色光谱仪灵敏度很高。通过对比可以看到，没有加入DNA的圆二色光谱中没有对应的与圆二色吸收，通过圆二色光谱可以很明显区分有无激子耦合发生，如图4所示。
图3：圆二色谱：DNA+蛋白
图4：有和没有DNA情况下的圆二色谱
四、结论
用标准配置的MOS-500圆二色光谱仪就可以很容易的测到激子耦合圆二色谱。通常激子耦合圆二色测试波长大于195nm，而MOS-500圆二色光谱仪在185nm以上不需要氮气吹扫，可以极大的节省您仪器的运行成本。
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