乳制品中双氰胺测定的沃特世整体解决方案

Waters

2013/03/12 16:15

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丁娟娟、纪英华、王冰、蔡麒
沃特世科技（上海）有限公司

摘要
2013年1月，新西兰牛奶及奶制品被检测出含有少量的有毒物质双氰胺，新西兰政府已经下令禁售含有双氰胺的奶类产品。由于中国是新西兰奶制品的出口大国，所以这一敏感的食品安全问题又一次触动了全中国人民的心。沃特世（Waters^®）公司第一时间推出完整解决方案，为广大客户提供有力的分析手段。二氰二氨（俗称双氰胺），缩写DICY或DCD，是氰胺的二聚体，也是胍的氰基衍生物。化学式C₂H₄N₄，白色结晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，几乎不溶于醚和苯。不可燃，干燥时稳定。

分析难点
双氰胺极性非常大，传统C₁₈色谱柱及HILIC色谱柱均难以保留，对于复杂的奶制品基质来说会与杂质共流出，影响分析目标化合物的定量和定性。沃特世公司BEH Amide系列色谱柱通过三键键合的酰胺基键合相，亲水作用色谱的原理，使得双氰胺得到非常好的保留。
实验方法
一、样品前处理方法：
取1g奶粉加10mL 1%三氯乙酸溶解并沉淀蛋白，12,000转高速离心10min；取2mL上清液上样到SepPak^® AC2小柱上（Sep-pak AC2上接30mL储液器，wat011390），按照如下流程操作。方法回收率91%。

二、仪器方法:
UPLC^®方法：
仪器： ACQUITY UPLC^®
流动相A： 0.05%乙酸水
流动相B： 0.05%乙酸乙腈
色谱柱： BEH Amide 2.1×150 mm 1.7 μm
流速： 0.3 mL/min
柱温： 30℃
进样体积： 5 μL
梯度曲线：

MS参数：
毛细管电压： 3.5 kv
脱溶剂气温度： 400 ℃
脱溶剂气流速： 900 L/hr
碰撞气流速： 0.2 mL/min

实验结果：

重现性：

检测利器1——RADAR^TM功能

检测过程中发现，乳制品基质即使做过净化处理，背景干扰依然很严重，所以在检测过程中开启RADAR功能，实时监测杂质对目标化合物的干扰及背景基质的影响。

此图为同时检测目标化合物的多反应检测通道及基质全扫描图，目标化合物双氰胺出峰时间背景干扰不明显，使离子抑制效应减到最低。
检测利器2——PICs功能（子离子确认扫描）
在检测目标化合物的时候发现，物质本身分子量小，乳制品中干扰物质多，干扰严重，不可避免地会出现假阳性的情况，此时会选择高分辨质谱进行分子量和结构的剖析，沃特世Xevo^®系列串联四极杆质谱可提供碎片离子信息，使一次进样即可完成化合物的多重定性。

由图中可以看出，溶剂标准品和奶粉样品的PICs质谱图中主要碎片离子相同，各碎片离子之间相对强度比也在误差范围内，拟合度匹配良好，可以确认是阳性样品。这样对于只提供两对离子对比的单一定性方法来说多了一种定性功能，使数据更加准确。
结论
双氰胺极性非常大，传统C₁₈色谱柱及HILIC色谱柱均难以保留，而沃特世公司Amide系列色谱柱通过三键键合的酰胺基键合相，亲水作用色谱的原理，使得双氰胺得到非常好保留。而仪器对于复杂基质中残留物的分析又作了更好的诠释，例如用于实时检测背景基质干扰的RADAR功能及多重定性选择的PICs功能，都能很好地应用在我们的实际工作中，使我们的工作事半功倍。