目的
使用沃特世(Waters®)ACQUITY UPC
2™系统成功将药典中蒽啉的正相HPLC含量测定方法转换为超临界流体色谱法。
背景
目前,美国药典(USP)对于药品蒽啉,(9(10H)-蒽酮,1,8-二羟基-9-蒽酮)[CAS #1143-38-0]的含量测定方法是正相HPLC方法。使用4.6 x 250 mm硅胶柱(L3)进行等度分离,流动相为82:12:6的正己烷:二氯甲烷:冰醋酸混合洗脱液,流速2 mL/min,如图1所示。目前测定方法的运行时间大约为10 分钟(最后一个主峰出峰时间的2倍)。虽然该方法可行且可靠,但是,出于健康、安全、环境和成本等方面的考虑,很多实验室都希望减少典型的正相色谱溶剂的使
用(如正己烷和二氯甲烷)。超临界液体色谱(SFC)是一种正相色谱分离技术,其使用CO
2作为主流动相,通常会使
用极性溶剂(如甲醇)作为改性剂。由于SFC的原理与HPLC的原理相似,因此,目前的方法应该能够转换成SFC方法,从而减少溶剂的使用和处理,降低每次分析的成本,同时增强健康、安全和环境方面的保护。
成功地将美国药典中HPLC方法转换为高质量的UPC2™方法,每次分析的成本为$0.05(相比于药典的$0.90),并且速度为药典的1.6倍。
将这些方法转变为SFC方法必须保持分析数据的质量(保留时间的重现性、样品中目标化合物和其它组分之间的分离度),并且必须得到与当前正相色谱方法一致的分析结果。
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图1. 蒽啉和邻硝基苯胺(内标物)的正相HPLC分离。
![](https://img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/images/2012523102223.png)
图2. 蒽啉和邻硝基苯胺(内标物)的UPC
2分离。
解决方案
制备蒽啉样品并使用目前的USP方法进行分析(该样品也用于UPC
2分析)。分析结果与使用ACQUITY UPC
2方法得到的结果进行对比。超高效合相色谱(UltraPerformance Convergence Chromatography™,UPC
2)方法的条件如下:
主要系统适应性参数的对比见表1。在所有的分析条件中,由转换后的UPC
2方法得到的结果很容易达到USP要求的系统适应性的值,且与正相色谱方法得到的值相比,结果很理想。有趣的是,适应性混合物(蒽啉和丹蒽醌
(danthron))选择性有所改变,但并不会对方法转换产生不良影响。两种方法测定未知纯度的蒽啉样品,分析结果一致。使用正相HPLC分析时,蒽啉样品含量为94.3%;而使用UPC
2时,含量为94.6%。
![](https://img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/images/2012523102249.jpg)
本例中,单次正相HPLC分析消耗16.4mL正己烷和1.2mL二氯甲烷。相比之下,UPC
2方法仅消耗1.05mL甲醇。这说明了通过将正相色谱方法转换为UPC
2方法可以大大地减少有机溶液的使用。根据目前的溶液价格,单次正相HPLC分析成本大约为0.90美元,相比之下,UPC
2仅为0.05美元。
总结
使用ACQUITY UPC
2系统,可以成功地将美国药典的HPLC方法转换为UPC
2方法。由这种新的UPC
2方法得到的数据与目前的HPLC方法相当,甚至更好,速度是目前的HPLC方法1.6倍,消耗的溶剂更少。我们以更快的速度得到高质量的分析数据时,实验室生产率提高,而每个样本的分析成本降低。ACQUITY UPC
2系统是实验室将目前的正相HPLC方法转换为更高效、更省钱的UPC
2的方法的一种理想解决方案,同时也增强了健康、安全和环境方面的保护。
关于沃特世公司 (www.waters.com)
50多年来,沃特世公司(NYSE:WAT)通过提供实用和可持续的创新,使医疗服务、环境管理、食品安全和全球水质监测领域有了显著进步,从而为实验室相关机构创造了业务优势。
作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者,沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。
2011年沃特世公司拥有18.5亿美元的收入,它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。
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Waters, UPC
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