使用在线二维色谱对血清中治疗性单克隆抗体进行MRM 定量的优势

Waters

2013/06/24 14:18

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Catalin Doneanu、Paul Rainville和Robert S. Plumb
沃特世公司（美国马萨诸塞州米尔福德市）

简介
在定量血清中的治疗性蛋白时，不进行分析物预分组分在降低检测成本和简化样品制备流程方面具有一定优势。分析物的分离（通常利用免疫亲和性）需增加额外的纯化步骤并使用昂贵的同位素标记的蛋白质标准品来计算分析物回收率。

另一种方法是采用具有较高色谱分辨率的LC系统，例如多维LC。设计用于测定复杂血清消化物（不进行分析物分馏）中治疗性蛋白质的多重反应监测（MRM）分析法在使用多维色谱时可获得更准确的结果。尤其是近年来，二维反相/反相(RP/RP)色谱在生物分析领域备受青睐。^1-52D-色谱法可以更好地分离分析物与样品中的其他组分，从而降低分析物信号的抑制作用，这一优势极大地提高了业界对2D-色谱法的认可度。使用相同量的样品进行分析时，2D-色谱技术相比1D LC方法具有更高的检测灵敏度。

曲妥珠单抗（赫赛汀）是一种人源性IgG1 kappa单克隆抗体(mAb)。此抗体可通过基因工程^6,7获得，也就是将人类单克隆抗体的恒定区与能够结合人类表皮生长因子受体2 (HER2)蛋白质受体的小鼠单克隆抗体的互补决定区(CDR)进行连接。这些HER2受体属于人类癌基因蛋白家族，在大约25%的浸润性乳腺癌中都有表达。在1998年，美国食品药品监督管理局(FDA)批准曲妥珠单抗用于治疗HER2-过度性乳腺癌。将曲妥珠单抗按照临床剂量通过静脉注射给药，使HER2受体饱和。通常曲妥珠单抗的负荷剂量为4 mg/kg，之后每周剂量为2 mg/kg，从22位患者血浆中测得的曲妥珠单抗最高浓度平均值大约为70μg/mL。⁸

在本应用纪要中，我们将介绍采用高灵敏度的2D LC/MRM测定人体血清中曲妥珠单抗含量的过程，第一维反相色谱在pH 10.0下进行梯度分离，第二维反相色谱在pH 2.5下进行梯度分离。我们发现在蛋白质生物分析中采用二维高pH/低pH RP/RP色谱能够显著降低离子抑制作用。

下载完整应用纪要请点击：http://www.waters.com/waters/library.htm?lid=134717777&cid=511436&locale=zh_CN&icid=i6713