尽可能降低细胞培养中的支原体污染风险

Overview

在细胞培养实验室中，预防支原体污染可能是一项艰巨的任务。但是，您可以选择易于清洁的移液器以及无菌耗材并定期检测，通过执行良好的细胞培养规范，从而显著降低细胞培养实验室的支原体污染及传播风险。

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《尽可能降低细胞培养中的支原体污染风险》应用说明阐述了支原体污染的来源及预防措施。

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简介

在细胞培养实验室中，支原体污染是一种普遍存在的现象：在一项研究中，研究人员测试了 10, 000 个细胞系，发现其中的 11 % 存在支原体污染。支原体污染如此普遍的部分原因在于，即使在常规传代培养中，其也能有效地传播。而在另一项研究中，研究人员在层流净化罩中处理受支原体感染的细胞培养物后，在烧瓶外壁、血细胞计数器上、移液器上以及废弃培养皿外部都检测到了活支原体。事实上，甚至在四到六天之后，从层流罩表面也回收到了活支原体。并且在处理过受支原体污染的细胞的同一个层流净化罩内传代培养纯净的培养物 6 周后，也检测到支原体呈阳性。

什么是支原体

支原体是一类没有细胞壁的细菌。由于缺少细胞壁，它们可以呈现不同的形状，从圆形到细长形都有，并对抗生素具有耐药性。支原体体积小（0.2 – 0.8 μm），可穿过除菌级过滤器，这使其成为一种非常难以去除的污染物。此外，体积小也导致其难以在细胞培养中被发现。

在细胞培养中，支原体可抑制蛋白质生物合成以及细胞生长，并会改变RNA和DNA合成，从而影响研究结果。在细胞治疗和先进治疗药物产品（ATMP）中，支原体污染会引起免疫反应、染色体畸变或增殖特性改变，从而影响患者的治疗安全性。

支原体污染的潜在途径包括：

- 受污染的培养基、试剂或仪器

- 实验室人员（约 80.6 %的技术人员为支原体携带者）

- 其他实验室的被感染培养物


支原体留存在移液器表面

移液器经常暴露在污染物中，并可能携带污染物。通过对移液器高压灭菌和乙醇擦拭的去污效率比较显示，用 70 %乙醇去污可使回收到的细菌数量减少一个对数级以上，而对移液器进行高压灭菌可以完全去除其中的支原体污染。

为降低支原体污染风险，请使用可高压灭菌的移液器进行细胞培养工作。赛多利斯整支可高压灭菌的Tacta®移液器是细胞培养工作的好选择。

避免支原体污染的良好实践

您可以通过以下操作规程进行无污染的细胞培养：

1. 实施良好细胞培养规范

《良好的细胞培养规范》中的关键指导原则包括：一次只培养一个细胞系；清晰标记用于细胞培养工作的移液器、移液助吸器及移液器吸头；仅在细胞培养实验室使用这些移液器和吸头；禁止将其从细胞培养实验室转移到另一个实验室，然后再转移回来。只能使用专为细胞培养工作指定的试剂，不得使用专用于其他应用的储备溶液。

2. 选择易于清洁且可高压灭菌的移液器用于细胞培养工作

液体溢漏和飞溅是造成污染的主要来源，而移液器和液体处理控制器的维护在降低这类污染风险方面发挥着重要的作用。实验室应针对定期的去除污染和维护作业制定相关指南和方案。去除细菌污染的有效清洁方法包括：

- 高压灭菌

- 碱性清洁剂

- 乙醇过氧化氢蒸汽VHP


赛多利斯Tacta®移液器只需拆卸三个部件即可清洁，而且拆卸操作无需使用工具。Tacta® 还可以整支进行蒸汽消毒或热压灭菌，它还具有强大的紫外线耐受力和耐化学腐蚀性。

3. 选择带有防护包装的无菌滤芯吸头

滤芯吸头是细胞培养工作中安全的选择，因其为样本和移液器提供了优质的防护，并且可以防止支原体通过气溶胶传播。

4. 定期检测

定期检测所有细胞系的支原体污染情况，尤其是新细胞系。将新细胞系隔离在单独的培养箱中，直到可以明确证明其未受支原体污染。

赛多利斯Microsart支原体检测试剂盒，采用RT-PCR的方法， 3小时内即可获得可靠结果。高特异性Taqman探针，无需担心假阳性结果，并且完全符合EP 2.6.7法规要求。

5. 使用 0.1 μm的滤器过滤

高压灭菌是杀死支原体的有效方法，但不适用于某些培养基和试剂，因为高温会破坏许多营养素和生长因子。对于细胞大小为 0.2 - 0.8 μm且可通过孔径大于 0.1 μm孔的支原体而言，能有效防止细菌和真菌通过的孔径为 0.22 μm的标准无菌过滤通常是不够的。因此，为防止支原体污染，在过滤细胞培养试剂和培养基时，应使用 0.1 μm孔径的无菌过滤器，而不是标准的 0.22 μm过滤器。

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