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用Vanquish结合Q Exactive高分辨质谱 检测血清中类胰岛素生长因子1
2019/05/14 20:28
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方案摘要：
产品配置单：
赛默飞AutoTrace 280全自动固相萃取仪
型号： AutoTrace 280
产地： 美国
品牌： 赛默飞
¥40万 - 50万
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赛默飞Q Exactive Orbitrap LCMSMS系统
型号： Q Exactive Orbitrap LCMSMS
产地： 美国
品牌： 赛默飞
¥500万 - 750万
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赛默飞 Vanquish Flex UHPLC系统
型号： Vanquish Flex UHPLC
产地： 德国
品牌： 赛默飞
¥100万 - 200万
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方案详情：
类胰岛素生长因子（insulin-like growth factor 1, IGF1）在临床上是一个非常重要的肽段类激素，通常用于评估由于生长激素的紊乱所导致的青少年生长发育的异常。目前国内类胰岛素生长因子1的检测方法主要为免疫法，但采用免疫法检测类胰岛素生长因子1已经被长期的临床实践证明存在以下的不足。第一，各个厂家生产的类胰岛素生长因子1的抗体对目标蛋白的亲和能力不完全一致，因此导致难以形成统一的参考范围[1]。第二，类胰岛素生长因子1在血液中会与类胰岛素生长因子结合蛋白3（Insulin-like growth factor binding protein 3, IGFBP3）结合，而不同厂家的免疫法对于IGFBP3所带来的干扰也不尽相同[2]。第三，最近的基于质谱检测的研究结果表明，在病人人群中，约有0.6%的病人存在类胰岛素生长因子1的蛋白质单点突变[3]，而通常免疫法对于蛋白质的蛋白突变是无法区分的。
本文建立了一种基于Vanquish超高效液相色谱和QE Focus超高分辨质谱在血清中检测类胰岛素生长因子的方法。该方法采用两步蛋白沉淀和在线固相萃取的方法来实现样品的净化，最终获得了满足高通量临床实验室日常检测的结果。该方法分析每个样本的时间为5分钟，但实际上目标和内标化合物出峰的时间窗口不足20秒，因此在后续的工作中我们可以采用Transcend II TLX-4四通道在线前处理液相系统来将实验室的检测通量提升4倍， 即一分半钟测试一个样本。
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