2018/01/29 13:20
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方案摘要:
产品配置单:
赛默飞EASY-nLC 1200纳升级UHPLC
型号: EASY-nLC 1200
产地: 美国
品牌: 赛默飞
¥50万 - 100万
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方案详情:
数据非依赖性的扫描模式(data-independent acquisition, DIA)是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式(1)。DIA 扫描模式中,利用超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂,采集所有母离子的碎片离子,并依次快速地扫描相邻的母离子窗口内的所有碎片离子。DIA 的数据中包含了所有碎片离子的保留时间和强度信息。因此,可以用非常小的质量偏差窗口(如 10 ppm)目标性地抽提同一肽段的多个子离子,计算子离子的强度,就能对该肽段进行鉴定和定量。相比传统的基于母离子强度的 DDA 定量,DIA 定量具有选择性好和定量准确等优点,因此 DIA 成为定量蛋白组学新的热门发展方向。
Q Exactive HF 是赛默飞世尔科技在 2014 年的 ASMS 上推出的全新静电场轨道阱超高分辨质谱仪(3, 4)。Q Exactive HF 采用了分段式四级杆技术(Advanced Quadrupole Technology,AQT)使离子传输效率至少提高了 2 倍;超高场 Orbitrap 技术,提高了 Orbitrap 扫描速度,在 15000 分辨率时,二级谱图的扫描速度是 20 Hz。这两项技术提高了 Q Exactive HF 进行 DDA 和 DIA 数据的采集能力。本文用 Q Exactive HF 质谱,90 min 色谱梯度对酵母蛋白质组进行 DIA 定量分析,考察 Q Exacive HF DIA 定量的能力。
本文基于 Q Exactive HF 质谱,对两种酵母细胞系进行了短梯度的 DIA 定量分析,展示了 DIA 定量重现性好,missing values 少和 CV 小等优点。仅通过 90 min 的梯度 DIA 就能定量接近 30000 个肽段,3000 个蛋白, 实现高通量定量分析。
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