近年来，我国生物制药行业发展正如火如荼，研发投入、生产能力、产业集中度均进一步提升。同时，国家政策积极，出台了一系列优惠政策，为我国生物制药产业发展提供了良好的大环境。为了帮助来自生物制药领域的用户学习、了解生物制药分析表征、质量控制工作流程相关内容，仪器信息网特别策划了“生物制药分析、表征与质量控制”专题并邀请SCIEX CE&Biopharma市场开发经理赵鹏谈谈对生物制药分析、表征与质量控制的看法。

生物制药是制药行业近年来发展最快的子行业之一，全球生物制药发展迅速，市场规模庞大，我国的生物制药也在紧跟脚步。紧跟法规要求，结合客户需要，赛默飞在生物制药表征分析和质量控制发方面提供完整的硬件分析平台和全流程解决方案。

安捷伦公司致力于提供生物制药质量控制的全套解决方案，产品线覆盖样品前处理试剂和设备、生物色谱柱、液相色谱、生物惰性液相色谱、毛细管电泳、高分辨质谱6545XT AdvanceBio LC/QTOF系统、手持红外RapID。

全球生物制药发展迅速，市场规模庞大，国内生物药分析、表征和质量控制存在哪些问题？在哪些方面尚待提升？仪器信息网邀请了SCIEX、赛默飞和安捷伦分享了他们对于国内生物制药企业的看法，供大家参考。

单克隆抗体 (mAb) 及其衍生物包含一类非常重要的生物分子，它们具有广泛的应用。由于 mAb 的异质性，必须对此类生物分子进行全面的分析表征。分析包括测定 mAb 及其异构体的完整氨基酸序列，以及糖基化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰 (PTM) 的表征。 糖基化在许多生物过程中起着重要的作用。它还会对治疗效果、稳定性、药代动力学和免疫原性产生影响。糖链表征通常会涉及到 NMR、HPLC 或质谱 (MS) 等技术。由于糖链在组成和结构方面十分多样，并且很难采用电喷雾电离，因此基于质谱方法的糖链表征具有挑战性。InstantPC 是一种 ProZyme Inc. 推出的新型荧光标签，已开发用于改善 N-糖链分子的 MS 电离效果和检测灵敏度。

本文开发了一种利用CESI-MS表征ADC分子结构的方法。利用该方法，通过两种不同的途径，我们获得了ADC的若干特性。 DAR值的测定通过测定非变性的完整蛋白的方法获得。 药物在F（ab'）2与Fc/2上的分布状况利用纳喷进样方法获得，样品在非变性条件下使用IdeS进行部分酶解。 我们获得了全部的序列覆盖度，同时也获得了药物分子的偶联位点以及其他翻译后修饰信息。通过二级质谱信息表征了偶联药物的肽段。

本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法，得到各种蛋白的肽谱，比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时的差异，同时借助质谱，评价蛋白酶解产物- 多肽在酸性或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。

毛细管凝胶电泳（CGE）可以进行自动定量的蛋白质分析。相较于SDS-PAGE,CGE可以提供自动、高速的分离，更大的分离度和紫外、荧光检测器下直接在线的定量分析。

天冬酰胺 (Asn) 脱酰胺化、天冬氨酸 (Asp) 异构化和甲硫氨酸 (Met) 氧化等修饰是重组抗体的典型降解产物。研究表明，单克隆抗体中 Asn、Asp 和 Met 残基的降解会影响蛋白质活性。因此，蛋白质候选药物（例如 mAb）中的上述修饰是关键质量属性 (CQA)，需在储存和制剂条件下进行密切监测。它们通常是药物开发过程中进行的影响因素试验和强制降解研究的重点。要评估上述 CQA，需要同时进行鉴定和定量分析。 本应用简报介绍了采用一体化工作流程（包括 Agilent AssayMAP Bravo 平台、Agilent 1290 Infinity II LC、Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 和 Agilent MassHunter BioConfirm 软件），通过肽谱分析方法同时鉴定和定量分析重组 mAb的化学诱导脱酰胺化和氧化修饰。

除具有肽段鉴定可信度评价功能外，还可智能显示多肽的理论质谱碎片，并用于与实验图谱直观对比，以辅助分析，并可快速提高分析员质谱解析水平。

基于 Orbitrap 技术的 Q Exactive Plus Biopharma 质谱平台，在完成常规肽图分析、变性质谱条件下测定蛋白分子量的同时，还可以与体积排阻色谱串联，方便快捷的测定非变性条件下 ADC 样品，尤其是 Cys 偶联样品的分子量。

使用CZE和cIEF的方法都可以很容易的检测蛋白质电荷异质性。cIEF通常用于获得电荷异质性和等电点的信息，而本文介绍的CZE方法具有对典型单抗快速及高重现性分离的能力。该CZE方法可以通过增加毛细管的有效长度进行提高峰分辨率的优化。CZE分离的性能不受检测器的影响，CZE可以在碱性峰、主峰和酸性峰分离中表现出很好的重现性。CZE是一种可以替代cIEF的快速分析方法，在保证分离效果和重现性的同时，为高通量分析提供了可能。

多肽分离是生物药物表征过程中至关重要的一步。肽谱分析在药品开发中作为主要的质量控制 (QC) 步骤，其中包括通过酶解生成多肽片段，然后进行反相分离和质谱鉴定。由于蛋白质混合物的蛋白水解消化物固有的复杂性，高效、高分离度的多肽分离显得尤为重要。保留时间和峰面积/峰 高等肽谱分析的质量属性是获得可靠肽谱分析结果的关键。因此，需要采用稳定可重现的 LC/MS 方法严格表征多肽片段，从而可靠地评估分析结果。本研究证明，使用可兼容质谱的 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱以及 含甲酸改性剂的流动相可实现高效的多肽分离。本研究筛选了多种类型的样品用于评估多肽分离的色谱柱性能。结果表现出优异的保留时间、峰面积、峰高和半峰宽 (FWHM) 重现性。

单克隆抗体 (mAb) 等蛋白质的翻译后修饰 (PTM) 是确定药品有效性和安全性的关键质量属性 (CQA)。分析技术的进步加快了 PTM 表征这项艰巨任务的速度。在生物制药行业，肽谱分析是蛋白质鉴定的常用方法。其中包括通过酶解生成肽片段，然后进行液相色谱 (LC) 分离、检测和肽段鉴定。肽谱分析与质谱 (MS) 检测联用，可鉴定单个氨基酸变化和 PTM。LC/MS 是 PTM 分析的首选技术。但由于蛋白质酶解物较为复杂，肽谱分离始终是一项具有挑战性的工作。高分离度和可靠的肽谱分离是可靠鉴定 PTM 的关键。目前的 LC/MS 方法中，采用质谱兼容的甲酸 (FA) 离子对试剂法，信号强度要优于其他改性剂。但 FA 的缺点是，与多种 C18 固定相配合使用时峰形较宽并会出现拖尾峰，从而导致肽对发生共洗脱。表征 PTM 时，需要对复杂的胰蛋白酶酶解物中经过修饰和未经修饰的肽进行高分离度液相色谱分离。肽保留和 MS 信号分别会受到所选反相液相色谱柱和流动相离子对试剂的影响。因此，选择正确的液相色谱柱对于提高含 PTM 肽的分离度至关重要。

Key Words SMART Digest kit, SOLAμ, Vanquish, peptides, protein, bottom up proteomics, proteomics, trypsin digestion, buffer, mAb, biomolecules, biotherapeutics, biopharmaceutical, biocompatible UHPLC, Acclaim C18 RSLC, peptide mapping, in-solution digestion, UHPLC, accurate mass, QE, Orbitrap, peptide quantitation, SPE, solid-phase extraction, Q Exactive Plus

通过快速糖标记和分析试剂盒进行N-糖分析，只需一个小时就能完成样品前处理，且结果产率高，重现性好。 用优化的CE快速分离方法对荧光标记的N-糖进行单个样品或是96孔板样品的分析，只需5分钟就能获得每个样品的高分辨率N-糖分离结果。创新的三个内标方法及GU值软件对结果进行自动化糖型鉴定。快速糖样品前处理（释放和标记），快速、高分辨分离及自动糖型鉴定，使一个样品的数据分析仅需75分钟。该工作流程促使将糖分析更容易地纳入到产品过程和开发实践中，以期更容易获得所需信息的手段。

中国药典和欧盟药典在蛋白质药物成品检验中规定肽图需要与标准品一致，因为属于鉴别项目，不需要定量比较，所以很多人觉得可以“依葫芦画瓢”尽力就好。事实上，生物类似药的肽谱是需要与原研药完全一致的，另外很多实验员在做肽谱分析时重现性很差，需要实验操作者综合考虑蛋白质本身、实验目的以及预期结果，需要实验员具备优质的样品前处理技术、强大的技术分离能力和信息，才能够获取最佳的蛋白水解消化物分离，并进行肽段的可靠表征分析。所以，别怪我没告诉你，肽谱分析真的“肽”重要了，也是难度很高的一个检测项目。干货太多，今天先从蛋白质酶解的独立开发方案说起。

二维液相色谱是传统液相色谱技术的重要补充。Agilent InfinityLab 二维液相色谱解决方案确保您能够自动进行多步分离、离线分析和样品前处理，帮助您在面对最具挑战性的分析物和复杂样品做出明智决策，分析快人一步，让您可以得到需要的结果。

4月8日,服务科学的全球领导者赛默飞世尔科技公司和生物药物开发产品的领先供应商Genovis开始开展一项合作研究项目，以开发先进的终端产品。使用液相色谱-质谱（LC-MS）设备，表征和监测新型或复杂生物治疗药物。

现代生物制药技术发展迅速，市场光明，随之而来的是技术分享的日趋频繁和行业的欣欣向荣。赛默飞作为生物制药领域的领导者，受邀参加第三届中国生物制药分离纯化技术创新发展论坛，并与行业精英进行深度交流，共同推动生物制药的未来发展。

肿瘤免疫治疗的火爆让单克隆抗体药物（下文简称单抗）的研究越来越受到关注，今天我们就来聊聊单抗的一大特性——电荷异质性。 抗体是指能与相应抗原特异结合的具有免疫活性的球蛋白，而单抗是由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。同其它蛋白一样，单抗常常存在广泛的翻译后修饰和降解，如糖基化、碳端赖氨酸丢失、脱酰胺化、二硫键错配、糖化和氧化等。几乎这些所有的翻译后修饰都会直接或间接的引起单抗表面电荷的变化，这就是单抗的电荷异质性。电荷异质性影响单抗的体外及体内的活性、安全性、可行性和质量，在新药研发和生物类似药的开发中都非常重要。

生物治疗药物复杂的异质性需要借助准确而稳定的分析检测方法进行分析，并需要可靠的色谱分离。 随着改变生命的治疗方法的出现，生物制药的未来前景广阔，2018 年的诺贝尔奖更是授予了免疫检查点疗法，基于这一疗法的 PD-1 正在拯救更多癌症病人的生命，推动这些新型生物治疗药物安全地应用于临床需要可靠的生产和质量控制过程。生物治疗药物复杂的异质性需要借助准确而稳定的分析检测方法进行分析，并需要可靠的色谱分离。

生物制药是制药行业近年来发展最快的子行业之一，全球生物制药发展迅速，市场规模庞大，我国的生物制药也在紧跟脚步。 无论fda还是cfda都不断意识到控制药品市场准入与药品上市许可，即药品注册管理的重要性，2017年10月和12月国家食品药品监督管理总局药品评审中心(cde)陆续颁布《生物制品注册分类及申报资料要求（试行）》、《治疗用生物制品注册申报资料指南（试行）》，规范生物药品注册申报的程序和资料。

如今生物制药（单克隆抗体和其他治疗性蛋白）大约占整个医药市场的 20％ ,预计在目前的十年内新增的批准药物中 50％ 以上将是生物制药，其中单克隆抗体占主导地位。在这类药物的研发和整个产品生命周期过程中，都伴随着深入的质量表征的需要。不同于小分子药物，蛋白质生物制药分子量大，异质性强，解析它们的质量属性充满挑战。

作为生物界的年度盛会，2018年生物制品年会于11月15-16日在昆明隆重召开。2000余名学者聚集春城，对生物医药成果、发展趋势、政策法规进行学术交流。 作为科学服务的世界前列，赛默飞携生物制药整体解决方案亮相此盛会，从生物制药的研发到大规模商业生产，及其质量控制的各个应用领域，赛默飞世尔科技致力于工艺的每一步创新，通过整合式的端到端生物工艺流程，为生物制药客户提供的整体解决方案，助力中国客户提升研发和生产能力。

仪器信息网于CPhI 2018期间采访了国际领先的制药和实验室设备供应商赛多利斯生物分析产品应用专家李倩，以了解在生物制药前期研发环节的用户需求及赛多利斯可以提供的创新解决方案。

由中国药理学会药物代谢专业委员会主办的“第十二届全国药物和化 学异物代谢学术会议”于 2018 年 10 月 12-14 日在河南省郑州市黄河迎宾馆盛大召开。会上，400余位专家学者就有关药物代谢与药物动力学研究现状、发展趋势、存在问题与对策进行学术交流和研讨。赛默飞市场经理范超在DMPK与新药成药性分会场给到场学者介绍 生物等效性评价 赛默飞整理解决方案，突出展示赛默飞领先技术是如何简化临床试验工作流程，诠释“新一代BE/DMPK 加速器”这一定位的。

4150 TapeStation系统是用于DNA和RNA样品质量控制的自动化解决方案。对于全套DNA和RNA分析而言，系统能够在每个样品成本固定的情况下分析1-16任意数量的样品。即开即用型ScreenTape技术具有极高的灵活性，支持在分析之间进行切换。该系统可处理两条8联管样品。高灵敏度检测和零交叉污染能够确保下游工作流程成功。