二硫键连接进行确认

大家好，本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章，Online Electrochemical Reduction of Both Inter- and Intramolecular Disulfide Bridges in Immunoglobulins1。该文章的通讯作者是来自荷兰伊拉斯姆斯大学医学院的Martijn M. Vanduijn研究员。许多蛋白质中都包含着二硫键，二硫键是指连接不同肽链或同一肽链中两个不同半胱氨酸残基的巯基组成的化学键（-S-S-）。在蛋白质分子中，二硫键起着稳定肽链空间结构的作用。二硫键数目越多，蛋白质分子对抗外界影响的能力就越大。维持二硫键的完整有利于蛋白质的液相色谱分离，但却给后端的质谱分析带来了挑战。常规的方法是在质谱分析前期对蛋白质进行变性、还原、烷基化处理，这些前处理过程可以有效的减少二硫键对后续酶切或二级碎裂（MS/MS）的干扰，但却非常繁琐耗时，除了会产生副反应以外，蛋白样品也可能在前处理过程中发生丢失。一个有效的替代方法是采用电化学还原。一个配备金属电极的流通池，仅需要施加适当电压于电极上，流通池中蛋白分子上的二硫键就可以被还原。目前，这种微型电化学反应池已实现商业化，可在线连接至质谱前端，蛋白样品经电化学还原，离子源活化，二级碎裂后可直接进行基于MS/MS谱图的序列匹配。尽管如此，电化学反应池在设计、电极材料组成、流通池的大小以及施加的电势等方面仍在不断的提高与创新。免疫球蛋白（抗体）包含有多个链间/链内二硫键。Simone Nicolardi等人曾在2014年将电化学反应器与FTICR质谱联用用于单克隆抗体的分析，从MS1谱图中可以明显地观察到单克隆抗体由于链间二硫键还原后生成的重链和轻链。然而，由于还原不完全，导致重链/轻链上的链内二硫键仅部分打开。类似的不完全还原在Kasper D. Rand组中电化学还原与氢氘交换质谱联用中也能观察到。这种不完全还原会影响蛋白中肽链的精准测量（一对二硫键引起2 Da的质量偏差），同时，关闭的二硫键也会干扰其跨度区域的二级碎裂，碎裂产物也较难通过计算软件进行预测或分析。本文介绍了一种改进的在线电化学还原方法可以实现单克隆抗体链间/链内的完全还原。装置如图1所示，蛋白样品注入系统后在1μL/min的流速下进行色谱分离，色谱柱后流出液与19 μL/min的补充液（1%甲酸，50%乙腈）在T型管中混合，随后以20 μL/min的流速经过电化学反应池（电化学反应池固有体积为19 μL），最终还原后的反应液进入质谱进行检测。值得注意的是，补充液中的50%乙腈有利于蛋白变性，而1%甲酸则为还原反应提供氢原子，促进还原反应的进行。图1. 在线电化学反应池耦联质谱装置示意图为了考察整个方法的可行性及普遍适用性，作者利用该装置对一系列的单克隆抗体进行了电化学还原和质谱检测。如图2A为贝伐珠单抗在800 mV还原电势下色谱分离的总离子流图（TIC），图2B为图2A中色谱峰所对应的一级质谱图（MS1）。从MS1可以看出有两组电荷态分布分别对应重链和轻链，说明在800 mV电势下，贝伐珠单抗链间二硫键发生了还原，由于还原发生在色谱分离之后，所以重链和轻链产生了共流出，仅在TIC图中观察到一个色谱峰。相比较柱前还原，这种色谱柱后二硫键还原会导致肽链的共流出，质荷比接近的肽链则会产生重叠的电荷分布进而干扰谱图的解析。但这种方法在分析复杂的蛋白样本具有明显有优势，可以将还原后生成的肽链与蛋白母体相关联，方便溯源。图2C则为贝伐珠单抗在不同电势下的还原情况，随着电势的逐渐增加，MS1去卷积谱图上逐渐观察到部分还原生成的重链、轻链或重轻链组合，当电势达到1000 mV时，几乎所有的链间二硫键都实现了还原。对于链内的二硫键，由于还原产生的质量改变较小（轻链包含两个二硫键，还原后质量增加4.032 Da），且存在未还原、部分还原以及完全还原肽链间的信号干扰，所以不太容易从MS1谱图确认链内二硫键的还原情况。但轻重链朝高电荷态偏移（图2D）间接说明链内二硫键在打开，肽链更加舒展，更容易质子化。图2. 在线还原系统分析贝伐珠单抗：A）贝伐珠单抗总离子流图；B）对应色谱峰的一级质谱图；C）在不同还原电势下的一级质谱图（去卷积）；D）重链在不同还原电势下电荷态的偏移。为了更加准确地评估链内二硫键的还原情况，作者模拟了不同氧化还原态的贝伐珠单抗轻链19+电荷态的同位素分布情况。如图3A，从上到下分别是模拟的完全还原（4 x SH）、部分还原（SS + 2 x SH）以及未还原（2 x SS）同位素分布。将实验测得同位素分布与模拟的同位素分布进行比对，计算每种氧化还原形式对总信号的贡献占比（图3B）。经过比对发现在1000 mV的电化学还原下是可以实现链内二硫键的完全还原的。因此，最终电化学还原设置为1000 mV。链内二硫键的完全还原可以极大的提高肽链的碎裂效率，获得更加丰富的MS/MS数据用于序列匹配。如图4所示，贝伐珠单抗以及西妥昔单抗的轻链19+电荷态被分离并碎裂。可以看到当施加1000 mV还原电势在质谱分析的前端时，轻链的二级碎片明显增加，特别是横跨链内二硫键的区域（图4，黄色阴影）。此外，在质量匹配的过程中也可以观察到二硫键处于还原状态，考虑还原氢引起的质量增加可以实现更多二级碎片的匹配。图3. A）不同氧化还原态的贝伐珠单抗轻链19+电荷态的同位素分布模拟；B）不同实验条件下的二硫键还原情况图4. MS/MS数据评估链内二硫键的还原情况总之，本文开发了一种在线电化学还原方法能够实现免疫球蛋白链间/链内二硫键的完全还原。该方法能够简化蛋白样品的前处理过程，方便后续的质谱测定。与之前的电化学反应器相比，该系统能实现链内二硫键还原的主要原因可能有以下几点：1、电化学流通池所用的表面材料，之前是全钛的设计，现在是表面镀铂。2、之前是三电极配置（工作电极，参比电极，辅助电极），而现在的设计减少至两个电极，驱动还原的电势适用于这种调整后电极配置。3、补充液的条件（50%乙腈和1%甲酸）对还原有利。此外，该电化学系统仍有需要改进的地方，例如：电化学反应池的体积过大、还原电势过高会影响质谱检测的信噪比等。该方法具有广阔的应用前景，无论是在蛋白质组学还是在结构质谱分析中。撰稿：刘蕊洁编辑：李惠琳原文：Online Electrochemical Reduction of Both Inter- and Intramolecular Disulfide Bridges in Immunoglobulins参考文献1.Vanduijn MM, Brouwer HJ, Sanz de la Torre P, Chervet JP, Luider TM. Online Electrochemical Reduction of Both Inter- and Intramolecular Disulfide Bridges in Immunoglobulins. Anal Chem. 2022, 94(7): 3120-3125. 2.Nicolardi S, Deelder AM, Palmblad M, van der Burgt YE. Structural analysis of an intact monoclonal antibody by online electrochemical reduction of disulfide bonds and Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Anal Chem. 2014, 86(11): 5376-5382.3.Trabjerg E, Jakobsen RU, Mysling S, Christensen S, Jørgensen TJ, Rand KD. Conformational analysis of large and highly disulfide-stabilized proteins by integrating online electrochemical reduction into an optimized H/D exchange mass spectrometry workflow. Anal Chem. 2015, 87(17): 8880-8888.

一、引言含有二硫键的环肽代表了一类具有广泛生物功能的化合物，其功能范围从毒素到重要的激素。1二硫键有助于稳定肽的二级结构和构象，这有利于提高蛋白水解稳定性和目标亲和力。2由于它们具有潜在的治疗价值，对合成含二硫键桥连的环肽的兴趣稳步增长。通过使用正交保护的半胱氨酸氨基酸，如Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH和Fmoc-(S)-Cys(STmp)-OH（图1），可以制备含有二硫键的肽。Cys(Mmt)基团可以使用稀释的三氟乙酉夋(TFA)溶液选择性去保护，而Cys(STmp)基团则使用二硫苏糖醇(DTT)作为还原剂进行正交去保护。去保护后，使用N-氯琥珀酰亚胺(NCS)作为温和氧化剂，可以选择性氧化Cys巯基形成二硫键。3 在这里，我们报告了使用Liberty BlueTM微波肽合成器全自动合成良好纯度的含二硫键桥连的环肽。一个骨形态发生蛋白受体激活素样激酶3 (Alk3)的肽激动剂THR-1234，在3小时内完成合成，纯度为77%。最后，一种含有两个二硫键的锥蜗牛毒素肽（Conotoxin-SI）5在不到4小时内合成，纯度为67%。将微波能量应用于二硫键桥连肽的合成可以实现更高效的偶联，从而快速合成并达到高纯度（CarboMAXTM）。6图1. 左：Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH；右：Fmoc-(S)-Cys(STmp)-OH二、实验部分HE-SPPS材料和方法：所有肽都是在CEM Liberty Blue&trade 自动微波肽合成器上合成的，使用的是Rink Amide ProTide&trade LL树脂（0.19 mmol/g替换）或Cl-MPA ProTide&trade LL树脂（0.18 mmol/g替换）。使用DMF进行后去保护洗涤，然后采用DIC/Oxyma活化方法进行偶联。肽树脂在CEM Razor® 肽裂解系统上用TFA/TIS/H2O/DODT（92.5/2.5/2.5/2.5）裂解。肽在冷乙酉迷中沉淀，粗品在分析前进行冻干。 分析：粗肽在配备了Acquity UPLC BEH C8柱（1.7 μm, 2.1 x 100 mm）的Waters Acquity UPLC系统上进行分析，该系统装有PDA检测器。UPLC系统连接到Waters 2100单四级杆MS用于结构测定。峰分析是在Waters MassLynx软件上完成的。分离是通过（i）水中的0.05% TFA和（ii）乙腈中0.05% TFA的梯度洗脱进行的。三、结果和讨论A）合成THR-123，CYFDDSSNVLCKKYRS-CO2H选择THR-123（图2）来展示含有C端酸的单一二硫键桥连肽的合成。该肽在10 µ mol规模上使用Cl-MPA ProTide&trade LL树脂（0.18 mmol/g替换）进行合成。第一个氨基酸使用CEM之前报道的氯化物加载循环自动加载。所有其他氨基酸循环使用1分钟/90º C去保护和一次2分钟/90º C与DIC/Oxyma偶联（使用Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH用于C）。使用2% TFA的DCM溶液进行Cys(Mmt)的去保护。反应在室温下进行1分钟，重复五次。使用25 mM的NCS的DMF溶液实现二硫键的形成。反应在室温下进行15分钟。在Liberty Blue自动微波肽合成器上进行的THR-123的微波增强SPPS产生了77%纯度的目标肽（图3）。图2.THR-123图3. THR-123的UPLC色谱图B) 合成Conotoxin-SI，ICCNPACGPKYSC-NH2选择Conotoxin-SI（图4）来展示含有两个二硫键的环肽的合成。该肽在10 µ mol规模上使用Rink Amide ProTide&trade LL树脂（0.19 mmol/g替换）进行合成。所有氨基酸循环使用1分钟/90º C去保护和一次2分钟/90º C与DIC/Oxyma偶联（使用Fmoc-(S)-Cys(Mmt)-OH用于C；使用Fmoc-(S)-Cys(STmp)-OH用于C）。使用2% TFA的DCM溶液进行Cys(Mmt)的去保护。反应在室温下进行1分钟，重复五次。使用25 mM的NCS的DMF溶液实现二硫键的形成。反应在室温下进行15分钟。使用5% DTT + 0.1 M NMM的DMF溶液进行Cys(STmp)的去保护。反应在室温下进行5分钟，重复三次。最后，使用25 mM NCS的DMF溶液形成第二个二硫键（室温下15分钟）。在Liberty Blue自动微波肽合成器上进行的Conotoxin-SI的微波增强SPPS产生了67%纯度的目标肽（图5）。图4.Conotoxin-S图5. Conotoxin-SI的UPLC色谱图四、结论采用全自动快速合成技术，我们成功高效地完成了含二硫键桥接的环肽的合成，并且实现了较高的纯度。借助CarboMAX&trade 6化学技术，偶联效率得到了显著提升，这不仅极大缩短了合成时间，还确保了产物的高纯度。例如，一个C端带有羧酸的环状二硫键桥接肽——THR-123，在短短不到3小时的时间内就被迅速合成出来，且纯度达到了77%。相比之下，传统的室温合成方法通常需要长达20小时来合成包含两个二硫键的Conotoxin-SI。3而利用微波增强的固相肽合成技术（SPPS），在不到4小时内就制备出了纯度为67%的相应肽。引用1 Góngora-Benítez, M. Tulla-Puche, J. Albericio, F. Chem. Rev. 2014, 114 (2), 901–926.2 Adessi, C. Soto, C. Curr. Med. Chem. 2002, 9 (9), 963–978.3 Postma, T. M. Albericio, F. Org. Lett. 2013, 15 (3), 616–619.4 Sugimoto, H. LeBleu, V. S. Bosukonda, D. Keck, P. Taduri, G. Bechtel, W. Okada, H. Carlson, W. Bey, P. Rusckowski, M. Tampe, B. Tampe, D. Kanasaki, K. Zeisberg, M. Kalluri, R. Kalluri, R. Nat. Med. 2012, 18 (3), 396–404.5 Azam, L. McIntosh, J. M. Acta Pharmacol. Sin. 2009, 30 (6), 771–783.6 CEM Application Note (AP0124) - “CarboMAX - Enhanced Peptide Coupling at Elevated Temperature.”

仪器信息网讯，2009年11月7日，由中国质谱学会有机质谱专业委员会与中国分析测试协会联合举办的“2009年中国有机质谱年会”在北京成功召开，会议为期三天，出席会议人数达300人。仪器信息网作为特邀媒体也应邀参加。 　　此次质谱年会为与会代表准备了丰富的报告内容，内容涉及生命科学、医学、药学、环境科学、食品安全、毒物分析中的质谱应用研究以及质谱仪器研发的新技术、新进展等。仪器信息网将进行系列报道。 　　中科院长春应化所的刘淑莹研究员选取了含有二硫键的蛋白质和多肽为研究对象，详细研究了其测定分析的问题。二硫键是一种常见的蛋白质翻译后的修饰，文献报道的研究方法有：NMR、部分还原与烷基化、Edman降解与MS相结合(FAB、ESI-MS、MALDI-MS)，但是NMR方法需要相当多的被拆分物，部分还原与烷基化需要耗费相当长的时间，因此课题组选择Edman降解与MS相结合中的MALDI-MS方法进行研究。 中科院长春应化所的刘淑莹研究员 　　课题组利用MALDI-MS研究了胰岛素、β2-微球和溶菌酶的二硫键断裂，发现MALDI线性和反射模式下均观察到了二硫键的快速裂解，并且这些裂解碎片是在气相中产生的，而不是来源于样品制备时在液相中的分解。在上述研究的基础上，课题组建立含有二硫键蛋白/多肽的新方法——还原后巯基与特定基质加成反应。实验中发现了样品与某些基质发生了加合反应，并进一步研究了基质、pH等对加合反应的影响，确定了其反应的机理，最后用于实际样品的研究。 　　最后，刘淑莹研究员与大家相约长春，邀请大家参加明年在长春举办的第三届世界华人质谱大会。

连接子 - 抗体与药物结合的关键因素抗体-药物偶联物（Antibody-drug conjugate, ADC）结合了抗体的高特异性和小分子药物的强细胞毒性。这种组合结合了抗体的独特和非常敏感的目标能力，可以区分健康组织和癌组织。它还具有细胞毒性药物的细胞杀伤能力，可能最大限度地减少剂量限制性毒性，同时最大限度地提高所需的治疗效果。ADC的主要优点是可以在体循环中作为药物使用，最终在靶肿瘤细胞中释放游离药物。在这一过程中，连接子在释放有效药物靶向肿瘤细胞，决定ADC的药代动力学特性、治疗指标和选择性，甚至整体成功方面发挥着关键作用。目前使用的连接子可分为可切割连接子和不可切割连接子两大类，它们之间的区别在于它们在细胞内是否会被降解。一、用于连接的可切割连接ADC连接子的主要类别是可切割连接子。可切割连接子被设计为对细胞外和细胞内环境差异（pH、氧化还原电位等）表现出化学不稳定性，或者可以被特定的溶酶体酶切割。在大多数情况下，这种连接子被设计成在键断裂后释放有效载荷分子。这种无迹可循的药物释放机制使研究人员能够根据已知的游离有效载荷的药理学参数估计共轭有效载荷的细胞毒性。2.1 可切割接头的类型可裂解接头腙是一种酸不稳定基团，当ADC被转运到核内体（pH 5.0-6.0）和溶酶体（pH约4.8）时，它被用作可切割的连接子，通过水解释放游离药物。组织蛋白酶B响应连接子组织蛋白酶B是一种溶酶体蛋白酶，在多种癌细胞中过表达，参与人类许多致癌过程。组织蛋白酶B的底物范围相对较广，但它优先识别某些序列，如苯丙氨酸-赖氨酸（Phe-Lys）和缬氨酸-瓜氨酸（Val-Cit）。这种序列的c端切割肽键。Val-Cit和Val-Ala连接物偶联p -氨基苄氧羰基（Val-Cit- pabc和Val-Ala- pabc）是adc最成功的可切割连接物。PABC片段使自由有效载荷分子以无迹方式释放。双硫键连接子谷胱甘肽敏感连接子是另一种常见的裂解连接子，其策略依赖于细胞质中较高浓度的还原分子（如谷胱甘肽）（1-10 mmol/L）。二硫键嵌入在连接子中，在循环中抵抗还原性裂解。然而，内化后，大量细胞内谷胱甘肽减少二硫键，释放自由有效载荷分子。为了进一步提高循环中的稳定性，通常在二硫键旁边安装一个甲基。焦磷酸二酯连接子该阴离子连接子具有比传统连接子更高的水溶性和优良的循环稳定性。此外，在内化后，焦磷酸二酯通过内核体-溶酶体途径快速裂解，释放未修饰的有效载荷分子。图1. 可切割连接子。（Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. 2018）二、不可切割的连接子不可切割连接子由稳定的键组成，抵抗蛋白质水解降解，确保比可切割连接子更高的稳定性。不可切割连接子依赖于细胞质和溶酶体蛋白酶对ADC抗体成分的完全降解，并最终释放与降解抗体衍生的氨基酸残基连接的有效载荷分子。与可切割连接子相比，不可切割连接子的最大优点是其等离子体稳定性增强，与可切割连接子相比，这可能提供更大的治疗窗口。此外，与可切割的偶联物相比，它有望降低脱靶毒性，因为不可切割的adc可以提供更大的稳定性和耐受性。图2. 不可切割的连接子。不可切割连接的化学稳定性可以承受蛋白质水解降解。单抗的细胞质/溶酶体降解可以释放与降解的单抗衍生氨基酸残基相连的有效载荷分子。（Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. 2018）三、总结结论保证游离药物在肿瘤细胞内的特异性释放是选择Linker的最终目的。该连接子对ADC的稳定性、毒性、PK特性和药效学等具有重要意义。每个环节都有其优点和缺点。在选择连接子时，必须考虑许多因素，包括单克隆抗体和细胞毒性药物中的现有基团、反应性基团和衍生功能基团。最后，需要通过个案分析确定如何优化选择合适的连接物、靶点和毒性分子，平衡ADC药物的有效性和毒性。表1. 连接子类型及优缺点比较参考文献1. Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. Antibody-drug conjugates: recent advances in conjugation and linker chemistries. Protein & Cell. 2018 9:33-46.2. Jun Lu. Feng Jiang. Aiping Lu. and Ge Zhang. Linkers Having a Crucial Role in Antibody–Drug Conjugates. Int J Mol Sci. 2016 Apr 17（4）:561.3. Monteiro Ide P, Madureira P, de Vasconscelos A, Pozza DH, de Mello RA. Targeting HER family in HER2-positive metastatic breast cancer: potential biomarkers and novel targeted therapies. Pharmacogenomics. 2015 16（3）:257-71.阿拉丁提供相关产品，详情请见阿拉丁官网：Linkers - A Crucial Factor in Antibody–Drug Conjugates (aladdin-e.com)

分析仪器的验证作为仪器使用前的一个重要环节，其目的在于通过书面形式，证明整个测量过程能够达到预期效果，即能够获得稳定、可靠和准确的分析数据。制药生产关系到人们的生命健康，其数据的真实准确至关重要。分析仪器是进行药品质量检验工作的必要设备，《药品生产质量管理规范（2010年修订）》第一百四十条明确提出，应当建立确认与验证的文件和记录，并能以文件和记录证明达到以下预定的目标：（一）设计确认应当证明厂房、设施、设备的设计符合预定用途和本规范要求；（二）安装确认应当证明厂房、设施、设备的建造和安装符合设计标准；（三）运行确认应当证明厂房、设施、设备的运行符合设计标准；（四）确认应当证明厂房、设施、设备在正常操作方法和工艺条件下能够持续符合标准；（五）工艺验证应当证明一个生产工艺按照规定的工艺参数能够持续生产出符合预定用途和注册要求的产品。分析仪器属于检验设备，属于上述（四）的范畴，而PQ（Performance Qualification）的含义即性能确认。性能确认不仅在《药品生产质量管理规范》中有明确规定，在美国药典 USP 1225分析方法验证、ICH分析方法验证的通则里也有相关要求。分析仪器的性能确认包括哪些项目？这些项目的具体含义分别是什么？本文以药企常用的分析仪器“总有机碳TOC分析仪”为例，对性能确认作出科学诠释，旨在减少仪器故障的发生率，避免不合格情况的出现，将风险降到最低。检验方法验证检验方法验证（即检验仪器的确认）是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法是否符合检测项目的要求。检验方法验证的基本内容包括方案的起草、审批以及检验仪器的确认。其中，方案的起草与审批，企业需根据自身情况进行撰写。至于检验仪器的确认，则包括多个检测项目。验证参数释义《药品生产质量管理规范（2010年修订）》中明确指出，检验方法验证的检测项目包括精密度、定量限/检测限、准确度、线性/范围、专属性、样品溶液稳定性以及系统适应性。以下是这些验证参数的具体含义。精密度精密度指在一定的受控条件下重复测定均一样品所得测定值的一致程度，它反映了测量系统存在的随机误差大小。比如，用不同品牌的总有机碳分析仪对同一个水样进行测定，仪器的精密度越高，测量数据就越集中，倘若测量数据均集中在真值附近，则测量结果就越理想。举例而言，同样配置500 ppb（1 ppm=1 mg C/l，1 ppb=1μg C/l）的标准蔗糖溶液，表1的两组数据中，数据A的精密度较好。表1：两组数据的精密度对比数据A（单位：ppb）数据B（单位：ppb）498476491462508536511521499509准确度准确度指在一定实验条件下多次测定的平均值与真值相符合的程度，用来表示误差的大小。精密度和准确度的区别就如同士兵打靶，如果子弹头分布很松散，则表明射击精密度低；如果子弹头密集在一起，则表明射击精密度高。在射击精密度高的情况下，聚集在枪靶中心的子弹头越多，则准确度越高。图2表示精密度高，准确度低；图3则表示精密度低，准确度高。图2 精密度高，准确度低图3 精密度低，准确度高定量限/检测限定量限（Limit of Quantification，LOQ），指可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。此处所指的最低浓度，应满足上述精密度和准确度的要求。比如在满足1%精密度和±2%准确度的前提下，测量最低浓度为4 ppb的水样。如果低于这个值，测量结果将不再准确。检测限（Limit of Detection，LOD），指能够被识别和检测的最低浓度。当仪器处于稳定状态时，仪器本身存在着噪声会导致测量读数出现漂移和波动。此值通常是仪器噪声水平标准偏差的3倍，检测限表示检测器对测定物质敏感程度的指标，其值越低，则说明检测器性能越好。线性/范围在给定范围内，所提供的样品与测试结果之间存在线性关系。通常，两点确定一条直线，对于最后的测试数据要求，应列出回归方程、相关系数、残差平方和以及线性图（或其他数学模型）。回归系数以1为基准，距离1越近则表示线性越好。专属性专属性指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在的情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性，反映的是对被测物质准确而专属的测定能力，是用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。比如，对于总有机碳分析仪而言，不论样品化学结构或分子组成如何，都能准确地测量出其中的有机碳化合物。以此建立专属性验证标样组，所使用的品种如下：● 1瓶试剂水（空白溶液）；● 1瓶500 ppb的TOC标样（甲醇）；● 1瓶500 ppb的TOC标样（烟酰胺）；● 1瓶500 ppb的TOC标样（邻苯二甲酸氢钾，简称KHP）。甲醇的分子式为CH3OH，由甲基和羟基组成，一个分子中仅含有一个碳原子，具有醇的化学性质，容易挥发和流失。即便只有一个碳原子，总有机碳分析仪仍能探测到它的存在，说明其专属性是合格的。烟酰胺含有一个氮的杂原子，同样适用于含碳物质的测试。通过专属性测试，也能够测量出其中含有的物质。KHP是一种呈无色单斜结晶或白色结晶性粉末状的化学物质，其特点是具有一个苯环，较难氧化，化学性质稳定，便于保存。可使用KHP进行检测，进而反映仪器的氧化能力。样品溶液稳定性样品溶液稳定性也称鲁棒性，是指仪器在受到扰动或者不确定的情况下，仍然可以维持某些性能的特性。英文名字为Robustness，即健壮和强壮。标样组设有以下几个品种：● 1瓶试剂水（空白溶液）；● 1瓶500 ppb的TOC标样（USP 蔗糖）；● 1瓶500 ppb的TOC标样（USP 1,4-苯醌）。根据美国药典 USP 1225分析方法验证的要求，所使用的试验方法必须是稳定的。举例而言，TOC既与温度无关，也与pH值无关，即使改变温度或 pH值，也不会影响样品溶液的稳定性。系统适用性可通过两种最极端的物质，即一个在自然环境中最容易氧化的物质“蔗糖”和另外一种在自然环境中最不容易氧化的物质“1,4-苯醌”进行测试。各自配置500 ppb浓度的蔗糖溶液、500 ppb浓度的 1,4-苯醌溶液，以及空白溶液放置到总有机碳分析仪中进行测定，测定的响应值分别记为Rs、Rss以及Rw，通过测定三种溶液，确定总有机碳分析仪的适用性。响应效率（Re）按下列公式计算：Re=100[(Rss-Rw)/(Rs-Rw)]如果85%Re115%，则确定该分析仪适用。药企可以根据自身生产的产品对风险进行评估。建议同步进行系统适用性测试（SST），以记录整个测量系统的性能（即人员、工艺、仪器和标样）。系统适用性标样的可接受回收率范围在85%～115%。如果能够通过系统适用性测试，则表明总有机碳分析仪的氧化性能良好。结语药企质量部和工程部人员不应只满足于对照药典和药品GMP指南中有关规定的字面理解，而应该从根本上掌握性能验证与各个测定项目的真正含义。在此基础上，使用合格的分析仪器来满足药品质量检测的需要。原文刊登于《流程工业 制药业》杂志2021年第12期，作者：Sievers分析仪 王欣◆ ◆ ◆联系我们，了解更多！

大家好，本栏目供稿来自于中山大学李惠琳课题组，以后将定期为大家带来质谱新技术、新方法领域的前沿文献与工作交流，欢迎评论互动。本周为大家分享一篇发表在mAbs上的文章，Non-targeted characterization of attributes affecting antibody-FcγRIIIa V158 (CD16a) binding via online affinity chromatography-mass spectrometry1，通讯作者是美国加利福尼亚州Amgen公司的Pavel V. Bondarenko。Fcγ受体（FcγR）是免疫球蛋白（Ig）超家族的膜结合糖蛋白，存在于免疫系统的许多造血细胞表面。这些受体可以结合IgG免疫复合物，在免疫反应的调节中发挥重要作用。FcγRIIIa（CD16a）是一种低亲和力Fc受体，与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）有关。研究表明FcγRIIIa结合亲和力与治疗性单克隆抗体（mAb）的ADCC效力之间存在良好的相关性，测量这种相互作用的亲和力是体外评估单克隆抗体疗法ADCC效力的一个重要部分。Fc上保守N糖基化位点（N297）的聚糖组成对CH2结构域的构象动力学和灵活性有显著的影响，并进一步关系到该结构域与Fcγ受体的亲和力，这种亲和力的差异为区分单克隆抗体糖型提供了一种独特的方法。在文章中，作者描述了一种使用固定化FcγRIIIa受体的亲和层析方法，通过在线质谱（MS）和离线馏分收集，在单个非靶向大规模实验中研究影响FcγRIIIa亲和性的因素。一、基于Fcγ受体亲和层析的抗体糖型鉴别图1显示了利妥昔单抗的糖型分离。从个体保留时间来看，半乳糖基化在与受体的结合亲和力中起着重要作用，更高水平的半乳糖导致亲和力增加（图1b）。几种糖型在提取质谱图（XMC）中含有多个峰（图1c），例如G1F/G1F。这是因为可能存在质量相同的位置异构体（例如G1F/G1F和G0F/G2F含有相同数量的糖，但排列方式不同）。此外，一次只有一个Fc-聚糖与Fc-γRIIIa相互作用，因此不对称糖基化单抗的一侧比另一侧具有更高的亲和力，这可以表现为两个不同的亲和力峰。此外还检测到两种无核心岩藻糖基化物种（M5/M5和G0F/G0）。据报道，这些物种的亲和力和ADCC效价显著增加，但这似乎并未反映在本实验中的保留时间上。最值得注意的是，据报道，M5/M5糖型对FcγRIIIa的亲和力增加了4-6倍，但在所有糖型中洗脱时间最早。仅观察到相对于岩藻糖基化G0F/G0F，无岩藻糖基化G0F/G0糖型的亲和力略有增加，保留时间偏移的幅度与G1F/G1F糖型相当，而不是文献中报道的增加10-50倍。作者推测，与大多数已发表的结合研究中使用的糖基化FcγRs相比，这种偏离预期保留行为的现象可能源于柱上的FcγRIIIa受体是无糖基化的。观察到具有唾液酸化的抗体分子的洗脱时间比其无唾液酸化的对应物稍早。例如，在图1c中，糖型G0F/S1G1F的洗脱时间与G1F/G1F相同。G0F/S1G1F的结构类似于G0F/G2F，在一个半乳糖上带有末端唾液酸，但其洗脱时间更早（类似于G1F）。这表明唾液酸残基可能阻止或抑制第二半乳糖与FcγRIIIa的相互作用，使其更类似于G1F聚糖。图1 利妥昔单抗的FcγRIIIa亲和LC-UV-MS表征。（a） 整个样品的去卷积质谱；（b） 280 nm紫外检测的LC色谱图。星号表示A1G0F的洗脱。（c） 提取的质谱图（XMC）用于检测含有M5/M5、G0F/G0F、G0F/G1F、G1F/G1F、G1F/G2F和G2F/G2F聚糖的单个完整抗体分子。二、亲和层析结果与AlphaLISA结合分析结果的相关性 图2显示了根据平均加权保留时间（根据峰面积加权）排列的四种治疗蛋白质的亲和色谱图。图2b和c显示了平均保留时间与AlphaLISA结合试验的相对亲和力百分比之间的线性相关性。这两种试验报告了类似的趋势，其中糖基化Fc融合蛋白显示无结合，mAb3（IgG2）显示非常弱的结合，与mAb1相比，mAb2（具有高水平半乳糖基化的IgG1）的结合增加。这为使用FcγRIIIa亲和层析方法表征影响结合的产品属性的影响提供了验证。图2 （a） 四种具有代表性的治疗蛋白模式的FcγRIIIa亲和色谱图：无糖基化Fc融合蛋白（紫色）、IgG2单抗（红色）和两种具有不同糖基化模式的IgG1单抗（蓝色和绿色）。（b） 相关图显示了相对结合亲和力与平均加权保留时间之间的关系，去除了异常样本。（c） 相对结合亲和力与加权保留时间的相关图，包括异常样本。三、受体亲和力的差异导致IgG亚类效应器功能的变化IgG亚类（IgG1、IgG2、IgG3和IgG4）的Fc区域具有高度的序列同源性，但在几个关键残基上有所不同，这决定了它们与各种Fc受体的亲和力。为了探究不同Fc结构域的角色，作者对具有相同Fab结构域，但Fc结构域分别来自IgG1、IgG2和IgG4的mAb2变体，以及一种工程化稳定效应器无功能变体（SEFL2）进行亲和分离（图3b）。SEFL2变体是一种无糖基化IgG1变体（N297G），带有额外的工程铰链二硫键，设计为不具有ADCC功能。保留时间数据表明，工程SEFL2-IgG1模式的亲和力最低，其次是IgG2、IgG4，然后是IgG1，这些样品的整体洗脱顺序与已有文献报道的结果一致。然而，IgG4变体的洗脱时间似乎高估了结合亲和力，洗脱时间仅略早于IgG1变体。这种增加的表观亲和力或许与柱上受体的糖基化性质有关，不应用于评估FcγRIIIa对IgG4亚类单克隆抗体的亲和力。图3 （a） 人类IgG重链CH2区域的对齐序列（EU编号）。参与FcγRIIIa结合的IgG Fc残基以绿色突出显示（本研究中通过实验测量），蓝色和红色突出显示（文献报道），二硫键以黄色突出显示。与IgG1序列不同的残基以粗体显示。（b） 具有相同Fab区和不同Fc区的四种mAb2变体的紫外色谱图（λ=280 nm），对应于IgG1（蓝色）、IgG2（品红）、IgG4（褐红色）和带有N297G突变的IgG1 SEFL2（黑色）。插图显示了AlphaLISA测量的相对FcγRIIIa结合亲和力值。亲和力是相对于mAb2参考标准物质的IgG1变体测量的。四、二硫化物异构体对IgG2单抗中FcγRIIIa结合的影响鉴于IgG2亲和色谱图的异质性，作者选择具有二硫化物变体的IgG2（mAb3）进行进一步表征。该IgG2单抗存在几种天然的二硫键结构异构体，它们可以影响疗效和Fc受体结合行为。对二硫化物异构体的反相和FcγRIIIa亲和分离的并排比较（图4）。有趣的是，亲和分离方法中使用的类天然条件仍然能够区分这些结构异构体，这表明这些异构体对Fc和FcγRIIIa的结合亲和力也存在一定影响。图4 （a） 在280 nm处进行紫外检测的反相色谱图，显示天然产生的IgG2二硫化物变体和富集IgG2-a和IgG2-B的纯化样品的混合物分离。（B）相同样品的FcγRIIIa亲和紫外色谱图，显示IgG2二硫化物亚型的部分分辨率。六、在应力条件下识别对FcγRIIIa结合产生负面影响的修饰对受体结合位点或其附近的残基进行化学修饰可影响抗体-受体相互作用的亲和力，从而导致ADCC和疗效的变化。这种修饰可以在各种应激条件下诱导。本研究使用热应激利妥昔单抗样品（40°C，持续6周），通过LC-MS/MS肽图谱检测到200多个修饰。对比具有温度应力的样品和保持在4℃的对照样品的亲和色谱图，每个样品的主峰收集为四个组分（F1–F4）。40°C下的应力导致FcγRIIIa结合的最低亲和组分F1的峰面积略有增加（2%~4%）。对每个收集的组分进行肽图谱绘制，以确定组分中修饰相对百分比的趋势（图5）。馏分被分别赋值为0.1、0.2、0.3、0.4，以便斜率与R2进行比较，并且斜率的R2与绝对值之和可用作评分。具有正斜率的修饰（如半乳糖基化和唾液酸化）表明对受体结合有有利影响，而具有负斜率的修饰（如去酰胺化）表明对结合有不利影响。应激后，组分中的化学修饰斜率（N329脱酰胺）更高（图5b、d、f），而应激前后糖类的斜率（图5c、e、g）保持相似，表明斜率主要由聚糖对受体亲和力的影响以及组分中存在的糖类来定义。图5 （a）亲和色谱图突出显示了在40°C下热应激6周后，相对于4°C对照样品，mAb1峰值强度的变化。（b–g）FcγRIII亲和组分F1、F2、F3和F4中所选修饰的相对丰度变化。（h，i）R2与4°C组分中PTMs的百分比变化斜率的关系。R2与斜率的关系由组分中所有检测到的PTMs的线性回归确定。在所有面板中，红色表示热应力样本（40°C，6周），黑色表示4°C对照样本。所有统计分析中确定的关键属性汇总如表1所示。选择六个指标来评估数据的显著性，以确定修饰是否对FcγRIIIa结合至关重要。评估显示，利妥昔单抗P231（EU P227）、N301（EU N297）和N329（EU N325）三个残基上的11个修饰对结合的影响具有统计学意义。作者进一步分析了这些残基的空间分布，结果显示每个已鉴定的残基都与IgG1到FcγRIIIa的结合域非常接近，为确认这些属性对结合有重要影响提供了额外的信心。表1 确定关键性属性的统计分析总结撰稿：夏淑君编辑：李惠琳文章引用：1 Daniel W. Woodall, Thomas M. Dillon, Kevin Kalenian, et al. Non-targeted characterization of attributes affecting antibody-FcγRIIIa V158 (CD16a) binding via online affinity chromatography-mass spectrometry. mAbs, 2022, 14(1): 2004982.

蛋白表征生物大分子药蛋白质是由不同氨基酸连接形成的多聚体，并且通过正确折叠为一个特定构型，发挥蛋白药物的生物学功能。氨基酸序列的特定位置可以与化学基团共价结合，发生蛋白质翻译后修饰，这些翻译后修饰会导致蛋白的结构发生改变，从而影响蛋白药物的生物学活性，所以需要对蛋白的分子量、肽段覆盖率、翻译后修饰等进行检测。精确分子量分析：分子量的检测是鉴定蛋白的第一步，使用高分辨率质谱分析可得到蛋白质的多电荷信号，通过对信号进行去卷积分析，可获得精确分子量数值，并初步判断蛋白的修饰状态。对于抗体药物还可打开轻重链或者去除糖基，分别分析糖基化和去糖基化轻链和重链的分子量。我们推荐THERMO高分辨质谱来进行：Thermo Scientific LTQ-Orbitrap XL 是离子阱和轨道阱高分辨组合质谱仪，通过强大的功能、稳定性以及低运行成本成为蛋白质组学和代谢组学研究的最佳选择，完全超过并替代 Q-TOF系统。通过高分辨、精确质量数测量和多级碎片解析，完成复杂体系成份鉴定和表征。LTQ-Orbitrap XL采用全新HCD八极碰撞反应池，实现信息更丰富的MS/MS应用，包括蛋白质差异定量分析iTRAQ、PTM分析、de novo 序列分析以及代谢组学研究。Thermo Scientific&trade Q Exactive&trade 组合型四极杆 Orbitrap 质谱仪可以快速可靠地识别、定量和确认更多化合物。 本台式 LC-MS/MS 系统将四极杆母离子选择性与高分辨率和准确质量数（HRAM）Orbitrap 检测相结合，提供出色性能和多功能性。 Q Exactive 质谱仪特别适用于非目标或目标化合物筛查，也能够实现广泛的定性和定量应用，可广泛用于药物发现、蛋白质组学、环境和食品安全、临床研究和法医毒理学。2.肽段覆盖率及肽段分析：肽段覆盖率是指检测到的肽段氨基酸数量占该蛋白质总氨基酸数量的比例。蛋白质肽段覆盖率的检测，对于蛋白质类药物的一级氨基酸序列的确证，保证蛋白质类药物的高级结构形成及维持蛋白质类药物性质均具有很重要的意义。3.二硫键分析：二硫键是蛋白质通过各种链间和链内的半胱氨酸连接在一起的化学键，对蛋白质分子保持正确的高级结构，维持必要的生物活性至关重要。所以在蛋白质类药物的结构分析中，二硫键一直是分析的重点。4.N-糖糖型分析：N糖（聚糖与天冬酰胺的氮链相连）是生物药物中，尤其是单抗药物中最广为人知的糖基化形式，其中N-聚糖结构会影响药代动力学、药效学和免疫原性，因此需要对糖型进行分析。另外，抗体结构分析还可以用到毛细管电泳系统，我们推荐BECKMAN PA800 PLUScIEF法测定单抗药物等电点 使用CE(毛细管电泳仪)对样品与已知等电点多肽作为参照物进行cIEF等点聚焦，依据样品与参照肽段的相对迁移时间计算样品的等电点。 cIEF 法测定单抗样品电荷异质体纯度 使用CE(毛细管电泳仪)对样品进行cIEF等点聚焦，而后对主峰纯度进行积分，得出样品电荷异质体纯度。 CE-SDS 法测定单克隆抗体纯度 将样品还原后，使用SDS毛细管电泳电泳与紫外检测器分析，检验轻链或重链的纯度及杂质含量。

大家好，本周为大家分享一篇文章，Added Value of Internal Fragments for Top-Down Mass Spectrometry of Intact Monoclonal Antibodies and Antibody−Drug Conjugates [1]，文章的通讯作者是加州大学洛杉矶分校化学与生物化学系的Joseph A. Loo教授。　　抗体-药物偶联物(Antibody - drug conjugates, ADC)是一种很有前景的治疗药物，它通过linker为抗体提供高效的细胞毒性有效载荷，以提高其抗肿瘤功效。将linker和有效载荷偶联到抗体上，给ADC带来了额外的异质性，增加了对其全面表征的挑战。自上而下的质谱(TD-MS)技术近年来在单克隆抗体的表征中得到了广泛的应用，与自下而上质谱(BU-MS)和中下质谱(MD-MS)相比，TD-MS具有最简单的样品制备流程和保留单克隆抗体内源性修饰的优势。然而，对于抗体大小的蛋白质和具有显著二硫键组成的蛋白质，TD-MS的断裂效率较低，获得的序列和药物偶联位点信息有限。　　为了增加TD-MS的序列信息含量，一种策略是将不包含蛋白质序列N端和C端的内部片段纳入数据分析工作流程中，这种方法已被证明有助于二硫化完整蛋白的TD-MS表征。在这篇文章中，作者发现在TD-MS中分配内部片段将mAb序列覆盖率提高到75%以上，并允许确定链内二硫键连接和各种N-糖基化类型。对于治疗性非特异性赖氨酸连接ADC，几乎60%的假定药物偶联位点被识别。　　内部片段可以在不破坏二硫键的情况下进入结构紧密、碎片化效率高度受限的区域，因此有可能大大增强完整单克隆抗体的序列信息。作者对完整的NIST单抗的5个最丰富的电荷态采用了ECD和HCD两种碎片化方法，并将每个电荷态的两种碎片化方法的TD-MS结果结合分析。内部片段的纳入提高了二硫键约束区域的序列覆盖，例如，轻链Cys133和Cys193之间的二硫约束序列几乎完全由内部片段覆盖(图2A)，重链的Cys147-Cys203和Cys264-Cys324序列区也是如此(图2B)，而这些区域是末端片段难以触及的。CDR的覆盖率从53%增加到60%，这表明纳入内部片段可以更深入地了解这一关键区域。总体来说，轻链的序列覆盖率从54%提高到83%，重链从28%提高到72%，合并后整个NIST单抗的序列覆盖率从36%增加到76%(图1)。重链比轻链的覆盖率提高更为显著，这表明随着蛋白质分子量增大，分配内部片段变得更有价值。　　图1. 考虑(A)轻链、(B)重链和(C)全单抗内部片段前后不同序列区域的序列覆盖率，包括非二硫约束序列(Free)、二硫约束序列(SS-constrained)、全序列(Full)和CDR序列(CDR)　　图2. (A)轻链和(B)重链的NIST mAb序列覆盖图谱。蛋白质骨架上的蓝色、红色和绿色切割分别代表b/y、c/z和by/cz片段。序列上方的实线表示末端片段序列覆盖率，序列下方的实线表示内部片段序列覆盖率。紫色虚线表示链内二硫键，浅灰色表示受二硫键约束的序列区域，橙色表示互补决定区域(cdr)。　　HCD能够在不破坏二硫键的同时仅碎裂蛋白质主干，因此作者在完整的NIST单抗上应用HCD来生成含有完整二硫键的片段，以确定二硫键连接。在每个形成链内二硫键的半胱氨酸上应用-1H的修饰，以表明它们的完整性。对于轻链，52个末端片段和12个内部片段穿过S - S键I, 17个末端片段穿过S - S键II, 6个末端片段穿过两个二硫键，清楚地显示了这两个二硫键的连接模式(图3A)。靠近重链两端的两个二硫键，S - S键I和S - S键IV，被89个末端片段和9个内部片段穿过 而中间的两个二硫键，S−S键II和S−S键III，只有24个内部片段穿过，没有末端片段穿过(图3B,C)。这些结果证明了NIST单抗重链的链内S - S连通性，重要的是，中间的两个S - S键模式只能由内部片段确定。除了确定链内S - S连通性外，分配内部片段也有助于鉴定N糖基化。当纳入内部片段时，额外分配了25个含有G0F的片段，42个含有G1F的片段和34个含有G2F的片段，这表明分析内部片段对N-糖基化鉴定的能力。　　图3. (A)轻链、(B)重链、(C)仅含完整NIST单抗内部片段的重链，在每个形成链内二硫键的半胱氨酸上施加一个氢损失后，通过HCD TD-MS生成片段位置图。　　内部片段可以确定赖氨酸连接ADC的药物偶联位点。作者采用了类似的方法，将ECD和HCD应用于先前已充分表征的非特异性赖氨酸连接ADC。ADC的TDMS在轻链上仅产生8个与DM1结合的末端片段(图4A)。分配内部片段显著提高了DM1偶联位点的测定。ADC的TD-MS在轻链上产生61个1- dm1结合和15个2 - dm1结合的内部片段，定位了3个偶联位点(K106, K114, K133)，并将鉴定的两个偶联位点缩小到4个赖氨酸残基(K153, K160, K170, K175)(图4A)。对于重链也观察到类似的结果。综上所述，对于完整的ADC，仅用末端片段确认了16个偶联位点，而在包含内部片段后，这一数字增加到52个，覆盖了约58%的抗体所有假定的偶联位点。　　图4. 由ECD和HCD TDMS生成的完整IgG1-DM1 ADC (A)轻链和(B)重链片段位置图。黑色垂直虚线表示赖氨酸的位置。　　在这项工作中，作者首次报道了在完整的NIST单抗和异质赖氨酸连接ADC的TD-MS表征中分析内部片段的好处。内部片段的包含末端片段难以达到的二硫键约束区域，显著增加了完整单克隆抗体的序列覆盖率。重要的PTM信息，包括二硫键模式和N糖基化，可以通过包含内部片段获得。最重要的是，内部片段可以帮助确定高度异质赖氨酸连接ADC的药物偶联位点。　　撰稿：夏淑君　　编辑：李惠琳　　文章引用：Added Value of Internal Fragments for Top-Down Mass Spectrometry of Intact Monoclonal Antibodies and Antibody-Drug Conjugates

ADC药物作为一类新兴的生物治疗药，其结构更为复杂，质量表征挑战也随之升级。在ADC的定量和定性表征中，质谱凭借其独特的能力发挥着不可或缺的作用，可以从完整分子水平、亚基水平、肽段水平和小分子分析等方面对ADC进行多维度的表征（如图1所示）。图1. 质谱多维度表征ADC的方法[1]ADC质谱表征策略√ 丰富的项目经验夏尔巴生物在ADC项目开发方面积累了丰富的经验，涵盖半胱氨酸随机偶联、糖基化定点偶联、半胱氨酸定点偶联、双抗ADC以及双载荷ADC等多种类型。目前，已有5个项目进入临床阶段、多个项目处于临床前阶段。√ 高效的ADC质谱表征流程夏尔巴生物凭借深厚的表征经验和先进的分析平台，成功打造出一套全面、高效的ADC质谱表征策略，可对不同偶联方式的ADC药物进行全方位表征，涵盖分子量、偶联位点、偶联位点占有率、偶联杂质、二硫键和翻译后修饰等，确保分析的全面性和深入性。这套质谱表征流程有效克服了在DAR（药物抗体比）分析、复杂肽段偶联位点的质谱表征研究方面的难题，实现了在完整分子水平的精准分析，充分为产品质量保驾护航。本文聚焦于药物抗体比（DAR, drug-to-antibody ratio）和偶联位点这两个ADC药物的关键质量属性，深入介绍夏尔巴生物的质谱表征方法。药物抗体比（DAR, drug-to-antibody ratio）的质谱表征ADC常用的偶联方式一般分为随机偶联和定点偶联，随机偶联包括赖氨酸随机偶联和半胱氨酸随机偶联；定点偶联方式较多，包括引入反应性半胱氨酸定点偶联、引入非天然氨基酸定点偶联、糖基化偶联、抗体间二硫键桥接偶联、其他酶促反应偶联等。半胱氨酸随机偶联过程如图2所示，由于半胱氨酸随机偶联ADC的轻链和重链以及重链和重链之间的二硫键被破坏，RP-LC/MS方法流动相中的有机溶剂会破坏非共价连接的立体空间结构，无法在完整分子水平分析DAR值和载荷分布情况。图2. 半胱氨酸随机偶联ADC偶联过程和结构展示[2] 而非变性质谱法（Native MS）由于其自身的特性，尤其是体积排阻色谱（Size exclusion chromatography, SEC）和质谱联用，很好的弥补了这种缺陷。SEC-MS法通常选择与质谱兼容的乙酸铵作为流动相体系，液相分离过程中无有机相参与，对柱温要求较低，分子的非共价结构得以保留，从而可以在完整分子水平进行DAR值分析。疏水作用色谱（HIC）通常以含盐的水溶液作为流动相，检测过程中不会引入有机相，也适用于在完整分子水平进行DAR值分析，通常被作为半胱氨酸偶联ADC的DAR值检测放行方法。但是HIC法本身不具备DAR值组分鉴定的能力，所以在HIC方法开发过程中，需要收集不同的组分，借助Native MS鉴定每个峰的组成。HIC法DAR值检测典型图谱见图3A，相应的Native-MS鉴定结果如图3B所示。图3. HIC和Native MS检测DAR值结果[2]定点偶联ADC在偶联过程中一般不会打开分子的链间二硫键，所以传统的RP-LC/MS法可以进行完整水平的DAR值分析。经典的糖定点偶联过程如图4所示，偶联过程中链间的二硫键得以保留，RP-LC/MS法以有机溶剂和水作为流动相，经过反相分离后进行质谱检测，对质谱结果解卷积分析后即可得到平均DAR值和载荷分布。图4. 糖定点偶联ADC的偶联过程[3]双载荷ADC（dual-payload）是在抗体上偶联两种不同的载荷，其自身异质性较强，常规分析方法很难实现两种载荷的DAR值检测，质谱可以根据带有不同载荷分子的分子量差异进行总DAR值以及两种不同载荷DAR值（DAR-A和DAR-B）的表征研究（图5）。图5. 双载荷ADC质谱表征[4]质谱分析DAR相较于常规分析方法的另一个优势在于可以在完整分子和亚基水平分别评估，如图6所示，对完整分子进行DTT还原后，可以检出轻链和重链上分别偶联的linker-payload数量，加权计算得出平均DAR值，与完整分子量检测结果交叉验证，可以得到更准确的ADC结构信息。图6. 质谱在完整分子和亚基水平DAR值检测结果ADC偶联位点的质谱表征研究肽图分析（LC-MS/MS法）是表征大分子药物的强大工具，将ADC样品酶解后，利用LC-MS/MS分析，从而确证氨基酸序列、翻译后修饰、二硫键连接形式，通过一级和二级质谱信号对肽段序列和linker-payload特征碎片进行确认即可获得偶联位点信息。图7. 肽图法质谱分析流程对于含有多个偶联位点的肽段，偶联位点的鉴定会更复杂，如图8所示，铰链区酶切肽段含有两个半胱氨酸偶联位点（~CPPC~），肽段有可能偶联一个或者两个linker-payload，这时就需要通过一级质谱判断肽段偶联的linker-payload数量，结合二级质谱信息判断偶联发生位点。图8. 偶联一个和两个linker-payload肽段质谱鉴定结果综上所述，夏尔巴生物的质谱分析平台具备生物大分子的全面表征分析能力，可以实现抗体、融合蛋白以及随机/定点不同偶联方式的不同分子形式ADC药物的全面表征研究和分析方法开发，可以根据需求为客户提供Top-down、Middle-down、Bottom up等基于质谱的、全面的生物大分子结构表征研究和质量控制策略，助力客户产品提质增效。参考文献1) Zhu X, Huo S, Xue C, et al. Current LC-MS-based strategies for characterization and quantification of antibody-drug conjugates[J]. Journal of pharmaceutical analysis, 2020, 10(3): 209-220.2) Valliere-Douglass JF, Hengel SM, Pan LY. Approaches to Interchain Cysteine-Linked ADC Characterization by Mass Spectrometry. Mol Pharm. 2015 Jun 1 12(6):1774-83.3) van Geel R, Wijdeven MA, Heesbeen R, Verkade JM, Wasiel AA, van Berkel SS, van Delft FL. Chemoenzymatic Conjugation of Toxic Payloads to the Globally Conserved N-Glycan of Native mAbs Provides Homogeneous and Highly Efficacious Antibody-Drug Conjugates. Bioconjug Chem. 2015 Nov 18 26(11):2233-42.4) Yamazaki C M , Yamaguchi A , Anami Y ,et al.Antibody-drug conjugates with dual payloads for combating breast tumor heterogeneity and drug resistance[J].Nature Communications[2024-03-05].关于夏尔巴生物夏尔巴生物专注于提供抗体、融合蛋白、ADC（抗体偶联药物）等药物的开发和商业化生产，致力于“帮助优质客户开发出全球老百姓用得起的高质量生物药”。公司已组建了一支具有丰富经验的国际化人才团队，并助力完成了40多个项目的申报注册以及10个产品的国内外上市，满足了250多万病人的用药需求。目前，夏尔巴生物在苏州已有60,000L的总产能，生产线的建设标准同时符合NMPA、FDA和EMA等GMP要求。同时，夏尔巴生物在杭州基地还有172,000L产能在建，其中4条20,000L的生物反应罐已建成。夏尔巴生物致力于为优质客户提供优质的技术服务，可提供行业领先的一站式解决方案，协助客户加速将创新成果实现商业化，惠及更多患者。“利他以恒，匠心致远”，以分享、帮助、成就、共赢的理念，帮助优质客户开发出全球老百姓用得起的高质量生物药，是夏尔巴生物的理想和目标。

Flux Console随着技术的不断迭代改善，多数企业的生产流程已逐渐从传统的单元机械式迈入全自动化的操作。在众多车间的各个关键节点上，需要检测当下的产品的一些关键指标，以保证最终产品的质量。对于质量控制，在线近红外作为一项过程分析技术，能够真正实现对生产流程的实时监控。但考虑到加装在线近红外设备对一些运转多年的车间来说存在难度，采用旁线近红外也是一项颇具性价比的解决方案。为了弥补旁线设备相较在线设备数据滞后带来的问题，通常会将仪器放在离生产线尽可能近的位置。而对一些有多个生产车间或是多地拥有工厂的企业来说，多台旁线近红外设备是必不可少的。质量管理部门为了收集并管理这些仪器上的数据，传统方法就是现场人员花费时间记录并提交给分析人员，再通过分析收集到的数据，根据具体情况告知现场调节生产，而这一环节在实际生产中耗费了相当的时间，并未充分地发挥出旁线设备的优势。虽然旁线近红外能够快速测定待分析样品的多个指标，但往往容易忽视反馈时间慢这一问题。步琦的旁线近红外光谱仪 ProxiMate™ 针对这一问题，推出了基于云计算的数据联网服务 Flux Console，能够实现企业内部对旁线近红外设备的远程查看及管理。 1功能简介：仪器仪器基本状态运行时间统计许可证汇总连接应用状态应用应用设置适用参数属性详情连接仪器状态偏差及斜率调整连接仪器状态偏差及斜率调整样品样品摘要测量结果原始谱图所用应用信息所用仪器信息趋势图参考值赋值所用仪器信息趋势图参考值赋值连接仪器视角管理所连接应用应用视角管理所连接仪器 2特点：同步获取全部数据查看和对比公司所有站点及实验室的测量数据，从而获得有用结论。此外只需简单的点击操作，便能满足生产和审计要求。数据安全性与效率Flux Console 基于微软云计算服务 Azure 建立的联网应用，运行于世界最安全的云平台之上，带给您数据安全的绝对保障。通过联网查看仪器状态，可以精确安排仪器维护工作，最大化确保仪器正常运行，实现生产效率的最大化。

2023年3月，美国威尔康奈尔医学院的研究人员在Cell 期刊上发表" HIV-1 remission and possible cure in a woman after haplo-cord blood transplant "的论文。研究显示，一名混血女性艾滋病患者在接受干细胞移植37个月后，停止了抗艾滋病毒治疗，之后她的体内连续18个月没有检测到HIV-1。根据伯乐生命科学公众号发文表示，在接受 CCR5Δ32/Δ32 单倍相合脐带移植(脐带血细胞结合成人单倍干细胞)治疗急性髓系白血病(AML)后，经 ddPCR 确认血液中 HIV 载量极低不可检出，艾滋病可能得到了治愈。该患者成为继“柏林病人”、“伦敦病人”、“杜塞尔多夫病人”之后，第四例经发表的艾滋病治愈病例，被称为“纽约病人”。同时，也是全球首次成功治疗的女性艾滋病患者。此前，有两名男子通过 CCR5 Δ 32 纯合子突变异体成体干细胞移植治愈了艾滋（注：作者投稿时为 2 名男子治愈者，现为 3 名）。但是，CCR5Δ32 纯合子突变在人群中十分罕见，这严重限制了干细胞移植治愈 HIV 的可行性。Hsu Jingmei 团队将 CCR5Δ32/Δ32 脐带血细胞结合病人亲属的干细胞进行移植，同时解决 CCR5 Δ 32 纯合突变和 HLA 配型的难题，使患者的肿瘤和艾滋病都得到了缓解，目前缓解已持续 4.8 年。移植后 37 个月，患者停止服用抗艾滋病病毒药物（ATI），停药后超过 18 个月，病人血液中仍然没有出现 HIV-1 载量反弹。Hsu Jingmei 团队曾在2021年开发了基于 Bio-Rad QX200 平台的 ddPCR HIV-1 检测 assay，用于检测和监测隐匿性 HIV-1 感染。经过实验室和临床评估，该 assay 结果稳定可靠，重复性好，表现出非常高的分析特异性和接近单拷贝水平的检测灵敏度，检测下限（LoD）为 4.09 拷贝/百万外周血单核细胞（4.09 copies/million PBMCs）。

日前，新西兰初级产业部(MPI)检测结果曝乌龙，原本被怀疑含有肉毒杆菌的恒天然浓缩乳清蛋白原料，以及包括婴幼儿奶粉在内的使用该原料的产品中，均未发现肉毒杆菌，而是含有一般不会引发食品安全问题的梭状芽孢杆菌。 　　乳业专家表示，虽然未涉肉毒杆菌，但产品中存在任何细菌都是不合理的。记者联系质检总局，其表示暂无解禁通知。 　　恒天然原料未涉肉毒杆菌 质检总局不提解禁 　　MPI方表示，肉毒杆菌事件是虚惊一场 ,有关部门除了在本国，还在美国的实验室对原料进行检测。195次检测显示肉毒梭状杆菌均呈阴性，证实在恒天然生产的浓缩乳清蛋白粉中发现的细菌，并非可能致命的肉毒梭状杆菌。 　　8月6日，正在恒天然"涉毒"事件发酵之际，国家质检总局发布，对恒天然集团浓缩乳清蛋白粉和奶粉基粉无限期叫停，直至事件影响确认或问题解决。 　　对于目前新西兰MPI公布的事件乌龙结果，中国经济网记者联系到了质检总局进出口食品安全局负责奶粉进出口的负责人，其明确表示，暂没有接到任何解禁通知。而对于新报出的梭状芽孢杆菌，同肉毒杆菌一样，是不在进出口日常检测范围内的。 　　"梭状芽孢杆菌"成始作俑者 专家原料存菌不合理 　　检测机构为何会出如此 "乌龙"?"梭状芽孢杆菌实际上是不产生毒素的肉毒杆菌分离菌，"也就是说，这两种菌(肉毒杆菌和梭状芽孢杆菌)几乎是一样的，唯一区别在于是否含有负责编码生成肉毒素的基因",新西兰奥克兰大学微生物学专家苏西· 怀尔斯对媒体介绍说。 　　MPI发布声明称，目前已经确认被发现的有机物是梭状芽孢杆菌。梭状芽孢杆菌不会像肉毒杆菌那样产生会致人中毒的肉毒素。目前还未曾有过由梭状芽孢杆菌引发食品安全问题的报告，但如果这种细菌的某些菌株含量过高，可能导致食物腐坏。对于细菌来源并未详细披露。 　　检测结果显示并非肉毒杆菌也不能代表恒天然乳清蛋白粉就不存在问题，"实际上，这种蛋白粉里根本就不应该有任何可检出细菌，归根结底其产品依然存在污染，只是危害程度没有之前认为的那么高" ,乳业专家王丁棉在接受采访媒体时表示。 　　检测结果虚惊企业亿元损失 恒天然或陷巨额赔偿 　　据相关机构统计，受恒天然肉毒杆菌事件影响，各大超市、母婴店洋奶粉销量平均下跌幅度达到了20%以上。资深乳业专家宋亮也曾表示，涉事企业多美滋、雅培的销售下滑同比大约有四成。 　　多个奶粉的经销商以及母婴店店主也透露，自从恒天然奶粉出事以来这半个月左右的时间内，涉事的多美滋、雅培和可瑞康，销量均有一定程度的下降，其中最大的降幅达到60%,少的也有10%左右。 　　《第一财经日报》报道，以受损最严重的多美滋为例，核算了其召回、销毁及其产生的人力、物力损失，约有1.33亿元。此外，由于肉毒杆菌事件带来销量下滑，声誉受损，赔偿金额或远超过此数。 　　记者联系到多家涉事企业，目前均未表示向恒天然索赔的信息。对于消费者与客户赔偿，恒天然此前一直未启动。对于将面临的赔偿风险，恒天然对中国经济网记者表示，我们正与客户继续保持合作以解决供应链下游的问题，毕竟到目前为止大家关注的重点都在预防性召回上。但作为原料供应商，恒天然将会对直接因此次事件受到影响的客户承担起应有的责任。 　　长期研究国际法的京都律师事务所合伙人郭庆近日表示，不排除多美滋等企业会主张远超过直接损失的巨额赔偿，但这种情况往往双方会"撕破脸"决裂，正常情况下双方会本着继续合作的态度，协商出双方都能接受的赔偿方案。

镉，一种重金属，化学元素周期表中排序第48位。在自然界，它作为化合物存在于矿物质中。人体长期摄入镉会导致癌症，低剂量摄入也对健康有害。人体的镉中毒主要是通过消化道与呼吸道摄取被镉污染的水、食物、空气而引起的。由于人自身有代谢功能，镉在人体积蓄潜伏可长达10年-30年，可以导致肾脏等器官发生病变，引发骨痛病，还有可能影响下一代的健康。 　　近年来，我国食品安全问题频发，已成为政府有关部门乃至普通百姓高度关注的焦点，其中有毒重金属超标和污染问题不容乐观，尤其是近期的大米中重金属镉超标问题格外引人注目。那么，如何快速准确地测定大米中的镉含量呢? 　　无机元素分析的专家PerkinElmer于2013年6月20日、21日在国家地质测试中心组织了石墨炉AAS直接进样做&ldquo 米镉&rdquo 现场观摩活动，此次活动共吸引了20多个用户参与。 　　据PerkinElmer应用工程师介绍，GB 2762-2012新版《食品中污染物限量》规定了大米中镉限量为0.2mg/kg，检测方法按GB/T 5009.15-2003《食品中镉的测定》规定的方法测定，石墨炉原子吸收光谱法是该标准的第一法。 PerkinElmer应用工程师向用户讲解测定方法 PerkinElmer原子吸收光谱仪PinAAcle 900T 　　PerkinElmer应用工程师从超市随机采购了7个品牌的大米、小米、糙米等。用户们兴致勃勃的选出了自己感兴趣品牌的样品，分别称重、简单处理、上机测定。 用户将要测定的大米样品 　　石墨炉原子吸收光谱法测定样品前处理方法通常是干灰化法或湿消解法，其缺点是操作繁琐、前处理时间长。PerkinElmer则采用了直接进样的前处理方法，0.5g样品加入1mL水润湿后加入0.5mL浓硝酸，再用曲拉通定容即可。 用户正在处理样品 　　本次实验使用的仪器是PerkinElmer的PinAAcle 900T原子吸收光谱仪，900T采用了横向加热石墨炉、纵向交流zeeman效应背景校正、内置直流ASCOM石墨炉电源、气动式锁紧石墨管、管内外气流分开、真实温度控制、自动节气停水、彩色TubeView石墨炉摄像头等技术。 　　900T标配高清摄像头，能监控整个升温程序的过程，给用户在调试自动进样器和设置升温程序上都带来很大的便捷。 干燥　　 加样 灰化　 　 原子化 　　软件具有标识功能，能将低于检出限和高出限量值的样品直接标记出来，让结果一目了然。 　　以下是此次用户测定的某些市售品牌大米及部分大米和小麦标准物质中镉含量的测定结果。 标准加入法测定曲线 测定结果 撰稿：刘丰秋

为进一步促进动物源食品质量安全的发展，更好的保障人类身体健康和提高生活品质，仪器信息网于2023年11月15-17日举办“动物源性食品质量安全检测技术”主题网络研讨会。围绕大家关心的话题共同探讨，为用户、专家和学者搭建优质、有效的交流平台。会议分设四大专场：（1）兽药残留检测技术，（2）其他污染物检测技术，（3）营养物质分析技术，（4）快速检测技术，（5）水产品质量安全检测技术。会议详细日程，请点击链接观看：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/animalderivedfood2023/会议将特别邀请了分别来自科研院所/大专院校、政府检测单位/第三方检测机构、食品生产企业等不同单位的30位+行业资深专家共同就新研究新技术等热点问题展开探讨。以下为部分已确认出席专家：朱坚（上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 研究员）报告题目：《国内外兽药残留检测标准动态》孙雷（中国兽医药品监察所 研究员）报告题目：《兽药残留新版标准解读》张鸿伟（青岛海关技术中心 兽药残留检测室主任/正高级工程师）报告题目：《QuEChERS技术在兽药残留检测中的应用》吴玉杰（中国检验检疫科学研究院 研究员）报告题目：《动物源性食品污染物安全监管标准体系介绍》姜毓君（东北农业大学 食品学院院长/教授）报告题目：《婴幼儿配方乳粉中克罗诺杆菌的溯源控制与检测》臧明伍（中国肉类食品综合研究中心副总工程师/教授级高工 教授级高工）报告题目：《加工肉制品短期贮藏过程中风味物质分析》陈全胜（集美大学/海洋食品与生物工程学院 院长/教授）报告题目：《食品质量安全快速无损检测技术》更多专家风采及会议日程详情请点击下方链接观看：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/animalderivedfood2023/欢迎广大食品同仁报名参会~主要参会目标用户：本会议报告内容属性涉及科研研究及仪器检测技术。（1）相关生产企业单位：食品生产企业、包装生产企业的技术人员、主任、总经理等。（2）商业检测机构：第三方检测人员、实验室主任、实验室主管等；（3）政府检测部门：各地海关、疾控、食品检测中心的检测人员、管理人员；（4）科研院所：中科院、农科院、检科院、市场监管局、食品药品研究院等单位研究员或技术检测人员；（5）高等院校：各普通高等院校食品类教授、实验室管理人员。会议赞助形式：（详情可咨询会议运营经理）刘经理 15718850776 liuyw@instrument.com.cn王经理 13269891028 wangxin@instrument.com.cn形式1：1、可在任一会场做30分钟主题报告1次，会后报告视频剪辑后上传至3i讲堂2、列为本届会议赞助商，在会议页面展示企业logo，3、会议报道、EDM、海报、主持人口播等体现赞助商名称4、直播期间，弹出调研问卷，收集用于意向形式2：1、可在任一会场做15分钟技术展示1次，会后展示视频剪辑后上传至3i讲堂2、列为本届会议赞助商，在会议页面展示企业logo，3、会议报道、EDM、海报、主持人口播等体现赞助商名称4、直播期间，弹出调研问卷，收集用于意向形式3：1、选定任一主题研讨会在茶歇期间播放2 分钟以内视频1次或会前流程 PPT 中插入一页企业宣传内容(视频内容需会前经过主办方审核)2、列为本届会议赞助商，在会议页面展示企业logo，3、会议报道、EDM、海报、主持人口播等体现赞助商名称更多免费会议，欢迎添加助教微信：食品领域会议赞助，请联系刘经理，欢迎各位厂商前来咨询！

目的细菌内毒素检测（BET，Bacterial Endotoxins Testing）的创新技术问世后，证明平台间检测的等效性就变得至关重要。“Sievers® Eclipse比例确认测试”旨在确认使用96孔板时的样品与鲎试剂的1:1比例始终对使用Eclipse微孔板也同样有效。只要保持1:1比例，就能使样品和鲎试剂（LAL，LimulusAmoebocyte Lysate，鲎变形细胞溶解物）之间的生物化学反应保持不变。即使在使用Sievers Eclipse平台时减少光学孔的总容积，每个孔中的1:1比例也能保持不变，用户可以确信样品和标准品的内毒素测量值是准确有效的。背景和重要性使用96孔板的动态显色法细菌内毒素检测技术，要求在每个孔中加注标准品或样品与鲎试剂的混合液，然后观察液体的颜色变化。检测成功的关键在于精确控制样品和鲎试剂的用量。USP 规定，对于某些检测参数（例如体积比、反应起效时间、pH值等），应遵循鲎试剂生产商提供的使用说明（IFU，Instructions for Use）。使用说明通常以下两种方式之一来表明如何达到正确的样品和鲎试剂的体积比：❶ 直接表明样品和鲎试剂的比例应为 1:1；❷ 指示用户加入100 µ L的空白鲎试剂水、内毒素标准品、产品样品、阳性产品对照，然后向所有使用的孔中加入100 µ L的鲎试剂。有的使用说明指示用户准备1:1样品与鲎试剂混合液时，建议使用100 µ L（而非典型的200 µ L）作为孔的总容积，并指出100 µ L有助于达到最佳的检测灵敏度。该使用说明表明，1:1的比例关系（而非孔的总容积）才是检测成功的关键。只要每个孔中的样品和鲎试剂的比例是1:1，反应就能准确进行，产生的结果就是等效的。如果比例不是1:1，那么样品与鲎试剂的用量就不对，就会对反应动力学过程和整体检测结果产生显著影响。除了孔的总容积之外，还需考虑反应速度。如果反应较快，那么起始反应时间就较短，内毒素浓度就较高。如果反应较慢，则情况相反——起始反应时间较长，内毒素浓度较低。错误的比例还会影响鲎试剂在与样品混合时的自然缓冲能力。如果达不到1:1的精确比例，则反应混合液的pH值就不在建议的6-8范围之内，就会影响检测的整体反应动力学过程。1:1比例确认测试1:1比例确认测试旨在证明在Sievers Eclipse微孔板的104个孔中都达到了鲎试剂和样品的1:1精确比例。进行测试时，用户需要一个新的Sievers Eclipse微孔板和Sievers Eclipse 1:1比例确认套件，该套件包括一个水瓶和一个染色剂瓶。开始分析之前，Eclipse软件会指导用户在对应的位置和鲎试剂LAL端口，完成水和染色剂的准备和注射。然后，Eclipse微孔板按照正常分析时的步骤运行。1:1比例确认测试不依赖于动力学酶促反应，因此测试所需的总时间较短。1:1比例确认测试的报告内容分析完毕后，Eclipse软件的“1:1比例结果（1:1 Ratio Results）”选项卡中会显示报告。报告内容除了包括在运行测试之前输入的常规信息（例如分析仪序列号、Eclipse微孔板信息、1:1比例确认样品信息），还包括104个光学孔的各自的平均光密度。在报告的“结果”部分下面，分别显示微孔板“染色剂”部分和“水”部分的总体平均光密度。染色剂分别同微孔板另一半上的染色剂和水混合，产生上述两个平均值。下面的方程1用于计算总体平均光密度值，该值显示溶液的混合是否成功。这可以用来表示在正常分析时样品和LAL是如何混合的。方程式1：在染色剂与染色剂混合的孔中，理想的比例为1（即染色剂平均值）。在染色剂与水混合的孔中，染色剂被稀释到原来浓度的一半，理想的比例为0.5（即水平均值）。将这两个平均值相除，得出的理想比例为2，表示到达光学孔的染色剂和水的量完全相同。对于本次测试来说，1.90至2.10之间的比例都是有效的，不影响整体反应动力学曲线和内毒素回收率。结论Sievers Eclipse微孔板是精密设计的微流控液体处理设备。此款微孔板利用计量分配腔，以恒定的通道几何形状和运动方式，将精确等量的样品和鲎试剂同时送到光学孔中。正是Eclipse微孔板的精密的液体控制能力，确保了每次检测的所有104个光学孔中都达到样品与鲎试剂的1:1关键性比例。鲎试剂生产商提供的使用说明可能会直接表明1:1比例，也可能会指导用户混合一定量的样品和鲎试剂，但液体总体积未必一定是200 µ L。如果光路径较长，或者为了进行精确移液，生产商会建议设置较大容积，以提高检测精度。对于标准的96孔微孔板来说，建议设置的孔的总容积在75-200 µ L范围内。“为了进行有效测量，建议设置的微孔板的最小孔容积通常大于最大孔容积的1/3。”1 所以，每次检测的每个孔中的样品与鲎试剂的比例达到1:1，非常重要，而没有必要使用整个孔的容积。在Sievers Eclipse平台上进行1:1比例确认测试的结果证明，即使孔的总容积显著减小，每次检测的每个光学孔中都能达到至关重要的1:1比例。始终保持1:1的精确比例，用户就能确认在转换平台时，生物化学过程是等效的。建议每年由Sievers分析仪认证的现场服务工程师或代表来完成此项确认测试任务。参考文献Pusterla, Tobias, PhD. “Which is the best microplate for my assay?” BMG Labtech, 2018 May 30. https://www.bmglabtech.com/which-is-the-best microplate-for-my-assay/◆ ◆ ◆联系我们，了解更多！

简介制药清洁验证和确认成功与否，关键在于能否设计出强有力的清洁工艺。从前，制药清洁工艺的设计主要着眼于将药力或毒性最强的活性药物成分（API，Active Pharmaceutical Ingredients）的残留量降到允许限值（MAC，Maximum Allowable Carryover）以下。美国食品药物管理局（FDA）和医药界的专家们强调风险和工艺管控，以及对验证清洁工艺的充分了解。企业在设计验证清洁工艺时，越来越重视完全可清洁性和主污物识别等概念。1在传统的完全可清洁性（Cleanability）分析中，人们将各种潜在污物分开，在最差清洁条件（如浓度、温度等条件）下按照清洁所需时间对所有污物进行排序。然后用清洁所需时间来确定主污物，优化清洁工艺以减少主污物残留量。传统方法假定，在清除主污物的同时，所有其它污物都能被更彻底地清除掉。在传统的可清洁性分析中，人们把视觉清洁度当做定性度量，用目视来排序2。传统分析受限于时间和资源，无法提供足够的取样频率，排序依赖于视觉等主观因素。为了克服上述缺点，我们设计出了全新的可清洁性研究，用Sievers® M9总有机碳（TOC）分析仪来模拟清洁周期中的设备冲洗，对污物进行可清洁性定量排序。此方法能够更好地识别主污物，帮助企业进行定量分析，设计出行之有效的清洁工艺。对污物进行实时可清洁性分析在分析中，我们采用Sievers® M9 TOC分析仪的Turbo在线运行模式，用低流量取样模块来分析一系列具有代表性的制药污物。Sievers M9的Turbo模式可以进行近乎实时的数据采集，每4秒钟进行一次TOC测量。有了这一独创功能，Sievers M9分析仪能够在清洁设备的同时分析冲洗结果。当此功能同低流量取样模块一起使用时，分析仪能够在最终冲洗量或流量受限的情况下分析冲洗结果。Sievers M9分析仪的标准“集成在线取样系统（iOS，Integrated On-Line Sampling）”的最小流量为30 mL/分钟，低流量取样模块的最小流量为3 mL/分钟。在可清洁性分析中，我们采取以下全新的操作：1用Turbo模式实时测量TOC和电导率，以表征各种污物的冲洗情况。2根据拖尾因子（TF，Tailing Factor）而非简单的冲洗时间来对污物排序。在传统上，拖尾因子属于色谱参数，用于量化分析物同柱子固定相之间造成峰形干扰的相互作用。在可清洁性分析中，我们将拖尾因子用于TOC测量，来识别主污物、优化清洁工艺（见图1）。图1：样品色谱图中显示拖尾因子的排序点方法为了模拟对沾有污物的制药设备的冲洗，Sievers M9便携式TOC分析仪配置了一个6端口和2位阀，和预先沾有污物的2毫升不锈钢样品线圈（见图2a和2b）。将高效液相（HPLC，High Performance Liquid Chromatography）泵连接到阀，将超纯水（UPW，Ultra Pure Water）通过沾有污物的样品线圈泵入M9分析仪进行测量。先将阀旋转到旁路位置（见图2a），使超纯水不流经样品线圈，直接进入M9分析仪的取样模块，以获得超纯水的基线测量值。当超纯水的基线读数稳定后，将阀旋转到运行位置（见图2b），使超纯水流经样品线圈进入分析仪。然后用Turbo模式下的Sievers M9分析仪测量TOC和电导率，得出每种污物的可清洁性结果。图2a：阀的旁路位置 ｜ 图2b：阀的运行位置用此方法分析以下化合物：淀粉乳糖布洛芬牛血清白蛋白（BSA）血红蛋白乙醇（EtOH）结果图3和图4分别显示了测试的6种化合物的实时低流量可清洁性TOC和电导率值。图4中右上角的放大部分是低浓度电导率曲线。根据TOC拖尾因子，从最差到最好可清洁性的污物排序如表1所示。图3：Sievers M9分析仪在Turbo模式下测得的TOC图4：Sievers M9分析仪在Turbo模式下测得的电导率表1：根据拖尾因子排列污物分析结果显示，在测试的6种污物中，清洁性最差的主污物是血红蛋白（见表1）。如果采用传统的清洁工艺设计，会将布洛芬设别为毒性或药力最强的污物，会围绕着减少或清除布洛芬来设计清洁工艺，而忽略其它种污物的存在。分析表明，在测试的所有污物中，布洛芬最容易清除。如果采用传统的清洁工艺设计，就无法将其它污物降至最低水平，因而很难通过工艺验证。结论随着美国食品药品管理局和制药界专家越来越重视对工艺的充分控制和了解，将污物的可清洁性纳入清洁工艺设计的考虑之中就变成重中之重。通过可清洁性分析来识别主污物，决定了到能否设计出强有力的、行之有效的清洁工艺。在可清洁性分析中采用TOC测量等非专属方法，能够有效地定量识别清洁性最差的主污物。在用非专属方法进行清洁验证和确认时，还可以通过监测活性药物成分、清洁剂、降解物、赋形剂、以及其它污染物来控制和了解工艺。高效液相（HPLC）等特定方法只能提供单一活性药物成分或特定分析物的信息，无法提供清洁工艺的全面信息。此项分析展示了成功地使用Turbo模式下的Sievers M9 TOC分析仪以低流量和在线运行模式来实时测量TOC和电导率，实时分析污物的可清洁性。此项分析还将拖尾因子应用到污物排序，成功地设别出清洁性最差的主污物。Sievers分析仪系列产品为您的清洁应用需求，提供完整的TOC分析解决方案。参考文献“Guidance for Industry. Process Validation: General Principles and Practices.” U.S. FDA Pharmaceutical Quality/Manufacturing Standards (CGMP), fda.gov, www.fda.gov/downloads/drugs/guidances/ucm070336.pdf. Accessed 15 May 2018.Jordan, Kelly, et al. “Cleanability of Pharmaceutical Soils from Different Materials of Construction.” Pharmaceutical Technology, vol. 38, no. 7, 2 July 2014, www.pharmtech.com/cleanability-pharmaceutical-soils-different-materials-construction. Accessed 15 May 2018.◆ ◆ ◆联系我们，了解更多！

p 　　近日，中国质检总局和中国国家标准委员会发布了推荐性国家标准GB/T《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》，标准号：GB/T 27417-2017，并将于2018年4月1日实施。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/90f06d57-8312-40d8-aaaa-84e086a1fdc6.jpg" title=" 微信图片_20180402161900.jpg" / /p p 　　随着科学技术的进步和国际贸易的发展，国内外对实验室化学分析方法和检测数据的质量提出了更高要求。目前，国外已经发布了一些关于化学分析方法的确认规范，但我国尚未发布关于化学分析实验室方法确认和验证的标准和指南性文件，在实验室的实际检测工作中，经常遇到现行的检测标准无法与快速发展的检测手段相适应的情况。为了提供更准确、高效率的检测服务，实验室往往需要采用自己制定或改进的检测方法，特别在化学分析领域，越来越多的实验室使用标准以外的检测方法，但如何确保这些检测方法的适宜性和可靠性，一直存在争议。为此，我国出台了该标准，是实验室对化学分析方法进行确认和方法验证的指南性文件，旨在提高实验室化学分析方法和检测数据的质量，确保化学分析实验室所提供数据的有效性、公正性和可靠性。 /p p 　　小编对该规范进行了初步总结，以帮助大家快速阅读和了解该《化学分析方法确认和验证指南》，以下是该标准的精简介绍和分析。 /p p 　　该国标共有6个章节，分别是范围、引用文件、定义、方法确认要求、方法特性参数的确认、方法验证要求。另外，该国标还有3个附录，分别是方法回收率偏差范围、实验室内变异系数、重复性和再现性自由度对照表。 /p p 　 strong 　1 范围 /strong /p p 　　本标准给出了实验室对化学分析方法确认和方法验证的一般性原则，并指出适用于实验室对非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围使用的标准方法以及实验室对新引入的分析方法在正式使用前的方法验证。 /p p 　 strong 　2 规范性引用文件 /strong /p p 　　参考了ISO/IEC 指南99:2007国际计量学词汇-基本和通用概念及相关术语等文件。 /p p 　 strong 　3 术语和定义 /strong /p p 　　本部分对常见的术语进行了定义，包括：方法确认、方法验证、实验室内方法确认、实验室间方法确认、定性方法、定量方法、确证方法、筛选方法、容许限、检出限、定量限、精密度、灵敏度、测量区间、自由度、准确度等。 /p p 　　需要注意的是，该部分中“方法确认”对应的英文是“method validation”，而“方法验证”对应的英文是“method verification”，大家在阅读时还应注意这些和行业内的常见定义是否有区别。 /p p 　　 strong 4 方法确认要求 /strong /p p 　　4.1 总则 /p p 　　实验室应对非标准方法、实验室制定方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法的确认制定程序。对于确认过的方法，实验室应制定作业指导书。 /p p 　　4.2 确认方法的特定参数 /p p 　　实验室可在综合考虑成本、风险和技术可行性基础上，并根据预期的用途来进行方法确认。实验室进行方法确认的内容应完整，包括但不限于以下方法特性： /p p 　　a)方法的选择性 /p p 　　b)方法适用范围 /p p 　　c)检出限和/或定量限 /p p 　　d)测量范围和/或线性范围 /p p 　　e)精密度(重复性和/或再现性) /p p 　　f)稳健度 /p p 　　g)正确度 /p p 　　h)准确度 (注：测量结果的准确度由正确度和精密度两个指标进行表征。) /p p 　　i)灵敏度 /p p 　　j)结果的测量不确定度。 /p p 　　4.3 确认方法特性参数的选择 /p p 　　4.3.1 方法确认的典型特性参数 /p p 　　方法确认首先应明确检测对象特定的需求，包括样品的特性、数量等，并应满足客户的特殊需要，同时应根据方法的预定用途，选择需要确认的方法特征参数。 /p p 　 strong 　典型方法确认参数的选择，参见表1： /strong /p p /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/3119a4e9-8c5a-4d05-b53b-20cafe2878bb.jpg" title=" 2018-04-02_162010.jpg" / /p p 　　4.3.2 实验室内方法确认 /p p 　　通常情况下，需要确认的技术参数包括方法的选择性、检出限、定量限、线性范围、正确度、精密度和稳健度等。 /p p 　　4.3.3 实验室间方法确认 /p p 　　通常情况下，对于定性方法，至少应确认方法的检出限和选择性 对于定量方法，至少应确认方法的适用对象、线性范围、定量限和精密度。 /p p 　 strong 　5 方法特性参数的确认 /strong /p p 　　5.1 选择性 /p p 　　分析方法应具有一定的选择性。 /p p 　　5.2 测量范围 /p p 　　方法的测量范围通常应满足以下条件： /p p 　　a)方法的测量范围应覆盖方法的最低浓度水平(定量限)和关注浓度水平。 /p p 　　b)至少需要确认方法测量范围的最低浓度水平(定量限)、关注浓度水平和最高浓度水平的正确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平。 /p p 　　c)若方法的测量范围呈线性，还应满足5.3条款的要求。 /p p 　　5.3 线性范围 /p p 　　线性范围应尽量满足如下标准： /p p 　　a)采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点(包括空白)，浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多 对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98 对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99。 /p p 　　b)校准用的标准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围并能覆盖该范围...... /p p 　　c)浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%~150%，如需做空白时，则应覆盖关注浓度的0%~150%。 /p p 　　d)应充分考虑可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。 /p p 　　5.4 检出限和定量限 /p p 　　5.4.1 需要评估检出限(LOD)和定量限(LOQ)的情况 /p p 　　通常情况下，只有当目标分析物的含量接近于“零”的情况下或者检测浓度接近检出限和定量限时，才需要确定方法的LOD或LOQ。 /p p 　　5.4.2 检出限(LOD) /p p 　　对于多数现代分析方法来说，LOD可分为两个部分，即仪器检出限(IDL)和分析方法检出限(MDL)。应注意两者的区别，在该国标中指出：使用信噪比可用来考察仪器性能，但不适用于评估方法的检出限。 /p p 　　确定检出限的方法： /p p 　　在该国标中提到了多种确定检出限的方法，包括： /p p 　　a)目视评价法评估LOD /p p 　　目视评价法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约7次独立测试，通过绘制阳性(或阴性)结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阈值浓度。该方法也可用于定性方法中检出限的确定。 /p p 　　b)空白标准偏差法评估LOD /p p 　　即通过分析大量的样品空白或加入最低可接受浓度的样品空白来确定LOD。独立测试的次数应不少于10次(n≥10)，计算出检测结果的标准偏差，具体的计算方法可参考该国标。 /p p 　　5.4.3 定量限(LOQ) /p p 　　与检出限相类似，定量限也分为仪器定量限和分析方法定量限。 /p p 　　5.5 正确度 /p p 　　测量结果的正确度用于表述无穷多次重复性测定结果的平均值与参考值之间的接近程度，测量结果的偏倚则通过回收率实验进行评估。 /p p 　　5.6 精密度 /p p 　　该国标中对精密度的描述分别从重复性、再现性两个维度进行描述。 /p p 　　5.7 稳健度 /p p 　　稳健度可通过由实验室引入预先设计好的微小的合理变化因素，并分析其影响而得出。可对样品进行预处理、净化、分析等可能影响检测结果的方面进行预实验，并分析可能影响结果的因素，必要时进行正交试验设计进行稳健度试验。 /p p 　　5.8 测量不确定度 /p p 　　该国标中列举了可能影响不确定度的多方面因素，并对测量不确定度评估时的考虑要点进行了介绍。 /p p 　 strong 　6 方法验证要求 /strong /p p 　　对分析方法的验证提出总体要求，包括定量分析和定性分析。在验证总则中提到，当化学分析实验室引入标准方法时，实验室应根据该国标的相应要求进行验证，即证实该方法能在该实验室现有的设施设备、人员、环境等条件下获得令人满意的结果。 /p p 　　说明：本文仅是对国标《合格评定 分析方法确认和验证指南》GB/T 27417-2017 的部分节选和介绍，仅供参考，若需获得更多准确内容还请查看国标原文。 /p

p style=" TEXT-ALIGN: center" img title=" e18a02a4ee114f8587a06d772e9631e0.jpg" style=" HEIGHT: 233px WIDTH: 600px" border=" 0" hspace=" 0" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/noimg/17b815ba-7f23-4cf0-b8ce-436f507b17c2.jpg" width=" 600" height=" 233" / /p p 　　近日，国标GB/T 27417-2017《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》发布，并将于2018年4月1日实施。 /p p 　　笔者对该规范进行了初步总结，以帮助大家快速阅读和了解该《化学分析方法确认和验证指南》，以下是该标准的精简介绍和分析。 /p p 　　该国标共有6个章节，分别是范围、引用文件、定义、方法确认要求、方法特性参数的确认、方法验证要求。另外，该国标还有3个附录，分别是方法回收率偏差范围、实验室内变异系数、重复性和再现性自由度对照表。 /p p 　　1 范围 /p p 　　本标准给出了实验室对化学分析方法确认和方法验证的一般性原则，并指出适用于实验室对非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围使用的标准方法以及实验室对新引入的分析方法在正式使用前的方法验证。 /p p 　　2 规范性引用文件 /p p 　　参考了ISO/IEC 指南99:2007国际计量学词汇-基本和通用概念及相关术语等文件。 /p p 　　3 术语和定义 /p p 　　本部分对常见的术语进行了定义，包括：方法确认、方法验证、实验室内方法确认、实验室间方法确认、定性方法、定量方法、确证方法、筛选方法、容许限、检出限、定量限、精密度、灵敏度、测量区间、自由度、准确度等。 /p p 　　需要注意的是，该部分中“方法确认”对应的英文是“method validation”，而“方法验证”对应的英文是“method verification”，大家在阅读时还应注意这些和行业内的常见定义是否有区别。 /p p 　　4 方法确认要求 /p p 　　4.1 总则 /p p 　　实验室应对非标准方法、实验室制定方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法的确认制定程序。对于确认过的方法，实验室应制定作业指导书。 /p p 　　4.2 确认方法的特定参数 /p p 　　实验室可在综合考虑成本、风险和技术可行性基础上，并根据预期的用途来进行方法确认。实验室进行方法确认的内容应完整，包括但不限于以下方法特性： /p p 　　a) 方法的选择性 /p p 　　b) 方法适用范围 /p p 　　c) 检出限和/或定量限 /p p 　　d) 测量范围和/或线性范围 /p p 　　e) 精密度(重复性和/或再现性) /p p 　　f) 稳健度 /p p 　　g) 正确度 /p p 　　h) 准确度 (注：测量结果的准确度由正确度和精密度两个指标进行表征。) /p p 　　i) 灵敏度 /p p 　　j) 结果的测量不确定度。 /p p 　　4.3 确认方法特性参数的选择 /p p 　　4.3.1 方法确认的典型特性参数 /p p 　　方法确认首先应明确检测对象特定的需求，包括样品的特性、数量等，并应满足客户的特殊需要，同时应根据方法的预定用途，选择需要确认的方法特征参数。 /p p 　　典型方法确认参数的选择，参见表1： /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img title=" 44f8b9ebd5c342089c46239f71844a99.jpg" style=" HEIGHT: 273px WIDTH: 600px" border=" 0" hspace=" 0" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/noimg/69b7e8f2-6adc-4800-9c2d-8ec84ea54953.jpg" width=" 600" height=" 273" / /p p 　　4.3.2 实验室内方法确认 /p p 　　通常情况下，需要确认的技术参数包括方法的选择性、检出限、定量限、线性范围、正确度、精密度和稳健度等。 /p p 　　4.3.3 实验室间方法确认 /p p 　　通常情况下，对于定性方法，至少应确认方法的检出限和选择性 对于定量方法，至少应确认方法的适用对象、线性范围、定量限和精密度。 /p p 　　5 方法特性参数的确认 /p p 　　5.1 选择性 /p p 　　分析方法应具有一定的选择性。 /p p 　　5.2 测量范围 /p p 　　方法的测量范围通常应满足以下条件： /p p 　　a) 方法的测量范围应覆盖方法的最低浓度水平(定量限)和关注浓度水平 /p p 　　b) 至少需要确认方法测量范围的最低浓度水平(定量限)、关注浓度水平和最高浓度水平的正确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平。 /p p 　　c) 若方法的测量范围呈线性，还应满足5.3条款的要求。 /p p 　　5.3 线性范围 /p p 　　线性范围应尽量满足如下标准： /p p 　　a) 采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点(包括空白)，浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多 对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98 对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99. /p p 　　b) 校准用的标准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围并能覆盖该范围… /p p 　　c) 浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%~150%，如需做空白时，则应覆盖关注浓度的0%~150%。 /p p 　　d) 应充分考虑可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。 /p p 　　5.4 检出限和定量限 /p p 　　5.4.1 需要评估检出限(LOD)和定量限(LOQ)的情况 /p p 　　通常情况下，只有当目标分析物的含量接近于“零”的情况下或者检测浓度接近检出限和定量限时，才需要确定方法的LOD或LOQ。 /p p 　　5.4.2 检出限(LOD) /p p 　　对于多数现代分析方法来说，LOD可分为两个部分，即仪器检出限(IDL)和分析方法检出限(MDL)。应注意两者的区别，在该国标中指出：使用信噪比可用来考察仪器性能，但不适用于评估方法的检出限。 /p p 　　确定检出限的方法： /p p 　　在该国标中提到了多种确定检出限的方法，包括： /p p 　　a) 目视评价法评估LOD /p p 　　目视评价法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约7次独立测试，通过绘制阳性(或阴性)结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阈值浓度。该方法也可用于定性方法中检出限的确定。 /p p 　　b) 空白标准偏差法评估LOD /p p 　　即通过分析大量的样品空白或加入最低可接受浓度的样品空白来确定LOD。独立测试的次数应不少于10次(n≥10)，计算出检测结果的标准偏差，具体的计算方法可参考该国标。 /p p 　　5.4.3 定量限(LOQ) /p p 　　与检出限相类似，定量限也分为仪器定量限和分析方法定量限。 /p p 　　5.5 正确度 /p p 　　测量结果的正确度用于表述无穷多次重复性测定结果的平均值与参考值之间的接近程度，测量结果的偏倚则通过回收率实验进行评估。 /p p 　　5.6 精密度 /p p 　　该国标中对精密度的描述分别从重复性、再现性两个维度进行描述。 /p p 　　5.7 稳健度 /p p 　　稳健度可通过由实验室引入预先设计好的微小的合理变化因素，并分析其影响而得出。可对样品进行预处理、净化、分析等可能影响检测结果的方面进行预实验，并分析可能影响结果的因素，必要时进行正交试验设计进行稳健度试验。 /p p 　　5.8 测量不确定度 /p p 　　该国标中列举了可能影响不确定度的多方面因素，并对测量不确定度评估时的考虑要点进行了介绍。 /p p 　　6 方法验证要求 /p p 　　对分析方法的验证提出总体要求，包括定量分析和定性分析。在验证总则中提到，当化学分析实验室引入标准方法时，实验室应根据该国标的相应要求进行验证，即证实该方法能在该实验室现有的设施设备、人员、环境等条件下获得令人满意的结果。 /p

2014年9月26日国家标准化管理委员会发布的2014年第一批国家标准制修订计划通知中，将《车用汽油中总硅含量的测定 电感耦合等离子体发射光谱法》、《电感耦合等离子体发射光谱法测定汽油中的氯和硅》列入了计划。 我国国家标准与石油化工行业标准中均无汽油中硅含量的测定方法。然而，在汽油的实际使用中，硅元素的含量多少对于汽车的行驶与养护有着关键的影响。车用汽油中硅含量过高会导致汽油火花塞堵塞、三元催化转化器中催化剂中毒等现象发生，对汽车本身性能造成较大的损害。 ICP-OES用于汽油等有机样品的检测一直存在着一些难点。基于油品的易挥发性及高度不稳定性，油品的前处理技术目前在国际上均没有很好的解决方案，传统的消解方式会改变甚至破坏油品本身的属性，这就要求在测定油品中的相关元素含量时必须做到油品直接进才能确保测量的准确性和真实性。但是，在ICP-OES汽油样品直接进样分析过程中，由于矩管、进样积炭堵塞引起进入等离子体气溶胶量的变化，使得分析线强度大大降低，随着分析时间的推移，这种现象会越来越严重，以至分析无法连续进行，也无法保证结果准确性，在积炭严重时甚至会引起等离子体意外熄灭。 为了满足汽油样品中硅元素的检测需求，聚光科技发布了ICP-5000应用于检测汽油中硅元素含量的解决方案——自主研发的全谱直读电感耦合等离子体发射光谱仪ICP-5000结合有机物直接进样系统；该方案的优势是无需对汽油样品进行复杂的前处理，直接通过有机进样系统进样测定；并且有机物直接进样系统之后，样品对进样系统的矩管和中心管不会产生积碳影响，影响进样系统的使用寿命。该方案提高了有机样品检测结果的准确性的同时保证了进样系统的部件和仪器的正常使用寿命。 有机物直接进样系统是通过氧气与有机物中高含量的碳的相互作用，消除了进样积碳对仪器持续运行的影响；针对挥发性大的有机物(如醚类、醇类)，设计有恒温装置，保证了挥发性有机物的进样稳定性，实现了有机物样品直接进样的多元素分析方法。采用该有机物直接进样系统，不仅可提高分析检测限，降低背景信号的干扰，同时可以避免复杂的样品前处理过程对检测结果的影响，实现了真正意义上的直接进样分析。 ICP-5000 电感耦合等离子体发射光谱仪用于石油化工行业油品检测的六大优势：1、样品溶于有机溶剂后（简单稀释）直接进样，避免有机样品前处理过程的影响，有效的提高分析检测灵敏度和准确度，分析测试结果更加精准；2、四路气体均由质量流量器控制，等离子体更加稳定，提高测试结果的精密度和稳定性；3、可实现有机样品中多元素同时检测，且分析速度快；4、操作简单、快速、易于实现自动化。5、无需特制的炬管和中心管，使用维护成本低；6、具有加氧和恒温装置，有效防止积碳和拓展应用范围聚光科技除了推出汽油中的硅检测方案之外，目前还推出了食用油，润滑油，机油等样品的分析测试方案，全面关注化工企业、炼油厂、质检机构、食品加工企业等的应用。 链接请见：ICP-5000测定油品中Si含量ICP-5000测定食用油中12种金属元素含量ICP-5000测定方便面油包中的金属元素ICP-5000测定土壤中十种金属元素 聚光科技 聚光科技（杭州）股份有限公司是由归国留学人员创办的高新技术企业, 2002年1月注册成立于浙江省杭州市国家高新技术产业开发区， 2009年完成股份制改造，2011年4月上市，注册资金4.45亿元人民币，是世界领先的环境与安全分析检测仪器生产商与系统解决方案供应商。公司拥有国际一流的研发、营销、应用服务和供应链团队，致力于业界最前沿的各种分析检测技术研究与应用开发，产品广泛应用于环保、冶金、石化、化工、能源、食品、农业、交通、水利、建筑、制药、酿造、航空及科学研究等众多行业，并出口到美、日、英、俄罗斯等二十多个国家和地区。网址：www.fpi-inc.com

继全自动毛细管Western Blot助力Merck公司全球首个预防埃博拉病毒病的商品化疫苗ERVEBO上市后，近日，Merck公司疫苗分析研究进展与疫苗工艺开发部门再发文章：利用还原全自动毛细管Western Blot技术，定量人巨细胞病毒疫苗多种抗原水平，同时利用非还原的方法表征抗原蛋白额外二硫键和MW信息（多聚体抗原水平）。同时Merck公司还利用此方法确定了一些HCMV病毒中以前未知的生化特征：非还原条件中，病毒表面蛋白的三重gH峰，这可能会为HCMV病毒抗原的特异性测试提供一种新的策略。1人类巨细胞病毒人类巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus, HCMV)，属于β疱疹病毒亚科。根据地域的不同，世界上50%到90%的成年人口曾感染过HCMV。尽管感染HCMV很少会在健康成人中引起症状，但它却是引起移植受者器官衰竭的主要原因。同时感染HCMV会对人类整个生命周期的健康造成威胁：对先天性感染的儿童造成神经系统异常；对免疫抑制患者（移植病患或者免疫缺陷疾病AIDS患者）出现较高的发病率和死亡率；同时还会增加老年人死亡率、心血管疾病和癌症的风险。2人类巨细胞病毒结构HCMV具有一个二十面体衣壳，其中包含双链DNA，编码165种蛋白质。衣壳被蛋白质包膜包围，外部被一个脂质包膜包围，其糖蛋白通过与细胞膜融合进入宿主细胞。融合后，DNA和被膜蛋白被释放到细胞中。该病毒包含不同类型的糖蛋白复合物(glycoprotein complexes, gC)，用于感染宿主细胞：gC-I是由糖蛋白B(glycoprotein B, gB)的同源三聚体组成的复合物，糖蛋白B(gB)是一种泛疱疹病毒科保守的糖蛋白，介导膜融合过程：即介导病毒进入细胞期间从融合前的构象重新排列为融合后的构象；gC-II是含量最丰富的gC，由糖蛋白M（glycoprotein M, gM）和N（glycoprotein N, gN）组成，有助于与细胞膜的初始结合，并在病毒复制中起作用；gC-III，现在称为三聚体复合物(Trimer complex, TC)，是一种异源三聚体复合物，其中糖蛋白H(glycoprotein H, gH)、L(glycoprotein L, gL)和O(glycoprotein O, gO)连接在一起，gH和gL参与激活gB的融合活性，gO作为共同受体。还有一种五聚体复合物（Pentameric complex, PC）由gH/gL与UL128、UL130和UL131蛋白（pUL128–pUL131）组成，主要感染上皮细胞和内皮细胞，有研究发现这种五聚体复合物（PC）对于引发保护性体液免疫反应很重要，在自然感染中占85%的中和活性。3全球HCMV疫苗临床实验进展4全自动毛细管Western Blot定量HCMV减毒活疫苗抗原全自动毛细管Western Blot：基于毛细管电泳的免疫学检测方法，只需3μL样本，一次性加好样本和反应试剂（blocking液、一抗、二抗、显色液、洗液），开始上机实验，仪器自动上胶、加样、跑胶、紫外交联蛋白、一抗二抗孵育、显色定量，CCD相机直接获取化学信号，不出3小时直接获得24个样本定量结果。此过程除手动加样后，无需任何手动操作，数据稳定重现性佳（Merck结果CV10%：见文章：全自动毛细管Western Blot助力全球首款埃博拉疫苗ERVEBO上市）。Merck公司正在进行的减毒活病毒HCMV疫苗（V160）的II期临床试验中，在减毒活AD169病毒株表面恢复了五聚体复合物。因此重建的HCMV病毒含有多种表面糖蛋白：五聚体gH/gL/gUL128-131复合物、三聚体gH/gL/gO复合物、gB糖蛋白和gM/gN异二聚体复合物。因此Merck公司利用全自动毛细管Western Blot定量的方法，监测在疫苗开发过程中的多种病毒表面抗原。还原毛细管Western Blot法鉴定9种抗原蛋白在无(-)和有(+)PNG-F酶处理的情况下，还原毛细管Western Blot法鉴定HCMV中的9种糖蛋白：gH、gL、UL128、UL130、UL131、gO、gB、gM和gN。原始峰形图（PNG-F酶处理前为蓝色峰，PNG-F酶处理后绿色峰）显示，PNG-F处理后的MW shift 取决于每个糖蛋白上有多少N-连接的聚糖位点。N-连接的聚糖位点越多，偏移越大。例如有18个N-连接的聚糖位点的gO（偏移很大）和不含N-聚糖位点UL128（两峰趋近一致）。非还原毛细管Western Blot法鉴定不同聚体复合物毛细管Western Blot可以提供特定病毒抗原的额外二硫键和MW信息。例如用非还原毛细管Western Blot检测发现，用抗gH抗体观察到~90kDa、~120kDa和~205kDa的三重峰。当使用抗gL抗体时，仅观察到120kDa和205kDa处的两个峰。当用抗UL128和抗gO抗体探测时，分别检测到120 kDa和205kDa处的峰。这些数据明确表明，120kDa处的峰分配是由于gH-gL-UL128复合物，它是五聚体复合物(gH-gL-UL128-UL130-UL131)的一部分，其中UL130和UL131是非共价结合的。在205kDa处观察到的峰被确认为gH-gL-gO三聚体复合物。在原始峰形图上观察到的三联体的gH峰，并不是HCMV疫苗病毒(V160)独有的，因为两个临床分离株的HCMV也显示了三联体的gH峰。因为AD169病毒株没有五聚体复合物(gH-gL-UL128-UL130-UL131)，所以不显示~120kDa的峰。同时结果也表明V160中gH单体(~90 kDa)和gH-gL-gO三聚体复合物(~205 kDa)的相对ratio与亲本病毒AD169相当。用抗gM和gN抗体检测到，在~138kDa 和236kDa处具有相同的两个峰：138kDa峰可能是实际的gM/gN复合物，而236kDa为二聚体(gM/gN)2。毛细管Western Blot监测疫苗发酵工艺利用特异性的三重gH峰面积可用于评估发酵过程中对五聚gH复合物的潜在影响。对九个开发批次的V160中，对五聚体gH复合物百分比进行了比较。第1至第4批是在工艺优化之前生产的，与工艺优化后生产的第5至第9批相比，其gH-gL-UL128（五聚体复合物）含量较低。同时毛细管Western Blot结果表明，五聚体的产量在感染后11-13天开始趋于稳定。此外与生物反应器3和4相比，生物反应器1和2提供了更好的五聚体表达。这一观察结果与微流式细胞仪测量的病毒颗粒浓度相吻合。毛细管Western Blot绝对定量五聚体抗原毛细管Western Blot绝对定量法的线性、R2、精密度、准确度如图所示，揭示了毛细管Western Blot绝对定量法可以用于定量HCMV的糖蛋白。用重组五聚体蛋白作为标准品，利用毛细管Western Blot绝对定量法绘制标准曲线（图A-C），用此方法定量疫苗样本中的五聚体抗原（图D）。与Elisa法定量疫苗样本中的五聚体抗原相关性R2=0.9941.结论：利用毛细管Western Blot方法检测抗原蛋白，不需要纯化样品，因此该方法适用于分析多种样品类型中的目标蛋白，例如来自感染细胞培养物的上清液、纯化中间体、浓缩液和最终疫苗产品。同时此方法不只可以定量抗原蛋白，还可以利用非还原的方法表征抗原蛋白额外二硫键和MW信息。在此方法中还确定了一些HCMV病毒中以前未知的生化特征：非还原条件中，病毒表面蛋白的三重gH峰，这可能会为HCMV病毒抗原的特异性测试提供一种新的策略。参考文献：1. Characterization of gH/gL/pUL128-131 pentameric complex, gH/gL/gO trimeric complex, gB and gM/gN glycoproteins in a human cytomegalovirus using automated capillary western blots, Vaccine. 2021 Jul 3.2. Cytomegalovirus as an immunomodulator across the lifespan, Curr Opin Virol. 2020 Oct.3. Development of a Vaccine against Human Cytomegalovirus: Advances, Barriers, and Implications for the Clinical Practice, Vaccines (Basel). 2021 May 25.

高灵敏度分析 草甘膦和草铵膦是广泛使用的叶面除草剂中的活性成分。近年来，草甘膦的产量和销售额一直占据世界除草剂品种的前列。当在土壤和水中降解时，草甘膦会产生代谢产物氨甲基膦酸 (AMPA)。 各国标准对于农产品中草甘膦的最大残留限量大多介于0.05mg/kg-50mg/kg之间。如GB2763-2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定，草甘膦在不同食品中的最大残留限量从0.05mg/kg-7mg/kg不等。 一直以来，高极性农药的检测都是液质分析的难点之一。草甘膦、草铵膦和AMPA都是高极性化合物，很难在反相模式下使用液相或液质进行分析。因此，对于草甘膦的液质分析通常采取FMOC衍生化的方法。本文[1]介绍了一种无需复杂预处理或耗时衍生化的草甘膦、草铵膦和AMPA的高灵敏度直接分析方法。 01样品前处理 本方法基于欧盟制定的食品中高极性农药快速分析方法（QuPPe），使用含有甲酸的甲醇：水 (50：50) 作为最终提取溶剂。将1g均质大米样品称入 50 mL离心管中，加入9 mL水和100 μL混标溶液，然后将样品静置15 min。之后，加入10 mL含有1%甲酸的甲醇，振摇1min。加入1 mL 10% EDTA水溶液，在振荡器上混合15min并离心。取上清液用0.22 μm尼龙滤膜过滤，取2mL滤液转移到含有2mL乙腈的试管中，涡旋1分钟，使用3 kDa的超滤管离心并将滤液转移至聚丙烯塑料瓶中。02色谱图 2.5ng/mL混标样品在纯溶剂(a)和大米基质(b)中的MRM色谱图 从左到右分别为0.5、1.0和2.5ng/mL样品的MRM色谱图（上：AMPA、中：草铵膦、下：草甘膦）利用岛津三重四极杆液质联用仪，基于QuPPe的样品前处理方法，无需衍生化、直接进样定量分析大米基质中的草甘膦、草铵膦和 AMPA。并对线性、准确度、精密度、基质效应和回收率等方法学进行了考察，结果良好。 03高极性农药分析的小诀窍 1、选用HILIC或混合模式色谱柱以获得良好峰形，可参考欧盟QuPPe方法中推荐的色谱柱型号。2、为避免高极性化合物被玻璃瓶吸附，建议使用聚丙烯塑料材质的样品瓶、离心管等用于样品和标准品的制备和储存。3、高极性化合物可能会吸附在金属表面，LC自动进样器和色谱柱之间的不锈钢管路用 PEEK材质管路替换。推荐使用Nexera XS inert生物惰性液相系统作为质谱前端。 Nexera XS inert生物惰性液相系统本文中涉及的分析仪器：三重四极杆液相色谱质谱联用仪LCMS-8060NX请访问以下链接，了解更多信息https://www.shimadzu.com.cn/an/lcms/lcms-8060nx/index.html 04其他相关应用 LCMS-8050直接分析饮料中草甘膦 复制链接前往查看：https://www.an.shimadzu.com/direct_analysis_of_glyphosate_glufosinate_and_ampa_in_beverages_using_a_tq_lcmsms.html LCMS-8060 在线衍生化分析啤酒中草甘膦 复制链接前往查看：https://www.an.shimadzu.com/glyphosate_glufosinate_and_ampa__uhplcmsms.html 参考文献：1.Zhe Sun and Zhaoqi Zhan, Quantitative Determination of Residual Glufosinate, Glyphosate and AMPA in Rice Matrix by Direct LC-MS/MS Method，Shimadzu Application News 本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。

中技国际招标有限公司受国家科技基础条件平台中心委托，根据《中华人民共和国政府采购法》等有关规定，现对重大科研基础设施和大型科研仪器国家网络管理平台建设运维及与管理单位在线服务平台系统对接进行公开招标，欢迎合格的供应商前来投标。　　项目名称：重大科研基础设施和大型科研仪器国家网络管理平台建设运维及与管理单位在线服务平台系统对接　　项目编号：0701-164000050022　　项目联系方式：　　项目联系人：李青　　项目联系电话：010-63348567　　采购人联系方式：　　采购人：国家科技基础条件平台中心　　地址：北京市海淀区复兴路乙15号　　联系方式：王祎， 010-58881469　　代理机构联系方式：　　代理机构：中技国际招标有限公司　　代理机构联系人：李青，010-63348567　　代理机构地址： 北京市丰台区西三环中路90号通用技术大厦　　一、招标项目性质、用途、数量、简要技术要求或者招标项目的性质：　　重大科研基础设施和大型科研仪器国家网络管理平台建设运维及与管理单位在线服务平台系统对接是落实并推进《国务院关于国家重大科研基础设施和大型科研仪器向社会开放的意见》(国发〔2014〕70号)(以下简称《意见》)的关键环节。其目标是：建成覆盖各类科研设施与仪器、统一规范、功能强大的专业化、网络化管理服务体系，推动科研设施与仪器开放共享制度、标准和机制更加健全，建设布局更加合理，开放水平显著提升，分散、重复、封闭、低效的问题基本解决，资源利用率进一步提高。　　本项目招标主要内容如下：　　(1)国家网络管理平台系统拓展建设与五大功能模块完善　　(2)国家网络管理平台与管理单位在线服务平台系统对接工作　　(3)国家网络管理平台元数据管理、质量审核及信息更新维护　　(4)国家网络管理平台系统运行维护　　(5)国家网络管理平台技术支持与培训　　(6)支撑国家科技主管部门的相关业务及管理工作　　二、供应商(或投标人)的资格要求：　　(1)投标人应具有独立承担民事责任的能力，须提供合法有效的企业法人营业执照复印件或事业单位法人证书复印件。(2)具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度，须提供基本开户银行出具的资信证明或上一年度财务审计报告复印件，包括资产负债表、利润表、现金流量表。如果是事业单位，可提供上一年度资产负债表和收入支出表等。经营状况不能出现亏损。(3)具有履行合同所必需的条件和专业技术能力，须提供相关合同关键页复印件等证明材料。(4)投标人须具有依法缴纳税收记录及社会保障资金的良好记录： 依法缴纳税收记录，投标人须提供开标前任意1个月的纳税证明材料，依法免税的应提供相应文件说明 社会保障资金的良好记录，投标人须提供开标前3个月内任意1个月依法缴纳社会保障资金的证明材料，证明材料可以是缴费的银行单据、公司所在社保机构开具的证明等复印件(自行编写无效)(依法不需要缴纳社会保障资金的应提供相应文件说明)。(5)近三年内，经营活动中没有重大违法记录的书面声明。重大违法记录是指供应商因违法经营受到刑事处罚或责令停产停业、吊销许可证或者执照、较大数额罚款等行政处罚。(6)本项目不接受联合体投标，不允许转包或分包。(7)按照招标公告要求购买了招标文件。(8)符合法律、行政法规规定的其它要求。　　三、招标文件的发售时间及地点等：　　预算金额：1000.0 万元(人民币)　　时间：2016年07月01日 09:00 至 2016年07月07日 16:00(双休日及法定节假日除外)　　地点：北京市丰台区西三环中路90号通用技术大厦一楼大厅东南侧标书室　　招标文件售价：￥600.0 元，本公告包含的招标文件售价总和　　招标文件获取方式：直接现场购买或邮寄　　四、投标截止时间：2016年07月22日 09:30　　五、开标时间：2016年07月22日 09:30　　六、开标地点：　　北京市丰台区西三环中路90号，通用技术大厦四层422会议室　　七、其它补充事宜　　无　　八、采购项目需要落实的政府采购政策：　　1.根据《政府采购促进中小企业发展暂行办法》规定，本项目投标人属于小型和微型企业的，评标时将对其投标价给予6%的扣除。监狱企业视同小型、微型企业。　　2 .供应商在本项目中体现节能减排和环境保护的，在评标中予以考虑。

气瓶阀门1. 阀门类型 根据GB15383《气瓶阀出气口连接形式和尺寸》中所要求，各种气体按性质分类，各分类气体所用气瓶阀门接口均有专门规定。表1为常见的气体组别和阀门连接方式。表1气体类别阀门连接方式不燃、无毒W21.8-14 、G5/8可燃、有毒G5/8 L、W21.8-14 L乙炔专用瓶阀，Φ5；专用接头注：W21.8-14 和G5/8为右旋螺纹；W21.8-14L 和 G5/8 L 为左旋螺纹。2. 阀门接口阀门接口的连接方式分为球面和平面两种。（点击查看大图）球面密封通过拧紧螺帽把气瓶接头的球面压紧在阀门接口的锥面上。其中，螺纹不起密封作用。密封效果取决于气瓶接头的球面与阀门接口内部的锥面接触的部分。对于平面密封的情况，垫片（或垫圈）的材质对气体兼容性和密封性能起到了很重要的作用。为了达到理想的密封效果，防止因垫片扭曲变形而产生漏气，建议每次更换气瓶时都要更换垫片。那么，是否用越大的力拧紧螺帽，密封效果越好呢？答案是不一定的。紧固螺帽的力如果超过一定的值，会破坏球面密封的接触面或平面密封的垫片，甚至导致阀门损坏，产生各种问题。从理论上来说，每种材质有对应的建议扭矩值。表2 球面密封建议扭矩值阀门材质接头材质建议扭矩值铜铜35-45 ft/lb铜不锈钢35-50 ft/lb不锈钢铜35-50 ft/lb不锈钢不锈钢35-60 ft/lb表3 平面密封建议扭矩值垫片材质建议扭矩值PTFE15-25 ft/lb铜35-45 ft/lb由于我们在日常操作中无法对扭矩有明确的掌握，所以建议每次更换气瓶时，如果用扳手紧固完阀门接口，在排除垫片过度变形、垫片划痕、密封面被污染等因素后，仍然发现有泄漏，建议联系供应商解决问题。减压阀的选型（本文仅针对小管道、低流量调压阀，不包括大宗气体供气调压阀）1. 减压阀的类型减压阀类型特点膜片式减压阀结构简单调节精度适中性价比高活塞式减压阀耐高压对调节压力不够敏感适用于需要较高出口压力的应用波纹管减压阀对压力敏感调压精确价格较高2. 减压阀的材质铜镀铬或黄铜：常用于纯度要求不高的工业气体和高流速氧气，具有价格优势。SS316L不锈钢：适用于高纯气体、超高纯气体、反应活性气体、腐蚀性气体、毒性气体。在选择减压阀材质时，必须确认材质与气体的兼容性，包括减压阀密封材料。3. 减压阀进出口气体压力要求进口气体压力，需根据气源压力考虑减压阀的压力等级。出口气体压力，选择合适范围，避免过大或过小。建议使用范围应选用全量程的 1/3 ～ 2/3 为宜。4. 减压阀出口气体压力稳定性要求由于减压阀自身的结构特点，在气体使用过程中，随着气源压力由高压变为低压，减压阀的出口气体压力会升高1-2bar左右。若气体使用点要求稳定的气体压力，建议安装二级减压阀，保持稳定的气体压力输出。5. 减压阀的流量选择要求如下图举例说明，当气体流量较低时，减压阀出口压力较稳定。一旦流量增加，出口压力便会降低。所以，我们可根据用气点对气体压力稳定性的不同要求，选择不同范围的流量。通过比较流量曲线来选择合适的减压阀。6. 一级减压阀、二级减压阀一级减压阀，为双表头，用于气瓶出口的高压气体调节。二级减压阀（使用点调压阀），为单表头。通过两级调压，可以使用气点压力更稳定。7. 双级减压阀两个调压阀阀体集成在一起，一级调压预设为中等压力，然后经二级减压后，出口压力非常稳定。常用于把减压阀直接连到钢瓶出口且需要很稳定的供气压力的场合。8. 恒流阀适用于1L、1.7L的一次性气瓶。管道连接（本文仅针对实验室气体小管道连接）1. NPT连接需要螺纹密封剂或四氟带（PTFE）起润滑和密封作用。泄漏率：10-1 to 10-2 (He, sccs)2. 卡套连接卡套接头靠螺母对双卡套挤压，使管道产生形变，前卡套形成主密封，后卡套对管道形成抓紧作用。泄漏率：10-3 to 10-5 (He, sccs)3. VCR连接两侧接头中间用金属垫片，拧紧螺帽使两侧接头向中间挤压，使垫片产生形变来密封。VCR连接应由专业人员操作，避免过度拧紧造成泄漏。泄漏率：10-9 (He, sccs)4. VCO连接通过O形圈压紧产生密封。泄漏率：10-8 (He, sccs)5. 软管连接将塑料/橡胶软管插入宝塔头，并用夹子固定。但由于塑料和橡胶材质本身具有渗透性，所以该种连接方式适合于对气体压力和纯度要求不高的应用。什么是泄漏率？如下图所示，以泄漏率为10-2(He, sccs)为例，其意为1.5分钟泄漏1毫升氦气。＋Q&A问减压阀贵的和便宜的有什么区别？材质、结构形式、供应商的差异等因素均会影响减压阀的价格。尤其是不同的供应商在品质控制方面都会有不同，包括对每一道工艺的控制、对原材料的检测、质量标准的不同、内表面处理、特殊处理（如电化学抛光，提高耐腐蚀性）、产品的质量检测、每个部件的去油脱脂清洗、售后服务、产品的安全性和可靠性等。这些环节都会造成无形的成本，使不同品牌减压阀的价格截然不同。当我们面对不同价格的减压阀时，主要看设备对气体的使用要求。如果您的设备非常昂贵，要求气体压力稳定可靠，建议选择品质好的减压阀，价格相对增加，但对设备具有更好的保护作用。反之，可选择较便宜的减压阀。不建议选择”三无“的减压阀，要保证安全。问为什么有些气体一定要使用不锈钢减压阀？不锈钢减压阀的特点是耐腐蚀、内表面光洁度高、可做特殊处理（如电化学抛光），用于反应活性、腐蚀性、毒性、高纯或超高纯气体。因为这些气体对杂质含量要求很高，若选择其他材质的减压阀，或有材质不兼容的问题，或由于其内表面粗糙，造成水、氧或颗粒等杂质附着在减压阀内表面，影响供气品质。

CAPCELL CORE系列 核-壳型液相色谱快速分析柱 适用于常规HPLC和超高效液相色谱的快速分析柱，传承了资生堂独有的高分子包被技术，并融合了全新几何设计的核-壳型填料。 快来申请试用CAPCELL CORE系列液相色谱柱吧（数量有限、欲试从速）！ 如果您对试用结果满意，购买色谱柱时不仅有机会以超低折扣价购买所试用的色谱柱，还有机会获得价值1000元人民币的礼品。资生堂液相色谱柱会员*不仅能够正常累计积分，更有1000积分赠送。 如果您对试用结果不满意，只需将色谱柱退还给我们，我们分文不取。 试用申请的提交时限2013-2-1至2013-4-30； 试用报告的提交时限2013-2-1至2013-5-31。 *资生堂液相色谱柱会员权益请看下方介绍 【活动细则】 1、您只需点击下面的链接，在留言栏中填写您所要分析的化合物名称，希望试用的色谱柱种类和规格，并留下您详细的联系方式，我们的营业人员会第一时间和您联系进行确认。 色谱柱试用申请留言板 2、我们研究所的分析工程师会根据您的要求，推荐给您最适合的色谱柱进行试用。 3、如果您对试用情况满意，只要您在帖子中回复试用报告（包括详细的样品、谱图和分析方法等），就能以6折的超低价格购买所试用的色谱柱；如果您对我们的服务或试用柱有任何不满，也请告诉我们，我们将竭尽全力完善我们的工作。 4、在购买色谱柱的用户中，我们研究所的分析工程师将会根据大家提交的试用报告进行评比，评比结果的前三名将获得价值1000元人民币的礼品，对您的热心和努力进行奖励；其余购买色谱柱的用户都将获得价值200元人民币的礼品，对您的积极参与表示感谢。如果您已经是资生堂液相色谱柱会员，此次购买不仅能够正常积分，更可获赠1000积分。 5、如果您不方便提供试用报告，也请留下联系方式，我们的营业人员会就是否能够试用与您联系，进行协商，争取给您一个满意的答复。 【CAPCELL CORE简要介绍】 自2012年6月，CAPCELL CORE C18面世以来，其特有的快速、高柱效、高分离能力和低柱压受到了广大用户的好评。 现在，CAPCELL CORE系列柱又推出了三款全新的色谱柱，它们分别是： CAPCELL CORE AQ，目前市面上唯一能在100%水相条件下安定使用的极性化合物快速分析核-壳柱； CAPCELL CORE PC，高比例有机相条件下对极性化合物具有良好保持能力的反反相快速分析核-壳柱； CAPCELL CORE PFP，通过五氟苯基特殊的鉴别能力，特别适合于芳香族化合物的临、间、对结构和顺反异构的快速分析。 更多色谱柱相关信息和应用数据请浏览我们的主页 http://hplc.shiseidochina.com 【您是否需要CAPCELL CORE】 如果您仍在使用常规的HPLC或者LC/MS/MS进行分析，但是也希望更加的节省分析时间，增加分离效果和提高柱效。那么，您不妨试试CAPCELL CORE。 如果您已经在超高压液相色谱，但是却对现有的超高压色谱柱不太满意，希望有更低的使用压力和更长的使用寿命。那么，您不妨试试CAPCELL CORE。 如果您对能在超高压条件下使用的色谱柱有特殊要求，比如能使用100%水相，能进行反反相分析，能对芳香族化合物的临、间、对结构和顺反异构的进行快速分析。那么，您不妨试试CAPCELL CORE。 【资生堂液相色谱柱会员制简介】 会员的权益： 1、会员可享受独有的积分系统(积分数=购买额)，积分可兑换相应的礼品。（特价柱及促销柱的相应购买额无法兑换积分） 2、会员可定期接收到资生堂液相色谱产品的最新资料和数据。 3、贵宾会员在每年的生日和特定节日都将收到资生堂提供的特别礼物。 4、会员在提交依赖分析时拥有比一般客户更靠前的处理顺序。 5、会员在试用色谱柱时拥有15日的试用周期。 更多会员制相关信息，您可在色谱柱试用申请留言板中询问，也可点击下面的链接进行查询。 资生堂液相色谱柱会员手册

近日，药典委发布关于0402 红外分光光度法标准草案的公示（第二次），对此前公示过的《红外光谱法草案公示稿（第一次）》进行了进一步修订。此次公示为期一个月，相关人员可在线对草案进行反馈。此次修订稿起草单位包括中国食品药品检定研究院、天津大学、江苏省食品药品监督检验研究院、宁夏回 族自治区药品检验研究院、广州市药品检验所、清华大学等，云南省食品药品监督检验研究院、哈尔滨市药品和医疗器械检验检测中心、湖南省药品评审与不良反应监测中心、上海市食品药品检验研究院、安徽省食品药品检验研究院、 山西省检验检测中心等也参与其中， 赵瑜、尹利辉、李晨曦、黄朝瑜、朱会琴、张立雯、李睿、孙素琴等担任主要起草人。此前第一次公示的草案在《中国药典》0402 红外分光光度法的基础上修订了如下内容：1. 对通则结构做了调整；2. 增订了红外光谱法的应用范围、谱图表示单位；3. 测量模式部分补充了原理，并增加了漫反射和红外显微镜的内容； 而本次草案，根据 2024 年 2 月 0402 红外光谱法首次公示稿的反馈意见和建议，在第一次公示稿的基础上修订了部分内容，包括概述、测量模式、仪器性能确认、鉴别、 定量分析、测定法部分，更多内容详见附件。附件：0402 红外光谱法草案公示稿（第二次） (2).pdf

BiopharmaLynx软件在蛋白质肽图分析中的应用 周春喜 沃特世科技（上海）有限公司实验中心 在新药研发中，蛋白质药物正在占据越来越大的比重，而蛋白质分子结构的复杂性又要求对蛋白质药物必须进行全面的表征，以满足新药报批、工艺改进和专利保护的要求。目前蛋白质药物的研发和表征还面临很多挑战，尤其是在重组蛋白的序列确证、微量杂质蛋白的检测和定量、不同批次间产品的比较和质量控制等方面。质谱在蛋白质的表征方面发挥着至关重要的作用，它不仅可以测定蛋白质药物的分子量和产品的异质性，还可以通过肽图分析确证蛋白质分子的一级结构，包括氨基酸序列、突变和修饰、二硫键定位等信息。 但如果没有功能强大的软件帮助，质谱数据的分析、比较、注释、有效信息的提取和分析报告的产生将是一个十分费时耗力的复杂过程。如果进行人工分析，即使是经验丰富的分析人员也会感到很头疼，而且在如此复杂的分析过程中很难保证不出差错，而一旦出现差错，不仅会严重影响研发的进程，有些错误的判断还有可能导致整个项目的失败。因此，分析软件是必不可少的。理想的软件不仅可以按照标准的流程，自动地完成分析过程，还可以允许分析人员根据经验和知识对分析结果进行检查并修正错误的结果。沃特世公司的BiopharmaLynxTM软件就是这样的理想工具，它不仅可以自动地完成蛋白质分子量和肽图的分析，比较不同批次间的样品并确认有无差异，还具有以下特点： 肽图分析覆盖率高 肽图分析可以确证蛋白质分子的一级结构，包括氨基酸序列、突变和修饰、二硫键定位等。由于酶解后的样品中同时存在着蛋白质的完全酶切肽段、不完全酶切肽段、非特异酶切肽段、修饰肽段和杂蛋白肽段，因此肽图是非常复杂的。通过全信息串联质谱技术（MSE），可以同时记录样品中所有的母离子及其碎片离子信息。在全面信息的基础上，BiopharmaLynx软件将可以自动进行保留时间的对齐、强度归一化、痕量杂质分析、序列确证等工作。图1为BiopharmaLynx软件对两种干扰素产品肽图分析的鉴定覆盖率分析结果，及其序列对比界面。 二、BiopharmaLynx具有多种酶切功能 在计算理论肽图时，BiopharmaLynx可以进行多种方式的理论酶切，包括半酶切、多酶联合酶切、非特异性酶切，以及自编辑酶切等。全面满足实验中的各种酶切分析需求。 三、BiopharmaLynx具有多种翻译后修饰可选 在计算理论肽图时，BiopharmaLynx还可以考虑各种翻译后修饰。在内置90种常见修饰可供选择外，分析人员还可自行编辑其需要的特殊修饰方式用于分析。 四、修饰的肽段在不同样品间含量对比 BiopharmaLynx软件可以比较不同样品间某种肽段（包括突变肽段和特定修饰肽段）的含量差异，发现样品间的细微差别，并用直观的方式显示出来。 五、BiopharmaLynx的样品间肽图对比 BiopharmaLynx软件这可以自动地将各个批次样品的肽图与参照样品的肽图进行对比，帮助我们快速而敏锐地发现不同批次的样品间有无细微差别。 六、二硫键的定位 二硫键对于蛋白质高级结构的形成和功能的维持具有重要的作用，二硫键的定位也是蛋白质结构分析的重要方面。但是二硫键的定位一直很耗时且非常具有挑战性的事情，尤其是对于含有多对二硫键的蛋白质，如免疫球蛋白等。沃特世公司的肽图分析完整解决方案通过独特的UPLC/MSE数据采集方式和功能强大的BiopharmaLynx软件，可以快速地自动完成二硫键的定位分析（见图6）。 在生物药领域，BiopharmaLynx软件作为液质数据分析最为专业的软件已经被广泛使用。目前，全球前十大生物药企业都已成为沃特世生物制药解决方案的使用者。 关于沃特世公司 (www.waters.com) 50多年来，沃特世公司(NYSE:WAT)通过提供实用和可持续的创新，使医疗服务、环境管理、食品安全和全球水质监测领域有了显著进步，从而为实验室相关机构创造了业务优势。 作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者，沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。 2011年沃特世公司拥有18.5亿美元的收入，它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。 ### 联系人： 叶晓晨 沃特世科技（上海）有限公司 市场服务部 xiao_chen_ye@waters.com 周瑞琳(GraceChow) 泰信策略(PMC) 020-83569288 13602845427 grace.chow@pmc.com.cn

尊敬的老师和同学，您好！ 创腾科技有限公司将联合华南理工大学生物科学与工程学院于2015年7月3日在广州举办为期1天的“蛋白质理性设计学术研讨会暨Discovery Studio4.5软件培训”，将为大家提供一个蛋白质理性设计领域面对面讨论与交流的机会与平台。 随着2013年诺贝尔化学奖的揭晓，美国三位科学家Martin Karplus, Michael Levitt与Arieh Warshel因其发展的分子模拟方法对生命科学领域发展的贡献而获奖，这从根本上承认了计算机模拟预测在生物学领域的贡献，分子模拟工具已经成为了生命科学家不可或缺的预测工具。Discovery Studio（简称DS）作为面向生命科学领域的综合性分子模拟平台，在生物制药、生物领域的应用已日趋成熟与完善，也为蛋白质理性设计提供了最先进的分子模拟工具。 研讨会将邀请中国科学院广州生物医药与健康研究院的刘劲松研究员和暨南大学生命科学技术学院的姚冬生教授分享他们在蛋白质理性设计领域的成果、经验与最新进展。同期的培训会，创腾科技技术支持专家将以Discovery Studio4.5软件的基础操作和应用为核心，以蛋白质理性设计为基础，针对蛋白质理性设计中所涉及的技术进行介绍与上机操作，包括：基于蛋白的一级序列预测蛋白的三维结构、蛋白-小分子/蛋白相互作用预测、通过虚拟氨基酸突变设计亲和力更高或稳定性更高的蛋白、预测并引入新的二硫键提高蛋白酶的稳定性、预测蛋白结构表面易聚集的位点并进行突变优化等等。会议基本信息会议时间：2015年7月3日（周五）会议地点：华南理工大学生物科学与工程学院1楼机房具体地址：广州市番禺区外环东路382华南理工大学大学城校区会议主题：蛋白质理性设计日程安排详情请登入创腾科技网站：www.neotrident.com 培训电脑参加7月3日下午培训的学员需自带手提电脑，手提电脑推荐配置如下：DS4.5安装所需的系统环境：Windows 7 （Professional & Enterprise完整版）64位；硬件要求：- Processor: Intel-compatible processor ≥2 GHz with x86_64 architecture- RAM: ≥4 GB of memory- Disk space: ≥20 GB disk space - Graphics card: ati or nvida independent graphics recommended- Mouse: Standard Microsoft 3-button mouse or 2-button wheel mouse关于软件安装、卸载的特别说明此次安装的DS4.5软件仅限于2015年7月3日培训使用！ 7月2日下午 14:00-17:00，7月3日上午8:00-13:00，由北京创腾科技有限公司的工程师在华南理工大学生物科学与工程学院1楼机房，负责为下午参加培训的学员安装DS4.5软件，并在培训结束后统一卸载。 对于安装过软件的学员，在培训结束后，需积极配合工程师的卸载工作，并承诺不将软件用作文章发表或者其它任何商业用途，对于不配合软件卸载工作、将软件用于文章发表或者其它任何商业用途的学员，北京创腾科技有限公司将保留追究其法律责任的权利。 对于确认报名参加此次培训的学员，均视作已阅读、知晓并同意以上全部内容。报名方式报名详情请登入创腾科技网站：www.neotrident.com 额有限，报名从速，额满为止。为保证研讨会质量，广州学术研讨会计划招生40名学员，额满为止。

美国食品药品管理局选择AB SCIEX公司的质谱产品进行食品中残留物的检测 　　FOSTER CITY, Calif. – October 20, 2010-美国AB SCIEX公司在生命科学和分析技术领域中的全球领导者，今天美国食品药品管理局宣布购买八台美国AB SCIEX公司的QTRAP® 5500系统用于检测美国食品中的残留物。这八台高灵敏度串联四极杆线性离子阱复合质谱系统将放置在美国食品药品管理局总部以及所属的其它七个食品检测实验室。其目的是支持美国政府主动确保美国食品的安全性。 　　美国食品药品管理局(FDA)负责美国食品的安全监管，使用高水平的分析方法检测食品中的化学残留污染物。例如食品中农药杀虫剂就属其监管的项目，美国食品药品管理局会抽样调查国内生产的食品和从国外进口的食品，并会定量分析检测其中的农药杀虫剂含量是否超标。美国食品药品管理局选择一种全新的分析方案的标准是提高原有LC/MS/MS分析方法的可靠性，要求新的分析方法能在一个分析平台上同时完成高灵敏度定量分析是定性确认数据，并能同时自动确认多种类型的化学污染物。 　　美国AB SCIEX公司的QTRAP® 5500系统和“可立快”食品检测软件平台相结合能完全满足美国食品药品管理局的要求标准。QTRAP® 5500系统是唯一全新的质谱技术，它将串联四极杆质谱技术和线性加速离子阱质谱技术完美地结合在一起，在定量分析和定性确证两方面具有业界最高的定量灵敏度和高可靠定性确证性能；“可立快”食品检测软件平台在AB SCIEX质谱系统上运行，可自动、快捷、简单地定量分析和定性确证检测食品中的化学残留污染物。 　　美国AB SCIEX公司的副总栽，应用市场和临床研究业务总经理Joe Anacleto先生说： 　　“美国AB SCIEX公司正期待继续与美国食品药品管理局合作，确保美国食品的安全 美国食品药品药品管理局很明确将消费者的利益放在最优先的位置，所以要求采用最精确、最可靠的分析检测技术能力。美国AB SCIEX公司的QTRAP® 5500系统在定性确认和定量分析食品中化学残留污染物方面具有最最可靠的性能。 　　美国AB SCIEX公司 　　美国AB SCIEX公司是生命科学分析技术领域的全球领导者，其产品能满足最复杂科学问题的挑战。美国AB SCIEX公司提供科学仪器、相关软件和服务用于发现新药，提高医药科学，保护食品安全和环境污染。美国AB SCIEX公司的技术解决方案能提供最可靠、最完善的数据确保我们的客户具有科学发现的热情，对数据结果保持最强的信心，提高人们的生命质量。美国AB SCIEX公司具有20多年的技术创新和市场领先历史，其前身是美国应用生物系统/MDS分析技术公司。想要了解更多美国AB SCIEX公司的信息，欢迎登录公司网站：www.absciex.com或www.absciex.com.cn

2021年4月24日-25日，中国微米纳米技术学会第六届青年科学家论坛在南京师范大学顺利举行，本次会议上，锘海生命科学在大会主会场设置了展台展出纳米药物制备系统。随着科学技术的飞速发展，微纳米药物递送逐渐成为微纳米技术的基础研究热点。作为先进制造技术的重要分支，微纳米药物递送技术在生物医学等领域得到了广泛应用。微纳米药物递送技术与生物医学的结合可以解决传统医学无法解决的问题,它是纳米科学、生物学、医学和机器人学等多学科的交叉产物,从而显示出了其巨大的发展潜力。对于治疗癌症、心血管疾病等具有特别的临床意义。本届论坛围绕“微纳米药物递送：新技术和新策略”的主题，集结了有些的青年学者围绕主题进行报告分享，碰撞思想，进一步总结目前我国微纳米药物递送领域的研究成果，突破微纳米药物递送关键核心技术，其中，Precision Nanosystems Inc.亚太地区应用科学家杨柳博士也在本次论坛上做了“新型脂质纳米颗粒靶向血脑屏障的药物递送”的专业学术性报告，引起现场多位青年学者的关注。报告摘要：随着年龄的增加，人们患中枢神经系统疾病的概率也在急剧攀升。如今全球约有 15 亿的人正在遭受着来自大脑以及神经系统疾病的困扰。然而多种药物递送的体系在血脑屏障的阻碍之下，表现出了效率低下和一定的安全隐患。这里我们展示出了一种新型的脂质纳米材料，以神经递质的胺作为材料的亲水结构连接二硫键疏水尾端，从而形成一种新型的靶向血脑屏障的纳米颗粒。利用这种材料，先后进行了两亲性小分子、短链反义核酸以及基因编辑蛋白的递送。我们成功地在脑部检测到了药物信号同时观察到了各自显著的药效，进一步说明该递送系统靶向血脑屏障的高效性与安全性。现场回顾展会预告：5月16~17日，锘海将参加以“全球合力、加速研发”为主题在上海龙之梦酒店举办的全球新冠疫苗研发峰会，展台位21号，期待与您的相聚。由锘海代理加拿大Precision Nanosystems纳米药物制备系统一键启动纳米药物制备应用范围

PerkinElmer将于2013年6月20日、21日在国家地质测试中心(西城区百万庄大街26号)组织石墨炉AAS直接进样做&ldquo 米镉&rdquo 现场观摩活动。欢迎大家带着自家吃的大米，体验测试的全过程。当然，除了大米，你也可以带着面粉、酱油、奶粉等等，我们会抽取有代表性的样品，在活动后继续进行分析。请提供样品的同时，以照片形式提供样品的来源(购买渠道、品牌、包装)。 &ldquo 食品安全，从我做起，从身边做起&rdquo 。哪些食品是安全的?哪些食品是健康的?让我们每个人都有一双慧眼，看穿重重迷雾、包装、广告误导，去看清食品的本质。 PerkinElmer，以&ldquo 人类健康&rdquo 和&ldquo 环境健康&rdquo 为使命，以&ldquo For The Better&rdquo 为旗帜，服务超过两百万用户，产前筛查了超过三千一百万个儿童，挽救了近两万个家庭，为超过一百万的人进行过癌症筛查和诊断，为环境、食品等各种行业提供了超过二十亿次的分析测试。PerkinElmer，与您健康同行! 报名截止日期： 2013年6月18日 逾期将不再接受报名! 更多信息咨询： 张萍 134-6663-3767 郭伟 186-0027-9790 报名直接发邮件至： ping.zhang@perkinelmer.com