核苷酸分离

专家您好！我用液相做核苷酸之前做了五种，分离挺好。最近尝试测六种时，图谱分离效果特差。请您给分析一下可能出现的原因！

[size=4]请教各位，近期俺要设计一个实验，但经过4、5天反复思考和查资料都没有找到太好的方案，遂进来赐教！是这样的，有一个混合样品，已知里面含有蛋白质（少量）、多肽和游离氨基酸（占绝大部分≥50%）、核苷酸（可能有三种存在形式：核苷、核苷酸、碱基）、还有其他可溶性化合物质。要求：检测样品当中核苷酸的含量。疑难：由于样品中多肽和游离氨基酸含量较多，遂不能用紫外分光光度计法测量（蛋白质和核苷酸的吸光峰值很相近，只有在蛋白质含量（包括蛋白质、多肽和游离氨基酸）较少的情况下用此法才准确）。 我的思路是，先把多肽和游离氨基酸与核苷酸分离开，然后再用紫外分光光度计法测量核苷酸含量。但本人才疏学浅，不知用什么方法才能把两者分离开。请各位赐教~~[/size]

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]跑了一种特殊的核苷酸，也没有标品，目前用的磷酸盐跑，不能做质谱，所以能用什么方法鉴定我用磷酸盐跑的这个峰是什么

核苷酸检测的标准品谁有啊？联系一下啊，我们现在需要做核苷酸的检测，谢谢

食品企业，用液相法做核苷酸，前处理样品用淀粉酶酶解，用高氯酸沉淀蛋白，然后用氢氧化钠调PH到6.75～6.85，标液五种核苷酸分离度很好，但是样品杂质峰很多，基质干扰很明显，只有一个UMP没有干扰。色谱柱是安捷伦的EC-C18，150mm*4.6，4μm，流动相就是国标法的磷酸盐＋甲醇=1000+40，波长254。有没有老师提供一点思路，怎么能更好的去除杂质或者减小基质干扰。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111031701224266_3925_4230434_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111031701224510_8643_4230434_3.png[/img]

[align=left][color=black]核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同，分别有胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）、[/color]鸟嘌呤核苷酸（GMP）及次黄嘌呤核苷酸（IMP）等。由于核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相C18色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。[/align][align=left][b]第一部分[color=red]CAPCELL PAK C18 AQ[/color]检测方法[/b][/align][align=left][/align][align=left][b]C[color=black]APCELL PAK C18 AQ[/color][/b][color=black]色谱柱可耐受纯水条件，适用于极性较大物质的高水相条件下的分析，因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》。[/color][color=black]按照国标方法，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果；对30个样品进行前处理后进行分析，样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好，且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。[/color][/align][align=left][b][color=red] [/color][/b][/align][align=left][b]《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调[/b][/align][align=left][img=,600,248]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051502543279_7587_2222981_3.jpg!w813x337.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051503129151_4402_2222981_3.jpg!w776x226.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left] 下表为样品定量浓度结果[/align][align=left][img=,600,126]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051455159701_7741_2222981_3.jpg!w900x190.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,221]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456000129_1190_2222981_3.jpg!w844x311.jpg[/img] 上图为核苷酸样品与标准品的对比谱图[/align][align=left][/align][align=left]基于个别样品分析时遇到的CMP与其前杂质未得到良好分离的情况，通过对洗脱条件进行调整，可实现CMP与其前杂之间的良好分离。[/align][align=left][img=,600,215]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456501881_4082_2222981_3.jpg!w843x303.jpg[/img][img=,600,175]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456507871_7358_2222981_3.jpg!w900x263.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left][b]第二部分[color=red]CAPCELL PAK ADME[/color]色谱柱的分析[/b][/align][align=left][color=black]CAPCELLPAK ADME[/color][color=black]键合了笼状金刚烷基团，兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。[/color]在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。[/align][align=left]值得注意的是，ADME色谱柱的溶出顺序与常规反相C18色谱柱不尽相同，再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于C18色谱柱的老师来说，具有独特溶出模式的CAPCELL PAK ADME色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。[/align][align=left][img=,500,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051457304991_1509_2222981_3.jpg!w758x525.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸标准品的分析结果[/color][/align][align=left][/align][align=left][img=,500,347]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051458490969_9562_2222981_3.jpg!w758x527.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果[/color][/align]

求助：GB5413.40 核苷酸标准品中有5种核苷酸的标准品要购买，不知道应该买哪里的。请教各位，能具体告知下购买的品牌和货号吗？胞嘧啶核苷酸 CMP：标准品，C9H14N3O8P，纯度≥99%次黄嘌呤核苷酸 IMP：标准品，C10H13N4O8P，纯度≥99%鸟嘌呤核苷酸 GMP：标准品，C10H14N5O8P，纯度≥99%尿嘧啶核苷酸 UMP：标准品，C9H13N2O9P，纯度≥99%腺嘌呤核苷酸 AMP：标准品，C10H14N5O7P，纯度≥99%

各位老师好，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]检测核苷酸，新换的柱子，第一针峰型还行，第二针就开始飘了，流动相配制有什么注意事项吗，求帮忙

Hi，诸位有哪位大神做了使用贝克曼PA800plus 分离核苷酸的分析？请发几个文章看看，不胜感激

大家有做过核酸的红外吗，我做的寡核苷酸药物，需要买仪器建分析方法，在网上查不到相关资料，不知道核酸类药物和普通化药对仪器要求一样吗，还有仪器设置和样品配置啥的，最关键的是谱图怎么分析，有没有做过的大神支支招，或者手里有相关文献，谢谢啦

请做过核苷酸的老师们给予帮助，标准中说核苷酸的标准品（每个组分称取的质量都要校正水分和钠盐含量，以酸型计）是什么意思，应该怎么处理呀，很急，请大家帮助！

目前想用Thermo Fisher的四级杆－静电轨道离子阱质谱做一个药物单，二，三磷酸核苷酸分析。文献报道是用同位素做内标，是他们实验室自己合成的，买不到现成的。用阴离子，MRM模式来做。想问，如果没有内标的话，只有该药物的单，二，三磷酸核苷酸的标准品的话，能够定量吗？第一次发帖求助，先谢谢大家的热心帮助！

问题: 有没有做核苷酸的大神呀？ 就是有的扫不出来， 不稳定回复: 核苷酸我们就是按照标准做的 全都跑出来了。 安捷伦的C18柱。 安捷伦的C18柱[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707081357_01_3114888_3.jpg[/img]

我最近用液相测定核苷酸，国标用的核苷酸基准试剂要在120度烘4h，但是我烘IMP和CMP后均发黄和结块，而GMP和UMP正常。我又在103度烘IMP和CMP，大概半小时又出现发黄和结块的现象，上网都没有找到相关的资料，不知道该在多少度烘才适合，求帮手

请教奶粉中核苷酸的测定样品前处理方法，最好是用SPE方法的，急！

5’-呈味核苷酸二钠的命名，为什么5上面要有那一撇？

HPLC检测奶粉中核苷酸，出现标品没有问题，或偶尔有杂峰样品开始没有问题，后来出现A腺嘌呤峰分裂，柱子，机子都已经换过，请问是什么问题

婴幼儿配方食品和乳粉 核苷酸检测中，配制核苷酸标准品时要求每个组分的浓度都要校正水分和钠盐含量，采用酸型表示，校正水分这个没问题，就是纯品的含量，这个校正钠盐含量并采用酸型表示，这个是什么意思？不太明白，请知道的大侠详细解释一下，谢谢！

做寡核苷酸合成，50个碱基，部分硫代。用HPLC纯化制备，做了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]结果是好的。然后做了乙醇沉淀。再做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]，发现样品脱硫了。不知道是哪里出现了问题。哪位大佬知道吗？

近日，中科院广州生物医药与健康研究院曾令文研究组成功开发出一种基于核酸等温链置换反应技术、T4连接酶反应与胶体金技术的单核苷酸多态性检测的生物传感器。 该生物传感具有以下三个特点：1.简单，无需复杂的检测仪器，仅需室温反应；2.高灵敏度，单次反应可检测约6个核酸分子；3.高特异性，可区分单碱基突变。该生物传感器克服了传统检测方法的操作技术复杂、耗时长、需要特殊仪器等缺陷。 该生物传感器可用于检测/诊断由单核苷酸多态性引起的遗传病、耐药性病原微生物、肿瘤等疾病易感基因。相关成果于7月6日发表在国际著名学术期刊Chemical Communications，2012，48(68): 8547-8549。 该项目由国家重大专项（2008ZX10004-004）、（2009ZX1004-109）经费资助。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201208/W020120830533626771243.jpg单核苷酸多态性检测生物传感器

QB/T 2845-2007 食品添加剂 呈味核苷酸二钠

寡核苷酸分析用离子对胺+HFIP作为流动相，B相为乙腈，流动相过一段时间(几个小时或者每天)，MS响应减弱，如何解决？

液相是普析通用的，检测器是可变波长紫外检测器（型号L6-UV6），泵型号是L6-P6，柱子也是普析的C8柱，不知道这个柱能不能分析核苷酸？还有，现在仪器的流动相是乙腈，我要用的流动相是甲醇和磷酸盐缓冲液，这两种不同的流动相之间需要用其他流动相过渡不？如果要过渡，是用什么过渡呢？新手哈，很多都不懂，麻烦大家指导了！

[font=SimSun, STSong, &]呈味核苷酸二钠的使用范围是表A.2中1-68的食品类别除外。[/font][font=SimSun, STSong, &]我看了一下，表A.2一共就68个食品类别，总不能是全部食品类别都不能放吧？[/font]

加急~柱层析用的提取核苷酸的纤维素粉填料能回收重复使用吗？我要大量提~所以必须要重复使用，谢谢大家了~

我是一个新手， 正在做核苷酸的测定，国标上用超纯水溶解鸟嘌呤，但是鸟嘌呤溶解度很低，一直沉淀怎么办，求助有没有什么好方法使它溶解。

求助，以磷酸二氢钾为流动相洗脱核苷酸主要是哪个离子在发挥作用，是钾离子吗