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核酸碱基

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  • Sil-SMA-MME色谱柱分离核苷/核酸碱基类化合物及苯酚类化合物

    Sil-SMA-MME色谱柱分离核苷/核酸碱基类化合物及苯酚类化合物

    [align=left][font='times new roman'][size=18px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]色谱柱分离[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]核苷[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]核酸碱基类化合物[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]及[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]苯酚类化合物[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]选用亲水性的核苷[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]核酸碱基类物质考察了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱的分离性能。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，使用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙腈[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4:6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]v/v[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]作为流动相对待测样品进行洗脱，在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以内，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]尿苷、尿嘧啶和肌苷三[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种物质可以达到基线分离（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]a[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱图峰型良好，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]三[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]物质的理论塔板数均大于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]000 N/m[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。采用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-NH[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对以上[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]三[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种物质进行分离，在相同的流动相条件下，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-NH[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱对于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]核苷[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]核酸碱基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类物质的保留更[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]强[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]之[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]内只有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]尿嘧啶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]出峰（图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]b[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不断调节流动相中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ACN[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]O[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的比例，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]选用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]流动相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙腈[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60:40[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]v/v[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]时，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]三种物质中保留时间最长的肌苷与在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]柱上的保留时间基本一致，三种物也可以达到基线分离，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]但尿嘧啶和尿苷的分离度仅[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px].62[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][align=center][img=,690,528]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308031653067829_7939_3237657_3.png!w690x528.jpg[/img][/align][align=center][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=center][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']核苷[/font][font='times new roman']/[/font][font='times new roman']核酸碱基类物质在[/font][font='times new roman']Sil-SMA-MME[/font][font='times new roman']色谱柱（[/font][font='times new roman']a[/font][font='times new roman']）和[/font][font='times new roman']SiO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']-NH[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']柱（[/font][font='times new roman']b[/font][font='times new roman']，[/font][font='times new roman']c[/font][font='times new roman']）中的分离色谱图[/font][/align][align=center][font='times new roman']色谱条件：图[/font][font='times new roman']a[/font][font='times new roman']和[/font][font='times new roman']b[/font][font='times new roman']流动相为乙腈[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']水（[/font][font='times new roman']94:6[/font][font='times new roman']，[/font][font='times new roman']v/v[/font][font='times new roman']），图[/font][font='times new roman']c[/font][font='times new roman']流动相为乙腈[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']水（[/font][font='times new roman']60:40[/font][font='times new roman']，[/font][font='times new roman']v/v[/font][font='times new roman']）；检测波长，[/font][font='times new roman']214 nm[/font][font='times new roman']；流速，[/font][font='times new roman']1.0 mL/min[/font][/align][align=center][font='times new roman']分析物：[/font][font='times new roman']1. [/font][font='times new roman']尿嘧啶；[/font][font='times new roman']2. [/font][font='times new roman']尿苷；[/font][font='times new roman']3. [/font][font='times new roman']肌苷[/font][/align][align=center][font='times new roman']Separation chromatograms of nucleosides and nucleic acid bases on the Sil-SMA-MME column (a) and commercial amino column (b, c)[/font][/align][align=center][font='times new roman']Chromatographic conditions: mobile phase, ACN-H[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']O (94:6, v/v) for a and b, ACN-H[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']O (60:40, v/v) for c [/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']detection wavelength, 214 nm flow rate, 1.0 mL/min[/font][/align][align=center][font='times new roman']Analytes: 1. [/font][font='times new roman']u[/font][font='times new roman']racil 2. [/font][font='times new roman']u[/font][font='times new roman']ridine 3. [/font][font='times new roman']i[/font][font='times new roman']nosine[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px] Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]色谱柱分离[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]苯酚类化合物[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]最后，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]选取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]四种苯酚[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类小分子物质对[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的分离性能进行考察[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对乙酰氨基酚、对甲酚、对氯苯酚和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]叔辛基苯酚[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分离[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]图。以流动相乙腈[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]40:60[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]v/v[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）进行洗脱，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]四种物质在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]之内可以实现基线分离，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱图峰型良好[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，四[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种物质的理论塔板数均大于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]000 N/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]m[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。采用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-NH[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对以上[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]四[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种物质进行分离，在相同的流动相条件下，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-NH[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]苯酚[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类物质的保留更[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]弱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对乙酰氨基酚和对甲酚色谱峰完全重叠，对氯苯酚和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]叔辛基苯酚也无法达到基线分离[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。调节流动相比例，使保留时间最长的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]叔辛基苯酚[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱上保留时间基本一致，此时，流动相为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙腈[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7:3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]v/v[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]四种物质可以达到基线分离，但分离选择性与在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱上[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]有显著差异。[/size][/font][align=center][img=,689,549]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308031653171485_5277_3237657_3.png!w689x549.jpg[/img][/align][align=center][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=center][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']苯酚类物质在[/font][font='times new roman']Sil-SMA-MME[/font][font='times new roman']色谱柱（[/font][font='times new roman']a[/font][font='times new roman']）和[/font][font='times new roman']SiO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']-NH[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']柱（[/font][font='times new roman']b[/font][font='times new roman']，[/font][font='times new roman']c[/font][font='times new roman']）中的分离色谱图[/font][/align][align=center][font='times new roman']色谱条件：图[/font][font='times new roman']a[/font][font='times new roman']和[/font][font='times new roman']b[/font][font='times new roman']流动相为乙腈[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']水（[/font][font='times new roman']40:60[/font][font='times new roman']，[/font][font='times new roman']v/v[/font][font='times new roman']），图[/font][font='times new roman']c[/font][font='times new roman']流动相为乙腈[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']水（[/font][font='times new roman']97:3[/font][font='times new roman']，[/font][font='times new roman']v/v[/font][font='times new roman']）；检测波长，[/font][font='times new roman']214 nm[/font][font='times new roman']；流速，[/font][font='times new roman']1.0 mL/min[/font][/align][align=center][font='times new roman']分析物：[/font][font='times new roman']1. [/font][font='times new roman']对乙酰氨基酚；[/font][font='times new roman']2. [/font][font='times new roman']对甲酚；[/font][font='times new roman']3.[/font][font='times new roman']对氯苯酚；[/font][font='times new roman']4. 4-[/font][font='times new roman']叔辛基苯酚[/font][/align][align=center][font='times new roman']Separation chromatograms of phenols on the Sil-SMA-MME column (a) and commercial amino column (b, c)[/font][/align][align=center][font='times new roman']Chromatographic conditions: mobile phase, ACN-H[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']O (40:60, v/v) for a and b, ACN-H[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']O (97:3, v/v) for c detection wavelength, 214 nm flow rate, 1.0 mL/min[/font][/align][align=center][font='times new roman']Analytes: 1. acetaminophen 2. [/font][font='times new roman']p[/font][font='times new roman']-cresol 3. [/font][font='times new roman']p[/font][font='times new roman']-chlorophenol 4. 4-[/font][font='times new roman']tert[/font][font='times new roman']-octylphenol[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=20px]小结[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]采用苯乙烯和马来酸酐作为单体原材料，通过“点击”反应与自由基聚合反应将苯乙烯[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]马来酸酐共聚物接枝在硅胶表面，然后通过亲核开环反应，用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]M[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]l[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对共聚物中的马来酸酐基团进行开环修饰，制备了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱固定相材料。采用热重分析和红外光谱分析证明了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定相的成功制备。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱具有亲水相互作用保留机制。通过小分子物质，对[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-MME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱的分离性能进行考察，结果显示该色谱柱具有良好的分离选择性和较高的理论塔板数，有望进一步用于磷脂的分离分析。[/size][/font]

  • 核酸计数器使用标准操作规程

    主体内容（操作步骤）：开机：打开计数器后面的开关，显示Instrument Initialising 启动需数秒Instrument Ready选择“Set up”键，这部可在快速吸光度读数时省略设对照“Set reference”将石英杯插入孔中，按箭头指示方向使光线方向在前到后轴线上。测样品：Instrument up 设置如果键入错误数字，set按“C”重新开始set up and enter按set up选择并输入与你样品相关的参数，要退出“set up”按任一计数键，要重新开始，按“set up”石英杯杯内径（mm）按“select”从0.5、1、5、10中选择^Prrneter(打印)按“select”选择ON或OFF 按｀Enter＇^Sample number(样品数)键入需要数目按 “enter”样品数，每次测量样品时都会自动累加。^Date（日期）键入日期，按“enter”（每日调节）^Moth（月）选择正确月，按“enter”^year (年)键入年，按“enter”backarouad compersation 320nm（背景补偿）320nm按“select”选择Yes or No^Dilute(稀释)键入稀释度，计算浓度，范围1.00-9999.9Factor（因子）按“select”选RNA dsDNA ssDNA对合成寡核苷酸选择ssDNABases碱基，键入A C G T V数通过核酸碱基对组成，计算分子量，以每毫升分子数显示结果按“enter”循环碱基，范围0-1000Oligo length （寡核苷酸长度）以碱基单位键入样本寡核苷酸长度以pmol/ul显示结果，按“enter”范围0-100Molecular weightMW（分子量）按“select”在计算值从A 、C 、G 、T、 V或使用者输入分子量值间选者，按“enter”Ratio 键入A260/A280吸光度比值（你希望样本达到的）按“enter”Concentration（浓度）键入希望浓度（pmol/ul）按“enter”Protein（蛋白）键入系数^Molarity（名称克分子浓度）键入盐浓度测对照:按 Set ref，听到“嘟”一声后将含对照石英杯插入样品槽中，听到“嘟”一声后，取出参照，屏幕上显示吸光度测样品步骤同对照，按“Sample”后同对照。

  • 核酸微小提过程

    核酸纯化柱（微/小提）http://www.biocomma.cn/images/2mlxiaoti.jpg核酸纯化小提柱产品组成外管医疗级PP，2ml，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，收集离心试剂。内管医疗级PP，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，底部鲁尔接口设计，方便试剂流出。筛板特殊纤维材料，在高速离心过程中，支撑硅胶膜，保证硅胶膜的完整性，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，厚度仅为0.3mm，孔径50um，致孔，孔隙率只有不到百分之二十，相比市场上同类产品，比面积小，静电小，DNA吸附极大降低。硅胶膜孔径1um，高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA，低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP，固定筛板与硅胶膜。核酸纯化微提柱http://www.biocomma.cn/images/2mlweiti.jpg产品组成外管医疗级PP，2ml，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，用来收集离心液。内管医疗级PP，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，底部鲁尔接口设计，方便离心液收集。装配位(这里指装配硅胶膜、筛板和压圈处)1直径为7.4mm，与市场上核酸小量提取同等规格。装配位2，直径为5.4mm，此处为微量核酸提取装配位，面积为小量提取装配位的一半。筛板特殊纤维材料，在高速离心过程中，支撑硅胶膜，保证硅胶膜的完整性，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，厚度仅为0.3-0.5mm，孔径50um，孔隙率只有不到百分之二十，相比市场上同类产品，比面积小，静电小，DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um，高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA，低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP，固定筛板与硅胶膜。CommaPrep™核酸微提/小提柱可用在核酸提取过程（见图1）中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://www.biocomma.cn/images/nucleic-2.jpg 图1 核酸提取过程核酸吸附量：核酸纯化小提柱：0-20ug核酸纯化微提柱：0-10ug规格：2ml离心管+吸附柱 适用范围：核酸提取原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质（硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，再改 变溶液环境使DN A溶解到纯水或TE中。DNA提取：核酸提取柱用于基因组DNA抽提，不需要使用平衡液。抽提缓冲液，或者结合液中需要胍盐（如硫氰酸胍等） 辅助DNA吸附到膜上。RNA提取：裂解液建议使用含有硫氰酸胍（异硫氰酸胍）可以抑制RNA酶活性，保证RNA酶完整性；可以配合Trizol使用，样品经Trizo裂解后，氯仿分相去除蛋白等杂质，取上层过柱，然后70%乙醇洗涤，即可得到纯净的RNA。【注意事项】 1.上柱前溶液的PH值应小于7；2.洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%，一般55%--80%之间。3.最后洗脱，可以用去离子水或者TE（10 mmol/LTris-Cl，1 mmol/L EDTA (pH8.0)）。如果长期保存DNA，建议使用TE。定购信息Cat#品名离心柱规格提取量包装DNAK1001CommaPrep™质粒小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1004CommaPrep™琼脂糖凝胶回收纯化柱2ml0-10μg100套/包DNAK1007CommaPrep™ 核酸纯化柱（微小提）2ml0-10μg100套/包DNAK1008CommaPrep™基因组小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1009CommaPrep™RNA小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1002CommaPrep™质粒中提纯化柱15ml0-100μg20套/包DNAK1003CommaPrep™质粒大提纯化柱50ml0-500μg10套/包定制

  • 【转帖】核酸电泳的指示剂与染色剂

    指示剂 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似.　　指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有①增加样 品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指 示带，可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色，使加样操作更方便.染色剂 核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其 次是银染色.　　溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间，在紫外线激发下，发出红色荧光.根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10～15min.琼脂 糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般5ng，当溴化乙锭太多，凝胶染 色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察.　　银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色. 也用于琼脂糖凝胶染色.其灵敏度比EB高200倍.但银染色后，DNA不宜回收.来源：生命经纬

  • 美国确定DNA第7种和第8种碱基

    本文由丁香园站友 宇宙cosmos 转载，点此查看详情据美国每日科学网站7月22日报道，美国科学家在7月21日出版的《科学》杂志上撰文指出，他们找到了DNA的第7种、第8种碱基，并在人体胚胎干细胞和实验老鼠器官染色体组的DNA中发现了这两个碱基的踪迹。科学家们指出，最新发现对干细胞和癌症研究非常重要。几十年来，科学家们一直认为DNA中只包含有4种碱基：腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶，这4种碱基已成为我们对基因代码如何形成生命的认识的基础。然而不久前，科学家们将碱基的数量扩展到了6种（第5种碱基：5-胞嘧啶甲基，第6种碱基：5-胞嘧啶甲基羟基）。现在，北卡罗来纳大学医学院生物化学和生物物理学教授张毅（音译）领导的研究团队则表示，他们已经发现了DNA的第7种碱基5-胞嘧啶甲酰（5-formylcytosine）和第8种碱基5-胞嘧啶羧基（5-carboxylcytosine）。科学家指出，最新的这两种碱基实际上都是胞嘧啶经由Tet蛋白修改后得到的“变身”。Tet蛋白是一种分子实体，其在DNA脱甲基过程和干细胞重新编程方面起关键作用。此前，科学家们已对第5种碱基有所了解——当一个化学标签或甲基被固定到一个胞嘧啶上时，第5种碱基就会出现。这个甲基化作用同基因沉默有关，因为它会导致DNA的双螺旋折叠得更加紧密。去年，张毅团队报告称，在一个4步反应的第一步，Tet蛋白能将第5种碱基转变为第6种碱基，但他们没有再接再厉，继续进行该实验，导致他们与第7种、第8种碱基“失之交臂”。研究团队最终发现，问题不在于Tet没有参与第二步和第三步，而是他们的实验工具的敏感度不足以探测到两种新碱基的存在。因此，他们重新设计了实验并探测到了最新的两种DNA碱基，并在人体胚胎干细胞和实验老鼠器官染色体组的DNA中发现了它们的踪迹。张毅表示：“新碱基代表了DNA脱甲基过程中的一个中间状态。通过去甲基化或重新激活DNA甲基化所沉默的肿瘤抑制基因，它们可能为干细胞重新编程和癌症研究提供非常重要的信息。”

  • 【求助】脑苷脂中长链碱基的衍生方法及其技巧

    大家好！希望能有脑苷脂方面的专家给与一定指导。脑苷脂有脂肪酸，单糖(一般为葡萄糖或半乳糖)和长链碱基按1：1：1构成。脑苷脂经水解，并通过衍生进行GC-MS测定。但是我们在实验过程中，发现脂肪酸和单糖的峰都很大，而长链碱基的峰尽管能测出来，但峰非常小，峰面积不及脂肪酸和单糖的1/20。我们分析了很多原因，如衍生方法：硅烷化衍生、乙酰化衍生；同时增加衍生试剂用量，但效果都不理想。因为长链碱基的峰太小，所以长链碱基后续研究很难展开。同等情况下，长链碱基的峰为什么这么小？能用什么方法进行改进？希望做脑苷脂方面的专家老师能给与一定的指导。谢谢大家！

  • 【求助】DNA中含RNA碱基的处理

    购买的单链DNA中含有一个RNA碱基：[font='Times New Roman']ACTAT[color=red]rA[/color]GGAAGAGATG，其中[color=#f10b00]rA[/color]为RNA的A碱基。现在购买的是粉剂。我应该怎样溶解，还有处理该样品的时候我的器材还要特需处理不？[/font]

  • 分离20-70个碱基的单链DNA用那种C18柱比较合适

    [color=#444444]想用高效液相分离分离20-70个碱基的单链DNA，查了不少文献发现在分离纯化DNA方面很多用的都是反相离子对色谱，但是用柱子牌子型号就有很大的差别了。我准备用岛津的高效液相，选用哪种C18柱会比较合适分离分析20-70个碱基的单链DNA？请个大家给点建议，谢谢！[/color]

  • Nature|天津工生所：新一代碱基编辑技术开发获进展

    碱基编辑（base editing，BE）作为前沿的基因组编辑技术，能够在基因组水平上实现精确、高效的单碱基编辑。该技术广泛应用于基础研究、基因治疗和细胞工厂构建等领域。常用的DNA碱基编辑器主要是通过将可编程的DNA结合蛋白（如Cas9）与碱基脱氨酶融合实现的，包括胞嘧啶碱基编辑器（CBE）、腺嘌呤碱基编辑器（ABE）以及糖基化酶碱基编辑器（GBE）等，可以实现C-to-T、A-to-G以及C-to-G等种类的碱基编辑。然而，这些碱基编辑器是针对C和A碱基的直接编辑，且所包含的脱氨酶可能导致非Cas9依赖的DNA或RNA脱靶。中国科学院天津工业生物技术研究所研究员毕昌昊带领的合成生物技术研究团队，联合研究员张学礼带领的微生物代谢工程研究团队，[b]开发了不依赖脱氨酶（deaminase-free，DAF）的碱基编辑器DAF-CBE和DAF-TBE，分别在大肠杆菌中实现C-to-A、T-to-A的碱基颠换，在哺乳动物细胞中实现C-to-G、T-to-G的碱基颠换编辑。?[/b]该研究通过定向进化改造了人源尿嘧啶糖基化酶（UNG）的两个突变体UNG（N204D）和UNG （Y147A），获得了两种高活性的DNA糖基化酶，分别可以作用于胞嘧啶碱基的CDG4和胸腺嘧啶碱基的TDG3。进而，研究将这两种DNA糖基化酶与nCas9（Cas9、D10A）融合，构建了CDG4-nCas9和TDG3-nCas9两种碱基编辑器，用于在大肠杆菌中进行C-to-A和T-to-A的编辑。实验结果显示，CDG4-nCas9和TDG3-nCas9在大肠杆菌中的编辑效率最高分别达到58.7％和54.3％。进一步，研究针对Homo sapiens密码子优化版本的CDG4-nCas9和TDG3-nCas9，在HEK293T细胞中实现了C-to-G和T-to-G的颠换编辑，编辑效率分别达到38.8%和48.7%。这两种编辑器的脱靶效果低于常用的胞嘧啶碱基编辑器（BE4max）和糖基化酶碱基编辑器（CGBEs）。因此，研究将这两个编辑器命名为DAF-CBE和DAF-TBE。此外，通过进一步的工程改造，该团队优化了CDG和TDG的空间位置，得到了DAF-CBE2和DAF-TBE2的新版本。它们的编辑窗口从原来的间隔序列（protospacer sequence）5'端移动到中间区域，且C-to-G和T-to-G的编辑效率分别提高了3.5倍和1.2倍。DAF-CBE和DAF-TBE实现了人诱导多功能干细胞（hiPSC）高效编辑。综上所述，[b]经过定向进化改造，该团队开发的DAF-CBEs和DAF-TBEs碱基编辑器在大肠杆菌和哺乳动物细胞中实现了高效的碱基颠换编辑，无需使用脱氨酶。与现有的引导编辑器（prime editing）或糖基化酶碱基编辑器（GBEs）相比，DAF-BEs具有相当的编辑效率、更小的尺寸和更低的脱靶率，这扩展了碱基编辑器的编辑类型，为工业菌株铸造和生物医药等领域的相关研究提供了新的技术工具。?[/b]近日，相关研究成果发表在《自然-生物技术》（[i]Nature Biotechnology[/i]）上。研究工作得到国家重点研发计划、国家自然科学基金、天津市合成生物技术创新能力提升行动专项、中国科学院青年创新促进会和天津市自然科学基金的支持。[url=https://www.nature.com/articles/s41587-023-02050-w][color=#ff0000]论文链接[/color][/url][align=center][img]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/ac641426-7515-499c-b780-d1c8c7b21f00.jpg[/img][/align][align=center]DAF-BEs碱基编辑器的设计及进化[/align][来源：天津工业生物技术研究所][align=right][/align]

  • 【原创大赛】核酸染料EB的安全使用

    【原创大赛】核酸染料EB的安全使用

    做分子实验的同学对溴化乙锭（EB，3, 8-二氨基-5-乙基-6-phenylphenanthridinium甲基溴）肯定很熟悉。那么EB的原理是什么，它除了方便做实验之外对人体有没有危害呢，实验过程中我们又需要注意哪些呢。。。。。。发出这一连串的疑问是因为看到周围在使用EB实验室出现了台面脏乱，染色操作不规范等问题，个人十分担忧。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09501.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09501.gif身体是实验的本钱，而EB对人体的伤害在短时间内是潜在的不可见的，而这种实验隐患经常为人们所忽视，以致造成不可挽回的伤害。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em0817.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em0817.gif 下面我来解开EB的本质面纱吧。EB属于核酸分子嵌入剂，它极易渗透细胞膜与细胞内DNA嵌合。它具有平面共轭大环结构，菲啶环插入到DNA分子的碱基对之间, 与DNA嵌合形成稳定的复合物, 并影响DNA 的复制，破坏正常的遗传生理现象，通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中，目前是国内实验室都在使用EB进行凝胶核酸电泳实验的染色。 谈EB“色变”，那么它对人体的危害在哪一点呢？DNA也是人体内一类重要的遗传物质，EB同样能够渗入到人体细胞中，与细胞内DNA发生作用，影响人体正常的遗传生理规律。EB对人生理的危害在女性身体体现的更直接一些，当这种变异遗传到下一代时，则可能会导致胎儿畸形甚至死亡。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09507.gif因此，规范对EB的操作十分必要！非常相当的重要！希望做相关实验的人都能够引起足够的重视，不要拿生命开玩笑。 下面说点让我们轻松的事吧。。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif令人值得高兴的是鉴于EB的毒性，不少公司研发出了替代EB的产品。这些产品同样具有EB的作用，但是危害相对小很多。本实验室用的产品是Goldview，使用的时候用枪头蘸取一点即可，显色效果也很好，能满足我们普通要求。下面这张图片是我在网上下载的，可以从图片中看出核酸染料的品种有多种。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171852_566483_3038982_3.jpg 当然，市面上还有GelRed，绿如蓝等核酸染料，据说效果也不错，不过本人没有用过。虽然有这些新产品出现，但是灵敏度不如EB，有人为了追求完美，依然在使用EB，值得一说的是，EB的安全使用不能小觑，当你在使用时，请注意操作规范，以免给自己和他人造成伤害。

  • 利用荧光DNA探测分子 单个碱基突变也能被发现

    中国科技网讯 DNA序列中最轻微的变异也会影响深远，无论对研究还是医学应用，可靠识别这些序列都非常重要。据物理学家组织网近日报道，美国华盛顿大学和莱斯大学研究人员合作，开发出一种荧光DNA探测分子，能检查出一段目标DNA链中单个碱基的变化。而这些微小突变可能是造成某些疾病的根源，或耐抗生素细菌的原因。这一成果有助于诊断和治疗像癌症、肺结核这样的疾病。相关论文发表于7月28日的《自然·化学》杂志网站上。 不同的DNA序列为不同生物设定了独特的基因标记。现代基因组学研究表明，仅一个碱基对的变化都足以引发严重的生物后果，可能决定了一种疾病能否被治愈，也解释了疾病的突发或某些疾病对常规抗生素治疗无效的原因。论文领导作者、华盛顿大学电力工程和计算机科学与工程副教授乔治·塞利格说，比如造成肺结核的细菌有很强的耐药性，这种能力通常来自其基因序列中的少量突变。现在，人们已能预先查出这种突变。 “我们真正改进了以往的方法。”塞利格说，“新方法不需要任何复杂的反应或添加酶，就只用DNA。这意味着无论温度及其他环境变量怎样变化，该方法都是稳定的，所以很适合用于低资源设置中的诊断。” 这种探测分子经过专门设计，采用了新的编程机制，能与一个可疑的DNA序列结合，对其双螺旋链生成互补的DNA序列。把含有两种序列的分子在盐水试管中混合，如果两条链的碱基对都是完好的，它们自然地匹配在了一起，探测分子会发出荧光；如果不发光，则意味着上面有碱基对发生了突变。与以往技术不同的是，探测分子会检查目标DNA双螺旋的两条链是否发生了突变，而不是一条，这使检验更加全面具体。 此外，探测分子由许多寡核苷酸构成，克服了合成上的局限，可以探测更长的DNA序列中更详细的变异信息，达到200个碱基对，而现有探测突变的方法只能检查20个。 目前，研究人员与华盛顿大学商业化中心一起对该技术提出了专利申请，他们希望把这种技术和诊断试纸结合用于疾病测试。（常丽君） 《科技日报》（2013-8-7 二版）

  • 基于聚倍半硅氧烷微球的亲水/反相混合模式色谱填料的制备与评价

    [color=#333333]亲水/反相混合模式色谱应用广泛,但pH使用范围有限,不利于碱性药物的分离。该工作利用巯基-烯基点击化学合成了单分散多孔的半胱氨酸改性乙烯基功能化聚甲基倍半硅氧烷(C-V-PMSQ)微球。元素分析表明半胱氨酸成功键合在微球表面。C-V-PMSQ微球为介孔结构,单分散性好且具有优良的化学稳定性。以几种常见的核苷和核酸碱基作为测试样品,考察其色谱保留行为,溶质的保留因子随流动相中水相含量的变化呈现典型的U型曲线,表明C-V-PMSQ固定相具有亲水/反相的双重保留特征。使用该固定相可以分离苯的同系物及一系列亲水性与疏水性化合物。另外在高碱性流动相条件下利用亲水和反相模式成功分离了中药苦参中的3种主要活性成分,表明它在分离碱性药物方面具有较大的优势。 [/color]

  • 义翘神州核酸高效清除解决方案及FAQ

    [font=宋体][font=宋体]随着生物医药领域的发展，生物制品（治疗性抗体药物、疫苗等）需求日益庞大。生物制品和生物技术药物在生产过程中通常使用到工程细胞（菌），可能会造成外源性核酸残留（如宿主的），存在致瘤、感染、干扰代谢等潜在安全风险。我国参照[/font][font=Calibri]WHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]和欧盟标准，在药典中对生物制品的核酸残留量有明确规定。生物制品的核酸残留主要集中在重组蛋白、抗体及疫苗的大规模纯化及生产过程。药典规定要求酵母、大肠杆菌表达的生物制品中[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]残留量不超过[/font][font=Calibri]10ng/[/font][font=宋体]剂，[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Vero[/font][font=宋体]细胞表达的狂犬疫苗、[/font][font=Calibri]EPO[/font][font=宋体]、乙肝疫苗等不超过[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]10pg/[/font][font=宋体]剂。因此控制这些产品中外源性核酸的残留就显得极为重要。而外源性核酸残留的控制，会对生产工艺、规模放大、生产效率等产生一定程度的制约，那么如何能够二者兼得呢？全能核酸酶在生物制品宿主核酸残留方面具有一定的优势。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]全能核酸酶[/b][/url]（[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]）是一种来自于粘质沙雷氏菌（[/font][font=Calibri]Serratia marcescens[/font][font=宋体]），经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，完全将核酸降解成[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个碱基长度的[/font][font=Calibri]5'-[/font][font=宋体]单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶，依托于[/font][font=Calibri]ISO 13485[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]体系，还可提供高效、高质量、应用广的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒，在解决生物制品核酸污染的同时，有效降低酶本身的残留风险。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同级别全能核酸酶[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级条件下生产的全能核酸酶[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]，无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的药物主文件申报备案（[/font][font=Calibri]DMF Number#:35978[/font][font=宋体]），满足药物申报的规范。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]应用场景：[/font][font=宋体]①去除疫苗、重组蛋白等生物制品中的外源性核酸。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②降低大分子样本制备过程中因核酸引起的粘度问题。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③去除病毒等颗粒表面的核酸，利于病毒颗粒的纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④用于预防细胞结团。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]核酸高效清除解决方案常见问题[/font][font=Calibri]FAQ[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①哪些因素会影响[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]的消化效果？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]酶的添加量，反应条件（例如：时间、温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值），缓冲环境（例如：是否存在酶的抑制剂）等。不同样本的最佳使用量，需要经过实验摸索。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②哪些条件会抑制[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]的活性？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]可在较宽条件下保持活性，二价阳离子（[/font][font=Calibri]Mg2+[/font][font=宋体]）对其活性至关重要。当在含有以下物质的体系中， [/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]的活性会受到抑制：[/font][font=Calibri] 300 mM[/font][font=宋体]一价阳离子，[/font][font=Calibri] 100 mM[/font][font=宋体]磷酸盐，[/font][font=Calibri] 100 mM[/font][font=宋体]盐酸胍， [/font][font=Calibri] 100 mM[/font][font=宋体]硫酸铵等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③如何去除[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]使用常规色谱法，如亲和色谱法和离子交换色谱法，可以很容易地去除[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]。其他方便的纯化方法，如切向流过滤（[/font][font=Calibri]TFF[/font][font=宋体]）也适用于从生物制品中去[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④如何灭活[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]采用[/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如[/font][font=Calibri]100 mM NaOH[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃处理[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]分钟等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]KIT-SSNP01[/font][font=宋体]是否可以用于其他品牌全能核酸酶残留检测？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]实验数据显示[/font][font=Calibri]KIT-SSNP01[/font][font=宋体]可检测主流进口品牌全能核酸酶产品。但由于各个公司的全能核酸酶可能在序列及工艺方面存在差异，建议进行实验验证确认后再使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情就可以参看：[/font][font=Calibri]http[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]s[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 【转帖】科学家发现海洋巨型病毒拥有73万个碱基对

    科学家发现海洋巨型病毒拥有73万个碱基对 　　北京时间10月29日消息，据物理学家组织网报道，英属哥伦比亚大学(UBC)已经发现世界上最大、最复杂的海洋病毒，Cafeteria roenbergensis病毒主要感染那些吃海洋生态系统中非常重要和分布广泛的浮游生物的掠食者。　　这种病毒的基因组比一些细胞生物的基因组还大，它的遗传复杂性使科学家感到疑惑，不知道该把它归为“无生命”生物，还是“有生命”生物行列。海洋微生物学和环境病毒学专家、这项研究的第一论文作者和英属哥伦比亚大学教授柯蒂斯·苏特勒说：“我们一般认为病毒都很小，是简单生物体，只有少量基因。然而我们在这种病毒里发现的大量遗传机制，只能在有生命的细胞生物体里找到，它们需要很多基因才能产生DNA、RNA、蛋白质和糖。”　　该研究成果发表在本周的《美国国家科学院院刊》上。一般情况下，病毒在活宿主细胞外无法自我复制，它们需要利用宿主提供的蛋白质进行复制，自我复制形式是区分“无生命”和“有生命”生物的分界线。然而最新发现的这种巨型病毒却对上述归类标准发起了挑战，它们虽然仍需要一个细胞进行复制，但它们是在自己的基因组里进行编码的。　　20世纪90年代初，有人在德克萨斯州沿海水域发现这种巨型海洋病毒。苏特勒和他的科研组确定该病毒的基因组含有大约73万个碱基对。这使Cafeteria roenbergensis病毒成为目前已知的世界最大海洋病毒和第二大病毒，排名仅次于淡水病毒——多噬棘阿米巴模仿病毒，后者拥有120万个碱基对。Cafeteria roenbergensis病毒还感染在海洋食物链中处于重要地位的浮游动物。　　苏特勒说：“尽管这些海洋浮游生物的掠食行为在海洋和淡水系统的碳转移及营养循环过程中起着重要作用，但是我们对该病毒在这个系统里所扮演的角色几乎一无所知。毫无疑问，这种病毒可能还是一大组未知但是具有生态重要性的海洋巨型病毒的代表。”

  • 全能核酸酶SuperNucleaseFAQ详解：解开核酸酶的神秘面纱

    [font=宋体][font=宋体]全能核酸酶（[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]）是一种来自于粘质沙雷氏菌（[/font][font=Calibri]Serratia marcescens[/font][font=宋体]），经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，完全将核酸降解成[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个碱基长度的[/font][font=Calibri]5'-[/font][font=宋体]单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶，依托于[/font][font=Calibri]ISO 13485[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]体系，还可提供高效、高质量、应用广的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒，在解决生物制品核酸污染的同时，有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解全能核酸酶：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理粘附细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤后，向[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）中加入[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理悬浮细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集悬浮细胞后，将[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）加入含有[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶的离心管中，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处组织样本呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 研磨[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]100mg[/font][font=宋体]动植物组织后，加入[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]200μL[/font][font=宋体]裂解液和[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液并离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 大肠杆菌或其他细菌呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集细菌后，裂解液或研磨破碎后，每[/font][font=Calibri]100μL[/font][font=宋体]加入[/font][font=Calibri]1~5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 正常推荐稀释比（终浓度）为[/font][font=Calibri]1:1000[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1:20000[/font][font=宋体]，其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 是否用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 是[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 你能减少剂量吗[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 如果你想减少剂量，可以适当提高反应温度或延长反应时间[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应辅因子[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 必须向反应溶液中加入[/font][font=Calibri]2-5mM Mg2+[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应缓冲液[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 常用的生物缓冲液，如[/font][font=Calibri]TBS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MOPS[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]pH6-8[/font][font=宋体]）等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 稀释后每次使用多少？如何测试梯度？一开始多少钱？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 根据不同的实验要求，添加量可以在[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]之间。真核细胞所需的量高于原核细胞，因为真核细胞的核酸含量高，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/1000[/font][font=宋体]的比例添加真核细胞初始添加量，可以按照[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高，因此在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃下消化的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]添加比例高于室温下。普通的[/font][font=Calibri]CoIP[/font][font=宋体]实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]的比例添加对[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]残基要求高的实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何灭活全能核酸酶？如何移除？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性，极端条件下可以引起不可逆的失活，如[/font][font=Calibri]100mM NaOH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃处理[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]。可以通过阴离子交换柱或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性，建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 储存条件[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 储存温度为[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃。储存缓冲液：[/font][font=Calibri]20mM Tris-HCl pH 8.0[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50mM NaCl[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]2mM MgCl2[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]甘油。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 全能核酸酶应用[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、蛋白质提取过程中核酸污染的去除：当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时，全能核酸酶可用于降低样品粘度，以便于操作；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、有效减少储存的外周血单个细胞（[/font][font=Calibri]PBMC[/font][font=宋体]）的聚集；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、有效去除带负电荷核酸对双向[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]蛋白样品的影响；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、在宽范围的条件下（[/font][font=Calibri]6M[/font][font=宋体]尿素、[/font][font=Calibri]0.1M[/font][font=宋体]盐酸胍、[/font][font=Calibri]0.4%Triton X100[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]0.1%SDS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM EDTA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM PMSF[/font][font=宋体]），降解所有形式的（双链、单链、线性、环状）[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序，去除蛋白质产品中的污染；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用，去除粗提液中的核酸，降低溶液粘度，提高蛋白质产量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同级别全能核酸酶，[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级条件下生产的[url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]全能核酸酶[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]SuperNuclease[/b][/url][/font][font=宋体]，无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的药物主文件申报备案（[/font][font=Calibri]DMF Number#:35978[/font][font=宋体]），满足药物申报的规范。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 核酸站,核酸舱,移动方舱,核酸工作站,核酸检测亭都是核酸亭不同的名字

    核酸站,核酸舱,移动方舱,核酸工作站,核酸检测亭都是核酸亭不同的名字

    [size=18px]创安盛交通生产核酸亭,核酸站,核酸舱,移动方舱,核酸工作站,[b][url=http://www.gongjiaozhanting.com]核酸检测亭[/url][/b],核酸检测站,核酸采样亭,核酸采样站厂家定制。欢迎来到创安盛www.gongjiaozhanting.com来电咨询，让您更好的了解产品。马卡龙般的清新配色、饱满圆润的憨厚外形、舒适安全的封闭舱体,小小的核酸采样亭，不仅为医务人员提供更好的工作环境，也给前来检测的居民带来更多便利。采样亭在疫情之后，还能转换成其他公服设施，继续为城市服务。近日从西城区了解到，新一代核酸采样亭“西城盒子”正式亮相，该批次共有62座“西城盒子”将陆续投放西城区街头。采样亭别出心裁 “城市家具”品质再提升在金融街购物中心一旁的凉爽树荫下，一座浅绿色的“大盒子”静静伫立。开关启动，遮阳板通过电动液压杆缓缓翻开，形成遮阳挡雨的棚架，遮阳板下的操作台，可以摆放多种用具。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208252043079113_5880_5806756_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208252043232695_6623_5806756_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208252043382232_7794_5806756_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208252043507204_2781_5806756_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,625]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208252043512515_6258_5806756_3.jpg!w690x625.jpg[/img]采样点通过窗口形式提供服务，采样人员每完成一次采样后随即进行消毒。在排队等候区，工作人员指引市民完成核酸码登记，没有核酸码的市民可用身份证进行现场登记。在公园，人民医院新设的便民核酸采样亭前，一些外卖小哥正在等候采样。“以前是要到医院里才能采样，现在在公园里辟出区域进行核酸采样，就不用和就医人员一起了，方便了不少。”外卖小哥说，以往总要等上个十多分钟，现在只要三五分钟就能完成采样。“我们医院也保留了核酸采样窗口，主要服务就医患者，在公园新设的采样点，也是为了方便复工复产人员、外卖骑手和有需求的居民。[/size]

  • MALDI-TOF核酸研究领域的下一站：病原体检测

    由于传播途径多样、影响范围广泛，症状发展迅速，传染病仍然是世界范围内引起人类大量死亡的重要原因。21世纪以来多次严重疫情给我们留下深刻印象：一是2003年的“非典”（SARS），二是2009年的甲型H1N1流感（人感染猪流感），再有就是现在席卷全球的新型冠状病毒肺炎疫情。因此，传染病的防控一直是医学科学工作者面临的巨大挑战。其中，对病原体进行快速准确的鉴定是传染病精准防控的基础。中国医学科学院病原生物学研究所彭俊平研员自2000年起即深耕于病原体检测技术方法及基因组学、耐药机制相关的研究工作。近日，仪器信息网特别采访了彭俊平研究员，与他就核酸质谱技术在病原体检测领域的应用现状及前景进行了深入交谈。[align=center][img=彭俊平个人.JPG,600,337]https://img1.17img.cn/17img/images/202204/uepic/3407a132-360a-4424-b8f8-73b9d8028642.jpg[/img][/align][align=center]中国医学科学院病原生物学研究所 彭俊平研究员[/align][color=#ff0000]“国内最早开展核酸质谱病原体检测研究的团队之一”[/color]随着各项科学技术的进步，病原体检测技术也在不断发展，由病原分离、电镜观察、免疫学检测等传统生物学方法发展到[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术、芯片技术、测序技术、质谱技术等分子生物学方法。“因为引起疾病的病原体种类繁多，单一的平台技术不能解决所有问题，所以，我们的主要工作是利用各种平台技术对病原体进行筛查。”彭俊平介绍到，“多年来我们课题组一直致力于搭建一个病原体组合筛查技术体系，这也是我国在传染病防控领域的一个重要工作。另外，我们利用多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应结合飞行时间质谱技术（以下简称：核酸质谱）在病原体检测领域开展了10多年的工作，这也是我们多年来的一个重点发展方向。”核酸质谱是什么？彭俊平为笔者解答到，核酸质谱其实是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）在核酸水平的应用，是一种将多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应与质谱结合的复合技术。此前，MALDI-TOF主要应用于蛋白质水平的微生物鉴定研究，应用发展不过30多年，而MALDI-TOF在核酸水平的相关应用则是近些年提出的概念，应用发展时间就更短。最初，MALDI-TOF在核酸研究领域开展的应用是SNP基因分型，其首先通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增含有SNP的基因组片段，再通过检测核酸分子在真空管中的飞行时间而获得样品分析物的精确分子量，从而检测出SNP位点信息。因为MALDI-TOF本身的高灵敏度和高通量等特点，使其非常适合应用于SNP多位点的筛查。而MALDI-TOF在病原体检测领域的研究则鲜少有报道。彭俊平课题组是国内最早开展核酸质谱病原体检测研究的团队之一。“我们是在2009年引进的这个技术平台，正好是H1N1全球大流行的时候，当时核酸质谱的技术水平还不足以帮助我们开展相关工作，因此我们就开始自己开发方法。”核酸质谱病原体检测的原理是利用MALDI-TOF检测多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应的产物，即单碱基延伸的产物质量大小，来判定检测靶基因的有无，从而进一步判定样本中目标病原体的有无。与传统的病原体检测技术相比，核酸质谱在灵敏度、检测通量以及操作简便性等方面均有一定优势。此外，核酸质谱检测的核酸序列均来源于公共数据库，不需要依赖其他的数据库。[color=#ff0000] “开发了7种人冠状病毒的检测方法，成功申请专利”[/color]经过多年的技术摸索，彭俊平团队利用核酸质谱在病原体检测领域做出了很多成果。最近其团队开发了7种人冠状病毒的检测方法，并申请了发明专利。目前，已知可以感染人的冠状病毒共有7种，其中包括2003年的“非典”SARS冠状病毒、2012年在中东地区出现的MERS冠状病毒以及2019年12月爆发的严重性呼吸系统综合征冠状病毒SARS-Cov-2。彭俊平介绍到，课题组是从2012年开始开展人冠状病毒的检测技术研究，其中一部分工作内容就是利用核酸质谱进行检测应用。该部分成果是与岛津公司合作开发的，利用一步法多重反应[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]与MALDI-TOF质谱联用鉴定7种人冠状病毒与新型冠状病毒的重要突变位点。“本次合作中我们将多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应从两步法改进为一步法，既缩短了实验时间，又减少了人为操作的工作。而且我们改进的方法适用于所有的RNA病毒，可以说是摸索出了一种通用的解决方案。”彭俊平介绍到，“和岛津合作成果的应用价值很明确，我非常期待未来该方法的推广。接下来我们也将继续和岛津合作在MALDI-TOF平台上开发出更多病原体检测解决方案，并合力推动核酸质谱在临床领域的应用。”笔者追问到目前国际上核酸质谱在病原体检测领域的应用现状如何？彭俊平坦言道，国际上相关的成果并不多，而团队于2009年就开展了相关研究，可以说是走在了国际前列。不过，目前核酸质谱病原体检测的应用还以科研阶段为主，临床应用正处于拓展阶段。此外，彭俊平也谈到他认为核酸质谱走向临床所面临的瓶颈，一是MALDI-TOF本身的硬件设备比较贵；其次，基于MALDI-TOF平台提供给临床应用的成熟方法不多。因此，核酸质谱这样的技术平台想要真正推广到临床，首先需要提供“一揽子”的解决方案，这样应用场景就会被打开。不过，彭俊平也观察到，无论国内还是国外，越来越多的团队和厂商开始关注这一领域，相信核酸质谱的临床应用情况将在短短几年之内得到很大的改变。最后彭俊平表示，未来核酸质谱病原体检测值得重点关注的方向有呼吸道感染疾病、腹泻性疾病和性传播疾病等，其涉及的病原体种类繁多，是核酸质谱可以“大展身手”的方向。后记：采访中彭俊平反复提到“病原体的组合筛查技术体系”，他也为笔者解释到，为了获取更全面的生物信息，往往需要多种技术平台共同解决问题，而不是希望用一个技术平台去解决所有的问题。回到MALDI-TOF这一技术来说，总有人拿质谱与NGS测序相比较，其实它们的应用场景和目标都不一样，发展核酸质谱也并不是为了替代测序技术。事实上，核酸质谱只需要在中高通量的检测中建立并巩固其“王者地位”，在此基础上能够再提升灵敏度和分辨率等性能，就为自身的发展开辟了新天地。

  • 核酸采样工作站，核酸采样舱，核酸采样小屋，提高了核酸采样工作的安全性与舒适性

    核酸采样工作站，核酸采样舱，核酸采样小屋，提高了核酸采样工作的安全性与舒适性

    五季智能核酸采样亭的消毒简单方便。室内采用紫外线杀毒，可以在工作前对采样亭进行自助消毒，并确保无菌和卫生。采样人员在核酸采样亭内与外部人员不产生直接接触，医废和垃圾会进行消杀并进行统一回收处理，不会对周边环境造成影响。采样人员通过特制的手套来采集样本，并透过玻璃进行观察。样品采集后，采样人员将样本直接放样本存储区内，大大减少了面对面接触，避免了触摸和呼吸造成的感染。[align=center][img=单人核酸采样工作站,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281424200807_3234_5635765_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align]具体点位选择以室外空旷、手机信号强、通风良好、面积较大为参考标准，可设置在社区卫生服务站、学校操场、体育场、楼宇园区广场、社区空地等。核酸采样场所应划分为等候区、扫码区和采样区，有效分散待检人员密度。每采样点设1-2个工位，每天1-2班，可根据采样人数需求及时增减。与传统核酸采样不同，医护人员在核酸采样亭内与居民无接触即可完成信息登记和采样操作。[align=center][img=移动核酸采样工作站,690,566]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281424511064_5867_5635765_3.jpg!w690x566.jpg[/img][/align]如遇正在开展采样的核酸采样亭，建议市民与排队做核酸的人员保持两米以上距离，以避免人员聚集所带来的危险。目前市面上出售的岗亭以单人操作和双人操作两种规格为主，主要配备的设施包括空调、对讲机、紫外消毒设备、离心风机、过滤器等，每台核酸检测亭都配有空调一台。尽管核酸采样亭已在多地铺设，但目前相关的配置规范和标准仍较少，仅有个别地市如无锡市出台了相关管理规范，对采样亭的选址、设施配套、人员配备等作出明确。核酸检测采样亭配置规范需要根据行业标准去制定，比如负压要求、空调设备要求、采样隔离要求等。杭州、广州、无锡等地比上海更早开始布局建设，相关标准也在参考前人经验。核酸采样亭的快速布局落地,势必给全民的工作生活带来极大的方便,助力全国的精准防疫。五季智能核酸采样亭厂家——欢迎咨询17201681858[align=center][img=便民核酸采样小屋,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281425565485_2290_5635765_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/align]

  • 核酸提取仪的工作原理

    核酸提取(核酸的分离与纯化)主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开,但在分离核酸时,应保证核酸分子一级结构的完整性,并排除其他分子污染。核酸提取方法一般包括细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤,而每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。操作过程中首先通过物理、化学或酶解作用裂解细胞,使核酸释放出来,并去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂肪类等生物大分子的过程。在此基础上,沉淀核酸、去除盐类和有机试剂等杂质,从而得到纯化的核酸。核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。在传统的手工核酸提取过程中通常采用离心澄清的方法，操作时费时费力。近年来,出现了磁珠分离技术，利用磁珠在一定条件下对核酸具有很强亲和力的特点，吸附核酸。当条件改变时，磁珠又可以与其吸附的核酸分离,从而得到纯化的核酸。这种方法简便、高效、易于操作，是目前核酸提取仪采用的主要方法。具体来说，磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂，操作简单，符合核酸自动化提取要求，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。

  • 【资料】核酸是如何被定量的

    UV分光光度计是一款常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。那么在试验中UV分光光度计又是如何定量的呢?下面我们就以核酸的定量为例来讲述UV分光光度计是如何定量的。核酸的定量 核酸的定量是UV分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非是一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。其实试验过程中就是这样的，常常会出现一些不确定的因素，导致试验结果的偏差，有些因素是可以避免的，然而有些因素又是不可避免的。

  • 【分享】土壤酸碱度

    土壤酸碱度对土壤肥力及植物生长影响很大，我国西北、北方不少土壤pH值大，南方红壤pH值小。因此可以种植和土壤酸碱度相适应的作物和植物。如红壤地区可种植喜酸的茶树，而苜蓿的抗碱能力强等。土壤酸碱度对养分的有效性影响也很大，如中性土壤中磷的有效性大；碱性土壤中微量元素（锰、铜、锌等）有效性差。在农业生产中应该注意土壤的酸碱度，积极采取措施，加以调节。

  • 酸碱滴定法

    教学目的：1、掌握酸碱滴定突跃范围和影响突越范围的因素。2、掌握一元酸碱和多元酸碱能被滴定的条件和判断能否被滴定的原则。3、熟悉选择指示剂（或混合指示剂）的原则。4、理解一元强酸滴定一元强碱，一元强碱（酸）滴定一元弱酸（碱）滴定过程中pH的变化情况（酸碱滴定曲线）。5、了解多元酸和多元碱的滴定。教学重点与难点：一元酸碱能被滴定的条件。教学内容： 一、方法简介什么是酸碱滴定法？酸碱滴定法（acid-base titration）：利用酸碱间的反应来测定物质含量的方法。例如：NaOH + HCl NaCl + H2O根据等物质的量的规则：Cb·Vb = C a·VaCHCl·VHCl = CNaOH·VNaOH1、作为滴定分析化学反应必须满足以下几点：①反应要有确切的定量关系，即按一定的反应方程式进行，并且反应进行的完全；②反应要迅速完成，对速度慢的反应，有加快的措施；③主反应不受共存物干扰，或有消除的措施；④有确定理论终点的方法；2、进行滴定分析必须具备以下条件：①准确称量—天平，定容体积的器皿；②标准溶液；③确定理论终点的指示剂。

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