[font=宋体][font=宋体]重组蛋白（[/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体]）是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因（[/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]），连接到适合的表达载体，导入到特定的宿主细胞，利用宿主细胞的遗传系统，表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]：原核表达系统：最常用的大肠杆菌蛋白表达，真核表达系统如酵母，哺乳动物细胞蛋白表达（常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]）及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生，产生的重组蛋白作为生物制药的产物，在医学中作用显著。利用基因工程技术，可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例：其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前，重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分，常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时，蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外，每个表达系统都有其独特的优势和挑战，这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议，以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]
http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif一种新型的重组蛋白A柱 洗脱条件温和，充分防止蛋白变性蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将蛋白A与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。早期的蛋白A柱结合的都是天然蛋白A。天然蛋白A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图一所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然蛋白A的其他非结合域会和非目标蛋白结合，这样被洗脱下来的蛋白质纯度不够，会影响到后续的试验。为了解决这些问题，科学家们运用基因工程技术，克隆出蛋白A的基因，并对其进行改造，除去了一些不重要的非结合域。偶联这种重组蛋白A的琼脂糖凝胶柱在蛋白质纯化中，的确是提高了产物的纯度。目前，市场上绝大部分重组蛋白A柱都是这种产品。但是，纯化时所用的洗脱液一般为pH=2.7的甘氨酸溶液，如果洗脱效果不是很理想，还要降低pH，采用pH=1.9的甘氨酸溶液。由此可见，此法洗脱条件比较剧烈，最后收集的蛋白质很有可能变性，或者是复性困难。 这种洗脱条件剧烈的柱子结合的重组蛋白A一般具有5个串联结构域：E、D、A、B、C。虽然每个域均可以和IgG的Fc段结合，但不同的域结合强度略有差异。因此洗脱条件不均一，而且经常需要较低的pH值。GE的重组蛋白A柱即为这种类型，如图二所示。考虑到减少串联结构域的个数，并且采取同型结构域串联，就可以避免不同结构域与抗体Fc 段亲和性的差异从而使洗脱条件温和而均一，Putus研制出了含有三个串联B结合域的重组蛋白A，如图二所示。同时，我们用Putus重组蛋白A柱和GE重组蛋白A柱纯化人血浆，纯化的结果用于比较两种纯化柱的纯化效果，结果如图三所示。GE Putus 图二、重组蛋白A结构示意图待纯化样品：人血浆实验材料：GE公司的重组蛋白A柱（E、D、A、B、C结构域串联，见图二）Putus公司的重组蛋白A柱（3个B结构域串联，见图二）实验方法：分别按照每个公司的说明书来操作，洗脱条件分别为pH值3.0和4.5， SDS-PAGE检测结果如下： 上图从左边起，泳道1为标准蛋白Marker，泳道2为经过GE填料洗脱后抗体，泳道3为经过Putus填料洗脱抗体，泳道4为人血浆。从图中，我们可以看出，与GE 重组蛋白A填料从人血浆纯化抗体纯度比较，拥有3个同型结构域的Putus填料可以获得同样纯度的抗体。但是，后者的洗脱条件仅为4.5，高于前者的洗脱条件3.0。由此可见，使用具备较少B结构域的重组蛋白A柱也能获得高纯度的IgG，并且洗脱条件温和，能防止蛋白质聚集，保护蛋白质活性。http://cp00a3cee71b5f96adf6e669b5d7f56a9f11.jpg/http://C:\Documents and Settings\adim\桌面\001.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191653_632703_1672347_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187444_1672347_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187445_1672347_3.jpg
[font=宋体][b]什么是重组蛋白？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连，这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念，融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。融合蛋白又称标签（[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]），常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结：在生物制药领域，重组蛋白具有较高的活性和纯度，更易吸收，安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务，例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息，详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]
[em09511]一种新型的重组蛋白A柱 洗脱条件温和，充分防止蛋白变性蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将蛋白A与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。早期的蛋白A柱结合的都是天然蛋白A。天然蛋白A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图一所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然蛋白A的其他非结合域会和非目标蛋白结合，这样被洗脱下来的蛋白质纯度不够，会影响到后续的试验。为了解决这些问题，科学家们运用基因工程技术，克隆出蛋白A的基因，并对其进行改造，除去了一些不重要的非结合域。偶联这种重组蛋白A的琼脂糖凝胶柱在蛋白质纯化中，的确是提高了产物的纯度。目前，市场上绝大部分重组蛋白A柱都是这种产品。但是，纯化时所用的洗脱液一般为pH=2.7的甘氨酸溶液，如果洗脱效果不是很理想，还要降低pH，采用pH=1.9的甘氨酸溶液。由此可见，此法洗脱条件比较剧烈，最后收集的蛋白质很有可能变性，或者是复性困难。 这种洗脱条件剧烈的柱子结合的重组蛋白A一般具有5个串联结构域：E、D、A、B、C。虽然每个域均可以和IgG的Fc段结合，但不同的域结合强度略有差异。因此洗脱条件不均一，而且经常需要较低的pH值。GE的重组蛋白A柱即为这种类型，如图二所示。考虑到减少串联结构域的个数，并且采取同型结构域串联，就可以避免不同结构域与抗体Fc 段亲和性的差异从而使洗脱条件温和而均一，Putus研制出了含有三个串联B结合域的重组蛋白A，如图二所示。同时，我们用Putus重组蛋白A柱和GE重组蛋白A柱纯化人血浆，纯化的结果用于比较两种纯化柱的纯化效果，结果如图三所示。GE Putus 图二、重组蛋白A结构示意图待纯化样品：人血浆实验材料：GE公司的重组蛋白A柱（E、D、A、B、C结构域串联，见图二）Putus公司的重组蛋白A柱（3个B结构域串联，见图二）实验方法：分别按照每个公司的说明书来操作，洗脱条件分别为pH值3.0和4.5， SDS-PAGE检测结果如下： 上图从左边起，泳道1为标准蛋白Marker，泳道2为经过GE填料洗脱后抗体，泳道3为经过Putus填料洗脱抗体，泳道4为人血浆。从图中，我们可以看出，与GE 重组蛋白A填料从人血浆纯化抗体纯度比较，拥有3个同型结构域的Putus填料可以获得同样纯度的抗体。但是，后者的洗脱条件仅为4.5，高于前者的洗脱条件3.0。由此可见，使用具备较少B结构域的重组蛋白A柱也能获得高纯度的IgG，并且洗脱条件温和，能防止蛋白质聚集，保护蛋白质活性。[IMG]http://CP00A3CEE71B5F96ADF6E669B5D7F56A9F11.jpg[/IMG][URL=http://C:\Documents and Settings\adim\桌面\001.jpg]http://C:\Documents and Settings\adim\桌面\001.jpg[/URL][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187443_1672347_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187444_1672347_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187445_1672347_3.jpg[/img]
组蛋白乙酰化组蛋白修饰通过改变组蛋白与DNA的亲和性使染色质结构发生改变，进而影响转录因子与DNA序列的结合和基因表达,包括乙酰化、甲基化、磷酸化等，其中乙酰化是最重要的修饰方式之一，其主要发生在组蛋白H3赖氨酸（Lysine, Lys）的位点上，在癌症进展中发挥双重作用，既参与肿瘤抑制基因的沉默，又增强癌基因的表达[11]，它受组蛋白乙酰转移酶（Histone acetyl transferase，HAT）和组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase，HDAC)调控。HDAC可移去Lys残基上的乙酰基，增强组蛋白的正电性，DNA（本身带有负电荷）与组蛋白结合紧密，转录因子不易于DNA结合，抑制抑癌基因的转录，HAT作用则相反，二者动态平衡才能使组蛋白乙酰化维持在正常水平。表观遗传学改变通过调控基因转录平衡组蛋白乙酰化和去乙酰化，从而影响细胞周期、凋亡和分化相关蛋白的表达水平[12]。2.1 组蛋白乙酰化水平与SCLC发生发展密切相关 一项实验研究表明，乙酰化组蛋白H3在SCLC和NSCLC细胞中的表达有显著性差异，以前者表达较高。Notch信号通路是SCLC发生发展和化疗耐药的主要调节通路之一[13]，具有肿瘤抑制作用。此研究中，Notch1在SCLC细胞系（除H69AR、SBC-3）中失活，其表达水平与组蛋白H3乙酰化有关。Notch1阳性表达的细胞系中乙酰化组蛋白H3富集在Notch1启动子区域，表达水平较高，Notch1阴性表达的细胞系中Notch1启动子周围的乙酰化组蛋白H3水平较低。这说明组蛋白去乙酰化是Notch1基因在SCLC中表观失活的原因[14]915-918。此外，组蛋白H3赖氨酸23(histone 3 lysine 23, H3K23)乙酰转移酶KAT6B在SCLC中失活，若其活性恢复可对SCLC产生抑制作用，它的乙酰化水平降低是SCLC发生的重要标志[15]。由此可见，组蛋白去乙酰化可以调控相关基因的表达从而促进SCLC发生发展。2.2 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 HDAC在许多癌症中过表达，干扰其活性、抑制其功能是有效的治疗手段。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone deacetylase inhibitor, HDACI）是重要的表观调控药物，高效低毒，通过靶向阻断HDAC去乙酰化、促进组蛋白乙酰化发挥抗肿瘤作用。根据化学结构的不同，HDACIs分为异羟肟酸（异羟肟酸酯）、短链脂肪（脂肪族）酸、环状四肽、苯甲酰胺和Sirt抑制剂5类[16]。在单药和/或与传统化疗药物联合使用时，HDACI可阻滞细胞周期，抑制迁移和侵袭[17]，诱导癌细胞分化、自噬[18]、凋亡，抗血管生成。当前，伏立诺他（Vorinostat ,SAHA）、罗米地辛（Romidepsin）、帕比司他（Panobinostat）等被批准用于血液系统恶性肿瘤的治疗[19]。丙戊酸(valproic acid ,VPA)作为HDACI可抑制SCLC细胞生长，诱导细胞凋亡，阻滞SCLC细胞周期于G1期。以上抑制作用是通过降低HDAC4表达，增加组蛋白H4乙酰化实现的。同时发现，VPA激活了SCLC中Notch1、Notch靶基因HES1和P21的Notch信号通路。此外，它还可以上调生长抑素受体II（somatostatinreceptor2，SSTR2）并增强受体靶向细胞毒素的抑制作用[20]。在经曲古抑菌素A (Trichostatin A ,TSA)处理后的SCLC细胞系中， Notch1启动子区域H3乙酰化水平增加，从而导致Notch1蛋白表达。此外，经TSA处理后，SCLC细胞黏附增加，上皮间质转化标志物表达减少，细胞增殖减少，细胞凋亡激活，可能与TSA诱导Notch1表达有关[14]916-918。这些研究成果为HDACI在 SCLC治疗中的应用提供了依据。为了达到最好治疗效果，药物用量、联合用药及使用顺序仍需深入研究。
[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白[/b][/url]（[/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体]）技术原理是现代生物技术的核心之一，它通过将目的基因插入到表达载体中，在宿主细胞中进行表达，从而获得所需的重组蛋白。这一技术的关键是选择合适的表达载体和宿主细胞，以确保目的基因的正确表达和蛋白质的正确折叠。重组蛋白技术的应用范围非常广泛，包括药物研发、疫苗生产、诊断试剂、生物治疗等领域。通过重组蛋白技术，我们可以快速、高效地获得具有特定结构和功能的蛋白质，为科学研究、医学和工业应用提供重要的工具和资源。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]构建重组蛋白的技术路线主要包括以下几个步骤：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①目的基因的获取：根据所需蛋白质的氨基酸序列，设计并合成相应的基因片段，或者从基因文库中筛选出相应的基因。[/font][font=宋体]②表达载体的构建：将目的基因插入到表达载体中，常用的表达载体包括质粒、病毒等，它们可以在宿主细胞中进行复制和表达。[/font][font=宋体]③宿主细胞的选择：选择适合的宿主细胞，如细菌、酵母、昆虫、哺乳动物等，以确保目的基因的正确表达和蛋白质的正确折叠。[/font][font=宋体]④重组蛋白的表达：将构建好的表达载体转入宿主细胞，进行培养或诱导，使目的基因在细胞内表达，产生重组蛋白。[/font][font=宋体]⑤重组蛋白的纯化：通过各种分离纯化技术，如离心、过滤、沉淀、色谱等，将重组蛋白从细胞中提取出来，并进行纯化和精制。[/font][font=宋体]⑥重组蛋白的鉴定：通过各种检测技术，如质谱、免疫学检测等，对重组蛋白进行鉴定和质量控制。[/font][font=宋体]通过以上技术路线，可以构建出具有特定结构和功能的重组蛋白，为科学研究、医学和工业应用提供重要的工具和资源。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白技术应用：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]一、药物研发与生产：[/font][font=宋体]靶点验证：在药物研发初期，可以使用重组蛋白来验证药物作用的靶点。[/font][font=宋体]抗体药物：利用重组蛋白技术可以生产人源化抗体，用于癌症治疗、自身免疫性疾病治疗等。[/font][font=宋体]直接药物：某些重组蛋白本身就是药物，如胰岛素、生长激素等。[/font][font=宋体]二、疫苗开发：[/font][font=宋体]基因工程疫苗：使用重组蛋白技术生产疫苗，例如针对乙肝、流感等疾病的疫苗。[/font][font=宋体]三、诊断试剂：[/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测：重组蛋白可以用作抗原或抗体，用于各种免疫检测技术，如[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、免疫荧光等。[/font][/font][font=宋体]四、生物治疗：[/font][font=宋体]细胞因子：重组蛋白技术可以生产各种细胞因子，用于促进细胞生长、分化、凋亡等。[/font][font=宋体]五、基础研究：[/font][font=宋体]结构生物学：利用重组蛋白研究蛋白质的结构与功能关系。[/font][font=宋体]信号转导研究：通过重组蛋白研究细胞内信号转导过程。[/font][font=宋体]六、其他应用：[/font][font=宋体]酶工程：生产具有特定性质的酶。[/font][font=宋体]七、农业应用：如生产抗虫作物或具有特定性状的动物。[/font][font=宋体]通过以上几个方面，重组蛋白技术在生物医药领域中发挥着越来越重要的作用，为疾病治疗、疫苗开发、基础研究等提供了有力的技术支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白纯化服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更多重组蛋白详情可以以关注义翘神州：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]
[font=宋体][b]重组蛋白、融合蛋白与天然蛋白的区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用基因工程技术产生的，通常是由转基因动物的乳腺产生，其作为生物制药在医学领域中作用显著。利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成[/font][font=宋体]“批量生产药物的工厂”。方法：是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白又称为[/font][font=宋体]“标签蛋白”，常用的标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Strep[/font][font=宋体]标签。融合蛋白是通过[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将要表达的目的蛋白基因和表达载体上融合蛋白基因相连，通过这种方式表达出来的蛋白质，就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重组蛋白。融合蛋白表达是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]天然蛋白质是在自然界中存在的，不经过人工的任何修饰或加工，比如大豆中的蛋白质和病毒表面的蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重组蛋白常见问题解析：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白为什么要冻干？冻干对蛋白的影响有哪些？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质对热敏感，冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来，提高蛋白的稳定性并延长保存时间，同时降低运费。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？一般冻干保护剂有哪几种？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加[/font][font=Calibri]8%[/font][font=宋体]（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集；甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂，可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]温馨提示：对于大多数蛋白，重悬后在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃仅能短期保存[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。如想长期保存，请先配制成稀释液[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]其中必须含有载体蛋白，如[/font][font=Calibri]0.1% BSA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]5%HSA[/font][font=宋体]，或[/font][font=Calibri]10% FBS)[/font][font=宋体]，然后分装冻存于[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃或[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]℃。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]如何重构冻干粉？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]请查看您的货物随附的分析证书以获取有关重构的确切说明，因为并非所有产品都在相同条件下重构。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇晃以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]为什么我的管内几乎看不见蛋白产品？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如牛血清白蛋白[/font][font=Calibri](BSA)[/font][font=宋体]，人血清白蛋白[/font][font=Calibri](HSA)[/font][font=宋体]和蔗糖等，并以最低含盐量的溶液进行冻干时，常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]应如何确定细胞因子的种属交叉活性？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。[/font][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。 [/font][font=Calibri]3) IL-7[/font][font=宋体]等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。[/font][font=Calibri]4) [/font][font=宋体]干扰素，[/font][font=Calibri]GM-CSF, IL-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。[/font][font=Calibri]5) [/font][font=宋体]相反，成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGFs)[/font][font=宋体]和神经营养素[/font][font=Calibri](neurotrophins)[/font][font=宋体]高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]什么是载体蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白如[/font] [font=Calibri]HSA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]BSA [/font][font=宋体]用于提高重组蛋白的稳定性，并有助于避免产品粘在小瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]我应该如何储存重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于长期储存，蛋白质溶液应与载体蛋白（例如[/font] [font=Calibri]0.1% BSA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]0.1% HSA[/font][font=宋体]）分装保存，并在 [/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下冷冻保存。请记住，每个冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质变性。除非分析证书上另有说明，否则大多数重组蛋白的保质期为一年。如果将它们保存在分析证书上所述的最佳存储条件下，则提供此保证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的数量？为什么我的检测产生的蛋白质数量与您的结果不同？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]等方法确定重组蛋白的数量。不同的测定产生不同的量化结果。有时，如果您进行不同的检测，差异可能会很大。蛋白质也有可能在储存过程中形成聚集体，在重组和离心后导致损失。我们对每批产品进行质量控制测试，但是，同一批次中的一些小瓶可能与其他小瓶不同（这种情况很少发生）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白资源[/b][/url]详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font]
[font=宋体]重组蛋白在生物医药领域的应用越来越广泛，然而，许多研究者在使用过程中可能会遇到各种问题。本文将对重组蛋白常见问题进行解析，包括其制备、纯化、保存以及应用等方面的问题，为您提供权威的解答和全面的指导。通过阅读本文，您将能够更好地理解和应用重组蛋白技术，提高研究工作的效率和准确性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]如何生产重组蛋白？真核表达（酵母、昆虫和哺乳动物细胞）与大肠杆菌表达相比有什么优势？[/font][/b][/font][font=宋体]我们的大多数重组蛋白都是在真核系统中生产的，分析证书中会为您提供有关单个产品如何生产的具体信息。真核生物作为表达系统有几个优势。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]真核生物本身很少分泌原生蛋白，但却能分泌重组蛋白。因此，真核生物系统通常是分泌表达重组蛋白然后进行纯化。在大肠杆菌中制造的重组蛋白通常被定位在包涵体中。从包涵体中纯化重组蛋白需要在苛刻的条件下进行，然后再进行重折叠处理。这些苛刻的处理会对蛋白质的功能产生负面影响。[/font][font=宋体]真核生物分泌的重组蛋白由高尔基体处理，因此可以进行翻译后修饰。这些修饰包括糖基化、磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要经过修饰才能发挥功能、正常折叠或溶解。[/font][font=宋体]真核生物没有像大肠杆菌那样的细菌细胞壁，因此不存在可影响目标系统炎症反应的内毒素（脂多糖）。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]当我打开小瓶时，什么也没看到。我怎么知道小瓶里有蛋白质？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]打开小瓶之前要先离心！我们的大多数产品都是用低浓度缓冲液冻干的，因此几微克的产品可能不太明显。我们建议在打开前将小瓶放入微型离心机中离心[/font] [font=Calibri]20-30[/font][font=宋体]秒，以将可能滞留在瓶盖或试管侧面的蛋白质离心到小瓶底部。我们的质量控制程序可确保每小瓶中的产品量正确无误。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]如何复溶冻干粉？重组蛋白[/font][font=Calibri]f[/font][font=宋体]复溶可接受的体积是多少？重组蛋白复溶后的浓度是多少？[/font][/b][/font][font=宋体]请查阅您的货物中包含的分析证书，以了解复溶方法，因为并非所有产品都在相同的条件下进行复溶。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇动以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的浓度取决于复溶体积。例如，如果在[/font][font=Calibri]100μL[/font][font=宋体]载体蛋白溶液中复溶[/font][font=Calibri]10μg[/font][font=宋体]重组蛋白，则浓度为[/font][font=Calibri]10μg/100μL[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]100μg/mL[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]如何储存重组蛋白？重组蛋白的保质期多长？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]若要长期保存，蛋白溶液应与载体蛋白（如[/font][font=Calibri]0.1% BSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]0.1% HSA[/font][font=宋体]）一起以等分的形式保存，并在[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]下冷冻保存。请注意，每次冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质发生变性。除非分析证书上另有说明，大多数重组蛋白的保质期为一年。请按照分析证书上的规定在最佳储存条件下保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]什么是载体蛋白？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白（如[/font][font=Calibri]HSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]）用于提高重组蛋白的稳定性，避免产品粘附在瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]6. [/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的量？为什么我的检测结果与你们的结果不同？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]和其他方法确定重组蛋白的量。不同的检测方法会产生不同的定量结果。如果您采用不同的检测方法，有时差异会很大。蛋白质在储存过程中也有可能形成聚集体，从而在复溶和离心后造成损失。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]义翘神州使用哪些标签进行蛋白质表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化？ 如果我需要去除标签怎么办？[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]常用标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx [/font][font=宋体]等。我们的科研人员会根据蛋白质的特性和客户的具体要求，为不同蛋白推荐不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签。一般，[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]是蛋白纯化的首选标签，它也可以与其他标签构建双标签表达。义翘神州提供广泛的蛋白生产和纯化服务，包括标签去除和内毒素去除等服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白质表达、纯化的一站式服务，可以根据客户需求，选用不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系，为蛋白表达、纯化提供多种选择，帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。如果对上述问题还有疑问，可以参看：[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达纯化服务[/b][/url]详情[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]
[font=宋体]在现代生命科学研究中，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白表达技术[/b][/url]扮演着至关重要的角色。通过将外源基因导入宿主细胞，并使其表达特定蛋白，我们能够获取大量高纯度的重组蛋白，为疾病治疗、药物研发和生物工程等领域提供了强有力的支持。本文将介绍重组蛋白表达的原理、表达系统、生产步骤以及应用前景。[/font][font=宋体][b]一、重组蛋白表达的原理[/b][/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白表达是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术，将目标基因（外源基因）导入宿主细胞中，并通过宿主细胞的生物机制使其表达出特定蛋白。其主要步骤包括：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]基因克隆：将目标基因经过[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增后，与表达载体连接，形成重组质粒。[/font][/font][font=宋体]转染或转化：将重组质粒导入宿主细胞中，可以使用化学方法、电穿孔或者嗜热菌等方式进行转染或转化。[/font][font=宋体]表达蛋白：重组质粒进入宿主细胞后，融合到宿主细胞的染色体中，随后遵循细胞的转录和翻译机制，表达出目标蛋白。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、常见的重组蛋白表达系统[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌表达系统：大肠杆菌是常用的重组蛋白表达宿主细胞之一。其优点在于生长快速、易于培养，并且能够产生大量的蛋白。此外，大肠杆菌的遗传工具和代谢途径也被广泛研究，提供了便利。[/font][font=宋体]酵母表达系统：酵母表达系统包括酿酒酵母和毕赤酵母。这些酵母细胞具有真核细胞的特点，能够进行正确的蛋白折叠和修饰。同时，酵母细胞也可以进行大规模培养和高表达，适用于一些复杂蛋白的表达。[/font][font=宋体]昆虫细胞表达系统：昆虫细胞表达系统常用于大规模蛋白表达。昆虫细胞具有真核细胞的优势，能够对蛋白进行正确的折叠和修饰，适合于表达大量需求复杂结构的重组蛋白。[/font][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统：哺乳动物细胞的表达系统可用于高效表达复杂蛋白和进行蛋白质研究。哺乳动物细胞具有真核细胞特点，能够进行正确的蛋白质修饰和折叠，并且在一些特殊情况下需要考虑到人类蛋白的免疫原性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、重组蛋白生产步骤[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞中有两个蛋白生产阶段：转录和翻译，被称为分子生物学的中心法则。换言之，转录和翻译步骤属于重组蛋白表达步骤。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][font=宋体]，例如义翘神州[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、重组蛋白表达技术的应用前景[/b][/font][font=宋体]药物研发：重组蛋白表达技术被广泛应用于药物研发领域，用于生产重组蛋白药物。这些药物包括多肽类、蛋白类和抗体类药物，如生长因子、抗体药物和血液制剂等。通过重组蛋白表达技术，我们可以获得高效纯度的药物，满足临床上的需求。[/font][font=宋体]生物工程：重组蛋白表达技术被广泛应用于生物工程领域，用于生产特定的蛋白产品。这些产品可以应用于食品、化妆品、工业发酵等领域，如酶制剂、生物染料和生物材料等。[/font][font=宋体]疾病治疗：通过重组蛋白表达技术，我们能够合成特定的蛋白，用于疾病的治疗和诊断。例如，利用重组抗体技术，可以开发出用于癌症治疗和免疫治疗的抗体药物。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]
[font=宋体] [font=宋体]重组蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体][b]重组蛋白纯化常用的几个方法如下：[/b][/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白纯化色谱法：[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]色谱法无疑是下游处理中主要和常用的操作，因为色谱法相比其他单元操作具有某些优势。例如色谱法支持高分辨率的效率，可以分离分子性质非常相似的复杂粗制混合物。此外，色谱法是生物工艺中遇到的稀释溶液中捕获分子的理想选择。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]柱色谱法[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]层析法[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的原理是将一个大的蛋白池分离成许多小的蛋白池，其中一些富集了目标蛋白。虽然柱色谱法有昂贵的专业设备，但只需要基本的设备就可以了。[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]2.[/font][font=宋体]亲和色谱法：[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]亲和色谱法依赖于蛋白对基质结合配体的特异性和可逆性结合。该配体可以直接与目的蛋白结合或共价连接到蛋白的标签上与其相结合。亲和层析通常是最有效的纯化方法，通常用在纯化方案的早期阶段。这种特定的亲和相互作用能够捕获目标物，同时去除溶液中的污染物或其他分子，并一步富集或纯化目标分子，使其与其他不能结合配体的分子分离。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]除了理论上蛋白能够通过免疫亲和色谱纯化之外，亲和法仅限于具有特异结合特性的蛋白，而免疫亲和色谱是所有亲和技术中特异性最高的。[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]3.[/font][font=宋体]离子交换色谱法：[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]离子交换色谱[/font][font=Calibri](IEX)[/font][font=宋体]是一种主要基于蛋白净电荷的色谱分离方法，通常用于追踪脱酰胺和琥珀酰亚胺的形成。[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]有两种类型：阳离子交换和阴离子交换色谱法。当缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值高于此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]时，蛋白带负电（阴离子）；当[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值低于此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]时，蛋白带正电（阳离子）。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]所有蛋白都表现出净电荷，这取决于蛋白氨基酸组成和任何共价连接的修饰。蛋白净电荷受溶解它的溶剂[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]所影响，因为溶剂会与蛋白进行氢离子交换。通常情况下，蛋白与[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]的结合必须通过反复试验来确定，使用一系列[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值的溶剂以确定蛋白保留的最佳[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]。通常溶剂的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值与[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]相差约一个[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]单位就足以实现蛋白结合。[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]4.HPLC[/font][font=宋体]法蛋白纯化：[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]色谱法是一种常用分析技术，可以将混合物分离成单独的成分。高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法通常称为[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]，在化学生物学研究实验室中广泛应用。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在化学生物学中，单个分析物（如多肽）通常经色谱纯化后作为一种功能工具使用。高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法[/font][font=Calibri](HPLC)[/font][font=宋体]是一种用于分析和分离液体样品的方法。在化学生物学实验室中，[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]是纯化多肽（人工合成或用合成器自动合成）和其他中小型有机分子不可或缺的过程。它还允许使用颗粒非常小的柱填料，这就给固定相和流经它的分子之间产生相互作用提供了更大的表面积，这样可以更好地分离混合物的成分。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]针对特定应用开发的[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]色谱柱有很多种类，如正相[/font][font=Calibri]HPLC(NP-HPLC)[/font][font=宋体]和反相[/font][font=Calibri]HPLC(RP-HPLC)[/font][font=宋体]。正确选择色谱柱是获得良好的[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]结果的关键。色谱柱的选择取决于我们希望分离的混合物的组分特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白质表达、纯化的一站式服务，可以根据客户需求，选用不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系，为蛋白表达、纯化提供多种选择，我们致力于为客户提供高质量、低成本的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达纯化服务[/b][/url]详情尽在：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font]
[font=宋体]重组蛋白是生物科学领域的重要研究对象，其类型多样且具有广泛的应用。然而，在研究和使用过程中，人们可能会遇到各种问题。本文将对这些常见问题进行解析，以帮助读者更好地理解和应用重组蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重组蛋白的主要类型包括：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①生长因子：一组细胞间信号转导蛋白，由细胞产生并用于通信。其等可刺激多种细胞过程，包括细胞分裂、分化、迁移和存活。主要生长因子家族包括： [/font][font=宋体][font=Calibri]FGF[/font][font=宋体]：成纤维细胞生长因子[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]VEGF[/font][font=宋体]：血管内皮生长因子[/font][/font][font=宋体]神经营养因子：一个生长因子亚群，主要作用于大脑和神经系统相关的细胞[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②细胞因子：包括对免疫细胞功能和通信至关重要的干扰素、白细胞介素、促炎性细胞因子和趋化因子[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③酶：可进行化学转化的生物活性蛋白；包括重组蛋白酶、激酶和核酸酶[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review]重组蛋白[/url]常见问题解析：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①如何准确评估重组蛋白的生物活性？[/font][font=宋体][font=宋体]生物测定旨在测量给定生长因子或细胞因子的生物活性。在大多数情况下，生物测定是基于细胞的检测，会使用不同的指示细胞，例如原代细胞或细胞系。常用的生物测定包括细胞增殖检测、趋化作用检测、细胞因子生成检测和细胞毒性检测。给定细胞因子的生物活性以[/font] [font=Calibri]ED50 [/font][font=宋体]表达，它代表诱导 [/font][font=Calibri]50% [/font][font=宋体]最大反应的细胞因子浓度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②应如何有效地复溶重组蛋白？[/font][font=宋体][font=宋体]首先，对容器进行离心，使粉末聚集在管的底部。我们通常建议将其复溶至[/font] [font=Calibri]0.1 [/font][font=宋体]至 [/font][font=Calibri]1.0 mg/mL [/font][font=宋体]浓度。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水复溶。但产品数据表或 [/font][font=Calibri]CoA [/font][font=宋体]将说明何时需要使用水以外的稀释液。也可在这些文档中找到推荐的溶液、载体蛋白浓度和扩展的储存条件。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③重组蛋白如何保存？[/font][font=宋体][font=宋体]通常，我们建议将冻干重组蛋白储存在[/font] [font=宋体]–[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下，但可在 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]或室温下短期储存。复溶蛋白溶液时，我们建议您制备至少含 [/font][font=Calibri]10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]L [/font][font=宋体]蛋白溶液的工作等份试液，并在 –[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]至 –[/font][font=Calibri]80[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下储存。不允许进行多次反复冻融。有关储存冻干和复溶重组蛋白的产品特定说明，请见产品手册、数据表或检验证书 [/font][font=Calibri](CoA)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④在冻干重组蛋白瓶中未发现蛋白沉淀的可能原因是什么？[/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白通常不含载体蛋白或添加剂（如[/font] [font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HSA[/font][font=宋体]、蔗糖等）。因此在冻干过程中，蛋白成品可能为薄薄的，有时肉眼不可见的薄膜形式沉积在小瓶上，而非颗粒状。沉淀物的大小（如果有）与样品瓶中的重组蛋白数量没有直接关系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为确保蛋白产物的完全回收，在打开冻干重组蛋白瓶之前，建议对其进行离心[/font] [font=Calibri]20[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]30 [/font][font=宋体]秒，以将可能残留在瓶盖或侧面的任何蛋白聚集到瓶底。复溶后，您可以通过在 [/font][font=Calibri]SDS-PAGE [/font][font=宋体]上运行少量产品来确认是否存在产品蛋白。通常来说，只要在丙烯酰胺凝胶上上样 [/font][font=Calibri]10 ng [/font][font=宋体]的蛋白，应该就能看到预期大小的蛋白条带。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达服务[/b][/url]，同时可以根据客户需求，选用不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系，为蛋白表达、纯化提供多种选择，帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。有需求可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font]
[b][font=宋体][font=宋体]什么是重组蛋白疫苗[/font][font=Calibri]? [/font][/font][/b][font=宋体]即将某种病毒的目的抗原基因构建在表达载体上，将已构建的表达蛋白载体转化到细菌、酵母或哺乳动物或昆虫细胞中，在一定的诱导条件下，表达出大量的抗原蛋白，通过纯化后制备的疫苗。[/font][font=宋体] [/font][b][/b][font=宋体][font=宋体][b]重组蛋白疫苗的基本原理[/b]是将病毒表面的刺突蛋白或受体结合区（[/font][font=Calibri]Receptor binding domain, RBD[/font][font=宋体]）的一部分，与宿主细胞结合制成疫苗。通过结合重组蛋白和多种免疫素来增强免疫应答，促进抗体产生，从而诱导免疫系统产生高强度的识别位点，使人体具备更好的免疫抵抗力，并可迅速减轻症状，有效地预防和治疗传染病。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]重组蛋白疫苗优势：[/font][/b][font=宋体]①不养活病毒，无需担心病毒外泄，对生产车间的生物安全等级要求低；[/font][font=宋体][font=宋体]②利用转基因技术生产病毒[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白上的[/font][font=Calibri]RBD[/font][font=宋体]蛋白，能实现高产量、高纯度、低成本；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③重组蛋白疫苗只含[/font][font=Calibri]RBD[/font][font=宋体]蛋白，纯度高，安全性更好。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白疫苗缺点：[/font][/b][font=宋体]①免疫原性较差：相比于一些其他类型的疫苗，重组蛋白疫苗的免疫原性可能较差。这意味着需要使用较高剂量的疫苗才能激发免疫反应，从而增加疫苗的成本和副作用的发生率。[/font][font=宋体]②需要辅助免疫刺激剂：重组蛋白疫苗通常需要添加辅助免疫刺激剂，如佐剂或载体，以增强免疫原性和免疫反应。这些辅助免疫刺激剂可能会增加疫苗的副作用和成本，并且有时可能会引起过敏反应。[/font][font=宋体]③需要多次接种：相对于一些其他类型的疫苗，重组蛋白疫苗需要进行多次接种，以达到充分的免疫效果。这可能会增加接种的难度和成本，并且需要较长时间才能建立起有效的免疫保护。[/font][font=宋体]④局部和全身反应：虽然重组蛋白疫苗的安全性较高，但含有佐剂的疫苗可能引起更多局部反应，如注射部位发红、肿胀，以及更多全身反应，如发热、寒战和身体疼痛。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]详情可参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font]
2 hours before use. (将重悬液在4 ℃ 静置2小时以上)第 3 步：该重悬液在 2-8 ℃ 最长可保存 1 周。用说明书上推荐的溶液将细胞因子或重组蛋白重悬到推荐的浓度后，细胞因子或重组蛋白可放置在2-8 ℃ ，即冰箱的冷藏室。在这种条件下，细胞因子或重组蛋白的活性最长可保持1周。这对一个周期为5-7天的实验，如DC(树突状细胞)的诱导成熟是足够的。在此期间，只要每次从冰箱里吸取一定量的细胞因子或重组蛋白溶液加入到培养体系内即可。其实，说明书上推荐的浓度对于一般的实验来讲是比较高的。所以用户通常会将该溶液进一步稀释后再放在4 ℃ 保存，待1周内用完。如进行稀释，必须遵照下面第4步的方法，即需用含载体蛋白的溶液进行稀释，否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降，细胞因子或重组蛋白的总活性则大为减弱。第 4 步：如要长期保存，则需用含载体蛋白 ( 如 0.1% BSA ，或 10% FBS ，或 5% HSA) 的溶液进一步稀释，然后分装冻存于 -20 ℃ 至 -80 ℃ 。如果一个实验周期长于一周，或配制的细胞因子或重组蛋白一次用不完，我们就需对细胞因子或重组蛋白进行长期保存。方法是：将已重悬的细胞因子或蛋白用含载体蛋白，如0.1% BSA(牛血清白蛋白)，10% FBS(胎牛血清)，5% HSA(人血清白蛋白)的溶液将重悬液进一步稀释，然后分装冻存于-20 ℃ 至-80 ℃ ，即常规冰箱的冷冻室或超低温冰箱中。问：经常有人会在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后直接分装冻存于-20 ℃ 至-80 ℃ ，这样可以吗? 答：不行。我们知道，塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用，也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。粘附后，蛋白是很难与管壁分离的。做过ELISA实验的人都知道，ELISA的包被抗体(Capture antibody)就是通过这种粘附作用包被到酶标板上的。载体蛋白，如1% BSA，10% FBS (胎牛血清)和5% HSA等的主要作用是预先封
[font=宋体][font=宋体]重组蛋白是由操作基因[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]重组基因编码的蛋白，由特异性重组表达系统生产。重组基因是一种新的遗传组合，其中插入了来自不同分子或来自其他物种的一个或多个[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段或基因。与天然蛋白相比，重组蛋白可以相对轻松地实现大量生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白在细胞因子和生长因子的研究、酶和激酶的研究以及补体系统功能等生物过程方面发挥着重要作用。此外，重组蛋白被称为高效药物，不会产生脱靶副作用，比小分子药物的开发时间更短。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]下面是关于重组蛋白资源常见问题解析：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白为什么要冻干？冻干对蛋白的影响有哪些？[/font][/font][font=宋体]蛋白质对热敏感，冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来，提高蛋白的稳定性并延长保存时间，同时降低运费。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？一般冻干保护剂有哪几种？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加[/font][font=Calibri]8%[/font][font=宋体]（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集；甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂，可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]温馨提示：对于大多数蛋白，重悬后在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃仅能短期保存[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。如想长期保存，请先配制成稀释液[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]其中必须含有载体蛋白，如[/font][font=Calibri]0.1%BSA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]5%HSA[/font][font=宋体]，或[/font][font=Calibri]10%FBS)[/font][font=宋体]，然后分装冻存于[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃或[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]℃。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]如何重构冻干粉？[/font][/font][font=宋体]请查看您的货物随附的分析证书以获取有关重构的确切说明，因为并非所有产品都在相同条件下重构。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇晃以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]为什么我的管内几乎看不见蛋白产品？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如牛血清白蛋白[/font][font=Calibri](BSA)[/font][font=宋体]，人血清白蛋白[/font][font=Calibri](HSA)[/font][font=宋体]和蔗糖等，并以最低含盐量的溶液进行冻干时，常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]应如何确定细胞因子的种属交叉活性？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1)[/font][font=宋体]除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。[/font][font=Calibri]2)[/font][font=宋体]许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。[/font][font=Calibri]3)IL-7[/font][font=宋体]等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。[/font][font=Calibri]4)[/font][font=宋体]干扰素，[/font][font=Calibri]GM-CSF,IL-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。[/font][font=Calibri]5)[/font][font=宋体]相反，成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGFs)[/font][font=宋体]和神经营养素[/font][font=Calibri](neurotrophins)[/font][font=宋体]高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]什么是载体蛋白？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白如[/font][font=Calibri]HSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]用于提高重组蛋白的稳定性，并有助于避免产品粘在小瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]我应该如何储存重组蛋白？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对于长期储存，蛋白质溶液应与载体蛋白（例如[/font][font=Calibri]0.1%BSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]0.1%HSA[/font][font=宋体]）分装保存，并在[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]下冷冻保存。请记住，每个冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质变性。除非分析证书上另有说明，否则大多数重组蛋白的保质期为一年。如果将它们保存在分析证书上所述的最佳存储条件下，则提供此保证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的数量？为什么我的检测产生的蛋白质数量与您的结果不同？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]等方法确定重组蛋白的数量。不同的测定产生不同的量化结果。有时，如果您进行不同的检测，差异可能会很大。蛋白质也有可能在储存过程中形成聚集体，在重组和离心后导致损失。我们对每批产品进行质量控制测试，但是，同一批次中的一些小瓶可能与其他小瓶不同（这种情况很少发生）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]9.[/font][font=宋体]如何区分重组蛋白、融合蛋白和天然蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用基因工程技术产生的，通常是由转基因动物的乳腺产生，其作为生物制药在医学领域中作用显著。利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成[/font][font=宋体]“批量生产药物的工厂”。方法：是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白又称为[/font][font=宋体]“标签蛋白”，常用的标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Strep[/font][font=宋体]标签。融合蛋白是通过[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将要表达的目的蛋白基因和表达载体上融合蛋白基因相连，通过这种方式表达出来的蛋白质，就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重组蛋白。融合蛋白表达是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]天然蛋白质是在自然界中存在的，不经过人工的任何修饰或加工，比如大豆中的蛋白质和病毒表面的蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白资源[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font]
目的要求（1）了解克隆基因表达的方法和意义。（2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。实验原理克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。试剂和器材一、试剂 LB液体培养基：Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL. 氨苄青霉素：100mg/mL 上样缓冲液：100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 10 mM2-ME, pH8.0 Washing Buffer：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3 Elution Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 500 mM Imidazole, pH8.0 IPTG二、器材摇床，离心机，层析柱（1′10 cm）操作方法一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5mL LB液体培养基中（含100ug/mL 氨苄青霉素），37℃震荡培养过夜。2. 转接1mL过夜培养物于100mL（含100ug/mL 氨苄青霉素）LB液体培养基中，37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h.4. 12，000rpm 离心10 min, 弃上清，菌体沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。二、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的分离、纯化1. NTA层析柱的准备：在层析柱中加入1mL NTA介质，并分别用8mL 去离子水，8mL上样缓冲液洗涤。2. 重组蛋白的变性裂解：在冰浴中冻融菌体沉淀，加入5mL上样缓冲液, 用吸管抽吸重悬，超声波破裂菌体，用振荡器等轻柔的混匀样品60min, 4℃ 12000rpm 离心 30 min, 将上清吸至一个干净的容器中，并弃沉淀。取10ul 上清样品用于SDS-PAGE 分析。3. 上清样品以10-15mL/h 流速上Ni2+-NTA柱，收集流出液，取10ul样品用于SDS-PAGE 分析。4. 洗脱杂蛋白：用Washing Buffer以10-15mL/h流速洗柱，直至OD280 = 0.01.分步收集洗脱液，约3-4h,取10ul洗脱开始时的样品用于SDS-PAGE 分析。5. 洗脱目标蛋白：用Elution Buffer洗柱，收集每1 mL 级分，分别取10ul样品用于SDS-PAGE 分析。
[font=宋体][font=宋体]义翘神州研发团队拥有多年的[url=https://cn.sinobiological.com/category/protein][b]重组蛋白[/b][/url]研发经验。多年来，我们的团队已开发出超过[/font][font=Calibri]6,000[/font][font=宋体]种重组蛋白，涵盖免疫检查点、抗体药物靶点、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗靶点、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体、流感病毒蛋白以及细胞因子等热门研究领域。义翘神州重组蛋白具有高纯度、高生物活性和低内毒素水平等特性，可为生物药靶点发现、蛋白质结构和功能分析、细胞疗法和重组酶酶学性质等科学研究提供支持。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①新冠病毒抗原 [/font][font=Calibri]SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Antigens[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了一组新冠病毒重组抗原，包括[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]（核衣壳）蛋白、[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白的[/font][font=Calibri]S1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]S2[/font][font=宋体]亚基、[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白的受体结合结构域（[/font][font=Calibri]RBD[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]PLpro[/font][font=宋体]蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]2015-2024 [/font][font=宋体]流感疫苗株重组抗原[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州持续推出[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]NA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]NP[/font][font=宋体]重组流感抗原，覆盖[/font][font=Calibri]WHO[/font][font=宋体]推荐的[/font][font=Calibri]2015-2024[/font][font=宋体]流感疫苗株，可用于抗体滴度测定、疫苗效力测定及抗原表位测定等各种生化测定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③免疫检查点蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]涵盖[/font][font=Calibri]PD-1/PD-L1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CTLA-4[/font][font=宋体]获批抗体药物以及候选药物等热门免疫检查点蛋白，如[/font][font=Calibri]TIM-3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD47[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GITR[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗靶点蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]涵盖许多热门的细胞疗法靶点，包括[/font][font=Calibri]CD19[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BCMA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD20[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CEA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD33[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]EGFR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]MSLN[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]治疗靶点蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一系列[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]靶点蛋白产品，涵盖实体瘤和恶性肿瘤[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]余个热门靶点。[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]验证的位点特异性生物素标记蛋白和无标记蛋白支持您的[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥多特异性抗体靶点蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]高质量的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]系列蛋白、多次跨膜蛋白、免疫检查点靶点蛋白以及更多蛋白产品供您选择，应用包括抗体药物的开发筛选、细胞学验证以及种属交叉反应等多个场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑦[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]靶点蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]高活性，高纯度，多种属，覆盖[/font][font=Calibri]TROP-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ROR1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Nectin-4[/font][font=宋体]等热门[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]靶点，满足免疫、抗体筛选、细胞功能验证等应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑧抗体治疗靶点蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]涵盖多种抗体治疗靶点，包括[/font][font=Calibri]PD-1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CD20[/font][font=宋体]获批抗体药物以及潜在的候选药物靶点，如[/font][font=Calibri]PD-1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Her2/ERBB2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]EGFR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]c-MET[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL17[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TNF-alpha[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑨细胞因子和生长因子——提供[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子[/font][/font][font=宋体]涵盖整个细胞因子家族，包括白介素、趋化因子和肿瘤坏死因子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑩过敏原重组蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]生产重组过敏原蛋白的设施经过[/font][font=Calibri]ISO 9001:2015[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]ISO 13485:2016[/font][font=宋体]认证，可确保重组蛋白高批次间一致性和高纯度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]11[/font][font=宋体]、[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url][/font][/font][font=宋体][font=宋体]涵盖多个种类，如单抗药物靶点、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]相关靶点和重要[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]12[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]涵盖多个物种的绝大多数[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体。经验证，每个受体都具有与免疫球蛋白结合的高生物活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]……[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州是重组蛋白研发的全球领导者，不仅拥有先进的技术平台、同时有严格的质量控制体系、高品质重组蛋白产品[/font][font=宋体]……为其做保障，为大家提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白生产[/b][/url][/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b][font=Calibri]"[/font][font=宋体]一站式[/font][font=Calibri]"[/font][/b][/url][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]技术服务[/b][/url]。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白表达纯化服务内容：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font]
[font=宋体][font=宋体]蛋白标签（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）又称为标签蛋白，是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]体外重组技术，将目的蛋白与其融合表达形成的一种多肽或蛋白。这种标签有助于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等操作。随着技术的不断进步，研究人员已经成功开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。然而，由于不同的蛋白标签具有各自的特性，因此在质粒构建过程中常常会遇到多种问题。今天，我们将深入探讨蛋白标签的各个方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白标签类型[/b][/font][font=宋体]蛋白标签主要分为三类，适用于不同的应用场景：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 [/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。最常用的表位标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②亲和标签一般较长，可增加蛋白溶解度，广泛应用于重组蛋白的纯化，如[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）、红色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]RFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。例如，[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是一种由六个组氨酸残基组成的融合标签，可以插入目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，这使得[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]标签可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，从而对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，蛋白标签在重组蛋白生产中扮演着重要的角色，它们不仅提高了生产效率，还为蛋白的检测、纯化和示踪提供了便利。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]有：[/font][font=Calibri]His-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production][b]Myc-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]……义翘神州不仅可提供重组蛋白表达定制服务，也可提供对应标签抗体产品及融合蛋白标签切除常用工具酶，如[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]蛋白酶、[/font][font=Calibri]3C[/font][font=宋体]蛋白酶等。下图是具体蛋白标签的序列和大小介绍，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]
[font=宋体][font=宋体]义翘神州研发团队拥有多年的重组蛋白研发经验。多年来，我们的团队已开发出超过[/font][font=Calibri]6,000[/font][font=宋体]种重组蛋白，涵盖免疫检查点、抗体药物靶点、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗靶点、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体、流感病毒蛋白以及细胞因子等热门研究领域。义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/protein][b]重组蛋白[/b][/url]具有高纯度、高生物活性和低内毒素水平等特性，可为生物药靶点发现、蛋白质结构和功能分析、细胞疗法和重组酶酶学性质等科学研究提供支持。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]重组蛋白研发的全球领导者[/font][font=宋体]——优势[/font][/b][/font][font=宋体]①先进的技术平台[/font][font=宋体]? 五个重组表达系统[/font][font=宋体]? 从多个物种中制备的蛋白质，以支持动物模型和药物开发[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]80+ [/font][font=宋体]自动生物反应器[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]2L-2000L[/font][font=宋体]生物反应器，确保高通量生产[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别的生产实验室和设施[/font][/font][font=宋体]? 毫克到克级的生产规模[/font][font=宋体]②严格的质量控制体系[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]400[/font][font=宋体]多种生物活性检测和分析方法[/font][/font][font=宋体]? 最先进的分析设备，确保生物活性[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端氨基酸序列分析能力[/font][/font][font=宋体]? 高稳定性，确保实验的可重复性[/font][font=宋体]? 优质原材料，确保生产不含动物成分[/font][font=宋体]③高品质重组蛋白产品[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]85%[/font][font=宋体]以上由真核细胞表达，接近结构[/font][/font][font=宋体]? 经验证的生物活性[/font][font=宋体][font=宋体]? 低内毒素水平：[/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]）法或高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]）法确定[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 不含载体：溶于[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]缓冲液，不含牛血清白蛋白（[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体]④高纯度重组蛋白[/font][font=宋体]⑤高生物活性重组蛋白[/font][font=宋体]⑥具有高结合活性的重组蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]义翘神州特色重组蛋白推荐：[/b][/font][font=宋体]①新冠病毒抗原[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了一组新冠病毒重组抗原，包括[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]（核衣壳）蛋白、[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白的[/font][font=Calibri]S1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]S2[/font][font=宋体]亚基、[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]蛋白的受体结合结构域（[/font][font=Calibri]RBD[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]PLpro[/font][font=宋体]蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]2015-2024 [/font][font=宋体]流感疫苗株重组抗原[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州持续推出[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]NA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]NP[/font][font=宋体]重组流感抗原，覆盖[/font][font=Calibri]WHO[/font][font=宋体]推荐的[/font][font=Calibri]2015-2024[/font][font=宋体]流感疫苗株，可用于抗体滴度测定、疫苗效力测定及抗原表位测定等各种生化测定。[/font][/font][font=宋体]③免疫检查点蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]涵盖[/font][font=Calibri]PD-1/PD-L1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CTLA-4[/font][font=宋体]获批抗体药物以及候选药物等热门免疫检查点蛋白，如[/font][font=Calibri]TIM-3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD47[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GITR[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗靶点蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]涵盖许多热门的细胞疗法靶点，包括[/font][font=Calibri]CD19[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BCMA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD20[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CEA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD33[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]EGFR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]MSLN[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]治疗靶点蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一系列[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]靶点蛋白产品，涵盖实体瘤和恶性肿瘤[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]余个热门靶点。[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]验证的位点特异性生物素标记蛋白和无标记蛋白支持您的[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]开发。[/font][/font][font=宋体]⑥多特异性抗体靶点蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]高质量的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]系列蛋白、多次跨膜蛋白、免疫检查点靶点蛋白以及更多蛋白产品供您选择，应用包括抗体药物的开发筛选、细胞学验证以及种属交叉反应等多个场景。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑦[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]靶点蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]高活性，高纯度，多种属，覆盖[/font][font=Calibri]TROP-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ROR1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Nectin-4[/font][font=宋体]等热门[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]靶点，满足免疫、抗体筛选、细胞功能验证等应用。[/font][/font][font=宋体]……[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同时义翘神州还提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]重组蛋白定制服务[/b][/url]，详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/protein[/font][/font]
[size=20px] [/size][size=20px]组蛋白乙酰化[/size][size=16px]组蛋白修饰通过改变组蛋白与[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]的亲和性使染色质结构发生改变，进而影响转录因子与[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]序列的结合和基因表达[/size][size=16px],[/size][size=16px]包括乙酰化、甲基化、磷酸化等，其中乙酰化是最重要的修饰方式之一，其主要发生在组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]赖氨酸（[/size][size=16px]Lysine, Lys[/size][size=16px]）的位点上，在癌症进展中发挥双重作用，既参与肿瘤抑制基因的沉默，又增强癌基因的表达[/size][font='times new roman'][size=16px][11][/size][/font][size=16px]，它受组蛋白乙酰转移酶（[/size][size=16px]Histone acetyl transferase[/size][size=16px]，[/size][size=16px]HAT[/size][size=16px]）和组蛋白去乙酰化酶[/size][size=16px](Histone deacetylase[/size][size=16px]，[/size][size=16px]HDAC)[/size][size=16px]调控。[/size][size=16px]HDAC[/size][size=16px]可移去[/size][size=16px]Lys[/size][size=16px]残基上的乙酰基，增强组蛋白的正电性，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]（本身带有负电荷）与组蛋白结合紧密，转录因子不易于[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]结合，抑制抑癌基因的转录，[/size][size=16px]HAT[/size][size=16px]作用则相反，二者动态平衡才能使组蛋白乙酰化维持在正常水平。表观遗传学改变通过调控基因转录平衡组蛋白乙酰化和去乙酰化，从而影响细胞周期、凋亡和分化相关蛋白的表达水平[/size][font='times new roman'][size=16px][12][/size][/font][size=16px]。[/size][size=20px]1[/size][size=20px] [/size][size=20px]组蛋白乙酰化水平与[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]发生发展密切相关[/size][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][size=14px] [/size][size=16px]一项实验研究表明，乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]和[/size][size=16px]NSCLC[/size][size=16px]细胞中的表达有显著性差异，以前者表达较高。[/size][size=16px]Notch[/size][size=16px]信号通路是[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生发展和化疗耐药的主要调节通路之一[/size][font='times new roman'][size=16px][13][/size][/font][size=16px]，具有肿瘤抑制作用。此研究中，[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系（除[/size][size=16px]H69AR[/size][size=16px]、[/size][size=16px]SBC-3[/size][size=16px]）中失活，其表达水平与组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]乙酰化有关。[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]阳性表达的细胞系中乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]富集在[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]启动子区域，表达水平较高，[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]阴性表达的细胞系中[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]启动子周围的乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]水平较低。这说明组蛋白去乙酰化是[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]基因在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]中表观失活的原因[/size][font='times new roman'][size=16px][14]915-918[/size][/font][size=16px]。此外，组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]赖氨酸[/size][size=16px]23(histone 3 lysine 23, H3K23)[/size][size=16px]乙酰转移酶[/size][size=16px]KAT6B[/size][size=16px]在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]中失活，若其活性恢复可对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]产生抑制作用，它的乙酰化水平降低是[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生的重要标志[/size][font='times new roman'][size=16px][15][/size][/font][size=16px]。由此可见，组蛋白去乙酰化可以调控相关基因的表达从而促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生发展。[/size][size=20px]2 [/size][size=20px]组蛋白去乙酰化酶抑制剂[/size][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][size=16px]HDAC[/size][size=16px]在许多癌症中过表达，干扰其活性、抑制其功能是有效的治疗手段。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（[/size][size=16px]Histone deacetylase inhibitor, HDACI[/size][size=16px]）是重要的表观调控药物，高效低毒，通过靶向阻断[/size][size=16px]HDAC[/size][size=16px]去乙酰化、促进组蛋白乙[/size][size=16px]酰化发挥抗肿瘤作用。根据化学结构的不同，[/size][size=16px]HDACIs[/size][size=16px]分为异羟肟酸（异羟肟酸酯）、短链脂肪（脂肪族）酸、环状四肽、苯甲酰胺和[/size][size=16px]Sirt[/size][size=16px]抑制剂[/size][size=16px]5[/size][size=16px]类[/size][font='times new roman'][size=16px][16][/size][/font][size=16px]。在单药和[/size][size=16px]/[/size][size=16px]或与传统化疗药物联合使用时，[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]可阻滞细胞周期，抑制迁移和侵袭[/size][font='times new roman'][size=16px][17][/size][/font][size=16px]，诱导癌细胞分化、自噬[/size][font='times new roman'][size=16px][18][/size][/font][size=16px]、凋亡，抗血管生成。当前，伏立诺他（[/size][size=16px]Vorinostat ,SAHA[/size][size=16px]）、罗米地辛（[/size][size=16px]Romidepsin[/size][size=16px]）、帕比司他（[/size][size=16px]Panobinostat[/size][size=16px]）等被批准用于血液系统恶性肿瘤的治疗[/size][font='times new roman'][size=16px][19][/size][/font][size=16px]。[/size][size=16px]丙戊酸[/size][size=16px](valproic acid ,VPA)[/size][size=16px]作为[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]可抑制[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞生长，诱导细胞凋亡，阻滞[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞周期于[/size][size=16px]G1[/size][size=16px]期。以上抑制作用是通过降低[/size][size=16px]HDAC4[/size][size=16px]表达，增加组蛋白[/size][size=16px]H4[/size][size=16px]乙酰化实现的。同时发现，[/size][size=16px]VPA[/size][size=16px]激活了[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]中[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]、[/size][size=16px]Notch[/size][size=16px]靶基因[/size][size=16px]HES1[/size][size=16px]和[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]的[/size][size=16px]Notch[/size][size=16px]信号通路。此外，它还可以上调生长抑素受体[/size][size=16px]II[/size][size=16px]（[/size][size=16px]somatostatinreceptor2[/size][size=16px]，[/size][size=16px]SSTR2[/size][size=16px]）并增强受体靶向细胞毒素的抑制作用[/size][font='times new roman'][size=16px][20][/size][/font][size=16px]。在经曲古抑菌素[/size][size=16px]A (Trichostatin A ,TSA)[/size][size=16px]处理后的[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系中，[/size][size=16px] Notch1[/size][size=16px]启动子区域[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]乙酰化水平增加，从而导致[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]蛋白表达。此外，经[/size][size=16px]TSA[/size][size=16px]处理后，[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞黏附增加，上皮间质转化标志物表达减少，细胞增殖减少，细胞凋亡激活，可能与[/size][size=16px]TSA[/size][size=16px]诱导[/size][size=16px]Notch1[/size][size=16px]表达有关[/size][font='times new roman'][size=16px][14]916-918[/size][/font][size=16px]。这些研究成果为[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]在[/size][size=16px] SCLC[/size][size=16px]治疗中的应用提供了依据。为了达到最好治疗效果，药物用量、联合用药及使用顺序仍需深入研究。[/size]
我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20℃或-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。 那么，应该如何进行正确的溶解呢？ 下面我们以Recombinant Human IL-4 (重组人IL-4，产品编号：200-04)的说明书为例，对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。 拿到重组人IL-4的说明书后，您会发现有一段关于Reconstitution(重悬)的叙述，这段内容含有溶解相关的所有信息。 1. Centrifuge the vial prior to opening.第1步：开盖前离心试剂管 PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中，为无菌包装。冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，所以在打开塑料瓶盖前，需将冻干粉通过离心收集到管底，以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。 有很多用户会问一个问题，即应该用多少转速、多长时间离心试剂管，才能达到良好的收集效果？答：有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键，按了此键后，离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm)，上升到最高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。 但有些实验室没有这样的高速离心机，只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。这种情况下，需3000-3500rpm离心5min，也能达到类似的效果。 2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.第2步：用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml，不可振荡。 这个步骤即为溶解步骤，非常重要。 1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉 用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。此例中的重组人IL-4需用水溶解，而重组人IL-2 (产品编号：200-02)则需用100mM Acetic Acid (醋酸)溶解，重组人TGF-beta1 (产品编号：100-21)需用10mMCitric Acid (柠檬酸)，pH3.0溶解，重组人FGF-basic(产品编号：100-18B)需用5mMTris，pH7.6溶解，重组人FGF-10(产品编号：100-26)需用5mMSodium Phosphate(磷酸钠)，pH7.4溶解，重组IL-13(产品编号：200-13)需用20mMMHCl溶解。(注：即使同一重组细胞因子或蛋白，不同批次的溶解方法也可能有所不同，因此上面的叙述仅供参考。具体应该如何溶解应以相应批次的官方说明书为准)。后续的文章中将对各种溶解液的配制方法进行详细的阐述，望继续关注。 经常有用户会问，为什么会有这么多种溶解方法？答：我们知道，蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试，说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。 有不少用户没注意说明书上的描述，而是根据习惯，直接用PBS或培养液(1640或DMEM等)等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。这样做可以吗？答：有时可以，要看具体情况。PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS，此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解，具体原因在上面已经叙述过。而有部分细胞因子，如重组人KGF(产品编号：100-19)和重组人FGF-23(产品编号：100-52)等，说明书上的溶解液即为1x PBS，此时用PBS溶解完全没问题，那么用培养液溶解也是可以的，不过最好还是用先用PBS溶解，然后再用培养液稀释。
[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在当今的生物技术领域，高通量重组蛋白表达技术在基础研究和商业应用中扮演着非常重要的角色。随着后基因组时代的到来，研究人员对大规模蛋白表达和纯化的需求日益增长，大肠杆菌因其易于遗传操作、低成本、生长迅速成为生产重组蛋白的首选微生物宿主。本文将综述大肠杆菌中高通量重组蛋白表达的现状和未来展望，探讨从目的基因获取到蛋白表达和纯化的先进技术，并讨论如何克服[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][u][font=宋体][color=#0000ff]重组蛋白表达[/color][/font][/u][/url][font=宋体]过程中的挑战。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]高通量重组蛋白表达技术[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量研究是一种能够同时检测数千个生物分子，使大规模重复成为可能的研究。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代初，第一台[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]测序仪被开发出来，人类基因组计划随之开启，高通量技术在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、蛋白质、脂质和代谢物检测的需求也急剧增加。自该技术提出以来，大肠杆菌中高通量重组蛋白表达和纯化已经得到了广泛的应用。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]1. [/font][b][font=宋体]目的基因的制备[/font][/b][font=宋体][font=宋体]获取目的基因是重组蛋白表达的第一步。传统的方法是从[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库中直接克隆基因，但这种方法存在局限性，如从库中筛选基因较为费时以及难以添加融合标签等。高通量[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术是目前获取目的基因最常用的技术，设计引物并调整好参数后，即可在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]仪中自动完成目的基因的制备。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]2. [/font][b][font=宋体]表达载体的高通量构建[/font][/b][font=宋体][font=宋体]研究人员开发了多种构建表达载体的克隆方法，包括基于限制性内切酶的克隆、重组克隆和不依赖于连接反应的克隆等。这些方法各有优势和局限性，但在近年来都有显著改进。例如，基于限制性内切酶的克隆因其简单、高效、通用和成本效益而备受关注。一个理想的大肠杆菌表达载体应具备选择标记、复制起点、转录启动子、[/font][font=Calibri]5'[/font][font=宋体]非翻译区（[/font][font=Calibri]5'UTR[/font][font=宋体]）和翻译起始位点。此外，融合标签的添加对于目的基因的转录和蛋白表达同样至关重要。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]3. [/font][b][font=宋体]大肠杆菌表达菌株的选择和细胞培养[/font][/b][font=宋体][font=宋体]为保证蛋白质表达成功及其表达质量，应选择合适的大肠杆菌菌株，如[/font][font=Calibri]BL21[/font][font=宋体]及其衍生菌株是较常用的重组蛋白生产菌株。培养大肠杆菌比较简单的方法是分批培养，但此方法对生长的控制比较有限。近年来，高通量培养技术使研究人员能够在一系列发酵条件下处理大量样品，大大加快了生产时间。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]4. [/font][b][font=宋体]高通量蛋白表达和纯化[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量平台可以快速克隆基因、挑选菌落、分离质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、转化细菌、表达和纯化蛋白质。这些平台虽然成本高昂，但为复杂的分子生物学实验操作提供了极大的便利。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论与展望[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌中的[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][u][font=宋体][color=#0000ff]高通量重组蛋白表达技术[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]极大的推进了重组蛋白的表达进程。尽管存在挑战，但通过不断优化和创新，研究人员正在朝着更高效可靠的蛋白质生产系统改进。未来的发展方向包括进一步优化克隆方法、开发新的融合标签、改进表达载体和菌株，以及利用高通量技术实现从[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]到大规模蛋白质生产的快速转变等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=Calibri]Jia B, Jeon CO. High-throughput recombinant protein expression in Escherichia coli: current status and future perspectives. Open Biol. 2016 6(8):160196. doi:10.1098/rsob.160196[/font]
[font=宋体][font=宋体]抗组蛋白抗体是抗核抗体家族的一个亚基，专门针对组蛋白亚基或组蛋白复合物。[/font][font=Calibri]1959[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Henry Kunkel[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H.R.Holman[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]H.R.G.Dreicher[/font][font=宋体]在对红斑狼疮细胞病因的研究中首次报道了这些抗体。如今，抗组蛋白抗体仍被用作系统性红斑狼疮的标志物，但也与其他自身免疫性疾病有关，如[/font][font=Calibri]Sj?gren[/font][font=宋体]综合征、皮肌炎或类风湿性关节炎。抗组蛋白抗体可作为药物诱导性狼疮的标志物。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]特异性[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]组蛋白是蛋白质的复合体，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]储存在其周围。抗组蛋白抗体可以靶向组蛋白复合物或显示的任何蛋白质亚基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗组蛋白抗体靶向五大类组蛋白亚基：[/font][font=Calibri]H1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H2A[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H2B[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]H3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]H4[/font][font=宋体]。抗组蛋白的抗体多种多样，因此除了靶向蛋白亚基外，不同的抗体也可能对不同的复合物，包括[/font][font=Calibri]H2A-H2B[/font][font=宋体]二聚体或[/font][font=Calibri]H3-H4[/font][font=宋体]四聚体。有证据表明，不同药物暴露产生的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]抗组蛋白抗体对不同组蛋白复合物的表位具有特异性。高度修饰的组蛋白已被证明能促进更大的免疫反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]检测抗体[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗组蛋白抗体可以使用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定法进行临床检测。测试需要血样。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]间接免疫荧光也可用于检测抗组蛋白抗体。均匀、扩散染色表明存在抗组蛋白抗体、染色质和一些双链[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]。义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-servicehttp://][b]免疫荧光检测服务[/b][/url]！[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗组蛋白抗体阳性说明什么？[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗组蛋白是含有五个亚单位的碱性蛋白，抗组蛋白阳性说明可产生了组蛋白抗体，多存在系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、风湿病等疾病中，建议患者对症治疗。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]正常值：[/font][/b][font=宋体]正常人抗组蛋白抗体为阴性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在探索抗组蛋白抗体的道路上，科学家们从未停止脚步。他们致力于解开这一生物标志物的所有谜团，以期为人类健康带来更多福祉。作为普通公众，我们也可以通过学习和了解抗组蛋白抗体的相关知识，为自己的健康保驾护航。让我们共同期待未来科学研究在抗组蛋白抗体领域取得的更多突破，为人类的健康事业贡献智慧和力量。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
[font=宋体][font=宋体]义翘神州具有每年[/font][font=Calibri]1,000[/font][font=宋体]多种新蛋白的研发能力，依托先进的蛋白表达技术，在重组蛋白生产如跨膜蛋白、酶、激酶、病毒抗原等积累了丰富的经验。我们拥有多种重组蛋白表达系统，包括昆虫细胞、哺乳动物细胞和原核蛋白表达系统，为客户提供高品质、低成本的活性重组蛋白，满足您的不同需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白质表达、纯化的一站式服务，可以根据客户需求，选用不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系，为蛋白表达、纯化提供多种选择，帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。‘’[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重组蛋白表达服务的类型：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]形式的膜蛋白表达服务[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]表达系统构建了[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台，为客户提供膜蛋白定制服务，助力药物研发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]? 活性优，哺乳动物细胞表达，更接近真实构象[/font][font=宋体][font=宋体]? 多应用，免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PK/PD[/font][font=宋体]等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二、哺乳动物细胞瞬时表达服务[/font][font=宋体]义翘神州的哺乳动物瞬时表达系统提供灵活的定制服务，满足多样化需求。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]? 高效表达载体[/font][font=宋体]? 高密度细胞培养[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞蛋白表达服务[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州在杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞蛋白表达方面具有丰富的经验，特别是病毒类蛋白、激酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]? 高效表达胞内和胞外蛋白[/font][font=宋体]? 大规模蛋白表达生产能力[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、原核（[/font][font=Calibri]E.coil[/font][font=宋体]）蛋白表达服务[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州[/font][font=宋体]“一站式”服务以及内毒素去除等附加服务，以满足不同的定制需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]? 多种表达载体和菌株[/font][font=宋体]? 丰富的包涵体纯化经验[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]五、生产用稳定株构建服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供优质稳定细胞株构建服务，满足客户蛋白[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗体生产、免疫治疗药物开发等诸多需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体][font=宋体]? 稳定细胞株抗体产量可达[/font][font=Calibri]2-4 g/L[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 团队重组表达经验[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]年以上[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]六、检测用细胞系构建服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供稳定表达特定基因的细胞株构建服务，可应用于多种研究领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]? 快速交付，经验丰富[/font][font=宋体]? 应用场景广泛，满足多样化实验需求[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择哪种[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]蛋白表达服务[/b][/url]取决于目的蛋白的来源、蛋白功能、产率、成本和纯化蛋白的用途等诸多因素，每个系统都有其优缺点，根据不同应用选择合适的表达系统对重组蛋白非常重要。下面是重组蛋白表达服务选择指南：[img=重组蛋白表达服务选择指南,690,198]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311031655095289_8336_5907840_3.png!w690x198.jpg[/img][/font][font=宋体][font=宋体]更多关于重组蛋白表达服务详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]
pET系统是有史以来在 E.coli中克隆表达重组蛋白的功能最强大的系统。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=113071]pET系统[/url]
[font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用[/font][font=Calibri]DNA(RNA)[/font][font=宋体]重组技术表达的蛋白重组。蛋白表达是将目的基因通过电转化或者热激等手段转入合适的宿主中，利用宿主的特定生理、生化和遗传特点进行目标蛋白大量表达及纯化的生物技术。目前，较为主流的表达宿主有大肠杆菌（[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]）、毕赤酵母（[/font][font=Calibri]P.pastoris[/font][font=宋体]）、昆虫[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杆状病毒（[/font][font=Calibri]Bac-to-Bac[/font][font=宋体]系统）以及哺乳动物细胞系（[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]）等。鉴于目标蛋白的应用场景和自身理化性质的差异，选择合适的表达宿主尤为关键。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]大肠杆菌（[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]）：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]表达系统：原核[/font][font=宋体]优势：经济、快速、高产量、应用广泛[/font][font=宋体]劣势：包涵体；无翻译后修饰；大分子蛋白表达困难[/font][font=宋体]推荐表达：细菌类蛋白；抗原类蛋白；细胞因子；酶类[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]酵母细胞：[/font][/b][font=宋体]表达系统：真核[/font][font=宋体]优势：经济、快速、高产量；部分翻译修饰[/font][font=宋体]劣势：非人源糖基化；高甘露糖修饰[/font][font=宋体]推荐表达：细胞因子；少分子量蛋白；酶类[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞：[/font][/font][/b][font=宋体]表达系统：真核[/font][font=宋体]优势：基因容量大；可溶蛋白；适合毒性蛋白；类似哺乳动物系统；翻译后修饰[/font][font=宋体]劣势：周期长；成本高；缺少部分糖基化[/font][font=宋体]推荐表达：细胞质蛋白；毒性蛋白；跨膜蛋白；分泌蛋白；激酶；[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]哺乳动物细胞[/font][font=宋体]表达[/font][font=宋体]：[/font][/b][font=宋体]表达系统：真核[/font][font=宋体]优势：可溶蛋白；更低内毒素；更好的活性；更好的翻译后修饰；可瞬时转染与稳定转染表达[/font][font=宋体]劣势：周期长；成本高；[/font][font=宋体]推荐表达：分泌蛋白；跨膜蛋白；重组抗体；抗体等[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有原核细胞表达平台、哺乳动物瞬时表达平台、杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫蛋白表达平台，同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]原核（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]E. coli[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]）蛋白表达服务[/b][/url]……可实现重组蛋白和重组抗体的高通量和高产量表达，可为客户提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-antibody-production-service][b]重组表达服务[/b][/url]及一站式定制需求。详情可以关注 大肠杆菌蛋白表达平台：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/e-coli-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font]
我国已批准紧急使用的重组蛋白亚单位新冠病毒疫苗，I期、II期临床试验结果日前在国际医学期刊《柳叶刀传染病》发布。结果表明，疫苗安全性良好，接种3剂次25微克疫苗的97%入组者产生了可以阻断活病毒的中和抗体，中和抗体水平超过康复患者血清。该疫苗由中国科学院微生物研究所联合安徽智飞龙科马生物制药有限公司研发，今年3月10日经有关部门评估论证同意紧急使用。据介绍，疫苗在国内的两期临床试验共招募950名18岁至59岁的健康成年人，采用随机、双盲和安慰剂对照的试验方案。试验对疫苗的安全性和免疫原性进行评估，包括不良事件和严重不良事件、抗体滴度、中和抗体滴度以及血清阳转率。结果表明，没有疫苗相关的严重不良事件发生。接种2剂次疫苗后，76%的人可以产生中和抗体。接种3剂次疫苗后，97%的人可以产生中和抗体。目前，该疫苗正在乌兹别克斯坦、印尼、巴基斯坦和厄瓜多尔开展国际多中心III期临床试验，并于3月1日在乌兹别克斯坦获批注册使用。重组蛋白亚单位疫苗是通过基因工程的方式在工程细胞内表达纯化病原体抗原蛋白，然后制备成疫苗。有别于灭活疫苗和腺病毒载体疫苗，这是一种新技术路线研制的新冠病毒疫苗。截至目前，我国有4个新冠病毒疫苗附条件上市、1个新冠病毒疫苗获批紧急使用。
[font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]蛋白分泌是细胞间传递信息的关键途径，是生命科学的本质问题之一。通常认为蛋白分泌过程是带有信号肽的分泌蛋白，通过[/font]SEC61转运体跨膜转运到内质网，经内质网-高尔基体膜泡运输释放到胞外的过程，称为经典蛋白分泌途径。近年研究发现许多无信号肽蛋白可以被分泌到胞外，其分泌通过非经典途径来实现，称为非经典蛋白分泌。相当一部分无信号肽分泌因子也需要进入膜泡运输系统来完成释放过程。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]但是[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]这些无信号肽的非经典分泌货物是如何进入膜泡运输途径从而完成分泌的[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]一直是[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]亟待解决的科学问题[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]。[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]清华大学葛亮团队近期发现了[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]一个新型蛋白跨膜转运途径调控无信号肽蛋白进入膜泡运输途径（[/font]THU途径）和非经典分泌，解答了该领域存在多年的难题[/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]。[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]本次会议葛亮研究员将给大家介绍蛋白质非经典分泌的分子机制。[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]会议时间：[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565]2020-08-27 14:00[/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]主讲老师：葛亮[/font] -- [/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]清华大学生命学院研究员，博士生导师[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]报名地址：[/font][/color][/font][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_15440.html]点击打开链接[/url][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑][img=,517,357]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008212041268170_9409_2507958_3.jpg!w517x357.jpg[/img][/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]欢迎报名参加！[/font][/color][/font]
现在，在实验研究基础上，借助多方面的生物信息学方法，可以快速高通量的预测和进行蛋白质鉴定蛋白翻译后修饰。分泌蛋白和膜相关蛋白附着于细胞膜上的或将被排泄出去的蛋白质是由细胞内质网膜上附着的核糖体合成。附着有核糖体的内质网被称为糙面型内质网。这类蛋白质都含有一个N-末端（或氨基端），我们称之为信号序列或信号肽。这个信号肽通常情况下含有13-36个主要疏水性残基，同时它含有多蛋白复合物，我们称之为信号识别粒子(SRP)。这种信号肽在通过内质网膜之后会被去除。信号肽的去除过程是在信号肽酶催化作用下完成的。含有一个信号肽的蛋白质被称为前蛋白，有别于原蛋白。然而，某些用于分泌的蛋白在分泌之后会进一步被蛋白水解，因此包含有原蛋白的序列。这类蛋白质被称为前原蛋白。蛋白水解性裂解许多蛋白质在翻译之后会经历水解性裂解过程。其中最为简单的形式是去除起始蛋氨酸。许多蛋白质合成了不活跃的前体细胞，这些细胞只能在合适的生理条件下通过限制性蛋白水解过程产生活性。在凝血过程中使用到的胰腺酶和酶类就是后者的例证。多肽去除时产生活性的不活跃的前体蛋白，我们称之为原蛋白。前原蛋白的翻译后加工过程的一个复杂的例子就是脑垂体分泌合成的前阿黑皮素原的裂解过程（有关前阿黑皮素原的讨论，见肽类激素页）。这类前原蛋白经过复杂的裂解，根据合成的前阿黑皮素原的细胞定位而不同，其路径也有所不同。另一个前原蛋白的例子就是胰岛素。由于胰岛素是由胰腺分泌的，因此它有一个前肽。随着含24个氨基酸的信号肽的裂解，这类蛋白也折叠成了胰岛素原。胰岛素原进一步分裂，产生活跃的胰岛素，它包含两个肽链，由二硫键进行连接。但仍有其他的蛋白（酶类）被合成为非活跃的前体细胞，被称为酶原。酶原在蛋白水解性裂解时会产生活性，在凝血串联蛋白质链的若干蛋白质中都会发生这种现象。甲基化作用蛋白翻译后的甲基化过程主要发生在氮原子和氧原子上。活性甲基供体是活性腺苷甲硫胺酸(SAM)。最常见的甲基化作用发生在赖氨酸残基的ε-amine上。脱氧核糖核酸组蛋白中赖氨酸残基的甲基化作用可调节核染色质结构，因此可调节其转录活性。赖氨酸原本被认为是一种常设共价标记，可提供长期信号，甚至包括转录记忆时的组蛋白依赖机制。然而，最近的临床研究表明赖氨酸甲基化作用与其他共价修饰体相似，作用时间短，并能通过反脱甲基化活动进行动态调节。最近的组学研究发现表明，赖氨酸残基的甲基化作用不仅发生在核染色质层面，而且还通过修订转录因子影响基因表达。组氨酸的咪唑环，精氨酸的胍基部分以及谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组酰胺（R-group amides ）上，都发现了额外的氮甲基化作用。谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组羧化物也会发生氧甲基化作用并形成甲基酯。蛋白可能在半胱氨酸的R[
[font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]蛋白分泌是细胞间传递信息的关键途径，是生命科学的本质问题之一。通常认为蛋白分泌过程是带有信号肽的分泌蛋白，通过[/font]SEC61转运体跨膜转运到内质网，经内质网-高尔基体膜泡运输释放到胞外的过程，称为经典蛋白分泌途径。近年研究发现许多无信号肽蛋白可以被分泌到胞外，其分泌通过非经典途径来实现，称为非经典蛋白分泌。相当一部分无信号肽分泌因子也需要进入膜泡运输系统来完成释放过程。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]但是[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]这些无信号肽的非经典分泌货物是如何进入膜泡运输途径从而完成分泌的[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]一直是[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]亟待解决的科学问题[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]。[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]清华大学葛亮团队近期发现了[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]一个新型蛋白跨膜转运途径调控无信号肽蛋白进入膜泡运输途径（[/font]THU途径）和非经典分泌，解答了该领域存在多年的难题[/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]。[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]本次会议葛亮研究员将给大家介绍蛋白质非经典分泌的分子机制。[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]会议时间：[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565]2020-08-27 14:00[/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]主讲老师：葛亮[/font] -- [/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]清华大学生命学院研究员，博士生导师[/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]报名地址：[/font][/color][/font][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_15440.html]点击打开链接[/url][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑][img=,517,357]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008212041417260_5339_2507958_3.jpg!w517x357.jpg[/img][/font][/color][/font][font=微软雅黑][color=#656565][font=微软雅黑]欢迎报名参加！[/font][/color][/font]
[align=left][size=18px]西达本胺促进[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系组蛋白乙酰化[/size][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px] [/size][size=16px]为验证西达本胺是否上调[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系的乙酰化水平，我们使用[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]检测了不同浓度（[/size][size=16px]I[/size][size=16px]C10[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC20[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC50[/size][size=16px]）西达本胺处理[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后，[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平，并以组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平为对照。结果如图所示。在四种亚型细胞系中，总组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平无变化，乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达量随加药浓度增大而增多，这证明了西达本胺对[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化的促进作用，这种作用呈剂量依赖性。[/size][/align][align=left][size=18px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350400898_8640_5887180_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系凋亡[/size][/align][align=left][size=16px]我们的功能实验表明，西达本胺[/size][size=16px]可剂量依赖的[/size][size=16px]促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]系[/size][size=16px]凋亡[/size][size=16px]，但其机制尚未明确。[/size][size=16px]依据国内外报道，西达本胺主要通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡[/size][size=16px]。除此之外，[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]能[/size][size=16px]使[/size][size=16px]线粒体[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]双链断裂，发生损伤。[/size][size=16px]为探究其是否通过此途径在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中发挥作用，我们检测了加药[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后，[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中由线粒体介导的[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px]信号通路相关蛋白[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px]，细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px]，[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 9[/size][size=16px]，[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px]，[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved [/size][size=16px]PARP[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px]，[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 3[/size][size=16px]以及[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链断裂标志物[/size][size=16px] [/size][size=16px]γH2AX[/size][size=16px]表达水平。[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]结果显示，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px]，[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px] [/size][size=16px]，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px]表达水平无明显变化，[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]表达下调，其余蛋白表达均上调。这些结果表明，在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞中，西达本胺可以通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][size=16px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350402755_79_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过抑制[/size][size=18px]C[/size][size=18px]yclin-CDK[/size][size=18px]复合物活性阻滞[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系周期[/size][/align][align=left][font='宋体'][size=16px]据文献报道，[/size][/font][size=16px]不同[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]对不同细胞阻滞时相不一致。为验证西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞周期的作用，我们检测了[/size][size=16px]经[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]处理[/size][size=16px]48[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后，[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中细胞周期相关蛋白的表达水平，如图所示。[/size][size=16px]在[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]、[/size][size=16px]P27[/size][size=16px]表达上调，[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin A2[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK[/size][size=16px]2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px]，[/size][size=16px]说明西达本胺阻滞[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]于[/size][size=16px]S[/size][size=16px]期。在[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin E1[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px]，说明西达本胺阻滞其于[/size][size=16px]G[/size][size=16px]1[/size][size=16px]/S[/size][size=16px]期。[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350422585_1956_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350405804_8826_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px]小结[/size][/align][size=16px]1[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可以增强[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化水平。[/size][size=16px]2.[/size][size=16px]西达本胺诱导[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞凋亡的机制可能与其激活线粒体介导的[/size][size=16px]caspase[/size][size=16px]凋亡途径有关。[/size][size=16px]3[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可阻滞[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞周期，可能与其上调细胞周期蛋白激酶抑制剂表达、从而抑制[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin-CDK[/size][size=16px]复合物活性有关。[/size]
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