聚集体分析检测方案_聚集体分析行业应用

重组蛋白表征——聚集体分析
蛋白质药物中聚集体的数量、类型和大小对药物的安全性和有效性有很重要的影响。蛋白质聚集体的形成涉及多种机理，包括疏水基团之间的非共价键相互作用以及二硫键的形成等。蛋白质药物中任何一种聚集体的存在都是有害应当避免的，这是因为聚集体可能导致免疫原性反应（小的聚集体）或者可能影响给药（微粒）。不可逆的聚集体对蛋白质药物潜在的影响最大，尤其是在长期储存和运输过程中产生的不可逆聚集体。常用于聚集体分析的方法有高速离心、体积排阻色谱（光散射检测），以及非变性凝胶电泳。中性pH 条件下的非变性凝胶电泳可用于研究蛋白质的构像、自结合或聚集体。SDS-PAGE（SDS 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳）也可用于分离聚集体，但该技术非常耗时且不能很好地分离分子量接近的聚集体或潜在杂质。安捷伦2100 生物分析仪和高灵敏度Protein 250 Assay 可以快速分离完整蛋白质、聚集体和低分子量的杂质，如非糖基化的完整单克隆抗体和游离的轻链和重链。这个分析方法具有很高的重现性 (%CV 6%)，并很容易用于开发和生产过程中的质量控制。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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使用快速高分离度体积排阻色谱柱分析生物治疗药物中的聚集体
由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性 [1]。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如 pH、温度或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱 (SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要 20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。

厂商：天津市普伦科技开发有限公司

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分子排阻色谱柱法分析EGFP IVT mRNA聚集体
mRNA聚集体检测是指使用特定的分析技术来识别、量化并表征mRNA分子在生产或存储过程中可能形成的聚集体。mRNA（信使核糖核酸）是一种单链RNA分子，它携带遗传信息，指导细胞合成特定的蛋白质。在mRNA疫苗或药物的生产过程中，mRNA分子可能会因为多种因素（如温度变化、pH值波动、物理或化学应力等）而形成聚集体。聚集体的存在可能会影响mRNA的稳定性、活性以及最终的疫苗或药物效果。因此，检测mRNA聚集体对于确保产品质量、安全性和有效性至关重要。本应用采用全新推出的Biozen dSEC-7建立了一种分析mRNA聚集体的方法，并评估加热处理对聚集体的影响。通过分子排阻色谱法（SEC-HPLC）研究人员可以更好地理解和控制mRNA聚集体的形成，从而优化mRNA疫苗和药物的生产工艺，提高产品质量。

厂商：艾杰尔飞诺美

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使用快速高分离度体积排阻色谱柱分析生物治疗药物中的聚集体
由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如pH、温度或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱(SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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使用 AdvanceBio SEC 2.7 μm 色谱柱提升聚集体分析效率
本文介绍了一种使用小粒径体积排阻色谱柱快速高效地分析抗体类蛋白聚集体的方法。该方法使用 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱，使聚集体峰与单体峰得到良好的分离。考察了色谱柱粒径和柱长对分离和分析效率的影响。结果表明，缩短色谱柱柱长，在保证满足分离需求的前提下，可以将分析效率提高至常规方法的 3.5 倍

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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蛋白质中聚集体的直接可视化、尺寸测量和计数
检测蛋白质聚集状态对了解生物医药产品的稳定性和功效是至关重要的。当有蛋白质聚集体时，对产品的质量的生物活性和原免疫性两方面有很大的影响。很多聚集体遇到生物样品会按照大小和特性排列（如：可溶的和不可溶的，共价的和非共价的或者可逆的和不可逆的）。蛋白质聚集体的范围跨度很大，从小型的低聚体（纳米级）到包含成百万的单体单元构成的不可溶的微米级的聚集体。在制造过程（细胞培养、提纯、形成）、贮存、分配和产品处理过程中的任何一步都可能产生蛋白质聚集体。它可能是由于各种压力引起的，比如，搅拌、暴露在极端的pH下、温度、离子强度或者各种界面（如，气-液界面）。在高蛋白含量（像单克隆抗体形成的情况）情况下，会出现进一步增加聚集体的可能性。因此，在开发、制造以及药物的后续贮存和描述产物时都必须仔细描述和控制聚集体。同样地，可以通过监测聚集体的状态，修改或者优化生产过程来实现。现在NanoSight提供一种以激光为基础的纳米粒子跟踪分析（NTA）的新系统，它可以使纳米粒子（如蛋白质聚集物）直接在液相中实时地观测到单个的颗粒并且对其计数。此外还可以获得高分辨率的粒度分布图。该技术具有快速、可靠、准确并且成本低，正因为这些特点使之成为现存纳米颗粒分析方法（如DLS（又称电子相关光谱PCS，）或者电子显微镜（EM））的很好的替代或者补足。

厂商：科艺仪器

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利用Q-TOF定性分析多肽类药物生长抑素中的聚集体
本文使用岛津LCMS-Q-TOF液质联用系统结合尺寸排阻色谱法，开发了一种定性检测多肽类药物生长抑素中聚集体的方法，使用岛津LabSolutions Insight Explore软件对色谱峰进行解析，并对多电荷结果进行解卷积分析。实验结果显示，该方法可以分离多肽类药物生长抑素的主成分和聚集体，分离出的4个色谱峰分别为生长抑素的四聚体，三聚体，非共价二聚体和共价二聚体。

厂商：岛津企业管理（中国）有限公司/岛津（香港）有限公司

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基于高通量荧光检测的 mAb 聚集体分析工作流程
Cary Eclipse 多孔板读数器和 PEPBOPS 染料可组成估算 mAb 聚集体含量的高通量工作流程。该工作流程可对高分子量聚集体进行半定量估算，每个样品只需约 5 秒。相比之下，更常规的测量技术通常需要约 5 分钟之久。本研究使用两种治疗性 mAb（利妥昔单抗和曲妥珠单抗）和抗体标准品 NISTmAb RM 8671 对该工作流程进行测试。结果表明，该工作流程得到的结果与使用体积排阻色谱对相同样品进行正交测量得到的结果之间具有良好的相关性。本研究还表明，PEPBOPS 染料作为荧光探针加入样品中，并不会影响聚集。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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利妥昔单抗创新药物和生物仿制药的电荷异构体及聚集体分析
单克隆抗体是用于治疗各种疾病的一类重要的生物分子。生物仿制药是创新药物分子的复制品，需要详细表征其关键质量属性 (CQA)，例如聚集体和电荷异构体。与创新药物相比，这些属性必须处于一定范围内才可获得监管机构批准。本研究采用基于 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱和 Agilent AdvancedBio 色谱柱的两种分析工作流程，对不同制造商生产的两种利妥昔单抗生物仿制药与创新药物的聚集体和电荷异构体图谱进行了比较。结果显示了创新药物与生物仿制药在聚集体和电荷异构体图谱方面的相似性或差异性。生物仿制药 1 与创新药物在聚集体和电荷异构体方面的相似性高于生物仿制药 2。方法表现出优异的日内和日间重现性。Agilent OpenLab CDS 软件的 Peak Explorer 功能使数据审查一目了然。本研究是一系列利妥昔单抗生物相似性研究的一部分。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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使用尺寸排阻色谱法分析蛋白类药物的聚集体
本文介绍了使用岛津尺寸排阻色谱柱“Shim-pack™ Bio Diol”，分析mAb和ADC聚集体的案例。使用“Nexera XS inert”系统，该系统对高浓度盐的流动相具有耐腐蚀性，可抑制管道内样品的吸附。

厂商：岛津企业管理（中国）有限公司/岛津（香港）有限公司

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使用 Cary 60 紫外-可见分光光度计测量在不同条件下诱导形成聚集体的 mAb 样品
单克隆抗体 (mAbs) 是制药公司广泛生产的重要生物制品。随着 mAbs 在生物过程中的应用不断增加，对其进行详细表征的技术引起制药公司的极大关注。由于蛋白质聚集体影响生物活性，因此是监管机构、学术界和制造商之间激烈讨论的话题之一。亚可见蛋白质聚集体可能暴露出当蛋白质处于稳定形式时可能不存在的表位。可靠地鉴定聚集体的存在对于 mAbs 表征至关重要。聚集体的形成在生产、纯化、制剂和存储过程中受到众多因素的影响。因此，采用快速 QC 方法鉴定蛋白质聚集体的存在极具优势。该方法可用于抗体生产生命周期中的许多阶段（例如克隆筛选），以及在存储过程中对产品进行持续监测。作为检测蛋白质聚集体的分析方法之一，紫外光谱的优势在于它是一种无损方法。此外，该方法所需样品量少，并且仅需极少的样品前处理，样品分析更加简单。本研究的结果表明，使用 Agilent Cary 60 紫外-可见分光光度计可以监测单克隆抗体溶液中聚集体的存在。尽管该方法无法分离不同形式的聚集体，但是在采用 SEC 分离这些聚集体之前，可以将该方法作为一种快速筛选方法来鉴定是否存在聚集体。结果还表明，Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱与 Agilent1260 生物惰性液相色谱系统结合使用，能够在较短的运行时间内实现 mAb 聚集体的高分离度分析。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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表征配方开发中的蛋白质聚集体
AB BioTechnologies，Inc。位于印第安纳州布卢明顿，是一家私营实验室，提供药品有偿服务。创始人兼首席执行官Jeff Schwegman博士在配方开发，冻干（冷冻干燥）循环开发和优化，热表征以及注射药物产品开发的教育和培训方面拥有丰富的经验。“我们将冷冻和冷冻干燥等应力条件应用于配方，然后将测量和表征初始解决方案以获得基线，”Schwegman博士说。 “我们添加稳定的辅料，然后我们将其再次冷冻干燥并重新检查样品颗粒，看看我们这么做是否产生什么聚集体。” 蛋白质聚集体很容易被检测到并且它们有可能变性并形成聚集体，因此找到它们是开发过程中的关键步骤。 Schwegman博士需要能够确定客户配方中可能出现的问题的进展。

厂商：大昌华嘉科学仪器

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使用 FTIR 对治疗性蛋白创新药和生物仿制药进行聚集体分析
使用 Agilent Cary 630 FTIR 光谱仪测量浓缩样品中的利妥昔单抗聚集体

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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明暗阈值在蛋白质聚集体成像分析中的重要性
目的：动态成像粒子分析（DIPA）是一种较新的技术，已被证明可以更好地表征基于蛋白质的药物中的亚可见颗粒，而不是使用光阻法等传统技术。这是因为在这些配方中发现的大多数亚可见颗粒实际上是蛋白质聚集体，它们是无定形的半透明颗粒，其可能被错误表征或甚至不被光阻法系统看到。 DIPA系统能够通过调整光强度阈值从背景中分割非常透明的粒子，创建用于所有粒子测量的二值图像，因此阈值技术的选择对于测量的有效性是至关重要的。本文将表明，改变阈值方法可以极大地改变粒度分布，并包括对所用方法的建议。

厂商：大昌华嘉科学仪器

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蛋白聚集体的分子量研究
使用了美国怀雅特技术公司的MALS（DAWN HELEOS）与Optilab rEX 检测器以及UV 检测器联，来监测不同流动相中蛋白聚集体的状态。使用这些检测器，可以追踪蛋白随盐浓度和缓冲液条件的改变而发生的变化，这有利于我们更深入了解我们所要研究的蛋白的性质和可预测性

厂商：美国怀雅特技术公司北京代表处

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优化和执行蛋白质聚集体研究的完整工作流程——将体积排阻色谱与方法开发和光散射相结合
本应用简报介绍了一套完整的聚集体分析工作流程，它能够：• 优化单克隆抗体高性能体积排阻色谱 (SEC) 的流动相条件• 表征包括单体、二聚体和高阶聚集体等物质的聚集特征我们使用安捷伦缓冲液顾问软件自动进行复杂的 SEC 优化实验，实验中充分利用 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统的功能，在一系列快速液相色谱运行中对各种缓冲液组分进行自动实时混合。Agilent 1260 Infinity Bio-MDS 多检测器套装提供了动态光散射检测功能，能够检测高阶蛋白质聚集体、测定绝对分子量并扩大紫外检测系统的测量范围。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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Aggregates Sizer在疫苗聚集体评价系统中的应用
到目前为止，只有岛津公司可以用一台仪器即Aggregates Sizer对亚可见区域（0.1nm-10μ m）的聚集体进行浓度分析，并且可以实现实时测定，从而可以考察疫苗的聚合过程。

厂商：岛津企业管理（中国）有限公司/岛津（香港）有限公司

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生物兼容性液相结合尺寸排阻色谱法分析司美格鲁肽制剂中聚集体
本文采用岛津生物兼容性液相系统结合尺寸排阻色谱法，开发了一种检测司美格鲁肽注射液制剂中聚集体的方法。优选的流动相条件和SEC色谱柱可以实现司美格鲁肽主成分、聚集体和制剂中抑菌剂的有效分离，分离度均大于2.5 。连续六次进样，司美格鲁肽保留时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）在0.044% 以内，重复性良好。

厂商：岛津企业管理（中国）有限公司

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使用 AdvanceBio SEC 色谱柱分析人促血红细胞生成素的聚集体
人促血红细胞生成素 (Erythropoietin, EPO) 是最早用于治疗贫血症的商业化糖蛋白之一。与其它生物治疗蛋白一样，聚集体监测是评价 EPO 的关键质量属性之一。在欧洲药典 (European Pharmacopoeia, EP) 10.0版[2] 中，详细规定了使用体积排阻色谱 (Size Exclusion Chromatography, SEC) 结合峰面积归一化法分析 EPO 样品中的二聚体及其它大于主成分分子量的有关蛋白比例的方法。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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利妥昔单抗聚集体和片段的高分离度 SEC 分离与定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å , 2.7 μm 色谱柱
单克隆抗体聚集可通过产品和环境因素等多种机制产生。体积排阻色谱(SEC) 是单克隆抗体型治疗药物聚集体和片段含量测定和定量分析的标准方法。本应用简报重点展示强制应激研究中获得的利妥昔单抗生物仿制药和创新药物的完整态、聚集体及片段的高分离度分离与定量分析。其中采用Agilent 1260 Infinity 四元生物惰性液相色谱和Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱进行分离与定量分析，并使用分子量标准品校准色谱柱。AdvanceBio SEC 色谱柱的高灵敏度、高分离度分离适用于监测聚集体/降解物，也是亟需高分离度与高灵敏度的应用的理想选择。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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利用 SEC 和水相流动相进行 mAb 和 ADC 聚集体的定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å , 2.7 μm 色谱柱
体积排阻色谱(SEC) 是监测生物治疗蛋白质样品（包括单克隆抗体及其衍生物）中单体、二聚体、聚集体和潜在降解物的重要工具。由于聚集体被视为一项关键质量属性，因此需要对其进行定量分析。本应用简报介绍了一种利用Agilent AdvanceBio SEC 300Å , 7.8 × 300 mm, 2.7 μ m 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱对生物治疗mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 中的聚集体进行定量分析的简单而灵敏的方法。该方法采用相同的水相流动相，无需添加有机改性剂即可对mAb 和疏水性更强的ADC 进行分析。优化方法还可监测经 pH/温度处理形成的聚集体和降解物。该方法操作简单且具有良好重现性，与仪器的抗腐蚀性相结合后极其适用于生物制药行业中mAb 和ADC 的常规QA/QC 分析。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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检测机构使用流动成像显微镜来表征蛋白质聚集体
Dan Berdovich（Micro Measurement Laboratories）了解他客户的注射剂样品中有蛋白质聚集体，但尽管有各种各样的高科技仪器可供他使用，但他仍然无法完全确信他能看到它们或获得精确计数。对于颗粒分析的权威机构，他们获得了关于注射药物产品目视检查标准的同行评审论文奖。然而，虽然在工业市场中，使用颗粒成像技术的应用不到十年，但是Berdovich仍努力解决客户的问题以至他自己的业务获得成功。

厂商：大昌华嘉科学仪器

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生物兼容液相色谱仪与多角度光散射检测器联用测定曲妥珠单抗主成分及聚集体分子量
本文采用岛津生物兼容液相色谱仪Nexera Bio联合多角度光散射检测器测定单抗药物主成分及聚集体分子量，为推断单抗药物聚集体状态提供依据。本实验采用体积排阻色谱对样品进行分离，紫外和多角度光散射检测器进行检测，通过色谱图得知，此曲妥珠单抗药物无聚集体，多角度光散射检测器测得主成分分子量为159,722 Da，与理论值偏差为0.17%。此分子量测定方法操作简便，快速，成本低，可用于单抗药物主成分及聚集体分子量的测定。

厂商：岛津企业管理（中国）有限公司/岛津（香港）有限公司

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在 AdvanceBio SEC 聚集体分析之后进行 Protein A 亲和 IgG 捕获--采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案
本应用简报介绍了使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案对生物治疗样品中聚集体的定量分析。Protein A 亲和捕获在第一维中进行，而体积排阻色谱在第二维中进行。多中心切割用于将样品从第一维转移到第二维。这项技术能够在一次分析中完成整个表征，无需进行馏分收集和多次进样。

厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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在 AdvanceBio SEC 聚集体分析之后进行 Protein A 亲和 IgG 捕获——采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案
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厂商：安捷伦科技(中国)有限公司

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生物制药中蛋白质聚集体和其他固有，内在和外在颗粒的表征
注射药物开发和生产中的颗粒一直是一个严重的问题。在包括蛋白质制剂在内的生物制药中，通过聚集体和颗粒对产品功效，安全性和免疫原性的影响对产生的问题进行总结。 FDA法规强烈建议深入描述蛋白质制剂中颗粒的特性和数量。颗粒问题在FDA意见书中越来越常见，并且在某些情况下，颗粒问题直接导致药物召回。

厂商：大昌华嘉科学仪器

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LC系统扩散对单抗聚集体和片段SEC分析的影响：基于方法选择最佳色谱柱规格
过去，体积排阻色谱 (SEC)是评估重组蛋白生物治疗药物中非共价蛋白质聚集体 (高分子量物质[HMWS])时应用最广泛的方法1。但近年来，由于SEC色谱柱和LC系统的性能提升，使用SEC对这些样品中的蛋白质片段(低分子量物质[LMWS]) 在非变性的条件下进行分析的方法也越来越受到人们的关注。其中最受关注的，是针对铰链区水解降解所产生IgG单克隆抗体(mAb)片段的分析方法2。相较于将单体(约150 KDa)与二聚体和更高分子量形式HMWS(≥ 300 KDa)分离的传统分离方法，LMWS片段(分子量为mAb单体分子量三分之二(约100 KDa)的mAb主要形式)的分离可能更具挑战性。这是由于LMWS与单体的大小 (流体动力学半径)相比于单体与HMWS蛋白质的大小更加接近。由于蛋白质洗脱顺序中低浓度LMWS峰作为主(单体)峰上的拖尾肩峰洗脱，使分离难度进一步增加。虽然使用粒径为亚2 µ m的SEC色谱柱能够提高效率，从而提高HMWS和LMWS的分析通量，但由于色谱柱硬件和填料的限制，这些高柱效SEC颗粒仅适用于内径为4.6 mm或更小的色谱柱。使用HPLC色谱系统时，通常因SEC粒径为3 µ m及以上，可以选择7.8 mm内径的色谱柱。虽然许多HPLC系统也能够在这些内径为4.6mm的SEC色谱柱所需流速和背压下运行，但存在一个经常被忽视的事实，即典型HPLC配置的柱外扩散相对大于这些UPLC SEC色谱柱所产生的峰体积，导致观察到的峰分离度明显降低。柱外扩散可以看作是样品在通过不含色谱柱的LC系统流路时发生的体积增加现象。

厂商：沃特世科技（上海）有限公司(Waters)

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厂商：沃特世科技（上海）有限公司(Waters)
蛋白聚集解决方案
在蛋白质溶液中聚集已被证明有有害的影响。对于较大的聚集体，可以测量这些聚集体，但是在0.150 nm至2微米范围内的较小聚集体具有很难量化。Nicomp动态光散射(DLS)技术可以证明聚集体的存在，但不能提供任何关于聚集体绝对浓度的信息。

厂商：上海奥法美嘉生物科技有限公司

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蛋白聚集解决方案二
基于治疗的蛋白质溶液聚集可能产生有害的免疫原性。对于较大尺寸的团聚体，可以测量这些团聚体，但在0.15至2微米范围内的较小团聚体很难量化。动态光散射(DLS)技术可以证明聚集体的存在，但不能提供任何关于聚集体的绝对浓度的信息。单粒光写传感器技术(SPOS)现在可以测量聚集蛋白的大小和浓度，并成为这一应用的首选技术。

厂商：上海奥法美嘉生物科技有限公司

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