绝对定量

最近做个PPT，讲到各类分析方法。 好早以前看过分析界似乎有一种说法，有四种手段可以作为“绝对”定量方法，其中包括“重量法”、“容量法”、“中子活化分析法”。还有一种实在想不起来了。 例如“中子活化分析法”就经常在各类的标准当中出现，而且基本是作为“仲裁”的方法。 故请各位版友帮忙，剩下的一种是哪种呢？还有这四种分析方法应该怎么说才比较合理，毕竟“绝对”似乎太过绝对了

有没有人做过质谱绝对定量蛋白的？

坛子里的朋友们，知道哪里可以检测土壤中硝化细菌和反硝化细菌的绝对定量的地方吗？QPCR不行哦，有没有其他的方法能绝对定量？谢谢！

我用SPME-GC-MS做了泡菜和泡菜发酵液的挥发性风味的定性，筛选出了二十几种物质要做定量以及嗅闻，看了不少文献和论坛里的帖子，感觉SPME做定量比其他前处理麻烦的多，误差也会大，但还是想试试，毕竟重头改方法太费时间了。关于定量方法和基质选择现在有几个疑问：1、如果想用外标法，配基质有什么依据吗？比如泡菜发酵液，盐度比较高，那我只需要配相同盐度的盐水就可以近似代替吗？还是说液体中的乙醇、乙酸、各种有机酸、氨基酸（这些值倒是都有测定数据），全都要按测定值模拟出来？泡菜的话，我看到坛子里有个做肉的朋友的帖子，有老师建议是把样品切碎，在里面加水，再加内标这样。那我的菜是不是也能参考这样方法？不过水的添加量怎么把握呢，尽量少？只要内标能混匀就行？2、如果用内标法，我感觉看到的方法都不一样，有的是把配好的混标直接按梯度加进样品，算出曲线，0点就是绝对浓度，有的是要算校正因子，校正因子说法更多了。。至今没搞明白咋回事、怎么算。。以及内标法定量的公式和算法也没看到通用的。。求老师们赐教！

我配的标样 苯 甲苯 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯 苯乙烯混合物 。我通过每个组分的已知百分含量和峰面积比值算出绝对校正因子。然后我以苯为基准，算出各组分相对于苯的校正因子，即相对校正因子。以后我定量的时候用哪个校正因子？我的仪器安捷伦 6820 工作站也是6820自带的

没有标准样品，也没有内标物，要求测定绝对含量，精度要高，怎么办呢？？？？？？？？？？？？？？期待高手指点！！！！！！！

（一）用于评价样品和内标等的回收程度，一般用绝对响应（峰面积或峰高）直结计算，与方法的灵敏度很相关。绝对回收率：考察测定结果与“真值”的接近程度，从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以纯标准品产生的响应值即为分析物的绝对回收率。应选用高、中、低三种浓度分别进行考察，绝对回收率一般要求在50%~80%（这个数值范围书上是这么写的，不过，个人认为接近100%更好，太低的话，比如说20%等，可能方法就不容易建立，此时，应更投提取体系，或者是采用反提法等）。提取回收率：空白基质中定量加入药物，经处理后与空白基质处理后加入相同量药物的比值。绝对回收率与提取回收率的关系： 绝对回收率=提取回收率 / (1-基质效应)对于液相色谱等而言，基质效应为0，此时，绝对回收率等于提取回收率。（二）用于评价方法的准确度，等同于相对偏差的作用，用测定所得浓度结果去计算。相对回收率（又称方法回收率），从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以加入到生物基质中已知量的标准品产生的响应值即为分析物的相对回收率。该评价指标已扣除了目标药物在样品的前处理过程损失而造成的系统误差。高、中浓度点测得的相对回收率应在85~115%，低浓度（定量限）应在80~120%。

绝对回收率计算时，空白血浆中加样品和内标，用甲醇沉淀离心后取上清液（不吹干再复溶）直接测定作为分子，那分母是怎么处理得到呢？是空白血浆沉淀后上清液全部取出再加样品和内标再离心测定吗？这个上清液体积我们没法定量，到时怎么算含量呢？因为我想省去吹干这一步

大家好，这段时间我在做一个药的液相分析方法学考察，对于回收率有些概念模糊的地方。我在网上看到了有人对于绝对回收率、相对回收率和提取回收率的解释，我还是有些疑问，想跟大家讨论一下。首先我附上别人对于这三个概念的解释，如下：1、绝对回收率：考察测定结果与“真值”的接近程度，从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以纯标准品产生的响应值即为分析物的绝对回收率。应选用高、中、低三种浓度分别进行考察，绝对回收率一般要求在50%~80%。2、提取回收率：空白基质中定量加入药物，经处理后与空白基质处理后加入相同量药物的比值。绝对回收率与提取回收率的关系：绝对回收率=提取回收率 / (1-基质效应)对于液相色谱等而言，基质效应为0，此时，绝对回收率等于提取回收率。3、相对回收率（又称方法回收率），从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以加入到生物基质中已知量的标准品产生的响应值即为分析物的相对回收率。该评价指标已扣除了目标药物在样品的前处理过程损失而造成的系统误差。高、中浓度点测得的相对回收率应在85~115%，低浓度（定量限）应在80~120%。绝对回收率和提取回收率好理解，就是提取回收率和相对回收率的概念有些不好区别了。有人说相对回收率=测定浓度/标矢浓度，也有人说提取回收率=相对回收率，大家看法如何？相对回收率是如何测定的呢？是将已知量的药物添加到生物基质中处理得到的峰面积代入到标准曲线得到的浓度与设定浓度的比值吗？

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]中什么是相对定量什么是绝对定量？

各位老师好。我使用的是安捷伦GC7890B-MS7000C[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用仪，HP-5ms毛细管柱(30 m×250 um×0.25 um)。目前打算用这台仪器做软体动物和浮游植物的脂肪酸测定，已经购买了37种脂肪酸甲酯（可定性定量）和十九烷酸甲酯作为内标使用，甲酯化方法参考国标《GBT17376-2008动植物油脂脂肪酸甲酯制备》和《GBT21514-2008饲料中脂肪酸含量的测定》。但是目前有一个疑问，就是在甲酯化的过程，脂肪酸和脂肪酸甲酯存在一个转化效率的问题，如何解决这样一个问题？我在网上找了一遍，发现有一种叫做回收率指示物的东西，好像可以得到这个效率。对此我有几个疑问。第一，对于这个脂肪酸甲酯实验，老师们有没有推荐的回收率指示的标准品？或者有更好的办法能够解决这个问题？第二，有没有做过脂肪酸甲酯相关实验的老师，请问大家采取的甲酯化方式是否和我相同，可否分享一下，为什么选择这种甲酯化方法？欢迎交流

绝对强度和绝对强度值这两个是一样的吗，其关系是如何的呢

本人使用热电的RSH做VOC样品时对如何定量有些疑问，想和版友讨论下，我们平常使用最多的定量方法还是用浓度（mg/L）来定量,但是如果使用绝对量（ug）来定量.不知道会产生怎样的影响，或是这二种定量之间有什么差别呢？希望版友多多提出宝贵的见解。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif

请问一下各位：绝对差值和绝对偏差有什么区别，怎么计算的？谢谢各位！

[color=#444444]对乙腈-水-无机盐混合体系当中各个组分含量进行定量分析，乙腈-水用使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]定量，无机盐用原子发射光谱定量。[/color][color=#444444]实验结果发现，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]对乙腈、水绝对含量的定量分析结果很不能令人满意，偏差很大，二者相对含量还可以；用原子发射光谱对无机盐绝对含量的定量分析结果，还可以接受。[/color][color=#444444]用无机盐的绝对含量和乙腈-水的相对含量，可以计算出各自的质量分数（已知总质量）。[/color][color=#444444]请问还有比这个方法更精确的方法来确定三者组分含量吗？谢谢！[/color]

[color=#444444]本人最近在做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的检测，可是用外标法做标准曲线时，所得色谱图有平头峰，就想用绝对峰面积为纵坐标，不知道这样是否可行呢？听人说出现平头峰的话做定量不准确？[/color]

METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2－△△CT MethodKenneth J. Livak* and Thomas D. Schmittgen¶,1*Applied Biosystems, Foster City, California 94404; and ¶ Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy,Washington State University, Pullman, Washington 99164-6534原文下载摘要：现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2－△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。另外，在本文中我们还介绍了两种2－△△CT衍生方法的推导和应用，它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到。关键词：反转录PCR 定量PCR 相对定量 实时PCR Taqman反转录 PCR （RT-PCR ）是基因表达定量非常有用的一种方法（1 - 3 ）。实时PCR 技术和RT-PCR 的结合产生了反转录定量 PCR 技术（4 ,5 ）。实时定量 PCR 的数据分析方法有两种：绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝数；相对定量方法则是用来确定经过不同处理的样品目标转录本之间的表达差异或是目标转录本在不同时相的表达差异。绝对定量通常在需要确定转录本绝对拷贝数的条件下使用。通过实时 PCR 进行绝对定量已有多篇报道（6 - 9 ），包括已发表的两篇研究论文（10,11 ）。在有些情况下，并不需要对转录本进行绝对定量，只需要给出相对基因表达差异即可。显然，我们说 X 基因在经过某种处理後表达量增加 2.5 倍比说该基因的表达从1000 拷贝/ 细胞增加到2500 拷贝/ 细胞更加直观。用实时PCR 对基因表达进行相对定量分析需要特殊的公式、假设以及对这些假设的验证。2－△△CT方法可用于定量PCR 实验来计算基因表达的相对变化：2－△△CT公式的推导，以及实验设计，有效性评估在Applied Biosystems User Bulletin No.2（P/N4303859）中有介绍。用2－△△CT方法分析基因表达数据在文献中也有报道（5,6）。本文介绍了该方法的推导、假设以及应用。另外，本文还介绍了2－△△CT两种衍生方法的推导和应用，它们在实时定量PCR 数据分析中都可能被用到。1. 2－△△CT方法1.1. 2－△△CT方法的推导PCR 指数扩增的公式是：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054042.jpg这里，Xn 是第 n 个循环後目标分子数，X0 是初始目标分子数，Ex 是目标分子扩增效率，n 是循环数，C T 代表目标扩增产物达到设定阈值所经历的循环数。因此：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054008.jpgX T 是目标分子达到设定的阈值时的分子数。C T,X 是目标分子扩增达到阈值时的循环数。Kx 是一个常数。对于内参反应而言，也有同样的公式：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054009.jpg用XT 除以RT 得到：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054010.jpg对于使用 Taqman 探针的实时扩增而言， XT 和 RT 的值由一系列因素决定：包括探针所带的荧光报导基团、探针序列对探针荧光特性的影响、探针的水解效率和纯度以及荧光阈值的设定。因此常数K 并不一定等于1 。假设目标序列与内参序列扩增效率相同：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054011.jpg http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054018.jpg或：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054019.jpgXN 代表经过均一化处理过的初始目标分子量；△CT表示目标基因和内标基因CT值的差异（CT,X－CT,R ）整理上式得：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054020.jpg最后用任一样本q 的XN 除以参照因子（calibrator, cb）的XN得到：http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054021.jpg在这里http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054023.jpg对于一个少于150bp 的扩增片断而言，如果 Mg2+ 浓度、引物都进行了适当的优化，扩增效率接近于1 。因此目标序列的量通过内均一化处理之后相对于参照因子而言就是http://tong.dxy.cn/upload/asset/2008/11/10/1226054022.jpg

如做烟草等香味，风味成分的定量分析，你会选择哪种方法，内标，外标还是面积归一化，是绝对定量还是相对定量？如何能够测定准确的量？用SPME做前处理方法，进行定量分析，会不会存在SPME越用萃取的效果逐渐变差而定量不准确的情况呢？谢谢大家？

请问下各位，“两次测定间的绝对误差”有这种说法吗？个人觉得绝对误差是指某一次测量值与真实值的差值，对象是单次测量，两次测定间要不用极差，要不用平均绝对误差表示更合理，想听听各位老师的意见

红外定量计算峰面积时有绝对面积（absolute area）和切线面积（tangent area），这之间有什么区别对于最后的结果，手边的说明书上说对于绝对面积计算的峰面积可以添加一个干扰物质的峰面积修正，这是什么意思？谁有关于傅立叶红外CLS算法初级点的文章呀，谢谢

请问下各位，“两次测定间的绝对误差”有这种说法吗？个人觉得绝对误差是指某一次测量值与真实值的差值，对象是单次测量，两次测定间要不用极差，要不用平均绝对误差表示更合理，想听听各位老师的意见

检测限是指产生一个能可靠地被检出的分析信号所需要的某元素的最小浓度或含量，而定量限则是指定量分析实际可以达到的极限。因为当元素在试样中的含量相当于方法的检出限时，虽然能可靠地检测其分析信号，证明该元素在试样中确实存在，但定量测定的误差可能非常大，测量的结果仅具有定性分析的价值。定量限在数值上总应高于检出限。定量限是定量分析方法实际可能测定的某组分的下限。与检测限不同，定量限不仅受到测定噪声限制，而且还受到空白背景绝对水平的限制，只有当分析信号比噪声和空白背景大到一定程度时才能可靠地分辨与检测出来。噪声和空白背景越高，实际能测定的浓度就越高，说明高的噪声和空白背景值会使测定限变坏。

设某测量值N的真值为N′，误差为ε=|N'-N|，则，它反映测量值偏离真值的大小，叫做绝对误差。绝对误差ε和测量值N具有相同的单位。用绝对误差无法比较不同测量结果的可靠程度，于是人们用测量值的绝对误差与测量值之比来评价，并称它为相对误差，用表示，并可化成百分比，也叫百分误差。例如用外径千分尺测量两个物体的长度分别是10．00毫米和0．10毫米，两次测量的绝对误差都是0．01毫米，从绝对误差来看，对两次测量的评价是相同的，但是前者的相对误差为0．1%，后者则为10%，后者的相对误差是前者的一百倍。先看绝对误差的数学定义：在测量中不考虑某量的大小，而只考虑该量的近似值对其准确值的误差本身的大小，绝对误差△=测量值 X—真值L 。绝对误差 = 测量值 - 真值相对误差 =（测量值 - 真值） / 真值例如:激光测距仪测量月地距离绝对误差是10cm,但已是非常精确,因为相对误差很小.可以想象若测量一个人的身高下相差10cm,此测量就没有意义了,相对误差太大了。应用中的绝对误差也是相对的，因为真值也是人为测得或确定的，那叫约定真值

重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。假设两次独立测定结果分别为A、B，那么绝对差值是A-B的绝对值吗？

绝对差值的定义是什么呀？很多国标里都有规定。比如两次测量结果为2.36，2.22，绝对差值是怎么算的呀？

用归一化法定量只能得出每种组分占所有出峰组分的百分比，而不能得出每种组分的绝对含量，譬如：我现在测得的结果是亚油酸占脂肪酸的百分比，而我想知道的是亚油酸在油脂样品中的含量，这个问题怎么解决？？如果用内标法定量，那么应该如何选择内标呢？FID对各种脂肪酸的灵敏度是不一样的，选用一种内标的可行性大不大？用归一化法定量存在很多局限性，为什么现在都是用这种方法定量呢？做过脂肪酸的各位专家，请指点一下，谢谢啊

应该理解“绝对安全，实际上是不存在”的，无论是§天然的还是合成的，只要摄入量充分的大和/或食用时间足够的长，都会在一些人身上引起有害的结果，包括食盐、糖、动物脂肪等等一般认为”绝对安全”的天然物质。 您怎么看待添加剂的”绝对安全”？

不知道这样提绝对分析方法和相对分析方法是否准确绝对分析方法测的是物质的绝对量一般是利用物理的方法吧，而通过加入标准物质的认为是相对测量的方法，那么绝对的测量方法有哪些呢？我知道的，称重法，同位素稀释质谱法

先说一下绝对最低温度：地球物质的绝对最低温度为-273.15℃，这也是物质能达到的最低温度，亦称为绝对零度.。这种温度只能接近，却无法达到，一旦到达这个温度，空气就会凝固。那有没有绝对最高温度呢？既然有绝对最低温度，那是不是也应该有个绝对最高温度，如果有它应该是怎么样定义的呢？