菌落数目

一、菌落总数介绍：　　菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。　　菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。　　菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。二、检验方法　　菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。　　基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。　　国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。　　检验方法参见：　　GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》　　SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：　　1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。　　固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。　　用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。　　另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。　　2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。　　操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。　　3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。　　4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。　　在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。　　为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。　　5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。（二）倾注培养　　1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。　　将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。　　待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。　　2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。　　倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。　　3．为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过[

菌落总数培养2天和培养5天结果有什么不同?有人说细菌数目不变,只是菌点增大.有人说细菌数目会增加,你们认为呢?

一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。

细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。转

一固体样品作菌落总数测定，其中10-1平板菌落数多不可计，10-2平板菌落数为271,10-3平板菌落数为60，则该样品菌落总数( )个/g。 A、27000 B、27100 C、60000 D、43550

菌落总数的快速测定方法1 适用范围：可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理：将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑（TTC）显色剂等加载在试纸片，经加样、培养后，细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑，通过计数报告结果。3 操作方法3.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇（均质）做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的纸片上，轻轻将上盖膜放下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。4 结果判断与计数：4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10个～100个）的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升）样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见下表中例次1）。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告（见下表中例次2和例次3）。4.2.3若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数（见下表中例次4）。4.2.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值（见下表中例次5和例次6）。 例次稀释度两稀释 度之比选定计数 稀释度报告方式 （个/g或 个/mL）10-110-210-31 2 3 4 5 6158 208 265 98 8 295

空白菌落总数总是有针尖大小的菌落，是怎么回事？但是倒不加生理盐水，只加培养基是没有菌落的

最近试做了几个样，全部无菌落，已恒温控制了培养基的温度为48度，甚至试做了一个没有添加防腐剂的样品，还是无菌落，有没有可能是因为刚灭完菌的培养皿和生理盐水温度太高烫死了，摸着都烫手，培养基应该没变质，在保质期内，在无菌落的皿上按手印培养后有菌落生成

国标中检测绿脓杆菌时，可疑菌落需要验证，但是什么样的菌落叫做可以菌落？

请问各位同行，菌落总数检测，10的负2结果为菌落蔓延，10的负3结果 15 28，最后的报告是要以负2 还是负3的为准。。。。。

一、填空（1）菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养(48)小时后,所得(1)mL水样所含菌落的总数。（2）若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。第二题,大家是报告0还是未检出?

做菌落总数测定的时候，所有培养基都多覆盖了一层培养基，空白组没长菌，12个平板但是大部分接种的培养基菌落表面还是长了菌，很多几乎是全部覆盖了，但是也有2个表面没长弥漫性菌落的 是怎么回事

测试菌落总数测试的时候可不可以把温度调高，是否可以提早出结果呢？

一般我们做液体样品的菌落总数检测，菌落在平板上都很细小，有时一眼看上去根本没有，非常仔细看才能看到很小的小点点在培养够48h的情况下，这样的算不算到有效菌落的统计里？如果要计数的话，很难判断是菌落还是别的什么，而且即使用菌落计数器数也很伤眼睛如果不计数的话，多培养几天后有些菌落会长大一点点，感觉的确是菌落那这些细小的点点算不算到菌落总数里呢

[font=SimSun, STSong, &]请问一下，做商业无菌中的染色镜检可以看到个别菌落，但做菌落总数后平板并不长菌，这是为啥[/font]

固体饮料里面有添加了乳酸菌，在检测固体饮料的菌落总数的时候，按照菌落总数的检测方法会把乳酸菌也给检测出来了吗？ 这样的话其菌落总数一定会超标 ，没有可以执行的标准

水分和菌落总数有直接关系么？比如固体粉末水分7%以下，菌落还是会很多么？

请教，制衣厂臭氧处理废水菌落总数和粪大肠菌群有直接关联吗，是不是菌落总数包括总大肠菌群，总大肠菌群包括粪大肠菌群？处理前，粪大肠菌群的数据和菌落总数数据比较，是20%，处理后，占1.7%，数据合理吗谢谢大家

今天出报告时遇到一个这样的问题，我用1000-2018做细菌总数，但地下水的标准钟又叫菌落总数，我想问这个是不是相同的，是不是只是叫法不同而已，我看地下水上的方法也是平皿计数法，那我测出来的是叫细菌总数还是菌落总数呢？我们资质附表中只有细菌总数，客户指明要测菌落总数，那我能不能出这个报告呢？

在菌落总数的计数中有这样的描述:如果所有的稀释度的菌落数均30,则按最低稀释倍数的结果报告.现在有这样的一个结果:0,0[10-1]；0，0[10-2]；2，1[10-3]；3，0[10-4]；那么我最后报告的结果应是多少呢？

我们想买一台菌落计数仪,查了一下,有SC-2010型系列全自动彩色菌落计数仪和SCAN-500型自动影像分析菌落计数仪以及手动菌落计数器等.有没有谁用过这些仪器?感觉如何?价格大概多少呢?谢谢.

员工手部的菌落总数可不可以直接在培养基上涂抹呀？以前是用棉球檫拭后稀释培养，我现在想用倒好的培养基直接用手涂抹来检测菌落总数，不知道可不可以！做过的培养可以指教一下！谢谢

微生物小白又要提问了，菌落（colony forming units）是微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。通常用个数表示。 那么在培养皿上刚开始显示出的菌落的形状，是不是都是圆形的呢？ 因为看书看到微生物有杆状、纺锤状、葫芦状。所以看到两个圆珠状的东西联接在一起，犹豫这是一个菌落呢还是两个菌落呢？ 如果菌落刚开始的形状都是圆形的，那么就好奇多问一句：为何都是圆形呢？？

想请问大家，在做产品菌落总数检验时有没有遇到过高稀释度平板上的菌落数反而比低稀释度平板上的菌落数多的情况？如果遇到这种情况，大家是怎么报告结果的？

1．菌落总数的测定：是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

[font=SimSun, STSong, &]菌落总数n＝5,c＝1,m＝10的四次方M＝10的五次方，[/font][font=SimSun, STSong, &]平常在五个样品中取俩个样品来做，做俩个稀释度10的-1次方，菌落数分别是110 126 120 130 10的-2次方 菌落数分别是是10 13 12 12 出厂报告应该如何写，[/font][font=SimSun, STSong, &]大肠菌群也是五个样品中选俩个样品做，俩个稀释度10-1次方和10-2次方，10的负一次方和10负二次方，都没有菌，出厂报告应该怎么写呢老师们，是＜1×10-1次方吗[/font]

生产的是果冻，同批产品中，测了三个样品，两个菌落为5，一个275（已经超标），这样的结果是正常吗？

大家有没有遇到这种情况？食品中菌落总数未检出，致病菌的平板检出2个菌？这种情况合理吗？

图中所示，用滤膜法做的总大肠菌群。100ml水样。国标规定的辨析特征描述为：1、紫红色、具有金属光泽的菌落。 2、深红色、不带或略带金属光泽。 3、淡红色、中心色较深的菌落。我的疑问是：图中1 所示，依据国标所述，紫红色具有金属光泽的容易看出，直径也较大。但是，除了那些紫红色较大的菌落外，其他的红色的直径较小的是不是总大肠菌群呢？图1 除了那些紫红色较大的菌落外，其他的红色的直径较小的是不是总大肠菌群呢？[img=690,520]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709051124_01_3295384_3.jpg[/img]下图2，另一个水样，没有明显的紫红色金属光泽，图2中所示，是不是都应该计数为总大肠菌群呢？[img=690,587]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709051134_01_3295384_3.jpg[/img]刚学微生物检测，请教各位帮忙辨认一下，在此感谢。