菌落总数检验方法

我们有个蛋白质含量约45%-60%的蛋白型固体饮料，公司制定菌落总数的检测标准依据GB/T 4789.21进行检验，可是在我们公司检验菌落总数是合格的但送我们省质检院检验就会检测出十几万的菌落总数？GB/T 4789.21这检验方法我们公司很多产品都在用都没有出现问题，就是蛋白型固体饮料与质检院检测结果相差太大。请教各位高手是不是蛋白型固体饮料做微检时有特殊的处理方法？或者需要注意什么？谢谢

一、菌落总数介绍：　　菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。　　菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。　　菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。二、检验方法　　菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。　　基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。　　国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。　　检验方法参见：　　GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》　　SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：　　1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。　　固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。　　用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。　　另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。　　2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。　　操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。　　3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。　　4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。　　在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。　　为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。　　5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。（二）倾注培养　　1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。　　将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。　　待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。　　2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。　　倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。　　3．为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过[

水质样品检验与食品样品检验，如果同时是1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数结果报告有何区别？各如何(表述)报告结果呢？请连接：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120104/3777936/“检验固体食品样品时，1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数应如何报告？”的话题。

在GB/T 5750.12-2006生活饮用水检验标准中说“对于生活饮用水在做菌落总数时只做一个稀释度，即直接从取1ml水样加入平板中”，那如果培养后平板上的菌落为“多不可计”该怎么报结果啊？

微生物检验中菌落总数的不确定度评定[~76563~]

生活饮用水检验方法标准（GB5750-2006）中菌落总数培养时间修改为48小时，原来标准为24h，不知是改变培养时间了，还是新标准的错误。那位同仁知道呀

[align=center][font='calibri light'][size=21px]浅谈水中菌落总数的检测方法[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]之前在研究奶中菌落总数的检测方法的时候，偶然看到了水中菌落总数的方法，就想到既然都是液体，那是不是可以尝试用检测水中菌落总数的方法去检测牛奶中的菌落总数。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]我们先来看看水中菌落总数检测的方法。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]第一种：平皿计数法[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]这个计数法是通过数菌落，一个单菌落就代表原样品中的一个单细胞。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]方法：样品10倍稀释→1ml稀释样品+15ml营养琼脂（45℃）混合→冷却凝固→37℃，48h培养。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]之后根据稀释倍数和取样接种量换算样品含菌数。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]第二种：酶底物法[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]原理：不同细菌分泌的不同产物可分解不同底物产生同一种信号——荧光，此信号可以在366nm的紫外灯下显示，数对应荧光孔数查MPN表得结果，稀释水样范围＜738MPN/mL。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]方法：1mL待测水样+9mL无菌水摇匀（培养基）→倒入定量盘，水平摇晃将液体充满孔槽→竖盘，棉条吸取多余水分→反向放置→37℃，48h培养→用366nm紫光灯照射，数带有荧光孔的数量。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]当时看到这个方法之后，就想到是不是能用这个方法检测牛奶的细菌总数，然后询问了一下师傅，才知道平皿计数法可以用于牛奶细菌总数的检测，但是酶底物法不太合适。因为水中除了细菌分泌产生的东西外，没有其他的物质。但是牛奶不一样，牛奶中含有脂肪，蛋白质，乳糖，矿物质等其他的物质，如果使用酶底物法会产生较大的误差，不适合牛奶的细菌总数的检测。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]虽然没有发现新的检测牛奶中细菌总数的方法，但是也学会了水中菌落总数的方法，希望能够对各位朋友提供帮助。[/size][/font][/align]

菌落总数的快速测定方法1 适用范围：可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理：将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑（TTC）显色剂等加载在试纸片，经加样、培养后，细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑，通过计数报告结果。3 操作方法3.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇（均质）做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的纸片上，轻轻将上盖膜放下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。4 结果判断与计数：4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10个～100个）的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升）样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见下表中例次1）。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告（见下表中例次2和例次3）。4.2.3若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数（见下表中例次4）。4.2.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值（见下表中例次5和例次6）。 例次稀释度两稀释 度之比选定计数 稀释度报告方式 （个/g或 个/mL）10-110-210-31 2 3 4 5 6158 208 265 98 8 295

[size=4][font=黑体]我们都知道：菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？水质：若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。食品：若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

目的: 通过对食品中菌落总数测定方法进行验证，证明我公司采用标准GB 4789.2-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》规定的方法对食品中菌落总数的测定满足检测要求。[b]1 实验室基本情况[/b][align=center]表1-1参加验证的人员情况表[/align] [table][tr][td] [align=center]姓名[/align] [/td][td] [align=center]性别[/align] [/td][td] [align=center]职务[/align] [/td][td] [align=center]所学专业[/align] [/td][td] [align=center]从事相关分析工作年限[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]女[/align] [/td][td] [align=center]微生物主管[/align] [/td][td] [align=center]食品科学与工程[/align] [/td][td] [align=center]8年[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]女[/align] [/td][td] [align=center]微生物组长[/align] [/td][td] [align=center]食品科学与工程[/align] [/td][td] [align=center]5年[/align] [/td][/tr][/table][align=center]表1-2使用仪器情况登记表[/align] [table][tr][td] [align=center]仪器名称[/align] [/td][td] [align=center]仪器型号[/align] [/td][td] [align=center]制造厂商[/align] [/td][td] [align=center]备注[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]生化培养箱[/align] [/td][td] [align=center]SPX-250B-Z[/align] [/td][td] [align=center]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]立式压力蒸汽灭菌器[/align] [/td][td] [align=center]YXQ-LS-75SⅡ[/align] [/td][td] [align=center]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]净化工作台[/align] [/td][td] [align=center]SW-CJ-2D[/align] [/td][td] [align=center]苏州博莱尔净化设备有限公司[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][align=center]表1-3使用试剂登记表[/align] [table][tr][td] [align=center]试剂名称[/align] [/td][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]生厂商[/align] [/td][td] [align=center]备注[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]氯化钠[/align] [/td][td] [align=center]160913[/align] [/td][td]西陇科学股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]平板计数琼脂（PCA）[/align] [/td][td] [align=center]171223[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][b]2 方法验证过程[/b]2.1 菌液制备：挑取一粒大肠埃希氏菌（ATCC25922）瓷珠置于BHI液体培养基中，24h过夜培养，使之菌悬液浓度在10[sup]9[/sup] CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10[sup]-6[/sup]~10[sup]-7[/sup]。2.2 样品制备：2.2.1 试验组：取25 mL2.1中制备的菌液，加入到225 mL无菌盐水中，制成每毫升10 CFU~100 CFU的样品原液，作为试验组。2.2.2 供试品组：不添加任何菌的相同样品。2.3 培养基/试剂制备：2.3.1按GB4789.28-2013食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求配制。2.3.2根据供应商提供的配制说明进行配制。2.4 实验操作：2.4.1 接种及培养：选择3个稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内做空白对照。及时将15-20 mL冷却至46℃的PCA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，36℃±1℃倒置培养48 h±2 h。为防止蔓延，可在琼脂凝固后在表面覆盖一层约4 mL的琼脂。2.4.2验证试验采用空白对照、人员比对进行试验，并分别计算实验结果及人员比对结果。2.5 测试数据： [table][tr][td=1,2] [align=center]人员[/align] [/td][td=1,2] [align=center]实验组别[/align] [/td][td=4,1] [align=center]稀释度[/align] [/td][td] [align=center]检测结果[/align] [/td][td] [align=center]平均结果[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1] [align=center]10[sup]0[/sup][/align] [/td][td=2,1] [align=center]10[sup]-1[/sup][/align] [/td][td] [align=center]CFU/mL[/align] [/td][td] [align=center]CFU/mL[/align] [/td][/tr][tr][td=1,4] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]试验组-1[/align] [/td][td] [align=center]47[/align] [/td][td] [align=center]43[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td=1,2] [align=center]46[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]试验组-2[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]48[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]47[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-1[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][td=1,2] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-2[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][tr][td=1,4] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]试验组-1[/align] [/td][td] [align=center]38[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]42[/align] [/td][td=1,2] [align=center]41[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]试验组-2[/align] [/td][td] [align=center]43[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]39[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-1[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][td=1,2] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-2[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][/table][align=center] [/align][align=center]r（A）=log[sup]47[/sup]—log[sup]45[/sup]=0.02＜0.25[/align][align=center]r（B）=log[sup]42[/sup]—log[sup]41[/sup]=0.03＜0.25[/align]重复性：单人两次独立的单次实验结果的绝对差值，不应大于重复性限r=0.25，以10为底每g（或ml）中微生物计数的对数。[align=center]R=log[sup]46[/sup]—log[sup]41[/sup]=0.05＜0.45[/align]复现性：人员比对结果符合标准要求，两人单次试验结果的绝对差值，不应大于复现性限R=0.45，以10为底每g（或ml）中微生物计数的对数。2.7是否对方法偏离？ □是 ■否2.8 结论根据GB 4789.2-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》要求依法检测，试验人员比对结果符合规定。故我公司对食品中菌落总数的测定符合标准GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》的要求。

想请问大家，在做产品菌落总数检验时有没有遇到过高稀释度平板上的菌落数反而比低稀释度平板上的菌落数多的情况？如果遇到这种情况，大家是怎么报告结果的？

检验固体食品样品时，1/10稀释液平皿上未出现菌落生长，菌落总数应如何报告？

固体饮料里面有添加了乳酸菌，在检测固体饮料的菌落总数的时候，按照菌落总数的检测方法会把乳酸菌也给检测出来了吗？ 这样的话其菌落总数一定会超标 ，没有可以执行的标准

GB 4789.2-2010 食品微生物学检验 菌落总数

[color=#333333]在食品安全微生物学检验中，为什么要以菌落总数为指标[/color]

请问大家，菌落总数有一个样品检验结果10450，报告值写多少，是不是10000？

员工手部的菌落总数可不可以直接在培养基上涂抹呀？以前是用棉球檫拭后稀释培养，我现在想用倒好的培养基直接用手涂抹来检测菌落总数，不知道可不可以！做过的培养可以指教一下！谢谢

今天出报告时遇到一个这样的问题，我用1000-2018做细菌总数，但地下水的标准钟又叫菌落总数，我想问这个是不是相同的，是不是只是叫法不同而已，我看地下水上的方法也是平皿计数法，那我测出来的是叫细菌总数还是菌落总数呢？我们资质附表中只有细菌总数，客户指明要测菌落总数，那我能不能出这个报告呢？

1．菌落总数的测定：是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

在菌落总数的计数中有这样的描述:如果所有的稀释度的菌落数均30,则按最低稀释倍数的结果报告.现在有这样的一个结果:0,0[10-1]；0，0[10-2]；2，1[10-3]；3，0[10-4]；那么我最后报告的结果应是多少呢？

目的： 通过对生活饮用水中菌落总数测定方法进行验证，证明我公司采用标准GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标 菌落总数测定》规定的方法对生活饮用水中菌落总数的测定满足检测要求。[b]1 实验室基本情况[/b][align=center]表1-1参加验证的人员情况表[/align] [table][tr][td] [align=center]姓名[/align] [/td][td] [align=center]性别[/align] [/td][td] [align=center]职务[/align] [/td][td] [align=center]所学专业[/align] [/td][td] [align=center]从事相关分析工作年限[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]女[/align] [/td][td] [align=center]微生物组长[/align] [/td][td] [align=center]食品科学与工程[/align] [/td][td] [align=center]5年[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]女[/align] [/td][td] [align=center]实验员[/align] [/td][td] [align=center]食品科学与工程[/align] [/td][td] [align=center]0.5年[/align] [/td][/tr][/table][align=center]表1-2使用仪器情况登记表[/align] [table][tr][td] [align=center]仪器名称[/align] [/td][td] [align=center]仪器型号[/align] [/td][td] [align=center]制造厂商[/align] [/td][td] [align=center]备注[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]生化培养箱[/align] [/td][td] [align=center]SPX-250B-Z[/align] [/td][td] [align=center]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]立式压力蒸汽灭菌器[/align] [/td][td] [align=center]YXQ-LS-75SⅡ[/align] [/td][td] [align=center]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]净化工作台[/align] [/td][td] [align=center]SW-CJ-1F[/align] [/td][td] [align=center]苏州博莱尔净化设备有限公司[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][align=center]表1-3使用试剂登记表[/align] [table][tr][td] [align=center]试剂名称[/align] [/td][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]生厂商[/align] [/td][td] [align=center]备注[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]氯化钠[/align] [/td][td] [align=center]160913[/align] [/td][td]西陇科学股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]营养琼脂（NA）[/align] [/td][td] [align=center]171223[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][b]2 方法验证过程[/b]2.1 菌液制备：挑取一粒大肠埃希氏菌（ATCC25922）磁珠置于BHI液体培养基中，24h过夜培养，使之菌悬液浓度在10[sup]9[/sup] CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10[sup]-6[/sup]~10[sup]-7[/sup]。2.2 样品制备：2.2.1 试验组：取25 mL2.1中制备的菌液，加入到225 mL无菌盐水中，制成每毫升10 CFU~100 CFU的样品原液，作为试验组。2.2.2 供试品组：不添加任何菌的相同样品。2.3 培养基/试剂制备：2.3.1按GB4789.28-2013食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求配制。2.3.2根据供应商提供的配制说明进行配制。2.4 实验操作：2.4.1 接种及培养：选择3个稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内做空白对照。及时将15-20 mL冷却至46℃的NA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，36℃±1℃倒置培养48 h±2 h。为防止蔓延，可在琼脂凝固后在表面覆盖一层约4 mL的琼脂。2.4.2验证试验采用空白对照、人员比对进行试验，并分别计算实验结果及人员比对结果。2.5 测试数据： [table][tr][td=1,2] [align=center]人员[/align] [/td][td=1,2] [align=center]实验组别[/align] [/td][td=4,1] [align=center]稀释度[/align] [/td][td] [align=center]检测结果[/align] [/td][td] [align=center]平均结果[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1] [align=center]10[sup]0[/sup][/align] [/td][td=2,1] [align=center]10[sup]-1[/sup][/align] [/td][td] [align=center]CFU/mL[/align] [/td][td] [align=center]CFU/mL[/align] [/td][/tr][tr][td=1,4] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]试验组-1[/align] [/td][td] [align=center]39[/align] [/td][td] [align=center]33[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td=1,2] [align=center]36[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]试验组-2[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]37[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-1[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][td=1,2] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-2[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][tr][td=1,4] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]试验组-1[/align] [/td][td] [align=center]42[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]39[/align] [/td][td=1,2] [align=center]40[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]试验组-2[/align] [/td][td] [align=center]38[/align] [/td][td] [align=center]41[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]40[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-1[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][td=1,2] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组-2[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]0[/align] [/td][td] [align=center]＜1[/align] [/td][/tr][/table][align=center] [/align][align=center]r（B）=log[sup]36[/sup]—log[sup]36[/sup]=0.00＜0.25[/align][align=center]r（A）=log[sup]40[/sup]—log[sup]39[/sup]=0.01＜0.25[/align]重复性：单人两次独立的单次实验结果的绝对差值，不应大于重复性限r=0.25，以10为底每g（或ml）中微生物计数的对数。[align=center]R=log[sup]40[/sup]—log[sup]36[/sup]=0.05＜0.45[/align]复现性：人员比对结果符合标准要求，两人单次试验结果的绝对差值，不应大于复现性限R=0.45，以10为底每g（或ml）中微生物计数的对数。2.7是否对方法偏离？ □是 ■否2.8 结论根据GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水 菌落总数测定》要求依法检测，试验人员比对结果符合规定。故我公司对食品中菌落总数的测定符合标准GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水菌落总数测定》的要求。

求助下列标准的英文版本，急用啊[em09509]食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 4789.2-2008食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数 GB/T 4789.3-2008食品中有机氯农药多组分残留量的测定 GB/T 5009.19-2008植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的测定 GB/T 5009.146-2008发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法 GB/T 5009.49-2008粮油检验 磷脂含量的测定 GB/T 5537-2008

[color=#333333]乳制品商业无菌检验中，如果通过检验菌落总数，大肠菌群，致病菌结果均未检出或者是0，能说明是商业无菌吗[/color]

GB 4789.2-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定.pdf

一、填空（1）菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养(48)小时后,所得(1)mL水样所含菌落的总数。（2）若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。第二题,大家是报告0还是未检出?

菌落总数为什么在非无菌环境中也能正常检测？？？

请问各位同行，菌落总数检测，10的负2结果为菌落蔓延，10的负3结果 15 28，最后的报告是要以负2 还是负3的为准。。。。。