菌体浓度

噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

病毒（噬菌体）买回来以后，应该怎么操作啊，是跟细菌菌种一样进行复苏，传代吗？我们要买的是MS2病毒，具体操作步骤能否提供一下啊（用什么培养基，怎么操作）以前没有接触过这类测试，谢谢！

各位好，我想请教一个问题，我们做噬菌体的实验，请问噬菌体买回来怎么处理啊，就是怎么扩增、保存啊？和细菌的保存一样吗？谢谢！

原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑——噬菌斑。了解噬菌体的特性，快速检查、分离并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体数量增加。采用生物测定法进行噬菌体检查，约需12h，因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染，以便采取必要的防范措施。根据正常发酵（培养）液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮；而侵染有噬菌体的发酵（培养）液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因而在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮，可以进行噬菌体检查。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往不适用。噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。

噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

[font=宋体]噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]phage display[/font][font=宋体]）是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框能正确表达，使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面，可以保持相对的空间结构和生物活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然后利用靶分子，采用合适的淘洗方法，洗去未特异性结合的噬菌体。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过[/font][font=Calibri]3-5[/font][font=宋体]轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体抗体库的构建和筛选技术流程：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体展示技术中，[/font][font=Calibri]M13[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]f1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]fd[/font][font=宋体]噬菌体是最常用的噬菌体，属于[/font][font=Calibri]Ff[/font][font=宋体]家族。与展示密切相关的有两种结构蛋白质：主要衣壳蛋白[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]（或[/font][font=Calibri]gp8[/font][font=宋体]）和次要衣壳蛋白[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]（或[/font][font=Calibri]gp3[/font][font=宋体]）。[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]含有[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个拷贝，以较低的价态存在； [/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]含有[/font][font=Calibri]2700[/font][font=宋体]个拷贝，以较高的价态存在。因此，[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]有利于筛选具有较高亲和力的配体，[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]可用于筛选具有较低亲和力的配体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该技术实现了基因型与表型的统一，目的基因（粉红色）被克隆至噬菌体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]基因，其产物（抗体、肽）以融合蛋白的形式展示到噬菌体的表面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]噬菌体展示技术的筛选过程包括：[/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）一个包含[/font][font=Calibri]106~1011[/font][font=宋体]个克隆的噬菌体文库与包被抗原孵育。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）清洗并除去未结合的噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）洗脱与抗原结合的噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）洗脱下来的噬菌体在辅助噬菌体的帮助下感染大肠杆菌从而扩增洗脱下来的候选噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）将细胞接种到可筛选的平板上并进行扩增。以上步骤重复[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]次，使得与目标抗原结合噬菌体被富集。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供噬菌体抗体库技术平台，包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font][font=宋体] [/font]

谷氨酸发酵液除菌体提取谷氨酸研究进展作者：佚名 文章来源：本站原创点击数： 222 更新时间：2010-4-14 13:19:04 file:///C:/Users/%E9%83%AD%E9%9B%B7/AppData/Local/Temp/msohtml1/01/clip_image001.gif我国味精生产，从发酵液中提取谷氨酸大多采用带菌体冷冻等电加离交法，由于发酵液中存在大量的菌体蛋白、悬浮物及其它杂质，给谷氨酸提取操作、提取收率、谷氨酸质量带来显著影响，且废水含高C0D、高B0D等严重污染环境的物质，又给废水治理带来重重困难。 近几年来，国内一些味精生产企业、研究所，对谷氨酸发酵液除菌体及提取谷氨酸进行了大量研究，除菌体工艺有高速离心机分离，絮凝剂分离、膜分离等，都取得了明显成果。按除菌体不同工艺、除菌体率分别达到70％～96％，以膜分离法除菌率最高达95％以上，得到的发酵液澄清，0D低，谷氨酸提取操作方便，由于除去了影响谷氨酸结晶的大量杂质，因而谷氨酸结晶颗粒大，纯度高、质量好，易于沉降分离，提取收率明显提高。高纯度谷氨酸有利于味精精制，味精中和脱色过滤可降低活性碳或树脂用量，提高味精结晶质量，大大降低味精生产成本。除菌体后的发酵液及等电提取后的废液中C0D、BOD大大减少，减轻了环境污染，降低了废水治理负荷与难度。得到的菌体经干燥后可以综合利用，作高蛋白质饲料或作核苷酸的生产原料。 谷氨酸发酵液除菌体及多种新工艺提取谷氨酸的研究，是对我国味精工业清洁生产的有益探索。随着研究的不断深化，许多先进工艺技术将会被应用，味精生产终将进入一个新水平。 1 高速离心分离除菌体，浓缩等电提取 沈阳味精厂从瑞典引进4台ALFA—LAVA公司的FESX5l2S一3lC型蝶片式高速喷咀离心机，转速4650I1) 分，功率45kw，对玉米淀糖为碳源，尿素作氨源、玉米浆为生物素的T一6l3菌发酵液进行了工业性除菌体，进料量20m ，喷咀直径1．0mm，菌体分离率达70％以上，轻流占75％ ，重流占25％左右，除菌体后发酵液中谷氨酸略增，还原糖下降，0D值明显降低，工业规模运转证明，该设备对分离谷氨酸发酵液性能可靠，比较适宜。 发酵液除菌体后采用浓缩等电点提取法。 除菌体后的发酵液，经减压蒸发到含谷氨酸12％～15％ ，后与重液经水解浓缩制成的二次蒸发液进行等电中和(60℃、40l1)m搅拌)，然后冷却、沉淀、离心分离，提取达83．14％～85．03％，比带菌体浓缩等电点提取收率77．24％显著增加。且谷氨酸含量高达96％(干)，用于制造味精时脱色液过滤快，透光率高，味精质量好。 2 凝聚剂除菌体一次等电或浓缩等电提取 使用安全性高的壳聚糖作絮凝剂，其阳离子性能与发酵液中菌体(带负电荷)与蛋白凝聚使其沉淀而进行分离。壳聚糖对金属离子、蛋白质、氨基酸、核酸均有很强的吸附能力，特别对胶体微粒有甚大的絮凝作用，其官能基团主要是氨基。在最佳pH、搅拌速度、用量、温度条件下，菌体去除率可达9O％左右。 壳聚糖不易溶于水，而溶解于酸性溶液中。配成一定浓度后，于发酵液中慢慢加人，搅拌速度也以慢为好。过快易将凝絮物打碎，难过滤。菌体凝聚沉降后，抽取上清液，沉降物可加硅藻土或珍珠岩作助滤剂，尤以硅藻土作助滤剂好，不吸附谷氨酸。中试规模过滤可用板框压滤，小试规模实验室中，采用高速离心机分离。应用国产高速离心机分离除菌体凝絮物(包括菌体)至今未见报导，这也是用凝絮法除菌体不能很快推广的一个较大问题。凝聚法去除菌体后的谷氨酸发酵液的提取方法有： 2．1一次等电点法 谷氨酸发酵液经絮凝处理后，采用一次等电点法，(即用酸逐步调到pH3-2法)提取收率可达76．18％ ，比对照收率71．3％提高6．2％ ，谷氨酸结晶的透光率52．25％ ，比对照l1．25％提高了4倍；谷氨酸提取后的母液，可减少谷氨酸0．06％～0．11％。这是提高谷氨酸收率的一个重要原因，即去除了干扰谷氨酸结晶因素。 2．2 浓缩等电点法 将除菌体经过滤的发酵液，真空浓缩一倍，用加热快速调pH的方法，一次性直接调到pH3．2。搅拌到常温，再搅拌2h～3h时，沉淀3h，离心分离谷氨酸，谷氨酸一次收率平均可达85％左右，纯度可达95％左右，且调节pH的酸用量比普通谷氨酸等电点法用量要少。 2．3 先等电提取后浓缩再提取法 谷氨酸发酵液除菌体后，先用一次等电点法(常温或冷冻)提取出谷氨酸的60％～75％，残母液中含1．2％～1．5％左右的残谷氨酸，再加以浓缩(通过多效蒸发器)3倍，再提出剩余谷氨酸，总收率可达85％以上。母液浓缩成浆状可作肥料，再根据当地的土质情况，适当添加磷、钾等肥效成分。这条工艺路线是既提高了谷氨酸的提取收率，又产生综合效益。从发酵液分离出

[font='calibri'][size=13px]噬菌体展示技术流程、原理及九大问题解析[/size][/font]原理：噬菌体展示技术，是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。基于噬菌体展示抗体库构建和筛选的专业知识，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。噬菌体展示技术流程：噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到90%，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。①义翘神州的噬菌体展示平台可以针对哪些种属的抗体进行开发？目前可以对小鼠 、兔子、鸡、人等多个种属的抗体开发进行建库。②义翘神州的噬菌体展示库建库库容有多大？免疫库的库容在5×108~2×109，天然库的库容可以达到1011。③义翘神州的噬菌体展示库筛选抗体的多样性如何？根据不同要求，可以提供十几个到上百个unique hits。④义翘神州噬菌体展示库抗体开发周期需要多长时间？免疫库从建库到获得质粒需要8周时间，天然库需要6周时间。⑤义翘神州噬菌体展示库及其筛选出的克隆可以保存多久？均可保存一年以上。⑥怎样衡量一个库的好坏，有哪些标准？除了库容大小，还可以通过电泳判断插入率，以及通过一代测序验证抗体构建的正确率，评估抗体库的真实库容。或通过二代测序，获得库的序列多样性和覆盖率等具体信息。⑦淘洗时筛选到非特异抗体怎么解决？被动的方法是利用负筛，尽快能去掉非特异克隆。主动的方法是更换免疫原，选择不仅免疫原性好且活性好、特异性强的免疫原。⑧淘洗过程中，如何判断淘洗是否可以终止？有多种途径可以判断，比如通过计算噬菌体淘洗前后的产出和投入比、将每轮淘洗的克隆测序观察序列是否出现富集、以及将噬菌体库检测ELISA等。⑨如何筛选到亲和力高的抗体？可以尝试降低抗原包被量，同时增加洗涤力度。更多详情可以关注：噬菌体抗体库技术平台https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display

我想请问一下，就是做噬菌体的实验时，为什么要用双层平板啊？这个双层平板有什么作用吗？跟单层的话有什么区别

[font=宋体]噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。下面为大家介绍噬菌体展示技术基本流程：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一般来说，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]有以下[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个步骤[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]1:[/font][font=宋体]构建噬菌体展示库[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术用于将外来[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]整合到病毒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中，使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面，而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库，如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]：结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这些库暴露于选定的目标，只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体，如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]：洗涤[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走，只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]：洗脱[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]：放大[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增，或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示的应用[/b][/font][font=宋体]噬菌体展示技术在基础研究、诊断和治疗应用领域发挥了关键作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组抗体具有高特异性和高亲和力，可用于在侧流分析（[/font][font=Calibri]LFA[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]和细胞成像等多种诊断平台中快速准确地识别样本中的目标抗原。大多这些平台都利用抗原捕获测定或抗体捕获测定来诊断某些疾病的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]阿达木单抗（市场名为[/font][font=Calibri]Humira[/font][font=宋体]）是首款通过噬菌体展示技术获得上市批准的治疗性抗体，其可中和肿瘤坏死因子，主要用于治疗类风湿性关节炎。噬菌体展示技术的出现，使得抗体药物的研发有了突破性进展，已成为最重要的药物筛选平台之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display]噬菌体展示技术平台[/url]，详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font][font=Calibri] [/font]

大肠杆菌发酵过程经常会发生各种各样的菌体自溶，可以发生在分批阶段，补料阶段，诱导后阶段。每个阶段有不同的原因和对策，下面我会分批次说说各种自溶的原因以及对策，希望有抛砖引玉之效。首先，我说说分批阶段。在分批阶段，通常自溶可以发生在几乎任何阶段，比较早的可能是接种后菌体生长过慢延滞期大大增加从数小时至十数小时，晚的大致出现在补料前。早期自溶可能出现的现象：延滞期增加，溶氧pH变化可能不大（也有上升至某一点不动）泡沫少或者几乎无泡沫；中晚期的表现大致可以有泡沫形成（停止搅拌后泡沫经久不散），加入消泡剂无效，pH上升，溶氧上升，镜检可见碎片，发酵液味道异常等现象。分批阶段自溶的原因：菌种，培养基，噬菌体，工艺异常，人为失误等。以下贴子将一一分析。

噬菌体可以用质谱定量分析吗，不管是根据蛋白或者根据核苷酸。噬菌体的蛋白可以被酶切吗。酶切后定量特征肽段，可行吗？

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。[/font][font=宋体][font=Calibri]1985[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Smith[/font][font=宋体]首先发现外源[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段可以融合到非裂解丝状噬菌体[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]外壳蛋白的编码基因上，并以融合蛋白的形式表达在病毒表面，而不影响噬菌体的传染性。随后，[/font][font=Calibri]Winter[/font][font=宋体]颠覆了噬菌体展示的过程，他使用噬菌体展示抗体（而不是蛋白质），然后找出与分子甚至细胞结合的目标抗体。噬菌体展示技术这一发明，为单克隆抗体药物的发现带来了巨大的改变。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]杂交瘤和噬菌体展示技术都属于重要的单克隆抗体制备技术。然而，每种方法都有其局限性，以下表格是两者的优势和缺点对比。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示技术优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]? 大规模生产[/font][font=宋体]? 周期快[/font][font=宋体]? 筛选过程易于控制[/font][font=宋体]? 易于筛选大量的不同克隆[/font][font=宋体]? 可直接筛选人类文库[/font][font=宋体]? 可用于筛选有毒抗原[/font][font=宋体][font=宋体]? 无免疫原性问题（对于[/font][font=Calibri]na?ve[/font][font=宋体]文库）[/font][/font][font=宋体]? 无克隆生存能力问题[/font][font=宋体]? 直接获得序列[/font][font=宋体][font=宋体]? 无动物使用（对于[/font][font=Calibri]na?ve[/font][font=宋体]文库）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]?价格昂贵[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]binders[/font][font=宋体]可能有较低的亲和力[/font][/font][font=宋体]? 技术更难[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]杂交瘤技术优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]? 大规模生产[/font][font=宋体]? 高产量[/font][font=宋体]? 高特异性[/font][font=宋体]? 高灵敏度[/font][font=宋体]? 低成本[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]? 周期长[/font][font=宋体]? 需要人源化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]基于噬菌体展示平台，义翘神州可为客户提供多种噬菌体展示文库构建和筛选服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多噬菌体展示技术和[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display][b]噬菌体抗体库技术平台[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font]

请教各位：我现在想用透射电镜拍摄噬菌体（一种病毒），负染后电镜，请问支持膜选哪种好呢，碳支持膜、微栅、超薄碳膜、多孔膜？非常感谢！！！

近日，美国巴尔的摩Intralytix公司研制出一种基于噬菌体的EcoShield产品，该产品能显着减少甚至清除碎牛肉中的大肠杆菌O157:H7,此产品目前已获得FDA批准，其纯天然的除菌方式受到FDA的高度评价。 Intralytix公司首席执行官表示，虽然EcoShield产品并非对抗大肠杆菌的"高招",然而它确实提供了一个"杀灭步骤",由此可将大肠杆菌显著得减少或清除99%至100%。 EcoShield产品由三种噬菌体混合而成，对人体、动物、植物无害，能有效的防护大肠杆菌O157:H7。

[font=&]【题名】： 菌体浊度在线光电测量研究[/font][font=&]【全文链接】: https://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10422-2005131809.htm[/font]

含农药和菌体的培养基（牛肉膏蛋白胨）怎么进行前处理？是研究有机磷农药降解性的，大家有作过这个的嘛？[em61]

通常测定菌体密度时用的是600nm时的吸收值，那么通常1个OD600nm对应多少个菌体数/ml？也就是说1OD=？cfu/ml？

美国典型物保藏中心，又称美国模式典型物收集中心(ATCC)，ATCC是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织。目前它可以提供以下物品：细胞系（3000种）；细菌和噬菌体（15000种）；动植物病毒（2500种）；原生动物 1200种以及重组物品等。北京时代新光TEl: 010-87875910 010-87875015 13371681771 E-mail: zfyu@ bio-life.cnweb: www.bio-life.cn

酒精杀菌消毒能力的强弱，其浓度的高低起着关键性的作用，过高或过低都不行，效果最好的是75%。经过测定，使用75％的酒精，既能使组成细菌的蛋白质凝固，又不形成阻挡酒精杀灭因子穿透的保护包膜。因而，就能使酒精杀灭因子继续向菌群内部渗透，75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白质未变性前逐渐不断地向菌体内部渗入，达到杀灭的浓度、剂量，使细菌所有蛋白脱水、变形凝固，也就能彻底将外、中、里层的全部细菌杀灭，达到彻底消毒的目的、效果。所以，消毒用酒精的最佳浓度应为75 ％，酒精的杀灭因子既可以渗入菌体内，也能深入菌群的深层内部，接触到每一粒细菌，将它们尽数都杀灭，做到科学合理应用酒精消毒剂。

检测活性污泥中活细菌的存活情况，加入了草酸铵结晶紫染色剂，在显微镜下能看见一团团深蓝色的东西，但这些细菌不会运动，那它们是活性菌体吗？

跟大家分享个小知识。酒精能渗入细菌体内，使组成细菌的蛋白质凝固。所以酒精在医疗卫生上常用它作消毒杀菌剂。但为什么用70%～75％的酒精而不用纯酒精消毒呢？这是因为酒精浓度越高，使蛋白质凝固的作用越强。当高浓度的酒精与细菌接触时，就能使菌体表面迅速凝固，形成一层包膜，阻止了酒精继续向菌体内部渗透。细菌内部的细胞没能彻底杀死。待到适当时机，包膜内的细胞可能将包膜冲破重新复活。因此，使用浓酒精达不到消毒杀菌的目的。如果使用70%～75％的酒精，既能使组成细菌的蛋白质凝固，又不能形成包膜，能使酒精继续向内部渗透，而使其彻底消毒杀菌。经实验，若酒精的浓度低于70％，也不能彻底杀死细菌。

酒精杀菌消毒能力的强弱，其浓度的高低起着关键性的作用，过高或过低都不行，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死。若酒精浓度过低，虽可进入细菌，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。经过测定，效果最好的是浓度为75%，能够使细菌内的蛋白质变性。75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白质未变性前逐渐不断地向菌体内部渗入，达到杀灭的浓度、剂量，使细菌所有蛋白脱水、变形凝固，达到彻底消毒的目的。所以，消毒用酒精的最佳浓度应为75％。另外，浓度越高，对皮肤或人体伤害越大。题外话含氯消毒剂作为我们常用的高水平消毒剂，可以杀灭大多数的细菌芽胞，以及分枝杆菌、亲水性病毒、真菌、繁殖期细菌、亲脂性病毒。但是其消毒效果还受到消毒浓度和时间的影响，比如高浓度有效氯（2000mg/L~5000mg/L）作用时间大于30分钟时，可以杀灭所有病原，包括细菌芽胞，可以达到高水平消毒，而低浓度有效氯（400~700mg/L）仅作用10分钟以上时，则不能杀灭细菌芽胞，仅达到中水平消毒。此外，有机物污染对有效氯杀菌效果影响很大，也就是清洁与否，如果消毒前没有彻底清洁，也会影响其消毒水平。因此，在使用含氯消毒剂等消毒用品时，有必要对被消毒的物品及污染的病原体种类进行评估，确定需要达到的消毒水平，从而正确配置合适的消毒浓度，才能达到可靠的消毒效果。

大肠杆菌发酵经验总结首先，补料速率与比生长速率直接影响着乙酸的生成速率和积累量（主要是补料速率与比生长速率影响发酵液中的残糖量，进而影响），所以适当的控制补料速率和比生长速率，对于控制乙酸的量有很好的效果。 其次，必须要保证充足的溶氧，并严格控制pH值，而且补酸碱的速率尽量缓和，不能太快；温度对于蛋白的表达也有很重要的影响，较低的发酵温度下所生产出的蛋白大多是有活性的，而较高的发酵温度下产生的蛋白大多一包涵体形式存在。第三，选取合理的诱导时间非常重要，一般的诱导时间选在指数生长后期，而且诱导时的比生长速率最好能控制在0.2之内，选在此时诱导，1.将菌体的快速生长期与蛋白合成期分开，使这两个阶段互不影响，有利于蛋白的高表达；2.已经得到了大量的菌体，而且菌体的生物量基本接近稳定，不论是从动力学角度，还是能耗，物料成本方面，都比较合理。第四，补料过程中的碳氮比也很重要。若氮源过高，会使菌体生长过于旺盛，pH偏高，不利于代谢产物的积累，氮源不足，则菌体繁殖量少从而影响产量；碳源过多，则容易刑场较低的pH，抑制菌体生长，碳源不足，则容易引起菌体的衰老和自溶。另外，碳氮比不当还会引起菌体按比例的吸收营养物质，从而直接影响菌体的生长和产物的合成。 根据自己的经验，一般情况下，对于一个稳定的发酵工艺下，如果总是在固定的发酵时间段出现溶菌现象，而且能排除噬菌体和染菌的可能性后，那就可能是因为碳氮比不合理造成的。可以适当调整碳氮比。 大家讨论得较多的是关于代谢副产物乙酸对大肠杆菌发酵的影响，针对我们论坛所发的帖，我先总结以下几点，并作出相应解决措施。一、代谢副产物-乙酸乙酸是大肠杆菌发酵过程中的代谢副产物，在多大的浓度下产生抑制作用各种说法不一，一般认为在好气性条件下，5～10g/L 的乙酸浓度就能对滞后期、最大比生长速率、菌体浓度以及最后蛋白收率等都产生可观测到的抑制作用。当乙酸浓度大于10或20g/L 时，细胞将会停止生长，当培养液中乙酸浓度大于12g/L 后外源蛋白的表达完全被抑制。预防乙酸产生的措施： 1、通过控制比生长速率来减少乙酸的产生：比生长速率越高，乙酸产生越多，当比生长速率超过某个值时，乙酸开始产生。可以通过降低温度，调节酸碱度，控制补料等方法来降低比生长速率。 2、透析培养： 在大肠杆菌的培养过程中可以用透析技术除去发酵液中的有害物质，降低乙酸含量从而实现重组菌的高密度发酵和产物的表达。3、 控制葡萄糖的浓度：葡萄糖是大肠杆菌发酵过程中重要的碳源之一，用其作碳源是要将其控制在一个较低的水平上，以减少乙酸的产生。 常用的控制方法主要有： 恒pH法：大肠杆菌会代谢葡萄等产生乙酸，使pH 值下降。因此可通过pH值的高低作为控制葡萄糖的指标，该法的缺点是pH 的变化不完全是由葡萄糖代谢的结果，容易造成补料体系出错。 恒溶氧法：菌体代谢时会消耗氧，使溶氧下降，当葡萄糖浓度低到一定程度时菌体代谢下降，消耗氧能力下降，溶氧上升。因此，根据溶氧曲线补加葡萄糖，保持溶氧恒定，可以控制葡萄糖在一定的水平。 二、温度大肠杆菌发酵最适温度是37 C，当温度最适菌体生长时，比增长速率将会增大。随温度上升细菌代谢加快，其产生代谢副产物也会增加。这些副产物会对菌体的生长产生一定的抑制作用。菌体生长过快也会影响质粒的稳定性。降低培养温度，菌体对营养物质的摄取和生长速率都会下降。同时也减少了有毒代谢副产物的产生和代谢热的产生。有时降低温度更有利于目的蛋白的正确折叠及表达。在重组大肠杆菌的发酵中不同发酵阶段其最适温度也不 同，为了能获得大量的目的蛋白，首先要保证菌体的量，因此在前期可优先考虑菌体的生长，到诱导阶段应将目的产物的表达放在首位。三、培养方式 微生物的培养方式主要有分批、连续和补料分批3种。大肠杆菌发酵大多采用补料分批培养，这是在现代发酵工艺得到优化的一种方式，能有效的优化微生物培养过程中的化学环境。使微生物处于最佳的生长环境。这种方式一方面可以避免某些营养成分初始浓度过高出现底物抑制现象，另一方面能够防止限制性营养成分被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成。补料分批培养已广泛应用于各种各样的初级、次级生物产品和蛋白等的发酵生产中。

http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2012/01/1325747079.jpg据英国每日邮报报道，目前，美国加利福尼亚州大学圣地亚哥分校的研究人员能够“同步化”数百万细菌的生物时钟来形成一种新型生物广告牌，像霓虹灯广告牌一样闪烁发光。细菌体形式的“生物像素”像霓虹灯一样脉冲闪动，迄今为止，研究人员已创建由13000生物像素(大约6000万细菌)构成的发光芯片。这些闪光信息是通过在具有生物时钟的细菌体上附加荧光蛋白质形成的，在一个细菌群体中同步数千细菌的生物时钟，然后一致性地同步数千个闪光细菌群体同时发光或者停止。这个芯片通过诱导细菌群体内部彼此间进行化学通信来实现“同步效应”，之后诱导细菌群体释放气体与其他细菌群体进行通信。最终结果将形成一个缓慢的闪光效应，研究人员能够非常有效地进行控制，他们已使用这种方法来制作大学标语广告。研究人员称，很可能未来使用这种发光生物芯片可用于制作探测毒素物质的传感器，其有效性远超过竞选活动的高调广告牌，同时，“同步生物”性传感器远比当前使用的电子传感器更加灵敏有效。美国加利福尼亚州大学圣地亚哥分校生物工程师和生物学教授杰夫-哈斯蒂(JeffHasty)说：“这种类型的活体传感器颇具吸引力，人们可利用它作为不间断性监控器，长期呈现一种既定图案。”据悉，他是加利福尼亚州大学圣地亚哥分校生物科学系、生物电路学会研究小组负责人。由于这些细菌体将以不同方式响应不同浓度环境，因此可以改变它们的闪光模式频率，它们可以提供一种毒素的危害性的连续性变化，或者监控病原体产生的任何变化。

1、这是根据酒精的杀菌机理与特点经过测定而确定的。由于细菌不具备进行氧化的细胞器如线粒体，其氧化代谢的酶均分布于细胞膜的表面；故其细胞膜蛋白质的干重可以达到70%以上，蛋白质是酒精杀灭因子的靶点物质。2、首先，酒精消毒剂是中效消毒剂，能杀灭结核杆菌；不能杀死如：细菌芽孢、部分种类的真菌、病毒等微生物。酒精杀灭细菌的原理，主要是能渗入细菌体内，吸收细菌蛋白的水分，使组成细菌的蛋白质脱水凝固，引起蛋白质的变性和沉淀，从而达到杀灭细菌的目的。（1）如果酒精浓度过高，达到80%以上的浓度就会大大增强、加快蛋白质凝固的速度，使微生物族群的外层微生物接触到酒精时，细胞膜上的蛋白质就发生迅速的变性凝固而形成对内层、里面微生物群体的坚固的包膜称之为：保护层。这个保护层为一层通透性极差的蛋白质层，阻止了酒精杀灭因子继续向菌体内部的微生物群体的渗透，阻断了酒精杀灭因子进入菌群、菌体内部，将全部微生物杀死。（2）由于细菌都不是单独孤立存在的，而是以族群的形式存在的，菌群深层内部的、未接触到酒精杀灭因子的微生物个体就不能被杀死。这些在包膜保护层内的未被杀灭的细菌待到适当时机如：包膜保护层破裂，就将冲破包膜保护层重新露出复活、生长繁殖。（3）达到80%以上并浓度逐渐增高的酒精，其渗透性逐渐降低。尤其是高浓度时，酒精的杀灭因子就更不能透过这个由外层菌体蛋白质变性形成的包膜保护层而渗入菌群的内部，接触到深层的每个细菌，导致杀菌能力逐渐减弱，就达不到消毒的目的了。（4）低浓度的酒精，虽可进入细菌，不能提供足够数量的杀灭因子，渗透压会降低，无法将其体内的蛋白质凝固，也就不能杀灭细菌。

8.0，加入后需静置20min），进行超声破碎，超声条件：400W，工作5秒，间隔5秒，重复一定次数，（根据我们的仪器找出一个比较好的工作条件）。直至菌体溶液变清澈为止，大约花费时间 。2.2.2 取少量经超声破碎后的菌液，10000rpm离心10分钟，分别对上清和沉淀进行检测，并用全菌作为阳性对照，检测菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。注意事项：（1） 超声破碎具体条件可根据实验情况而定，要掌握好功率和每次超声时间，降低蛋白被降解的可能。（2） 功率大时，每次超声时间可缩短，不能让温度升高，应保持在4度左右，超声时保持冰浴。（3）菌体破碎后总蛋白浓度的测定可用Bradford 法或者紫外吸收法。（4）可通过SDS-PAGE 电泳观察菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。

作者：牛红军（山西医科大学）摘要： 目的：初步研究光合细菌生物转化槲寄生的转化机理,并且对光合细菌生物转化槲寄生培养液中具有细胞毒活性的蛋白质和总三萜类物质进行研究。 方法： 实验一：(1)采用pH计测定光合细菌转化槲寄生过程中培养液pH的变化趋势；(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳法获得光合细菌(PSB)蛋白质、酯酶、过氧化物酶及超氧化物歧化酶的电泳图谱；(3)槲寄生提取液中添加吲哚,以PSB进行生物转化,通过HPLC法测定靛蓝的生成量来反映PSB加氧酶活性。 实验二：将光合细菌转化槲寄生培养液(PSBT)离心,得到PSBT上清液和菌体沉淀。菌体沉淀用超声波辅助冻融法破碎,离心,上清液即为PSBT菌体沉淀提取液。取PSBT上清液及PSBT菌体沉淀提取液,进行硫酸铵沉淀和透析,分别得PSBT上清液总蛋白提取液和菌体沉淀总蛋白提取液。取不同浓度的总蛋白质提取液,用MTT法测定细胞毒活性。 利用AKTA purifier 10层析系统,Hitrap Desalting和CM Fast Flow等层析柱,采用不同缓冲液体系对PSBT上清液总蛋白提取液进行蛋白质纯化。 实验三：采用紫外分光光度法对槲寄生提取物和PSBT中三萜类化合物进行比较研究；分别采用薄层色谱法和高效液相色谱法(HPLC)对齐墩果酸进行定性分析和含量测定,HPLC色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18 (200mm×4.6mm, i.d.5μm),流动相为甲醇-0.18%的磷酸水(86：14),检测波长210nm,柱温25℃,流速1ml/min。结果： 实验一：(1)接种PSB后,纯PSB培养液pH缓慢上升,PSBT的pH迅速下降；(2)PSBT中菌体蛋白质、酯酶、过氧化物酶及超氧化物歧化酶的电泳图谱与纯PSB培养液中菌体的电泳图谱不同；(3)未得到PSBT和纯PSB培养液中菌体的超氧化物歧化酶(SOD)电泳图谱；(4)加入吲哚后,PSBT中有靛蓝类物质生成,而纯PSB培养液中无靛蓝产生。 实验二：各蛋白质样品的细胞毒活性： (1)上清液总蛋白对HO-8910细胞的半数抑制浓度(IC50,mg/mL,按照槲寄生提取液中原药材含量计算,下同)：①IC50200mg/mL:沼泽红假单胞菌转化槲寄生水浸提培养液(浸沼,JZ)是0.18,槲寄生水浸提培养基(浸对,JD)是20,球形红细菌转化槲寄生水浸提培养液(浸球,JQ)是60：②200mg/mLIC502000mg/mL:槲寄生水提培养基(水对,SD)、沼泽红假单胞菌转化槲寄生水提培养液(水沼,SZ)和球形红细菌转化槲寄生水提培养液(水球,SQ);③IC502000mg/mL:球形红细菌转化槲寄生醇提培养液(醇球,CQ)、沼泽红假单胞菌转化槲寄生醇提培养液(醇沼,CZ)和槲寄生醇提培养基(醇对,CD)。 (2)上清液总蛋白对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:JD是8,JZ是20,JQ是78,CQ是150；②200mg/mLIC502000mg/mL:SQ。 (3)菌体沉淀总蛋白对HO-8910细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:SZ是84,CZ是122；②200mg/mLIC502000mg/mL:JQ和JZ；③IC502000mg/mL:纯球形红细菌培养液(球,Q)、纯沼泽红假单胞菌培养液(沼,Z)、SQ和CQ。 (4)菌体沉淀总蛋白对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:JZ是14,JQ是18；②200mg/mLIC502000mg/mL:CZ、CQ和SZ。 (5)其它蛋白样品对肿瘤细胞几乎没有抑制作用。 SZ上清液总蛋白、SQ上清液总蛋白和SD总蛋白在CM Fast Flow层析柱的各种层析条件下都至少得到一个穿透峰和一个洗脱峰,另外,SQ上清液总蛋白在pH5.0的缓冲液体系中还额外分离得到的一个洗脱峰；SZ上清液总蛋白和SQ上清液总蛋白都在pH6.5的缓冲液体系中多分离得到一个小穿透峰。 实验三：CQ和CZ的总三萜含量与CD相比分别增加36%、14.7%；CQ和CZ的齐墩果酸含量与CD相比分别增加925%、281%；SQ、SZ及SD的总三萜和齐墩果酸含量均很低。 结论： (1)培养液中加入槲寄生后,光合细菌参与槲寄生的生物转化反应的某些酶被抑制或激活；(2)各种蛋白质提取液中,PSB转化槲寄生水浸提培养液上清液总蛋白的抑瘤活性最大。各种浓度JZ上清液总蛋白、JQ上清液总蛋白和JD总蛋白的细胞毒活性随作用时间变化的规律不同,但都具有时间-剂量依赖性。由此可知：PSB生物转化后,蛋白质的抑瘤活性规律发生了变化,抑瘤活性的蛋白质组分发生了改变。(3)PSBT中有新的蛋白质组分生成,说明光合细菌可以转化槲寄生成分生成新的蛋白质；(4)槲寄生醇提培养基经过光合细菌生物转化后,总三萜和齐墩果酸含量均增加,球形红细菌转化生成总三萜和齐墩果酸的能力比沼泽红假单胞菌强。三萜类化合物含量的增加可能是PSBT抗肿瘤作用增强的部分物质基础。

消毒及灭菌的定义：1.消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。2.灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。本版关于灭菌的话题已有730贴， 关于灭菌的话题已有320 贴，这些帖子的绝大多数是讨论了一些关于消毒灭菌的具体操作技术。本贴的主旨是从应用微生物技术的角度来谈论这个老话题，希望战友们积极参与。我先开个头，简单介绍一下几种非热灭菌技术。大家还可以进行补充和详细谈论。1.冷冻真空干燥(vacuo-lyophilization)灭菌冷冻：－20℃以下，细胞原生质内水分结冰，破坏其胶体状态并机械挤压，刺伤菌体而死亡。真空：抽去空气呈低氧或绝氧状态，抑制正常呼吸干燥：导致菌体脱水和盐类浓度增高，抑制代谢活动正常进行2.微波(microwave)灭菌微波：是频率范围为300~300000MHz的无线电波，与其他波段的无线电波相比，其具有波长短，振荡周期短，似光波性和频率很高等特点。微波灭菌机理：微波的热效率高；介质分子振荡旋转速度快；菌体脱水，蛋白质凝固；染色体、细胞膜、酶系统发生变性。3.γ射线(γ-ray radiation)灭菌γ射线：是一种波长非常短能量非常大，有强烈穿透力使物质产生电离作用的电磁波。γ射线灭菌机理：低剂量的γ射线诱发生物变异。高剂量γ射线使水分子电离，生成具有强氧化性的H+和强还原性的OH－，直接作用菌体细胞本身；电离产生的电子和环境的分子氧结合，氧化菌体内酶的化学基团使酶失活；辐射能导致DNA降解或其他物质分解，造成死亡。4.化学熏蒸（fumigating）灭菌法化学熏蒸的概念：在一定温度和压力的密闭条件下，化学毒剂由固态或液态迅速转成气态渗透到生物体内，使生物致死。常用熏蒸灭菌剂(1)甲醛（HCHO）R—NH2 + HCHO R—NH2 •CH2O甲醛的灭菌机理在于它的还原作用与蛋白质的氨基结合使其变性，从而破坏了酶系统和细胞膜、细胞壁的结构(2)环氧乙烷(CH2OCH2)R—SH + CH2OCH2 R—S—CH2CH2OH环氧乙烷的灭菌机理在于它与蛋白质的氨基、羟基、酚基和巯基结合使其变性，抑制氧化酶和脱氢酶的活性，破坏菌体正常代谢熏蒸设备：简易消毒箱、真空熏蒸机、熏蒸消毒室