抗凝全血

[align=center]浅谈[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS药动学方法学考察中的全血稳定性实验[/align]利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]技术测定药动学时，方法学考察是至关重要的一步，除了比较经典的精密度试验、样品稳定性试验、溶液稳定性实验、专属性试验、基质效应考察、回收率实验和长冻样品稳定性试验等，大多实验者容易忽略的是全血稳定性实验。全血稳定性实验，顾名思义是指全血从动物体内取出，放置一段时间是否会影响药物的浓度。而大多数药物由于自身性质的原因会导致分解，进而影响测定特定时间点下的药物血浆浓度。因此，对于不稳定的药物，我们不仅需要在全血离心得到血浆后考虑药物的稳定性，还需要考察药物在全血中的稳定性。药物在全血中被转化掉了，也就是biotransformation。全血或血浆中的转化一般会发生在具有易水解位点的化合物，如具有酯键或酰胺键的化合物等。原因很简单，全血或血浆中含有水解酶。要搞清楚你的化合物是不是被水解掉了，也很简单。如果你的血是EDTA抗凝的，那么水解反应这个原因就不可能了，因为水解酶要发挥作用是需要金属离子（镁离子）的，而EDTA可以螯合掉金属离子（镁离子）。因此你只需要比较一下肝素钠和EDTA两种抗凝剂的孵育结果就行了。如果肝素钠不下降，EDTA下降就是这个原因了。如果都下降，就不是这个原因了。当然，如果真的是水解反应所造成的话，一般都应该能同时观察到全血和血浆的浓度下降。我们举一个例子为大家演示全血稳定性实验的操作步骤。首先购买无菌抗凝大鼠全血，要求大鼠来源健康，全血由EDTA抗凝。见下图。全血中的红细胞易破裂，应严禁将全血冻存，且远离冰箱壁等低温源。保存期间适时摇晃全血瓶，使红细胞均匀吸收养分和氧气，防止变黑。储存条件：2-6℃保存，无菌取用。[align=center][img=,485,647]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340033036_8094_3255306_3.jpg!w485x647.jpg[/img][/align]我们的分析物结构不稳定，在水中和甲醇中易水解，主要水解产物我们也购买了标准品，打算利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]技术同时检测分析物和水解产物的浓度。而分析物由于结构的原因，对pH要求较大，即应在pKa范围内才能稳定存在。因此我们的实验目的也清晰了很多，建立方法改善药物不稳定因素，尽量做到测定药物浓度为真实浓度。那么我们的方法就是在取血前，在抗凝管内加少量酸溶液，改善pH，进而使药物稳定存在。此处实验我们尝试了不同浓度和体积的甲酸、乙酸 ，以及不同稀释液：水、生理盐水、PBS等。最终选择的是10%乙酸的PBS溶液，1 mL全血对应50 mL即可保证分析物稳定不水解。实验开始，我们设计了低、高浓度的分析物在空白血浆、加酸调pH后的血浆条件下，分别在0,1,2,4小时37℃水浴保存后，用4000rpm离心机离心操作将血浆取出，然后将血浆沉淀蛋白，取上清进样分析。见下图。此处需要注意的是全血不能用涡旋仪涡旋，否则红细胞会破裂，我们选用的是摇床，将加了分析物的全血摇匀。见下图。最终实验结果也是符合我们的预期，文章结尾依然要感谢仪器信息网为我们提供原创大赛平台，互相学习，互相进步！Fighting！[align=center][img=,282,376]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340309064_9891_3255306_3.jpg!w282x376.jpg[/img][img=,544,409]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340311624_1449_3255306_3.jpg!w544x409.jpg[/img][img=,189,393]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340314680_6766_3255306_3.jpg!w189x393.jpg[/img][img=,333,443]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340318325_9168_3255306_3.jpg!w333x443.jpg[/img][img=,351,468]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340320825_7270_3255306_3.jpg!w351x468.jpg[/img][img=,564,423]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340324325_2157_3255306_3.jpg!w564x423.jpg[/img][img=,468,351]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340327676_8628_3255306_3.jpg!w468x351.jpg[/img][img=,406,305]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340330956_1648_3255306_3.jpg!w406x305.jpg[/img][img=,353,471]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101340333596_3676_3255306_3.jpg!w353x471.jpg[/img][/align]

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105281415_296633_1609805_3.jpg献血毕竟也是“出血”。我们知道，一般急性失血500ml，就会出现头昏、心慌、乏力，失血1000ml就会出现休克。正常成人的血液总量大约有4000～5000ml，倘若一次失血超过20%（也就是800～1000ml）就可能有生命危险。因此，献血者有些顾虑是正常的，但是献血对身体的具体影响会大到什么地步呢？血液中的主要成分包括红细胞、血小板、白细胞和血浆。红细胞的主要作用是运送氧气和二氧化碳——这可谓是血液最重要的功能。人体的组织器官，缺氧超过几分钟就会发生不可逆的损伤。而细胞所需要的氧几乎都是由红细胞运送的。大量失血之所以会要人命，主要就是因为红细胞会不够用。血小板和血浆中的十几种凝血因子共同参与凝血的工作。如果血小板减少的话，人就可能出血不止，甚至出现自发出血，也就是你什么都不做，血自己就渗出来了。白细胞主要参与免疫反应，说白了就是抵抗外来入侵者、以及清除内部叛乱者——肿瘤细胞。但是这个免疫反应绝对不是白细胞一个人在战斗，还需血浆中的各种免疫成分协作。

[align=center][/align][align=left][b] 摘要：目的 [/b]确立不同稀释液对凝血因子效价检测的影响，研究因子效价检测的稀释方法，从而完善因子类血液制品效价检测的方法。 [b]方法 [/b]对同一批和连续生产的10批人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物样品进行全自动血凝仪法的效价检测，分别选用全自动血凝仪稀释液和含1%人血白蛋白稀释液进行检测，统计10次以上的检测结果以确定不同稀释液之间的差别。 [b]结果 [/b]本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中，采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释，无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定，检测结果之间存在较大的差别。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中，采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释，同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小。[b]结论 [/b]因子类血液制品效价检测时，同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别，应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估，并应建立起正确的检测操作规程。[/align][b] 关键词: [/b]凝血因子； 稀释液； 效价测定 目前国内血液制品的生产是以健康人血浆为原料，经过分离纯化和病毒灭活制成，主要分为三大类，人血白蛋白、人免疫球蛋白类产品、人凝血因子类产品。国内已上市或在研的人凝血因子类产品主要有人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原、人纤维蛋白粘合剂、人凝血因子Ⅸ、人抗凝血酶Ⅲ等。人凝血因子Ⅷ主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。人凝血酶原复合物主要有效成分为人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ，主要用于治疗主要用于乙型血友病、 维生素K依赖的凝血因子缺乏症等病症的治疗。 人凝血因子Ⅸ主要用于防治乙型血友病和获得性凝血因子Ⅸ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。因子类血液制品是血液中凝血因子的高纯度浓缩物，在进行效价测定时需要对样品进行稀释，而稀释液中蛋白含量的不同对其检测结果有着影响。因子效价测定方法有一期法、二期法和发色底物法。一期法是目前应用最广泛的检测方法，系用人凝血因子缺乏血浆为基质，在APTT试剂和氯化钙的参与下，根据凝血因子国家标准品和供试品的凝集时间来计算供试品中的人凝血因子效价，实际检测过程中将基于一期法原理的人凝血因子效价测定法分为三种方法，即手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法。全自动血凝仪只是对一期法中各反应试剂的加入顺序进行了修订以便实现仪器的自动操作。相对于手工法检测，消除了很多主观因素。在日常工作中，当使用不同种类的稀释剂而采用相同的检测原理和方法进行效价测定应不会对测定结果产生影响，但实际工作中发现使用不同种类的稀释剂对效价测定结果有一定的影响。在人凝血因子Ⅷ效价检测过程中，采用手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法进行人凝血因子Ⅷ效价的比对试验，发现手工法、半自动血凝仪法检测结果一致，这两种方法比全自动血凝仪法的检测结果高20%以上。血液制品的原料来源于人血浆，受原料限制，一直较为稀缺，尤其是当前人凝血因子Ⅷ的生产量远远无法满足血友病患者的需求[sup][[/sup][sup]1-5[/sup][sup]][/sup]，不同检测方法间20%以上的检测差别可能影响20%的产品收率，所以建立起因子类产品效价准确的检测至关重要。[b][b]1 实验仪器与试剂1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪（法国Diagnostica Stago公司），漩涡振荡器（美国Thermo Scientific公司）。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆（法国Diagnostica Stago公司），人凝血因子Ⅸ缺乏血浆（法国Diagnostica Stago公司），APTT试剂（法国Diagnostica Stago公司），Owren-Koller（稀释液）（法国Diagnostica Stago公司），0.025 mol/L氯化钙溶液（法国Diagnostica Stago公司），Desorb U（清洗液）（法国Diagnostica Stago公司），人凝血因子Ⅷ国家标准品（批号20100101），人凝血酶原复合物国家标准品（批号20130306），生理氯化钠溶液（石家庄四药有限公司），咪唑（天津市巴斯夫化工有限公司），氯化钠（天津市巴斯夫化工有限公司），枸橼酸钠（台山新宁制药有限公司），人血白蛋白（公司自产）。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定2.1.1 人凝血因子Ⅷ供试品Owren-Koller（稀释液）稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标：取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品，加入1.0 ml纯化水复溶，轻轻混匀，用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ，将Desorb U（清洗液）、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉，将Owren-Koller（稀释液）装入全自动血凝仪的样本抽屉，按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标，仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释，建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价（分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml）的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。人凝血因子Ⅷ供试品效价测定：取人凝血因子Ⅷ供试品，按其标示装量加入灭菌注射用水复溶，轻轻混匀，用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ，再用Owren-Koller（稀释液）做2倍、4倍稀释，将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉，选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.1.2 人凝血因子Ⅷ供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标同2.1.1人凝血因子Ⅷ供试品效价测定：取人凝血因子Ⅷ供试品，按其标示装量加入灭菌注射用水复溶，轻轻混匀，用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ，再用药典稀释液（取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成）做2倍、4倍稀释，将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉，选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同稀释液稀释效价测定2.2.1 人凝血酶原复合物供试品Owren-Koller（稀释液）稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标：取1支人凝血酶原复合物国家标准品，加入1.0 ml纯化水复溶，轻轻混匀，用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ，将Desorb U（清洗液）、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉，将Owren-Koller（稀释液）装入全自动血凝仪的样本抽屉，按照《STAGO Compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标，仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释，建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价（分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml）的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定：取人凝血酶原复合物供试品，按其标示装量加入灭菌注射用水复溶，轻轻混匀，用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ，再用Owren-Koller（稀释液）做2倍、4倍稀释，将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉，选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2.2 人凝血酶原复合物供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标同2.1.1。人凝血酶原复合物供试品效价测定：取人凝血酶原复合物供试品，按其标示装量加入灭菌注射用水复溶，轻轻混匀，用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ，再用药典稀释液（取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成）做2倍、4倍稀释，将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉，选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ为泰邦公司人凝血因子Ⅷ产品的质控品，取自正常生产的产品，用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血因子Ⅷ效价测定时，分别用Owren-Koller（稀释液）和药典稀释液（取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成）对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表1，效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,586,268]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141920_02_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示，如图1：[align=center][img=,488,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血因子Ⅷ产品，进行人凝血因子Ⅷ效价测定，分别用Owren-Koller（稀释液）和药典稀释液（取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成）对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表2，效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,273]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_03_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示，如图2：[align=center][img=,499,310]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141922_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图 2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0901批人凝血酶原复合物为泰邦公司人凝血酶原复合物产品的质控品，取自正常生产的产品，用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定时，分别用Owren-Koller（稀释液）和药典稀释液（取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成）对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表3，效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示，如图3：[align=center][img=,548,288]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血酶原复合物产品，进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定，分别用Owren-Koller（稀释液）和药典稀释液（取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成）对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表4，效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,573,259]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示，如图4：[align=center][img=,548,327]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_03_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中，采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释，无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定，检测结果之间存在较大的差别，另外对FⅧ质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较，计算P值，P＜0.05表明两种方法的结果有显著性差异，含有蛋白的稀释液的检测结果明显高于不含蛋白的稀释液。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中，采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释，同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小，另外对PCC质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较，计算P值，P＞0.05表明两种方法的结果无显著性差异。在使用全自动血凝仪进行人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物等因子类血液制品效价检测时，一般按照仪器的使用说明书和配套试剂进行稀释检测，但是忽视了血凝仪的开发目的是用于临床血浆样品的检测，而血浆与高纯度的血液制品浓缩物是不同的，用检测血浆样品的方法进行因子类血液制品的效价检测可能影响检测结果。因子类血液制品效价检测时，同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别，应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估，并应建立起正确的检测操作规程。因子类血液制品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别可能跟产品本身的性质有关，因子类血液制品经过分离、纯化，去除了众多的杂质蛋白，为高纯度的浓缩物，活性较高，但蛋白质含量较低，人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量约为0.1%，人凝血酶原复合物的蛋白质含量约为2.3%，而临床血浆样本的蛋白质含量约为5%，, 人凝血因子Ⅷ加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅧ效价测定影响较大，PCC中加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅨ效价测定影响较小，可能是人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量远小于血凝仪设计用于检测的血浆样本的蛋白含量，故建立不同蛋白质浓度梯度的稀释液对因子效价进行测定，从而确认蛋白质浓度对因效价测定的影响。[b]参考文献：[/b]Cheng E, Jinzenji D, Lorthiois AP, et al. Purification of coagulation factorⅧ using chromatographic methods. Direct chromatography of plasma in anion exchange resins . Biotechnol Lett, 2010, 32(9):1207-1214.李策生, 周志军, 胡勇, 等. 人凝血因子Ⅷ中试纯化工艺的质量控制 .中国生物制品学杂志, 2013, 26(10):1508-1512.冉曙光, 刘文芳, 赵辉. 凝血因子Ⅷ浓缩物的制备及安全性和有效性 .中国输血杂志, 2008, 21(2):156-159.倪道明, 朱威. 血液制品 . 北京: 人民卫生出版社, 2013:21.王卓, 赵雄, 吕茂民, 等. 血液制品的现状与展望 . 生物工程学报, 2011, 27(5):730-746.[b] [/b]

人凝血因子VIII中氨基酸含量测定摘要 目的: 建立用高效液相色谱法测定人凝血因子VIII中氨基酸含量。方法: 采用6 － 氨基喹啉－ N － 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 为衍生剂，与氨基酸柱前衍生后，用Agilent 1200 高效液相色谱仪，AccQ·Tag C18柱( waters 150 mm ×3. 9 mm，4 μm) ，以水Eluent( 醋酸盐－ 磷酸盐缓冲液) 稀释液和乙腈进行梯度洗脱，检测波长为248 nm，柱温37 ℃，进样量10μL。结果: 各氨基酸在32 min 内测定完毕，回收率为98.7% ～ 101.5%。RSD 均小于1. 5%。结论: 本法分离度好，快速、简便，可作为产品的质量控制方法。关键词: 6 － 氨基喹啉－ N － 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯; 人凝血因子VIII; 甘氨酸; 衍生物; 梯度洗脱; 高效液相色谱法;氨基酸; 含量测定人凝血因子VIII，本品对缺乏人凝血因子礓所致的凝血机能障碍具有纠正作用，主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状及这类病人的手术出血治疗。该药物制备过程中使用了氨基酸( 精氨酸、丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、盐酸赖氨酸、脯氨酸 等) 做稳定剂，为了保证药品质量和用药安全，应对其中氨基酸的含量进行控制。该法依据过量的6 － 氨基喹啉基－ N － 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 在一定条件和氨基酸形成稳定的衍生产物( 柱前衍生) ，用高效液相色谱法测定衍生产物，根据衍生产物的含量计算人凝血因子中各氨基酸的含量。1 仪器和试药1200 高效液相色谱系统( 美国Agilent 公司) ，配置低压四元梯度泵、1314B 紫外吸收检测器、自动进样器、柱温箱、Chemistations 化学工作站; Sartorius CP225D 电子微量天平( 德国Sartorius 公司) ; SartoriusPB － 21 型pH 计( 德国Sartorius 公司) ; LDZ5 －2 低速自动平衡离心机( 上海医用离心机厂) 等。各标准品均来自于中国食品药品检定研究院2 色谱条件及系统适用性试验色谱柱: Waters AccQ·Tag C18色谱柱( 3. 9 mm ×150 mm) ; 流动相: 水为溶剂D，Eluent( 醋酸盐－ 磷酸盐缓冲液) 稀释液( A) － 乙腈( B) － 水( D) ，柱温:37 ℃; 检测波长: 248 nm。精密量取对照品溶液与供试品溶液10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图32 min。梯度洗脱条件表见表1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508311802_563771_1637386_3.png

[align=center][/align][align=center][font='仿宋'][size=16px][color=#000000]宋嘉新[/color][/size][/font][/align][align=center][font='宋体'][size=13px]目录[/size][/font][/align][url=#_Toc4927][font='calibri'][size=16px]第1章[/size][/font][/url][url=#_Toc4927][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙的简介[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc17777][font='calibri'][size=16px]1.1抗坏血酸的起源[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc24327][font='calibri'][size=16px]1.2抗坏血酸的理化性质[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc13423][font='calibri'][size=16px]1.3抗坏血酸的作用[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc30123][font='calibri'][size=16px]1.4抗坏血酸钙的合成[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc13772][font='calibri'][size=16px]1.5[/size][/font][/url][url=#_Toc13772][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙分子[/size][/font][/url][url=#_Toc13772][font='calibri'][size=16px]量[/size][/font][/url][url=#_Toc13772][font='calibri'][size=16px]的测定[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc20831][font='calibri'][size=16px]1.6抗坏血酸钙的介绍[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc29811][font='calibri'][size=16px]1.7对抗坏血酸钙的评价[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc19651][font='calibri'][size=16px]第2章[/size][/font][/url][url=#_Toc19651][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙的合成[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc22110][font='calibri'][size=16px]2.1[/size][/font][/url][url=#_Toc22110][font='calibri'][size=16px]合成原理[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc15448][font='calibri'][size=16px]2.2合成方法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc4790][font='calibri'][size=16px]2.3[/size][/font][/url][url=#_Toc4790][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙和抗坏血酸的分析方法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc1197][font='calibri'][size=16px]第[/size][/font][/url][url=#_Toc1197][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][/url][url=#_Toc1197][font='calibri'][size=16px]章抗坏血酸在鲜切蔬菜中的应用[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc26056][font='calibri'][size=16px]3.1抗坏血酸钙在鲜切蔬菜中的应用的背景[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc6885][font='calibri'][size=16px]3.2抗坏血酸钙对鲜切蔬菜的实验方法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc14835][font='calibri'][size=16px]3.3设备仪器与方法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc2696][font='calibri'][size=16px]3.4试剂[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc5308][font='calibri'][size=16px]3.5测定方法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc12986][font='calibri'][size=16px]3.5.1维生素C含量测定采用2，6-二氯靛酚滴定法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc20893][font='calibri'][size=16px]3.5.2实验步骤[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc15951][font='calibri'][size=16px]3.5.3、多酚氧化酶(PPO)的活性测定[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc16472][font='calibri'][size=16px]3.5.4过氧化物酶(POD)的活性测定愈创木酚法21测定POD活性[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc13651][font='calibri'][size=16px]3.5.5总酚(TP)含量测定采用FolinCiocalteau方法22测定[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc10959][font='calibri'][size=16px]3.6蔬菜抗坏血酸钙检测对蔬菜检测的分析[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc15360][font='calibri'][size=16px]3.6.1生菜中蔬菜Vc蔬菜影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc9906][font='calibri'][size=16px]3.6.2抗坏血酸钙处理对鲜切生菜电导率的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc29241][font='calibri'][size=16px]3.6.3、抗坏血酸钙处理对鲜切生菜多酚氧化酶蔬菜(蔬菜PPO)蔬菜活性的影响PPO[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc31106][font='calibri'][size=16px]3.6.4、抗坏血酸钙处理对鲜切生菜过氧化物酶(POD)活性的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc16382][font='calibri'][size=16px]3.6.5抗坏血酸钙处理对鲜切生菜总酚含量的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]9[/size][/font][url=#_Toc18868][font='calibri'][size=16px]3.7抗坏血酸钙对蔬菜影响的分析[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc32385][font='calibri'][size=16px]第[/size][/font][/url][url=#_Toc32385][font='calibri'][size=16px]4[/size][/font][/url][url=#_Toc32385][font='calibri'][size=16px]章[/size][/font][/url][url=#_Toc32385][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨品质的影响*[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc28162][font='calibri'][size=16px]4.1抗坏血酸钙对鲜切鸭梨的影响背景[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc10932][font='calibri'][size=16px]4.2[/size][/font][/url][url=#_Toc10932][font='calibri'][size=16px]实验原料[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc29738][font='calibri'][size=16px]4.3[/size][/font][/url][url=#_Toc29738][font='calibri'][size=16px]实验方法[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc30101][font='calibri'][size=16px]4.4[/size][/font][/url][url=#_Toc30101][font='calibri'][size=16px]测量方法[/size][/font][/url][url=#_Toc30101][font='calibri'][size=16px]。[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc675][font='calibri'][size=16px]4.4.1[/size][/font][/url][url=#_Toc675][font='calibri'][size=16px]失重率[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc26492][font='calibri'][size=16px]4.4.2[/size][/font][/url][url=#_Toc26492][font='calibri'][size=16px]色差[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc5401][font='calibri'][size=16px]4.4.3[/size][/font][/url][url=#_Toc5401][font='calibri'][size=16px]脆度[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc14135][font='calibri'][size=16px]4.4.4[/size][/font][/url][url=#_Toc14135][font='calibri'][size=16px]可溶性酚含量的测定[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc20911][font='calibri'][size=16px]4.5[/size][/font][/url][url=#_Toc20911][font='calibri'][size=16px]实验数据分析[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc15039][font='calibri'][size=16px]4.5.1[/size][/font][/url][url=#_Toc15039][font='calibri'][size=16px]不同浓度抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨失重率的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc25938][font='calibri'][size=16px]4.5.2[/size][/font][/url][url=#_Toc25938][font='calibri'][size=16px]不同浓度抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨色泽的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc18114][font='calibri'][size=16px]4.5.3[/size][/font][/url][url=#_Toc18114][font='calibri'][size=16px]不同浓度抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨脆度的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc1956][font='calibri'][size=16px]4.5.4可溶性[/size][/font][/url][url=#_Toc1956][font='calibri'][size=16px]性酚含量的测定的影响[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc15197][font='calibri'][size=16px]4.5[/size][/font][/url][url=#_Toc15197][font='calibri'][size=16px]结论[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc2888][font='calibri'][size=16px]第[/size][/font][/url][url=#_Toc2888][font='calibri'][size=16px]5[/size][/font][/url][url=#_Toc2888][font='calibri'][size=16px]章[/size][/font][/url][url=#_Toc2888][font='calibri'][size=16px]小结[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc12211][font='calibri'][size=16px]参考文献[/size][/font][/url][font='calibri'][size=16px]15[/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][align=center][font='calibri'][size=16px]第1章[/size][/font][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙的简介[/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]1.1抗坏血酸的起源[/size][/font][font='宋体']早在1946年，美国就已研制成功，[/font][font='宋体']其主要是由[/font][font='宋体']由抗坏血酸与碱性钙盐中和而制得[/font][font='宋体']。[/font][font='宋体']在体内具有Vc的全部作用，其抗氧化作用优于Vc，而且由于钙的引入，也增强了它的营养强化作用。近年来，Vc-Ca的研究不断取得进展，应用领域相继拓宽。[/font][font='calibri'][size=16px]1.2抗坏血酸的理化性质[/size][/font][font='宋体']抗坏血酸钙的外观呈白色至浅黄色结晶性粉末状。无臭。旋光度[a]"5p:+95°～+97°。溶溶于水。难溶于乙醇。不溶于乙醚。10%水溶液的pH值为6.0～7.5。[/font][font='calibri'][size=16px]1.3抗坏血酸的作用[/size][/font]1. [font='宋体']保鲜剂2.营养强化剂3.抗氧化剂4.肉色保护剂[/font][font='calibri'][size=16px]1.4抗坏血酸钙的合成[/size][/font][font='宋体']抗坏血酸与碳酸钙在水中进行酸碱中和反HT映结晶而成,[/font][font='宋体']化学反应式:[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']C[/font][font='宋体']6[/font][font='宋体']H[/font][font='宋体']8[/font][font='宋体']O[/font][font='宋体']6[/font][font='宋体']+CaCO[/font][font='宋体']3=[/font][font='宋体']Ca(C[/font][font='宋体']6[/font][font='宋体']H[/font][font='宋体']7[/font][font='宋体']O[/font][font='宋体']6[/font][font='宋体'])[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']+CO[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']+H[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']O[/font][font='calibri'][size=16px]1.5[/size][/font][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙分子[/size][/font][font='calibri'][size=16px]量[/size][/font][font='calibri'][size=16px]的测定[/size][/font][font='宋体']取10[/font][font='宋体'].00g[/font][font='宋体']抗坏血酸与2[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']8429碳酸钙,在水相经中和反应后测定CO[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']量1.25[/font][font='宋体']g[/font][font='宋体'],与理论值1.249吻合[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']结晶后测定抗坏血酸钙量[/font][font='宋体']11.08g[/font][font='宋体']与理论值[/font][font='宋体']11.079g[/font][font='宋体']吻合,故抗坏血酸钙实测分子量为[/font][font='宋体']390.23[/font][font='宋体']与理论值390[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']2吻合。[/font][font='calibri'][size=16px]1.6抗坏血酸钙的介绍[/size][/font][font='宋体']抗[/font][font='宋体']坏血酸钙(ClaciumAscorbta石,以下简称A:一Ca)溶于水,易被人体吸收,在体内分解后,除可吸收的钙外,分解出来的抗坏血酸(以下简称A:A)仍具有AsA的生理活性[’1,是防治坏血病和维持人体内正常生理生化功能必不可少的营养素,据报道对关节炎.静脉炎和痛风等患者,每日按一定剂量服用本品后,可减轻由这些病症引起的疼痛:其氧化物也有同样疗效[`1.在美国现用A。一Ca作食品中的抗氧剂〔`I。合成AS一Ca的主要原料为AsA和碳酸钙(CaCO3),在水中反应。国外学者对反应条件等方面作过报道,如Ruskinl“专利,采用过量子贻A稀溶液与CaCO[/font][font='宋体'][size=16px]3[/size][/font][font='宋体']:反应,然后在有机溶剂中结晶 Scherulr`1专利,是将AsA配成一定浓度的水溶液,再与过量CaCO:反应,然后将反应混合物在室温下自行结晶,得到以抗坏血酸钙为主要成分的结晶产物(C12H,`CaO :ZH:O,以下简称As一Ca’ZH:O)本试验曾按上述专利进行试验,结果发现Ruoikn用AsA浓度太稀,反应后需加入大量溶剂(乙醇或丙酮)才能结晶,且得率低(70~80肠)。如将反应后的混合物蒸发浓缩后结晶,则因蒸发时间较长致使产品颜色变深且略带苦味。采用scherur方法时,反应后将混合物冷却至一10℃时,仍无结晶析出。[/font][font='calibri'][size=16px]1.7对抗坏血酸钙的评价[/size][/font]1. [font='宋体']抗坏血酸钙为钙剂中有机钙的新品种,它呈白色结晶粉末,味甘爽,易溶于水中,是其他不溶于水的碳酸钙、磷酸氢钙、珍珠粉、磷酸钠和稍溶于水的乳酸钙和葡萄糖酸钙是无法相比的,它算是名符其实的活性钙剂。[/font]2. [font='宋体']抗坏血酸钙具有抗坏血酸和抗坏血酸纳一样无毒,具有还原抗氧、消毒、消炎性,是人体不可缺少的维生素C之类物质。它既是钙的营养医疗物质,又是维生素C的营养医疗物质,是其他钙剂不能及的。[/font]3. [font='宋体']3.钙对人体构成骨骼和牙齿外,还存在于软组织或细胞内和细胞外液中的,仅只有百分之一的钙,更具有惊人的生理作用。人体的衰老、癌变和病变是与细胞中产生自由基多少有关,这些自由基则会和细胞各组成成分相互作用,会破坏正常的细胞功能。使用抗坏血酸钙的还原抗氧性,就可破坏自由基或减缓自由基的形成,起到防衰老、抗癌、抗坏血病的作用 同时钙质的补充是人体骨骼、牙齿健康外,又能镇静神经,防止肌肉抽搐,是预防或缓解动脉硬化和高血压病的有效途径,增强了对各种疾病的抵抗力。[/font]4. [font='宋体']4.抗坏血酸钙是人体必需的钙质和维生素C质的双重营养医疗物质,可用于片剂、针剂、冲剂、胶囊和口服液外,又可广泛添加于食品、奶粉、食盐、饮料、护肤、美容品之中,这样不仅提高了这些商品的营养医疗价值,又能保鲜延长这些商品的保存期限。抗坏血酸钙独特的理化性质,造成它独具三格的钙剂、维生素剂、保鲜剂的高价值的三重功效,是其他钙剂和维生素剂、保鲜剂所不能及的。[/font][align=center][font='calibri'][size=16px]第2章[/size][/font][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙的合成[/size][/font][/align][align=center][font='calibri'][size=16px]2.1[/size][/font][font='calibri'][size=16px]合成原理[/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙合成的主要原料是抗坏血酸,它并非酸类化合物,而系不饱和多元醇竣酸内酷,因分子中存在拨基和烯二醇相邻的结构,使烯二醇经基上的氢变得较活动,在水中能电离出氢离子而显较强的酸性(水溶液pH值2.2)[/size][/font][font='calibri'][size=16px]、[/size][/font][font='calibri'][size=16px]因而能和一些金属(如钾、钠、钙和铁等)反应生成对应的抗坏血酸盐。本文合成即基于此理。反应式如下[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724263870_5121_1608728_3.png[/img][font='calibri'][size=16px]2.2合成方法[/size][/font][font='宋体']抗坏血酸:北京化工厂产品,I级,比旋度(a)25/[/font][font='宋体']D[/font][font='宋体']十21[/font][font='宋体']~[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']“含量不少于9[/font][font='宋体']9.7%[/font][font='宋体']碳酸钙:北京化工厂出品,l[/font][font='宋体']1[/font][font='宋体']级,水:重蒸水[/font][font='宋体']在烧杯中加入一定比例量抗坏血酸和水,装上电搅拌器,烧杯外用恒温水浴器控制反应温度。在剧烈搅拌下,分次加入碳酸钙。加毕,继续搅拌以驱除生成的二氧化碳。反应后的棍合物在室温下任其自行结晶。可得纯度在98肠以上,产率约为98[/font][font='宋体']%[/font][font='宋体']肠的结晶产品抗坏血酸钙(As一Ca.[/font][font='宋体']2[/font][font='宋体']H[/font][font='宋体'][size=16px]2[/size][/font][font='宋体']O).[/font][font='calibri'][size=16px]2.3[/size][/font][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙和抗坏血酸的分析方法[/size][/font][font='宋体']精确称取样品（纯品约为250毫克﹔添加物视其含量而定)，用50毫升新沸后冷却的重蒸水溶解并转入250毫升锥形瓶内。立即用0.1N碘标准溶液滴至苍黄色出现30秒不消失为终点。每1毫升0.1N碘标准溶液相当于10.66毫克抗坏血酸钙(C[/font][font='宋体'][size=16px]13[/size][/font][font='宋体']H[/font][font='宋体'][size=16px]14[/size][/font][font='宋体']Ca0[/font][font='宋体'][size=16px]12[/size][/font][font='宋体']2H[/font][font='宋体'][size=16px]2[/size][/font][font='宋体']O)。[/font][align=center][font='calibri'][size=16px]第[/size][/font][font='calibri'][size=16px]3[/size][/font][font='calibri'][size=16px]章抗坏血酸在鲜切蔬菜中的应用[/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]3.1抗坏血酸钙在鲜切蔬菜中的应用的背景[/size][/font][font='宋体']鲜切水果有被称为经过最少的加工的食品鲜切果蔬又称最少加工处理果蔬、半成品加工果蔬、轻度加工果蔬、切分(割)果蔬、调理果蔬等，它是指新鲜果蔬原料经过分级、整理、挑选、清洗、整修、去皮、切分、包装等一系列步骤，然后用塑料薄膜袋或以塑料托盘盛装外覆塑料薄膜包装，供消费者立即食用或餐饮业使用的一种新式果蔬加工产品。它具有品质新鲜、食用方便、营养卫生、百分之百可等多种优点。抗坏血酸钙有着优异的还原性，[/font][font='宋体']因此被普遍应用于鲜食领域。由于鲜切加工蔬菜菜的过程中会导致其生理性的一定程度的破坏，例如：软化，褐变，水分缺失等等，导致其货架期限大大降低，既而，需要加强对鲜切蔬菜的研究，从而加强对鲜切蔬菜的品质的提升，以及延长货架期以及提高其本身商业价值[/font][font='calibri'][size=16px]3.2抗坏血酸钙对鲜切蔬菜的实验方法[/size][/font][font='宋体']市售新鲜结球蔬菜，形状整齐，大小均匀，色泽鲜绿，成熟度一致，无缺陷及损伤。将蔬菜置于4℃过夜。次日取出，洗净、晾干、切分，100mg/L次氯酸钠溶液浸泡处理1min，清水快速冲洗1min，沥干，随机分为10组。将样品进行抗坏血酸钙溶液浸泡处理，设不同浓度(20g/L、35g/L、50g/L)和不同浸泡时间(1min、5min、20min)共9种处理，以蒸馏水浸泡为对照。浸泡结束后室温下沥干，装入PVC保鲜袋，置于4℃下贮藏。每隔2d测定各处理鲜切蔬菜的Vc含量、相对电导率、多酚氧化酶活性、过氧化物酶活性、多酚含量等指标，每个指标重复测定3次，计算其平均值及标准差。[/font][font='calibri'][size=16px]3.3设备仪器与方法[/size][/font][font='宋体']HH-6型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司产品)，分析天平(Ohaus公司产品)，超纯水净化仪(Labconco公司产品)，低温高速离心机(Eppendorf公司产品)，Alpha-1506紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司产品)，DDS-307型电导率仪(上海伟业仪器厂产品)，振荡器、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url](JenconsSealpette公司产品)等。[/font][font='calibri'][size=16px]3.4试剂[/size][/font][font='宋体']抗坏血酸钙、草酸、抗坏血酸标准品、2，6-二氯靛酚、福林酚溶液、Na2CO3溶液、没食子酸标准溶液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、邻苯二酚溶液、愈创木酚、30%过氧化氢、磷酸二氢钾等购于南京寿德生物科技有限公司。[/font][font='calibri'][size=16px]3.5测定方法[/size][/font][font='calibri'][size=16px]3.5.1维生素C含量测定采用2，6-二氯靛酚滴定法[/size][/font][align=left][font='宋体'][size=16px][color=#000000]称取样品100g，加入100ml浸提剂(2%草酸)，迅速捣成匀浆。称取10～40g浆状样品，用浸提剂将样品移入100ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤，按1g样品加0.4g白陶土脱色，过滤。吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中，用已标定的2，6-二氯靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。[/color][/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]3.5.2实验步骤[/size][/font][align=left][font='宋体'][size=16px][color=#000000]相对电导率测定取大小相当的样品用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干表面水分。避开主脉将叶片剪成7mm宽适宜长度的长条，快速称取3份样品，每份0.3g，分别置于装有30ml去离子水的刻度试管中，盖上塞子置于25℃恒温水浴处理1h。轻轻动试管使样品浸出液与蒸馏水混合均匀，放入电极测定第1次电导率值Ｒ1，然后沸水浴中加热30min，冷却至25℃后摇匀，再次测定浸提液电导率值Ｒ2。计算相对电导率，相对电导率=Ｒ1/Ｒ2×100%。[/color][/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]3.5.3、多酚氧化酶(PPO)的活性测定[/size][/font][font='宋体']邻苯二酚法20测定PPO活性。粗酶液的提取:称取样品2g，加pH7.6磷酸盐缓冲液10ml，在研钵中冰浴研磨成匀浆转入离心管，10000r/min离心10min，取上清液即为粗酶液。多酚氧化酶活性测定:取2只比色杯，在1只杯中加入pH7.6磷酸盐554张留圈等:抗坏血酸钙对鲜切蔬菜品质的影响缓冲液1ml、0.2mol/L邻苯二酚溶液1ml，作为校零对照，另1只杯中加入pH7.6磷酸盐缓冲液1ml、0.2mol/L邻苯二酚溶液1ml、粗酶液0.5ml，[/font][font='宋体']用紫外可见光光度计在波长410nm处测定OD值，每10s记录1次OD值(测8～12次)。酶活性以吸光值1min变化0.001为1个酶活性单位(U/min)表示[/font]。[font='calibri'][size=16px]3.5.4过氧化物酶(POD)的活性测定愈创木酚法21测定POD活性[/size][/font][font='宋体']粗酶液的提取:称取样品2g，加20mmol/L磷酸二氢钾5ml，在研钵中冰浴研磨成匀浆，转入离心管，4000r/min离心15min，收集上清液，所得残渣再用5ml磷酸二氢钾溶液提取1次，合并2次上清液保存于冰箱中备用。酶活性测定:取2只比色杯，在1只杯中加入反应混合液3ml、磷酸二氢钾0.5ml，作为校零对照，另1只杯中加入反应混合液3ml、上述酶液0.5ml，立即开启秒表计时，用紫外可见光光度计在波长470nm下测定OD值，每1min记录1次OD值，一共读5min。酶活性以吸光值1min变化0.001为1个酶活力单位(U/min)表示[/font]。[font='calibri'][size=16px]3.5.5总酚(TP)含量测定采用FolinCiocalteau方法22测定[/size][/font][font='宋体']总酚提取:取蔬菜样品5g，加少许75%乙醇置于研钵中研磨，研磨成浆后移入50ml离心管中，加入25ml75%乙醇，超声提取1h，12000r/min离心15min，转移上清液于50ml容量瓶中，残渣再用75%乙醇重复洗涤离心，合并上清液，定容待测。总酚含量测定:吸取1.0ml样品提取液于10ml比色管中，添加6ml蒸馏水，再加入0.5ml1.0mol/L福林酚试剂，漩涡振荡，暗处放置2～3min，加1.5ml20%碳酸钠溶液，定容，混匀后室温放置2h，于765nm下测吸光值。标准曲线的制作:准确称取10mg没食子酸用蒸馏水定容至100ml的容量瓶中备用，取6只10ml比色管，分别加入0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml的0.1mg/ml没食子酸标准溶液，添加6ml蒸馏水，再加入0.5ml1.0mol/L福林酚试剂，漩涡振荡，暗处放置2～3min，加1.5ml20%碳酸钠溶液，定容，混匀后室温放置2h，765nm下测吸光值，得到浓度(x)和吸光值(Y)之间回归方程(图1)。由图1可以看出，回归方程的Ｒ2为0.9992，可以用此直线方程计算样品总酚含量[/font]。[font='calibri'][size=16px]3.6蔬菜抗坏血酸钙检测对蔬菜检测的分析[/size][/font][font='calibri'][size=16px]3.6.1生菜中蔬菜Vc蔬菜影响[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724266303_5729_1608728_3.png[/img][font='calibri'][size=16px]在货架期间很容易被空气氧化，所蔬菜以其含量是衡量蔬菜保鲜效果的一个重要指标。由蔬菜图蔬菜2蔬菜可以看出，与对照比较，采用不同浓度、不同浸蔬菜泡时间的抗坏血钙处理后，鲜切生菜蔬菜Vc蔬菜含量明显蔬菜增加。在贮藏期间，各处理组在贮藏前蔬菜6蔬菜d蔬菜内蔬菜Vc蔬菜含蔬菜量下降较快，之后蔬菜Vc蔬菜含量的减少趋于平缓，在蔬菜15蔬菜d蔬菜时各处理组之间无显著差异，但蔬菜Vc蔬菜含量均高于对蔬菜照组，这说明抗坏血酸钙处理能够延缓鲜切生菜在蔬菜贮藏期间蔬菜Vc蔬菜含量的降低。[/size][/font][font='calibri'][size=16px]3.6.2抗坏血酸钙处理对鲜切生菜电导率的影响[/size][/font][align=left][font='宋体'][size=16px][color=#000000]蔬菜细胞膜透性的大小可以通过相对电导率大小来蔬菜衡量，一般来说，相对电导率越大，贮藏过程中细胞蔬菜654蔬菜江蔬菜苏蔬菜农蔬菜业蔬菜学蔬菜报蔬菜2016蔬菜年蔬菜第蔬菜32蔬菜卷蔬菜第蔬菜2蔬菜期膜受到损害而导致胞液外渗，细胞膜结构破坏的程蔬菜度越大。由图蔬菜3蔬菜可以看出，随着贮藏时间的增加，不蔬菜同处理组的相对电导率均呈上升趋势，且贮藏初期蔬菜上[/color][/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724268422_5921_1608728_3.png[/img][font='宋体'][size=16px][color=#000000]升较快，其中对照组的相对电导率上升最快。20蔬菜g蔬菜/L蔬菜抗坏血酸钙处理组在贮藏蔬菜6蔬菜d蔬菜后，虽然其相对蔬菜电导率明显高于蔬菜35蔬菜g蔬菜/L蔬菜和蔬菜50蔬菜g蔬菜/L蔬菜抗坏血酸钙处理蔬菜组，但仍低于对照组的相对电导率，说明抗坏血酸钙蔬菜能够保持细胞膜结构的稳定，阻止其增加透性。20蔬菜g蔬菜/L蔬菜和蔬菜35蔬菜g蔬菜/L蔬菜抗坏血酸钙处理组中，随着处理时浸蔬菜泡时间的延长，其相对电导率逐渐降低，而蔬菜50蔬菜g蔬菜/L蔬菜抗坏血酸钙各浸泡时间处理组之间无明显差异。因蔬菜此，经蔬菜35蔬菜g蔬菜/L蔬菜抗坏血酸钙溶液浸泡蔬菜20蔬菜min蔬菜能有效保蔬菜持鲜切生菜的细胞膜稳定性。[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][font='黑体'][size=17px]3.6.3、抗坏血酸钙处理对鲜切生菜多酚氧化酶蔬菜(蔬菜PPO)蔬菜活性的影响PPO[/size][/font][/align][align=left][font='宋体'][size=16px][color=#000000]蔬菜是果蔬发生酶促褐变的主要酶，它与多蔬菜酚类底物及酚类衍生物反应，导致褐变。PPO蔬菜活蔬菜性越高，褐变越严重。从图蔬菜4蔬菜可以看出，不同处理蔬菜的鲜切生菜在贮藏期间多酚氧化酶活性呈波动变蔬菜化状态。其中，对照组蔬菜PPO蔬菜活性一直较高，在第蔬菜9蔬菜d蔬菜时出现蔬菜峰蔬菜值，抗坏血酸钙处理则显著推迟(蔬菜20蔬菜g蔬菜/L处理蔬菜组)蔬菜峰值出现或者降低了(蔬菜35蔬菜g蔬菜/L蔬菜和蔬菜50蔬菜g蔬菜/L处理组)蔬菜峰值。同时，相同浓度、不同浸泡时间蔬菜的抗坏血酸钙处理组之间无明显差异。在蔬菜12蔬菜～蔬菜15蔬菜d蔬菜内，PPO蔬菜活性降低是因为鲜切生菜中潜伏状态多蔬菜酚氧化酶的诱导作用降低，自杀性失活占主导。蔬菜而蔬菜35蔬菜g蔬菜/L蔬菜和蔬菜50蔬菜g蔬菜/L蔬菜处理组在前蔬菜12蔬菜d蔬菜没有峰值出蔬菜现，说明适当浓度的抗坏血酸钙处理对鲜切生菜蔬菜PPO蔬菜活性有良好的抑制作用。[/color][/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724268538_1935_1608728_3.png[/img][/align][align=left][/align][font='calibri'][size=16px]3.6.4、抗坏血酸钙处理对鲜切生菜过氧化物酶(POD)活性的影响[/size][/font][font='宋体'][size=16px]如图5所示，各处理组在贮藏初期和末期的POD活性存在明显差异。抗坏血酸钙处理过的鲜切生菜POD活性在第3d时略有下降，随后维持在一定水平，整体变化幅度较小，表明抗坏血酸钙在贮藏初期显著抑制了POD活性上升。同时，20g/L抗坏血酸钙处理组的POD活性均低于对照，而35g/L和50g/L处理组的POD活性低于20g/L处理。在35g/L处理组中，随着浸泡时间的延长，POD活性有降低的趋势，50g/L处理组则无明显差别。因此，适当延长浸泡时间能够增加抗坏血酸钙的保鲜作用。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724270306_5883_1608728_3.png[/img][/align][font='calibri'][size=16px]3.6.5抗坏血酸钙处理对鲜切生菜总酚含量的影响[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724271380_6731_1608728_3.png[/img][font='宋体'][size=16px][color=#000000]多酚是植物体内重要的次生代谢物质，参与许多生理过程，对鲜切果蔬的品质有极大的影响。因受到切分伤害，鲜切生菜的苯丙氨酸解氨酶活性会急速上升，加速酚类物质合成，引起总酚含量(TP)的增加，随着苯丙氨酸解氨酶活性下降，同时TP参加酶促褐变被氧化，TP含量逐渐下降。从图6可以看出，各处理组的总酚含量呈现先上升后下降的趋势，但均略高于对照组，说明各处理组的总酚消耗低于对照组，且35g/L和50g/L处理组的总酚消耗量最低。对照组和20g/L处理组总酚含量在第9d达到峰值，而35g/L和50g/L处理组在第12d达到峰值，可能是因为贮藏初期这两组的苯丙氨酸解氨酶活性被抑制。同时，相同浓度、不同浸泡时间抗坏血酸钙处理组之间总酚含量无明显差异。[/color][/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]3.7抗坏血酸钙对蔬菜影响的分析[/size][/font][font='宋体'][size=16px]抗坏血酸钙处理不仅能够增加鲜切生菜的Vc含量，起到营养强化作用，还能延缓鲜切生菜贮藏期间Vc含量的降低，同时抑制鲜切生菜的PPO和POD活性，阻止其褐变，减弱软化程度及减缓细胞膜通透性的增大。当用浓度为20g/L的抗坏血酸钙溶液浸泡处理鲜切生菜时，由于抗坏血酸钙浓度过低，没有完全在鲜切生菜表面形成保护膜，所起到的抗氧化和抗褐变作用有限。在35g/L抗坏血酸钙处理组中，当浸泡时间延长至20min时，抗坏血酸钙逐渐完全附着于叶菜表面，抗氧化保鲜作用最佳。当钙离子浓度达到一定水平，足以保持膜完整性，进一步加钙的效果不大。因此用浓度为50g/L的抗坏血酸钙处理时，对于叶菜其浸泡浓度已经处于饱和状态，无法结合更多的抗坏血酸钙，所以其保鲜效果并没有优于35g/L抗坏血酸钙处理组。综合考虑试验各项指标，以35g/L抗坏血酸钙浸泡处理20min的保鲜效果最佳，该处理可使鲜切生菜在15d内保持较好品质。[/size][/font][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='calibri'][size=16px]第[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4[/size][/font][font='calibri'][size=16px]章[/size][/font][font='calibri'][size=16px]抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨品质的影响*[/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]4.1抗坏血酸钙对鲜切鸭梨的影响背景[/size][/font][font='宋体'][size=16px]我国梨果主要用于鲜食，鲜切梨开发可以显著提高其新鲜、方便、卫生等食用特性和市场价值，梨果鲜切后易出现果肉软化及表面褐变的现象，品质和货架期保持是鲜切梨产品和市场开发的关键。关于提高各类鲜切果蔬贮藏品质的研究已有较多的相关报道，如使用抗坏血酸进行浸泡处理可控制水果的酶促褐变2－4，CaCl2涂抹在哈密瓜表面可保持其硬度，并且使用的氯化钙的浓度越高，水果越坚硬等人使用浓度为7%的抗坏血酸钙浸泡处理鲜切嘎啦苹果，在10℃的贮存条件下可以在3周内保持其硬度有较高水平等。本文使用抗坏血酸钙对鸭梨进行鲜切处理，研究其在贮藏期间的生理生化及品质变化，以期探索控制鲜切鸭梨褐变及软化程度、改善贮藏期间品质的新方法。[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.2[/size][/font][font='calibri'][size=16px]实验原料[/size][/font][align=left][font='宋体'][size=16px]利用市场中的鸭梨，且大小一致，个体差异一致，成熟期一致，且健康完好无虫蛀现象。[/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]4.3[/size][/font][font='calibri'][size=16px]实验方法[/size][/font][font='宋体'][size=16px]实验方法：将鸭梨削皮去核，并称取等量的鸭梨果肉分别放于1%、2%、3%、4%的抗血酸钙溶液中浸泡五分钟。取出并置于是室温中晾干，最后装入PVC塑料袋放至4度的冷藏箱中保存24小时[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.4[/size][/font][font='calibri'][size=16px]测量方法[/size][/font][font='calibri'][size=16px]。[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.4.1[/size][/font][font='calibri'][size=16px]失重率[/size][/font][font='宋体'][size=16px]通过计算贮存前后的质量来计算出其失重率之比。[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.4.2[/size][/font][font='calibri'][size=16px]色差[/size][/font][align=left][font='宋体'][size=16px]通过利用色差计车算前后不同色差[/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px]4.4.3[/size][/font][font='calibri'][size=16px]脆度[/size][/font][font='宋体'][size=16px]参照孙彩铃的方法使用质构仪来测定。采用TPA 质构仪对不同品种梨果的脆度和硬度进行分析。使用P5 的探头，参数设置为: 测前速5. 0 mm/s，测中速1. 0 mm/s，测后速5. 0 mm/s，2 次压缩之间间隔5s，压缩强度50%，触发力5 g。第一压缩周期中第一个峰为脆度，最高峰为硬度。[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.4.4[/size][/font][font='calibri'][size=16px]可溶性酚含量的测定[/size][/font][font='宋体'][size=16px]Folin-Ciocalteau 法。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]样品制备: 取一定量样品与70% 乙醇1 ∶ 4 ( g:mL) 打浆，将匀浆放置在60 ℃水浴中处理15 min 后取50 g 匀浆定容至100 mL，用纱布初滤后1 000 r /[/size][/font][font='宋体'][size=16px]min 离心10 min，取上清液。标准曲线的绘制: 分别取配置好的0、10、20、30、[/size][/font][font='宋体'][size=16px]40、50 mg /L 的没食子酸溶液1 mL，2 mL 蒸馏水， 0. 5mL FC 福林试剂， 1. 5 mL 10%Na2CO3混匀后室温反应2 h，使用分光光度计测定765 nm 处的吸光度，结果用mg( 没食子酸) /100g( 样品) 表示样品测定: 1 mL 样品溶液，2mL 蒸馏水，0. 5 mLFC 福林试剂， 1. 5 mL 10%Na2CO3混匀后室温反应2h，使用分光光度计测定765 nm 处的吸光度。[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.5[/size][/font][font='calibri'][size=16px]实验数据分析[/size][/font][font='calibri'][size=16px]4.5.1[/size][/font][font='calibri'][size=16px]不同浓度抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨失重率的影响[/size][/font][font='宋体'][size=16px]每隔1 天测定使用抗坏血酸钙处理的鲜切鸭梨的重量变化。由图2 所示，各处理组鲜切鸭梨在贮藏期间失重率均呈上升趋势，其中，对照组失重率较高，各处理组均低于对照组，且均与对照组存在显著性差异，随着抗坏血酸钙处理浓度的增加，失重率增加呈降低趋势，可能是由于涂膜处理在鲜切鸭梨表面形成一层薄膜，在一定程度上阻止了水分的蒸发，并且阻碍了O2的进入从而进一步减弱了呼吸作用的消耗。[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724273774_3593_1608728_3.png[/img][font='calibri'][size=16px]4.5.2[/size][/font][font='calibri'][size=16px]不同浓度抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨色泽的影响[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724273509_9165_1608728_3.png[/img][font='宋体'][size=16px]分别测定样品贮藏期间L 值、a 值、b 值的变化，并计算出ΔE 值，结果如图3所[/size][/font][font='宋体'][size=16px]从图结果可以看出，随着贮藏时间的延长，ΔE值呈逐渐增大的趋势，其中各处理组均低于对照组，且抗坏血酸钙浓度越高，ΔE 值越小。贮藏8 d 时，对照组ΔE 值达到8. 36，而使用5. 0% 抗坏血酸钙处理的鲜切鸭梨为4. 83，仅为对照组的57. 78%，说明使用抗坏血酸钙处理抑制鲜切鸭梨表面褐变的发生，起到良好的护色作用，且浓度越高护色效果越好。[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724275893_3785_1608728_3.png[/img][font='calibri'][size=16px]4.5.3[/size][/font][font='calibri'][size=16px]不同浓度抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨脆度的影响[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724276987_9118_1608728_3.png[/img][font='宋体'][size=16px]由图4 可以看出，不同处理的鲜切鸭梨贮藏后脆度均呈下降趋势，其中使用浓度为1. 0%，2. 0%，3. 0%抗环血酸钙处理的鲜切鸭梨在贮藏8 d 后脆度与对照组没有显著性差异，说明使用低浓度抗坏血酸钙处理的鲜切鸭梨的脆度在贮藏8 d 后与对照组相。同，在脆度保持方面效果不明显 而使用4. 0% 和5. 0% 处理的鲜切鸭梨脆度在贮藏8 d 后分别为895. 36 g 和942. 15 g，显著好于对照组的771. 84 g 且与贮藏初期没有显著性差异，说明使用高浓度抗坏血酸钙处理的鲜切鸭梨的脆度在贮藏8 d 后并没有下降，起到了良好的脆度保持效果。[/size][/font][/align][align=left][font='黑体'][size=17px]4.5.4可溶性[/size][/font][font='黑体'][size=17px]性酚含量的测定的影响[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106191724277005_3155_1608728_3.png[/img][font='宋体'][size=16px]各处理组鲜切鸭梨在贮藏过程中可溶性酚含量均呈先上升后下降的趋势，对照组可溶性酚含量在贮藏期间呈较明显的下降趋势，各处理组的酚含量在贮藏期间的变化呈波动状态，但均高于对照，即可溶性酚的消耗低于对照组，且处理浓度越高，可溶性酚的消耗越少。贮藏初期可溶性酚含量增多可能是由于不可溶性酚转化成可溶性酚所致，而贮藏后期引起褐变的可溶性酚的氧化又导致其含量的减少[/size][/font][font='calibri'][size=16px]。[/size][/font][/align][align=left][font='黑体'][size=18px]4.5[/size][/font][font='黑体'][size=18px]结论[/size][/font][/align]([font='宋体'][size=16px] 1) 使用抗坏血酸钙处理可抑制鲜切鸭梨的褐变，减弱其软化程度，减缓膜透性的增大及抑制多酚氧化酶的活性，延缓VC的消耗。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]( 2) 从各指标综合考虑来看，浓度为4. 0% 的抗坏血酸钙处理组的色泽、硬度、PPO 活性及还原糖含量与5. 0%处理组没有显著性差异，8 d 内可较好保[/size][/font][font='宋体'][size=16px]持鲜切梨的贮藏品质[/size][/font][font='宋体'][size=16px]。[/size][/font][align=left][/align][align=center][font='calibri'][size=16px]第[/size][/font][font='calibri'][size=16px]5[/size][/font][font='calibri'][size=16px]章[/size][/font][font='calibri'][size=16px]小结[/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]抗坏血酸钙作为现代生产和生活中不可或缺的一部分，是一个双面刃。在合理的利用下，它可以为生活食品提供更多的味道，延长食品保质期。但是，如果超出使用范围，则会对人造成极大的危害，贻害子孙后代。因此，有关部门的法规应更加详明和严厉，人民群众和大众媒体应严格监督，商家应依法生产，为民族和人民的未来负责[/size][/font]。[align=left][/align][align=center][font='times new roman'][size=21px][color=#000000]参考文献[/color][/size][/font][/align][1] 梁晓璐,陈义伦.抗坏血酸钙处理对鲜切鸭梨品质的影响[J].食品与发酵工业,2012,38(01):190-194.[2] 张留圈,李艺,梁颖,丁莹,张娟,刘贤金.抗坏血酸钙对鲜切生菜品质的影响[J].江苏农业学报,2016,32(02):454-459.[3] [1]GB 1886.43-2015, 食品安全国家标准　食品添加剂　抗坏血酸钙[s].[4] [1]周友亚,李冀辉,高风格,黎梅.抗坏血酸钙的合成及抗氧化作用[J].河北师范大学学报,1999(01):97-99.[5] [1]马忠国,石秀梅.L-抗坏血酸钙在食品中的应用[J].牡丹江医学院学报,1997(02):89-91.[6] [1]张紫洞.抗坏血酸[J].药学情报通讯,1985(04):1-3.[/s]