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  • 全血中毒鼠强测定(血要抗凝还是不抗凝?)

    如果测定全血中毒鼠强,对血有没有特别要求呢?一定要用不抗凝血吗?还是抗凝血呢?感觉都可以用吧?测定步骤是这样的,离心,取血清,加2ml乙酸乙酯,萃取10min,再加2ml乙酸乙酯,萃取10min,氮吹仪浓缩至0.5ml,进气质定性或定量。

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  • 一步法凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间检测

    ——胡丽涛、王治国目的 为凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶时间(APTT)检测提供指南。方法 主要参考美国临床和实验室标准化研究院(CLSI)H47-A2文件相关内容,并结合具体的实际进行总结。结果 PT和APTT检测受到检验前、中和后各种变异的影响。通过检测技术的标准化提高检测的重复性,通过设定性能目标来确保检测的临床相关性。PT检测可用于检测肝素治疗,实验室应该建立肝素治疗范围。结论 对于疑似血液凝固障碍的患者评估,PT和APTT是非常重要的实验室筛查检测。在实际工作中要严格按照操作规程和厂家说明,保证结果的准确可靠,为临床提供诊疗依据。凝血酶原时间;部分活化凝血酶时间;国际标准化比值;校准 自从Quick在1953年首次描述了凝血酶原时间(PT),PT在可疑凝血障碍的患者评估方面成为了一项非常重要的实验室筛查检测,也是实验室最常见的凝血检测。尽管PT最先被描述成一种凝血酶原或凝血因子Ⅱ的特异性一步法检测,但是PT对凝血系统的共同途径和外源性途径所涉及到的任何凝血因子(凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纤维蛋白原)及因子抑制物的定量或定性的异常都非常敏感。同时,PT也是严重肝脏疾病或慢性肝病的一项适当指标,还是用于监测维生素K治疗最常用的指标。 PT检测的主要试剂凝血活酶是一种磷脂或组织制剂,通常为人源性或动物源性或人和动物的混合材料制成的各种商业化的制剂。这些商业化的凝血活酶制剂在其减少凝血因子的反应性方面存在差异,影响了其使用,特别是在维生素K治疗的检测过程中。 APTT对内源性凝血途径和共同途径的定量和定性异常敏感。是除PT之外,常规实验室最常进行的凝血检测。APTT对内源性凝血途径凝血因子缺乏(凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ、前激肽释放酶和高分子激肽原)尤为敏感。APTT检测通常用于监测低分子肝素抗凝治疗。APTT还用于检测其他类型的病理型血液凝固抑制物,最常见的是狼疮抗凝物质(LA)。APTT用于凝血因子替代治疗。APTT的检测试剂是促凝物、磷脂和接触激活剂组成的混合物。磷脂可能来源于人、动物或者植物。激活剂的种类也很多,如硅藻土、高岭土、微粉化的硅土和鞣花酸等。 一般,当凝血因子的活性低于参考区间的95%置信限水平时APTT会延长。但是,大量的研究表明不同的APTT试剂对于轻度和中度的凝血因子缺乏的反应程度存在一定的区别,特别是Ⅷ和Ⅸ因子缺乏。有相似的报道APTT对循环狼疮抗凝物质有不同的敏感性。同样,有文献报道商品化的APTT试剂对肝素的反应性不同,使得APTT值存在显著差异。

  • 【原创大赛】稀释液对凝血因子效价检测影响研究

    【原创大赛】稀释液对凝血因子效价检测影响研究

    [align=center][/align][align=left][b] 摘要:目的 [/b]确立不同稀释液对凝血因子效价检测的影响,研究因子效价检测的稀释方法,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。 [b]方法 [/b]对同一批和连续生产的10批人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物样品进行全自动血凝仪法的效价检测,分别选用全自动血凝仪稀释液和含1%人血白蛋白稀释液进行检测,统计10次以上的检测结果以确定不同稀释液之间的差别。 [b]结果 [/b]本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释,无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定,检测结果之间存在较大的差别。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释,同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小。[b]结论 [/b]因子类血液制品效价检测时,同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别,应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估,并应建立起正确的检测操作规程。[/align][b] 关键词: [/b]凝血因子; 稀释液; 效价测定 目前国内血液制品的生产是以健康人血浆为原料,经过分离纯化和病毒灭活制成,主要分为三大类,人血白蛋白、人免疫球蛋白类产品、人凝血因子类产品。国内已上市或在研的人凝血因子类产品主要有人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人纤维蛋白原、人纤维蛋白粘合剂、人凝血因子Ⅸ、人抗凝血酶Ⅲ等。人凝血因子Ⅷ主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。人凝血酶原复合物主要有效成分为人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ,主要用于治疗主要用于乙型血友病、 维生素K依赖的凝血因子缺乏症等病症的治疗。 人凝血因子Ⅸ主要用于防治乙型血友病和获得性凝血因子Ⅸ缺乏而致的出血症状病人的手术治疗。因子类血液制品是血液中凝血因子的高纯度浓缩物,在进行效价测定时需要对样品进行稀释,而稀释液中蛋白含量的不同对其检测结果有着影响。因子效价测定方法有一期法、二期法和发色底物法。一期法是目前应用最广泛的检测方法,系用人凝血因子缺乏血浆为基质,在APTT试剂和氯化钙的参与下,根据凝血因子国家标准品和供试品的凝集时间来计算供试品中的人凝血因子效价,实际检测过程中将基于一期法原理的人凝血因子效价测定法分为三种方法,即手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法。全自动血凝仪只是对一期法中各反应试剂的加入顺序进行了修订以便实现仪器的自动操作。相对于手工法检测,消除了很多主观因素。在日常工作中,当使用不同种类的稀释剂而采用相同的检测原理和方法进行效价测定应不会对测定结果产生影响,但实际工作中发现使用不同种类的稀释剂对效价测定结果有一定的影响。在人凝血因子Ⅷ效价检测过程中,采用手工法、半自动血凝仪法、全自动血凝仪法进行人凝血因子Ⅷ效价的比对试验,发现手工法、半自动血凝仪法检测结果一致,这两种方法比全自动血凝仪法的检测结果高20%以上。血液制品的原料来源于人血浆,受原料限制,一直较为稀缺,尤其是当前人凝血因子Ⅷ的生产量远远无法满足血友病患者的需求[sup][[/sup][sup]1-5[/sup][sup]][/sup],不同检测方法间20%以上的检测差别可能影响20%的产品收率,所以建立起因子类产品效价准确的检测至关重要。[b][b]1 实验仪器与试剂1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定2.1.1 人凝血因子Ⅷ供试品Owren-Koller(稀释液)稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.1.2 人凝血因子Ⅷ供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标同2.1.1人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同稀释液稀释效价测定2.2.1 人凝血酶原复合物供试品Owren-Koller(稀释液)稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《STAGO Compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2.2 人凝血酶原复合物供试品药典稀释液稀释效价测定方法[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标同2.1.1。人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ为泰邦公司人凝血因子Ⅷ产品的质控品,取自正常生产的产品,用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血因子Ⅷ效价测定时,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表1,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,586,268]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141920_02_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图1:[align=center][img=,488,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图1 FⅧ质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血因子Ⅷ产品,进行人凝血因子Ⅷ效价测定,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ进行再稀释。检验结果见表2,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,273]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141921_03_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图2:[align=center][img=,499,310]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141922_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图 2 连续10批FⅧ两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同稀释液稀释效价测定结果[/b][/b] 2015ZK0901批人凝血酶原复合物为泰邦公司人凝血酶原复合物产品的质控品,取自正常生产的产品,用国家标准品标定后用作工作质控品。在进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定时,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,580,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图3:[align=center][img=,548,288]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141923_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 PCC质控品两种稀释液检测结果对比[/align] 选取泰邦公司生产的连续10个批次的人凝血酶原复合物产品,进行人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定,分别用Owren-Koller(稀释液)和药典稀释液(取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%配制而成)对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ进行再稀释。检验结果见表4,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][align=center][img=,573,259]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_01_1626619_3.png[/img][/align]用柱形图表示,如图4:[align=center][img=,548,327]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709141947_03_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 连续10批PCC两种稀释液检测结果对比[/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验确定了在人凝血因子Ⅷ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ的样品进行稀释,无论是对同一批质控品的测定还是对连续批次样品的测定,检测结果之间存在较大的差别,另外对FⅧ质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较,计算P值,P<0.05表明两种方法的结果有显著性差异,含有蛋白的稀释液的检测结果明显高于不含蛋白的稀释液。而在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ的效价检测中,采用不同的稀释液对每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ的样品进行稀释,同一批质控品和连续批次样品检测结果之间差别较小,另外对PCC质控品两种稀释液检测结果运用软件SPSS17.0进行均值单因素ANOVA比较,计算P值,P>0.05表明两种方法的结果无显著性差异。在使用全自动血凝仪进行人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物等因子类血液制品效价检测时,一般按照仪器的使用说明书和配套试剂进行稀释检测,但是忽视了血凝仪的开发目的是用于临床血浆样品的检测,而血浆与高纯度的血液制品浓缩物是不同的,用检测血浆样品的方法进行因子类血液制品的效价检测可能影响检测结果。因子类血液制品效价检测时,同一样品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别,应对血凝仪是否可用于因子类血液制品进行评估,并应建立起正确的检测操作规程。因子类血液制品采用不同的稀释液进行稀释检测结果可能存在较大差别可能跟产品本身的性质有关,因子类血液制品经过分离、纯化,去除了众多的杂质蛋白,为高纯度的浓缩物,活性较高,但蛋白质含量较低,人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量约为0.1%,人凝血酶原复合物的蛋白质含量约为2.3%,而临床血浆样本的蛋白质含量约为5%,, 人凝血因子Ⅷ加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅧ效价测定影响较大,PCC中加入含1%人血白蛋白的稀释液后对FⅨ效价测定影响较小,可能是人凝血因子Ⅷ的蛋白质含量远小于血凝仪设计用于检测的血浆样本的蛋白含量,故建立不同蛋白质浓度梯度的稀释液对因子效价进行测定,从而确认蛋白质浓度对因效价测定的影响。[b]参考文献:[/b]Cheng E, Jinzenji D, Lorthiois AP, et al. Purification of coagulation factorⅧ using chromatographic methods. Direct chromatography of plasma in anion exchange resins . Biotechnol Lett, 2010, 32(9):1207-1214.李策生, 周志军, 胡勇, 等. 人凝血因子Ⅷ中试纯化工艺的质量控制 .中国生物制品学杂志, 2013, 26(10):1508-1512.冉曙光, 刘文芳, 赵辉. 凝血因子Ⅷ浓缩物的制备及安全性和有效性 .中国输血杂志, 2008, 21(2):156-159.倪道明, 朱威. 血液制品 . 北京: 人民卫生出版社, 2013:21.王卓, 赵雄, 吕茂民, 等. 血液制品的现状与展望 . 生物工程学报, 2011, 27(5):730-746.[b] [/b]

  • 【原创大赛】人凝血因子VIII中氨基酸含量测定

    【原创大赛】人凝血因子VIII中氨基酸含量测定

    人凝血因子VIII中氨基酸含量测定摘要 目的: 建立用高效液相色谱法测定人凝血因子VIII中氨基酸含量。方法: 采用6 - 氨基喹啉- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 为衍生剂,与氨基酸柱前衍生后,用Agilent 1200 高效液相色谱仪,AccQ·Tag C18柱( waters 150 mm ×3. 9 mm,4 μm) ,以水Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液和乙腈进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37 ℃,进样量10μL。结果: 各氨基酸在32 min 内测定完毕,回收率为98.7% ~ 101.5%。RSD 均小于1. 5%。结论: 本法分离度好,快速、简便,可作为产品的质量控制方法。关键词: 6 - 氨基喹啉- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯; 人凝血因子VIII; 甘氨酸; 衍生物; 梯度洗脱; 高效液相色谱法;氨基酸; 含量测定人凝血因子VIII,本品对缺乏人凝血因子礓所致的凝血机能障碍具有纠正作用,主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状及这类病人的手术出血治疗。该药物制备过程中使用了氨基酸( 精氨酸、丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、盐酸赖氨酸、脯氨酸 等) 做稳定剂,为了保证药品质量和用药安全,应对其中氨基酸的含量进行控制。该法依据过量的6 - 氨基喹啉基- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 在一定条件和氨基酸形成稳定的衍生产物( 柱前衍生) ,用高效液相色谱法测定衍生产物,根据衍生产物的含量计算人凝血因子中各氨基酸的含量。1 仪器和试药1200 高效液相色谱系统( 美国Agilent 公司) ,配置低压四元梯度泵、1314B 紫外吸收检测器、自动进样器、柱温箱、Chemistations 化学工作站; Sartorius CP225D 电子微量天平( 德国Sartorius 公司) ; SartoriusPB - 21 型pH 计( 德国Sartorius 公司) ; LDZ5 -2 低速自动平衡离心机( 上海医用离心机厂) 等。各标准品均来自于中国食品药品检定研究院2 色谱条件及系统适用性试验色谱柱: Waters AccQ·Tag C18色谱柱( 3. 9 mm ×150 mm) ; 流动相: 水为溶剂D,Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液( A) - 乙腈( B) - 水( D) ,柱温:37 ℃; 检测波长: 248 nm。精密量取对照品溶液与供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图32 min。梯度洗脱条件表见表1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508311802_563771_1637386_3.png

  • 【原创大赛】人凝血因子Ⅷ酸沉淀过程分析和近红外定量模型的建立

    摘要: 目的 对人凝血因子Ⅷ酸沉淀过程效价和总蛋白建立近红外模型,实现效价和总蛋白的快速检测,并以此确定酸沉终点。 方法 实验室模拟人凝血因子Ⅷ酸沉淀过程,对不同酸沉程度下的效价和总蛋白进行测定,同时采集近红外光谱,建立模型。结果 酸沉淀过程中FⅧ比活性达到最高时的pH值并不固定,在6.1-6.5范围内波动,所以将固定的pH值作为酸沉淀的终点并不能达到最佳的效果。结论 建立的人凝血因子Ⅷ酸沉过程中效价和总蛋白模型,固定加酸法不能准确判断酸沉最佳终点,所建立的近红外分析模型为在线实时监控溶解液中的FⅧ比活性提供参考方案。 关键词:近红外光谱分析技术 人凝血因子Ⅷ 酸沉 效价 总蛋白人凝血因子Ⅷ(coagulationfactor Ⅷ,FⅧ)是治疗甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状等的不可或缺的药品,而目前国内生产工艺相对落后,在国内29家血液制品企业中仅有4家有能力生产FⅧ,采用离子交换层析法从人血浆冷沉淀中分离纯化FⅧ的生产工艺,收率低(平均9%)、比活低。因此,针对生产现状,将现代过程分析与控制技术引入到FⅧ生产过程中的关键环节当中,增加对生产工艺过程的了解,有效控制工艺过程,提升FⅧ的收率及比活性。生产人凝血因子Ⅷ以人血浆的冷沉淀为原料,一般用含肝素钠的溶解液溶解,溶解液pH为7.2±0.1。溶解完全后依据不同蛋白质的等电点不同,加0.05M的醋酸溶液进行酸沉淀,使以纤维蛋白原为主的大量杂蛋白沉淀出来,而FⅧ大部分保留在上清液中,从而大大提升溶液的FⅧ比活性。在生产中,酸沉淀终点的控制依据经验以溶液的pH值为参考,当溶液的pH值为6.3±0.1时加酸过程终止,此时上清液中的蛋白含量较低而FⅧ的活性损失较少,因此能够得到FⅧ比活性高的产品。但是单纯以pH值为控制参数的终点控制方法,不一定能够保证不同批次的酸沉淀过程都达到最理想的状态,本试验将对FⅧ的酸沉淀过程进行分析,以检验是否不同批次溶解液的FⅧ比活性在pH=6.3时都达到最高值,并试图找到与比活性直接相关的物料参数——蛋白质含量作为酸沉淀终点的控制标准,使溶解液中FⅧ的比活提升和活性损失达到更均衡的状态。同时,利用近红外光谱分析技术,建立溶解液蛋白含量的PLS定量分析模型,进行蛋白含量的实时监控,从而实现以新参数为指标的酸沉淀终点控制。1 材料1.1 试剂 冷沉淀溶解液(山东泰邦生物制品有限公司),批号分别为201435、201436、201437、201438、201439,每批留样200mL;BCA试剂盒(碧云天生物技术研究所);凝血因子Ⅷ促凝活性检测试剂盒(成都协和生物技术中心);醋酸(国药集团化学试剂有限公司,分析纯);三蒸水。1.2 仪器 Antaris II傅里叶变换近红外光谱仪(美国ThermoFhisher公司);PB-10酸度计(德国sartorius公司);BF300恒流泵(保定齐力恒流泵有限公司);JB-3A型恒温磁力搅拌器(上海雷磁创益仪器仪表有限公司);Legendmicro 17R离心机(美国ThermoFhisher公司);TW12恒温水浴箱(德国Julabo公司);3001-1890酶标仪(美国ThermoFhisher公司)。2 方法2.1 样品的制备2.1.1 配制醋酸溶液 量取醋酸约3.0mL,加入适量蒸馏水中,然后加蒸馏水至1.0L,得到浓度约为0.05M的醋酸溶液,混匀后用0.22 μm膜过滤。2.1.2 酸沉淀过程 参照实际生产过程,在实验室进行小试规模的酸沉淀过程。将超低温冻存的冷沉淀溶解液约100mL放至室温融化,缓慢倒入烧杯中,将烧杯置于低温水浴中,用酸度计监测溶解液的pH值和温度,然后以1mL/min的速度滴加配制好的醋酸溶液,边加边搅拌,使溶液的pH值由7.2左右降低至5.9左右,此过程中溶解液的温度由室温(25℃)均匀降低至15 ℃。重复进行此实验10次,每次实验过程之间保证相同的环境温度、水浴温度、醋酸浓度、加酸速度和搅拌速度。每次酸沉淀过程中pH值每变化0.1取样800μL,取样后立即进行离心(10000 rpm,5min),保留上清液作为样品,进行后面的光谱采集和蛋白含量及FⅧ效价的测定。2.2 近红外光谱的采集 选择AntarisII光谱仪的透射模块进行上清液光谱的采集。选用4 mm光程的比色皿,加样量约为400μL,光谱扫描范围为10000-4000 cm-1,扫描次数为32次,分辨率为8cm-1,以空气为参比进行采集,每隔1小时校正一次背景,测量环境为室温,湿度30%-50%。2.3 FⅧ效价的测定 使用凝血因子Ⅷ促凝活性检验试剂盒对上清液中的FⅧ效价进行检测,试剂盒中包含正常凝血质控血浆、缺凝血因子Ⅷ血浆,APTT试剂b/a、稀释液、CaCl2溶液,现用现配。2.3.1 标准曲线的制作 除氯化钙溶液在37℃水浴预热外,其余样品、试剂均置冰水浴中。 1)将正常凝血质控血浆用稀释液1作1/2、1/5、1/10、1/20、1/40、1/80倍比稀释,其对应FⅧ:C百分活性为500%、200%、100%、50%、25%、12.5%。 2)取某一稀释度正常凝血质控血浆0.1mL、缺凝血因子Ⅷ血浆0.1 mL、APTT试剂0.1mL于透明小试管,混匀后即置37℃水浴温浴10min。 3)迅速加入氯化钙溶液0.1mL,同时启动秒表,在水浴中以1-2次/秒的频率摇动小试管,当观察到凝固出现时,立刻停表记录凝固时间。 4)以不同稀释度正常凝血质控血浆FⅧ:C百分活性为X,对应的凝固时间(秒)为Y,按照统计学方法作直线回归方程,方程形式为Y=blog X+ a,即得标准曲线。2.3.2 样品效价的测定 1)将上清液用稀释液1作1/100倍稀释,即取10µL样品液加稀释液990µL,以此代替标准曲线制作项中某一稀释度正常凝血质控血浆,按照同样方法测定凝固时间。 2)将样品凝固时间(秒)代入标准曲线方程,计算X值,即得样品FⅧ:C百分活性水平。2.4 总蛋白含量的测定样品上清液中总蛋白质的含量测定采用Bicinchoninicacid(BCA)法。BCA法是应用较为广泛的蛋白定量方法之一,其原理是在碱性条件下,蛋白质与Cu2+络合,使之还原成Cu1+,Cu1+可与BCA形成稳定的蓝紫色复合物,复合物在561nm处有强吸收且吸收值与蛋白浓度成正比。BCA法原理与Lowery法相似,但是灵敏度高,操作简单,稳定性好,干扰物质对其影响也较小。2.4.1 配制工作溶液 将BCA试剂盒铜试剂按照体积比50:1混合,得到嫩绿色的标准工作试剂(WorkingReagent,WR),WR在室温条件下十分稳定。2.4.2 配制标准蛋白溶液配制0.5 mg/mL的BSA蛋白溶液,在96孔板中用PBS缓冲液对BSA溶液进行稀释,得到相同体积的BSA标准溶液0、25、50、100、200、300、400、500μg/mL,每个浓度的BSA标准溶液再各加200μL WR。具体稀释方案如表1所示。2.4.3 测定蛋白浓度每个样品取2 μL置于96孔板中,加18μL PBS缓冲液,然后加200 μL WR,在37℃培养箱中放置30min。将反应温度冷却至室温,用酶标仪测定标准蛋白溶液和样品溶液在561 nm处的吸光度值,绘制标准曲线,计算样品的蛋白浓度。表1 标准蛋白溶液和待测样品的加样量和比例 孔数 蛋白浓度(μg/mL) 标准或待测蛋白溶液体积(μL) PBS缓冲液体积(μL) WR体积(μL) 1 0 [ali

  • 人抗凝血酶Ⅲ分离纯化工艺研究

    [img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221754166749_5746_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221754272172_4339_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221754375930_7082_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221754478170_9409_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221754579270_6088_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755077660_5040_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755154062_8177_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755231932_519_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755316494_3561_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755387771_4933_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755454692_9457_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221755534545_1492_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221756015254_5487_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221756105492_8859_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221756194351_7987_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221756271199_1141_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221756346232_4807_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907221756407302_4758_3389662_3.jpeg!w690x975.jpg[/img][align=center][b][/b][/align]

  • 335万!西安市妇幼保健院HPV试剂、生化凝血和血常规试剂采购项目

    [b][font=inherit]项目概况[/font][/b]HPV试剂、生化凝血和血常规试剂采购项目招标项目的潜在投标人应在全国公共资源交易平台(陕西省西安市)网站〖首页〉电子交易平台〉陕西政府采购交易系统〉企业端〗获取招标文件,并于 2022年12月29日 09时30分 (北京时间)前递交投标文件。[b][font=inherit]一、项目基本情况[/font][/b]项目编号:SXZBXA2022-37项目名称:HPV试剂、生化凝血和血常规试剂采购项目采购方式:公开招标预算金额:3,350,000.00元采购需求:合同包1(诊断试剂):合同包预算金额:3,350,000.00元合同包最高限价:3,350,000.00元[table=100%][tr][td]品目号[/td][td]品目名称[/td][td]采购标的[/td][td]数量(单位)[/td][td]技术规格、参数及要求[/td][td]品目预算(元)[/td][td]最高限价(元)[/td][/tr][tr][td]1-1[/td][td]诊断用生物试剂盒[/td][td]HPV试剂、生化检测试剂、凝血和血常规检测试剂[/td][td]1(批)[/td][td]详见采购文件[/td][td]3,350,000.00[/td][td]3,350,000.00[/td][/tr][/table]本合同包不接受联合体投标合同履行期限:具体时间以合同上签订时间为准。

  • 【转帖】临床药学简识歌

    抗凝血药血栓疾病需抗凝,肝素作用强快灵,抗凝适用体内外,鱼精蛋白拮抗快,双香豆素仅体内,过量中毒加维K,枸橼酸钠用体外,大量输血防低钙。

  • 壳聚糖止血粉促凝血作用的实验研究

    【序号】:1【作者】: 于佳鑫【题名】:壳聚糖止血粉促凝血作用的实验研究【期刊】:影像研究与医学应用. 【年、卷、期、起止页码】:2018,2(05)【全文链接】:https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDLAST2018&filename=YXYY201805159&uniplatform=NZKPT&v=PHm7p9Rc2CgPScGXeXyvUFix-WBMA12jeytsIyDnJZXLw-WSRFCaK9jDGAkjOwc9

  • 凝聚胺法交叉配血标准操作规程

    1. 原理 凝聚胺(polymatching)法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。2. 标本采集:2.1 标本种类:抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清,将细胞配成5%盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。2.2 标本要求:抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主张用EDTAK2(mg/dz)抗凝标本应无溶血,切标签齐全。3. 标本储存:急诊标本30分钟内完成操作,标本应至4℃冰箱保存7天。4. 标本运输:室温运输。5. 标本拒收标准:细菌污染。溶血标本,标签不齐全不能作测定。6. 试剂:6.1 试剂名称:凝聚胺试剂(polymatching)6.2 试剂生产厂家:(台资)珠海贝索生物技术有限公司。6.3 试剂组成:试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium,LIM).试剂打开使用后,可置室温贮存,未开封者2-10度贮存,有效期为2年。试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。试剂4. 8.5%生理盐水。7. 仪器:7.1 血型血清索离心机:XTL-4.7 上海离心机械研究所7.2 离心机:上海手术器械厂7.3 电热恒温水箱:北京长源实验设备厂7.4 显微镜:OLYMPUS(日本)8. 操作步骤及结果判断:8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5%的细胞悬液。加样量均为:血清2滴,红细胞悬液1滴。主管:受血者血清+供者红细胞悬液;次管:受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴,混匀,置室温15秒。8.3 1000g(3000rpm),离心18秒,弃上清液,管底保留约2滴液体。轻摇试管,观察是否形成凝块。如未形成凝块,则重做前面试验。8.4 加入2滴重悬液,轻轻混合,肉眼或显微镜下观察结果。8.5 凝块在1分钟内分散,试验结果为阴性,供受者血液配合;反之,如依照为不同强度的凝块,试验结果判为阳性,供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。9. 操作性能: 快速简便,特异性强,灵敏度较高,重复性好。10. 超出范围结果处理:10.1 细胞自凝: 在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果。10.2 若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。10.3 红细胞悬液为5%为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当,反应不明显易误判。10.4 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体。11. 方法局限性:11.1 试管,滴管吸头和玻片必须清洁干燥,防止溶血。11.2 操作方法应按规定,先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清。11.3 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集,继发性凝固及线状排列的区别。

  • 【原创大赛】原子吸收分光光度法测定人凝血因子VIII中铝离子残留量

    【原创大赛】原子吸收分光光度法测定人凝血因子VIII中铝离子残留量

    建立了使用石墨炉原子吸收分光光度法检测人凝血因子VIII中铝含量的分析方法,探讨了以非离子表面活性剂Triton X-100,基体改进剂,干燥温度和气体流量对实验结果的影响.在最佳工作条件下,铝的检测限为0.8μg/l;样品测得的相对标准偏差(n=6)为5.6%,加标回收率94.5%~103.5 %。方法适合人凝血因子VIII中铝离子残留量的分析测定。关键词:铝;石墨炉原子吸收分光光度法;人凝血因子VIII,残留量 铝是一种人体非必需的微量元素, 如果摄入过多, 将会严重影响人体的神经系统, 不仅使老年人易患痴呆病,还会引发慢性肾功能损害等病症, 故世界卫生组织及欧洲药典等均将铝含量的测定作为成品检定项目之一。 人凝血因子VIII辅料中加入Al2O3作为吸附剂,因此其在制剂中需对其残留量进行检测。由于其制剂成分复杂、有机物干扰严重、某些样品中的铝含量极低, 有些分析方法检出限达不到要求。石墨炉原子吸收光谱法是铝残留量分析中常用的方法之一。 本文采用非离子表面活性剂Triton X-100,基体改进剂硝酸镁 ,建立了石墨炉原子吸收分光光度法检测人凝血因子VIII中铝离子残留量的分析方法。1  实验部分1 .1  仪器与试剂ICE 3400GF 型原子吸收光谱仪(美国Thermo公司):ID100 自动稀释器,Chill I冷却水系统,GFS35Z石墨炉,自参比单光束塞曼系统, GFS 石墨炉自动进样器, 涂层石墨管(Extended Lifetime Cuvettes);铝空心阴极灯;ELGA Q15 纯水机。HNO3为MOS级;100μg/mL铝元素标准溶液(GSB 04-1713-2004) , 标准工作溶液均由以上溶液经超纯水逐级稀释而成的;稀释液:1%(v/v)硝酸+0.01%(v/v)Triton X-100(化学纯试剂);2.5g/L Mg(NO3)2 基体改进剂:称取0.25g分析纯Mg(NO3)2到PPE塑料烧杯中, 用超纯水溶解定容至100mL PPE塑料容量瓶中。实验所用水为电阻率为18.2 MΩ·cm 的超纯水。1 .2  样品预处理1.2.1 供试品溶液 精密量取供试品溶液0.2ml,加稀释液2.3ml。1.2.2 混合溶液 精密量取供试品溶液0.2ml,加入100μg/L标准铝溶液0.50ml,再加稀释液1.8ml。1 .3  实验方法准确移取稀释液、供试品溶液、混合溶液倒入自动进样器的样品杯中, 再通过自动进样器进样后由石墨炉原子吸收光谱仪进行铝含量的测定。1 .4  仪器工作条件石墨炉原子吸收光谱仪测定铝时的工作参数设置和石墨炉升温程序见表1 和表2 。表1 石墨炉原子吸收光谱仪的操作参数Tab.1 Operating parameters for GFAAS电流 I/mA测定波长 λ/nm缝隙宽度 l/nm测定模式进样量 V/µL基体改进剂8309.30.5峰高102.5g/L Mg(NO3)2 表2 石墨炉升温程序Tab.2 Graphite furnace heating program步骤程序温度 ℃时间 s斜坡 ℃/s气体类型气体流量 l/min1干燥8010.00氩气0.22干燥1105.03氩气0.13干燥2205.01氩气0.24灰化150010.00氩气0.15原子化26005.00氩气06清除26505.00氩气0.3 1 .5  工作曲线的制作将0

  • 服用这些药物应忌口

    饮食对部分药物的吸收有影响,或存在相互作用,必须按照各种药物的不同特性,科学地服药,才能确保药物的疗效,同时可降低不良反应发生。   单胺氧化酶抑制剂 在服用呋喃唑酮(痢特灵)、异烟肼(雷米封)、苯乙肼等单胺氧化酶抑制剂时,不宜食用动物肝脏、腌鱼、香蕉、菠萝、巧克力等富含酪胺的食物。牛奶、酵母、啤酒和葡萄酒中也含有较多的酪胺。酪胺能促进体内去甲肾上腺素的释放,在正常情况下,酪胺经肠道吸收后被单胺氧化酶氧化和分解。服用单胺氧化酶抑制剂后,体内单胺氧化酶活性降低,不能分解食物中的酪胺,引起去甲肾上腺素的大量释放,导致血压升高,出现颜面潮红、头痛头晕、恶心呕吐、心跳加快、视力模糊等症状,甚至发生高血压危象和蛛网膜下腔出血。   利尿药 在服用安体舒通、氨苯喋啶时,如果同时食用较多的鱼类、番茄、土豆、紫菜和香蕉、葡萄干等富含钾离子的食物,就可导致高血钾症的发生,出现胃肠痉挛、腹泻腹胀等症状,严重的可致心律失常。   喹诺酮类和四环素类药物 如氧氟沙星、左氧氟沙星、四环素、土霉素、强力霉素等,应避免与富含钙、镁、铁的食物同服。因为钙、镁、铁等金属离子能与这些药物发生化学反应,生成络合物,降低溶解度,影响药物吸收,从而使疗效降低。   磺胺类和氨基糖苷类抗菌药 磺胺嘧啶、磺胺甲基异�唑等磺胺药尿中浓度高,在酸性尿中,其溶解度降低,可在泌尿道内析出结晶,引起肾损害,出现结晶尿、血尿、尿痛、尿少和尿闭等症状,严重者还可致肾功能衰竭。妥布霉素、庆大霉素等氨基糖苷类药物主要经肾排泄并在肾脏皮质部蓄积,对肾脏有一定的毒性作用。在应用这些药物时,如果食用较多的肉类等能酸化尿液的食物,可能加重对肾脏的损害。因此,应多饮水,同时服用碳酸氢钠,少食肉类,多食水果和新鲜蔬菜,以碱化尿液,避免药物的不良反应。   左旋多巴 抗震颤麻痹药,服药时不能食用鱼、肉、动物肝脏、豆类、卷心菜等富含维生素B6的食物。维生素B6是多巴脱羧酶的辅基,使左旋多巴加速代谢脱羧成为多巴胺,而多巴胺不易透过血脑屏障,降低左旋多巴的疗效。同时,在外周组织形成的大量多巴胺,可导致恶心、呕吐、食欲减退、头痛、头晕、体位性低血压,甚至可引起肾功能下降和心律失常。还应避免与富含钙、镁、铁的食物同服,因为钙、镁、铁等金属离子能与左旋多巴分子结构中的两个游离酚羟基形成络合物,影响左旋多巴在胃肠道的吸收,降低药物疗效。   抗过敏药 服药期间不能食用肉制品、奶酪等富含组氨酸的食物。因为组氨酸在体内会转化为组织胺,而抗过敏药抑制组织胺分解,因此造成人体内组织胺蓄积,导致头痛、头晕、心慌等不适症状。   抗贫血药 应用硫酸亚铁片、富马酸铁片等治疗缺铁性贫血时,不宜食用豆制品、动物肝脏、海产品等。因为这些食物富含钙、镁、磷,他们可与铁离子生成不溶性的复合物而降低疗效。   助消化药 胃蛋白酶、淀粉酶、胰酶片、多酶片等助消化药的化学成分是蛋白质,服药期间忌饮茶,因茶叶中富含鞣质,会与蛋白质形成鞣质蛋白沉淀而难于吸收,降低药效。也不宜食用猪肝,猪肝含铜丰富,而铜离子易于和这些酶制剂的酸性基团结合,形成不溶性沉淀物,降低药效。   抗凝血药 服用双香豆素、华法林、硝苄丙酮香豆素等抗凝血药时,不宜食用动物肝脏、蛋黄、绿叶蔬菜等富含维生素K的食物。因为这些抗凝血药化学结构与维生素K相似,两者相互竞争与肝脏中有关的酶结合,使凝血酶原和凝血因子VII、IX、X的生成受抑制,影响药物的抗凝血作用。

  • 全血中毒鼠强

    如果测定全血中毒鼠强,对血有没有特别要求呢?一定要用不抗凝血吗?还是抗凝血呢?感觉都可以用吧?测定步骤是这样的,离心,取血清,加2ml乙酸乙酯,萃取10min,再加2ml乙酸乙酯,萃取10min,氮吹仪浓缩至0.5ml,进气质定性或定量。

  • 阿司匹林可降低前列腺癌患者死亡率

    据新华社华盛顿8月29日电 美国研究人员日前报告说,对接受手术或放疗的前列腺癌患者而言,日常坚持服用阿司匹林可降低其长期死亡率。 此前有研究表明,阿司匹林及其他抗凝血药物能抑制肿瘤生长和转移,但相关临床数据却非常有限。在新研究中,得克萨斯大学西南医学中心等机构的研究人员以近6000名接受手术或放疗的前列腺癌患者为对象进行分析,其中约2200人日常服用阿司匹林、华法林或波立维等抗凝血药。 研究人员发现,日常服用抗凝血药的前列腺癌患者群体的10年死亡率为3%,而未服用群体的死亡率为8%,前者的癌症复发率和骨转移率也明显较低。进一步的分析表明,前列腺癌患者所获的上述益处主要来自阿司匹林,而不是其他两种抗凝血药。 相关研究报告本周已发表在美国《临床肿瘤学杂志》上。研究人员表示,新研究表明,作为一种耐受性良好的常用处方药,阿司匹林可以改善前列腺癌的治疗结果,但向前列腺癌患者推荐服用阿司匹林之前还需进行更多研究。(记者任海军)

  • 【求助】血淋巴和抗凝剂

    用注射器抽取血淋巴每只蟹0.5mL移入装有0.5mLACD抗凝剂的ePpendorf管中。为什么抽的血和抗凝剂要一样多,谢谢

  • 心血管手术必须用药-鱼精蛋白全国严重缺货,各地心血管手术将停摆

    心血管手术的必用药-鱼精蛋白,其无机酸盐具有抗凝血作用。现在国内只有上海第一生化药业有限公司在生产,虽说海洋污染严重,捕捞量不够,但价格低,生产成本高很可能是重要原因。鱼精蛋白是一种碱性蛋白,主要在鱼类(如蛙鱼、蹲鱼、鲱鱼等)成熟精子细胞核中作为和DNA结合的核精蛋白存在。鱼精蛋白发现于1870年,到1940~1960年间,正式用作抗菌剂的研究才盛行起来。现在普遍用作心血管手术的抗凝血药。全国争抢鱼精蛋白 山东仅得30盒无奈暂停手术http://news.e23.cn/content/2011-09-11/2011091100220.html

  • 【求助】测定结果产生影响?

    做液相可以用枸橼酸钠抗凝剂抗凝血吗从资料上看,血药浓度多是采用血浆药物浓度,而资料上所用的抗凝剂全部为肝素,那么用枸橼酸钠抗凝剂可以吗?会不会对测定结果产生影响?

  • 西红柿这样吃很可能会出大事

    西红柿颜色鲜艳、味道可口、食法多样,是人们餐桌上常见的平民化蔬菜。不仅味道酸甜可口,而且还含有不少对人体有益的元素,常吃西红柿,可达到祛斑、美白、降血压、防癌等多重养生功效。然而,吃西红柿的好吃虽然有不少,但食用上还是要多加注意,否则很容易出事的哦。  服用抗凝血药物时不能吃  维生素K主要作用是催化肝中凝血酶原以及凝血活素的合成,维生素K不足时,由于限制了凝血酶原的合成而使凝血时间延长,造成皮下和肌肉出血。而西红柿则刚好含有较丰富的维生素K,因此服用肝素、双香豆素等抗凝血药物时不宜食用。  不要空腹食用  西红柿含有大量可溶性收敛剂等成分,与胃酸发生反应,凝结成不溶解的块状物,这些硬块可能将胃的出口幽门堵塞,引起胃肠胀满、疼痛等不适症状。  吃成熟的西红柿  尚未成熟的青西红柿含有生物碱甙(龙葵碱)其形状为针状结晶体,进食以后轻则口腔感到苦涩,严重的时候还会出现中毒现象。所以生的西红柿最好就不要吃了。 不宜长久加热烹制后食用  长久加热烹制后就失去了原有的营养与味道,因番茄红素遇光、热和氧气容易分解,失去保健作用。因此,烹调时应避免长时间高温加热。

  • 【讨论】夏季防治蚊子全攻略

    夏季防治蚊子全攻略灭蚊攻略:不光是打,效率太低。要运用科学从根本上解决——破坏其繁殖环境。蚊子寿命就一两个月,就是靠其强大的繁殖功能延续其种族的,所以只要破坏其繁殖环境就能很大程度上控制其数量。具体做法就是从水入手,因为有管哪种蚊子都要在水环境下才能繁殖。攻畋一:及时清理垃圾,不要留死水。攻畋二:肥皂水。关上门窗,在窗前放置一个盆子,盆中加点混合洗衣粉的水,第二天,水盆中就会有一些死去的蚊子。为什么被蚊子咬到会肿起来?事实上应该说被蚊子「刺」到了。蚊子无法张口,所以不会在皮肤上咬一口,它其实是用六枝针状的构造刺进人的皮肤,这些口针(stylets)形成摄食用口器的中心。这些口针吸入血液的功用就像抽血用的针一样;蚊子还会放出含有抗凝血剂的唾液来防止血液凝结,这样它就能够安稳地大快朵颐一番。当蚊子吃饱喝足、飘然离去时,留下的就是一个痒痒的肿包。 夏天到来后,蚊子随之孳生,尤其是雨季,蚊虫的幼虫--在大水中大量繁衍。蚊虫的叮咬使人难以入眠,而且还会传播疾病。可是要想彻底消灭蚊虫,并非易事,被蚊叮咬在所难免。蚊虫叮咬时,在蚊子的口器中分泌出一种有机酸--蚁酸,它的化学成分是HCOOH。雌蚊吸血,是为了得到血中蛋白质滋养卵巢,因此雌蚊的唾液会分泌一种类似抗凝血剂的有机酸,使血液不会凝固,但是留在人皮肤上的有机酸是外来物质,有些人便会产生过敏现象,像是痒、肿。去痒妙方1、在家庭中可用浓肥皂涂抹可迅速止痒,或用香皂蘸水在红肿处涂抹。原因是肥皂高级脂肪酸的钠盐。如:C17H35COONa。这种脂肪酸的钠盐水解后显碱性(含OH-),蚁酸水溶液中含H+ ,因为肥皂水中的OH-与蚁酸的H+中和成H2O因此可迅速消除痛、痒。2、涂点氨水止痒,原理同上。3、如果叮咬处很痒,可先用手指弹一弹,再涂上花露水、风油精等。4、用盐水涂抹或冲泡痒处,这样能使肿块软化,还可以有效止痒。5、可用芦荟叶中的汁液止痒。被蚊子叮咬后红肿奇痒时,可切一小片芦荟叶,洗干净后掰开,在红肿处涂擦几下,就能消肿止痒。6、万金油和盐的涂抹,可让局部麻醉并舒缓神经,减轻痒的感觉。7、将阿斯匹灵药丸磨碎和水涂抹在伤口上,也有消炎消肿功效。8、如果对蚊子叮咬较敏感的人,不妨在外出前,吃一粒抗组织胺药物。最近芬兰报告指出,抗组织胺药物阻断免疫反应,可以减轻蚊虫咬的痒和肿胀。但抗组织胺的副作用是想睡觉,开车者避免服用。在下极不赞成网友为了怕蚊子咬而吃抗组织胺之西药,为了蚊虫叮咬会痒,就轻易的建议大家吃西药,是极为要不得的,这会误导大家的健康!9、只要肯改吃碱性蔬菜之饮食,体质及血液是微碱性的,不但蚊子不爱叮,就算被叮之后,也不至於会太痒! 如果叮到,可用自己微碱性之口水,涂抹蚊虫叮咬处,亦能止痒!10、把一颗蒜瓣掰开,用断面涂抹蚊子咬的包,一会就好,而且止痒。11、几个人在一块就叮你一个主要还是跟气味有关,你也吃点蚊子讨厌气味的东西:4月10日中央2 台为您服务栏目讲了一个预防蚊子的办法:吃维生素B1,如果去野外要提前3-4天吃。她说人感觉不出来,蚊子可受不了那味,会远离你, 据说特有效,你试试.12、维生素B1泡水擦身也会让蚊子不敢近身。这种水溶性维生素是没有副作用的。多余的分量完全排出体外,不会贮留在人体中。13、用调味品中的八角、茴 各两枚,泡于温水脸盆中,用其水洗澡,蚊子不敢近身。14、在室内点燃干桔皮,可代替蚊 ,既能驱蚊,又可消除屋内异味。15、穿浅色衣服。 大家注意喽!伊蚊(又叫花斑蚊)最喜欢停在黑色衣服上。所以大家尽量在炎热的夏天穿一些颜色比较浅的衣服。16、尽量穿袜子。许多人喜欢夏天光脚穿鞋,殊不知穿袜子后,蚊子感觉人的皮肤湿度降低、皮表挥发物减少,会减少叮咬。17、被叮咬后不能抓。被蚊子叮到,我们会马上去抓。可是抓挠后,皮肤里的组织液、淋巴液等渗出,肿成一个包,就会越抓越痒,而且还不易消退,长满红包的“赤豆腿”就是这样被抓出来的。如果坚持不抓,一般10至15分钟后,痒感就能明显消退了。18、蚊子黄昏前喜欢停息在窗台附近,入夜后喜欢停息在房中表面色泽较深的物体上,按此规律拍打蚊子,事半功倍。19、家庭

  • 离心机如何应用于红细胞压积容量测定

    [b]离心机[/b]如何应用于红细胞压积容量测定摘要:红细胞压积(packedcellvolume,PCV)又称红细胞比容(hematocrit,Hct),是指红细胞在血液中所占容积的比值,测定时将抗凝血在一定的条件下离心沉淀,即可测得每升血液中血细胞所占容积的比值。  1原理[b]离心机[/b]  在100刻度玻璃管中,充入抗凝血至刻度,经一定时间离心后,红细胞下沉并紧压于玻璃管中,读取红细胞柱所占的百分比,即为红细胞压积容量(PCV又称压容、比容)。  2.器材  (1)温氏管:管长11cm,内径约2.5mm,管壁有100个刻度。一侧自上而下标有0~10,供测定血沉用,另一侧标有10~0,供测定比容用。如无这种特制的管子,可用有100刻度的小玻璃管代替。  (2)长针头及胶皮乳头:选用长12~15cm的针头,将针尖磨平,针柄部接以胶皮乳头。也可用细长毛细吸管代替。  (3)水平电动离心机:转速能达4000rpm者。  3.方法  (1)用长针头吸满抗凝血,插入温氏管底部,轻捏胶皮乳头,自下而上挤入血液至刻度10处。  (2)置离心机中,以3000rpm的速度离心30~45min(马的血液离心30min,牛、羊的血液离心45min),取出观察,记录红细胞层高度,再离心45min,如与第一次离心的高度一致,此时红细胞柱层所占的刻度数,即为PCV数值用%表示。  4.注意事[b]离心机[/b]项  (1)温氏管及充液用具必须干燥,以免溶血。  (2)此时,离心机的转速必须达3000rpm以上,并遵守所规定的时间。  (3)用一般离心后[b]离心机[/b],红细胞层呈斜面,读取时应取斜面1/2处所对应的刻度数。血浆与红细胞层之间的灰白层由白细胞与血小板组成,不应计算在内。  5.临床意义  (1)红细胞压积增高:见于各种原因所引起的血液浓缩,使红细胞相对性增多,如急性胃肠炎、肠便秘、肠变位、瓣胃阻塞、渗出性胸膜炎和腹膜炎,以及某些传染病和发热性疾病。由于红细胞压积增高的数值与脱水程度成正比,因此在临床上可根据这一指标的变化而推断机体的脱水情况,并计算补液的数量及判断补液量的实际效果。另外。也见于各种原因所致的红细胞绝对性增多,如真性红细胞增多症、肺动脉狭窄、高铁血红蛋白血症等。  (2)红细胞压积降低:见于各种贫血,但降低的程度并不一定与红细胞数一致,因为贫血有小细胞性贫血、大细胞性贫血及正细胞性贫血之分。

  • 【分享】献血有害健康吗?

    【分享】献血有害健康吗?

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105281415_296633_1609805_3.jpg献血毕竟也是“出血”。我们知道,一般急性失血500ml,就会出现头昏、心慌、乏力,失血1000ml就会出现休克。正常成人的血液总量大约有4000~5000ml,倘若一次失血超过20%(也就是800~1000ml)就可能有生命危险。因此,献血者有些顾虑是正常的,但是献血对身体的具体影响会大到什么地步呢?血液中的主要成分包括红细胞、血小板、白细胞和血浆。红细胞的主要作用是运送氧气和二氧化碳——这可谓是血液最重要的功能。人体的组织器官,缺氧超过几分钟就会发生不可逆的损伤。而细胞所需要的氧几乎都是由红细胞运送的。大量失血之所以会要人命,主要就是因为红细胞会不够用。血小板和血浆中的十几种凝血因子共同参与凝血的工作。如果血小板减少的话,人就可能出血不止,甚至出现自发出血,也就是你什么都不做,血自己就渗出来了。白细胞主要参与免疫反应,说白了就是抵抗外来入侵者、以及清除内部叛乱者——肿瘤细胞。但是这个免疫反应绝对不是白细胞一个人在战斗,还需血浆中的各种免疫成分协作。

  • 【原创大赛】一种快速测定人凝血因子Ⅷ冷冻干燥过程中水分含量的方法

    摘要:目的 建立一种快速测定人凝血因子Ⅷ冷冻干燥过程中水分含量的方法。 方法 首先采用卡尔费休容量滴定法测定不同冻干程度的人凝血因子Ⅷ的水分含量,做为一级数据,并同时采集样品的近红外光谱;采用K-S方法对样品集进行划分,学生化残差-杠杆值去除异常样品,考察不同的光谱预处理方法,利用iPLS和GA对建模波段进行选择,以R2、RMSEC、RMSECV、RMSEP值为模型评价指标。 结果 所建立模型的主要参数为R2=0.918,RMSEC=0.2141,RMSECV =0.4102,RMSEP=0.3848,线性较好,光谱与样品的水分含量有较好的相关性。结论 建立的FⅧ成品的水分含量模型满足生产需求,是一种快速无损的检测方法,同时减少了FⅧ样品和卡尔费休试剂等的损耗,是一种十分经济有效的方法。关键词:近红外光谱分析技术 人凝血因子Ⅷ 水分 冻干血液制品在医疗急救和某些特定遗传疾病治疗上具有其他药品无法替代的作用,但我国当前整个血液制品行业长期处于供不应求的状态,因此提高血浆综合利用率、增加各产品的收率是解决现状的一个必要举措。其中人凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ, FⅧ)是治疗甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状等不可或缺的药品,而目前国内生产工艺相对落后,少数企业有能力生产FⅧ。水分是确保产品质量的一个重要参数,它的含量和存在形式对FⅧ的结构和功能影响很大,直接关系到FⅧ产品的稳定性。在生产中,通过冷冻干燥使FⅧ制剂的水分含量在3.0%以下。但是冻干过程无法取样,只能依据经验,通过观察冻干曲线对冻干条件和冻干时间进行控制,无法直接对产品水分含量进行判定;而产品的水分含量测定采用常规的卡氏水分测定方法,具有破坏性切费时费力,而且测定结果无法代表整批产品的特性。近红外光谱分析技术(Near InfraredSpectroscopy,NIRS)是当前最重要的一种PAT技术,它是指应用波长范围在780-2526nm波长范围内的电磁波的一种光谱学方法,在制药、医学诊断、食品和农产品的质量控制,天文学以及治疗医学等领域都有应用。本实验室采用近红外光谱分析技术,对产品进行快速、无损隔瓶测定,并可以实现多点测控,测定冻干产品中的水分含量,以判断干燥终点。1 材料1.1 试剂人凝血因子Ⅷ(冻干剂,200IU/瓶,山东泰邦生物制品有限公司);甲醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);卡尔·费休试剂(KFR-06型,天津市科密欧化学试剂有限公司);注射用水。1.2 仪器Antaris Ⅱ傅里叶变换近红外光谱仪(美国Thermo Fisher scientific公司),附件配置:积分球漫反射检测器;KF-4型自动水分测定仪(南京科环分析仪器有限公司);Alpha 1-2 LD实验室型冻干机(德国Christ公司);VD-53真空干燥箱(德国Binder公司);EL204电子天平(METTLER TOLEDO公司)。2 方法2.1 样品的制备取若干瓶FⅧ冻干剂,每瓶加10mL注射用水溶解完全,置于-80℃超低温冰箱预冻2h以上。开启冻干机,使冷阱降温至-55℃,并将真空泵预热。取出预冻完全的FⅧ,放置在干燥室内的搁板上,抽真空开始升华干燥,干燥过程中搁板温度约为-20℃,真空度为10Pa。升华干燥的时间为12-48h不等,到时间后关闭真空泵,通过真空密封阀门使干燥室通气,取出样品。选取部分升华干燥时间在24h以上的样品,转移至真空干燥箱内,进行解析干燥,其余样品封盖密封保存。解析干燥的温度为32℃,真空度为10Pa,干燥时间为5-24h不等。干燥结束后取出样品,压盖密封保存。最终共得到88个样品,通过控制干燥时间的不同使获得的样品拥有不同的水分含量,而且能够涵盖使用该模型预测样品水分时可能遇到的浓度范围,以保证未知样品水分含量的预测是通过模型内插进行分析的,从而使模型具有有效性和实用性。2.2 光谱的采集本实验使用Antaris Ⅱ傅里叶变换近红外光谱仪,包括带InGaAs检测器的积分球漫反射分析模块,采用仪器自带的RESULT-Intergration软件编写采集光谱的工作流程。仪器的主要工作参数为:光谱扫描范围为10000cm-1-4000cm-1,分辨率为8cm-1,光谱扫描次数为32,每个样品在不同部位采集3张光谱。近红外漫反射光谱吸收强度设定为lg(1/R)。启动仪器,预热至少30分钟,检查仪器各项性能是否正常。采用仪器自带的RESULT-Operation采集光谱,调用编写好的工作流程,将装有样品的西林瓶直接放在通光孔并固定位置,即可采集样品的傅里叶变换近红外光谱数据。2.3 水分含量的测定依据《中国药典》三部附录VII D 水分测定法第一法—卡尔费休容量滴定法,测定样品的水分含量。2.4 建立校正模型在MATLAB中运行PLS_Toolbox工具箱进行数据处理,采用PLS建立FⅧ冻干过程中水分含量的定量分析模型。用K-S分类的方法将样品划分为校正集和验证集。根据学生化残差和杠杆值等统计指标识别并去除异常样品。对光谱数据进行必要的平滑、求导等预处理,以消除噪声和基线漂移等的影响。使用iPLS和GA等方法选择光谱区间,优选与水分含量相关性强的谱区,减少无效信息的使用。3 结果3.1 样品制备及水分含量测定结果共制备得到88个样品,水分含量范围为1.00%-5.30%。其中1-60号样品只进行了不同时间的升华干燥,水分含量在2.04%-5.30%之间;61-88号样品在升华干燥后进行了不同时间的解析干燥,水分含量在1.00%-2.75%之间。3.2 样品的近红外光谱所有88个样品的原始近红外漫反射光谱如图1所示。从图中可发现,样品光谱的基线漂移十分严重,所以必须进行适当的预处理,以消除基线漂移以及光谱噪声等的影响。水分子的O-H在近红外谱区有两个特征谱带:5150cm-1的组合频吸收和6950cm-1的OH伸缩振动一级倍频吸收。这两个特征吸收是建模时选择光谱区间的重要依据。data:image/png;base64,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

  • 西红柿的错误吃法

    西红柿四大常见错误吃法  错误吃法1:长久加热烹制西红柿  长久加热烹制后会失去原有的营养与味道,对身体无益。  错误吃法2:空腹的时候吃西红柿  西红柿含有大量可溶性收敛剂等成分,与胃酸发生反应,凝结成不溶解的块状物,容易引起胃肠胀满、疼痛等不适症状。  错误吃法3:吃未成熟的西红柿  青西红柿含有生物碱甙(龙葵碱),食用后轻则口腔感到苦涩,重时还会有中毒现象。  错误吃法4:服用肝素、双香豆素等抗凝血药物时吃西红柿  西红柿含维生素K较多,维生素K主要催化肝中凝血酶原以及凝血活素的合成。维生素K不足时,会使凝血时间延长造成皮下和肌肉出血。  西红柿生吃熟吃都防病  西红柿是人们都爱吃的食物,丰富的营养价值有益身体健康。可西红柿怎么吃更养生保健呢?西红柿到底怎么吃?生吃熟吃都防病。  生吃西红柿——抗感冒提高免疫力  西红柿营养价值高,比如富含提高免疫力的维生素C,也富含防癌抗氧化的番茄红素和β—胡萝卜素,这三种物质性质不一样:维生素C“怕热”,而番茄红素和β-胡萝卜素属于脂溶性营养素,用油烹调后更易吸收。要论生吃还是熟吃好,就要看你现在身体的需求所在。因此,在烹饪食物时,不要一味认为生吃一定比熟吃好,或者熟吃一定比生吃好,要看情况而定。  比如现在到了秋冬季,想提高家人的免疫力,可通过摄取一些维生素C来实现,建议生吃西红柿比较好,比如把西红柿当水果来吃,或者糖拌西红柿等。  熟吃西红柿——防癌抗衰老  若是想防癌抗衰老,那就把西红柿做熟了吃效果更佳。西红柿有助长寿,主要得益于它富含的番茄红素。番茄红素有植物黄金之称,它属类胡萝卜素的一种,是自然界中最强的抗氧化剂。它的抗氧化作用是胡萝卜素的两倍,具有极强的清除人体自由基的作用,还能促使细胞的生长和再生,起到延缓衰老的作用。  比如老年人,建议把西红柿煮熟吃,比如今天教的这道西红柿豆腐汤。秋冬季节,一天吃一个西红柿的量比较合适。

  • 【分享】各大治疗领域最具价值新药

    心血管领域    重点产品:利伐沙班(rivaroxaban、Xarelto)  研发商:强生、拜耳  适应症:深层静脉血栓(VTE注册前)、急性冠状动脉综合征、预防中风(Ⅲ期临床)  临床价值:所有的4项RECORD研究都显示,在降低深层静脉血栓和肺栓塞方面,利伐沙班优于依诺肝素(enoxaparin、Lovenox),但出血率比较低,这方面两者相似。  销售预期:荷兰国际银行金融市场的CraigMaxwell预测:2015年全球销售额将达68亿美元。  inThough获批指数和评论:95%(深层静脉血栓),53%(房颤导致的中风)。过去的10年中,医生们一直希望能有一只口服抗凝血药物可以替代华法令(warfarin、Coumadin)。几年前,阿斯利康公司的Xa因子抑制剂由于安全性而退出,这让FDA在审批这类药物时非常谨慎。但是inThought认为,利伐沙班利大于弊,且医生非常乐意接受这只药物。这只药物已经在欧洲获得批准,首先在美国获得批准的适应症将为深层静脉血栓的预防。这只药物还有预防房颤患者中风的预防和其他临床疾病的潜力。该药物用于治疗深层静脉血栓的适应症将于2010年4月获得批准。  分析师点评:医生们正在寻找一只比华法令使用更方便、疗效相当且出血风险并没有升高的药物。利伐沙班和达比加群(dabigatran、Pradaxa)将满足这些需求中的一部分。虽然这两只药物都只需1天用药1次、口服给药且不需要监测凝血功能,但是,利伐沙班在中风方面不如达比加群。FDA要求利伐沙班提交深层静脉血栓的数据,使得该项目的研发进程被拖缓。    重点产品:达比加群(dabigatran、Pradaxa)  研发商:勃林格殷格翰  适应症:深层静脉血栓、中风预防(Ⅲ期临床)  临床价值:18113名患者参与的Ⅲ期临床试验RE-LY显示,与华法令相比,每天2次使用达比加群150mg能显著的降低出血性卒中和缺血性卒中。  inThought获批指数和评价:67%。和利伐沙班一样,这只药物同样激动人心,由于这只口服抗凝血药具有替代华法令的潜力。达比加群最有利的地方是可以降低房颤患者中风发作的风险,专家们估计,该药物上市5年后将抢占华法令50%的市场份额。  分析师评价:这只口服的凝血酶抑制剂将远远超过同类药物,医生将会非常乐意使用此药来预防中风。RE-LY试验已经为我们显示了非常有希望的结果,与华法令相比,这只药物的疗效相当,并没有增加出血的风险和肝脏毒性,同时起效迅速和不需要监测凝血功能,这暗示着医生和患者将非常欢迎这只使用简单、可以替代华法令的药物。

  • 【转帖】鱼白的相关知识

    鱼类的精巢又叫鱼白,是鱼制造和贮存精子的器官。鱼白含有一种特殊的蛋白质,叫鱼精蛋白,是自然界中最简单的一种碱性蛋白质。它是止血的良药。鱼白含有一种特殊的蛋白质,叫鱼精蛋白,是自然界中最简单的一种碱性蛋白质。它是止血的良药。鱼精蛋白不仅用于治疗肺咳血、重症肝炎引起的大出血,还可和抗凝血药肝素的硫酸基相结合,使肝素很快失去抗凝活性。   鱼精蛋白可与胰岛素、抗菌素、肾上腺皮质激素等药物形成混合物,以延长这些药物的疗效。一名需每日注射3次胰岛素的病人,若使用鱼精蛋白与锌制成的鱼精蛋白锌胰岛素注射液,可使胰岛素的注射时间间隔延长为每24~48小时给药1次。   鱼类精巢中含有大量DNA。用DNA制成的片剂和注射液,可以用于治疗因使用抗癌药或放射疗法治疗引起的白细胞减少症,也可用于治疗再生障碍性贫血、血小板减少、肝炎、牛皮癣等疾病。鱼精巢的提取物精氨酸是治疗肝昏迷的特效药物。人体内如精氨酸含量不足,就会影响人体的生物代谢速度。用精氨酸为原料制成的精氨酸门冬酸酯,可以治疗成人疲劳、睡眠不足和记忆障碍。   鱼白是重要的制药原料,用鱼白制成的药物正在为治疗人类疾病而贡献自己的力量。

  • ELISA试剂盒实验操作之标本采集及贮存

    ELISA酶联免疫法因其灵敏度高,特异性好的有点被广泛运用与各种实验。在ELISA试剂盒实验虽然时间短,但是过程十分复杂,且实验中的每个步骤都需要实验人员百分之百的投入。稍有疏忽很可能就会导致实验结果背景值过高、白板等现象。为了能让大家在ELISA实验前有个充分的了解,今天要为大家讲解的是ELISA试剂盒实验操作之标本采集及贮存。血清标本宜在新鲜时检测,严重溶血标本禁用。一般说来,在 5 天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合,使间接法的 试剂 本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使 抗体 效价跌落,所以测 抗体 的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存;最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管;并使用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关;EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性;血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。严重溶血,以 HRP 为标记的ELISA 测定中,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性,催化底物显色造成假阳性; 混有红细胞的血清 易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净;如有 细菌污染 ,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应; 标本凝固不全 ,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果; 采血试管洗涤不彻底 、反复使用易交叉污染; 塑料试管能吸附抗原物质 ,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。所以为了保证我们实验的结果,在标本采集和贮存的时候我们需要保证其不被污染不受到破坏。

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