抗体偶联药物表征

大家好，本周为大家分享一篇文章，Added Value of Internal Fragments for Top-Down Mass Spectrometry of Intact Monoclonal Antibodies and Antibody−Drug Conjugates [1]，文章的通讯作者是加州大学洛杉矶分校化学与生物化学系的Joseph A. Loo教授。　　抗体-药物偶联物(Antibody - drug conjugates, ADC)是一种很有前景的治疗药物，它通过linker为抗体提供高效的细胞毒性有效载荷，以提高其抗肿瘤功效。将linker和有效载荷偶联到抗体上，给ADC带来了额外的异质性，增加了对其全面表征的挑战。自上而下的质谱(TD-MS)技术近年来在单克隆抗体的表征中得到了广泛的应用，与自下而上质谱(BU-MS)和中下质谱(MD-MS)相比，TD-MS具有最简单的样品制备流程和保留单克隆抗体内源性修饰的优势。然而，对于抗体大小的蛋白质和具有显著二硫键组成的蛋白质，TD-MS的断裂效率较低，获得的序列和药物偶联位点信息有限。　　为了增加TD-MS的序列信息含量，一种策略是将不包含蛋白质序列N端和C端的内部片段纳入数据分析工作流程中，这种方法已被证明有助于二硫化完整蛋白的TD-MS表征。在这篇文章中，作者发现在TD-MS中分配内部片段将mAb序列覆盖率提高到75%以上，并允许确定链内二硫键连接和各种N-糖基化类型。对于治疗性非特异性赖氨酸连接ADC，几乎60%的假定药物偶联位点被识别。　　内部片段可以在不破坏二硫键的情况下进入结构紧密、碎片化效率高度受限的区域，因此有可能大大增强完整单克隆抗体的序列信息。作者对完整的NIST单抗的5个最丰富的电荷态采用了ECD和HCD两种碎片化方法，并将每个电荷态的两种碎片化方法的TD-MS结果结合分析。内部片段的纳入提高了二硫键约束区域的序列覆盖，例如，轻链Cys133和Cys193之间的二硫约束序列几乎完全由内部片段覆盖(图2A)，重链的Cys147-Cys203和Cys264-Cys324序列区也是如此(图2B)，而这些区域是末端片段难以触及的。CDR的覆盖率从53%增加到60%，这表明纳入内部片段可以更深入地了解这一关键区域。总体来说，轻链的序列覆盖率从54%提高到83%，重链从28%提高到72%，合并后整个NIST单抗的序列覆盖率从36%增加到76%(图1)。重链比轻链的覆盖率提高更为显著，这表明随着蛋白质分子量增大，分配内部片段变得更有价值。　　图1. 考虑(A)轻链、(B)重链和(C)全单抗内部片段前后不同序列区域的序列覆盖率，包括非二硫约束序列(Free)、二硫约束序列(SS-constrained)、全序列(Full)和CDR序列(CDR)　　图2. (A)轻链和(B)重链的NIST mAb序列覆盖图谱。蛋白质骨架上的蓝色、红色和绿色切割分别代表b/y、c/z和by/cz片段。序列上方的实线表示末端片段序列覆盖率，序列下方的实线表示内部片段序列覆盖率。紫色虚线表示链内二硫键，浅灰色表示受二硫键约束的序列区域，橙色表示互补决定区域(cdr)。　　HCD能够在不破坏二硫键的同时仅碎裂蛋白质主干，因此作者在完整的NIST单抗上应用HCD来生成含有完整二硫键的片段，以确定二硫键连接。在每个形成链内二硫键的半胱氨酸上应用-1H的修饰，以表明它们的完整性。对于轻链，52个末端片段和12个内部片段穿过S - S键I, 17个末端片段穿过S - S键II, 6个末端片段穿过两个二硫键，清楚地显示了这两个二硫键的连接模式(图3A)。靠近重链两端的两个二硫键，S - S键I和S - S键IV，被89个末端片段和9个内部片段穿过 而中间的两个二硫键，S−S键II和S−S键III，只有24个内部片段穿过，没有末端片段穿过(图3B,C)。这些结果证明了NIST单抗重链的链内S - S连通性，重要的是，中间的两个S - S键模式只能由内部片段确定。除了确定链内S - S连通性外，分配内部片段也有助于鉴定N糖基化。当纳入内部片段时，额外分配了25个含有G0F的片段，42个含有G1F的片段和34个含有G2F的片段，这表明分析内部片段对N-糖基化鉴定的能力。　　图3. (A)轻链、(B)重链、(C)仅含完整NIST单抗内部片段的重链，在每个形成链内二硫键的半胱氨酸上施加一个氢损失后，通过HCD TD-MS生成片段位置图。　　内部片段可以确定赖氨酸连接ADC的药物偶联位点。作者采用了类似的方法，将ECD和HCD应用于先前已充分表征的非特异性赖氨酸连接ADC。ADC的TDMS在轻链上仅产生8个与DM1结合的末端片段(图4A)。分配内部片段显著提高了DM1偶联位点的测定。ADC的TD-MS在轻链上产生61个1- dm1结合和15个2 - dm1结合的内部片段，定位了3个偶联位点(K106, K114, K133)，并将鉴定的两个偶联位点缩小到4个赖氨酸残基(K153, K160, K170, K175)(图4A)。对于重链也观察到类似的结果。综上所述，对于完整的ADC，仅用末端片段确认了16个偶联位点，而在包含内部片段后，这一数字增加到52个，覆盖了约58%的抗体所有假定的偶联位点。　　图4. 由ECD和HCD TDMS生成的完整IgG1-DM1 ADC (A)轻链和(B)重链片段位置图。黑色垂直虚线表示赖氨酸的位置。　　在这项工作中，作者首次报道了在完整的NIST单抗和异质赖氨酸连接ADC的TD-MS表征中分析内部片段的好处。内部片段的包含末端片段难以达到的二硫键约束区域，显著增加了完整单克隆抗体的序列覆盖率。重要的PTM信息，包括二硫键模式和N糖基化，可以通过包含内部片段获得。最重要的是，内部片段可以帮助确定高度异质赖氨酸连接ADC的药物偶联位点。　　撰稿：夏淑君　　编辑：李惠琳　　文章引用：Added Value of Internal Fragments for Top-Down Mass Spectrometry of Intact Monoclonal Antibodies and Antibody-Drug Conjugates

为促进我国生物医药产业持续快速发展，仪器信息网将于2023年3月29日-2023年3月31日举办第四届“生物制药研发及质量控制” 网络大会，内容覆盖抗体/蛋白药物、细胞与基因治疗、多肽药物、核酸药物/mRNA疫苗，涉及生物药开发、质量控制、制剂的分析表征以及自动化等创新技术在生物制药领域的应用。多肽药物是现代医药研究的前沿方向，具有重要的社会价值和经济价值。然而，由于多肽属于蛋白质结构的组成部分，作为药物，其质量控制则更需要注意。本次生物制药大会特别设置多肽药物会场，4位嘉宾将从多肽药物发现、多肽二硫键的结构确证、多肽偶联物研究进展及拉曼光谱技术相关应用等角度进行讲解。点击图片免费报名报告嘉宾详情如下：多肽药物会场王珠银 董事长 深圳肽盛生物科技有限公司报告：突破多肽创新药发现的瓶颈：多肽创新药发现平台报名占位王珠银教授博士学士和硕士毕业于兰州大学化学系，博士毕业于美国Rutgers大学，博士后在纽约哥伦比亚大学做研究，现为兰州大学功能有机分子国家重点实验室教授。王教授主要研究方向为合成生物学，多肽和蛋白质生物医药，高通量药物筛选等。过去多年发表论文50余篇，申请美国和中国专利50多项，其中已获得11项美国发明专利授权，7项中国专利授权,1项欧盟专利授权，1项澳大利亚专利授权。王教授成功研发了多肽信息压缩技术，并基于此技术构建了大型多肽全库，加速多肽新药研发。梁远军 总经理 北京普诺旺康医药科技有限公司报告：化学合成多肽二硫键的结构确证报名占位梁远军，博士，毕业于军事医学科学院，在军事医学科学院从事活性多肽研究工作近20年，负责多项国家新药创制重大专项、新药创制多肽关键技术、863等课题，申请40多项新化合物专利。2017年任北京药物化学专业委员会委员，2018年聘为中国生化制药工业协会专家委员、多肽分会专家理事，2022年评为大兴“新国门”领军人才。2016年创立北京普诺旺康医药科技有限公司，专业从事多肽药物研发，公司逐步成长为国家高新技术企业，获得北京市“专精特新”企业、中关村“金种子”企业、瞪羚企业等称号。王颖 副研究员 中国药科大学报告：多肽偶联物的研究现状及展望报名占位中国药科大学副研究员，海洋药学硕士生导师。中国药科大学微生物与生化药学专业，获博士学位。长期从事多肽新药的一线研发工作，获得新药临床批件2件。致力于探讨非编码RNA及其来源的新型微肽在疾病发生发展中的功能机制，发现人体内源性微肽并对其进行优化提高成药性，开发成FIC多肽药物，为这些疾病的诊断和治疗提供了新思路。曾在Signal Transduct Target Ther（IF：38.104）、J Am Chem Soc（IF：15.419）、Acta Pharm Sin B（14.903）、Cell Death Dis（IF：6.304）、Oncogene（IF：7.519）和Mol Ther Nucleic Acids（IF：7.032）等杂志发表多篇论文，第一作者累计影响因子为105分，参与文章影响因子120分以上；申请发明专利两项；获中国产学研合作创新成果奖二等奖、第六届江苏医药科技进步奖二等奖；获得两件药物临床试验批件（批件号2013L01914，2018L02321）。王睿 产品经理 瑞士万通中国有限公司报告：拉曼光谱技术在药物质量控制中的应用报名占位瑞士万通中国有限公司拉曼产品线产品经理，硕士研究生学历。从事分子光谱技术的产品开发，仪器销售和应用推广工作十余年。在农业，食品，化工，高分子等行业有丰富的产品应用开发和实测经验。从2014年入职瑞士万通中国有限公司，负责近红外光谱和拉曼光谱产品的推广工作至今。生物制药分析表征会场生物药物结构上的细微差别可以显著影响其安全性和有效性,对此类药物的准确表征就需要精密的分析表征手段。本次生物制药大会特别设置生物制剂表征会场，邀请到杭州奕安济世、上海晟国医药、北京市科学技术研究院分析测试研究所的多位专家从不同角度对生物制剂的表征内容进行阐述。高原 高级工程师 北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）报告：生物制剂检测中的关键表征技术 报名占位现任中国颗粒学会测试专业委员会副秘书长，北京粉体技术协会副秘书长。主要研究粉体材料的物理性能表征方法及应用。主持及参与了与纳微米粉体表征技术相关的省部级项目4项。目前是国际标准化组织（ISO）的粒度分析工作组和孔径分析工作组成员人。同时作为全国颗粒表征与分检及筛网标准化技术委员会及微泡技术委员会委员，主持、参与制修订并颁布实施粉体物理性能相关国家标准9项，团体标准1项，合作研制国际实物标准1项、主持研制国家二级标准物质3项。获得中国分析测试协会（CAIA）奖一等奖，中国颗粒学会科技进步奖二等奖等奖项。杨泗兴 总监 上海晟国医药发展有限公司报告：双抗制剂表征 报名占位杨泗兴 博士，上海晟国医药CDMO业务制剂开发和生产负责人。杨博士毕业于上海交通大学，在生物制药领域从事制剂技术研究及CMC工艺、质量等相关工作超过15年，成功申报过20个以上生物药IND及BLA，覆盖重组蛋白、单抗/双抗/ADC、融合蛋白、酶、疫苗等。在生物药缓控释微球/微针等制剂技术、抗体高浓度注射液、双抗制剂、冻干制剂等领域具有丰富的经验。胡裕迪 制剂工艺开发/高级主管研究员 杭州奕安济世生物药业有限公司报告：商业化生产和BLA申报中的生物药制剂工艺表征和验证的研究 报名占位 硕士毕业于中国医药工业研究总院的药剂专业；本科毕业于中国药科大学药物化学专业。拥有超过5年的生物制剂开发经验，以制剂或CMC负责人参与“高浓度抗体、双抗、ADC冻干、siRNA、后期工艺表征”等研发项目超过15个，获得“制备一种抗Claudine18.2抗体制剂的方法”等5篇专利。目前专注于抗体药物的理化表征，成药性，制剂处方和工艺开发，制剂工艺表征，工艺转移等多个领域研究。宁辉 产品总监 丹东百特仪器有限公司报告：光散射技术在生物制剂中的应用报名占位 宁辉博士，全国专业标准化技术委员会委员，《分析仪器》第十一届编委会委员，现任丹东百特仪器有限公司产品总监兼任研发中心副主任。 2004年至2007年从事胶体物理领域研究，并于2007年取得荷兰屯特大学物理学博士学位。2007年至2008年在德国于利希研究中心从事博士后研究，关注胶体的热扩散行为及其表征手段。 宁辉工作和研究经历过程中，在Langmuir， J. Chem. Phys.等等期刊发表超过10篇学术论文。 宁辉于2008年入职于国外某知名粒度仪生产商，担任产品经理，并于2019年离开工作11年的外企，于2020年加入中国著名的粒度表征设备制造商，辽宁省A级高新技术企业，丹东百特仪器公司。在丹东百特仪器有限公司的工作过程中，宁辉先后参与了多项与光散射相关的设备的研发和产品推广工作。点击报名：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/biopharma2023/扫码进入会议交流群

2015年6月18日上午，安捷伦科技公司与烟台迈百瑞国际生物医药有限公司在山东烟台迈百瑞公司厂区举行了&ldquo 迈百瑞国际生物医药&mdash 安捷伦科技前沿生物药研究暨抗体药物偶联物分析联合实验室&rdquo 揭牌仪式。烟台迈百瑞国际生物医药有限公司常务副总裁梁其斌、烟台迈百瑞国际生物医药有限公司质量副总裁阮懋荣、安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影、安捷伦科技大中华区液相与液质联用技术应用技术支持经理安蓉等出席了揭牌仪式。仪器信息网等多家媒体与双方共同见证了促进中国新药领域研究的激动时刻。烟台迈百瑞质量副总裁阮懋荣致辞　　烟台迈百瑞国际生物医药有限公司质量副总裁阮懋荣为仪式致辞，并介绍了抗体偶联药物(Antibody Drug Conjugates，ADC)的特点和研发概况。ADC具有良好的靶向性及抗癌活性，已成为目前抗肿瘤抗体药物研发的新热点和重要趋势，并受到越来越多的关注。其开发涉及四个方面，包括药物靶点的筛选、重组抗体的制备、&ldquo 连接物&rdquo 技术开发以及高细胞毒性化合物的优化，其中任何一个环节出现问题，都会影响到ADC药物的安全性和有效性。目前，ADC药物开发的技术能力仍依赖于少数几个技术提供商。阮懋荣说：&ldquo 我们非常高兴能有机会与安捷伦这样全球领先的公司展开合作。迈百瑞一直致力于提供高质量的生物药物研发和GMP生产一站式外包服务，满足客户研发和GMP生产需求，加快生物药物的研发速度。此次与安捷伦合作成立的联合实验室，将为迈百瑞在国际ADC药物研发/生产舞台竞争中取得领先地位奠定坚实的基础。&rdquo 阮懋荣还说，迈百瑞的ADC产能是亚洲之冠，在全球也是屈指可数。除此之外，迈百瑞的客户是中国申请ADC新药的首例。　　该联合实验室是安捷伦科技在中国的第一间ADC分析领域前沿合作实验室，旨在以国际化视角和全球先进技术，建设先进生物药物分析测试平台，在完善工艺流程研究、ADC药物开发、提升科研质量的同时，紧跟国内外行业进展及客户需求，提供整体化解决方案，从而促进我国生物医药产业的可持续性发展。安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影致辞　　安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影女士在揭幕前致辞。赵影表示：&ldquo 安捷伦致力于为制药/生物制药行业客户提供创新高效的解决方案和技术支持。在ADC这一生物制药前沿的领域，安捷伦凭借其优异的仪器性能和完善的技术支持服务赢得了制药/生物制药客户的认可。在本次与迈百瑞的合作中，安捷伦不仅提供客户理化分析、结构表征相关的仪器平台，更是与客户紧密沟通，应对客户需求和行业动态快速响应，积极开发相应的整体解决方案。&rdquo 赵影还提到，安捷伦科技在全球已经有12000余名员工，近几年非常注重生命科学领域的发展。目前，中国的技术支持和售后服务工程师有500多位，为用户提供7天24小时无假期全天候的服务，得到了广大用户的认可。随着&ldquo 十三五&rdquo 重大新药创制中提出重点支持生物药开发创新，生物制药市场发展势头强劲，安捷伦也会继续在生物药物质量控制领域继续提供仪器平台和售后支持，协助广大制药用户以更快的速度、更低的成本将高质量的药物带入市场。烟台迈百瑞质量副总裁阮懋荣与安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影签署共建联合实验室框架协议联合实验室揭牌参观共建实验室及迈百瑞生产线　　安捷伦科技安蓉及迈百瑞姚雪静带领大家参观了共建实验室，并介绍了安捷伦的仪器应用。迈百瑞常务副总裁梁其斌带领大家参观了迈百瑞设施完备的无菌药物生产线，使大家对药物生产特别是ADC的生产流程增进了认识。　　烟台迈百瑞厂区坐落于在烟台海岸线旁边，紧邻大海，环境优雅。整个厂区使用的供暖等循环水都是打井地下水循环使用，也是响应环保的典范。双方答记者问　　在媒体采访环节，安捷伦科技和烟台迈百瑞回答了记者就双方合作实验室建成的有关问题。　　Instrument: 请问安老师，安捷伦科技的哪些产品已经用于联合实验室，将来会有那些产品逐步入驻?这些仪器将分别应用在药物研究的哪些层面?　　安捷伦科技安蓉：目前已经用在联合实验室的安捷伦设备包括1290 Infinity 2D超高效液相色谱、6530 四极杆-飞行时间串联质谱仪(Q-TOF)、1260 Infinity 液相色谱、1260 infinity 生物惰性液相系统、低热容(LTM)柱温箱以及毛细管电泳仪。接下来，安捷伦的气质联用仪和气相色谱会很快入驻，ICP-MS等仪器也会陆续应用于合作实验室。LC-MS和GC-MS以及ICP-MS等将会用于制剂包材药物相容性控制，LC和毛细管电泳等将用于QC层面表征等。　　Instrument: 请问赵总，这次与迈百瑞的合作应该是安捷伦科技六大战略领域中与诊断制药相关的一项，那么在其他几个领域是否也将与其他机构合作建立共建实验室?　　安捷伦科技赵影：安捷伦一直在寻找战略伙伴，前期已与上海交大药学院、中国药科大学等实验室有合作。现在和迈百瑞的合作，也是在寻求行业中的窗口。不仅在生物医疗方面，在其他战略领域也是如此。安捷伦要给客户提供真正意义上的整体解决方案，不仅针对仪器，也针对客户的应用需求，目的是为客户提供整体、特定的解决方案。与行业前沿的具体公司和实验室的合作，是对安捷伦的一种特殊技术补充。　　Instrument: 请问黄总，安捷伦和迈百瑞的合作将带来怎样的成果和收效?　　烟台迈百瑞药物研发中心副总裁黄长江：迈百瑞致力于研发药物分析手段，满足新的药物生产需求，是中国生物制药ADC研发生产的先驱。而安捷伦在生命科学仪器方面是佼佼者。安捷伦与迈百瑞的合作是一种一加一大于二的强强联手，即优秀的团队利用新的分析仪器研发新的检测方法。更新更好的药物分析方法将在我们的合作实验室中产生。编辑：郭浩楠

抗体偶联药物是指将具有高度靶向性的单克隆抗体，通过特定的一段连接片段，实现同具有细胞毒性抗肿瘤药物的偶联，从而将抗体的高度选择性与药物的抗肿瘤活性合二为一。2021年8月8日，荣昌生物与Seagen（SeagenInc. 纳斯达克：SGEN）达成一项全球独家许可协议，以开发和商业化其抗体偶联药物（ADC）维迪西妥单抗，9月22日，国家药品监督管理局（NMPA）药品审评中心（CDE）官网显示，荣昌生物（09995.HK）靶向Claudin18.2的抗体偶联药物（ADC）RC118获得临床试验默示许可，适应症为Claudin18.2表达阳性的局部晚期不可切除或转移性恶性实体瘤。国内研发实力增强，中国ADC药物研究大有可为，期待为患者造福。 目前在研的ADC药物见下表：ADC结构主要由靶向抗体，连接子linker以及高效价小分子细胞毒性药物。药物研究过程涉及到重要关键质量属性，包括药物/抗体比率DAR（drug-to-antibody ratio），药物荷载分布，未偶联抗体，残留药物，大小异质性以及电荷异质性，以关键的DAR研究为例，DAR表示与抗体偶联细胞毒性药物的平均数量，是ADC药物重要质量属性。现在研厂家的pepline DAR值有不同设计的缘由，低药物荷载时，ADC效力可能会降低或达不到要求，高药物荷载，可能会影响毒性以及代谢问题。表.ADC药物重要关键质量属性 对于ADC药物DAR值分析，推荐使用液相以及液相串联质谱方法分析。根据该指南要求，岛津推荐：Nexera生物惰性液相以及Nexera LC40液相 Nexera Bio生物兼容液相系统 岛津生物兼容液相Nexera Bio系统流路采用生物惰性材料，不仅耐腐蚀，而且能减少生物大分子的吸附，保证生物大分子的完整性，有效保障分析重复性和仪器耐用性。 Nexera Bio生物兼容液相系统特点：● 泵头、混合器、进样针、样品环和接头配件等均采用生物惰性材料，耐腐蚀、抗吸附；● 耐高压不锈钢包覆的Peek管路，提升系统耐压至66MPa；● 标配输液泵柱塞清洗蠕动泵，有效降低盐析，实现良好的送液稳定性，并防止泵头腐蚀。 Nexera LC-40 系列 Nexera系列HPLC与人工智能和物联网结合，实现智能化和自动化。融合“AI”和“loT”技术，轻松应对RNA类物质分析液相色谱仪。 ADC样品DAR值分析案例通过岛津液相以及HIC色谱柱可自动化分析得到DAR值计算报告。 更多内容了解或仪器配置应用了解，请联系岛津工作人员！ 参考文献：[1] Wagh A , Song H , Zeng M , et al. Challenges and new frontiers in analytical characterization of antibody-drug conjugates[J]. mAbs, 2018:0-0. 岛生物药， 津心为您

安捷伦携手迈百瑞共建前沿生物药研究暨抗体药物偶联物分析联合实验室 2015年6月18日，北京——安捷伦科技公司（纽约证交所：A）今日宣布，与烟台迈百瑞国际生物医药有限公司携手共建“迈百瑞国际生物医药—安捷伦科技前沿生物药研究暨抗体药物偶联物分析联合实验室”（以下简称“联合实验室”）。烟台迈百瑞国际生物医药有限公司常务副总裁梁其斌先生、烟台迈百瑞国际生物医药有限公司质量副总裁阮懋荣博士以及安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影女士等出席了揭牌仪式，共同见证双方为积极促进中国新药领域研究的里程碑时刻。烟台迈百瑞国际生物医药有限公司质量副总裁阮懋荣博士与安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影女士签署共建联合实验室框架协议 抗体偶联药物（Antibody Drug Conjugates，ADC）因其良好的靶向性及抗癌活性，已成为目前抗肿瘤抗体药物研发的新热点和重要趋势，并受到越来越多的关注。其开发涉及四个方面，包括药物靶点的筛选、重组抗体的制备、“连接物”技术开发以及高细胞毒性化合物的优化，其中任何一个环节出现问题，都会影响到ADC药物的安全性和有效性。目前，ADC药物开发的技术能力仍依赖于少数几个技术提供商。 该联合实验室是安捷伦科技在中国的第一间ADC分析领域前沿合作实验室，旨在以国际化视角和全球先进技术，建设先进生物药物分析测试平台，在完善工艺流程研究、ADC药物开发、提升科研质量的同时，紧跟国内外行业进展及客户需求，提供整体化解决方案，从而促进我国生物医药产业的可持续性发展。烟台迈百瑞国际生物医药有限公司质量副总裁阮懋荣博士与安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影女士共同为联合实验室揭牌 目前进驻联合实验室的安捷伦设备包括1290 Infinity 超高效液相色谱、6530 四极杆－飞行时 间串联质谱仪（Q-TOF）、1260 Infinity 液相色谱、1260 infinity 生物惰性液相系统、7890A GC 和低热容（LTM）柱温箱以及安捷伦毛细管电泳解决方案。其中，Agilent 1290 Infinity LC具有创新的设计，能够在确保极高准确度和精密度的同时，提供极高的灵活性和分析效率，满足用户从常规液相色谱，到超高效液相色谱各种不同分析要求。Agilent四极杆－飞行时间串联质谱仪（Q-TOF）集成了安捷伦三大核心创新技术——高精度飞行时间质谱技术、安捷伦喷射流离子聚焦技术以及强大的MassHunter工作站软件，是轮廓分析、结构表征和定量分析的理想平台。 烟台迈百瑞国际生物医药有限公司质量副总裁阮懋荣博士表示：“我们非常高兴能有机会与安捷伦这样全球领先的公司展开合作。迈百瑞一直致力于提供高质量的生物药物研发和GMP生产一站式外包服务，满足客户研发和GMP生产需求，加快生物药物的研发速度。此次与安捷伦合作成立的联合实验室，将为迈百瑞在国际ADC药物研发/生产舞台竞争中取得领先地位奠定坚实的基础。” 安捷伦科技大中华区生命科学事业部业务总监赵影女士表示：“安捷伦致力于为制药/生物制药行业客户提供创新高效的解决方案和技术支持。在ADC这一生物制药前沿的领域，安捷伦凭借其优异的仪器性能和完善的技术支持服务赢得了制药/生物制药客户的认可。在本次与迈百瑞的合作中，安捷伦不仅提供客户理化分析、结构表征相关的仪器平台，更是与客户紧密沟通，应对客户需求和行业动态快速响应，积极开发相应的整体解决方案。” 作为全球生命科学市场的领导者以及领先的实验室合作伙伴，安捷伦近年来一直致力于针对生物制药市场和客户需求，提供高通量、准确、耐用的仪器平台、分析方法和解决方案。随着“十三五”重大新药创制中提出重点支持生物药开发创新，生物制药市场发展势头强劲，安捷伦也会继续在生物药物质量控制领域继续提供仪器平台和售后支持，协助广大制药用户以更快的速度、更低的成本将高质量的药物带入市场。关于迈百瑞 烟台迈百瑞国际生物医药有限公司成立于2013年6月25日，是一家面向全球生物制药公司、生物技术公司提供符合欧美标准的临床样品及生物药品的研发、生产合作服务的生物医药公司。了解关于迈百瑞的详细信息，请访问http://www.mabplex.com/index。 关于安捷伦科技 安捷伦科技公司（纽约证交所：A）是全球生命科学、诊断和应用市场的领导者，同时也是领先的实验室合作伙伴，致力于与客户共同缔造美好世界。安捷伦为全球100多个国家的客户提供先进的仪器、软件、服务和耗材，产品覆盖整个实验室的工作流程。2014财年，安捷伦的收入达到40亿美元。公司在全球拥有12,000 名员工。今年是安捷伦进军分析仪器领域的50周年纪念。了解关于安捷伦的详细信息，请访问www.agilent.com.cn。 编者注：更多有关安捷伦科技公司的技术、企业社会责任和行政新闻，请访问安捷伦新闻网站：www.agilent.com.cn/go/news。

英国Randox-lifescience公司生产药物残留检测单克隆和多克隆抗体，ELISA试剂盒，以及偶联BSA/BTG蛋白抗原，主要产品有：抗生素（磺胺喹恶啉、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、氯霉素、喹诺酮类药物），呋喃唑酮代谢物（AOZ、AMOZ、SEM、AHD），&beta -兴奋剂类（克伦特罗、莱克多巴胺），雌激素（玉米赤霉烯醇、沙丁胺醇）等。

抗体偶联药物（antibody-drug conjugate，ADC）是一类通过特定的连接子将靶向单克隆抗体与高杀伤性的细胞毒性小分子药物偶联起来的生物药，以单克隆抗体为载体将小分子细胞毒性药物高效地运输至目标肿瘤细胞中，起到治疗的目的。与传统抗体药相比，ADC药物的结构复杂度和异质性更高，因为添加了多变的有效载荷和连接子1。为确保药物安全性和有效性，ADC的深度表征在其开发过程中至关重要。这不仅包括对mAb的翻译后修饰（PTM）的鉴定和定位，还包括药物偶联的鉴定。由于质谱技术的飞速发展，质谱已经成为ADC药物表征中最广泛使用的方法。完整质量分析是用于确定小分子药物与抗体比率（DAR）的常规方法，而对结合位点的深入表征，通常依赖于bottom-up的方法。现在最广泛采用的碰撞诱导解离（CID）技术能够提供氨基酸序列确认，但是这种能量比较大的碎裂技术也将有效载荷碎裂为更小的片段，从这种方法获得的高度复杂的谱图可能很难解析。而能量更柔和的碎裂方法可以促进此类复杂样品的解析，一种基于电子活化裂解（EAD）2,3的创新、高度可重复的碎裂方法用于分析来自商业化ADC药物的偶联肽。使用10 Hz快速非靶向的数据依赖采集（DDA）方法采集数据，通过此工作流程，一次进样就可以应用基于EAD的碎片进行常规和高级表征。曲妥珠单抗美坦新偶联物（T-DM1）是最早的ADC治疗药物之一，于2013年获得FDA批准用于治疗人表皮生长因子受体2（HER2）阳性转移性乳腺癌。T-DM1是由单克隆抗体曲妥珠单抗和细胞毒素美坦新（DM1）通过不可裂解连接子共价偶联而成（图1）。将单克隆抗体（mAb）的靶标特异性与细胞毒性药物的高效率相结合，可充分利用两个方面的优势，最大限度地减少副作用3。T-DM1是与氨基连接，如连接在曲妥珠单抗的赖氨酸残基的侧链中。先前的完整质量研究表明，T-DM1的平均DAR约为3.5.1,4。但是曲妥珠单抗中有88个赖氨酸残基和4个N端基团，可能会出现450万个以上的不同分子形式1。有效载荷的位点和结构将直接影响药物的功效和安全性，因此将其归类为关键质量属性（CQA），并且需要在开发过程中进行全面表征和严格监控。图1. 细胞毒药物有效载荷和连接子与mAb偶联的示意图。T-DM1由DM1（黑色），靶向连接氨基残基的MCC连接子（linker，蓝色）和单克隆抗体组成。本研究选择了与Zeno&trade EAD相结合的DDA方法。采用这种方法，不仅可以执行常规的肽图分析，而且EAD可以在同一针分析中进行高级表征。此外，Zeno EAD增强了碎片离子的检测能力，从而正确鉴定了低丰度物质。图2展示了在偶联肽SCDK [DM1]THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK上观察到的碎裂模式的例子。在分析中未观察到没有连接子和药物或其部分的肽，表明其完全偶联。获得了此肽段高质量的MS / MS谱图，从而使该特定肽段的MS / MS序列覆盖率达到96.6％。一个更占优势的碎片从 m/z大于500的有效载荷产生（请见图2中的标记）。观察到的有效载荷结构的主要裂解位点是DM1的COO-C键，这种碎裂模式与先前利用CID技术产生的一系列小碎片的数据不同1。较大分子量的药物碎片可以用作特征碎片，以更具体地确认有效载荷的存在，并可以用来确认有效载荷的结构。图2. 应用Zeno EAD得到的偶联肽SCDK [DM1] THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK（z =+4）的碎片数据。来自肽段主链指定偶联肽段离子的全扫描MS / MS数据，以及有效载荷中的碎离子信息。此外，通过将Zeno EAD技术用于增强的碎片离子检测，还可以很好地检测到来自肽段主链的片段信息，从而提供有关肽段的分子完整性的信息。由于酶的空间位阻，抗体上偶联药物的存在会导致样品制备酶解过程中的更多漏切位点。另外，赖氨酸残基和有效载荷之间的结合过程是随机反应，偶联的比率并不总是100％，这导致了多样性和低丰度物质存在。当一个肽段中存在多个潜在连接形式时，鉴定正确的连接位点可能是一个挑战。肽段ASQDVNTAVAWYQQKPGKAPK是这种具有挑战性的另一个例子（图3）。它包含一个漏切位点和一个脯氨酸相邻的N端赖氨酸，导致偶联位点的多种选择。但是，有了从EAD技术碎裂得到丰富、高质量的MS / MS质谱图，就可以实现药物定位的自动匹配（图3A）。由于有效载荷靠近肽的C端，因此检测到的C离子比Z离子丰富（图3A），而未结合的肽显示出来自C端和N端的丰富片段（图3B）。众所周知因为电子活化解离技术不会解离脯氨酸的N端，我们还检测到了除了C15以外的从C3到C17的全系列C片段7。这提供了确凿的证据表明K15未与细胞毒药物偶联。此外，z4，z5和z7表明K18（而非K21）是药物偶联的正确位点。图3. 应用Zeno EAD得到的来自偶联/非偶联肽ASQDVNTAVAWYQQKPGK [DM1] APK（z =+3）的碎片的数据。A：来自肽段主链指定偶联肽段离子的全扫描MS / MS数据，以及有效载荷中的碎离子信息。B：来自肽段主链指定非偶联肽的全扫描MS / MS数据。 连接子显示为蓝色，DM1药物显示为黑色。结论：通过EAD的新型碎裂模式，实现了具有多个潜在位点的多肽中药物偶联的准确定位与传统的MS / MS分析相比，EAD技术获得更丰富的MS/MS碎片信息。应用Zeno EAD技术，即使对于中等强度或极低强度的母离子（例如低丰度的偶联肽），也能获得令人信服的二级碎片和出色的数据质量SCIEX ZenoTOF&trade 7600系统强大、高重现性且易于使用的多重碎裂技术，使用户能够以简单的方式解决具有挑战性的分析问题(CN)Characterization of an antibody-drug-conjugate (ADC) using electron activated dissociation (EAD).PDF点击下载声明：版权为 SCIEX 所有。欢迎个人转发分享。其他任何媒体、网站如需转载或引用本网版权所有内容须获得授权, 转载时须注明「来源：SCIEX」。申请授权转载请在该文章下“写留言”。

治疗性单克隆抗体药物已经成为生物制药中增长最快的领域，国外近百亿美元销售额的单抗药物将在未来几年中专利保护陆续到期，引发了全球制药行业的一轮热潮。同时新型ADC（抗体药物偶联物，Antibody-Drug Conjugate）的研究开发也得到了广泛关注。 与小分子药物相比，抗体的结构复杂且天生具有&ldquo 非均一性（Heterogeneity）&rdquo 特点，分子本身的某些微小变化如糖基化修饰或者三维结构改变对药物活性和免疫原性有很大影响，因此法规监管机构要求将理化分析表征作为抗体质量研究的基础，其中LC/MS是非常关键的分析平台；另一方面，对于抗体药物代谢研究，LC/MS以其特有的专属性和高效率也得到了更多的关注。 本次网络研讨会将以抗体药物结构分析和表征为主线，通过具体的抗体药物分析表征应用案例介绍Waters公司基于UNIFI信息学平台的方案和工作流程如何帮助生物制药企业满足法规监管机构日益严格的要求，从控制仪器、采集数据到数据处理和生成报告，所有环节在一个软件平台自动完成。 讲座主要内容：1、中国发展抗体药物的市场机遇；2、LC/MS技术在抗体药物分析表征上和比较性研究上的应用进展；主讲人：陈曦，实验中心经理，沃特世科技（上海）有限公司。陈熙博士在生物大分子药物分析研究方面有丰富的实战经验，进行过多个抗体分子的分析表征研究。目前，陈博士是沃特世科技（上海）有限公司生物制药应用部经理，负责生物大分子应用开发团队，以及为生物制药领域的客户提供应用支持。陈博士于美国Clark University获得博士学位，博士期间主要研究方向为蛋白质化学，其中包括用液质连用技术进行双硫键的定性研究；在国内就读于北京大学。陈博士已经发表了多篇LC/MS应用文章。讲座视频链接：http://www.waters.com/waters/library.htm?locale=zh_CN&lid=134769227&cid=511436

2014年3月10-11日，GE医疗生命科学部出席在厦门日航酒店召开的2014（第四届）抗体药物及新药研发高峰会，并推出抗体药物质量分析与过程控制的整体解决方案。会议期间，GE医疗生命科学部的技术人员与来自抗体药物研究开发、工业生产与质量控制，以及抗体药物临床研究领域的专家和业界相关人士，共同探讨生产质控和临床开发的热点话题，并在当前抗体药物及生物类似药市场蓬勃发展的大气候下，分享抗体药物新趋势，以迎接行业挑战与机遇。 此次，GE医疗生命科学部展示了旗下全面、成熟的整体解决方案，涵盖从抗体研发、生产放大直至产品分析的完整工业流程。随着近年来国内质量法规的日渐升级完善，大量在研新药和仿制药进入临床前和临床阶段，抗体药物的临床安全性评价和生产环节质量控制日益受到重视。尤其对于抗体等生物治疗性药物，其复杂的药物结构和多步的生产流程，更容易导致最终产品在质量、药效甚至安全性方面的差异。因此，采用最先进的技术（State-of-art techniques）对临床阶段的免疫原性进行全面筛查表征，对工艺流程中抗体产品的关键的质量属性（Quality Attributes）进行实时监测和控制的理念逐渐被行业认可和应用。因而在此次峰会上，GE更着重介绍了针对抗体药物质量分析和过程控制的解决方案。 来自GE医疗生命科学部的Biacore产品经理蔡河做了“Biacore技术在抗体药物质量控制与安全性评价环节的应用与进展”的主题报告，详尽地介绍了GE非标记生物物理分析技术，特别是Biacore技术的价值与应用，包括无需标准曲线的抗体活性浓度定量技术（CFCA）、生物活性分析（FcR, C1q）、临床免疫原性、ADA筛查和表征等。尽管众多的研究者和业内专家对包括Biacore在内的GE非标记分析技术在抗体的药物靶点发现与确认、抗体筛选、动力学表征等前期开发领域的标杆应用早有认可，此次还是对其延展的强大的质量分析和安全性评价的技术价值和产品应用表示出了极大的兴趣。另外，随着近几年国内生物类似物（生物仿制药）市场不断加温，GE的非标记生物物理技术也一定会在生物类似药的head-to-head的一致性分析方面发挥不可替代的作用。 本次峰会还对近几年抗体药物研发的新热点，如ADC（抗体-药物偶联物）、双特异性抗体、抗体药物的临床试验等具体策略和问题展开了深入的探讨；在专场访谈中对于抗体研发的合作模式，法规和质量要求，以及如何更有效的开展生物制品的临床试验进行了开放式的讨论。 GE医疗生命科学部作为在抗体和生物制药领域的领先供应商，期望借其抗体研发、生产到分析平台，以及包含企业整体化解决方案在内的先进技术和理念，共同推动国内抗体和生物制药的进步和发展。

在生物药众多的品类中，抗体药物是当前最大的治疗用生物剂类别，单克隆抗体是研发最早、研究最为深入的抗体药，具有较高的安全性与有效性。近年来随着单抗药物各个靶点不断进入红海竞争状态，双抗项目研发日渐火热。双特异性抗体药物（简称“双抗”）是新型的二代抗体，拥有两种特异性抗原结合位点，可以同时与靶细胞和功能细胞相互作用，进而增强对靶细胞的杀伤。与但双抗药物开发复杂性和技术壁垒更高，对于技术平台和靶点选择的适配性要求也有所提高。抗体-药物偶联物（ADC）是通过化学反应，把传统的小分子抗癌药物与重组单克隆抗体（mAb）分子通过连接分子结合，所形成的新分子。抗体工程在10年间也已经取得了相当大的进展，允许更多的位点特异性偶联，提高了ADC的均一性和稳定性。新的第二代和第三代ADC已经进入临床，以期获得更好的治疗效果和安全性。几十种基于半胱氨酸残基、非天然氨基酸或分子工程模式的生物偶联技术也已经在临床前研究获得了验证。此外，更多的肿瘤特异性抗原靶点和肿瘤内细胞毒性药物的释放机制使ADC获得了爆炸式的发展，ADC药物进入了黄金时代。为促进我国抗体药物产业持续快速发展，仪器信息网将于2022年9月14日-15日举办第五届“抗体药物研发与质量分析”主题网络研讨会，特别邀请二十余位多位业内研发专家、质量控制专家，对当前抗体药领域研究热点双抗、ADC相关研发、分析技术开发、质量研究、CMC开发、生命周期管理等广受关注的内容进行精彩分享，欢迎广大相关从业人员免费报参会！点击图片报名参会大会亮点一、专家阵容：恒瑞、信达、复宏汉霖等国内知名生物医药企业总经理、高级副总裁、研发总监、质量控制总监等大咖阵容二、热点内容：双抗、ADC药物研发策略和案例分享、 质量研究、质谱、色谱分析方法解析、 CMC开发、全生命周期管理考量和经验分享3、 参会人员专业、垂直：制药企业、CRO/CDMO、生物技术公司、政府主管部门、药检机构、科研院所免费报名链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/antibodydrug2022/大会日程时间 Time报告题目Topic演讲嘉宾The Speakers抗体药物研发（上）(09月14日)9:00聚焦热点——ADC药物张娟(中国药科大学 教授)9:30更新中锐欧森中国10:00双特异抗体生物学活性分析方法的开发易继祖(友芝友生物 高级副总裁)10:30心血管代谢系统的抗体新药研发张成(鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 高级副总裁和首席科学官)11:00肿瘤免疫新药研发策略赵永浩(江苏康宁杰瑞生物制药有限公司 研发总监)抗体药物研发（下）-双抗、ADC药物(09月14日)13:30ADC研发进展与挑战陶维康(恒瑞医药股份有限公司 副总经理)14:00自动化时代下聚焦细胞株开发的自动化解决方案刘达潍(贝克曼库尔特生命科学 自动化应用专家)14:30高通量分析技术助力双抗新药开发探讨谢红伟(信达生物制药集团 产品开发部副总裁)15:00更新中SCIEX中国()15:30抗体偶联药物的CMC研发挑战及策略黄鹏(东曜药业有限公司 ADC研发负责人)16:00创新全人双抗设计/筛选及双靶点ADC新药开发案例杨勇飞(百奥赛图（北京）医药科技股份有限公司 新药研究院 总监)抗体药物分析与质量控制(09月15日)9:00抗体药物的质量研究策略及质控标准建立黄懿(上海探实生物科技有限公司 总经理)9:30更新中多宁()10:00复杂蛋白质药物体系异质性的质谱解析王冠博(北京大学生物医学前沿创新中心 研究员)10:30线性pH梯度分析单克隆抗体变体的创新技术李国荣(苏州科技大学 兼职教授)11:00高通量质谱用于抗体药物的结构表征卢颖洪(南京理工大学 副教授)抗体药物后期工艺开发和商业化生产(09月15日)13:30质量研究对抗体药物CMC研发关键节点的把控吕品(上海博威生物医药有限公司 质量分析部/执行总监)14:00基于cIEF-MS联用技术的抗体药物电荷异质性分析解决方案张为(永道致远科学技术有限公司 应用科学家)14:30抗体药物工作参比品的全生命周期管理李镭(浙江博锐生物制药有限公司 研发质量副总监)15:00抗体药后期CMC开发和商业化郭文晖(KKH Consultant LLC Principal Consultant)15:30全生命周期管理下生物药技术转移考量李孟捷(三生制药集团 质量 商务负责人 高级工程师)16:30抗体委托生产期间委托方和受托方的质量责任李醒(杭州奕安济世生物药业有限公司 QA执行总监)免费报名链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/antibodydrug2022/ 专家阵容（更新中）第五届抗体药物会议交流群

为促进我国生物医药产业持续快速发展，仪器信息网将于2023年3月29日-2023年3月31日举办第四届“生物制药研发及质量控制” 网络大会，内容覆盖抗体/蛋白药物、细胞与基因治疗、多肽药物、核酸药物/mRNA疫苗，涉及生物药开发、质量控制、制剂的分析表征以及自动化等创新技术在生物制药领域的应用。抗体药物是现代生物医药产业的主力军,是生物医药产业增长最快的细分领域。我国抗体药物产业起步晚，抗体药发展水平相较于国际还有较大差距。近几年，国内抗体药物市场得到了快速的发展，但在抗体结构设计、新药临床前研究与安全评价、工艺和质量稳定性等方面仍存在诸多挑战。本次生物制药大会特别设置抗体/蛋白药物会场，邀请到14位来自生物制药企业和仪器技术企业的行业专家，报告内容涉及抗体和蛋白药电荷异质性的分析表征、分子模拟和人工智能研究抗体/蛋白药物研发的应用、高分辨质谱在ADC及抗体药研发质量分析中的应用、生物药的非临床安全性评价、提高生物药CMC效率，点击下方图片即可免费报名。点击图片免费报名报告嘉宾（部分）详情如下：潘利强 院长助理/研究员 浙江大学药学院报告：定向进化西妥昔单抗克服EGFR胞外区耐药点突变 报名占位潘利强博士，浙江大学药学院院长助理、百人计划研究员，博士生导师。兼任浙江大学附属第一医院院长助理（2020-2021，双专计划）、兼聘教授。国家高层次青年人才、浙江省海外高层次引进人才、浙江省钱江人才等；入选 2021 年《麻省理工科技评论》“35 岁以下科技创新 35 人”亚太区（Asia Pacific）榜单。 现为浙江省药学会理事、生物制药专委会副主任委员等，以及 Signal Transduction and Targeted Therapy、Frontiers in Pharmacology等国际知名期刊编委、专刊副主编等。十多年来专注于抗肿瘤生物药物研究，在Cell、Nature communications等国际知名期刊上发表SCI论文20余篇，授权创新生物药中国发明专利9项、国际专利8项，其中10项专利已转让。谢红伟 产品开发部副总裁 信达生物制药集团报告题目：抗体和蛋白药电荷异质性的分析表征 报名占位 谢红伟，现为信达生物产品开发部副总裁。都柏林大学博士，生物药分析表征和抗体产品开发专家，在美国和中国从事药物分析和蛋白药开发表征20多年。对QbD生物药研发和单抗、双抗、ADC产品关键质量属性CQA分析和质量控制有一定造诣。参加过多个单抗产品的上市（NDA/BLA/MAA）申报和超过30个抗体产品的临床（IND/IMPD）申报，在mAbs和Analytical Chemistry等国内外专业杂志发表学术论文50多篇，应邀在国内外行业会议口头报告50多次.刘翠华 SVP百奥泰生物制药股份有限公司报告：如何提高生物技术药物CMC的效率？ 报名占位刘翠华博士现任百奥泰生物制药股份有限公司的高级副总裁，负责产品管线CMC相关技术开发工作。刘博士有20余年的美中生物制药工业经验，先后在美国的Pfizer和前Momenta现J&J，和中国的百迈博、华海、康宁杰瑞、海普瑞任职，作用从技术带领的首席科学家到高级执行管理。她富有国际环境下的研发体系建设和项目管理经验，为多家生物医药业务和管理做了国际化战略策划。她带领管理了50余个复杂生化混合物和生物制品的CMC从早期到产业化不同阶段的开发，其中多个产品成功获得在欧美/中国上市许可。共发表30余篇国际论文和15余项专利。获加拿大西安大略大学生物物理化学博士和美国麻州大学Amherst分校遗传结构生物学博士后。马步勇 教授 上海交通大学药学院报告：分子模拟和人工智能研究抗体/蛋白药物研发的应用 报名占位国家二级教授，分子生物学博士、药理学博士后，黑龙江省“龙江学者”特聘教授、黑龙江省“头雁计划”成员、日本新瀉大学客座教授、黑龙江省杰出青年基金获得者、黑龙江省“五四青年”奖章获得者、黑龙江省政府特殊津贴专家。中国生物化学与分子生物学会常务理事、生物化学与分子生物学技术委员会副秘书长、核糖核酸专业委员会理事、中国生物化学与分子生物学会教学工作委员会常务理事。黑龙江省遗传改变模式动物重点实验室主任，哈尔滨医科大学转基因动物与转基因动物制药中心主任。l 师从2009年诺贝尔奖候选人山本雅之教授；近30年分子生物学、遗传改变模式动物及生物制药研发经验；l 15年打造基因编辑、转染色体及抗体研发技术平台与团队，开发30余种有自主知识产权的转基因小鼠；l 国内首例微小RNA转基因小鼠、国际首例微小RNA敲减小鼠模型；l 国内首批成果利用CRISPR技术在体基因编辑；l 利用“转染色体全人源抗体小鼠”进行创新型抗体研发，已建立多条产品研发管线，成药性数据获业内广泛认可。高旭 教授 哈尔滨医科大学报告：基于转染色体小鼠平台的全人源抗体研发 报名占位国家二级教授，分子生物学博士、药理学博士后，黑龙江省“龙江学者”特聘教授、黑龙江省“头雁计划”成员、日本新瀉大学客座教授、黑龙江省杰出青年基金获得者、黑龙江省“五四青年”奖章获得者、黑龙江省政府特殊津贴专家。中国生物化学与分子生物学会常务理事、生物化学与分子生物学技术委员会副秘书长、核糖核酸专业委员会理事、中国生物化学与分子生物学会教学工作委员会常务理事。黑龙江省遗传改变模式动物重点实验室主任，哈尔滨医科大学转基因动物与转基因动物制药中心主任。l 师从2009年诺贝尔奖候选人山本雅之教授；近30年分子生物学、遗传改变模式动物及生物制药研发经验；l 15年打造基因编辑、转染色体及抗体研发技术平台与团队，开发30余种有自主知识产权的转基因小鼠；l 国内首例微小RNA转基因小鼠、国际首例微小RNA敲减小鼠模型；l 国内首批成果利用CRISPR技术在体基因编辑；l 利用“转染色体全人源抗体小鼠”进行创新型抗体研发，已建立多条产品研发管线，成药性数据获业内广泛认可。胡怀忠 转化医学与临床研究高级副总裁 成都维瑾柏鳌生物医药科技有限公司报告：免疫毒素蛋白开发和临床研究 报名占位胡怀忠教授在医药领域拥有26年药物发现、早期开发和临床转化经验，完成了120名项毒理学GLP研究，3个项目获得FDA批准上市:创建了多种针对肿瘤、自身免疫性疾病和器官移植等动物模型，结合临床前药理学和生物标志物结果制定药物临床开发策略，科学合理地指导临床开发和剂量扩展设计。历任科文斯毒理学家和临床前开发总监，在北京康辰药业研究院院长，荷兰Utrecht大学免疫学博士，华西医科大学医学博士， 美国NIH博士后研究员 ，美国认证毒理学家。贺全仁 高级副总裁/药理学与毒理学 艾博生物科技有限公司报告：生物药的非临床安全性评价 报名占位贺全仁 博士在多家安评中心和国内外新药研发企业负责非临床新药研发工作，是美国毒理学理事会认证的毒理学家(Diplomate, American Board of Toxicology, DABT)。加入艾博生物之前任复宏汉霖研发项目管理与毒理学部副总经理，负责支持新药临床试验和新药上市申请的非临床研究和项目管理。曾任天境生物临床前研究副总裁；昭衍新药研究中心机构副主任和国际毒理部主任；苏州药明康德新药开发有限公司毒理学高级主任和项目负责人。在美国曾任Biothera公司药理学和毒理学主任，CyDex毒理学和医学事务主任。贺博士有丰富的包括小分子、大分子的新药非临床安全性评价以及与美国FDA、欧盟、韩国和中国药品监管部门沟通经验。为其所服务的公司和客户成功申报了数十个IND/NDA项目。王云鹏 GPC&光散射高级专家、产品经理 东曹（上海）生物科技有限公司报告：东曹多角度光散射检测器LenS3在生物大分子表征中的应用 报名占位 王云鹏，毕业于复旦大学高分子科学系，博士学位。现为东曹（上海）生物科技有限公司GPC&光散射高级专家、产品经理，专注于聚合物的分析与表征。薄涛 市场总监 艾易尔斯 （AES ）生物科技有限公司报告：全柱成像毛细管等点聚焦技术 （icIEF）表征蛋白电荷异质性的最近进展：质谱联用、馏分制备和高分辨分离 报名占位薄涛于2003年在北京大学化学与分子工程学院获得分析化学博士学位，在2003-2007年在芬兰、加拿大和比利时做色谱与质谱的研究工作。2007年回国后长期致力于仪器分析的技术支持和市场推广，现任艾易尔斯 （AES ）生物科技有限公司市场总监。刘达潍 自动化应用专家 贝克曼库尔特生命科学报告：自动化时代下的抗体药物研发方案 报名占位就职于贝克曼库尔特生命科学市场部，主要从事于自动化整合系统以及移液工作站等产品线的应用以及市场工作。在多家头部生命科学仪器公司工作期间，曾参与搭建国内多套千万级生命科学自动化整合项目，覆盖生物药，IVD以及NGS等多个应用领域，有着丰富的高通量设备整合经验。致力于为制药，医疗及生物技术等领域客户提供优质可靠的自动化解决方案。闫凌 大分子应用团队高级应用工程师 赛默飞生命科学质谱应用团队报告：高分辨质谱在ADC及抗体药研发质量分析中的应用 报名占位 博士，毕业于复旦大学分析化学专业，期间主要进行蛋白质组学的相关研究，博士毕业后开始进行生物制药行业的技术支持，在生物分析领域有近十四年的科研及应用与技术支持经验。陈凌声 应用工程师 SCIEX报告：多重碎裂质谱ZenoTOF ™ 7600系统在生物药表征中的应用 报名占位北京蛋白质组研究中心、广西大学联合培养博士。目前担任SCIEX中国应用支持中心应用工程师，主要负责蛋白质组学及生物制药等相关领域的应用支持工作。点击报名：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/biopharma2023/扫码进入会议交流群

会议背景:近年来, 抗体药物及基于抗体的治疗药物已经逐步成为最重要的生物制品并且进入到黄金发展时期. 截止至2021年4月, 美国药品监管单位批准上市的抗体药物数量已经达到100款. 2015年治疗性抗体药物的市场达到了854亿美元, 预计到2024年将达到1386亿美元. 与此同时, 中国生物制药产业在过去些年中得到了快速的发展, 工艺技术, 设备及生产能力也日趋成熟. 随着早些年针对于生物类似物的开发, 中国生物技术公司也逐渐专注于创新性抗体药物及生物制品的研究与开发. 随着抗体发现技术和方法的成熟, 抗体药物研发也呈现越来越多样性, 包括抗体偶联药物, 双特异性与多特异性抗体，纳米抗体等其他形式治疗药物正在不断增加。有鉴于此, 第四届抗体药物开发暨生物工艺技术论坛(ATBP2021), 旨在加强交流与合作, 深入探讨抗体及治疗性生物制品研究, 分析表征与工艺开发技术.会议信息:会议时间: 2021年10月26-27日会议地点: 中国上海筹办单位: 迪易咨询 Deliver Life Sciences会议网址: www.abbforum.com/cn合作媒体: 生物器材网, 生物探索, 仪器信息网, 生物药CMC会议主要专题：抗体药物开发论坛2021Antibody-based Therapeutics Forum 2021- 治疗性抗体与生物制品最新发展趋势- 抗体药物偶联物开发: 进展与前沿技术- 双特异性抗体开发与技术: 策略, 考量与难点- 抗体药物研发, 抗体工程与可开发性评估- 创新抗体与下一代抗体药物开发- 抗体药物临床前开发考量与策略- 生物制品分析与表征策略生物工艺论坛2021 BioProduction Forum 2021- 生物工艺前沿技术, 创新与生产策略- 质量控制, 临床与商业化生产策略- 细胞株开发技术: 速度, 滴度与产品质量策略- 上游与下游工艺技术进展, 病毒安全- 生物技术产品的连续工艺- 生物制剂, 蛋白聚集及稳定性试验- 生物制造数字化转型与新兴生产技术部分早期确认演讲/主持嘉宾： (右侧标注' +' 表明此发言人将进行远程演讲)议程概览:会议注册:-中国国内单位-单位类别早期注册 (8月15日前)标准价格 (8月15日后)学术及生物制药单位RMB 2,200RMB 2,800标准注册RMB 3,200RMB 3,800* 生物制药单位是指从事生物制品研究, 开发与制造的企业(需含内部产品开发管线)* 费用包含会议资料, 午宴, 茶歇及相关税金限量免费注册 [限特定单位类型与职位] ：本次会议采用实名注册登记制, 并对来自生物制药研制单位 (需含内部产品开发管线), 法规单位, 从事抗体药物/治疗性生物制品研究, 产品开发与项目管理, 分析与表征科学, 生物工艺研究, 生产与质量控制, 等相关专业人士提供限量免费参会名额. 通过微信朋友圈分享此信息可获取. 请符合条件的, 请先扫描以下二维码填写相关报名信息 (请使用单位邮箱填写). 组委会将根据填报信息进行甄选与联系. (报名成功者将收到来自组委会的确认信息)填写须知:- 免费名额有限, 对符合条件的报名者, 将依据填报的顺序进行联系与确认, 额满即止。- 微信分享至朋友圈应至少保留一天- 免费名额包含会议资料, 但参会者需自行安排会议所产生的差旅与会议期间用餐.- 免费名额需实名签到- 组委会对此免费注册具有解释权, 并有权对此活动的适用条款进行适当调整.* 请留意组委会将根据填报的信息, 依据相关性与适用性进行核对, 并对您提交的免费注册申请保留接受或拒绝的权利. Please kindly note the committee reserves the rights to accept/decline your free registration after careful review on the submitted details in terms of relevance and eligibility.海报征集 (注册参会嘉宾免费享有此项权益)：此次论坛将提供海报演讲机会来推广贵司最新产品, 技术及服务在抗体药物研发, 表征与分析技术, 以及工艺开发, 生产质控中的应用. 海报提交指南- 海报标准尺寸为A0- 海报发言人需提会议前1周将电子版海报发送组委会进行统一打印- 截止日期为: 2021年10月15日会议合作与联系：组委会致力于根据合作方的需求量身制作合适的参与方案。此次峰会提供多种形式的赞助方案以确保合作单位的成功参与。支持此次抗体药物开发暨生物工艺技术论坛2021将是一次难得及有效的机会，面向您的目标客户群体来推广和巩固贵司最新产品及技术服务, 从而提高抗体药物/生物制品研发与工艺研究效率。早期确认可以使您得到更好的宣传, 包括广告,电子邮件, 媒体宣传等, 使得您在会议前作为会议的主要合作方得到最大程度的推广。有关议程与更多信息，请联系:会议演讲, 内容及合作张经理 Wei Zhang项目经理邮箱: wzhang@deliver-consulting.com 电话: 021-6034-0229微信: wei_zhang_2016参会, 展览展示及支持机会(单位首字母 A-N)张经理 Wei Zhang项目经理邮箱: wzhang@deliver-consulting.com 电话: 021-6034-0229微信: wei_zhang_2016(单位首字母 O-Z)徐经理 David Xu邮箱: david.xu@deliver-consulting.com 电话：137-7629-3901 微信同媒体合作 Michelle Wang邮箱: michelle.wang@deliver-consulting.com 电话：86-21-6034-0229关于我们：迪易咨询是一家专注并服务于亚太生物制药及生命科学领域的信息咨询及品牌性会议运营单位. 我们着眼于最新的法规要求, 产业发展趋势, 科学发现及技术更新 通过与领先的国际行业协会, 政府监管单位, 学术及生物制药产业界的关键意见领袖及顾问, 建立长期及紧密的合作及联系, 我们策划并推广具有影响力及品牌性的国际会议, 论坛, 公共培训及相关咨询服务, 主要涵盖了药物的早期发现, 临床研究, 抗体药物, 疫苗制品，细胞与基因治疗产品，生物工艺开发等。

抗体药物是生物药物中最重要的组成之一，约占全球生物药市场五成，也是全球生物技术领域产业化最为成功的产品。抗体药物是以基因工程、细胞工程、发酵工程为工艺研发的生物技术药物，主要分三类：单克隆抗体药、多克隆抗体药与基因工程抗体药物；基因工程抗体药物包含源化改造抗体药物（嵌合抗体、人源化及完全人源化抗体）与小分子抗体药物（单链抗体、双特异性抗体、纳米抗体及人源Fab片段）。抗体药物因抗体药物与靶抗原结合具有高特异性、有效性和安全性，在恶性肿瘤、自身免疫疾病等重大疾病的临床治疗中发挥着越来越重要的作用。虽然我国抗体药物产业起步相对较晚，但近几年，中国抗体药物研发进入快车道。据了解，目前国内进行抗体药物研发的企业有百余家，上市的抗体药物达27个，此外还有数百个抗体药物正处于研发阶段，在研药物包括单抗、双抗和ADC药物等多种类抗体药。随着抗体药物产业的不断发展，研发、质量分析和生产等各个环节的技术方法和工艺等也在不断创新发展，从业人员需要及时了解相关进展，以便更好地开展工作。2021年9月14-16日，仪器信息网将举办第四届“抗体药物研发与质量分析”网络会议，聚焦抗体药物从研发到生产全流程的技术和方法，为行业从业人员提供免费、高效的学习交流平台。点击下图，可免费报名参会。点击图片免费报名会议看点• 设“单抗药物研发”、“双抗、ADC药物研发”、“抗体药物质量控制”、“抗体药物生物工艺”等多个主题会场，内容涉及单抗、双抗、ADC多类型抗体药、覆盖抗体药物研发生产全流程；• 30位专家参与，多位国内知名抗体药物企业（信达、奕安济世、武汉友芝友、亿一生物）高管和技术负责人结合实际案例详述研发进展与关键技术，可在线与大咖互动交流（对于社恐症人士更是绝对福利~）• 企业结合科研人员的知识盛宴，多位高校科研专家进行技术讲解，未来意向从事抗体药物事业的学生党不可错过！• 更多会议亮点，报名了解。扫码免费报名参会会议日程分会场一（9月14日上午）：单抗药物研发时间报告主题报告嘉宾9：00-9：30特异性靶向CLDN6的卵巢癌治疗抗体袁纪军上海吉凯基因 副总经理9：30-10:00数字化转型助力生物制药研发与数据合规黄皓珀金埃尔默 信息科学业务部售前总监10:00-10:30基于抗体分子的创新药物研究张娟中国药科大学 教授10:30-11:00自动化移液工作站在生物大分子药物研发领域的主要应用刘健德国耶拿 生命科学部移液工作站产品经理11:00-11:30基于精准医学大数据的新药研发和伴随诊断楼敬伟宝藤生物 董事长兼总裁分会场二（9月14日下午）：双抗、ADC药物研发13:30-14:00双特异性抗体开发中的杂质研究易继祖友芝友生物 副总裁14:00-14:30Hamilton自动化移液工作站让蛋白纯化如此简单姜超哈美顿 应用工程师14:30-15:00肿瘤免疫治疗：过去，现在和将来王常玉康诺亚生物医药 高级副总裁15:00-15:30待定拜泰齐贸易（上海）有限公司15:30-16:30基于糖链的ADC定点偶联技术与应用黄蔚中国科学院上海药物研究所 课题组长/研究员分会场三（9月15日上午）：抗体药物质量控制（上）9：00-9：30单抗药物LC-MS/MS与ECL生物分析方法比较(Case Study: SHR-1603和SHR-1222)高宇雄恒瑞医药 临床研发9：30-10:00BioAccord系统在抗体药物研发与质量控制上的应用邵锴沃特世 大中华区生物制药高级市场专员10:00-10:30抗体药物工艺开发的过程监控和高通量质量控制谢红伟信达生物制药集团 产品开发部副总裁10:30-11:00粘度流变在高浓度制剂中的应用刘兵锐欧森 产品经理11:00-11:30实验设计(DoE)在单克隆抗体工艺开发中的应用李国荣苏州美极医疗 总裁分会场四（9月15日下午）：抗体药物质量控制（下）14:00-14:30对单克隆抗体及其复合物的“自上而下”质谱分析王冠博北京大学生物医学前沿创新中心 研究员14:30-15:00抗体类生物大分子色谱表征田海玉纳谱分析 液相色谱柱产品线负责人15:00-15:30生物分析及临床相关的考量—抗体偶联药及双特异性抗体药张辰浦PPC佳生 生物分析实验室负责人15:30-16:00Q-TOF和LC在抗体药物质量研究中的应用唐雪岛津 应用工程师16:00-16:30磁共振在抗体药物研发与质量控制中的应用邓惠文布鲁克 制药市场拓展经理16:30-17:00高通量质谱用于抗体药物的结构表征卢颖洪南京理工大学 副教授分会场五（9月16日上午）：抗体药物生物工艺（上）9：00-9：30数据分析在细胞培养工艺开发和优化中的应用赵亮上海倍谙基生物 副总裁，研发中心负责人9：30-10:00东曹FcR亲和色谱技术在抗体药物研发、质控及工艺优化中的应用杜耀杰东曹 应用开发10:00-10:30抗体药物的开发过程和质量标准杨晓明杭州奕安济世 总经理10:30-11:00基于微芯片CE-MS联用技术的全自动培养基生化分析仪 REBEL 加速生物药上游工艺开发王亮908Devices Inc. （美国） Science leader, APAC11:00-11:30抗体快速纯化工艺耿信笃西北大学 教授分会场六（9月16日下午）：抗体药物生物工艺（下）14:00-14:30应用平台技术快速助推双抗从开发到生产李巍巍 白帆生物 工艺总监14:30-15:00中美双报的工艺验证设计戚波亿一生物 中国区COO/总经理15:00-15:30表位模拟肽识别技术：从抗体药物生产纯化到临床精准分析江正瑾暨南大学药学院 副院长/教授15:30-16:00蛋白药物制剂中的可见异物问题探讨吴用百奥泰 制剂高级经理扫码下方二维码，进入本次会议交流群，第一时间获取相关技术内容及会议回放视频。扫描进入会议交流群

相比于低水平重复，高水平重复对企业的影响往往更为严重，因为创新药投入更大，研发周期更长。　　还记得去年南方所年会上关于“新药高水平重复现象也已经呈现交错的态势”的观点。与业内广泛认同的“低水平重复”不同，“高水平重复”还未得到部分企业的重视，在某些领域(如替尼类)创新药的研发已经出现了扎堆情况。　　在一系列利好因素的作用下，国内生物药研发非常活跃，尤以抗体类药物最受关注。相比于替尼类等，国内抗体类药物过热态势还不明显，但我们也看到不少国内优秀企业也开始或准备涉水抗体类药物研发。从靶点上看，国内抗体类药物研发依然集中在TNF-α 、CD20、HER2、VEGF等热门靶点，而对于一些国外研发比较活跃的新靶点，国内还比较滞后。　　据笔者统计，截至2016年10月，国内已上市或在研的抗体类药物(不含融合蛋白类药物，排除鼠源单抗)总数达到180个(数据来源于CDE公开数据，在研品种仅包括至少申报临床的品种，不含前期研发品种)。其中，国内企业开发的品种为128个，占71.1% 跨国企业开发的品种为52个。　　180个品种中，创新抗体药有85个，其中国内企业开发的品种为35个，占41.2% 生物类似药共95个，除了2个是国外企业的品种，其余均是国产品种。虽然从分布来看，国内单抗类药物仍以生物类似药为主，但创新药的数量已经大幅增长。同时，一定数量生物类似药的开发无疑也是非常节约研发资源的方式，可以降低开发风险。　　相比于化药品种，抗体类药物的研发投入巨大，难度也更高。不少国内企业对于抗体类药物开发难度并没有清醒的认识，看到类似凯美纳、朗沐、泰欣生和艾坦这样的品种上市后获益颇丰，就简单认为抗体类药物一旦获批就能轻松获得数亿元的销售额。　　比如网上就有大量类似的提法：“某某公司的某产品是全球某畅销品种的相似品种，一旦上市该药销售额有望超过**亿元”。殊不知，这些销售成绩都需要大量的市场推广才有可能实现，加之国内如赫赛汀、美罗华、安维汀和修美乐等品种普遍已有超过10家以上的类似药申请。部分靶点的生物仿制药已经明显过热，一堆产品蜂拥而至，仅在研究阶段的临床基地筛选，病例入组就将让不少企业苦不堪言。　　此外，尽管在小试及中试阶段，生物药的开发已经难度不大，但如何在质量和成本可控的情况实现产业化，这一步依然非常漫长。即便是顺利上市，单抗类药物同样会面临激烈的竞争，尤其对于某些目标人群本就有限的品种。　　因此，对于抗体类药物的研发，国内企业还需冷静思考，切莫跟风。本文梳理出国内抗体类药物的8个研发热门靶点，对各靶点市场情况和趋势进行精辟分析，为国内抗体类药物研发提供参考和建议。　　NO.1 TNF-α 靶点　　[已上市/在研品种] 28种　　[生物类似药热点] 阿达木单抗(17种)　　TNF-α 靶点是单抗取得最为成功业绩的靶点。即便排除TNF-α 融合蛋白药物依那西普，仅抗TNF-α 单抗就有4个重磅炸弹级品种：首个获批的英夫利西单抗，“药王”阿达木单抗，以及新获批的戈利木单抗和赛妥珠单抗。这4个品种2015年全球销售额合计达266亿美元。　　不过，相比于TNF-α 单抗在全球大放异彩，其在国内的表现却相当惨淡。根据样本医院销售数据，尽管类克(英夫利西单抗)及修美乐(阿达木单抗)已在国内上市，但两个产品样本医院销售合计仅为1.33亿元，且连续两年销量止步不前。这也提示，短期内国内类风湿关节炎生物制剂还难以获得市场认可。　　虽然国内销售不佳，却也无碍TNF-α 单抗成为国内最受关注的单抗研发类别，已上市及在研的单抗达到28个。其中英夫利西单抗、阿达木单抗及各自的生物类似药共有22个。　　尤其是英夫利西单抗生物类似药，作为人鼠嵌合单抗，在阿达木单抗上市多年的情况下，国内研发依然活跃。进度最快的上海百迈博制药已经申报生产，值得期待 还在申报临床的几个厂家，则建议进一步评估继续开发的价值。　　阿达木单抗类似药仅仅已申报品种就达到17个，更值得注意的是还有不少准备申报临床的企业。目前申报进度最快的是百奥泰生物和信达生物，均已进入Ⅲ期临床 此外，北京绿竹生物、嘉和生物、江苏众合、复宏汉霖和浙江海正都已获得临床批件。　　在TNF-α 创新药方面，全人源、抗体小型化以及长效是TNF-α 单抗的主要发展方向。因此，与英夫利西单抗和阿达木单抗相比，杨森长效全人源的戈利木单抗和UCB的长效抗体片段赛妥珠单抗有一些优势，这两个品种在国内研发分别进展到申报生产和Ⅲ期临床。　　国内自主创新的一类TNF-α 药物中，目前主要有丽珠的注射用重组人源化TNF-α 单抗，以及三生的人源化抗人TNF-α 单抗注射液(CHO细胞)，两个品种目前都在进行临床研究。　　NO.2 VEGF靶点　　[已上市/在研品种] 26种　　[生物类似药热点] 贝伐珠单抗(19种)　　与TNF-α 一样，VEGF也是药物获得巨大成功的靶点，贝伐珠单抗的上市及其肿瘤饥饿疗法的提出在当时的影响力不亚于PD-1及其肿瘤免疫疗法。　　VEGF单抗除了在肿瘤领域取得巨大成功，也广泛用于眼底新生血管疾病的治疗。包括贝伐珠单抗、雷珠单抗，以及2个VEGF融合蛋白类药物(阿柏西普和康柏西普)，都广泛用于包括年龄相关性黄斑病变在内的多种新生血管疾病。VEGF单抗药物治疗眼底疾病的地位甚至高于其治疗肿瘤的地位。2015年，贝伐珠单抗(安维汀)和雷珠单抗(诺适得)的全球销售额分别达70亿美元和36亿美元。　　　　在国内，目前已上市和在研的VEGF单抗达26种。其中，贝伐珠单抗的类似药达19种，信达生物进度最快，已进入Ⅲ期临床，此外还有多个厂家已经获批临床。雷珠单抗由于上市较晚，目前国内类似药获批临床的仅有齐鲁1个品种。　　VEGF单抗创新药中，礼来最新在FDA获批的Ramucirumab也已在中国进入Ⅰ期临床，该药在国外已获得包括非小细胞肺癌和胃癌在内的多个适应症。先声的Sevacizumab是其联合开发的VEGF单抗，也在中国开展Ⅰ期临床。　　此外，泰康生物正在开展Ⅰ期临床的重组抗VEGF人源化单抗注射液，应该是一个针对眼底疾病的VEGF单抗，该药作为为数不多的针对眼底疾病的创新药，更值得期待。　　NO.3 CD20靶点　　[已上市/在研品种] 19种　　[生物类似药热点] 利妥昔单抗(15种)　　CD20靶点单抗主要用于非霍奇金淋巴瘤和淋巴细胞白血病的治疗。全球首个获批的CD20类单抗罗氏的利妥昔单抗(美罗华)，2015年全球销售额高达73亿美元。在国内市场，美罗华也是最畅销的抗肿瘤单抗药物，根据PDB样本医院数据，2015年样本医院销售额达到7.93亿元。　　　　在美罗华的刺激下，国内CD20类抗体药物的研发一直非常活跃，目前已上市和在研的CD20单抗共有19个，其中利妥昔单抗及其类似药共有16个。　　在利妥昔单抗类似药的研发竞争中，三生国健的速度最快，已经完成临床研究，正在申报上市。此外，复宏汉霖、神州细胞和信达生物已进入Ⅲ期临床，浙江海正已进入Ⅱ期临床，还有6家企业已获得临床批件。　　CD20创新药方面，目前国内有3个在研品种。考虑到利妥昔单抗是人鼠嵌合单抗，故降低其免疫原性是一个发展方向。　　罗氏的Obinutuzumab是第一个被FDA认定为“突破性治疗”的单抗，与利妥昔单抗一样靶向CD20单抗，但其属于人源化单抗，且通过糖基化修饰其Fc片段增加其对Fcγ 受体的亲和力。GSK的奥法木单抗(Ofatumumab)是全人源的CD20单抗，该药用于CLL同样获得了突破性治疗认定。目前Obinutuzumab和Ofatumumab都在中国开展Ⅲ期临床研究，有望分享美罗华的市场份额。　　国内CD20创新药也有了先行者，北京天广实生物的重组人源化单抗MIL62注射液是人源化CD20单抗，该药目前正在申报临床。　　NO.4 EGF靶点　　[已上市/在研品种] 19种　　[生物类似药热点] 西妥昔单抗(11 种)　　EGF类单抗主要用于结直肠癌的治疗。第一个获批的EGF类单抗是Imclone的西妥昔单抗(爱必妥)，该药2015年全球销售额超过14亿美元。　　在国内，除了爱必妥，百泰生物联合开发的尼妥珠单抗(泰欣生)也获批上市，两个品种上市早期都经历了快速增长，不过目前增速有所放缓，2015年两个品种样本医院销售合计达3.4亿元。　　　　爱必妥的成功和泰欣生的上市促进了国内EGF类抗体的研发，目前已上市和在研的EGF类单抗一共有19个，其中西妥昔单抗及其类似药共有12个。在西妥昔单抗类似药研发竞争中，张江生物的速度最快，目前正在Ⅲ期临床阶段，其余大部分处于Ⅰ期临床或获批临床批件阶段。　　西妥昔单抗的最大问题同样是免疫原性，该药属于人鼠嵌合单抗，因此EGF类单抗研发也着眼于解决免疫原性问题。帕尼单抗(帕妥木单抗)是安进研发的全人源EGF单抗，单药一度被认为有望替代西妥昔单抗，不过上市后大规模临床研究并未支持其在疗效或安全性上优于西妥昔单抗。目前帕尼单抗国内由贝达安进开发，正在开展Ⅲ期临床研究。除了针对西妥昔单抗的类似药，目前国内还有多个针对其他EGF单抗的类似药。齐鲁和上海津曼特生物的EGF单抗类似药都已获批临床，其中前者可能是帕尼单抗的类似药。　　创新药方面，目前国内有4个自主研发品种。神州细胞的重组全人源抗人表皮生长因子受体单抗注射液目前已经进入Ⅰ期临床，而上海赛伦生物和重庆智翔金泰生物各自的重组全人源抗EGFR单抗注射液均已经获得了临床批件，这些品种可能都是采用不同的方式使西妥昔单抗实现全人源。　　NO.5 HER2靶点　　[已上市/在研品种] 19种　　[生物类似药热点] 曲妥珠单抗(10种)　　HER2靶点单抗主要用于乳腺癌等HER2高表达的癌症治疗。第一个获批的HER2类单抗是罗氏的曲妥珠单抗(赫赛汀)，该药2015年全球销售额达到68亿美元，在国内该药销量同样增速迅猛，样本医院2015年赫赛汀销售额达6.66亿元。对于HER2高表达的乳腺癌、胃癌等疾病，曲妥珠单抗的疗效优越，并已经被国内外指南一致推荐为HER2阳性的乳腺癌等疾病的一线用药。　　中国是乳腺癌的高发国，患者众多，故HER2单抗市场巨大。目前已上市和在研的HER2类单抗一共有19个，其中曲妥珠单抗及其类似药共有11个。在曲妥珠单抗类似药研发竞争中，复宏汉霖和嘉和生物的速度最快，目前正在Ⅲ期临床阶段，安徽安科和齐鲁则进入Ⅰ期临床。　　尽管曲妥珠单抗已经得到临床认同，但业内还是希望能在HER2药物中有新的突破。帕妥珠单抗是罗氏新获批的HER2单抗，该药尽管同属HER2单抗，但作用靶点与曲妥珠有所区别。　　临床研究发现曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗的疗效较单用曲妥珠单抗大幅提升。目前帕妥珠单抗正在国内开展Ⅲ期临床。对于帕妥珠单抗，国内不少企业也跃跃欲试，其中齐鲁的帕妥珠单抗类似药获批进入临床，丽珠的重组抗HER2结构域Ⅱ人源化单抗注射液同样定位于HER2的结构域Ⅱ，作为创新药该药已经获批临床。　　抗体偶联技术在HER2单抗使用最多，罗氏的Trastuzumab Emtansine(Kadcyla)是第一个在HER2领域获得成功的抗体偶联物，该药利用曲妥珠单抗和微管蛋白类药物DM1，偶联物较曲妥珠单抗的疗效显著提升，该药目前正在国内开展Ⅲ期临床研究。　　国内针对HER2的抗体偶联物研发活跃，目前已经有百奥泰生物的注射用重组人源化抗HER2单克隆抗体-美登素偶联物和烟台荣昌的注射用重组人源化抗HER2单抗-MMAE偶联剂获批开展临床研究。　　在HER2领域还有一个值得大书特书的国产创新药：武汉友芝友这样一个名不见经传的创新企业正在开发注射用重组抗HER2和CD3人源化双特异性抗体，该药是国内自主研发的首个申报临床的双特异性抗体，从理论上该药可以同时靶向HER2和T细胞，实现靶向免疫。　　NO.6 PD-1/PD-L1靶点　　[已上市/在研品种] 7种　　抗肿瘤无疑是抗体类药物最为关注的领域，而在抗肿瘤领域，以PD-1、PD-L1为代表的抗肿瘤免疫治疗又是其中最闪亮的类别。2014年《Forbes》破例将两个肿瘤免疫药物分别是Opdivo(Nivolumab)和Keytruda(Pembrolizumab)列为该年度最重要的创新药，各大专业医药数据分析公司也纷纷预测两个产品全球销售额将轻松突破50亿美元大关，甚至有望挑战修美乐的药王地位。除了这两个品种，罗氏的Atezolizumab也获批上市，该药是全球首个获批的PD-L1药物。三个药物目前都已进入中国，正在开展Ⅲ期临床研究，都有可能成为首个中国上市的PD-1/PD-L1药物。此外，默克雪兰诺的PD-L1药物Avelumab正在申请临床研究。　　PD-1/PD-L1类药物是国内抗体类药物创新的热点，国内在研的自主研发PD-1/PD-L1药物达7个，其中君实生物的重组人源化抗PD-1单抗注射液已经进入了Ⅰ期临床，此外百济神州的PD-1类药物BGB-A317、恒瑞的PD-1类药物SHR-1210和信达生物的PD-1类药物IBI308均获批临床。而基石药业、誉衡和嘉和生物各有1个PD-1/PD-L1类药物申报临床。　　NO.7 IL-6靶点　　[已上市/在研品种] 7种　　IL-6类单抗主要用于类风关等自身免疫疾病。类风关的生物制剂治疗一度被TNF-α 抑制剂垄断，但欧美最新指南普遍将各类生物制剂放到了等同地位，这使得包括IL-6类在内的各种非TNF类药物获得了巨大的市场机会。　　IL-6类药物目前最畅销的是罗氏的托珠单抗，该药2015年全球销售额达到15亿美元。在国内，IL-6治疗类风关的理念还有待推广，目前仅有静脉注射也阻碍了托珠单抗的推广。尽管不属于国内抗体类药物研究热点，但目前已上市和在研的IL-6类单抗依然达到7个，其中托珠单抗及其类似药共有4个。　　创新药方面，杨森的Sirukumab和Siltuximab(司妥昔单抗)都已申请在中国开展临床研究，其中全人源IL-6单抗Sirukumab已获得临床批件，在免疫原性方面有一定优势。国内IL-6创新药领域目前仅有药明康德的重组全人抗白介素-6单克隆抗体注射液，该药是药明康德和阿斯利康旗下的MedImmune共同研发的产品。　　NO.8 RANK靶点　　[已上市/在研品种] 6种　　核因子-κ B受体活化因子(RANK)及其配体RANKL与破骨细胞的成熟等一系列骨代谢相关信号通路有关。对RANK及其配体RANKL的抑制，可在某些情况下改善骨代谢，减少骨质疏松和骨折等疾病风险。　　根据该机制，安进成功开发了针对RANKL的狄诺塞单抗，该药已获批用于恶性肿瘤骨转移(SREs)和骨质增生等4种有巨大市场容量疾病的治疗。狄诺塞单抗尽管上市时间不长，但市场表现优异，2015年其全球年销售额已达30亿美元。　　国内RANK单抗均属于狄诺塞单抗及其类似药。安进的原研药目前已经在中国进入Ⅲ期临床。5个类似药中，齐鲁进度最快，已获得临床批件 其他厂家则还处于申报临床阶段。

p style="line-height: 1.75em " /pp style="text-align:center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201603/insimg/423d89ef-b2c0-432b-82bf-7282dc2e3167.jpg" title="201637164821361.jpg" width="500" height="427" border="0" hspace="0" vspace="0" style="width: 500px height: 427px "//pp style="text-align: center "中科院上海巴斯德研究所所长唐宏和MRCT首席执行官Dave Tapolczay代表合作双方签署并交换了合作协议。/pp style="line-height: 1.75em " 抗体类药物开发已经进入成熟阶段。早期主要是解决免疫原性问题，上世纪80年代以前的单抗主要是鼠源抗体，包括免疫原性反应在内的安全性问题使其难以得到临床认同。近年来，全人源抗体技术已经不是难题，最新的抗体药物已经实现全人源化，可完全规避鼠源成分带来的各种安全性风险。/pp style="line-height: 1.75em " 近日，中国科学院上海巴斯德研究所(IPS)和英国国家医学研究院科技部(MRCT)在上海成立合作共建“IPS-MRCT 抗体药物联合中心”，标志着中国抗体药物研发进入全新的阶段。/pp style="line-height: 1.75em " 传统的抗体类药物主要针对某些癌细胞特定抗原或针对肿瘤供给血管，如曲妥珠单抗和贝伐珠单抗。新的研究发现抗体类药物也能有一些新的用途，比如免疫检查点抑制剂PD-1类药物可以改变人体对癌细胞的免疫应答，抗体偶联物可以运输细胞毒类药物直达靶点，双特异性T细胞抗体可以将癌细胞和免疫细胞联络在一起，嵌合CD19单抗可以用于CAR-T治疗等等。抗体类药物的发展无疑为抗肿瘤靶向治疗提供了更多强大的武器。抗体类药物在肿瘤领域可谓大放异彩。不过，抗体类药物已不仅仅用于抗肿瘤治疗，其在多种自身免疫疾病、心脑血管疾病、眼科疾病等治疗领域中都显示出卓越的优势。/pp style="line-height: 1.75em " 中国的抗体类药物创新相比欧美还较为落后，国内抗体药市场绝大部分份额还被外资企业产品占据。中国的抗体药数量较少，技术水平也普遍不高，一些国外不认同的技术或淘汰技术开发的品种尽管在中国获批，但市场并不接受。此外，虽然我国抗体药在研品逐步丰富，但大多数品种依然是癌症或自身免疫疾病用药，新适应症用药还为数不多。/pp style="line-height: 1.75em " 不过，中国的抗体类药物创新水平正逐步赶上。一是国家新药创制政策对生物药创新日益重视，最新的“十三五”新药创制计划明确对抗体类药物新技术和新靶点创新的支持，包括双特异性抗体、抗体偶联物、PD-1类药物等都将给予重点支持。二是海外归国高水平生物药人才在国内陆续创建的生物药创新企业为国内带来了欧美最新的生物药创新技术，也带来了生物药创新的新理念。三是风投等资本力量与生物药创新的结合日益紧密。包括恒瑞的PD-1类药物SHR1210、康方生物的免疫监测点抑制剂AK-107、信达生物的双特异性抗体Anti-PD-1 Bispecific Antibodies等在研药物的海外市场权益，都以数亿美元的高昂价格转让给跨国企业，中国的创新抗体类药物已逐步得到国外企业的认同。/pp style="line-height: 1.75em " 最新成立的IPS-MRCT抗体药物联合中心是中国加速创新抗体类药物研发的又一有力证明。抗体药物联合中心将整合IPS和MRCT优势进行创新抗体药物的研发及转化，致力于中国的研究机构和国际以及国内制药公司之间建立转移转化的桥梁，促进中国创新抗体药物的研发与产业化。/pp style="line-height: 1.75em " 新成立的抗体药物联合中心主任，上海巴斯德所孙兵研究员介绍称：“过去三年中国新药临床申报(IND)中，抗体药物领域大多为仿制药，创新靶点少，未来鼓励创新抗体药物的研发是必然趋势。”他还表示：“中国基础研究发展迅猛，但转化研究的能力有待提升。”这也是IPS选择与MRCT合作的根本目的。/pp style="line-height: 1.75em " 英国国家医学研究院(MRC)拥有强劲的医药研发实力，造就了29位诺贝尔奖获得者。MRCT是负责MRC科技成果转化的非盈利性组织，在创新靶点抗体药物研发、知识产权保护、科技成果开发和转化等方面具有丰富的经验和独特的运作体系。/pp style="line-height: 1.75em " 上海巴斯德研究所科研合作处高级主管孟君对《第一财经日报》记者表示：“此次成立的抗体药物中心，是把双方多年来的合作正式化了，而且能够提供一个开放的平台，加强与国内外各大机构的研究合作，并将科研成果尽快产业化。”/pp style="line-height: 1.75em " 中国科学院上海巴斯德研究所是根据中法两国政府间协议，由中国科学院、上海市政府和法国巴斯德研究所三方为应对中国重要传染性疾病而建立的高水平、非盈利性的科研机构。研究所瞄准国家战略需求，定位于重大传染病的基础和应用研究，研究方向主要集中在新生及突发传染性疾病的病毒学、免疫学、疫苗学研究。/ppbr//p

连接子 - 抗体与药物结合的关键因素抗体-药物偶联物（Antibody-drug conjugate, ADC）结合了抗体的高特异性和小分子药物的强细胞毒性。这种组合结合了抗体的独特和非常敏感的目标能力，可以区分健康组织和癌组织。它还具有细胞毒性药物的细胞杀伤能力，可能最大限度地减少剂量限制性毒性，同时最大限度地提高所需的治疗效果。ADC的主要优点是可以在体循环中作为药物使用，最终在靶肿瘤细胞中释放游离药物。在这一过程中，连接子在释放有效药物靶向肿瘤细胞，决定ADC的药代动力学特性、治疗指标和选择性，甚至整体成功方面发挥着关键作用。目前使用的连接子可分为可切割连接子和不可切割连接子两大类，它们之间的区别在于它们在细胞内是否会被降解。一、用于连接的可切割连接ADC连接子的主要类别是可切割连接子。可切割连接子被设计为对细胞外和细胞内环境差异（pH、氧化还原电位等）表现出化学不稳定性，或者可以被特定的溶酶体酶切割。在大多数情况下，这种连接子被设计成在键断裂后释放有效载荷分子。这种无迹可循的药物释放机制使研究人员能够根据已知的游离有效载荷的药理学参数估计共轭有效载荷的细胞毒性。2.1 可切割接头的类型可裂解接头腙是一种酸不稳定基团，当ADC被转运到核内体（pH 5.0-6.0）和溶酶体（pH约4.8）时，它被用作可切割的连接子，通过水解释放游离药物。组织蛋白酶B响应连接子组织蛋白酶B是一种溶酶体蛋白酶，在多种癌细胞中过表达，参与人类许多致癌过程。组织蛋白酶B的底物范围相对较广，但它优先识别某些序列，如苯丙氨酸-赖氨酸（Phe-Lys）和缬氨酸-瓜氨酸（Val-Cit）。这种序列的c端切割肽键。Val-Cit和Val-Ala连接物偶联p -氨基苄氧羰基（Val-Cit- pabc和Val-Ala- pabc）是adc最成功的可切割连接物。PABC片段使自由有效载荷分子以无迹方式释放。双硫键连接子谷胱甘肽敏感连接子是另一种常见的裂解连接子，其策略依赖于细胞质中较高浓度的还原分子（如谷胱甘肽）（1-10 mmol/L）。二硫键嵌入在连接子中，在循环中抵抗还原性裂解。然而，内化后，大量细胞内谷胱甘肽减少二硫键，释放自由有效载荷分子。为了进一步提高循环中的稳定性，通常在二硫键旁边安装一个甲基。焦磷酸二酯连接子该阴离子连接子具有比传统连接子更高的水溶性和优良的循环稳定性。此外，在内化后，焦磷酸二酯通过内核体-溶酶体途径快速裂解，释放未修饰的有效载荷分子。图1. 可切割连接子。（Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. 2018）二、不可切割的连接子不可切割连接子由稳定的键组成，抵抗蛋白质水解降解，确保比可切割连接子更高的稳定性。不可切割连接子依赖于细胞质和溶酶体蛋白酶对ADC抗体成分的完全降解，并最终释放与降解抗体衍生的氨基酸残基连接的有效载荷分子。与可切割连接子相比，不可切割连接子的最大优点是其等离子体稳定性增强，与可切割连接子相比，这可能提供更大的治疗窗口。此外，与可切割的偶联物相比，它有望降低脱靶毒性，因为不可切割的adc可以提供更大的稳定性和耐受性。图2. 不可切割的连接子。不可切割连接的化学稳定性可以承受蛋白质水解降解。单抗的细胞质/溶酶体降解可以释放与降解的单抗衍生氨基酸残基相连的有效载荷分子。（Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. 2018）三、总结结论保证游离药物在肿瘤细胞内的特异性释放是选择Linker的最终目的。该连接子对ADC的稳定性、毒性、PK特性和药效学等具有重要意义。每个环节都有其优点和缺点。在选择连接子时，必须考虑许多因素，包括单克隆抗体和细胞毒性药物中的现有基团、反应性基团和衍生功能基团。最后，需要通过个案分析确定如何优化选择合适的连接物、靶点和毒性分子，平衡ADC药物的有效性和毒性。表1. 连接子类型及优缺点比较参考文献1. Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. Antibody-drug conjugates: recent advances in conjugation and linker chemistries. Protein & Cell. 2018 9:33-46.2. Jun Lu. Feng Jiang. Aiping Lu. and Ge Zhang. Linkers Having a Crucial Role in Antibody–Drug Conjugates. Int J Mol Sci. 2016 Apr 17（4）:561.3. Monteiro Ide P, Madureira P, de Vasconscelos A, Pozza DH, de Mello RA. Targeting HER family in HER2-positive metastatic breast cancer: potential biomarkers and novel targeted therapies. Pharmacogenomics. 2015 16（3）:257-71.阿拉丁提供相关产品，详情请见阿拉丁官网：Linkers - A Crucial Factor in Antibody–Drug Conjugates (aladdin-e.com)

p　　结构确认、生物分析、表征和质量控制方法等的研究是药物研发过程中的重要环节，这些研究必须尽可能准确、灵敏且具有选择性。在过去30年里，液相色谱和串联质谱(LC-MS-MS)技术一直是许多小分子药物分析的首选方法。在此期间，分析技术的高速发展为灵敏、可靠方法的开发提供了支持。但是当前制药/生物制药行业仍然渴求更强大的工具和更多样的方法，尤其是在市场上出现越来越多的大分子治疗药物的情况下。本文讨论了目前小分子及大分子药物生物分析过程中的问题，以及分析方法开发中的新趋势等。/pp　　液相色谱-质谱联用技术从上世纪90年代起即广泛应用于药物发现和研发实验室，因为这种技术有能力在含有成百上千种其他物质的样品中快速识别和量化低浓度化合物。LC-MS-MS技术在小分子药物的结构分析、ADME及生物分析研究中尤为重要。在化合物浓度不断降低的情况下，这项应用的难度在于对方法精确性和重现性的高标准要求。近年来，生物药物的发展非常迅速，这些大分子药物的分析也面临着一系列挑战，同时也推动了技术和方法的新进展。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "小分子药物生物分析/span/strong/pp　　几十年来，药物开发人员一直在样本收集过程中使用生物分析手段来测定给定样本中药物的准确浓度。这些研究的准确性取决于分析方法以及实验室分析仪器的可靠性，所使用的方法及仪器应能够选择性、特异性地量化目标化合物。由于生物分析样本(如血浆、血液和其他复杂的基质)中经常含有高含量结构相关或非相关化合物，这一分析一直特别具有挑战性。这些因可能会导致亲缘试剂或其他不相关化合物共洗脱的交叉反应会影响实验的准确性和重现性。/pp　　多年来，为了应对这些挑战，人们开发了很多基于LC-MS-MS的方法，改善了药物定量实验的灵敏度、通量、准确性和重现性。一种常用的方法是在三重四级杆质谱系统中使用多重反应监测(MRM)技术来降低噪声，同时提高量化的选择性与准确性。最近这种方法已经扩展至MRMsup3/sup技术，通过增加碎片化步骤而改善选择性。如今，三重四级杆质谱系统已被用于开发浓度低至pg/ mL的小分子药物的检测方法，且具有良好的重现性、线性范围和信噪比。/pp　　由于基质干扰，某些化合物在生物样品中特别难以分离，这可能会导致出现未分辨的峰或基线噪音过高，从而影响数据重现性、准确性和动态范围。通常，这这类问题可以是通过额外的样本处理过程或使用速度较慢的色谱来解决。然而，由于样品通量所带来的压力，这样的解决方式会为大多数药物开发实验室增加额外的时间、金钱和劳动力成本。过去的几年内，出现了有效的替代技术，即将离子迁移谱与LC-MS技术相结合，从而提高选择性。它可以以离子迁移装置的形式连接到TOF或者三重四级杆质谱的前端，或者也可以直接内置在TOF质谱系统内，但这种方法大都无法满足生物分析实验中速度、选择性和耐用性之间的平衡。最近，在分析的LC和MS阶段之间，已经开发出了多种不同的离子迁移分离装置。这些使离子根据迁移轨迹的不同而分开，而不是根据时间而分离，这样就去除了背景化合物的影响，从而提供了一个耗费更短MRM周期时间的系统，以便快速准确地检测复杂基质中的低浓度化合物。/pp　　目前，越来越多生物分析实验室采用基于微流LC的方法来分析低浓度水平的化合物。这项技术使用更小的色谱柱(直径小于1mm)和电极，以获得更快速、更灵敏以及更高分辨率的结果，同时将柱后分散降到最低。较低的流速也提高了电离效率、减少了离子抑制，同时大大降低了样品及溶剂的使用量，为制药开发过程带来了经济和环保方面的优势。微流LC所需要的样品体积较低，这也恰好符合制药行业在采用显微取样技术进行毒物学和生物分析研究等方面的需求。此外，微流LC还可以结合不同离子迁移质谱，从而灵敏地对生物样品中的化合物进行选择性分析。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "大分子药物生物分析/span/strong/pp　　生物分析方法的准确性、耐用性和重现性仍然是药物研发人员以及监管部门所关注的关键问题。然而，传统的用于小分子药物生物分析的LC-MS方法通常并不适用于研究大分子药物，如抗体、生长因子、寡核苷酸和重组肽等。这些分子具有更大的尺寸以及复杂性，这就意味着在分析它们之前通常需要大量的样品制备过程，且它们的吸附特性以及背景蛋白的干扰会进一步影响定量的准确性。/pp　　LC-MS-MS方法经过优化后可直接分析10kDa以下的小肽 而在定量分析之前，通常需要应用免疫反应介导的样本提取和/或样品富集步骤来增强选择性。而对于更大的蛋白质，通常需要更复杂的工作流程，包括在使用LC-MS方法对代表性肽进行分析之前的蛋白质水解。这种间接分析的方法被实验人员广泛采用，但却非常复杂，并会受到诸如可变肽释放等的影响。此外，监管部门也还尚未对这些方法的验证方法发布指导原则。/pp　　如ELISA等的配体结合分析(LBAs)方法是一种成熟的蛋白质定量技术，且对于生物分析来说，它们的优势还在于其有能力同时检测人体循环中的游离药物以及药物的活性结构。然而，LBAs方法也有许多局限性，影响了它们在高通量药物开发中的应用。在最近的一项研究中，研究人员已经开始将LBAs方法与LC-MS方法结合起来。这些方法上的进展得益于三重四级杆及QTRAP质谱系统等技术的改进，包括灵敏度的提高，即可在低至毫克至微克的水平上检测大分子。这些新技术改善了电离与采样效率，增加了动态范围和可切换质量范围，而且允许不同质量的离子通过探测器。因此才开发除了很多经过验证的方法用以测定各类具有分析难度的药物，如细胞因子抑制剂、阿达木单抗、升糖激素、胰高血糖素、胰岛素类似物、胰岛素以及如用于自身免疫性疾病的英夫利昔以及用于乳腺癌的曲妥珠单抗等的抗体治疗药物。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "大分子表征/span/strong/pp　　多数大分子药物在生产过程中容易发生序列改变和生物转化不一致的现象。这些改变对于药物的有效性、生物利用度和安全性都会造成影响。因此，药物分析实验室会定期进行蛋白质的表征研究，以监测序列降解和转录后修饰，如氨基酸的改变和糖基化。这些研究通常采用LBAs或毛细管电泳(CE)技术。CE技术是一种强大的、耐用的方法，但在完整的表征过程中却非常耗费人力和时间，特别是在处理复杂药物如抗体药物偶联物(ADC)时，其表征可能需要不同分析方法的反复运行以及复杂的数据处理过程。/pp　　近年来，技术的进展引发了几种蛋白质表征方法的改进。另外，CE技术与电喷雾离子化技术(CESI)的整合也促使了CESI-MS技术的发展，大大加速与简化了蛋白质分析。将CE技术的高分离效率与纳流LC结合，能最大限度地提高电离效率，并减少离子抑制。CESI-MS系统采用开管毛细管，最大限度地减少了死体积，从而提高了灵敏度和峰值效率。同时由于没有固定相，也避免了肽的丢失或过度保留。在最近的一个案例中，在使用单一蛋白酶消化后应用CESI–MS方法的单次运行之后，抗乳腺癌药物曲妥珠单抗被完全表征。该方法包含了100%的序列，而且鉴别了几个关键的氨基酸修饰 在同一分离中还完成了完整的糖肽分析。/pp　　生物转化如脱酰胺、氧化以及结构的改变是LBAs等的传统方法所面临的挑战。曲妥珠单抗结构中的一个关键位置在体内会发生脱酰胺作用，而在经过验证的ELISA方法中并无法识别这种脱酰胺现象。人们最近开了一种LC-MS-MS方法来定量监测这种生物转化作用，采用胰蛋白酶消化的方法，使用选择反应监测(SRM)对特征肽进行定量。实验结果表明，该方法能同时有效地定量分析脱酰胺信号敏感肽及其脱酰胺产物。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "结论/span/strong/pp　　成功的药物开发及药物安全性研究依赖于大分子药物在研发或表征过程中某些步骤，及一系列相关分析测试过程。这些分析方法的准确性和重现性对工业界以及患者来说是非常重要的。多年来，由于激烈的竞争形势以及制药行业严格的监管特性，我们看到了分析技术的持续发展。尤其是近年来仪器本身及方法开发上的一系列进展，帮助人们开发了很多全新的治疗药物及更加复杂的化合物。在未来，这些研究还将需要更多快速的、选择性强的和精准的分析方法。/pp　strong　注：本文为仪器信息网翻译，原标题为“Trends and Challenges for Bioanalysis and Characterization of Small and Large Molecule Drugs”，作者为SCIEX全球制药/生物制药高级市场经理Suma Ramagiri博士。/strong/ppbr//p

p　　随着引领第二次生物医药产品浪潮的“单克隆抗体”的出现，抗体研发的一切正在慢慢改变。在抗体工程药物中，肿瘤抗体药物更是异军突起，独占一半天下，单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性，在抗恶性肿瘤的治疗中发挥了不可估量的重要作用。目前，单克隆抗体已广泛应用于肿瘤的临床治疗，本文主要从抗体药物的发展、面临的挑战以及如何解决等方面进行了详细的分析。/ppstrong　　抗体药物的前世今生/strong/pp　　和各种重大革命性技术的发展一样，抗体的研究也是经历了漫长岁月。直到Kohler和Milstein在1975年创建了淋巴细胞的杂交瘤技术并获得了专一识别抗原位并与之特异结合的单克隆抗体，才受到了相关领域学者们的高度重视。两位科学家因此被授予1984年的诺贝尔生理学或医学奖。/pp　　然而，由于通过杂交瘤技术制备的单克隆抗体是鼠源性的，应用于人体不可避免地引起人抗鼠抗体(HAMA)反应，限制了单克隆抗体的临床应用。/pp　　为了克服这种缺陷，20世纪80年代中期研究者们寻求以基因工程技术对鼠源性单克隆抗体进行改造，尝试对其人源化处理。如将鼠源抗体可变区与人抗体恒定区拼接而形成嵌合抗体或将鼠抗体可变区的互补决定区(CDR区)与人的抗体的互补决定区互换构成人源化抗体等。/pp　　以上抗体技术的建立，基本解决了抗体药物异源性的问题，促进了抗体药物的广泛应用。迄今美国FDA已经批准上市了几十种治疗性抗体药物，抗体产业增长迅猛，产生了巨大的社会效益和经济效益。目前国内外处于临床前、临床研究的各类生物技术药物中也以抗体类制品最多，其中则以抗肿瘤抗体药物最多。/pp　　这其中除了单抗之外，新型抗体的开发也各施所长，其中包括双特异性抗体以及抗体偶联药物(ADC)。就开发热点而言，当然要数PD-1/PD-L1单抗、ADC药物、以及双特异性抗体了。目前，全球抗体药物产业已经步入了强劲发展的时代，与此同时，抗体技术的发展也面临着诸多挑战。无论是在抗体靶标和新抗体基因发现，还是在新抗体药物的研发和产品种类等方面，很多问题都亟待解决。在此，小编做了详细的总结。主要分为以下几个方面。/ppstrong　　筛选肿瘤治疗新靶点/strong/pp　　与传统的小分子药物相比，抗体的靶点数量相对要少的很多。这主要首先由于抗体本身的性质。一般来说，抗体分子的分子量较大，结构复杂，绝大多数抗体只能对位于细胞膜表面及分泌出来的分子发挥作用，而对于细胞内的分子则很难产生功效。/pp style="text-align: center "img title="001.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/3fbc9274-4de1-4a6d-acf5-dc8ffbcad09f.jpg"//pp style="text-align: center "strong针对不同靶标的抗体/strong/pp　　目前，在已经批准的抗体药物中仅有27个靶标。其中7个靶标分别有两个或两个以上的抗体药物，共计18个。其中5个靶标(TNF、CD20、VEGF、HER2、EGFR)所对应的抗体药物多数为重磅炸弹药物，共计10个。在2014-2017新上市的抗体中，几个特殊靶点已引发重大波澜，诸如CTLA-4、PD-1/PD-L1等都成了重磅炸弹的诞生地。其中以PD-1/PD-L1为靶点的抗体作为肿瘤免疫治疗中的先锋队更是各个公司追逐的热点。/pp　　多家国际巨头公司已在该领域做了充足的准备，包括辉瑞，安进，赛诺菲，再生元、罗氏、诺华、礼来、阿斯利康等。该靶点也必然引起新一轮的腥风血雨。但总体来说，抗体靶标十分有限，所以说，在研发的候选抗体药物中，新靶点和新适应证抗体是药物研发团队首要追求的目标 其次是老靶点的深度开发。/ppstrong　　降低抗体的免疫原性/strong/pp　　最早通过杂交瘤技术制备的鼠源性单克隆抗体，应用于人体会不可避免地引起人抗鼠抗体(HAMA)反应。随着基因工程技术的发展，研究人员开始对鼠源性单克隆抗体进行改造，尝试对其人源化处理以解决单克隆抗体的这种缺陷。可分为嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。试图通过增加其可变区序列与人胚系基因的同源性来降低它们的预期免疫原性。/pp style="text-align: center "img title="002.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/d4eabd2b-11a8-492c-b317-7b62d2129725.jpg"//pp style="text-align: center "strong鼠源性到完全人源化抗体/strong/pp　　嵌合抗体成功的例子包括罗氏公司的抗 CD20 抗体Rituxan，其用于治疗B 淋巴瘤。它的抗淋巴瘤作用主要来自于补体作用、ADCC作用和诱导肿瘤细胞凋亡。因为人鼠嵌合抗体仅仅消除了鼠源单抗的部分异源性，未经改造的可变区的鼠源序列依然可以诱导人体产生HAMA反应，因此对鼠源抗体可变区的进一步进行人源化改造是必然趋势。/pp　　通过研究大量小鼠抗体可变区序列，截取可变区中与抗原直接接触的序列与人抗体可变区的框架区嫁接，经过亲和力重塑，可在极大程度上保持亲本抗体的特异性和亲和力，同时在人鼠嵌合抗体的基础上进一步消除免疫原性和毒副作用。人源化抗体成功的例子包括罗氏的Herceptin，其用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌。/pp　　不容置疑，完全人源化抗体绝对是最理想抗体，其可以达到完全避免鼠源性单抗的种种缺点。目前主要通过抗体库技术以及转基因小鼠技术等方法来进行生产。/ppstrong　　新型抗体药物/strong/pp　　抗体偶联药物(ADC)、双特异性抗体以及PD-1/PD-L1单抗绝对算的上是抗体圈的明星产品了。/pp　　ADC由单克隆抗体与有治疗作用的小分子药物两部分构成，借助抗体实现化学药物对肿瘤组织的靶向递送。ADC 在血液中稳定性高，药物分子不会脱落，因而毒副作用较小，但对肿瘤细胞的抑制作用远远高于裸抗体。这种设计策略既可提高抗体药物的杀伤能力，又提高小分子化学药物的治疗窗。/pp style="text-align: center "img title="003.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/c110a3a2-3d90-4c38-ab72-7b6cdd3ecafa.jpg"//pp style="text-align: center "strong双特异性抗体/strong/pp　　传统抗体药物通过封闭单一信号通路抑制肿瘤生长，临床上易出现抗体药物的耐药性。所以双特异性抗体(BsAb)应运而生，其通过基因工程手段将两个分别靶向不同抗原的抗体片段组合在一起，具有两种抗原结合位点，可以发挥协同作用，进而提高治疗效果。这种结构设计能有效地改善抗体药物在体内的药物代谢动力学过程，增强临床治疗效果。然而，设计出疗效好、稳定性高且利于生产的BsAb仍需深入研究。/pp　　除了ADC和BsAb之外，肿瘤免疫治疗抗体药物也是火的不行。近几年，针对免疫检验点的PD-1/PD-L1单抗治疗不断在癌症治疗中取得突破性进展，尤其在黑色素瘤、肺癌、肾癌及膀胱癌等多种肿瘤的治疗中显示出很好的疗效，初步实现了利用免疫方法治疗肿瘤的梦想。/ppstrong　　抗体组技术和抗体组药物/strong/pp　　抗体组技术是在基因组学和蛋白组学基础上，结合杂交瘤技术及基因工程抗体技术，经过抗体靶标高通量筛选、建立大规模抗体库，最终走向应用。相比传统的单克隆抗体技术相比，抗体库技术，具有库容量大、可筛选种类多、更易获得针对特定抗原表位的高活性单克隆抗体等无以替代的优势。同时抗体库技术在筛选过程中，更为省时、省力、高效、经济。/pp style="text-align: center "img title="004.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/7cd75911-64ed-4a38-aa94-c1179ab902e0.jpg"//pp style="text-align: center "strong抗体库技术/strong/pp　　目前抗体库根据其宿主免疫状态来说，主要分为天然库和免疫库两大类。天然库从理论上来说可以筛选获得可与任何抗原特异结合的的抗体，同时人抗体库可以直接产生全人的抗体V区基因，避免了后续的繁琐的人源化过程，但这些天然抗体基因缺乏体内的重排与突变过程，因而很难获得高亲和的抗体，所筛选的抗体往往需要进一步的亲和力成熟改造，而且同时筛选背景较高，针对特定抗原的抗体丰度低。/pp　　相比较而言，免疫库中则含有大量针对该特定抗原的抗体，其筛选背景大大降低，并且这些抗体基因经过在宿主体内的成熟过程，往往具理想的亲和力。/pp　　小鼠目前依然是最容易进行免疫和其后续进行基因工程操作的动物品种，然而通过小鼠抗体库获得的依然是鼠抗体V区基因，想使其安全用于临床，还必须进行后续的人源化改造。近两年发展的全人抗体的转基因小鼠技术，使得我们可以通过转有全套人抗体基因的转基因小鼠来制备人的免疫抗体库，并从中直接筛选具有治疗价值全人的抗体V区基因，无需人源化的改造。/ppstrong　　国内抗体药物产业如何突破瓶颈/strong/pp　　在全球抗体药物产业强劲发展的浪潮中，国内抗体药物产业也已经实现了从基础研究到产业化的跨越，抗体的产品逐渐增多，市场逐渐扩大。尽管我国抗体药物产业近年来发展迅速，但国产抗体药物的技术水平及市场占有率与国际先进水平仍有较大差距。/pp　　中国抗体药物上市以及原始创新产品开发都面临着严重不足的问题。无论是已上市销售的还是正在注册研究的抗体药物，国内企业在抗体靶标和新抗体基因发现、新抗体药物创制、产品种类等诸多方面都亟待提升。/pp style="text-align: center "img title="005.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/35b205bb-cafe-410d-88f4-0541881c8198.jpg"//pp style="text-align: center "strongCustom mAb/strong/pp　　要实现抗体药物产业发展的突破，应该结合抗体药物相关的产学研医用现状资源禀赋及医疗服务的需求，选定未来重点发展领域及其对应的产品方向，重点支持和引导相关领域目标性抗体药物产品的开发。加强研发平台建设、提升抗体药物自主研发、CRO、CMO及产业化水平，达到与欧美先进国家同步，打破国外医药巨头对我国抗体药物的市场垄断，增强我国在国际抗体药物领域的综合竞争优势。/p

Bevacizumab是重组人源化人血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体，作为美国第一个获得批准上市的抑制肿瘤血管生成的药，可用于转移性结直肠癌以及非鳞状非小细胞肺癌治疗等。在中国，超过10家贝伐珠单抗生物类似药在研发上市过程中，面对生物类似药分析，充满技术挑战，贝伐单抗生物类似药表征是质量控制关键点之一，分析过程中，抗体肽图分析方法尤为关键，今天我们就聊一聊贝伐单抗生物类似药肽图分析技术方法。 肽图分析（peptide mapping）是研究抗体药物结构组成的重要技术之一，抗体通过酶切处理后，利用色谱结合岛津高分辨Q-TOF质谱LCMS-9030分析，不仅可以对蛋白质氨基酸序列进行分析，同时可以对于相应肽段的翻译化修饰（PTM）进行分析。通过岛津反相HPLC方法分离不同性质的肽段，后续肽段通过高分辨质谱进行一级和二级扫描，通过监测的母离子和子离子匹配相应的肽段氨基酸序列以及存在的修饰。肽图分析是抗体蛋白药物质量控制的重要手段，岛津高分辨质谱可以完成相关所有的分析检测项目。 分析仪器及色谱柱方案 01分析仪器 LCMS-9030四极杆飞行时间质谱仪使高速度、高灵敏度的四极杆质谱与TOF技术的紧密结合。融合岛津先进工程技艺的DNA，打造出速度与出色性能兼备的全新一代高分辨质谱仪，以优异表现轻松胜任定性和定量分析挑战。 LCMS-9030 02液相色谱柱 ● 反相肽段分析专用色谱柱● 寿命长，耐压高，出峰稳定Shim-pack GISS-HP,3um，150*3.0 mm 应用实例 以bevacizumab 生物类似药为例，进行peptide mapping分析，将抗体蛋白通过胰酶酶切后，通过反相色谱质谱分离后进入高分辨Q-TOF质谱进行一级全扫描和二级扫描，高分辨数据提取分析匹配相应的肽段序列，完整流程如下图所示。 图. 利用岛津LCMS-9030抗体测序基本流程以及举例 岛津分析bevacizumab 生物类似药序列分析，通过Shim-pack GISS-HP色谱柱（3um，150*3.0 mm），可以高效分离酶切后的轻重链肽段，最后用LC-MS 9030 进行一级和二级扫描，最佳参数色谱质谱参数如下表所示。 图. 利用岛津LCMS-9030抗体测序详细参数 通过软件分析高分辨数据，进而匹配生物类似药的重链和轻链序列，完成整个抗体的肽图分析。因篇幅有限，以重链肽段序列部分数据进行展示，匹配覆盖率100%，可以说明岛津LCMS-9030 Q-TOF质谱在抗体肽段分析方面具有强大的实力。部分序列分析结果见下图所示。 图.bevacizumab 生物类似药重链测序结果展示（部分展示） 结合前述案例，岛津建立高分辨质谱LCMS-9030针对抗体药物进行肽图分析完整策略，此外对于分子量分析、翻译化修饰、二硫键分析、糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相关抗体药物关键质量属性检测，为用户节能增效，创造最大价值。

p　　strong01 抗肿瘤药物活体水平药效学评价/strong/pp　　Avastin/Bevacizumab通过特异性结合并阻断VEGF(血管内皮生长因子)抑制肿瘤血管生成，是世界上第一个抗肿瘤血管生成的抗体类药物。Palbociclib(帕博西尼)是针对 CDK4/6 激酶靶点的高选择性小分子抑制剂，辉瑞公司于2015年获得Palbociclib与诺华Letrozole(来曲唑)联合治疗ER+/HER2- 绝经后晚期乳腺癌的FDA药物上市审批。Docetaxel(多西他赛)为紫杉醇类传统化疗药物。/pp　　在2009年Clin Cancer Res杂志发表的文章中，辉瑞肿瘤生物部研发团队就利用IVIS小动物光学成像技术平台，将荧光素酶标记MDA-MB-435 乳腺癌细胞移植入小鼠肾包膜下，建立肾包膜肿瘤疾病活体水平动物药效学评价模型，通过观测给药后光学信号随时间的变化情况，进而评价Palbociclib (PD-991)、Avastin 和 Docetaxel三种不同药物，特定的给药途径、时间、剂量等给药策略对于肿瘤的治疗效果。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/dbd4cf41-f7bb-40ed-86ba-6666a45320cf.jpg" title="1.jpg" alt="1.jpg"//pp　　相对于触诊、肿瘤体积测量等传统方法，利用高灵敏度的生物发光成像技术进行药物评价，可以更灵敏的发现残余病灶点或尽早发现肿瘤的复发，从而更准确的对药 物治疗效果进行判定。并且利用生物发光成像技术进行药效评价的另一独特优势在于，可以明确判断药物是否有效杀死肿瘤活细胞。这是由于生物发光的原理是基于活细胞环境的酶促反应，因此，能够发光的细胞必定是具有活性的，从而避免了传统体积测定方法造成肿瘤体积无变化、内部已出现细胞死亡的检测陷阱。/pp　　针对人类顽疾癌症的治疗，多靶点联合治疗是当前的一个新思路，而小分子药物和生物大分子治疗的联合应用带来的治疗改善，给攻克癌症治疗难题也带来了新曙光。而高灵敏度的生物发光成像技术平台，以其非侵入性、快速、高效、高灵敏度等特点，也为多靶点联合治疗开启了新篇章。/pp　　strong02 免疫检验点抗体药物联合治疗研究/strong/pp　　Michael Lim等人在2017年Clinical Cancer Research杂志上的文章中，首次使用PD-1阻断抗体、TIM-3阻断抗体和传统放疗(stereotacticradiosurgery, SRS) 三种方式联合，在小鼠神经胶质瘤模型上，评价不同组合联合治疗的效果，如下图数据所示，使用三种/pp　　方式联合治疗能显著提高小鼠的生存时间，并且通过IVIS成像系统检测发现，第14天以后治疗组已检测不到GL261-luc2细胞的生物发光信号。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/019afff7-e279-40b5-8c7f-1f30623e10de.jpg" title="2.jpg" alt="2.jpg"//pp　　Ronald Blasberg等人在2016年Molecular Therapy: Oncolytics杂志上发表的文章中，使用PD-1/PD-L1阻断抗体，联合靶向PSMA的人CAR-T细胞，对小鼠前列腺癌模型(Myc-CaP:psma(+))的治疗效果。如下图中结果所示，阻断PD-1/PD-L1，使得hPSMA-CAR-Tcell免疫治疗效果增强，但是治疗反应仅仅是在短期内，表示可能存在其他的免疫调节机制，限制了CAR-T细胞靶向、功能和在hPSMA阳性肿瘤的汇集。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/99b2eeeb-6c1e-48e6-a671-eb9a9b332be7.jpg" title="3.jpg" alt="3.jpg"//pp　　strong03 荧光标记抗体药物靶向分布及代谢研究/strong/pp　　通过近红外荧光探针直接标记单抗药物，经尾静脉注射后，利用小动物活体成像检测荧光信号，而实时追踪抗体药物在体内分布、肿瘤靶向性及代谢情况。/pp　　利用近红外荧光探针直接标记抗体药物Herceptin/Trastuzumab，将XenoFluor 750-Herceptin通过尾静脉注射到HER2/neu阳性的小鼠模型体内。给药前21天使用人源前列腺癌PC-3M-luc细胞株，在免疫缺陷小鼠体内进行细胞原位移植造模，并同时用Spectrum检测生物发光信号，判断肿瘤生长状况。/pp　　XenoFluor 750-Herceptin不同剂量给药后，使用Spectrum连续检测荧光信号72h，可直观看到药物实时分布且靶向肿瘤的情况，并通过软件定量分析/pp　　肿瘤区域的荧光信号后，得到Herceptin的代谢曲线。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/5542361d-205d-469e-a29a-3bf0d2758091.jpg" title="4.jpg" alt="4.jpg"//pp　　Takuo Suzuki等人在2015年 mAbs杂志上发表的文章中，使用一种更先进的基于FRET的方法，分别标记Trastuzumab和Cetuximab，通过小动物活性成像平台检测完整抗体实时分布及抗体被降解的情况。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/c4861b20-13a9-4035-88e1-c515eaecc01b.jpg" title="5.jpg" alt="5.jpg"//pp　　以上这种FRET模型非常适合对抗体完整性、生物分布及稳定性的评价，且对Fc区域介导的ADCC效应及改造机制和抗体偶联药物设计(Antibody-Drug Conjugates, ADC)提供重要有效信息。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/d6daf28b-db0b-421c-89ad-e49cafece935.jpg" title="6.jpg" alt="6.jpg"//pp style="text-align: center "img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/9f1c32a3-dbfd-486a-9cb0-a8a850330df0.jpg" title="7.jpg" alt="7.jpg"//p

抗体药物是现代生物医药产业的主力军,是生物医药产业增长最快的细分领域。我国抗体药物产业起步晚，抗体药发展水平相较于国际还有较大差距。近几年，国内抗体药物市场得到了快速的发展，但在抗体结构设计、新药临床前研究与安全评价、工艺和质量稳定性等方面仍存在诸多挑战。为促进我国抗体药物产业持续快速发展，仪器信息网将于2023年9月19日-20日举办第六届“抗体药物研发与质量分析”网络大会，将邀请多位业内专家做精彩报告，为广大用户搭建一个即时、高效的交流和学习的平台。点击免费报名专场设置：日期上午下午9月19日抗体筛选技术单抗/双抗药物开发9月20日ADC药物开发抗体表征与质量控制（上）9月21日抗体表征与质量控制（下）生物工艺和CMC会议日程（更新中）：9月19日上午 抗体筛选技术与抗体发现报告主题专家单位基于单个浆细胞抗体发现平台（SCmab）及应用唐勇暨南大学 教授/抗体工程中心主任基于微流控技术筛选肿瘤免疫激动剂抗体张宏恺南开大学 教授待定李茂华京天成总经理分子互作用于抗体筛选王倩北京大学药学院 国重实验室9月19日下午 单抗、双抗药物开发待定方伟杰浙江大学药学院 浙江大学（杭州）创新医药研究院生物药中心主任高效低毒双抗构建新策略：多个新型双抗案例分享黄浩旻三生国健 研发副总裁抗体药物的生物分析策略和案例分享郎士伟武汉宏韧生物医药股份有限公司 总监待定待定夏尔巴生物研发负责人9月20日上午 ADC药物开发创新全人双抗设计/筛选及双靶点ADC新药开发案例杨勇飞百奥赛图（北京）医药科技股份有限公司 新药研究院 总监时空定量观测ADC旁观者效应及肿瘤渗透性研究郭鹏中国科学院基础医学与肿瘤研究所 特聘研究员ADC药物研发过程中的质量分析和生物分析策略（拟）唐家澍中科新生命 首席科学家天然抗体的一步定点修饰及ADC药物研发唐峰中科院上海药物研究所 副研究员EGFR/HER2双靶向ADC药物(DTLL)经SMAD4克服胰腺癌耐药的作用研究（拟）李亮中国医学科学院医药生物技术研究所 研究员 待定待定宜联生物9月20日下午 抗体药物表征与质量控制（上）从细胞株筛选到BLA申报不同阶段的质量研究策略及实例分析乔怀耀荃信生物 高级总监基于表位模拟肽识别策略的抗体药物分析新方法研究王启钦暨南大学 教授待定王冠博北京大学 研究员抗体质谱表征技术(拟）卢颖洪南京理工大学 教授9月20日下午 抗体药物表征与质量控制（下）抗体类药物生物学活性研究策略姚雪静荣昌生物 副总裁抗体药物开发质量研究的重要性及全产程覆盖（拟）黄懿上海探实生物科技有限公司待定姚钟平香港理工大学教授糖修饰蛋白质分析方法与生物药应用研究（拟）应万涛军科院生物质普与糖蛋白质组学课题组长/研究员9月21日下午 生物工艺与抗体药CMCCMC策略分析郭文晖上海宇嵩科技有限公司 Principal Consultant待定戚波北京亿一生物待定李巍巍白帆生物 工艺总监 待定待定（拟）药明生物抗体处方与工艺开发关键技术考量梁柳恩 汉腾生物制剂开发 资深研究员会议链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/antibodydrug2023/扫码报名

仪器信息网讯 为促进我国抗体药物产业持续快速发展，仪器信息网将于2023年9月19日-21日举办第六届“抗体药物研发与质量分析”网络会议。本次会议将有30余位抗体药物研究或者开发领域的专家，包括高校和科研院所的科研专家、制药企业的专家以及仪器企业的技术专家、内容覆盖抗体筛选、药物开发、质控、生产工艺和CMC全流程，一年一度的抗体药物网络盛会，面向所有从业人员的公益讲座，不容错过！点击图片，免费报名！大会日程2023/9/19 抗体筛选技术与抗体发现09:00--09:30抗体抗原分子识别的计算与应用曹志伟复旦大学生命科学院 系主任/教授（二级）09:30--10:00移液工作站在抗体药物研发领域的主要应用刘健德国耶拿分析仪器股份公司 产品经理10:00--10:30基于微流控技术筛选肿瘤免疫激动剂抗体张宏恺南开大学 教授10:30--11:00自动化时代下的抗体药物研发方案刘达潍贝克曼库尔特生命科学 自动化应用专家11:00--11:30基于单个浆细胞抗体发现平台（SCmab）及应用唐勇暨南大学生物工程学系 系主任/教授11:30--12:00生物分子互作技术在抗体药物筛选领域的应用王倩北京大学药学院 助理研究员2023/9/19 单抗/双抗药物开发14:00--14:30人工智能助力抗体药物开发李茂华京天成生物技术（北京）有限公司 总经理14:30--15:00双抗ADC国内外研发进展和趋势杨勇飞百奥赛图（北京）医药科技股份有限公司 总监15:00--15:30高效低毒双抗构建新策略：多个新型双抗案例分享黄浩旻三生国健药业（上海）股份有限公司 研发副总裁15:30--16:00抗体药物的生物分析策略和案例分享郎士伟武汉宏韧生物医药股份有限公司 总监2023/9/20 ADC药物开发09:00--09:30基于纳米抗体的多功能抗体药物平台技术潘利强浙江大学药学院 院长助理/研究员09:30--10:00时空定量观测ADC旁观者效应及肿瘤渗透性研究郭鹏中国科学院基础医学与肿瘤研究所 特聘研究员10:00--10:30高分辨质谱在ADC抗体药物中的全面表征方案张劭阳赛默飞世尔科技中国有限公司 高级应用支持工程师10:30--11:00双靶向ADC药物DTLL成药性及其与吉西他滨联用治疗胰腺癌克服耐药的研究李亮中国医学科学院医药生物技术研究所肿瘤研究室 研究员,博士生导师11:00--11:30天然抗体的一步定点修饰及ADC药物研发唐峰中国科学院上海药物研究所 副研究员11:30--12:00ADC药物研发中的质量分析和生物分析策略唐家澍中科新生命生物科技有限公司 首席科学家2023/9/20 抗体表征与质量控制（上）14:00--14:30从细胞株筛选到BLA申报不同阶段的质量研究策略及实例分析乔怀耀荃信生物医药 质量研究部总监14:30--15:00基于表位模拟肽识别策略的抗体药物分析新方法研究王启钦暨南大学 药物分析研究中心副主任/教授15:00--15:30高通量质谱用于抗体药物的结构表征卢颖洪南京理工大学 副教授15:30--16:00应用结构质谱技术拓展蛋白质药物质量属性表征范围王冠博北京大学生物医学前沿创新中心 研究员2023/9/21 抗体表征与质量控制（下）09:30--10:00蛋白类生物制药稳定化策略及案例分析方伟杰浙江大学 研究员10:00--10:30基于在线CE-MS联用技术的复杂生物制品的分析解决方案洪佳莹永道致远科学技术（上海）有限公司 市场经理10:30--11:00抗体类药物生物学活性研究策略姚雪静荣昌生物制药(烟台)股份 副总裁11:00--11:30生物药宿主细胞蛋白的表征分析与质控策略黄懿上海探实生物科技有限公司 CEO11:30--12:00融合蛋白药物糖修饰异质性分析方法应万涛军事科学院军事医学研究院 研究室主任/研究员2023/9/21 生物工艺与抗体药CMC13:30--14:00抗体药物工艺表征研究策略李苗苗夏尔巴生物 纯化工艺研究员14:00--14:30为出海企业制定后期CMC与商业化计划Kevin GuoKKH Consultant LLC 独立顾问 Independent Consultant14:30--15:00最新LC-MS PAT技术助力早期生物工艺开发罗宇文沃特世科技（上海）有限公司 市场开发经理15:00--15:30ADC药物的工艺开发和质量控制代波苏州宜联生物医药有限公司 总监15:30--16:00为制药行业应用量身打造的渗透压仪杨敏安达望（上海）科技有限公司 产品应用专家16:00--16:30双特异性抗体药物开发和生产的挑战和应对策略李巍巍白帆生物科技（上海）有限公司 CMC高级总监16:30--17:00抗体制剂与工艺开发关键技术考量梁柳恩广州汉腾生物科技有限公司 制剂开发资深研究员报名链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/antibodydrug2023/扫码报名

在全球病毒感染性疾病此起彼伏的形势下，人们把疾病的预防提升到了一个新的高度，尤其是免疫疫苗、抗病毒疫苗、抗肿瘤疫苗已成为开发的热点。为了进一步推动我国疫苗抗体药物研究领域的发展，促进国际研发合作，第三届北京疫苗与抗体创新国际论坛于2021 年7月8-9日在北京亦庄生物医药园成功举办，岛津企业管理（中国）有限公司（以下简称“岛津”）受邀参加了此次大会，发表最新报告并分享疫苗抗体最新技术。此次论坛受到了中国生物器材网、分析测试百科网及仪器信息网等多家业内知名媒体的关注，论坛除主会场外共设置疫苗研发与评价、生物制药研发技术及生物制药研发技术三个专题。论坛首日主会场，岛津分析计测事业部市场部程汉兴发表了题目为《助力创新，岛津赋能中国疫苗与抗体行业发展方案》的报告。 岛津分析计测事业部市场部程汉兴 在报告中程汉兴首先介绍了岛津有关抗体药物以及疫苗相关工作，以抗体药物为例，围绕工艺监测和质量控制推动生物药高质量发展。岛津现有基于LC MS/MS方法的培养基和工艺监测方案可以通过离线和在线模式实现分析培养基以及细胞上清液中有机组分，监控培养基中的氨基酸，核苷酸等125种以上物质浓度变化，研究培养基中营养成分消耗变化，进而优化培养基配方及补料成分，保证抗体产品高质量生产。 从质量分析角度，在抗体以及抗体偶联药物（ADC）的表征分析实验中，可利用岛津生物兼容型液相以及高分辨飞行时间质谱，可以分析抗体的分子量，蛋白序列，二硫键以及糖型分析。如需要对抗体偶联药物关键参数DAR值进行研究，可使用针对ADC专门开发的SHIMSEN Ankylo HIC-Butyl色谱柱，可有效实现不同偶联药物抗体的分离，岛津将提供从色谱到耗材等整体解决方案。 在疫苗研究方面，程汉兴还介绍了岛津多年来与用户合作开发的多种类型疫苗解决方案。利用生物兼容型液相分析病毒疫苗抗原蛋白含量测定，使用LC-MS/MS用于百白破疫苗成品中多种抗原蛋白的定量以及TCT毒素分析。针对肺炎多糖结合疫苗，使用液相质谱快速定量糖醛酸等成分，效率大大提升。围绕mRNA疫苗相关的核酸定性分析，使用高分辨飞行时间质谱可以对核酸分子量及序列进行定性表征。 现场传真 大会期间，岛津设立相应展位与参会的专家学者进行交流，与嘉宾一同交流探讨岛津有关抗体药物以及疫苗相关方案，主要围绕工艺监测和质量控制以推动生物药高质量发展。

安捷伦公司大力支持首届抗体工程高峰会暨抗体药物成果展（Antibody Engineering Summit & Antibody Therapeutics Exhibition） 随着生物医药市场的快速开发，探寻不同的抗体研发方法及需要应对的挑战变得日益重要和紧迫。对于蛋白治疗药物研发企业来说，从蛋白设计、抗体工程、生产工艺到技术应用，每一个环节都至关重要。2011年7月21-22日在上海银星皇冠假日酒店办的&ldquo 首届抗体工程高峰会暨抗体药物成果展&rdquo ，聚集了有关抗体研发、生产等全球领先企业高层，共同探讨抗体行业的研发进展和实际应用情况，并深入讨论了&ldquo 新医改&rdquo 环境下，抗体药物相关企业所面临的重大挑战、主要进展和应对方案、全球趋势、以及当前国内生产和应用市场分析等。 此次峰会围绕主题&mdash &mdash 国际抗体药物研发与合作，邀请到约100名来自抗体药物生产、抗体工程及新药研发、CRO、CMO、科研院校的国内外领先企业高层参会。 作为世界领先的生物医药行业分析解决方案供应商，安捷伦致力于帮助生物医药领域用户开发专业、安全、高质、高效的药物治疗产品，并且帮助用户以更快的速度，更低的成本将产品推向市场，经过近年来的先进技术及行业经验的不断积累，安捷伦目前可为广大生物医药领域用户提供广泛的完整应用方案，包括： 生理化学性质表征完整新生物成分（NBE）分析糖基化与磷酸化蛋白分析氨基酸分析肽谱分析产物相关的杂质分析工艺流程相关的污染物检测蛋白和抗体的质量保证/质量控制稳定性和剂型测试蛋白治疗药物的生产工艺优化等 7月21日进行的首日大会报告上，来自安捷伦公司的液质联用技术应用工程师陶定银博士进行了题为&ldquo 利用安捷伦HPLC、Chip-cube HPLC 及Q-TOF等仪器针对抗体药物的表征策略&rdquo 的精彩报告。报告中提到，单克隆抗体药物与抗原存在很强的相互作用且具有高特异性，目前在科研以及各种疾病治疗中备受关注。抗体药物在应用之前，需要进行一系列的表征，比如抗体药物的氨基酸序列、完整蛋白质、甲硫氨酸氧化、二硫键、以及糖基化等翻译后修饰。采用安捷伦的HPLC、Chip-cube HPLC 及Q-TOF等仪器方案可充分实现抗体药物的一系列表征。安捷伦开发的单克隆抗体-糖链分析芯片，可以快速高效的分析抗体药物的糖基化修饰，结果与LC-FLD方法相当。新颖的报告内容及创新的技术理念引发与会者强烈的关注和兴趣。更多安捷伦生物制药解决方案，请参考：http://www.chem.agilent.com/zh-cn/solutions/biopharma/pages/default.aspx 更多安捷伦生物制药分析解决方案在线讲座视频及应用材料，敬请联系我们：yunxia_shi3@non.agilent.com 订阅Access Agilent电子刊物，请登录: www.agilent.com/chem/accessagilent:cn 关于安捷伦科技 安捷伦科技公司（纽约证交所：A）是全球领先的测量公司，同时也是通信、电子、生命科学和化学分析领域的技术领导者。公司的18500 名员工为100 多个国家的客户提供服务。在2010 财政年度，安捷伦的业务净收入为54 亿美元。要了解安捷伦科技的信息，请访问：www.agilent.com.cn。

大家好，本周为大家分享一篇来自Angewandte Chemie - International Edition的文章：Infrared Multiphoton Dissociation Enables Top-Down Characterization of Membrane Protein Complexes and G ProteinCoupled Receptors[1]，文章的通讯作者是牛津大学化学系的Carol V. Robinson教授。　　非变性质谱(Native MS)是结构生物学中一个成熟的工具。在电喷雾电离过程中使用非变性缓冲液可以保存多组分蛋白质复合物之间的非共价相互作用，以及它们的配体、辅因子或其他结合蛋白。它可以用于探究蛋白质复合物的相互作用和功能，因为结合事件导致质量变化，可以在质谱仪中跟踪和剖析。然而，由于膜蛋白的疏水性，使得它们在传统的非变性质谱缓冲液中不溶且容易聚集，因此在非变性质谱中呈现出独特的挑战。目前采用的方法是将蛋白质复合物溶解到膜类似物中，例如：去垢剂、纳米脂质盘、两性聚合物等，再将这些膜类似物通过碰撞激活去除。其中去垢剂是应用的最广泛的一种。然而由于碰撞激活的能量在应用中受到限制，该方法并不能在质量分析前很好地去除去垢剂。此外，在非变性质谱条件下，键的断裂也受到非共价相互作用强度的影响(例如蛋白质-蛋白质、蛋白质-去垢剂剂以及去垢剂胶束内的相互作用)。　　基于光子的方法，如紫外光解离(UVPD)和红外多光子解离(IRMPD)已被证明有利于可溶性蛋白质及其复合物的Top-Down质谱分析。与此同时，基于光子的膜蛋白Top-Down模式的应用正在兴起。原理上，激光束路径中的离子被连续地驱动到振动激发态。因此，在基于光子的方法中，能量储蓄通常与前体离子的电荷状态和分子量无关。然而，电荷状态和分子量仍然会影响肽键解离需要的输入能量。先前报道的通过UVPD对79 kDa的五聚体的大电导机械敏感通道(MscL)Top-Down的断裂得到了令人印象深刻的54%的序列覆盖。然而，对于氨通道(AmtB)一个127 kDa的同源三聚体，通过碰撞激活和UVPD两种不同的方式破碎，仅实现了20%的序列覆盖率。事实上，相对较低的序列覆盖率是由于大分子量以及三聚体中增加的非共价相互作用影响的结果。尽管这些工具能够在非变性状态下实现Top-Down质谱分析，但其在膜蛋白表征中的应用仍不广泛。这就要求建立一种能使低电荷密度的高分子量蛋白质稳定地产生蛋白质序列离子的方法，而膜蛋白嵌入异质膜或膜类似物则使这一问题更加复杂。虽然IRMPD之前被用于从去垢剂中释放膜蛋白，但使用IRMPD对非变性的膜蛋白进行测序的研究相对较少。　　图1. (A)改进的Orbitrap Eclipse Tribrid的原理图，其中包括一个红外激光器直接进入四极线性离子阱(QLIT)的高压细胞。离子化的蛋白质胶束被转移到高压QLIT中，在那里整个离子群受到红外光子的照射，然后被转移到Orbitrap进行质量分析。通过调节激光输出功率(W)和照射时间(ms)，可以使膜蛋白从去垢剂胶束中完全解放出来。(B)三聚氨通道(AmtB)在3.0 W输出功率和200ms辐照时间下的非变性质谱。(C)在3.3 W输出功率和200ms辐照时间下AmtB的非变性质谱。　　因此，作者利用改进的Orbitrap Eclipse Tribrid质谱仪，与连续波远红外(IR) CO2激光器连接，使光束聚焦到双四极杆线性离子阱(QLIT)的高压池中(图1A)。红外激活可以有效地去除蛋白质复合物中的去垢剂胶束，随后通过IRMPD使得膜蛋白碎片化。在这种安排下，由纳米电喷雾电离产生的蛋白质复合物被转移到高压池中。在转移到Orbitrap进行检测或m/z分离和随后的碎片化之前，整个离子群将受到943cm-1红外光子的照射。利用红外的方法去除去垢剂胶束，红外激光有两个可调控参数:激光输出功率(高达60瓦)和照射时间(毫秒到秒)。因此，可以更好地控制从蛋白质胶束中释放膜蛋白，确保非变性复合物的保存，同时完全去除包裹复合物中的去垢剂。通过对激光输出功率和照射时间的优化，作者发现红外激活的参数是高度可调的，不同的激光功率和照射时间的组合也可以产生分辨率相当的谱图。其中例如在3.3 W下照射200 ms时，可以得到多个电荷态的三聚体峰(~6500 m/z)，也可以观察到三聚体与脂质结合的峰，而且对于图谱中的单体也能观察到与脂质结合的峰(图1C)。作者还对不同的去垢剂产生分辨率较高的图谱所需要红外参数进行了评估，从而评价了这几种去垢剂得到高分辨率图谱的难易程度(图2)。　　图2. 红外辐射去除膜蛋白离子中的去垢剂是高度可调的。增加激光输出功率对三种常用的MS兼容去垢剂(C8E4, G1和DDM) AmtB三聚体峰外观的影响。辐照时间固定为200 ms，激光输出功率分别为2.1、2.4、3.0和3.6 W。去垢剂在真空中按易去除的顺序显示，这是由完全释放膜蛋白复合物所需的激光输出功率决定的，从而在m/z光谱中产生良好分辨的电荷状态峰。为了探究IRMPD分离蛋白质和去垢剂胶束的机制，作者对三种不同的去垢剂：四聚乙二醇单辛醚(C8E4)、树突状低聚甘油(G1)和十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)的溶液相和气相红外光谱进行了表征，并利用密度泛函理论(DFT)计算得到了C8E4头部基团的红外谐波光谱，用来验证所得到的红外吸收光谱会受到振动耦合的影响，对于质子化的去垢剂离子，氢键和富氧去垢剂内的质子共享可以改变观察到的振动频率。结果表明C8E4胶束的溶液相吸收光谱包含一个与预期激光波数943cm-1重叠的显著带，这就解释了为何较低的激光能量可以将去垢剂胶束和蛋白质复合物分离。而在谐波光谱中在预期的激光波数处的确产生了峰，并推测该峰来自于O-H伸缩、C-C伸缩，C-H弯曲和C-O伸缩振动的耦合。而G1和DDM的最大吸收则偏离了943cm-1的预期波数，作者认为这是不同去垢剂氢键作用的结果。而蛋白质在真空中的红外吸收能力较弱，由此推测在IRMPD的过程中，去垢剂是主要的吸收对象。所以仅需要较低的能量就可以使蛋白质从复合物中剥离而不至于破坏蛋白质的非共价作用。完整的蛋白质离子还支持串联质谱的实验，为了得到蛋白质的序列信息，作者分离了m/z在6674处(电荷态为+19)的AmtB三聚体蛋白，并将其置于高激光输出功率(9 W)下照射5 ms，在m/z 1750~4000之间产生密集的多电荷态离子片段，并得到了26%的序列覆盖，这优于之前基于碰撞激活的方法(20%的序列覆盖率)。此外，在MS2的谱图中并没有观察到单体的峰，这说明共价键的断裂比蛋白质的展开和亚基的分离更快，这种效应也在之前的可溶性蛋白和膜蛋白研究中呈现。为了探究位点裂解的偏好，作者将片段离子丰度通过电荷态进行了归化一，发现了高频的断裂位点来自于经典的选择性断裂位点X|P和D|X，而剩余的断裂往往发生在A|G、F|G和V|G的位点，说明N端到甘氨酸有更高的断裂偏好。为了观察断裂的位置和蛋白质的二级结构之间的关系，作者沿着氨基酸序列构建了每个片段相对于原点位置的相对丰度图，多个电荷态的离子则通过归化一的方法进行求和。(图3)由此观察到了大多数的片段断裂出现在跨膜区域的α-螺旋处，其中8号α-螺旋的T|P和V|G，以及6号α-螺旋的L|G和F|G断裂产生了丰度最高的几个片段。此外，将这些片段的相对丰度映射到三聚体的结构上发现，片段来自于蛋白质的内部而非表面。分子动力学的研究表明了其中的机制，在高温下蛋白质的跨膜区域的α-螺旋保持了稳定的结构，而非跨膜区域的α-螺旋则失去了大部分的螺旋结构。先前的研究表明了α-螺旋外侧的质子化的氨基酸可以稳定α-螺旋的结构。由此，作者推测质子不光可以稳定蛋白质的螺旋结构，而且可以沿着蛋白质的骨架迁移来诱导电荷远程破碎。　　图3. 三聚体AmtB的IRMPD。(A)在m/z 6674处分离19+电荷态离子阱后，IRMPD后观察到的碎片离子MS2谱。多重带电碎片被高亮显示 来自相同地点的重复片段用虚线分组。为了清楚起见，许多指定的离子没有注释 (B)片段丰度相对于裂解原点(残基数)的条形图，其中丰度表示来自每个位点的片段归化一强度之和。条形图的颜色强度表示每个片段的加权平均电荷。将AmtB的拓扑域叠加在条形图上 α-螺旋跨膜区域用黄色方框表示，编号为1到11。跨膜区由质周环和细胞质环连接，用灰色线表示。(C)主干裂解位点覆盖在AmtB (PDB: 1U7G)的结构上。蓝色和红色阴影区域分别代表b型和y型离子。颜色强度对应于所分配片段的丰度。从气相分子动力学模拟中得到的高温(500 K)下的跨膜螺旋快照用虚线圈标出。为了验证这一个推测，作者又对另外两种GPCR蛋白：β -1-肾上腺素能受体(β1AR)和腺苷A2A受体(A2AR)用IRMPD进行了MS2图谱的测定，结果也观察到了片段离子相似的二级结构定位，在跨膜结构区域有着高丰度的片段，但是在二硫键相连的螺旋中并没有观察到丰富的离子片段。并再次利用分子动力学模拟研究了两种GPCR的结构对断裂的影响。在500 K下的最终结构中显示，两种GPCR中都保留了α-螺旋特征，并与观察到的裂解位点密切相关。此外，还对这两种蛋白进行了HCD和IRMPD的比较分析。对于β1AR, IRMPD产生的片段离子平均分子量为8866 Da，高于HCD产生的5843 Da。IRMPD产生的片段离子也保留了更高的平均电荷(4.7 + vs 3.6+ z)。最终，IRMPD的碎片化导致β1AR的序列覆盖率更高，为28%，而HCD为17%。在A2AR中也观察到类似的趋势，IRMPD的覆盖率为19%，而HCD为9%。　　总的来说，作者证明了可以在改进的Orbitrap Eclipse质谱仪的高压QLIT下，通过红外照射可以完全释放一系列去垢剂胶束中的膜蛋白。然后，通过增加激光输出功率，获得直接从膜蛋白及其复合物中释放的序列信息片段离子，证明红外光去除去垢剂是通用的和高度可控的，为保存和鉴定膜蛋白和配体之间脆弱的非共价相互作用构建了一个可靠的方法。而且还对片段离子的产生机制做了阐述，即质子可以通过沿蛋白质骨架迁移来稳定和诱导连续的肽键裂解。　　撰稿：李孟效　　编辑：李惠琳　　文章引用：Infrared Multiphoton Dissociation Enables Top-Down Characterization of Membrane Protein Complexes and G ProteinCoupled Receptors　　参考文献　　Lutomski, C.A., El-Baba, T.J., Hinkle, J.D., et al. Infrared multiphoton dissociation enables top-down characterization of membrane protein complexes and g protein-coupled receptors[J]. Angewandte Chemie-International Edition，2023.

近年来，抗体药物的接连上市和重磅销售引发国内外抗体类生物治疗药物的研发热潮。抗体药物已经成为治疗肿瘤的明星产品。抗体类生物治疗药物的活性测定在质量控制中至关重要。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。相关的生物技术在药物研发质控中的应用对新型抗体药物的发展带来一系列突破。为帮助从事相关研究的用户梳理生物制药质量控制研究技术及方法，仪器信息网特别策划了“抗体药研发的生物活性鉴定及功能分析”相关专题（点击查看）并邀请赛默飞蛋白和细胞分析技术应用高级经理冯彦斌先生分享对于抗体药的看法。他在文中主要分析了国内抗体药物的市场潜力、研发进展以及抗体药研发相关生物活性鉴定和功能分析的先进技术。赛默飞蛋白和细胞分析技术应用高级经理 冯彦斌仪器信息网：您如何看待近年来的抗体药市场发展变化与前景？ 冯彦斌：众所周知，近年来中国抗体药物市场规模增长异常迅猛，尽管目前中国总的抗体药物上市批准数量低于欧美，但增速方面已经接近欧美市场的两倍，蕴藏着巨大的潜力和空间。据统计，2018年我国抗体药物产业总体市场规模约183亿美元，预计2020-2025年平均年增长率为~15%，到2025年，我国抗体药的市场规模将超508亿美元。其主要的驱动因素有：1）肿瘤的发病和死亡率上升； 2）我国创新药优化的审评审批流程；3） 带量采购等政策驱动创新需求； 4）抗体药物逐渐被纳入医保目录。自2020年以来，国家药品监督管理局（NMPA）累计受理了超过200款国产抗体新药的临床试验申请。目前抗体药物研究最热门的靶点包括PD-1/PD-L1、TNF-α、VEGF、HER-2、CD20、EGFR 等。抗体药物最重要的应用领域为自身免疫类疾病和癌症（约65%的市场占比）。随着疾病机制的深入研究，抗体药物在哮喘、抗感染、血液病和心血管病领域的药物不断增加，并迅速拓展到其它相关领域。作为未来生物药的主力军，抗体药物创新研发则显得尤为重要。随着单抗生物类似药进入收获期，双特异性抗体、抗体偶联药物（ADC）、纳米抗体等药物市场也异军突起。创新型抗体加快了开发步伐，多种类型的抗体药物有望得到广泛的临床应用。从抗体创新药品种数量和国内产品临床申报数量上看，排名靠前的为恒瑞医药、复星医药、海正药业，而信达生物和康宁杰瑞产品数量超过了10个。创新类抗体药物基于其高特异性、低毒性、低转化周期等特征，将被更广泛地应用于各类疾病的治疗。未来几年，生物药仍是医疗领域的蓝海，也是人类健康的福音，未来发展前景良好。仪器信息网：近年来抗体制药的发展迅速，对于创新研发技术有何促进？ 冯彦斌：越来越多的研究表明，抗体药物由于靶向性强、特异性高和毒副作用低等特点，近年来已成为生物药行业中发展最快的分支。截至今日，美国FDA陆续批准了多个个治疗性抗体药物，其中传统单克隆抗体和人源化单抗已成主流，双特异性抗体开始初具规模。但在抗体功能优化、新抗体研发，特别是抗体规模化生产，以及抗体药物如何创新等问题仍是我们面临的巨大挑战。随着分子生物学、结构生物学、生物信息学等技术的发展，人们对抗体结构中各功能区的认识进一步加深，现在已经能够通过修改各功能区的序列、结构来赋予抗体新的特性和功能，这是抗体药物创新的基础。近年来抗体偶联药物（ADC）的发展主要依赖于以下研究领域的进展：①靶抗原及其特异性抗体的临床有效性及安全性得到验证，如靶向Her2 抗原的Herceptin 等；②高效的细胞毒性药物，如：美登素（maytansinoid，DM）、单甲基奥利他汀E（auristatin，MMAE）等；③新的连接臂和交联方法的发展，连接臂是决定抗体偶联药物ADC 药物活性的主要因素之一，它们应该在血液循环中相对稳定，到达靶细胞时通过内化进入细胞内，在溶酶体的低pH 条件下或蛋白酶作用下释放小分子药物。交联方法也从利用赖氨酸的随机连接向利用半胱氨酸的定点交联发展。新型药物拓宽了药物的治疗窗，因此备受关注，成为当前抗体药物发展的热点。持续上升的关注热点和研发投入的加大，使得创新技术也不断涌现。双特异性抗体药物由于其更好的特异性和低毒性，也越来越多地被投入研发管线；新靶点的筛选也一直是抗体药发现的努力方向，但其有效性和安全性需要获得更多的临床数据来验证，同时也有学者提出反向筛选靶向抗原的策略，以期通过反向药理学发现更多的候选靶分子。随着研究的持续深入，更多企业也加强了抗体工程下游技术的优化与整合。如在优化细胞培养条件、改造细胞系、抗体药物的质量控制、细胞培养工艺流程的改进等方面进行了诸多改良和优化。另外，未来基因工程抗体的发展方向将主要集中在通过合理改造抗体序列结构来提高基因工程抗体的药学特性，例如增加抗体药物的稳定性和均一性；通过双特异、多特异抗体以及抗体偶联物技术，赋予基因工程抗体药物新的药效功能；通过Fc 片段改造和糖基化改造，调节原有的效应功能和生物分布特性；通过创造新形式的抗体样分子骨架来发展具有更适宜的生物分布与代谢特性、抗原结合特性、药动学特性的新的“抗体”药物。 仪器信息网：请谈一下相应生物活性鉴定和功能分析的重要性和重要环节是什么？又发挥着怎样的作用？冯彦斌：随着生物制药领域的一大热点，治疗性抗体在治疗肿瘤、自身免疫性疾病、炎症、感染性疾病及其他疾病中取得了重大进展，作为抗体药研发的重点和难点，除了抗体的获取即表达和纯化之外，建立高效、稳定、可信的抗体质量控制分析方法，以及其标准化和先进性是衡量抗体药物相关企业研发能力的重要标准之一。特别是目前研究较为热门的肿瘤特异性抗体功能分析，之前也有提及双特异性抗体甚至多特异性抗体，其最突出的优势就是靶向性强、特异性高和毒副作用低等，所以在其特异性功能分析方向我们也提供足以应对的核心武器。因此，需要关注治疗性抗体的功能研究，通过对特异性抗原结合、抗体介导的细胞毒性作用（ADCC）、补体介导的细胞毒性作用（CDC）、抗体介导的细胞吞噬作用（ADCP）等实验方法进行分析。如在杂交瘤体系构建过程中对于杂交瘤细胞培养、融合、筛选，就可以使用我们的EVOS智能活细胞成像系统对其进行包括增殖及细胞状态的长期成像监测。EVOS M7000 3D数字共聚焦活细胞成像分析系统（点击查看详细参数）对于药理药效、药代及药物安全性评价方面，高内涵筛选分析平台和Varioskan LUX多功能酶标仪，凭借其高效的全自动高通量多靶标筛选功能，以及其后续通过强大多参数数据分析软件多抗体药功能验证进行多维度评价和分析。CellInsight CX7 LZR 激光共聚焦高内涵筛选分析系统（点击查看详细参数）Varioskan LUX多功能酶标仪（点击查看详细参数）Attune NxT流式细胞仪则发挥着更为广泛的作用，通过结合特异性流式抗体对不同种类和亚群的免疫细胞进行鉴定和分析，从而评估机体的免疫功能状态；也可以对细胞的状态和功能进行监测，以实时评估细胞的功能状态和对肿瘤细胞的杀伤作用。Attune NxT流式细胞仪（点击查看详细参数）

仪器信息网讯 2023年9月19-21日，仪器信息网主办的“第六届抗体药物研发与质量分析网络大会”成功召开！本次大会由广东省抗体药物质量控制与临床评价重点实验室，广东省药学会生物医药分析专业委员会，暨南大学药物分析研究中心协办，共邀请到32位来自制药企业、科研院所、高校和仪器企业的专家分享了精彩内容。会议共吸引约1400位行业从业人员参加，出席人数更是创历年新高！回顾本次抗体药物网络大会，在内容上保留了单抗、双抗、ADC药物开发的专题内容，同时贯穿从开发到质量控制、生物工艺剂商业化的全流程都开设了相关会场，直播间里报告专家与听众充分交流，会议也收到“内容质量高”，“收获很大”等良好反馈。同时，仪器信息网也在线征集和听取了听众们对于抗体药物会议内容更多的需求与期待，以保证下一届会议更好地帮助到网友们的工作。应广大网友强烈要求，现将征得本人同意的报告视频整理如下。点击“回放”即可进入视频播放页面。2023/9/19 抗体筛选技术与抗体发现抗体抗原分子识别的计算与应用曹志伟复旦大学生命科学院 系主任/教授（二级）无移液工作站在抗体药物研发领域的主要应用刘健德国耶拿分析仪器股份公司 产品经理回放基于微流控技术筛选肿瘤免疫激动剂抗体张宏恺南开大学 教授回放自动化时代下的抗体药物研发方案刘达潍贝克曼库尔特生命科学 自动化应用专家回放基于单个浆细胞抗体发现平台（SCmab）及应用唐勇暨南大学生物工程学系 系主任/教授回放生物分子互作技术在抗体药物筛选领域的应用王倩北京大学药学院 助理研究员无2023/9/19 单抗/双抗药物开发人工智能助力抗体药物开发李茂华京天成生物技术（北京）有限公司 总经理回放双抗ADC国内外研发进展和趋势杨勇飞百奥赛图（北京）医药科技股份有限公司 总监回放高效低毒双抗构建新策略：多个新型双抗案例分享黄浩旻三生国健药业（上海）股份有限公司 研发副总裁回放抗体药物的生物分析策略和案例分享郎士伟武汉宏韧生物医药股份有限公司 总监回放2023/9/20 ADC药物开发基于纳米抗体的多功能抗体药物平台技术潘利强浙江大学药学院 院长助理/研究员无时空定量观测ADC旁观者效应及肿瘤渗透性研究郭鹏中国科学院基础医学与肿瘤研究所 特聘研究员无高分辨质谱在ADC抗体药物中的全面表征方案张劭阳赛默飞世尔科技中国有限公司 高级应用支持工程师回放双靶向ADC药物DTLL成药性及其与吉西他滨联用治疗胰腺癌克服耐药的研究李亮中国医学科学院医药生物技术研究所肿瘤研究室 研究员,博士生导师回放天然抗体的一步定点修饰及ADC药物研发唐峰中国科学院上海药物研究所 副研究员回放ADC药物研发中的质量分析和生物分析策略唐家澍中科新生命生物科技有限公司 首席科学家回放2023/9/20 抗体表征与质量控制（上）从细胞株筛选到BLA申报不同阶段的质量研究策略及实例分析乔怀耀荃信生物医药 质量研究部总监回放基于表位模拟肽识别策略的抗体药物分析新方法研究王启钦暨南大学 药物分析研究中心副主任/教授无高通量质谱用于抗体药物的结构表征卢颖洪南京理工大学 副教授无应用结构质谱技术拓展蛋白质药物质量属性表征范围王冠博北京大学生物医学前沿创新中心 研究员无2023/9/21 抗体表征与质量控制（下）蛋白类生物制药稳定化策略及案例分析方伟杰浙江大学 研究员无基于在线CE-MS联用技术的复杂生物制品的分析解决方案洪佳莹永道致远科学技术（上海）有限公司 市场经理回放抗体类药物生物学活性研究策略姚雪静荣昌生物制药(烟台)股份 副总裁回放生物药宿主细胞蛋白的表征分析与质控策略黄懿上海探实生物科技有限公司 CEO回放融合蛋白药物糖修饰异质性分析方法应万涛军事科学院军事医学研究院 研究室主任/研究员无2023/9/21 生物工艺与抗体药CMC抗体药物工艺表征研究策略李苗苗夏尔巴生物 纯化工艺研究员回放为出海企业制定后期CMC与商业化计划Kevin Guo 独立顾问 Independent Consultant回放最新LC-MS PAT技术助力早期生物工艺开发罗宇文沃特世科技（上海）有限公司 市场开发经理回放ADC药物的工艺开发和质量控制代波苏州宜联生物医药有限公司 总监回放为制药行业应用量身打造的渗透压仪杨敏安达望（上海）科技有限公司 产品应用专家回放双特异性抗体药物开发和生产的挑战和应对策略李巍巍白帆生物科技（上海）有限公司 CMC高级总监回放抗体制剂与工艺开发关键技术考量梁柳恩广州汉腾生物科技有限公司 制剂开发资深研究员回放

新药无止境，创新不落幕 | 新品助力基因治疗药物的表征史俊霞★ 2020年12月11日，治疗高血脂的inclisiran在欧洲获批上市，不同于罕见病的治疗，而是用于治疗高血脂这类大众疾病的rna药物就格外耀眼了，新冠疫情的肆虐也使得mrna一举成名，未来基因治疗药物开发的潜力是无限的！“基因治疗药物关键考虑因素有哪些？寡核苷酸药物和以mrna为代表的核酸药物研发和生产过程中，如何快速高效表征？辅料的质控如何去做？自动化的smart digest rna酶如何助力质谱完成mrna序列测定？快快参与直播跟专家面对面交流吧！报名参会更有惊喜礼品相送！ 扫描二维码免费报名学习 惊喜礼品 旅行茶具电热水杯塑料储存盒 报告详细介绍 automated workflow for mrnasequencing by high resolution lcms2021.10.21 下午4:00-下午5:00 mrna序列测定的挑战 得到正确的mrna序列的tips smart digest rnase t1 mag bulk 酶切mrna实例分享ken cook，ph.d.thermo fisher scientificeu biopharma expert dr. ken cook has 30 years of experience supporting liquid chromatography and mass .previously dr. cook was a lecturer in biochemistry at the university of newcastle-upon-tyne, uk where he focused on protein biochemistry液相色谱耗材技术在基因治疗和预防药物中的表征2021.10.21 下午5:00-下午6:00 基因治疗药物的概况和药物生产考虑的关键因素 核苷和寡核苷酸药物生产中色谱分析案例分享 核酸药物生产中色谱分析案例分享 药物载体的表征史俊霞赛默飞世尔科技中国有限公司高级产品专家 生物制药领域从业12年，擅长蛋白，抗体，多肽，核酸，疫苗等治疗性药物的表征。主要负责生物色谱柱，微升色谱柱以及纳升色谱柱的应用方案开发.

在“十三五”医药生物产业规划的推动下，我国抗体药物虽迎来发展机遇期，但仍在知识产权、检测标准、成本控制等方面受到制约，亟待大力创新，规范发展，实现产业转型升级。　　抗体药物成生物医药“潜力股”　　抗体是指机体在抗原性物质刺激下，由B细胞分化成浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。通过与抗原(包括外来的和自身的)相结合，抗体可有效清除侵入机体的外源微生物并中和它们所释放的毒素，清除某些自身抗原，以维持机体正常平衡。由抗体物质组成的药物就是抗体药。抗体针对相应抗原具有高特异性和高亲和力的特性，使得其在疾病的诊断和治疗中显示出其他类型药物无可比拟的优势。　　目前全球抗体药物市场增长势头强劲，1997年全球抗体药物市场规模只有3.1亿美元，2010年已达到480亿美元。统计显示，2015年全球抗体药物市场规模已达到680亿美元，且年增长速度较高，如日本抗体医药2014年比2013年度增长幅度高达555亿日元。　　数据显示，在21世纪前十年，抗体药物在全国生物制药中的市场份额从10.5%上升到56.4%，被业内认为是生物制药产业中最为活跃的组成部分，已成为未来生物医药领域发展的“潜力股”。　　在临床实践中，抗体药物也呈现愈发活跃的状态。2013年全球前十大重磅畅销药中，6个都是抗体药物。美国詹森研究开发有限责任公司副总裁威廉R斯特罗尔表示，过去十年间，多种抗体治疗方法和新平台已被设计研发，未来抗体治疗的范围将进一步扩大。“目前一些针对免疫肿瘤学的抗体已被研发，即将进入临床，为癌症患者、免疫功能紊乱、代谢障碍等患者提供更多治疗方法。”　　抗体药产业在全球蓬勃发展的同时，中国内地近年来也持续发力：从2007年抗体药物市场规模的2.3亿元，增长到2010年的10亿元。随着“十二五”、“十三五”医药生物产业规划的推动，制药技术迅猛发展的拉动下，目前国内抗体药物产业发展迅速，已形成以北京、上海、西安、武汉等为中心的产业基地。　　虽然中国抗体药物相对基数小，但是发展潜力巨大。目前，我国国产单抗药物主要为仿制药。在进口药占主导、药品专利到期创造的窗口机遇期，将倒逼国产药比例将有所提升。2015年有640亿美元的生物专利药到期，其中抗体药物占比高达48%。业内普遍认为，中国“仿制”抗体药物将迎来一个发展机遇期。　　国内抗体药产业化发展仍受制约　　虽然国内制药企业在抗体药物研制方面取得有效进展，但仍存在一定制约。　　缺少自主知识产权。中国科学院过程工程研究所国家生化工程技术研究中心首席科学家苏志国指出，目前中国90%以上的抗体药物都是仿制国外，国内缺少自主知识产权的细胞株以及技术，包括设备、材料、工艺等都是采用国外进口，缺乏创新。　　华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室教授谭文松也表示，我国受到产能和成本制约，动物细胞培养生产工艺技术落后，且无血清培养基、生物反应器和原辅料等过分依赖借口，表达产物质量低、标准缺失，且分工不够明确，产学研用合作严重不足。　　纯化工艺成本过高。在生物技术药物产业发展中，生产制造规模和产品纯度的要求越来越严格。随着生物药物被批准和投入生产的数量增多，临床使用量持续加大，对生产制造纯化工艺的效能和成本要求也早随之提高。业内人士指出，目前抗体药物开发中，约60%的资金被投入在下游纯化工艺建设，药物制造成本可达到售价的20%到25%。　　上海交通大学生物制药实验室主任李秀荣认为，下游纯化成本扩张，也为生物制药企业的运转增加了压力。如果生产中可以减少纯化步骤，研究高质量纯化工艺，缩短生产周期，降低生产成本，提高生产效率，生物技术药物制造将会更加“轻装上阵”。　　药物质量检测标准尚未成熟。抗体药物检测标准的建立和验证，是药物最终获得批准并进入生产沟通的核心环节，质量分析检测贯穿全流程。据介绍，目前我国抗体药物质量标准尚未完全成型，主要沿用欧美标准，仍然需要学界和产业界积极配合。　　“除了标准不成熟，更重要的是我们的抗体药物企业都是等着国家检查，缺乏自查自纠的安全意识。”苏志国表示，目前美国已经提出了质量源于设计的概念，但中国的企业相对缺乏对质量重要性和安全性的认识。“安全是根本。如果药物安全无法得到保障，那产业化就将无法实现，国内抗体药物将在全球继续处于跟跑位置。”　　加强创新促国产抗体药产业转型升级　　“我们是生物医药的仿制药大国，进口药比国产药贵几倍。为什么医院碰到疑难杂症，还是青睐进口药?很大一部分原因，就是因为进口药比国产仿制药的有效性更强。”苏志国认为，加强创新、提高核心竞争力，是中国抗体药物发展的未来方向。　　专家表示，大部分抗体药物属于高精尖药物范围，诊疗类似癌症等疑难重症，感冒药等常见药物的“价格战”套路并不适用，应从提高质量、加大创新力度入手，整体提高抗体药物的产业能力。　　苏志国建议，国家、企业、科研单位等宜建立创新联盟，从国家层面鼓励新药创制，鼓励新抗体的研制，并重视知识产权，尽快实现细胞株、装备、消耗材料等内容的研发，以实现技术国产化，起到可以支撑的技术平台作用。　　在抗体药物创新中，动物细胞的大规模培养技术已成为各个国家生物医药产业化的核心竞争点。谭文松指出，我国动物细胞工程行业起步较晚，目前上市产品数量和种类少，工业化生产规模小。建议国家加大力度促进细胞株的代谢工程改造，并加强对细胞培养过程的理解和优化，提高抗体表达速率，开发高产量、高质量的细胞培养工艺，以补齐短板，实现行业转型升级。

纳米药物载体热点应用#本文由马尔文帕纳科GPC应用专家冯慧庆供稿#2022 PNP聚合物纳米药物载体纳米药物载体可实现靶向药物治疗。靶向给药治疗是指供助载体、配体或抗体将药物通过局部给药或全身血液循环而选择性地定位于靶组织、靶器官、靶细胞或细胞内结构的给药系统。在特定的导向机制作用下，纳米药物载体输送药物到特定靶点，发挥治疗作用，可达到药剂用量少、毒副作用低、药效持续、生物利用度高、长时间保持靶目标的有效药物浓度的效果。常见的纳米药物运载体系在药学研究中，正确定位小分子药物的给药位置和控制药物释放曲线是一个关键的挑战。通过小分子药物与聚合物纳米载体偶联起来，在很大程度上实现细胞内精准靶向给药，在实际应用过程中有较好的效果。该方法既可用于控制药物释放曲线，又可用于控制药物释放位置，以最大限度地减少可能的副作用。阿霉素（Doxorubicin）阿霉素(Dox)是一种高效抗肿瘤抗生素，对肺癌、急慢性白血病等多种恶性肿瘤都有很强的细胞毒性，其机制是：通过将自身插入细胞的DNA碱基对中，破坏DNA的双螺旋结构，阻断DNA复制和RNA转录。通常是通过血液循环导入肿瘤细胞实现其抗肿瘤功能。聚谷氨酸(PG)是一种以氨基酸谷氨酸为基础的具有生物相容性的聚合物。试验结果表明Dox和PG的偶联，可以实现靶向给药，提高药物在靶体内的聚集度，延长体内循环时间，降低毒副作用。在本文中我们展示了马尔文帕纳科OMNISEC多检测器SEC如何对PG、Dox 和两个PG-Dox 偶联样品进行表征。这种先进的分析技术可用于研究药物加载效率和药物加载后发生的聚合物结构变化。研究方法 PG和PG-Dox偶联物溶解在在pH7.4的PBS缓冲液中，通过OMINISEC进行样品的分离和检测。OMNISEC是一个多检测器SEC系统，包括示差检测器(RI)、紫外检测器(UV)、光散射检测器(LS)和粘度检测器(IV)。流动相为PBS pH 7.4，含30%(v/v)甲醇水溶液；采用马尔文A6000M和A3000色谱柱分离。OMNISEC多检测器SEC检测结果与讨论 测试PG样品和两个PG-Dox偶联物样品色谱图如图1所示，PG的数值结果见表1。PG样品分离显示一个单峰，测得其平均分子量(MW)约为13KDa。再看两个偶联样品，都分离出和PG具有相似保留体积的多峰。较早洗脱的光散射色谱图(绿色，12-14mL)表明存在一些大的聚集体。而且，这些峰包含明显的紫外吸收信号，表明Dox的存在成功地偶联到聚合物上。图1 PG（A）、PG-Dox 1（B）和PG-Dox 2（C）多检测器色谱图表1 PG测试结果在图2 A中可以看到，在不同进样量下检测游离Dox的UV色谱图，可以看到游离的Dox从柱上洗脱得很晚，实际上已经在整个柱体积之后。这清楚地表明了Dox与色谱柱发生了显著的相互作用，延迟了Dox的洗脱。但从图2 B所示浓度响应曲线可以看出，尽管存在相互作用，回收率仍然接近100%。该校准曲线用来测量存在于PG-Dox样品中的Dox的量。图2 A：不同进样量Dox在UV（490nm）色谱图；B：Dox浓度校准曲线如果我们确定36mL处的峰为游离Dox，这样PG-Dox样品中的相同位置峰也能确定为游离Dox。如图3所示，可以清楚地确定偶联样品含有PG-Dox偶联物和游离Dox。图3 UV色谱图显示偶联样品含有PG-Dox偶联物和游离Dox使用图2 B中的浓度校准曲线，可以计算偶联样品中存在的Dox量。如表2所示，两种PG-Dox偶联物都含有游离的Dox。在一次注射体积中，PG-Dox 1的偶联物中含有大约11μg的Dox，而PG-Dox 2的偶联物中含有大约39μg的Dox。然后，可以计算出样品中注入的总Dox质量和Dox浓度。然后，可以根据溶解物质的质量计算出近似的总样品浓度。这样就可以计算每个PG-Dox偶联物中Dox的近似负载量。由此可以近似地看出，样品2的偶联物中含有的Dox是样品1的三倍。表2 计算两个偶联样品中Dox的负载量我们可以对PG-Dox偶联物进一步表征（其中dn/dc假设分析），计算偶联聚合物的近似分子量、特性粘度和结构数据，如表3所示。表3 PG-Dox偶联物测试结果Mark-Houwink(M-H图)显示了特性粘度作为分子量的函数，是分子间结构差异的直观表示。在溶液中密度较高的聚合物在M-H图上看起来较低，用来研究结构变化，如支化、偶联等结构变化。图4显示了3个样本的M-H图。首先，这两个PG-Dox偶联物M-H曲线显著低于单独的PG。这是我们预料中的，因为药物分子的偶联将增加聚合物在溶液中的表观密度，并且具有更大Dox负载量的样品将进一步向下移动。PG-Dox 1和PG-Dox 2之间的斜率不同，说明Dox负载量可能不是随分子量均匀分布的。图 4 Mark-Houwink曲线图叠加显示PG和PG-Dox偶联物结论 本文展示了如何将多检测器SEC用于高分子聚合物偶联小分子药物传递表征分析的方法。在相同的测试条件下，对原聚合物、游离药物(Dox)和两种偶联产物进行了表征。药物的紫外吸光度使得可以测量负载水平和评估两种偶联物的偶联水平。通过假设分析，偶联分子量和结构也可以测量并相互比较。 小分子药物的输送在实际应用中面临许多挑战，与较大的聚合物偶联是提高药物定位和载药量的一种策略，但要获得可靠和可重复的结果，需要先进的表征方法。通过使用OMNISEC这样的多检测器系统进行分析，研究人员可以更好地表征和研究，从而控制附着在聚合物纳米输送载体上的药物量以及产品的分子量和结构，以实现最佳的药物输送效率。