抗体人源化设计

[font='calibri'][size=13px]人源化抗体和全人源抗体区别[/size][/font][font='calibri'][size=13px]？[/size][/font][font='calibri'][size=13px]义翘[/size][/font][font='calibri'][size=13px]抗体人源化[/size][/font][font='calibri'][size=13px]服务内容[/size][/font][font='宋体']人源化抗体和全人源抗体区别:[/font][font='宋体']根据单克隆抗体的来源不同，可分为鼠源抗体、嵌合体抗体、人源化抗体和全人源抗体。[/font][font='宋体']所谓的全人源单抗，就是基因来源100%都是人源的。不过，事实上全人源单抗也是在小鼠身上产生的，通过把产生抗体相关的人类基因转移到小鼠，此后小鼠体内的抗体结构可以跟人类抗体结构一样。所以全人源抗体直接用人体[/font][font='宋体']细胞制作的抗体，只是抗体结构100%按照人类基因编码而成。[/font][font='宋体']人源化单抗则是大部分来源是人源，同时融合了鼠源成分。近年来，科学家通过基因工程特意将鼠抗的关键有利基因结构保留在人源框架上，起到特殊的作用，就像优化再加工(2l。例如，依奇珠单抗(人源化单抗)中保留了1.8%的鼠源成分，这部分整合了优势有利的基因，成就了依奇珠单抗的高亲和力，其起效速度快可能也和其亲和力高有关。[/font][font='宋体'] [/font][font='宋体'] [/font][font='宋体']义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]：[/font][font='宋体']抗体人源化[/font][font='宋体']非人源性抗体进入人体内会引起严重的机体排异反应，进而影响抗体在临床应用时的安全性和治疗效果。抗体人源化通过基因改造，使鼠源抗体具有与人体内抗体类似的结构，从而逃避免疫系统的识别。抗体人源化经历了从嵌合抗体到CDR移植、SDR移植等技术演变，力求在保持高亲和力、高特异性结合能力的同时克服传统鼠源抗体的免疫原性，在肿瘤治疗等领域具有极为广泛的应用前景。[/font][font='宋体']义翘神州利用CDR置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对鼠源单抗等进行人源化改造，保证人源化程度 95%，为客户提供优质的单克隆抗体人源化服务。[/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体已成为治疗和诊断人类疾病的有效工具。非人源抗体会诱导人类免疫反应，使用非人源抗体产生的中和反应会限制此类抗体在治疗人类疾病的应用。为了克服这个问题，抗体人源化技术应运而生。抗体人源化经历了从嵌合抗体到[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植、[/font][font=Calibri]SDR[/font][font=宋体]移植等技术演变，力求在保持高亲和力、高特异性结合能力的同时克服传统鼠源抗体的免疫原性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]现阶段，常用抗体人源化方法包括以下几种：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①基于框架区同源性的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植与回复突变[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]非人源化抗体人源化的常用方法是互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）移植，即非人源抗体的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区移植到人源抗体框架区上。通常，会选择与非人源抗体框架区同源性最高的人源抗体框架区作为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植的受体。这种方法最主要问题是与特定靶标结合的亲和力会降低乃至丧失。将小鼠抗体的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]环直接移植到人源抗体框架上在某些情况下不会影响抗体亲和力，然而在多数情况下，它会显著降低亲和力。鼠源抗体框架区的一些残基已被证明会影响[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]环的构象以及抗体的亲和力，我们称其为游标区残基。这些残基位于靠近[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区的β折叠。因此，在选择所需的人源抗体框架区后，需要对这些残基进行回复突变，使其保留在人源化抗体中。除此之外，可变区外氨基酸残基的突变也已被用于赋予人源化抗体新的特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②基于胚系基因的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]人类胚系基因可作为鼠源抗体人源化框架区的替代来源。与来源于[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]的框架区相比，胚系基因具有较少的克隆内体细胞超突变。因此，人们认为利用胚系框架的人源化抗体比[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]框架的人源化抗体表现出更低的免疫原性。尽管胚系基因的免疫原性可能较低，但事实上[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]的衍生框架有时更有利。复数研究反映，人源化抗体[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的变化会影响抗体活性与亲和力。如有研究证实，将鼠抗可变区融合到[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]恒定区构建的嵌合抗体对黄热病感染的预防和治疗有效，而具有[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]恒定区的嵌合抗体则不然。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③抗体表面重塑[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体表面重塑是非人源抗体人源化的另一种策略。表面重塑是指对非人源抗体的表面氨基酸残基进行抗体人源化改造。该策略的原则是确定鼠源抗体表面残基的位置，在维持抗体活性并兼顾减少抗体免疫原性的基础上，选用与人源抗体表面残基相似的氨基酸进行替换。通过这种方法人源化的抗体通常表现出稳定性和亲和力的变化很小。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④基于[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]同源性的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以往的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植通常会选择与非人源抗体框架区同源性最高的人源抗体框架区作为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植的受体。[/font][font=Calibri]Hwang[/font][font=宋体]及其同事首次设计了一种基于[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区域同源性的抗体人源化新方法。该方法不使用框架区的同源性来选择人源化抗体框架，关键的鼠源残基也不进行回复突变。使用这种方法可以减少被识别为外源物质的可能性。比起基于框架区同源性的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植，通过该方法改造的抗体亲和力维持更好。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]SDR[/font][font=宋体]移植[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植获得的人源化抗体仍可能在患者中引发免疫性抗独特型（[/font][font=Calibri]anti-Id[/font][font=宋体]）反应。为了最大限度地减少抗[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区免疫反应，可以通过仅将[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]序列中抗原结合活性所必需的特异性决定残基（[/font][font=Calibri]SDR[/font][font=宋体]）移植到人源抗体框架区上来实现抗体人源化。[/font][font=Calibri]SDR[/font][font=宋体]移植的方法更进一步地提升了抗体人源化程度，并尽可能地减少了鼠源[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]中效应[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞表位的数量，从而将抗体可变区潜在的免疫原性风险做到最小化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥其他抗体人源化方法[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]定向筛选或链替换抗体库技术，是利用噬菌体展示的方法，将鼠源抗体重轻链[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区结构域分别顺序或平行地替换为人源化的。该方法为人源化提供了一个强大的工具，可以最大限度地减少人体的免疫原性。值得注意的是，通过噬菌体展示技术产生人源化抗体，即使是全人源抗体，也无法消除全部的免疫原性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对羊驼纳米抗体、鼠源单抗进行人源化改造，保证人源化程度 [/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，为客户提供优质的单克隆[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]。更多抗体人源化改造详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]目前，用细胞工程制备人单抗在技术上和伦理上都存在一些难题，治疗性抗体的开发就集中在具有治疗前景的鼠源单抗上。但是鼠源单抗对人体具有异源性反应，可诱发人抗鼠抗体效应[/font][font=Calibri](Humananti-mouseantibodies,HAMA[/font][font=宋体]反应[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，使得单抗的治疗效果明显滞后。随着基因重组技术的发展和人们对抗体结构认识的深入，研究者们尝试对鼠源性抗体进行改造，致力于在保留与抗原结合的高亲和力的基础上，减少异源性抗体的免疫原性，推动抗体人源化研发的进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]人源化抗体主要指以用基因克隆及[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术对鼠源单克隆抗体改造，重新表达产生的抗体。其大部分氨基酸序列被人源序列取代，基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了其异源性，有利应用于人体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据人源化程度不同，单抗又可分为[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url][/font][font=Calibri](60%-70%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDR(complementarity-determiningregion)[/font][font=宋体]移植抗体[/font][font=Calibri](90%-95%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体：[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体[/font][font=Calibri](chimericantibody)[/font][font=宋体]：第一代人源化抗体。其是在基因水平上将鼠源单克隆抗体的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区和人抗体的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](variableregion,[/font][font=宋体]可变区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]连接，在合适的宿主细胞内表达可得到人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体。嵌合抗体用于人体所产生的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应比鼠源单抗明显减弱[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]另外，人源[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](constantregion[/font][font=宋体]，恒定区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]可更有效地介导人体一些免疫反应，如[/font][font=Calibri]CDC(complement-dependentcytotoxicity,CDC,[/font][font=宋体]依赖补体的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ADCC(antibodydependentcellmediatedcytotoxicity,[/font][font=宋体]抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合抗体虽然可以部分解决异种蛋白的排斥问题，但由于其还含有鼠源[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区，依然有可能会诱发[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应，干扰抗体疗效，诱发超敏反应，在临床上其应用会受到一定限制。因此人们进一步研究鼠源可变区的改造，研发出了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植的人源化抗体，即第二代人源化抗体也是现在普遍所说的人源化抗体[/font][font=Calibri](humanizedantibody)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体是研究者们在嵌合抗体的基础上进一步用人源框架区[/font][font=Calibri](Frameworkregion,FR)[/font][font=宋体]替代鼠源框架区[/font][font=Calibri](FR)[/font][font=宋体]，仅保留了[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个鼠源性[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]，其他全部为人源结构，人源性可达[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]以上。但对于特定的抗原分子，[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]并不能随意替换。多方面研究均证实，具有支持作用的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]不仅为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的构象提供了环境，有时还参与抗体结合。因此简单的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植往往明显降低抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体结合的亲和力，甚至是丧失抗原抗体结合的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]针对这种状况，目前主要有四种策略：[/font][font=宋体][font=宋体]①同源替换，使用与鼠源对应部分具有较大同源性的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行替换[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②表面重塑，对鼠源[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]表面氨基酸残基进行重塑，以使其类似于人抗体[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的轮廓或者[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]型式[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]③补偿变化，改编关键位置氨基酸残基，以补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]④定位保守，人源化单抗以[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]保守序列为模板进行人源化，但保留鼠源单抗可变区的关键氨基酸残基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、全人源抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了彻底消除异源性抗体的不良影响，[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代以后，人们将噬菌体展示技术应用到抗体的表达和克隆上，产生了噬菌体抗体库技术。由此，抗体工程技术进入到了一个新的发展阶段，全人源化抗体的生产和应用也逐渐走向成熟。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]全人源化抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。目前已建立多种方法生产完全人源性抗体，主要有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和[/font][font=Calibri]RNA-[/font][font=宋体]多肽技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]人源化抗体的应用[/b][/font][font=宋体]目前，人源化抗体在肿瘤，器官移植排斥反应，病毒感染，血液性疾病，自身免疫性疾病等方面的治疗和临床诊断中显示出越来越大的应用前景。[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、在肿瘤治疗中的应用[/font][/font][font=宋体]近年来，兴起的分子靶向治疗，是根本意义上的肿瘤特异性治疗手段，是以肿瘤抗原特异性结合的单抗为载体，连接放射性核素，化疗药物等对肿瘤有杀伤作用的负载而成的抗体导向疗法。其靶向性好，毒性小等特点，非常适合肿瘤的内放射治疗。采用该技术用于临床的人源性抗体有治疗转移性乳腺癌的赫赛汀，用于治疗结直肠癌的西妥昔单抗等。[/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、自身免疫性疾病治疗[/font][/font][font=宋体]自身免疫疾病多于自身抗体异常增多有关。很多临床研究发现，一些具有免疫疾病的病毒感染患者，体内病毒水平常伴随某些免疫分子水平的升高而升高，因此很多免疫分子的人源化抗体在此类病毒的治疗中显示出很好的效果。[/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、病毒感染中的应用[/font][/font][font=宋体]病毒感染几乎无特效药，现有的核苷酸类抗病毒药物效果并不理想，且毒副作用大，单抗治疗因其针对性强，和相对比较安全，已越来越多研究者将其应用于抗病毒的治疗中。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]第一代人源化抗体是通过将鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]的可变区与人抗体的恒定区相结合，形成了一种[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url]。尽管这两部分在空间结构上相对独立，使得其独特的抗原亲和力得以保持，但由于嵌合抗体中仍然包含鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]的可变区，因此在应用时仍可能引发强烈的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了克服这一问题，科学家们进一步进行了改进，将鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区中的相对保守的骨架区（[/font][font=Calibri]Framework region, FR[/font][font=宋体]）替换为人的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]，而仅保留抗原结合部位的互补决定区（[/font][font=Calibri]Complementarity-Determining region, CDR[/font][font=宋体]）。这种改进使得抗体真正实现了人源化。然而，[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]作为抗体的脚手架，不仅为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]提供了空间构象环境，有时还参与抗体结合位点正确构象的形成，甚至与抗原的结合。因此，简单的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植往往会导致原抗体亲和力的丧失或降低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了解决这一问题，目前科学家们已经探索出了四种策略，旨在优化[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]之间的相互作用，以恢复或提高人源化抗体的亲和力。这些策略的实施将有助于进一步提升抗体人源化的效果，为医学研究和治疗提供更多的可能性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]人源化抗体构建原则与策略[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]模板替换[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在使用与鼠对应部分有较大同源性的人抗体[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]替换鼠[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]时，通常有两种途径可供选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第一种途径是采用同一个（或少数几个）具有已知晶体结构数据的人源抗体可变区框架（如[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]中的[/font][font=Calibri]NEW[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]KOL[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]中的[/font][font=Calibri]REI[/font][font=宋体]等）作为基本模板，通过序列比较与分子模建，确定人、鼠间存在种源差异的氨基酸残基，特别是与鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]密切作用的氨基酸残基，在替换过程中予以保留。为了确保[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的空间构象得以维持，需要特别关注原来抗体[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]下方的堆积残基以及周围的残基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这种方法的优势在于，已知的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]晶体结构为残基替换提供了明确的信息。然而，其不足之处在于可能难以保持鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的天然构象，从而可能导致抗体亲和力的降低或丧失。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第二条途径是在已有的抗体序列库中搜索与鼠[/font][font=Calibri]McAb FR[/font][font=宋体]具有最大同源性的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行替换。在选择同源的人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]时，早期的研究者倾向于将[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]作为一个整体来考虑，以寻找最高同源的人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]，理由是同一个抗体的[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]在折叠上更能匹配。然而，后来的研究者则认为将[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]分开考虑，分别寻找最高同源的对应序列，可以更好地保持[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]原来的框架，为鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]提供整体上最类似的环境。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同源替换的主要考虑因素是确保鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]在此背景下具有类似的折叠环境，从而维持其原来的构象。同样需要借助分子模建来提供[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植后可能缺失的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]关键残基的信息。这种方法的优点在于能够减少需要更改的氨基酸数目，更好地保持[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]所需的空间环境。然而，其不足之处在于选择的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]可能并无结构数据可供参考，因此无法提供有效的关键残基信息。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]表面重塑[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]的表面残基进行镶饰（[/font][font=Calibri]veneering[/font][font=宋体]）或重塑（[/font][font=Calibri]resurfacing[/font][font=宋体]），以使其轮廓（[/font][font=Calibri]profile[/font][font=宋体]）或型式（[/font][font=Calibri]pattern[/font][font=宋体]）更加类似于人抗体的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]。这一策略的前提是，鼠[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区的免疫原性主要源自其表面残基。由于残基的运动性和溶液可及性是成为抗原决定簇的关键因素，因此表面残基很可能携带全部或绝大部分的抗原表位。在定义溶液可及性表面残基时，我们采用的标准是：构成该残基的全部原子的[/font][font=Calibri]30%[/font][font=宋体]以上是溶剂可及的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]尽管人、鼠间抗体可变区表面暴露残基的精确型式存在差别，但大多数表面位置的残基类别具有强烈的倾向性。仅仅考虑这种表面型式，我们就可以区分抗体可变区的不同组别。这表明抗体可变区的表面至少与框架区核心一样保守，而表面型式的差异则是人鼠间抗体的主要区别。根据对现有抗体晶体结构数据的分析结果统计，人、鼠间抗体可变区残基在序列配对位置上的相对溶剂可及性分布保真度高达[/font][font=Calibri]98%[/font][font=宋体]。这意味着在异种间诱导免疫反应的残基是由其余的种特异性溶液可及表面残基引起的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过将鼠特异性表面残基替换为人源性的残基，我们可以模拟人源抗体的表面轮廓，从而逃避人体免疫系统的识别，达到人源化的目的。这种策略可以在不进行同源模建的情况下，基于序列同源分析，选择与鼠表面残基暴露类型最相匹配的人源型式进行。然而，需要注意的是，如果要改变的残基在侧链大小、电荷、疏水性或有可能形成氢键从而影响到[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的构象时，则不应进行改变。这是因为改变的残基较少，有助于减少[/font][font=Calibri]CDR-FR[/font][font=宋体]之间的不相容性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]作为一种较新的人源化途径，该策略仍在逐步成熟阶段。关于鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]在人体引起的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应是否完全由其表面暴露残基引起，还是由表面残基与内部残基的共同贡献所致，这涉及到抗体产生最基本的免疫学机制，目前仍是研究的热点。通过深入探索这一策略，我们有望为抗体人源化提供更多有效的解决方案。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]补偿变换[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在选择人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行改变时，我们重点关注那些与[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]有相互作用、与抗体的亲和力有密切关系或对[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]空间结构折叠起关键作用的残基。这些改变旨在补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植可能带来的影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据立体结构数据和同源性分析，我们了解到在抗原结合、稳定[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]构象和[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]折叠方面，构成抗体[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]的残基并不具有相同的重要性。基于这一点，我们可以将这些残基分为三类：低风险性残基，这些残基暴露于溶剂中，对抗原结合和抗体结构的贡献较少。替换这些位置的残基可以降低免疫原性，而几乎不影响抗体的亲和力；高风险性残基，这些残基直接参与抗原结合、稳定[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]构象或[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]折叠。为了保持人源化抗体的活性，我们应尽量避免在这些位置进行替换；中度风险性残基，对于这类残基，我们需要谨慎处理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中的高风险性残基和某些中度风险性残基，统称为非[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区补充调控残基。它们分布于线性序列的不同位置，为每个[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]回折提供了合适的“平台”。这些残基的形状和侧链大小协同决定了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的基本构象，并影响其抗原结合的特异性。因此，在将[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植到人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]后，我们必须将人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中的这些位置替换成鼠源非[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区补充调控残基，以补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植带来的影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这种分析方法使我们能够制定具有选择性和针对性的人源化突变方案，避免了盲目的、可能导致失败的探索。此外，通过在中度风险性残基中进行变化，我们还有可能提高人源化抗体的亲和力。然而，需要注意的是，对残基的分类需要基于晶体数据和三维结构，以确保提供准确的标准。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]定位保留[/font][font=Calibri](positional consensus method)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]人源化[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]保留了鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区中参与抗原结合的关键氨基酸残基，这包括了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]以及[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中的一些至关重要的残基。尽管我们可以将鼠框架区的其余部分从某个人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中移植过来，但无可避免的是，这样得到的人源化抗体序列与人抗体的保守序列（[/font][font=Calibri]consensus sequences[/font][font=宋体]）在某些位置上仍会存在差异。这些非典型残基，源自个体型抗体在亲和力成熟过程中的体细胞突变，应用于病人后可能会诱导免疫反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此，一个更为理想的途径是，以人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]的保守序列为模板进行人源化设计。由于人抗体轻、重链可变区不同亚类的保守序列存在差异，我们需要寻找一种合适的方法来确定最适合的保守序列。最简位置模板（[/font][font=Calibri]minimal positional template[/font][font=宋体]）为我们提供了确定这些关键位置的方法，它揭示了抗体可变区中哪些位置对于维持抗原结合结构域的完整性是绝对必要的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在选择人框架区时，我们首先会从现有的人源抗体保守序列中搜寻与鼠框架区最为类似的序列。接着，根据最简位置模板，我们确定鼠可变区的关键位置残基。最后，我们将保留所有这些关键位置，而将其余部分进行人源化改造。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]上述人源化的四种策略，均以保持抗体的亲和力为核心目标，以降低免疫原性为最终目的，各具特色。总的来说，抗体人源化设计的关键步骤包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①从同源抗体或共同序列抗体中选择适合的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②根据已发布的研究信息，确定[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中起关键作用的氨基酸残基。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③以鼠[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区的立体模型为指导，进行精确的设计和改造。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在设计过程中，同源分析和分子模建提供了必要的辅助手段。尽管存在一些一般性原则，但在对某一具体的鼠[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]进行人源化时，仍需进行具体的分析和调整。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合抗体：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

实验室常用的ELISA方法可以用来测定抗体，也可以用来测定抗原。我们可以根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。下面就让上海劲马ELISA试剂盒为您分享其中关于双抗体夹心法检测抗原的操作步骤。双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：1) 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2) 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3) 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。劲马ELISA试剂盒小提示：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

[font=宋体][font=宋体]人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体：利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将鼠源单抗的轻链、重链可变区插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转化哺乳动物细胞进行表达所产生的单克隆抗体。人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体的人源化程度可达到[/font][font=Calibri]70%[/font][font=宋体]，完整的保留了鼠源单抗的可变区及亲本活性，人抗体恒定区的引入则降低了免疫原性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]人鼠嵌合抗体基本原理[/font][/b][font=宋体][font=宋体]是从分泌某种鼠单抗的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]（轻链可变区）和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]（重链可变区），经过基因重组分别与人的[/font][font=Calibri]CL[/font][font=宋体]（轻链恒定区）和[/font][font=Calibri]CH[/font][font=宋体]（重链恒定区）区基因按照一定的方式相拼接，克隆到表达载体中构建鼠[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]人轻重链基因表达载体，并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]对于其他类型的人源化抗体，其优势在于，技术路线简单，易于操作；抗体完整性好，在体内滞留时间长；鼠源抗体的亲和力和特异性都得到保留，在临床上得到了良好的反应。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]构建人鼠嵌合抗体主要包括：克隆鼠抗体可变区基因，钓取人抗体恒定区基因，拼接鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因以及构建载体和宿主细胞。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]人鼠嵌合型单克隆抗体制备优点：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①不仅保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力，而且使鼠源性成分减少 [/font][font=Calibri]70%[/font][font=宋体]左右；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②其人源[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能有效介导生物学效应功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（[/font][font=Calibri]Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）、补体依赖性细胞毒作用（[/font][font=Calibri]Complement dependent cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）等；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③能自由地选择抗体的型、亚型、类、亚类、大小、结构域及添加糖基化位点等，以利用其不同的生物学特点及理化特性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④由高效真核表达载体和人抗体恒定区组成的嵌合抗体表达“盒子”可以容许插入不同的鼠单克隆抗体的可变区，缩短操作和研制周期；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤操作相对简单。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody]嵌合抗体[/url]主要有三种类型：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、嵌合[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前嵌合抗体的研究主要集中在嵌合[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Immunoglobulin G[/font][font=宋体]）抗体。其构建基本原理是从生产某种鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中得到目的抗体[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区（[/font][font=Calibri]variable region[/font][font=宋体]）基因，再与人类的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区（[/font][font=Calibri]constant region[/font][font=宋体]）基因重组并克隆到合适载体中，然后转入受体细胞表达（如图[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在构建嵌合抗体时应根据不同目的选择不同的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]片段。这是因为不同类型的人抗体[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区与补体和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]fragment crystallizable,Fc[/font][font=宋体]）相互作用的能力以及引发细胞溶解的功能不尽相同。在体内免疫系统中，抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段和效应细胞相互作用，发挥特异的生物学功能。例如[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Immunoglobulin E[/font][font=宋体]）可介导炎症反应等，[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]活化补体的能力强，[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]的补体活化能力比[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]强，且在[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]作用（[/font][font=Calibri]antibody dependent cell mediated cytotoxicity[/font][font=宋体]）触发能力上也比[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]强。在与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体的结合能力上[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]比较强，[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]次之，而[/font][font=Calibri]IgG2[/font][font=宋体]几乎检测不到。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、嵌合[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]F(ab')2[/font][font=宋体]抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]嵌合[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]antigen-binding fragment, Fab[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]F(ab')2[/font][font=宋体]（具有两个抗原结合表位的片段）抗体的优势就是渗透力强。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]嵌合抗体制备原理为：将功能性抗体[/font][font=Calibri]L,H[/font][font=宋体]链的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区基因与人的轻链[/font][font=Calibri]k[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]链[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]进行重组，克隆到表达载体中，在转入宿主细胞表达。不过对于大多数该类型的抗体来说，由于亲和力较低，分子量小，容易被肾小球过滤而从血液中消失，因此大多数不适合单独使用于临床治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/chimeric-antibody-production-service][b]嵌合抗体生产服务[/b][/url]详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/chimeric-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对羊驼纳米抗体、鼠源单抗进行人源化改造，保证人源化程度 [/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，为客户提供优质的[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]单克隆抗体人源化服务[/b][/url]。详情可关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体]在生物学和医学领域，抗原与抗体之间的结合反应是极为重要且复杂的过程。这种反应不仅关乎免疫系统的正常运作，而且在诊断、治疗等多个领域具有广泛的应用。本文将详细探讨抗原抗体结合反应的原理及其背后的生物学意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一、抗原与抗体的基本概念[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗原，通常是指能够刺激机体产生特异性免疫应答的物质。它们可能是外来的微生物、毒素，也可能是机体自身的异常成分。抗体，则是免疫系统在受到抗原刺激后产生的特异性免疫球蛋白，能够与抗原发生特异性结合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二、抗原抗体结合的结构基础[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗原抗体之间的结合，依赖于它们分子间的结构互补性和亲和性。这种互补性主要源于抗原的表位和抗体的结合部位之间的匹配。抗原的表位，即其表面能够与抗体结合的区域，通常是特定的化学基团或空间构象。而抗体的结合部位，即其能够与抗原结合的区域，由重链和轻链上的可变区组成，形成了特定的空间结构，能够与抗原表位进行精确的结合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]三、抗原抗体结合的动力学过程[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗原抗体结合反应通常可以分为两个阶段。第一阶段是抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应速度极快，仅需几秒钟即可完成。这是因为抗原抗体之间的结合是高度特异性的，一旦找到合适的配对，它们会迅速结合形成抗原抗体复合物。第二阶段是可见反应阶段，此时抗原抗体复合物在环境因素的影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀、溶解等肉眼可见的反应。这一阶段的反应速度较慢，往往需要数分钟至数小时。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]四、抗原抗体结合反应的意义[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗原抗体结合反应在生物学和医学领域具有广泛的应用。在免疫学中，它是机体免疫系统识别和清除外来抗原的基础。在医学诊断中，利用抗原抗体反应可以进行疾病的快速、准确诊断。例如，利用单克隆抗体技术可以检测乙型肝炎等病毒。此外，抗原抗体反应还被广泛应用于治疗领域，如利用载药单克隆抗体进行肿瘤的靶向治疗等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]五、总结[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗原抗体结合反应是生物学和医学领域的重要反应之一，其原理涉及到分子间的结构互补性和亲和性、反应动力学等多个方面。对这一反应的研究不仅有助于我们深入理解免疫系统的运作机制，也为疾病的诊断和治疗提供了新的方法和手段。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function][b]抗体的结构和功能[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

内容很全很细，有工作与抗原抗体相关的同仁们都可以看看

[font='calibri'][size=13px]重组抗体的制备方法[/size][/font][font='calibri'][size=13px]及过程[/size][/font][font='calibri'][size=13px]分享[/size][/font]重组抗体，也称为基因工程抗体，是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组，并构建在质粒上，再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应，使得抗体实现人源化，使抗体的效能更为完善抗体生产的三个阶段抗体广泛应用于疾病的诊断和治疗，是研究和应用领域最有价值的研究对象之一。抗体制备技术经历了三个阶段，第一阶段，通过抗原免疫高等动物，从动物的血清中纯化获得抗体，该抗体为多克隆抗体；第二阶段，杂交瘤技术问世，通过将无限增殖的骨髓瘤细胞与产生抗体的B淋巴细胞融合生产出针对单一抗原决定簇的单克隆抗体；第三阶段，通过基因工程技术改造动物生产的单克隆抗体的基因序列，使单抗性能更加符合应用需要，并能通过大规模细胞培养获得，该阶段抗体为重组抗体。重组抗体有哪些类型？重组抗体分为五大类：嵌合抗体、人源化抗体、全人源化抗体、小分子抗体、双特异性抗体嵌合抗体抗体的恒定区和可变区分别来源于不同的物种，常见的嵌合抗体是将动物源抗体的可变区与人源抗体的恒定区结合。嵌合抗体的特点：1. 抗体可变区为动物源区域，保留了抗体对抗原的特异性和亲和性 2. 抗体有近70%的部分是人源的，很大程度上降低了抗体的异源性，其中人源性Fc片段能有效介导ADCC（抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应）和CDC（补体依赖的淋巴细胞毒效应）作用；3. 可以根据需要选择不同的抗体类型、亚型、大小、修饰位点等；4. 通过成熟的质粒构建体系及蛋白表达平台，可高效大量的获得目的抗体。嵌合抗体的生产方式：①免疫动物，获得杂交瘤细胞②杂交瘤细胞测序，获得抗体可变区序列③选择人源恒定去亚型④构建重组表达质粒⑤转入合适的宿主细胞表达⑥抗体纯化及检测人源化抗体将人抗体的CDR区域替换成动物源单抗的CDR，也称CDR嫁接抗体。CDR：即互补决定区（complementarity－determining regions），抗体每个可变区含有三个氨基酸顺序超变区，这些超变区是抗原的结合位点，与抗原决定簇结构互补，被称为CDR。可变区里其他氨基酸作为骨架支持部分，称为框架残基（Framework Residue）。人源化抗体特点：1. 人源化抗体在嵌合抗体的基础上将抗体中人源性区域进一步扩大，人源化比例可达80%-90%，使得抗体在应用过程中降低人体的异源排斥反应；2. CDR与抗原结合过程受到FR区域的影响，动物源CDR与人源Fr结合，可能会改变抗体原有CDR的空间结构，进而降低重组抗体与抗原的亲和力。在设计人源化抗体时，可将人源FR区域的关键性氨基酸残基更改为动物源FR，以减少对CDR结构域的影响。人源化抗体生产方式：重组抗体的类型及生产流程全人源化抗体采用基因敲出技术将动物抗体基因敲除，造成动物抗体基因缺失，将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，移至抗体基因缺失动物中，通过动物表达人类抗体，达到抗体完全人源化。采用动物基因敲除和插入的方式获得抗体，操作难度大，成本高，并且依然存在人体排斥反应，噬菌体展示技术应运而生。将人抗体的可变区基因插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，人抗体可变区随噬菌体外壳蛋白的表达而表达，同时，随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面。再通过展示库筛选和细胞表达获得全人源抗体。重组抗体的载体如何选择？全人源化抗体特点:全人源化抗体对人体的免疫原性极小，是抗体药研发最重要的对象，在疾病和癌症的治疗中具备广泛的应用，非常具备研究和生产价值。全人源化抗体生产方式:重组抗体的类型及生产流程小分子抗体小分子抗体顾名思义是分子量较小的抗体，一般为完整Ig的一部分，现有的小分子抗体有Fab、Fv、 scFv、SdAb、微抗体、纳米抗体。重组抗体的类型及生产流程小分子抗体特点:小分子抗体分子量大小只有完整Ig大小的1/12~1/2，穿透性强，同时具备抗原亲和力，并且可通过基因工程系统来操作编辑，通过各种重组蛋白表达系统来大量生产。小分子抗体生产方式:重组抗体的类型及生产流程双特异性抗体具备两种特异性抗原结合位点的抗体，可同时与两种抗原结合，例如可同时结合靶细胞（癌症细胞）和效应细胞（T细胞），定向介导效应细胞对靶细胞的杀伤作用，是抗体药物领域的重要研究对象，在肿瘤治疗方面具有卓越的成效。双特异性抗体特点:1. 拥有两种特异性抗原结合位点，作为抗体药物，是治疗肿瘤的“抗体炸弹”，比普通的抗体药具有更强的导向性、更强的治疗效果，是最为理想的肿瘤治疗药物；2. 自然状态不存在，只能通过人工制备获得。双特异性抗体生产方式:[align=left][font='calibri'][size=13px]义翘神州推出[/size][/font][font='calibri'][size=13px]大规模重组抗体生产服务[/size][/font][font='calibri'][size=13px]，服务周期大概在4-10周；[/size][/font][/align][size=13px]服务内容[/size][size=13px]可以查看：[/size][url=https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service][size=13px]https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service[/size][/url][size=13px] 里面有更详尽的内容服务。[/size]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview][b]重组抗体[/b][/url]，也被称为重组免疫球蛋白，是通过基因工程技术将抗体的基因在合适的宿主细胞中表达并生产出来的一类抗体。与传统的多克隆抗体和单克隆抗体相比，重组抗体具有更高的特异性和亲和力，并且可以针对特定的抗原表位进行设计和优化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组抗体的类型包括嵌合抗体、双特异性抗体、抗体片段和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白等。下面一起来看一下他们各种的应用：[/font][/font][font=宋体]①[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]1975[/font][font=宋体]年，杂交瘤技术的发现彻底改变了抗体研究和临床开发。然而，鼠源性抗体的疗效受到人抗鼠抗体（[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]）效应的限制，鼠源性单抗对人体具有异种蛋白的免疫原性 [/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]在人体内半衰期较短。[/font][font=Calibri]1984[/font][font=宋体]年，研究人员通过基因工程构建了第一个嵌合抗体，也是公认的第一种重组抗体，以降低鼠源抗体在人体内的免疫原性。其中，约[/font][font=Calibri]30%-35%[/font][font=宋体]的分子来源于小鼠的抗体序列，约[/font][font=Calibri]65%-70%[/font][font=宋体]来源于人的抗体序列。所得嵌合抗体保留了亲代小鼠抗体的抗原结合能力。抗体嵌合是开发治疗性人源化抗体的第一步。义翘神州采用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植技术和计算机辅助分子建模，提供高质量的单克隆抗体人源化服务，成功率高，人源化程度[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②抗体片段[/font][font=宋体][font=宋体]每一个完整的免疫球蛋白（[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]）分子包含通过二硫键连接的两条重链和两条轻链。抗体片段（如[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]）体积小，比其全长抗体具有更好的组织或肿瘤穿透力。因此，它们在免疫治疗方面具有巨大的前景，尤其是在实体瘤方面。此外，它们的半衰期也较短，可用作放射性显像剂。然而，由于缺乏[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，它们不能引起[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]介导的抗体效应功能，如抗体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）和补体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]起初采用酶解法对[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体进行片段化。胃蛋白酶作用于铰链区二硫键所连接的两条重链的近[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端，水解产生被称为[/font][font=Calibri]F(ab[/font][font=宋体]’[/font][font=Calibri])2[/font][font=宋体]的二价[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段。然后，通过木瓜蛋白酶将该片段裂解为两个相同的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段。然而，酶解法限制了可制备的抗体片段类型，而且不适合工业化大规模生产和纯化。随着抗体工程技术的进步，这些问题可以通过重组生产抗体片段来解决。抗体基因克隆测序成功后，可通过瞬时转染在原核表达系统（如大肠杆菌）和哺乳动物系统（[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞）中表达抗体片段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凭借丰富的重组生产经验，义翘神州建立了高通量[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]表达平台，交付了多个[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]抗体生产项目，总体成功率超过[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]。除了常见的[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]形式，我们还可以表达双特异和多特异[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]。此外，义翘神州还可以表达其他各种高特异性和亲和力的抗体片段，如[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url][/font][font=宋体][font=宋体]与常规单克隆抗体不同，双特异性抗体（[/font][font=Calibri]bsAb[/font][font=宋体]）具有两个结合位点，可识别同一抗原上两个不同抗原或表位。由于这一特性，双特异性抗体备受研究者和制药业的关注。截止目前，美国食品药品监督管理局（[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]）已批准了[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]种双抗药物，而且[/font][font=Calibri]160[/font][font=宋体]多种双抗正在进行临床试验，用于治疗癌症、糖尿病、阿尔茨海默病和其他疾病。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]起初，双特异性抗体通过四源杂交瘤技术制备，但这对下游抗体生产和纯化构成了巨大的挑战。随着过去[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]年重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术的发展，出现了几种双特异性抗体形式，以适应所需的靶标[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]产品特征。为了解决重链错配问题，[/font][font=Calibri]Genentech[/font][font=宋体]首先提出了“[/font][font=Calibri]knob-into-hole[/font][font=宋体]”（[/font][font=Calibri]KiH[/font][font=宋体]）技术，该技术通过对[/font][font=Calibri]CH3[/font][font=宋体]结构域进行改造，在每条重链中创建一个“[/font][font=Calibri]knob[/font][font=宋体]”或一个“[/font][font=Calibri]hole[/font][font=宋体]”，以诱导异源二聚化。同样地，研究人员也采用了[/font][font=Calibri]common light chain [/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CrossMab[/font][font=宋体]等其他技术来解决轻链错配问题。表达双特异性抗体主要在哺乳动物细胞中进行。由于单克隆抗体和双特异性抗体之间的各种结构相似性，许多已建立的常规单抗纯化工艺也可适用于双特异性抗体。（参见另一篇文章：“双特异性抗体：抗体治疗中的新星”）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白（又称[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]嵌合融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc-Ig[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]标签蛋白）是一种同源二聚体，由免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与具有生物学活性的蛋白分子组成。虽然单克隆抗体是治疗性生物制剂开发的重点，但[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白也是一类成功的生物制药产品，至少有[/font][font=Calibri]13[/font][font=宋体]种药物获得了欧洲药品管理局（[/font][font=Calibri]EMA[/font][font=宋体]）和美国[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的批准。除治疗应用外，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白还是基础研究中的检测试剂，包括流式细胞术、免疫组织化学和蛋白结合试验。事实上，与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的连接可以提高一些结合蛋白的溶解度和稳定性。鉴于其大小和对糖基化的需求（大多数是糖蛋白），[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白主要在哺乳动物表达系统中产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前，抗体工程技术取得了一定的进步，这极大地促进了各种形式重组抗体的开发，用于疾病治疗。[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]已批准了[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]多种抗体药物，目前有多种抗体处于临床后期开发阶段。此外，重组抗体还可用于许多研究应用：蛋白免疫印迹（[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]）、免疫组织化学（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）、免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）、流式细胞术（[/font][font=Calibri]FC[/font][font=宋体]）和表面等离子体共振（[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，重组抗体是基因工程技术的重要应用之一，其类型多样，具有广泛的应用前景。随着基因工程技术的发展，重组抗体的生产成本和安全性问题也将得到进一步优化，为临床治疗和科学研究提供更多有效的工具。同时，我们也应该认识到重组抗体的潜在风险和挑战，加强对其安全性和有效性的评估和监管，以确保其能够更好地服务于人类的健康事业。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多重组抗体详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。一、关于特异性的选择：特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。1、蛋白特异性：针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。2、种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。3、实验方法特异性：目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。4、标记物的特异性一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。

[font=宋体]抗体是体液免疫应答的主要效应因子，存在与血液和组织中，它们能特异性的结合或识别入侵的病原体，一次构成机体预防系统的重要组成部分。抗体具有相似的结构，由两条相同的重链和和轻链组成的对称结构。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体的生产目前最常用的两种方式是利用哺乳动物细胞生产的重组抗体和免疫动物生产的普通抗体。传统的免疫动物生产的抗体，是获取动物血清纯化得到的，如果用于药用人体往往会产生排异反应。利用重组技术生产抗体不仅能够满足抗体的大规模生产需求，同时，重组抗体药物的发展已成为目前生物制药的主流。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组抗体的发展经历了鼠源单抗（[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]），人鼠嵌合抗体，人源化抗体和全人抗体四个阶段。下面从抗体生产和抗体技术两方面入手，系统的阐述重组抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重组抗体技术：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]Fab[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/fab-antibody-production][b]Fab[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/fab-antibody-production][b]片段[/b][/url]（[/font][font=Calibri]Fragment of antigen binding[/font][font=宋体]）也叫做抗原结合片段，是抗体结构中可以与抗原结合的区域。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段由一条完整的轻链与重链的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]结构域（[/font][font=Calibri]Fd[/font][font=宋体]段）组成，分子量约[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]104[/font][font=宋体]。轻链与重链均存在一个恒定区与一个可变区，轻重链间存在二硫键链接。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]scFv[/font][/font][font=宋体][font=宋体]单链抗体（[/font][font=Calibri]single-chain variable fragment[/font][font=宋体]， [/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]）是由抗体重链的下载可变区与轻链的可变区在一段肽链的连接下构成的小分子，是具有抗体活性的最小功能结构单位。单链抗体可以由表达系统进行表达，也可以用噬菌体展示技术进行制备。由于其分子质量小，穿透力强，半衰期短，免疫原性低等特点，在疾病临床诊断、治疗、预防等方面具有重要作用和广阔的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③双特异性抗体[/font][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体（[/font][font=Calibri]bispecific monoclonal antibody, BsAb[/font][font=宋体]）是一种人工制作出来的可以同时结合两种不同抗原的特殊抗体。双特异性抗体在自然状态下不存在，只能通过人工制备。研究双特异性抗体，对于癌症的免疫治疗有着重大的意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白是指利用基因工程技术将免疫球蛋白（[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）的下载[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与某种具有生物学活性的功能蛋白分子融合而产生的新型蛋白。具有生物学活性的功能蛋白可以是细胞因子、毒素、受体、酶、抗原肽等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白不仅可发挥所融合蛋白的生物学活性，还具有一些抗体的性质，如可引起抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）、补体依赖的细胞毒作用（ [/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）与抗体依赖细胞介导的吞噬作用（[/font][font=Calibri]ADCP[/font][font=宋体]）等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]蛋白类药物在血浆内半衰期较短，为了达到治疗效果需要大剂量给药，这样会造成严重的副作用，给患者造成巨大的负担。将功能蛋白与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段融合，可以延长药物在血浆内的半衰期，降低药物的免疫原性，在疾病的诊断与治疗方面有重要的意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化[/b][/url][/font][font=宋体][font=宋体]抗体人源化的发展经过三个阶段，从人鼠嵌合[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]人源化抗体和全人抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-affinity-maturation-service][b]抗体亲和力成熟[/b][/url][/font][font=宋体][font=宋体]抗体亲和力成熟[/font][font=Calibri](antibody affinity maturation)[/font][font=宋体]下载是指机体正常存在的一种免疫功能状态。在体液免疫中，再次应答所产生抗体的平均亲和力高于初次免疫应答。这种现象称为抗体亲和力成熟。机体的这种功能状态是长期进化和对外界环境不断适应的结果，对机体防御和维持自身免疫监控有着十分重要的意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑦抗体亲和力测定[/font][font=宋体]抗体与抗原表位或抗原决定簇之间的结合力称为抗体亲和力，下载其本质是一种非共价作用力，包括对氨基酸之间的吸引力，氢键，疏水性作用力等。抗体亲和力体现了一个抗体分子和一个半抗原分子或抗原分子的一个决定簇起反应的能力。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑧[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display][b]噬菌体展示技术[/b][/url][/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体展示技术[/font][font=Calibri](phage display technology)[/font][font=宋体]的本质是一种筛选技术。下载将不同的外源基因分别插入噬菌体载体中，随着噬菌体的传代，外源蛋白会展现在噬菌体表面，形成噬菌体文库。随后用特定蛋白对噬菌体文库进行筛选，便可快速的得到与该蛋白具有高度亲和力的抗体。筛选出的抗体可以进一步用于生物学功能研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[/font][font=Calibri]CRO[/font][font=宋体]服务详情。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/custom-services-cro[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font]

现在不管 国外 还是国内，在生物原料方面，成品的抗原抗体以及定制的抗原抗体等都发展得越来越好。抗体抗原种类可谓是五花八门，琳琅满目，而且非技术人员选择采购也很麻烦。这里列举少数最热门的一部分

[font=宋体][font=宋体]抗体纯化的原理是依据抗体的生物学特征，如抗体分子的电荷、大小、疏水性等，选用合适的方法将目标抗体分子从初始混合物中分离纯化出来。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体纯化方法包括[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]亲和层析法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法和疏水作用层析法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]等。选用何种纯化方法取决于抗体的来源、时间、成本以及抗体的最终用途等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]抗体纯化的方法及步骤[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体是一类免疫蛋白，可识别并结合特定抗原，在生物研究以及临床应用中，纯化得到高质量的抗体十分重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一、凝胶过滤层析法[/font][/font][font=宋体][font=宋体]凝胶过滤层析法的原理是基于抗体分子的不同大小，利用不同孔径的凝胶过滤介质将目标分子（抗体）与较大分子（如蛋白质等杂质）分离开来。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的凝胶柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]使用缓冲液进行洗脱，较大分子无法通过凝胶柱而流出。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]目标抗体分子大小适中，可通过凝胶柱并被保留下来。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从凝胶柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析法[/b][/url][/font][/font][font=宋体][font=宋体]亲和层析法的原理是利用抗体分子与抗原之间的特异性结合来实现目标抗体的纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先包含特异性结合配体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的亲和层析柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]目标抗体与配体之间发生特异性结合。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]使用洗脱缓冲液将非特异结合的组分洗脱掉。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从亲和层析柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、离子交换层析法[/font][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析法的原理是利用目标抗体分子与离子交换柱中固定的离子之间的相互作用来实现纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的离子交换柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]使用缓冲液进行洗脱，使与固定离子相同电荷的分子无法通过离子交换柱而流出。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]目标抗体由于表面电荷不同，能够通过离子交换柱被保留下来。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]或盐浓度等条件，将目标抗体从离子交换柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、逆向相色谱法[/font][/font][font=宋体][font=宋体]逆向相色谱法的原理是利用目标抗体分子与逆向相色谱柱中固定的疏水基团之间的相互作用来实现纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的逆向相色谱柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]使用缓冲液进行洗脱，使疏水性较低的分子无法通过逆向相色谱柱而流出。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]目标抗体由于表面疏水性不同，能够通过逆向相色谱柱被保留下来。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液改变溶剂极性等条件，将目标抗体从逆向相色谱柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体纯化是一项关键技术，在[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-production][b]抗体制备[/b][/url]过程中十分重要。每种方法都有其特点和适用性，义翘神州可根据您的具体需求选择合适的抗体纯化方法，保证交付高质量、高纯度的纯化抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-purification][b]抗体纯化[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-purification[/font][/font][font=宋体] [/font]

[font=宋体]什么是抗体开发？抗体开发包含了抗体生成和表征的全过程。首先，将目的抗原注射入实验动物体内，使其免疫系统生成大量抗体。[/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development][b]抗体开发[/b][/url]的方法各有不同。例如，多克隆抗体可直接从血清中纯化，而单克隆抗体则需要先培养杂交瘤或先构建噬菌体展示抗体库。[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州作为行业领先的抗体研发公司，提供从抗原合成、研发和生产的一站式[/font][font=Calibri]CRO[/font][font=宋体]服务。通过我们的抗体制备平台，我们随时准备帮助您应对研究中遇到的严峻挑战。[/font][/font][b][font=宋体]义翘神州提供抗体定制开发服务：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]快速单克隆抗体开发、[url=https://cn.sinobiological.com/services/fast-antibody-service][b]快速多克隆抗体开发[/b][/url]、磷酸化抗体定制服务、[url=https://cn.sinobiological.com/services/anti-idiotype-antibody-service][b]抗独特型抗体服务[/b][/url][/font][b][font=宋体]抗体开发技术平台：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一站式的定制抗体开发服务，包括多克隆抗体开发、单克隆抗体开发，以及针对特定应用的抗体开发，例如[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、蛋白免疫印迹、免疫组化和流式细胞术。多年来，从抗原设计到抗体纯化和鉴定，我们花费了多年时间优化和调整抗体开发过程中的关键参数。我们以自主研发的技术和极具竞争力的效率为优势，为客户提供专业服务。由我们开发的高成功率和更高质量的抗体将使我们的客户受益其中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①抗原制备[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用计算机辅助模拟和设计机制，开发出应用在多肽抗原设计中的自主研发技术。这种经过优化的方法大大地提高了抗体的质量和成功的概率。义翘神州还成功制备出[/font][font=Calibri]6000[/font][font=宋体]多种重组蛋白质，可线上购买，作为抗原用于免疫反应和筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②优化小鼠杂交瘤技术[/font][font=宋体]义翘神州多年来一直致力于优化小鼠杂交瘤技术，极大程度提高抗体质量和成功率。因此，义翘神州已经开发出适用多种应用的优质抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③自主研发二代兔单克隆技术[/font][font=宋体]义翘神州花费多年时间优化其自主研发的兔单克隆抗体开发平台，该平台能以合理的成本制备出高亲和力的抗体。义翘神州曾利用该平台制备出优质兔单克隆抗体产品作为目录产品，还为定制客户开发过治疗性抗体候选产品，并取得了巨大的成功。义翘神州利用这一先进平台助力于全球客户开发兔单克隆抗体，作为试剂或治疗性候选产品。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④重组抗体生产[/font][font=宋体][font=宋体]经过多年的工艺开发，义翘神州已建立四种抗体生产平台，可用于快速高通量抗体生产和大规模抗体批量生产。从基因序列到纯化抗体（[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]克），只需几周时间，即可将成品送至您手中。义翘神州拥有先进的技术，极大节省了抗体生产的时间和成本。很多大型医药公司都利用我们的平台来支撑他们的抗体研究和开发项目。在过去的几年里，我们实现了几乎[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]的成功率，生产了成千上万的高质量单克隆抗体产品。为制药和生物技术领域客户带来了好的业务发展和市场营销。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤抗体应用验证平台[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了多个抗体应用验证平台，包括[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]检测平台、免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测平台、流式（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）检测平台、免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测平台以及免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）检测平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]详情可以关注义翘神州抗体开发页面。[/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：抗体开发[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development[/font][/font][font=Calibri] [/font]

影响抗原[url=https://www.tw-reagent.com/category.php?id=34]抗体[/url]反应的因素有两方面，一是反应物自身的因素；二是反应环境条件。　　　　（一）反应物自身的因素　　　　1.抗体：不同来源的抗体，反应性各有差异，抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗体抗原反应，为提高试验的可靠性，应选择高特异性、高亲和力的抗体作诊断试剂。等价带的宽窄也影响抗原抗体复合物的形成，单克隆抗体不适用于沉淀反应。　　　　2.抗原：抗原的理化性状、分子量、抗原决定簇的种类及数目均可影响反应结果。颗粒性抗原出现凝集反应，可溶性抗原出现沉淀反应，单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。　　　　（二）反应环境条件　　　　1.电解质：抗原与抗体发生特异性结合后，虽由亲水胶体变为疏水胶体，若溶液中无电解质参加，仍不出现可见反应。为了促成沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%NaCl或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。　　　　2.酸碱度：抗原抗体反应必须在合适的pH环境中进行。蛋白质具有两性电离性质，因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体反应一般在pH6～9进行，有补体参与的反应pH为7.2～7.4，pH过高或过低都将影响抗原与抗体反应。　　　　3.温度：在一定范围内，温度升高可加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，使反应加速。一般为15℃～40℃，常用的抗原抗体反应温度为37℃，温度如高于56℃，可导致已结合的抗原抗体再解离，甚至变性或破坏。此外，适当振荡也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。

[font=宋体][font=宋体]纳米抗体（[/font][font=Calibri]Nanobody, Nb[/font][font=宋体]），又称为单域抗体（[/font][font=Calibri]Single-domain antibodies, sdAbs[/font][font=宋体]），是来源于骆驼科动物和鲨鱼的一种独特的抗体，最初由比利时免疫学家[/font][font=Calibri]Hamers-Casterman[/font][font=宋体]于[/font][font=Calibri]1989[/font][font=宋体]年在分离骆驼血清中的抗体时偶然发现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]传统抗体的结构类似于[/font][font=宋体]“[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]”形，是由两条重链和两条轻链构成的对称结构。一些骆驼科动物等在其生长进化的过程中，自身的免疫系统中出现了缺失轻链及重链[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]结构但完全保留抗原结合活性的重链抗体（[/font][font=Calibri]HCAb[/font][font=宋体]）。[/font][font=Calibri]HCAb[/font][font=宋体]特异性结合抗原的区域为其重链的可变区，即[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody[/font][font=宋体]）。[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]经重组表达后，可获得只含有单个结构域的最小单元抗原结合片段，即纳米抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纳米抗体仅有[/font][font=Calibri]12~14 kDa[/font][font=宋体]，其晶体直径为[/font][font=Calibri]2.5 nm[/font][font=宋体]，长[/font][font=Calibri]4 nm[/font][font=宋体]，因此被认为是已知的可以与抗原结合的最小单位。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纳米抗体（[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]）与普通抗体[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]具有相同的结构域，即[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个保守框架区（[/font][font=Calibri]FR1/2/3/4[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR1/2/3[/font][font=宋体]）。普通抗体的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]中[/font][font=Calibri]FR2[/font][font=宋体]内有四个高度保守的疏水性氨基酸残基（[/font][font=Calibri]V42[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]G49[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]L50[/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]W52[/font][font=宋体]），而在[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]抗体中，这四个氨基酸被替换成亲水性的氨基酸残基（[/font][font=Calibri]F42[/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]Y42[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]E49[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]R50[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]G52[/font][font=宋体]），因此增加了纳米抗体的水溶性。此外，与普通抗体的[/font][font=Calibri]CDR3[/font][font=宋体]相比，纳米抗体的[/font][font=Calibri]CDR3[/font][font=宋体]较长一些，可形成凸形结构，从而增强对隐藏的肿瘤抗原表位识别的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]纳米抗体与普通抗体的区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]普通抗体：[/b][/font][font=宋体]免疫原性：较高[/font][font=宋体][font=宋体]分子量大小：[/font][font=Calibri]150 kDa[/font][/font][font=宋体]半衰期：较长[/font][font=宋体]组织穿透力：较低[/font][font=宋体][font=Calibri]CDR3[/font][font=宋体]长度：平均[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基[/font][/font][font=宋体]识别位点：较难识别隐藏位点[/font][font=宋体][font=宋体]稳定性：易失活，在高温或极端[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]下失效或分解[/font][/font][font=宋体]抗体表达：哺乳动物表达[/font][font=宋体]生产费用：较高[/font][font=宋体][font=宋体]工程化改造：[/font][font=宋体]“[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]”字型结构，不易改造[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]纳米抗体：[/b][/font][font=宋体]免疫原性：较低[/font][font=宋体][font=宋体]分子量大小：[/font][font=Calibri]12-14 kDa[/font][/font][font=宋体]半衰期：较短[/font][font=宋体]组织穿透力：较强，可穿过血脑屏障[/font][font=宋体][font=Calibri]CDR3[/font][font=宋体]长度：[/font][font=Calibri]16-24[/font][font=宋体]个氨基酸残基[/font][/font][font=宋体]识别位点：容易识别隐藏位点[/font][font=宋体][font=宋体]稳定性：高稳定性，在高温或极端[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]下保持稳定[/font][/font][font=宋体]抗体表达：哺乳动物或微生物表达[/font][font=宋体]生产费用：较低[/font][font=宋体]工程化改造：结构简单，容易改造[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纳米抗体是一种非常有前景的下一代治疗性抗体技术，受到越来越多的研究机构和制药公司的关注。为支持纳米抗体药物的早期发现，义翘神州利用噬菌体抗体库技术自主研发了纳米抗体开发平台，已成功开发了多个纳米抗体候选分子。另外，我们的高通量纳米抗体表达平台，已成功表达和生产了多种纳米抗体形式，包括单价、多价或多特异性[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]，满足客户的各种定制需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]纳米抗体开发服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]不同于经典的杂交瘤技术制备单克隆抗体，纳米抗体开发的整个流程主要包括羊驼免疫、噬菌体文库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。羊驼免疫后，从羊驼外周血分离[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，提取总[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，反转录为[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]，以[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]为模板[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增获得多样化的纳米抗体基因片段，然后将其连接到载体上，从而构建噬菌体文库。随后进行多轮淘洗步骤获得抗原特异性纳米抗体，并对其进行测序、表达和验证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/nanobody][b]纳米抗体[/b][/url]开发平台，可提供一站式的纳米抗体定制服务，主要包括抗原设计与制备、羊驼免疫、文库构建、淘洗、单克隆鉴定、测序以及活性分析等实验步骤，已成功交付多个纳米抗体开发项目。获得的纳米抗体需要进行进一步的人源化改造，以降低其免疫原性，实现最佳的治疗效果。义翘神州提供的纳米抗体人源化服务，利用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对羊驼纳米抗体进行人源化改造，保证人源化程度 [/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，成功率[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]。我们也提供体外药效评价解决方案，满足纳米抗体成药性评估、生物学活性测定等应用场景。更多详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/nanobody[/font][/font]

[font=宋体]抗体标记是一种生物技术，通过将标记物（如酶、荧光素、生物素等）共价连接到抗体上，使其与待检测物（如特定抗原）特异性反应，形成多元复合物。随后，借助相关仪器，可以直接观察试验结果或进行自动化测定，从而对抗原、抗体反应进行定性和定位研究，或进行定性和定量测定。下面为大家介绍几种高质量的标记抗体：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①荧光色素标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这种标记方法是将荧光素与相应的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]结合，将荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]与标本中相应的抗原形成荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原复合物，用荧光显微镜观察。在显微镜若存在荧光则意味着存在抗原抗体复合物，因此可根据已知的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]推断出另一种未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②[/b][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记抗体[/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体标记中生物素的引入使整个过程灵敏度大大提高！这种方法可使抗体或其它蛋白质的[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基与酰化的生物素共价结合，生物素化的分子可以通过酶标记的抗生物素蛋白或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉抗生物素蛋白复合物来检测。小分子水溶性生物素对链霉亲和素的高亲和力是该方法的设计基础。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③放射性碘标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质的碘标记方法有很多种，比如我们常用的化学法或酶促法通过氧化对蛋白质分子进行碘化等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]④[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体是指将[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料与特定抗体结合而成的复合物，这种技术常用于生物医学研究中的荧光标记。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料是从红藻属藻类中提取得到的一种特殊色素，具有较高的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体主要应用在流式细胞术和免疫组化等实验中。在流式细胞术中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞表面标记物的表达情况，如[/font][font=Calibri]CD4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD8[/font][font=宋体]等，可以实现对免疫细胞亚群的研究。在免疫组化和免疫组织化学等实验中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞内标记物的表达，如细胞因子、转录因子等，可以深入研究细胞内信号传导通路及相关的生物学功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体是一种荧光标记的二抗，通常是在单抗上进行标记，具有很强的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体可以与细胞或细胞组分中的特定抗原结合，用于细胞表面标记、蛋白质定量分析、细胞周期和细胞凋亡研究等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑥[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体是将[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体经适当方法连接而成的复合物。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是一种荧光染料，能够与各种抗体蛋白结合，并产生强烈的荧光信号。这种标记技术常用于生物医学研究中的荧光标记，特别是在免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州除了为客户提供抗体开发，还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。更多关于抗体标记及抗体标记方法详情可以参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[font=宋体]磷酸化抗体是一种特殊的抗体，能够识别并结合到已经被磷酸化的蛋白质。磷酸化是一种重要的蛋白质修饰方式，通过将磷酸基团结合到特定的氨基酸残基上，可以改变蛋白质的结构和功能。在许多生物学过程中，磷酸化都扮演着重要的角色，因此磷酸化抗体成为了研究生物学和生物化学的重要工具。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质磷酸化是指蛋白在激酶作用下在特定氨基酸位点（最常见的是丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基）发生磷酸化的过程。蛋白磷酸化是极其重要的翻译后修饰，其动态调控是信号转导中不可或缺的一环，调控着细胞生长、分化、代谢、凋亡等等过程。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]磷酸化抗体主要是针对磷酸化位点制备的，可以特异性识别磷酸化氨基酸位点，对磷酸化蛋白进行定性、定量分析，检测蛋白受刺激后磷酸化水平变化情况。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可以为客户提供一系列具有高特异性（经内源性、磷酸化特异性等多方面验证）、高灵敏度（[/font][font=Calibri]1:200000[/font][font=宋体]稀释度）特点的磷酸化抗体，满足[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]等应用。同时我们还可以为客户提供定制化的磷酸化抗体定制服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]义翘神州磷酸化抗体服务优势：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①专业高效的多肽设计软件及高效偶联方法，保证多肽免疫成功率[/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]以上。[/font][/font][font=宋体]②多种纯化策略，正负筛选平台，确保得到高特异识别指定磷酸化位点的抗体。[/font][font=宋体]③竞争性的价格[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多种生物的制备服务，包括磷酸化兔多克隆抗体制备服务、磷酸化鼠单克隆抗体制备服务、磷酸化兔单克隆抗体制备服务[/font][font=宋体]……详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/phospho-specific-antibody-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/services/phospho-specific-antibody-service][b]磷酸化抗体定制服务[/b][/url]能够满足您的个性化需求，帮助您在研究领域获得更多的突破。我们致力于为您提供高质量、高效率的抗体定制服务，助力您的科研事业更上一层楼。[/font]

1891年10月，抗体（antibody）一词首次出现在保罗·埃尔利希公布的《免疫力的试验性研究》这篇文章中，德语的抗体"Antikörper"出现在该文章的结论部分。从此，科学家们开始了对抗体的探索和研究。二十世纪三四十年代，人们已经认识到抗体是一种蛋白质，并且可以识别抗原的空间结构。六十年代，罗德尼·罗伯特·波特和杰拉尔德·埃德尔曼揭示了抗体的化学结构，并因此获得1972年的诺贝尔生理学或医学奖。同一时期，人们发现了IgA, IgD, IgE等亚型的抗体。1975年，分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦建立杂交瘤技术，这是第一代单克隆抗体技术。他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。基于杂交瘤的单克隆抗体技术一经问世，迅速被应用于疾病诊断，治疗等用途中，使用中人们发现，鼠源的单克隆抗体很容易在人体内产生免疫反应，随后，1988年，Greg Winter等人率先提出了人源化抗体的方法，解决了这一问题。这是第二代单克隆抗体技术。而近来流行的兔单克隆抗体，是一种新型的技术，它基于杂交瘤或者噬菌体展示技术，这种方法产生的抗体在保持特异性的同时，具有更高的亲和力和灵敏度，实际使用时，工作浓度更低，背景更低，用作免疫组化等用途时，有时甚至可以免去抗原修复的步骤。时至今日，抗体的生产技术已经非常成熟。单克隆抗体已经应用于临床诊断，肿瘤治疗，自身免疫病治疗等诸多方面，日渐成为治疗各种顽疾的终极武器。

[font=宋体]在生物医药领域，抗体作为一类重要的生物分子，被广泛应用于疾病诊断、治疗以及基础研究中。其中，单克隆抗体和单链抗体是两种常见的抗体类型，尽管它们都是从杂交瘤或基因工程方法中获得，但在结构、功能和制备方法等方面存在显著差异。本文将对单克隆抗体和单链抗体的区别进行深入解析。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、结构差异[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/mab-development][b]单克隆抗体[/b][/url]是由一个单一的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生，具有高度的均一性和特异性。其结构包括重链和轻链，通过二硫键连接在一起，形成一个完整的抗体分子。而单链抗体则是由一段柔性连接肽把抗体重链可变区（[/font][font=Calibri]V~H[/font][font=宋体]）和轻链可变区（[/font][font=Calibri]V~L[/font][font=宋体]）连接而成，是具有亲代抗体全部抗原结合位点的最小功能结构单位。单链抗体的结构相对简单，没有重链和轻链的连接，分子量也较小。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、功能差异[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体具有高度的特异性，可以用于疾病的诊断和治疗。由于其结构均一，单克隆抗体的生产和质量控制相对容易，因此在临床应用中具有较高的可靠性。而单链抗体则具有特异的抗原结合活性，能够较好地保持亲本抗体的抗原亲和活性，同时分子量小、结构简单，更适于抗体结构与功能的分析。此外，单链抗体还具有较好的组织穿透能力和低免疫原性等优点，使其在药物研发以及导向治疗等方面具有广泛的应用前景。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]三、制备方法差异[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体的制备通常采用[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]，将能够产生特异性抗体的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，再通过筛选和克隆化培养获得能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。这种方法需要经过多次筛选和克隆化培养，制备过程相对复杂。而单链抗体的制备则多采用基因工程方法，通过设计和构建基因表达载体，在体外表达单链抗体基因，然后进行分离和纯化得到单链抗体。这种方法相对简单快捷，但需要设计和构建基因表达载体，对技术要求较高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述，单克隆抗体和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体[/b][/url]在结构、功能和制备方法等方面存在显著差异。在实际应用中，应根据具体需求选择合适的抗体类型。单克隆抗体具有高度的特异性和可靠性，适用于疾病的诊断和治疗；而单链抗体则具有特异的抗原结合活性、分子量小、结构简单等特点，适用于抗体结构与功能的分析、药物研发以及导向治疗等领域。随着生物技术的不断发展，相信单克隆抗体和单链抗体的应用前景将更加广阔。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体制备服务[/b][/url]和[url=https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service][b]抗体片段生产服务[/b][/url]，同时拥有一整套的抗体开发解决方案，包括免疫原制备、动物免疫、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]抗体库构建和筛选等步骤。此外，我们在[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]抗体表达纯化方面具有丰富的经验，已成功为客户表达[/font][font=Calibri]di-scFvs[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]tri-scFvs[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BiTE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Diabody[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]scFv-(H)IgG[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]scFv-(L)IgG[/font][font=宋体]等多种[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]形式。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体][b]多克隆抗体纯化原理[/b]是依据抗体的生物学特性，一般通过[/font][font=Calibri]Protein A[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]Protein G[/font][font=宋体]的方法从动物血清中纯化抗体。但某些使用场景对抗体的质量要求很高，需要利用抗原亲和层析从总[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体中进一步纯化和分离抗原特异性抗体，最终获得纯度高、非特异性背景低的多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。抗血清被收集后，可通过硫酸铵沉淀法对其进行初步纯化，移除许多粘性蛋白，尽可能减少这些杂质对后续亲和层析纯化的影响。不同的纯化方法经常联合使用，用于从血清中纯化高质量的多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]①[/font][font=Calibri]Protein A/G[/font][font=宋体]纯化[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Protein A[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Protein G[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Protein L[/font][font=宋体]是三种细菌蛋白，具有能与抗体高效结合的特性。这些蛋白经过基因工程技术重组表达，常用于不同物种关键抗体类型的亲和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Protein A/G[/font][font=宋体]纯化是一种快速高效的多克隆抗体纯化方法，其原理是能与不同物种的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]恒定区发生结合，从而除去血清蛋白和[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]抗体。应该注意的是，终产品包含总[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体和特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州已生产了[/font][font=Calibri]Protein A[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Protein G[/font][font=宋体]琼脂糖纯化树脂，可用于纯化小鼠[/font][font=Calibri]IgG2a/2b/3[/font][font=宋体]、大鼠[/font][font=Calibri]IgG2c[/font][font=宋体]、人[/font][font=Calibri]IgG1/2/4[/font][font=宋体]和兔[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]等多种来源的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]②抗原亲和纯化[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在[/font][font=Calibri]Protein A/G[/font][font=宋体]纯化步骤后，抗原亲和纯化可进一步用于制备具有特异性高和纯度高的多克隆抗体。这种高灵敏度和高特异性的多克隆抗体适合用于[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]等免疫学检测实验，即使在较低的稀释比下使用，也不会增加信号背景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗原亲和纯化，首先将抗原固定至树脂上，然后目的抗体与抗原发生特异性结合，最后洗脱得到目的抗体，以达到纯化多克隆抗体的目的。与[/font][font=Calibri]Protein A[/font][font=宋体]法相比，此方法识别的是抗体的可变区，能高度识别和结合目的抗体，常用于多克隆抗体的纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]多克隆抗体的纯化主要包括以下几个步骤：[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①收集细胞上清液或培养上清液：多克隆抗体是通过免疫动物（如小鼠、兔子等）产生的，因此首先需要收集包含抗体的细胞上清液或培养上清液。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②蛋白[/font][font=Calibri]A/G[/font][font=宋体]层析：将收集到的上清液通过蛋白[/font][font=Calibri]A/G[/font][font=宋体]层析柱进行纯化。蛋白[/font][font=Calibri]A/G[/font][font=宋体]是常用于捕获免疫球蛋白的亲和色谱基质，可以选择性地结合抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③洗脱：通过改变洗脱缓冲液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值或盐浓度等条件，将结合在蛋白[/font][font=Calibri]A/G[/font][font=宋体]柱上的抗体洗脱下来。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④纯化筛选：使用各种纯化筛选方法，如凝胶过滤、离子交换层析、尺寸排阻层析等，进一步去除杂质并提高抗体的纯度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤浓缩和储存：对纯化后的抗体进行浓缩处理，通常使用离心浓缩或超滤浓缩等方法。最后，将抗体在适当的储存缓冲液中保存，确保其稳定性和活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-purification][b]多克隆抗体纯化[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-purification[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]主流的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development][b]抗体开发平台[/b][/url]有多个，其中最常用的是基于杂交瘤技术的平台。该技术通过将免疫细胞与肿瘤细胞融合，产生能够产生抗体的杂交瘤细胞，从而制备出单克隆抗体。随着技术的发展，基于噬菌体展示技术的平台也逐渐成为主流。该技术通过将抗体片段与噬菌体蛋白融合，展示在噬菌体表面，从而筛选出具有所需特性的抗体。此外，基于转基因小鼠技术的平台也是常用的抗体开发平台之一。这些平台为抗体开发提供了强大的技术支持，使得研究人员能够快速、高效地开发出针对特定抗原的抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一站式的[url=https://cn.sinobiological.com/services/custom-antibody-services][b]定制抗体开发服务[/b][/url]，包括多克隆抗体开发、单克隆抗体开发，以及针对特定应用的抗体开发，例如[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、蛋白免疫印迹、免疫组化和流式细胞术。多年来，从抗原设计到抗体纯化和鉴定，我们花费了多年时间优化和调整抗体开发过程中的关键参数。我们以自主研发的技术和极具竞争力的效率为优势，为客户提供专业服务。由我们开发的高成功率和更高质量的抗体将使我们的客户受益其中。下面是义翘神州抗体开发平台：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①抗原制备[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用计算机辅助模拟和设计机制，开发出应用在多肽抗原设计中的自主研发技术。这种经过优化的方法大大地提高了抗体的质量和成功的概率。义翘神州还成功制备出[/font][font=Calibri]6000[/font][font=宋体]多种重组蛋白质，可线上购买，作为抗原用于免疫反应和筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②优化小鼠杂交瘤技术[/font][font=宋体]义翘神州多年来一直致力于优化小鼠杂交瘤技术，极大程度提高抗体质量和成功率。因此，义翘神州已经开发出适用多种应用的优质抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③自主研发二代兔单克隆技术[/font][font=宋体]义翘神州花费多年时间优化其自主研发的兔单克隆抗体开发平台，该平台能以合理的成本制备出高亲和力的抗体。义翘神州曾利用该平台制备出优质兔单克隆抗体产品作为目录产品，还为定制客户开发过治疗性抗体候选产品，并取得了巨大的成功。义翘神州利用这一先进平台助力于全球客户开发兔单克隆抗体，作为试剂或治疗性候选产品。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④重组抗体生产[/font][font=宋体][font=宋体]经过多年的工艺开发，义翘神州已建立四种抗体生产平台，可用于快速[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量抗体生产[/b][/url]和大规模抗体批量生产。从基因序列到纯化抗体（[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]克），只需几周时间，即可将成品送至您手中。义翘神州拥有先进的技术，极大节省了抗体生产的时间和成本。很多大型医药公司都利用我们的平台来支撑他们的抗体研究和开发项目。在过去的几年里，我们实现了几乎[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]的成功率，生产了成千上万的高质量单克隆抗体产品。为制药和生物技术领域客户带来了好的业务发展和市场营销。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤抗体应用验证平台[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了多个抗体应用验证平台，包括[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]检测平台、免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测平台、流式（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）检测平台、免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测平台以及免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）检测平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development[/font][/font]

[font=宋体]抗体和抗原是生物学中重要的概念，它们在免疫学、医学和生物学等领域都有广泛的应用。抗体和抗原具有一些显著的区别，这些区别主要体现在化学结构、产生方式、溶解性、特异性和效应功能等方面。本文将对这些差异进行详细的阐述。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先，让我们了解一下抗体的化学结构。抗体是一种免疫球蛋白，具有两条相同的抗原结合簇。抗原决定簇是抗体与抗原结合的关键部位，它们在空间结构上呈现出一定的形状和大小，能够与抗原的特定部位精确结合。然而，抗原通常具有多个抗原决定簇，这使得抗原能够与多种抗体结合，从而在免疫反应中发挥重要作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]接下来，让我们了解一下抗原的产生方式。抗原是能够诱发免疫应答的分子，通常是由病原微生物产生的一种外源物质。例如，细菌的细胞壁、病毒的包膜蛋白等都可以作为抗原。与此相反，抗体是由淋巴细胞产生的，特别是浆细胞。在接受抗原的刺激后，浆细胞会分化为能够产生抗体的浆细胞，从而在体内产生大量的抗体，以应对抗原的侵袭。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]此外，抗体和抗原在溶解性上也存在显著差异。抗原的溶解性通常受到[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和电解质浓度的 影响，而抗体的溶解性则与抗原无关。这一差异在生物学和医学领域具有重要的意义。例如，在疫苗研发中，科学家需要了解抗原的溶解性，以确保疫苗的有效性。而在抗体治疗中，医生需要了解抗体的溶解性，以确保抗体能够有效地发挥作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]另外，抗体和抗原的特异性也存在明显的差异。抗原的特异性取决于抗原决定簇的立体构型和间距，这意味着不同的抗原决定簇可以激发不同的免疫应答。与此相反，抗体的特异性取决于抗体的独特型。独特型是指抗体的抗原结合部位的空间结构，它决定了抗体与抗原的特异性结合。因此，不同的抗体可以与不同的抗原结合，这使得抗体在免疫应答中具有多种不同的作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]最后，抗体和抗原在效应功能上也存在显著的差异。抗原主要是刺激免疫系统产生抗体，从而在体内产生免疫应答。然而，抗体在与抗原结合后，能够激活补体系统，促进吞噬细胞对病原微生物的吞噬，从而发挥效应功能。此外，抗体还可以通过调理作用促进吞噬细胞的吞噬，以及通过[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]作用（抗体依赖的细胞毒性作用）诱导细胞对靶细胞的杀伤作用。这些效应功能使得抗体在免疫防御和免疫治疗中具有广泛的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述，抗体和抗原在化学结构、产生方式、溶解性、特异性和效应功能等方面存在显著的区别。这些区别决定了抗体和抗原在免疫应答中的不同作用和应用。在生物学、医学和免疫学等领域中，了解抗体和抗原的区别对于理解免疫应答的机制、疫苗研发、抗体治疗等方面都具有重要的意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]随着抗体制备技术的发展，现在已有多种方法可用于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-production][b]抗体制备[/b][/url]。可使用体外杂交瘤细胞制备单克隆抗体。一般在兔体内[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production][b]制备多克隆抗体[/b][/url]。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多年的工艺开发，义翘神州已成为行业领先的抗体制备公司。我们可提供克级数量的定制抗体生产，交货迅速，价格优惠。从基因序列到纯化抗体（[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]克），只需几周时间，成品产品即可送到您家门口。详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

一 抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1 分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种 应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。5 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用， 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/nanobody][b]纳米抗体[/b][/url]是一种非常有前景的下一代治疗性抗体技术，受到越来越多的研究机构和制药公司的关注。为支持纳米抗体药物的早期发现，义翘神州利用噬菌体抗体库技术自主研发了纳米抗体开发平台，已成功开发了多个纳米抗体候选分子。另外，我们的高通量纳米抗体表达平台，已成功表达和生产了多种纳米抗体形式，包括单价、多价或多特异性[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]，满足客户的各种定制需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①纳米抗体开发服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]不同于经典的杂交瘤技术制备单克隆抗体，纳米抗体开发的整个流程主要包括羊驼免疫、噬菌体文库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。羊驼免疫后，从羊驼外周血分离[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，提取总[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，反转录为[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]，以[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]为模板[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增获得多样化的纳米抗体基因片段，然后将其连接到载体上，从而构建噬菌体文库。随后进行多轮淘洗步骤获得抗原特异性纳米抗体，并对其进行测序、表达和验证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了纳米抗体开发平台，可提供一站式的纳米抗体定制服务，主要包括抗原设计与制备、羊驼免疫、文库构建、淘洗、单克隆鉴定、测序以及活性分析等实验步骤，已成功交付多个纳米抗体开发项目。获得的纳米抗体需要进行进一步的人源化改造，以降低其免疫原性，实现最佳的治疗效果。义翘神州提供的纳米抗体人源化服务，利用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对羊驼纳米抗体进行人源化改造，保证人源化程度 [/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，成功率[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]。我们也提供体外药效评价解决方案，满足纳米抗体成药性评估、生物学活性测定等应用场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②高通量纳米抗体表达服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州自主研发的高通量重组抗体表达平台，结合了专业的高通量引物合成和载体构建等，可实现高通量抗体表达。除全长[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体外，义翘神州可表达多价[/font][font=Calibri]VHHs[/font][font=宋体]以及[/font][font=Calibri]VHH-Fc[/font][font=宋体]融合型抗体等多种形式，成功率很高，满足客户不同的个性化需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体流程如下：获得纳米抗体序列文库之后，通过高通量引物合成和载体构建建立纳米抗体表达文库，转至[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞进行摇瓶培养，通过[/font][font=Calibri]Protiein A[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]Ni[/font][font=宋体]亲和层析一步纯化，得到纯度大于[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]的纳米抗体，纯化后抗体均通过功能验证再进行放大生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③无细胞系统纳米抗体表达服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]除了利用[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞表达纳米抗体外，义翘神州还自主研发了[url=https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service][b]无细胞表达系统[/b][/url]，也可实现纳米抗体高通量表达。该系统以外源[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]为模板，通过在细胞抽提物的酶系中添加氨基酸、能量物质等实现纳米抗体的体外合成，将原本需要几天的表达过程缩短至几小时，更加快速、高效。义翘神州可提供优质的[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]快速表达服务，加速您的研发进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体服务流程如下：首先合成基因、构建载体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，接着利用无细胞合成系统合成纳米抗体，再经纯化以及可行性分析，得到可交付的高质量抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原文出自：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/nanobody[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]免疫组化法（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）是使用抗体检测组织切片（例如肝脏、胰腺或心脏）中细胞蛋白质（抗原）的过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当组织样本被送到实验室进行疾病检查时，有几个细节不易确定。几种疾病或疾病亚型在显微镜下可能看起来相似或看起来具有相似大小的细胞，但具有不同的行为和必要的治疗，区分它们的最佳方法是检测这些细胞上作为标记的特定分子。免疫组化法（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）是一种使用抗体（匹配分子）的技术，用于寻找、识别附着在细胞上的标记物。在显微镜下可以看到抗体本身，这有助于技术人员进行精确识别。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化法（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）已广泛应用于医学中，特别是癌症诊断。淋巴瘤是依赖于[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]进行正确诊断和治疗决策的癌症之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]免疫组化常见问题：[/font][font=宋体][font=宋体]问题一：我应该使用[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]还是[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]进行抗原修复？[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]固定过程可能会掩盖抗原，导致抗体结合无法进行。这种掩盖可以通过一种称为抗原修复[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗原去掩蔽的技术来逆转，该技术可以通过加热（[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]；热诱导抗原修复）或蛋白酶（[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]；蛋白水解诱导抗原修复）介导。后者使用蛋白酶[/font][font=Calibri]K[/font][font=宋体]、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]方法通过降解掩盖表位的肽而起作用。然而，[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]也可能导致样品形态或抗原本身的改变。因此，[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]的使用频率低于[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]，后者通过恢复表位的二级和三级结构而起作用。[/font][/font][font=宋体]为了确定是否应该进行抗原修复以及采用哪种方法，应遵循以下指南：[/font][font=宋体]进行文献检索，以确定其他研究人员如何可视化您感兴趣的抗原。[/font][font=宋体]检查抗体供应商是否推荐了特定的抗原修复方案。[/font][font=宋体][font=宋体]如果没有特定的协议可用，我们建议使用[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]而不是[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]协议。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对于[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]，总是使用中性抗原修复缓冲液，如[/font][font=Calibri]AbD Serotec[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]BUF025A[/font][font=宋体]，并与未进行抗原修复的样品进行比较。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]如果中性染色溶液没有产生良好的染色效果，则应测试碱性或酸性抗原修复缓冲液。除了[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值外，其他需要优化的参数是温度和持续时间。理想情况下，尝试各种[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、温度和时间组合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]为了排除由[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]过程引起的伪影，始终包括一个控制样品，该样品在没有[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]步骤的情况下进行染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]问题二：如何选择[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]实验的抗体，单克隆抗体还是多克隆抗体？[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体和多克隆抗体的抗体特性决定了其优缺点。单克隆抗体是针对单个表位的同种免疫球蛋白。抗体是由一个动物的单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的，因此在免疫化学上相似。多克隆抗体是针对同一抗原的各种表位的异质抗体混合物。抗体是由动物的不同[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的，因此在免疫化学上不同。多克隆混合物中的抗体可能具有略微不同的特异性和亲和力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果蛋白质靶标具有相同的氨基酸序列，单克隆抗体更合适。一旦抗原因各种原因发生构象变化，如蛋白质相互作用、翻译后修饰、温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、固定、盐浓度等，单克隆抗体和抗原的联合作用将受到严重影响。由于多克隆抗体具有多个表位，不受蛋白质构象变化的影响，一般来说，在一定范围内的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和盐浓度内，多克隆抗体之间的抗原结合比单克隆抗体更稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]问题三：一抗的孵育时间多久？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]一抗的孵育时间与温度[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]抗体浓度有关。一般情况下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]1-2[/font][font=宋体]小时左右。在室温的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]小时左右。在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]18-24[/font][font=宋体]小时左右。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多免疫组化的问题可以上义翘神州网咨询！[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

因实验原因，需要买一对抗原/抗体，什么抗原/抗体都可以，效价要高一些，抗体要纯一些，谁那里有在下面电子邮件发个信息吧happybsky@163.com

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理，主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物，所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快速的发展，是当前生物药物领域增长最快的一类药物.1.抗体药物发展新趋势在生物药物领域，抗体药物占据着越来越重要的地位，全球销售排名前10位的药物中有6个为抗体药物，抗体药物按来源分类可以分为：鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。目前，批准的单克隆抗体药物中，人源化单抗和全人源单抗数量已占据大多数。1.1 抗体药物偶联物（ADC）抗体药物偶联物（ADC）由单克隆抗体和小分子化合物两部分组成。通过抗体的靶向作用，ADC 的抗体部分和肿瘤细胞表面抗原特异性识别并结合，通过细胞内吞作用，将抗体和小分子化合物一起带进肿瘤细胞内部，释放出小分子化合物。这样既可以降低小分子药物的毒性，同时具有靶向结合的作用。已经上市的两个ADC 是Kadyla 和Adcetris。1.2 双特异性抗体（BsAb）双特异性抗体（BsAb）是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，由于基因工程的发展，目前双特异性抗体已经研发出多种类型，主要类型有三功能双特异性抗体、IgG-scFv、三价双特异性分子、串联单链抗体（串联scFv）、DVD-Ig 等多种形式。2.质谱技术近年来质谱仪性能的显著改进主要基于开发出的两种离子化技术：一种是介质辅助的激光解吸/离子化技术。另一种是电喷雾离子化技术。由于这两种电离技术的出现，使原本只能检测小分子的质谱技术，可以运用于检测生物大分子。在过去质谱技术主要运用于对一级结构和序列的表征，而现在质谱技术越来越多地运用于高级结构的分析，而高级结构对于抗体药物的生物活性至关重要。3.质谱技术在抗体药物一级结构分析中的应用3.1 完整抗体药物精确分子量测定当得到抗体药物时，可以直接通过高分辨率的MALDI-TOF或者ESI-MS进行分子量的检测。通过对于脱糖后分子量的检测，可以对于抗体药物进行初步定性分析，并将可以作为药物常规放行的分析方法。对于脱糖前的抗体药物进行分析，可以得到抗体药物的糖基化类型的信息及糖基化水平的分布，对于快速了解生产工艺与药物质量的关系具有十分重要的意义。3.2 药物抗体偶联比（DAR）对于赖氨酸链接的抗体偶联药物，采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析，根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目。对于质谱测定的结果，不仅可以给出确切的药物抗体偶联比值，更能够给出链接不同个小分子药物的分布情况，及反应过程副产物空链接头的分布情况。3.3 肽图谱分析蛋白被特异酶切后的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于不同的抗体药物具有不同的氨基酸序列，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段也各不相同，肽混合物的质量数具有唯一特征。可以通过LC-ESI-MS进行肽片段的一级质量数的鉴定，也可以通过LC-ESI-MS/MS对于每个肽片段进行进一步确证，提高肽图谱的准确性。3.4 翻译后修饰研究蛋白质的翻译后修饰（PTM）对于抗体药物的生物学功能十分重要。常见的翻译后修饰有：磷酸化、脱酰胺、甲硫氨酸氧化、糖基化修饰、N端焦谷氨酸环化，C端赖氨酸切除等。质谱分析仪检测蛋白和肽片段的分子量偏差，可以实现高灵敏、高通量和高精确地鉴别蛋白质的翻译后修饰的种类。3.5 N端氨基酸序列检测常规N端氨基酸检测用Edman降解法进行检测，但是抗体药物有时候会出现N 端环化的现象，在这种情况下用Edman降解法需要先对抗体进行去封闭处理，而直接使用质谱可以直接测出N端的氨基酸序列，同时可以检测出N端环化的相对比例。4.质谱技术在抗体药物高级结构分析中的应用4.1 氢/氘交换质谱（HDX-MS）常规的质谱只能获得蛋白的一级结构信息。氢/氘交换质谱（HDX-MS）可以进行蛋白质构象，溶液动力学和表位映射进行分析。在能够调查的蛋白质的高阶结构和动态结构技术中，HDX-MS已经证明适合单克隆抗体和单克隆抗体-抗原复合物的构象分析。4.2 离子淌度质谱法（IM-MS）离子淌度是根据蛋白的电荷和形状选择性分离的方法，可以区分相同分子量的蛋白和肽段，可用于检测蛋白的简单高级结构。4.3 高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）能够检测最高质量数的质谱仪器，并且有着很高的分辨率。FTICR-MS 是目前被公认为是蛋白质组学研究的有力工具，特别是和完整的蛋白质鉴定和上/下调翻译后修饰（PTM）蛋白质的鉴定。