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抗氧化能力

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  • 【原创大赛】酒中抗氧化能力ORAC分析

    【原创大赛】酒中抗氧化能力ORAC分析

    酒中抗氧化能力ORAC分析1.实验原理ORAC反应是一个经典的氢原子转移(HAT)的氧化过程。在实验条件下，一分子的AAPH失去一分子氮气，生成两分子AAPH自由基(方程1)。在空气中，生成的AAPH自由基很快与O2反应(方程2)生成相对稳定的过氧自由基ROO· 。荧光素的荧光衰退曲线表明过氧自由基对荧光素的破坏程度，在没有抗氧化剂存在的情况下，ROO·从FL获得一个氢原子(方程3)，致使荧光素的荧光衰退；在有抗氧化剂(ArOH)存在的情况下，ROO·从抗氧化剂获得一个氢原子，生成ROOH和一个稳定的抗氧化剂自由基ArO· (方程4)，致使荧光素被过氧自由基破坏的速率受到抑制(见图1)。R－N＝N－R 2R· + N2 (1)R·+O2 ROO· (2)ROO· + probe (荧光素) ROOH + oxidized probe (失去荧光) (3)ROO·+ArOH（抗氧化剂） ArO· + ROOH (4)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/10/201310141626_470806_1613776_3.gif图1 ORAC检测示意图2.实验方法ORAC法即氧自由基吸收能力（又称为抗氧化能力指数），是一种测量不同食品抗氧化能力的国际通用标准单位，检测数值愈高代表其抗氧化能力就愈强。ORAC法适合抗氧化剂的高通量筛选，是目前评价抗氧化物质抗氧化活性的最为准确、灵敏度高、应用范围广的方法之一，目前国际上已经有很多商品的标签注明抗氧化能力（ORAC值）。将空白、样品以及标准抗氧化物(Trolox)各20μL，分别与160μL荧光素溶液混合后37℃保温30min，然后再加入AAPH溶液20μL，迅速开始测定，利用荧光酶标仪配备软件记录荧光强度，初始荧光强度值记为f0，以后每隔一段时间测定一个点，荧光强度分别记为f1, f2 …，抗氧化剂作用下荧光衰减曲线下的积分面积，扣除无抗氧化剂的空白曲线下面积，得出抗氧化剂的曲线下净面积(Net AUC)。抗氧化剂的ORAC值是通过其荧光衰退曲线的曲线下净面积与标准抗氧化物质Trolox的曲线下净面积相比得出的，ORAC值以Trolox当量μmol Trolox equivalent/g (μmol TE/g)或μmol Trolox equivalent/L (μmol TE/L)表达。我们将以ORAC方法来验证，包括线性（定量限与检测限）、精密度与准确度、重复性与稳定性、回收率等。通过验证方法的可行性，以此来评价保健酒的抗氧化能力。3.试剂溶液的制备3.1磷酸盐缓冲溶液3.1.1缓冲溶液储备液0.75 M K2HPO4：130 g K2HPO4溶于1 LddH2O；0.75 M NaH2PO4：90 g NaH2PO4溶于1 LddH2O 3.1.2缓冲溶液工作液分别量取K2HPO4贮备液81 mL，NaH2PO4贮备液19 mL，混合后用ddH2O定容至1000 mL，这样得到75 mM，pH 7.4的缓冲溶液，冰箱下贮存。3.2荧光素钠盐溶液荧光素钠盐贮备液1：称取0.0456g荧光素钠盐定容到100 mL磷酸缓冲液，4℃黑暗贮存；荧光素钠盐贮备液2：1000μL贮备液1用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存；荧光素钠盐工作液：800μL贮备液2用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存。3.3 Trolox标准溶液的配制0.0125 g Trolox定容到50 ml磷酸缓冲液中，得到1000μM的贮备液，−20℃ 贮存。然后用磷酸缓冲溶液依次稀释成100，50，25，12.5，6.25μM的工作液。3.4 AAPH溶液0.414g AAPH完全溶于10mL pH7.4，75mM的磷酸缓冲溶液，即得153mM的溶液，冰浴保存。（8h的有效期，现配现用）3.5

  • 【原创大赛】九味中药的抗氧化能力活性筛选

    【原创大赛】九味中药的抗氧化能力活性筛选

    九味中药的抗氧化能力活性筛选 衰老的自由基学说最早1956年提出， 并逐步发展为自由基一氧化应激学说。此学说认为在生命活动过程中产生的自由基对生物大分子、细胞器、细胞等累积性氧化损伤，导致组织损伤和器官功能衰退，诱导及加速机体衰老。在病理条件下或随着年龄的增加，各种内外因素导致自由基大量、过多产生，超过了机体的抗氧化能力，便产生氧化应激，过多自由基通过损伤细胞核及线粒体DNA、生物膜脂质过氧化、蛋白质交联变性等多种方式引起细胞损伤，氧化损伤逐渐累积，最后导致各种老年性疾病的发生和发展。 本实验室通过大量调研文献，筛选出具有潜在抗氧化作用的中药，只在通过实验最终筛选出具有抗氧化作用比较强的药味，进一步开发利用！ DPPH（二苯基苦味酰基自由基，）在有机溶剂中是一种稳定的以氮为中心的自由基，其单电子在517 nm附近有最大吸收。甲醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。当甲醇溶液中有自由基清除剂存在时，的单电子被配对而使ESR信号减弱，溶液颜色变浅，直至达到稳定。因此，可以通过在517nm波长处检测不同待测样品对自由基的清除效果，从而评价样品的抗氧化能力。本实验参照相关文献用紫外分光光度计筛选了九味中药的DPPH自由基清除活性，并测定了半效应浓度（EC50）。一、试剂与仪器二苯代苦味酰自由基（DPPH）、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚；氯仿、甲醇均为分析纯；紫外可见分光光度计为上海产S54A型分光光度计。二、实验方法2.1样品的制备 待测样品：九味中药分别采用水煎煮的方法提取浓缩成每1g提取液相对于10g原药材。每份提取液以最适溶剂溶解后，配成1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml六个浓度的溶液待测。2.2 DPPH标准曲线的制备 精密称取DPPH标准品12.62 mg,加入200 ml无水甲醇,配制成浓度为0.16 mmol/L的储液。分别精密移取1.00 mL各个样品的六个浓度的待测溶液，依次迅速加入1.00 mL DPPH甲醇溶液。在选定最大吸收波长(517 nm)的条件下,分别测定其吸光度。2.3样品的自由基清除能力测定 DPPH[

  • 【原创大赛】胡萝卜汁中抗氧化能力指数（ORAC）的测定

    【原创大赛】胡萝卜汁中抗氧化能力指数（ORAC）的测定

    胡萝卜汁中抗氧化能力指数（ORAC）的测定【生活中的仪器分析】食品安全——饮品卫生大检测抗氧化能力指数（ORAC），是一种测量不同食品抗氧化能力的国际通用标准单位，检测数值愈高代表其抗氧化能力就愈强。是目前评价抗氧化物质抗氧化活性的最为准确、灵敏度高、应用范围广的方法之一，目前国际上已经有很多商品的标签注明抗氧化能力（ORAC值）。ORAC值以Trolox当量μmol Trolox equivalent/g (μmol TE/g)或μmolTrolox equivalent/L (μmol TE/L)表达。 (Trolox为一种标准抗氧化物，其测定方法以及原理在另一篇原创中有详细的概述。）1 仪器与试剂1.1 仪器Biotek Synergy 2多功能酶标仪，Biotek自动移液分液系统；梅特勒万分之一天平；96孔微孔板；Eppendorf移液枪；玻璃器皿：10mL容量瓶、50mL容量瓶、100mL容量瓶、1000mL容量瓶、100 mL烧杯；1000μL移液枪、100μL移液枪、1mL移液管。1.2 试剂K2HPO4，NaH2PO4，荧光素二钠盐，Trolox标准物质，AAPH 2,2’-Azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride，双蒸水。2试剂的配制2.1 磷酸盐缓冲溶液2.1.1缓冲溶液储备液0.75 M K2HPO4：130 g K2HPO4溶于1 LddH2O；0.75 M NaH2PO4：90 g NaH2PO4溶于1 LddH2O 2.1.2缓冲溶液工作液分别量取K2HPO4贮备液81 mL，NaH2PO4贮备液19 mL，混合后用ddH2O定容至1000 mL，这样得到75 mM，pH 7.4的缓冲溶液，冰箱下贮存。2.2 荧光素钠盐溶液荧光素钠盐贮备液1：称取0.0456g荧光素钠盐定容到100 mL磷酸缓冲液，4℃黑暗贮存；荧光素钠盐贮备液2：1000μL贮备液1用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存；荧光素钠盐工作液：800μL贮备液2用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存。2.3 Trolox标准溶液的配制0.0125 g Trolox定容到50ml磷酸缓冲液中，得到1000μM的贮备液，−20℃ 贮存。然后用磷酸缓冲溶液依次稀释成100，50，25，12.5，6.25μM的工作液。2.4 AAPH溶液0.414g AAPH完全溶于10mL pH7.4，75mM的磷酸缓冲溶液，即得153mM的溶液，冰浴保存。（8h的有效期，现配现用）3样品测定用自动移液系统对饮品进行稀释，用缓冲溶液依次稀释成1:100，1:200，1:400，1:800系列。然后将空白、样品各稀释梯度以及标准抗氧化物(Trolox)各20μL，分别与160μL荧光素溶液混合后37℃保温30min，然后再加入AAPH溶液20μL，迅速开始测定，利用酶标仪配备软件记录荧光强度，初始荧光强度值记为f0，以后每隔一段时间测定一个点，荧光强度分别记为f1,f2 …，抗氧化剂作用下荧光衰减曲线下的积分面积，扣除无抗氧化剂的空白曲线下面积，得出抗氧化剂的曲线下净面积(Net AUC)。抗氧化剂的ORAC值是通过其荧光衰退曲线的曲线下净面积与标准抗氧化物质Trolox的曲线下净面积相比得出的。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312212007_483831_1613776_3.jpg3.1 Trolox标准曲线使用0、6.25、12.5、25、50、100μM的Trolox标准工作溶液，绘制标准曲线，试验表明不同浓度的Trolox与Net AUC(曲线下净面积)相关系数都在0.99以上，说明不同浓度的Trolox与其Net AUC具有线性关系。Y=0.16*X+3.59，R2=0.997。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312212007_483832_1613776_3.jpg3.2 重复性实验每个样品有4个稀释梯度（其中1：100的稀释梯度超过了曲线最高点而无法计算），重复测定2次，结果如下。N1[/

  • 【原创大赛】白芍提取物体外抗氧化的作用试验

    【原创大赛】白芍提取物体外抗氧化的作用试验

    白芍提取物体外抗氧化作用的研究目的：测定白芍提取物抗氧化的活性。方法：采用分光光度法对白芍提取物总抗氧化活性进行测定，使用754分光光度计，在520nm处测定其吸光度。结果：白芍提取物具有抗氧化活性，其抗氧化活性大小与浓度具有明显的关系。结论：分光光度法测定白芍提取物抗氧化活性稳定可行，简便，可作为白芍提取物的抗氧化测定标准之一。 白芍系毛莨科芍药植物( Paeonia lactiflora Pall.)的去皮干燥根，性微苦，味苦酸。有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗的功能。我国白芍主产为浙江、安徽、四川等地。其化学成分主要为挥发油类、单萜类、三萜类及黄酮类化合物等。白芍具有抗凝血作用，能有效清除血管内皮过氧化物，能够明显改善由高胆固醇血症引起的血管内皮细胞的功能下降。可治疗胸腹胁肋疼痛，泻痢腹痛，自汗盗汗，阴虚发热，月经不调，崩漏，带下。中医认为白芍归肝、脾经,有养血、柔肝、疏肝的作用。近年来的研究证实，人体内自由基增多导致的脂质过氧化作用与多种疾病有关。因此，对抗氧化药物的研究已成为自由基医学研究领域中的一个重要课题。测定样品的总抗氧化能力(total antioxidant capacity，TAC)或总清除自由基抗氧化力(total radical-trap pingantioxidative capacity， TRAC)激起了许多学者的兴趣。我国有丰富的植物资源，植物中酚类、黄酮类、萜类和多种提取的抗氧化活性物质的研究越来越受到关注，并且在衰老的自由基学说以及与衰老相关的疾病研究中，抗氧化活性物质的研究也占有很重要的地位。本文采用分光光度法对白芍提取物总抗氧化活性进行测定，以没食子酸标准品为对照，为白芍的进一步研究和应用提供依据。1 仪器和材料1.1 仪器 UV–754N型分光光度计（上海天普）；分析天平（TG-328A，上海天平仪器厂）；恒温鼓风干燥箱（DHG-9070AS，深圳亿博兰电子有限公司）；电热套；恒温水浴箱。1.2 材料白芍（安徽，121001）购于哈药世一堂。1.3 试剂总抗氧化能力测定试剂盒（研域化学试剂有限公司)，没食子酸标准品(121131)。其余试剂：双蒸水。2 实验方法[f

  • 【原创大赛】重金属对肝脏抗氧化能力影响的探究

    【原创大赛】重金属对肝脏抗氧化能力影响的探究

    看到一年一度的原创大赛又开始了，收到坛主大人的邀请，将自己的一些心得和经历总结出来与大家分享，主要还是希望能够从中得到一些提高~~下面小生就再次献丑了~=====================================写在前面==============================================这次我们一同探究的是肝脏的抗氧化能力，为什么要探究这个问题呢？因为抗氧化和我们人体延缓衰老、解除有害代谢物有很大的关系，那么这个抗氧化又要从哪里说起呢？主要是与以下几个方面有关系：　1.　自由基也称游离基，是指含有奇数价电子并因此在一个轨道上具有一个未成对电子的原子或原子团。其产生途径很多，但一般是通过分子或离子的均裂获得的：具体有辐射诱导;热诱导;单电子氧化还原。它是机体代谢过程中所产生的一种副产品，可使脂类发生过氧化反应，而生成过氧化脂质(LPO)，LPO又可使细胞膜脂质组成发生变化，导致细胞内酶和蛋白质变性，而破坏细胞的结构和功能，且LPO还可使机体内重要脏器如心、肝等组织损伤，因而它对机体是有害的。　2.　超氧化物歧化酶(Super Oxide Dismutase，SOD)是一种广泛存在与生物体内与细胞氧化代谢密切相关的蛋白质，它是清除机体细胞中有害物质-氧自由基的功能活性蛋白质。是人体防御内外环中超氧负离子对自身侵害的一类金属活性酶，细胞中SOD以Cd2+、Cu2+等金属为辅基。SOD是人体内一种十分重要的活性物质，起着抗衰老和防止多种疾病的重要作用。它具有抗辐射、消炎、抑制肿瘤和心血管病的功能;可以改善人体自身免疫、延缓衰老;最具明显的功能为抗衰老、抗氧化，对创伤的修复、缺血再灌流损伤的防护有明显效果。 3. 在红细胞等组织中含有一种含硒的谷胱甘肽过氧化酶(GSH—Px)，可使氧化脂质(ROOH)和H2O2与还原型谷胱甘肽(GSH)反应，从而将它们转变为无毒的水或醇。所以还原型谷胱甘肽(GSH)可保护红细胞蛋白膜、血红蛋白及酶的巯基等免受氧化剂的毒害，维持细胞的正常功能。测定该酶的活性数量可作为人体衰老和生命活力状况的一个定量指标。　4.　Cd2+(或Cu2+)等金属离子都对动物(小白鼠)产生毒害作用，如对小鼠体内抗氧化酶活性产生影响，通过对小鼠体内抗氧化活性在注射前后的变化可以测定外来化合物的毒性强弱。　　所以为了探究外来重金属对肝脏的影响，我们就通过分析不同浓度的Cd2+注射对小鼠在不同血液中抗氧化酶的活性的变化来定量测定Cd2+金属对小鼠产生的毒性强弱，以及毒害程度随时间的变化情况，从而为细胞分子水平的毒性机制探讨和环境综合完全性评价提供科学依据。背景介绍完下面就是我们的实验部分了~~========================================实验经过========================================http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191422_305728_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191423_305730_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191424_305731_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191432_305737_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191433_305738_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191434_305740_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191435_305742_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191435_305743_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191439_305744_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191439_305745_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191440_305746_1947624_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107191442_305747_1947624_3.jpg========================================后记=============================================总的说来这次实验不是特别的满意，但是结论和我预想的是保持一致的，属于验证类的实验，使用的实验方法也比较简单，无非就是一些基本的实验操作~~也没有用什么特殊的仪器，后期数据处理的工作量比较大，因为是自己设计的验证性实验，所以也没有对出局处理仔细推敲，分享出来大家纯属参考下好了~~最后，帮活动宣传下吧，这次活动设计的很好，大家积极参赛，不要让版面落后哦！！

  • 【讨论】抗氧化剂检测的问题

    很多食品中会添加抗氧化剂（BHA、BHT、TBHQ），但这些抗氧化剂很容易被氧化。如果某食品中检出了抗氧化剂，一段时间后（1周、半个月）要求复测，有哪些办法能最大限度的保持抗氧化剂的稳定？

  • 枸杞大枣茶 抗氧化、延缓衰老

    枸杞8克、大枣10克。1、大枣洗净放入锅中，中火翻炒10分钟，待大枣颜色变深取出备用。2、待大枣放凉后同枸杞一同放入茶壶。3、倒入开水（可以依照自己口味加入适量冰糖）。4、静待个3-5分钟左右，可饮用。枸杞：延缓衰老、助长寿枸杞含有丰富的枸杞多糖、β-胡萝卜素、维生素E、硒及黄酮类等抗氧化物质，有较好的抗氧化作用。枸杞还能增强人体抵抗感染的能力，护肝、降血脂、有助于降低血糖都是它的功效，这一切都有利于从整体上增进健康，延缓衰老。古代长寿老人李庆远就是靠长期喝枸杞水获得长寿的，当然前提必须是长期坚持。大枣：抗氧化、延缓衰老大枣则是富含蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、B族维生素、维生素C、维生素P以及钙、磷、等多种人体所需的营养成分，可谓是维生素之王的果实。大枣有补中益气，养血神的作用，另外，大枣含维生素E，有抗氧化、抗衰老等功效。http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif枸杞和大枣搭配到一起，可以说是相辅相成的黄金搭档了，可以让人在自然衰老的过程上打个盹儿，让自己更年轻一些，都不用吃唐僧肉了。枸杞搭配大枣，胜吃唐僧肉！抗氧化、延缓衰老......这个方法简单实用，人人都能做到。值得您给身边的亲朋好友看看，他们会感谢您！

  • 抗氧化剂的检测

    抗氧化剂检验方法的发展趋势是各类食品中抗氧化剂的多组分同时测定。色谱技术如高效液相色谱、气相色谱、离子色谱已成为抗氧化剂分析的主要手段。其中高效液相色谱法占主导地位，基本上能进行所有抗氧化剂的分析，气相色谱法主要应用于脂溶性抗氧化剂的分析，离子色谱法主要应用于水溶性抗氧化剂的分析。

  • 【资料】试剂与生活——抗氧化剂！

    抗氧化剂：是阻止氧气不良影响的物质。 它是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。如维生素Ａ、Ｃ、Ｅ；例胡萝卜素（虾青素、角黄素、叶黄素，B-胡萝卜素等）；微量元素：硒、锌、铜和锰等　　饮食中抗氧化剂长期以来倍受国内外学者关注，这是因为①食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质②在人体消化道内具有抗氧化作用，防止消化道发生氧化损伤@吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用④来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

  • 食品中的抗氧化剂

    关键词： 钢铁成分分析标准样品 钢铁光谱分析标准样品 光谱分析标准物质 光谱标准物质 光谱标准样品 光谱标样 随着国内外对食品质量和安全的广泛关注，如何防止食品变质，保障人体健康日显重要。（钢铁成分分析标准样品）为了提高食品的抗氧化性能，在加工食品中必要时需添加防腐抗氧保鲜剂。（钢铁光谱分析标准样品）预防食物氧化，除了采用低温、避光、真空等物理方法外，主要依靠在食品中加入抗氧化剂，以防止食品，特别是油脂的氧化。（光谱分析标准物质）我国已列入GB 2760中允许使用的抗氧化剂共有17种。主要品种大致分3类：化学合成的酚类化合物、维生素、天然提取物(茶多酚、甘草抗氧化剂、竹叶抗氧化剂等)。（光谱标准物质）

  • 食品添加剂中的“白富美”——植物中提取的抗氧化剂

    安全高效的抗氧化剂特丁基对苯二酚也是对健康有益的一种食品添加剂，因为抗氧化剂具有清除自由基的能力。当然，对于那些听到化学名词就心里不舒服的“自然爱好者”，另一些抗氧化剂可能更适合他们的胃口，比如维生素C和维生素E。还有一些抗氧化剂是直接从植物中提取的，比如茶多酚、甘草抗氧化物、迷迭香提取物、竹叶抗氧化物等，它们也包含多种抗氧化成分，不过在食品中添加的量也比较少。食品添加剂里面还有些品种听起来十分“高端”“洋气”，比如番茄红素、蜂蜡、石榴果汁浓缩物、薰衣草油、紫苏油等。甚至有些百姓厨房里的常见调料也算食品添加剂，比如八角、茴香、丁香、肉桂等。另外，目前中国人的饮食结构中90%是来自鲜活农产品，仅有10%左右来自加工食品，食品添加剂的威胁其实没有我们想象得那么可怕，而且适当吃一些具有营养强化作用的加工食品，是有益无害的。

  • “涩味”食物具有强烈的抗氧化强

    [color=#3e3e3e]“涩味”食物抗氧化强。葡萄皮、小苹果都是味道比较涩的食物，而它们的涩味其实是来源于植物中的单宁、植酸和草酸。这些涩味物质的抗氧化性都很强，对血脂和胆固醇都有一定效果。对女性来说，这种涩味物质单宁还有抗衰老、抗氧化、美白等功效。[/color]

  • 【原创大赛】钛盐比色（TSS）法——一种新的抗氧化能力检测方法

    【原创大赛】钛盐比色（TSS）法——一种新的抗氧化能力检测方法

    [b]钛盐比色（TSS）法——一种新的抗氧化能力检测方法[/b]过氧化氢（H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]）是一种非自由基形态的ROS，生物机体中的H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]主要产生于胞内的过氧化物酶体，包括葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶等在内的多种氧化酶在催化氧化还原反应的过程中均会伴随H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]的形成（Valko et al. 2007）。另外，SOD催化O[sub]2[/sub][sup]• -[/sup]的歧化分解也产生H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]。较其它生物类自由基，H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]活性（氧化还原能力）较弱但膜穿透能力较强，在正常生理pH和温度环境下，尤其是无过渡金属离子存在时，H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]通常被过氧化氢酶转化为O[sub]2[/sub]和H[sub]2[/sub]O。然而，H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]一旦产生过量，即可跨膜抵达胞内其它部位进而攻击多种生物大分子，如H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]可降解血红蛋白并释放出Fe[sup]2+[/sup]（Karadag et al. 2009），后者又催化H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]通过芬顿反应产生细胞毒性极强的[sup]• [/sup]OH。目前研究中用于测定物质清除H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]能力的方法主要分为三类：基于紫外分光技术的直接清除法、基于荧光的高香草醛法和冬莨菪素法以及基于化学发光的芳基草酸酯法和鲁米诺法，其中荧光法和化学发光法因仪器普及度不高和所用试剂昂贵而较少使用，应用较多的即为直接清除法（Direct scavenging, DS）。DS法依据H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]在紫外区有特征吸收且强度与其浓度成正比的原理而建立，当反应体系中存在H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]清除剂时230~240 nm处的特征吸收随之减弱（Ruch et al. 1989）。然而在DS法实际应用中，由于绝大部分物质在≤ 240 nm这一紫外区段都存在强烈的本底吸收而干扰读数，易致测试不能正常进行，尤其是对于植物提取物之类的复杂混合物样品（Amous et al. 2002 Karadag et al. 2009）。本研究在采用DS法测试VPE清除H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]能力时就遇到类似问题，因此有必要重新建立一种切实有效的测试复杂混合物清除H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]能力的方法。H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]在酸性条件下与钛离子（Ti[sup]4+[/sup]）可形成稳定的显色络合物，颜色深浅与H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]或Ti[sup]4+[/sup]量成比例，目前依据上述原理并利用TiOSO[sub]4[/sub]、Ti(SO[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]、K[sub]2[/sub]TiO(C[sub]2[/sub]O[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]、TiCl[sub]4[/sub]等钛盐定量H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]或H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]定量钛的研究多集中在植物生理学、冶金、印染等领域（Patterson et al. 1984 段颖等2001 张瑛洁等2008）。本文在DS法的基础上结合Ti(IV)-H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]显色原理，以VPE为测试对象，以期建立一种新的测定清除H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]能力的抗氧化评价方法。另外，对多种抗氧化测试手段的方法学特征进行综合考量，以期优选出一套系统研究冬剪枝条抗氧化的方法体系。[b]1 材料与方法1.1 供试材料1..2 主要试剂[/b]甲醇（MeOH）、丙酮（Me[sub]2[/sub]CO）、硫酸（H[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub]）等分析纯化学试剂购自西安化学试剂厂；过氧化氢（H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]）、四氯化钛（TiCl[sub]4[/sub]）及硫酸钛（Ti(SO[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]）等购自国药集团；维生素C（Vc）、没食子酸（GA）、水溶性维生素E（Trolox）等购自Sigma-Aldrich上海贸易有限公司。[b]1.2 研究方法1.2.1 钛盐比色法（Titantnium saltsspectrophotometry, TSS）[/b]TSS测试分为两步，第一步为清除反应，反应体系包括一定量（1 mL）不同浓度样品（标准物质或VPE）、H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]（0.5 mL, 10 mM）及PBS（1.5 mL, 60 mM pH 7.4），混匀于37°C水浴中准确温育30 min；第二步为显色反应，向温育后的反应体系中加入Ti(SO[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]溶液（0.1 mL, 50 mM），振荡后会产生少量黄色沉淀，随后再加H[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub]（2.0 mL, 1.2 M），待沉淀完全溶解即可测404 nm下Abs，反应体系终体积为5.1 mL。同体积H[sub]2[/sub]O替换H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]作空白或80% MeOH替换样品作对照。TSS法所测抗氧化能力，即H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]清除率按公式3-1计算，结果以EC[sub]50[/sub]（半清除浓度）、TEE（与单位质量VPE等效的Trolox量）及TES（与单位质量植物材料等效的Trolox量）表示。[b]1.2.2 直接清除法（Direct scavenging, DS）[/b]DS测试步骤同TSS法中的第一步反应，温育后的反应体系直接在240 nm下测Abs。同体积H[sub]2[/sub]O替换H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]作空白或80% MeOH替换样品作对照。DS法结果计算与表示同TSS法。[b]1.2.3 冬剪枝条中抗氧化物质的提取[/b]同3.1.2.1[b]1.3 数据处理[/b]以上指标至少重复测定3次，结果以均值（± S.D.）表示，实验数据采用Microsoft Office 2003和SPSS Statistics 17.0进行分析，差异显著水平为[i]P[/i] TSL ≥ CS CF KY ≥ ML RG CH ≥ HMG ≥ PN，除TSL与CS间、CH、HMG、PN互相间外，其余品种间皆存在显著差异（[i]P[/i] 0.05）。标准物质中清除力最强的为Catechin，略高于VPE中的VT；其次为TBHQ，清除力仅高于CH、HMG及PN；Vc和Trolox清除力相当。[align=center]表4-3 钛盐比色法和直接清除法测定冬剪枝条和标准物质清除过氧化氢能力[/align][align=center]Table 4-3 H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub] scavenging capacities of vine prunings andstandards estimated by TSS and DS assays[/align] [table][tr][td=2,2] [align=center]样品[/align] [align=center]Sample[/align] [/td][td=3,1] [align=center]TSS-H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub][/align] [/td][td=3,1] [align=center]DS-H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]EC-[sub]50 [/sub][/align] [align=center](μg/mL)[/align] [/td][td] [align=center]TEE [/align] [align=center](mM/g extr)[/align] [/td][td] [align=center]TES[/align] [align=center] (mM/g samp)[/align] [/td][td] [align=center]EC-[sub]50[/sub][/align] [align=center][sub] [/sub](μg/mL)[/align] [/td][td] [align=center]TEE[/align] [align=center] (mM/g extr)[/align] [/td][td] [align=center]TES[/align] [align=center] (mM/g samp)[/align] [/td][/tr][tr][td=1,10] [align=center]VPE[/align] [/td][td] [align=center]CF[/align] [/td][td] [align=center]116.43 ± 3.49 c[/align] [/td][td] [align=center]11.39 ± 0.34 e[/align] [/td][td] [align=center]1.61 ± 0.05 d[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]CH[/align] [/td][td] [align=center]183.65 ± 3.67 f[/align] [/td][td] [align=center]7.22 ± 0.14 b[/align] [/td][td] [align=center]0.81 ± 0.02 a[/align] [/td][td] [align=center]148.65 ± 7.98[/align] [/td][td] [align=center]8.32 ± 1.59[/align] [/td][td] [align=center]1.42 ± 0.11[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]CS[/align] [/td][td] [align=center]100.42 ± 2.01 b[/align] [/td][td] [align=center]13.20 ± 0.26 f[/align] [/td][td] [align=center]2.09 ± 0.04 e[/align] [/td][td] [align=center]90.22 ± 10.23[/align] [/td][td] [align=center]14.65 ± 1.16[/align] [/td][td] [align=center]2.09 ± 0.17[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]HMG[/align] [/td][td] [align=center]269.56 ± 4.20 h[/align] [/td][td] [align=center]4.92 ± 0.11 a[/align] [/td][td] [align=center]0.79 ± 0.02 a[/align] [/td][td] [align=center]88.76 ± 8.47[/align] [/td][td] [align=center]14.94 ± 0.65[/align] [/td][td] [align=center]2.39 ± 0.11[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]KY[/align] [/td][td] [align=center]119.66 ± 2.39 c[/align] [/td][td] [align=center]11.07 ± 0.22 e[/align] [/td][td] [align=center]1.41 ± 0.03 c[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]ML[/align] [/td][td] [align=center]140.53 ± 2.81 d[/align] [/td][td] [align=center]9.43 ± 0.19 d[/align] [/td][td] [align=center]1.40 ± 0.03 c[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]PN[/align] [/td][td] [align=center]253.75 ± 4.07 g[/align] [/td][td] [align=center]5.22 ± 0.10 a[/align] [/td][td] [align=center]0.76 ± 0.02 a[/align] [/td][td] [align=center]130.54 ± 9.87[/align] [/td][td] [align=center]11.04 ± 0.90[/align] [/td][td] [align=center]1.61 ± 0.08[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]RG[/align] [/td][td] [align=center]153.82 ± 4.61 e[/align] [/td][td] [align=center]8.62 ± 0.26 c[/align] [/td][td] [align=center]1.19 ± 0.04 b[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]TSL[/align] [/td][td] [align=center]94.63 ± 2.37 b[/align] [/td][td] [align=center]14.01 ± 0.35 g[/align] [/td][td] [align=center]2.10 ± 0.05 e[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]VT[/align] [/td][td] [align=center]63.64 ± 0.64 a[/align] [/td][td] [align=center]20.82 ± 0.21 h[/align] [/td][td] [align=center]3.05 ± 0.03 f[/align] [/td][td] [align=center]126.54 ± 9.87[/align] [/td][td] [align=center]11.04 ± 0.90[/align] [/td][td] [align=center]1.61 ± 0.08[/align] [/td][/tr][tr][td=1,4] [align=center]标准[/align] [align=center]物质[/align] [align=center]Stand.[/align] [/td][td] [align=center]Trolox [/align] [/td][td] [align=center]343.21 ± 5.02 i[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]321.21 ± 9.32[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Vc[/align] [/td][td] [align=center]345.35 ± 3.23 i [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]322.14 ± 7.65[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]TBHQ[/align] [/td][td] [align=center]180.32 ± 1.43 f[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]124.48 ± 6.32[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Catechin[/align] [/td][td] [align=center]61.93 ± 0.83 a[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]78.36 ± 8.84[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td=2,1] [align=center]VPE均值Avg.[/align] [/td][td] [align=center]149.61 ± 65.45[sup]**[/sup][/align] [/td][td] [align=center]10.59 ± 4.57[/align] [/td][td] [align=center]1.52 ± 0.70[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][td] [align=center]N/A[/align] [/td][/tr][/table]注: TEE或TES: 表示与单位干重VPE或植物材料等效的Trolox量 同列内数值后相同字母表示差异不显著 上标[sup]**[/sup]表示所有VPE的EC[sub]50[/sub]均值与Trolox间存在显著差异 N/A: 不可用.Note:TEE or TES: the amounts of Trolox having equivalent effects to unit mass ofextracts or botanical samples on dryweight Values with same letters in each column are not significantly differentat [i]P[/i] 0.05 ‘**’ indicatessignificant difference of the mean EC[sub]50[/sub] between all VPE and Troloxat [i]P[/i] 0.01 N/A: Not Available.对比TSS法，DS法在测试VPE过程中仅能对部分样品的H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]清除能力做出评价，但测定结果的重复性较差，其余样品因背景干扰过大且难以消除而致无法正常测试。当对VPE进行稀释时我们发现：稀释倍数较小时不足以消除干扰吸收，较大时VPE则丧失了清除能力。另外，在DS测试中，当VPE与H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]反应后，样品本底可能已经发生改变，尤其是对于紫外区波段下的吸收，这种情况下即便设置样品空白也可能是无效的。在对标准物质的测试中，就EC[sub]50[/sub]值而言，DS法虽在数值上低于TSS法，但两者所测不同物质间清除能力的差异趋势相同，同时，DS法依旧存在测定重复性差的问题，这主要是因为方法自身精密度较差（详见2.2.3精密度考察）。[b]2.4 TSS法与其它抗氧化测定方法的相关性[/b]相关性研究结果显示：在针对VPE的抗氧化能力测试中，TSS法与清除O[sub]2[/sub][sup]• -[/sup]的PMS/NADH法、清除[sup]• [/sup]OH的TBA法及清除ONOO[sup]-[/sup]的EB法之间呈极显著正相关（[i]P[/i] 0.01），与测定螯合力的Ferrozine法显著正相关（[i]P[/i] 0.05），而与清除人工自由基的ABTS法、清除[sup]1[/sup]O[sub]2[/sub]的RNO法、清除ROO[sup]• [/sup]的Crocin/ABAP法、测定还原力的CUPRAC法及抗脂质过氧化的TBARS法间呈弱相关无相关性。[align=center]表4-4 钛盐比色法与其它抗氧化方法之间的相关性[/align][align=center]Fig. 4-4Correlations between TSS and other antioxidative methods [/align] [table][tr][td] [/td][td] [align=center]TSS[/align] [/td][td] [align=center]ABTS[/align] [/td][td] [align=center]PMS/N.[/align] [/td][td] [align=center]TBA[/align] [/td][td] [align=center]Crocin/A.[/align] [/td][td] [align=center]RNO[/align] [/td][td] [align=center]EB[/align] [/td][td] [align=center]TNB[/align] [/td][td] [align=center]TBARS[/align] [/td][td] [align=center]Ferrozine[/align] [/td][td] [align=center]CUPRAC[/align] [/td][/tr][tr][td]TSS[/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]0.195[/align] [/td][td] [align=center]0.809[sup]**[/sup][/align] [/td][td] [align=center]0.925[sup]**[/sup][/align] [/td][td] [align=center]-0.001[/align] [/td][td] [align=center]0.212[/align] [/td][td] [align=center]0.787[sup]**[/sup][/align] [/td][td] [align=center]0.018[/align] [/td][td] [align=center]0.189[/align] [/td][td] [align=center]0.405[sup]*[/sup][/align] [/td][td] [align=center]0.277[/align] [/td][/tr][/table]注: 上标**表示在0.01水平显著(双尾) 上标*表示在0.05水平显著(双尾).Note:‘**’ indicate the significant correlation at the 0.01 level (two-tail) ‘*’indicates the significant correlation at the 0.05 level (two-tail).[b]2.5 不同抗氧化测试的方法学比较[/b]由于物质抗氧化作用的多重性特点，目前已建立的抗氧化方法虽达几十种之多，但尚无一种可全面评价物质的抗氧化特性，每种方法具体特征不一且仅能反映抗氧化作用的某一方面，因此在对给定测试物的抗氧化研究中，须结合实际情况同时采用多种不同方法尽可能给出全面评价。在方法的具体选择中，既要优先考虑使用具有生物相关性或近生理条件的方法，又要避免类似机理方法的重复但不失测试全面性，同时尽可能兼顾效率和成本。遵循上述原则，对本研究中的19种不同抗氧化测试进行了综合比较，结果见表4-5。在清除人工自由基测试中，DPPH和ABTS是两种同时基于电子转移（ET）和氢原子转移（HAT）的非竞争性机制方法，虽不具生物相关性，但因测试便捷、准确度高等特点，目前仍是应用最广泛的两种抗氧化评价方法，尤其适合大量样品初筛。两种方法在本研究中呈极显著的正相关关系，但因ABTS测试可在近生理pH下进行，且较DPPH法省时，因此在后续研究中若需进行人工自由基清除测试，则推荐使用ABTS法。在清除O[sub]2[/sub][sup]• -[/sup]中，PMS/NADH和VB[sub]2[/sub]/Met均为基于ET的竞争性机制方法，两者在VPE测试中呈极显著相关。PMS/NADH法虽然成本较高，但因其自由基产生过程为易控制的化学反应，较VB[sub]2[/sub]/Met的光激发更准确迅速、结果重复性也越高，同时测试环境更近pH，因此推荐PMS/NADH。在清除[sup]• [/sup]OH中，首先需说明的是外源抗氧化剂清除机体内[sup]• [/sup]OH的可能性很小，主要因为[sup]• [/sup]OH存在时间极短，一旦产生遂即攻击胞内的生物分子。尽管体外清除[sup]• [/sup]OH测试现实意义不大，但仍为广大研究者使用。本研究中TBA和Phen均为竞争性机制方法，但两种测试所用靶分子不同，前者为生物大分子脱氧核糖，后者为邻二氮菲-亚铁，因此TBA法的生物相关性更高，故推荐之。[align=center]表4-5 19种抗氧化方法的综合比较[/align][align=center]Table 4-5Comprehensive comparations of methodological aspects among 19 antioxidativeassays[/align] [table][tr][td] [align=center]方法[/align] [align=center]Method[/align] [/td][td] [align=center]动力学[/align] [align=center]Kinetics[/align] [/td][td] [align=center]pH值[/align] [align=center]pH value[/align] [/td][td] [align=center]生物相关性[/align] [align=center]Biolo. rele.[/align] [/td][td] [align=center]可能机理Possi. mech.[/align] [/td][td] [align=center]反应时间[/align] [align=center]Time (min /one samp.)[/align] [/td][td] [align=center]费用[/align] [align=center]Cost (CNY /100 samp.)[/align] [/td][td] [align=center]难度[/align] [align=center]Diffi.[/align] [align=center]level[/align] [/td][td] [align=center]综合推荐[/align] [align=center]Recom.[/align] [align=center]level[/align] [/td][/tr][tr][td]DPPH[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]‘N/A’[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][td] [align=center]ET, HAT[/align] [/td][td] [align=center]40[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆[/align] [/td][/tr][tr][td]ABTS[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]7.0[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][td] [align=center]ET, HAT[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]PMS/NA.[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]++[/align] [/td][td] [align=center]ET[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]170[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]VB[sub]2[/sub]/Met[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.8[/align] [/td][td] [align=center]+[/align] [/td][td] [align=center]ET[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆[/align] [/td][/tr][tr][td]TBA[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]+++[/align] [/td][td] [align=center]EA, HAT[/align] [/td][td] [align=center]75[/align] [/td][td] [align=center]95[/align] [/td][td] [align=center]※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]Phen[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]+[/align] [/td][td] [align=center]EA[/align] [/td][td] [align=center]60[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]TSS[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]+[/align] [/td][td] [align=center]EA[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]CRT/LA[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.0[/align] [/td][td] [align=center]+++[/align] [/td][td] [align=center]HAT[/align] [/td][td] [align=center]180[/align] [/td][td] [align=center]720[/align] [/td][td] [align=center]※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]Crocin/AB.[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]+++[/align] [/td][td] [align=center]HAT[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]RNO[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.0[/align] [/td][td] [align=center]+++[/align] [/td][td] [align=center]PQ[/align] [/td][td] [align=center]40[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]TNB[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]++[/align] [/td][td] [align=center]ET[/align] [/td][td] [align=center]15[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]SNP[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]++[/align] [/td][td] [align=center]ET, NT[/align] [/td][td] [align=center]190[/align] [/td][td] [align=center]40[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]EB[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]++[/align] [/td][td] [align=center]NT[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]20[/align] [/td][td] [align=center]※※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]TBARS[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]+++[/align] [/td][td] [align=center]HAT[/align] [/td][td] [align=center]115[/align] [/td][td] [align=center]670[/align] [/td][td] [align=center]※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]FTC[/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]7.4[/align] [/td][td] [align=center]+++[/align] [/td][td] [align=center]HAT[/align] [/td][td] [align=center]10085[/align] [/td][td] [align=center]1450[/align] [/td][td] [align=center]※※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]Ferrozine[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]6.8[/align] [/td][td] [align=center]+[/align] [/td][td] [align=center]CO[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][tr][td]PB[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]6.6[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][td] [align=center]ET[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]205[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆[/align] [/td][/tr][tr][td]FRAP[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]3.6[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][td] [align=center]ET[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]100[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆[/align] [/td][/tr][tr][td]CUPRAC[/td][td] [align=center]NC[/align] [/td][td] [align=center]7.0[/align] [/td][td] [align=center]+[/align] [/td][td] [align=center]ET[/align] [/td][td] [align=center]20[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]※[/align] [/td][td] [align=center]☆☆[/align] [/td][/tr][/table]注: C: 竞争性机制 NC: 非竞争性机制 EA: 亲电加成 ET: 电子转移 HAT: 氢原子转移 PQ: 物理猝灭 NT: 硝基化 CO: 配位 ‘-、+、++、+++’：无、低、中、高生物相关性 ‘※、※※、※※※’: 低、中、高操作难度 ‘☆、☆☆、☆☆☆’: 低、中、高推荐程度 N/A: 不可用.Note: C:competitive NC: non-competitive EA: electrophilic addition ET: electrontransfer HAT: hydrogen atom transfer PQ: physical quenching NT: nitration CO: coordination ‘-、+、++、+++’:non-、low-、medium-、high-relevance ‘※、※※、※※※’: low-、medium-、high-operationdifficulty ‘☆、☆☆、☆☆☆’: low-、medium-、high-recommendation N/A: Not Available.对于清除H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]，传统的直接清除法因背景干扰难以消除，未能够准确评价全部被测VPE，新建TSS测试虽属于非竞争性机制反应，但却适用于VPE和众多其它抗氧化剂的测试，故作推荐。对于清除ROO[sup]• [/sup]，CRT/LA和Crocin/ABAP在方法机制、生物相关性及反应机理等方面均相似，两者之间在本研究中也呈极显著正相关。但在具体反应过程中，两者靶分子敏感度不同，CRT/LA测试中除ROO[sup]• [/sup]之外的多种因素可致CRT漂白，而Crocin/ABAP法中Crocin只对ROO[sup]• [/sup]敏感且测试更为快速、经济，故而推荐后者。RNO法是一种基于物理猝灭[sup]1[/sup]O[sub]2[/sub]的竞争性机制方法，具有生物相关性高、操作相对简单、费用低廉等特点，宜作推荐。清除HOCl的TNB法是一种基于ET的竞争性机制测试，生物相关性中等，但自由基获取非常方便，也宜作推荐。在清除含氮活性氧NO[sup]• [/sup]和ONOO[sup]-[/sup]测试中，SNP法和EB法均属竞争性反应机制，生物相关性中等，反应机理前者以硝基加成（NT）和ET为主，后者主要为NT。本研究中中SNP与EB间存在极显著正相关性，但因生物机体内NO[sup]• [/sup]易转化活性更强的ONOO[sup]-[/sup]，故而应用EB法评价ONOO[sup]-[/sup]清除能力现实意义更大，故作推荐。在抗脂质过氧化测试中，TBARS和FTC在反应机制、机理及生物相关性等方面均相似，两者之间也呈极显著的正相关关系，不同之处在于FTC法耗时长且费用高，因此在后续研究中推荐使用TBARS法。螯合过渡金属离子作为物质抗氧化的重要机制之一，对于抑制自由基形成和脂质过氧化有着重要意义。Ferrozine法测定Fe[sup]2+[/sup]螯合力方便、快速、准确，故作推荐。还原力测试中，PB、FRAP及CUPRAC均为基于ET的非竞争性机制方法，三者之间相关度极高，不同的是PB和FRAP须在酸性条件下进行，且反应易受糖、有机酸等还原性物质干扰，而CUPRAC可在近生理的中性环境下进行，反应选择性较高（由于Cu[sup]2+[/sup]氧化还原电位低于Fe[sup]2+[/sup]），同时耗时少、费用低，故推荐之。综上，为了尽可能全面分析葡萄冬剪枝条的抗氧化能力，我们推荐使用ABTS、PMS/NADH、TBA、TSS、Crocin/ABAP、RNO、TNB及EB等方法检测冬剪枝条清除人工自由基和多种活性氧的能力，使用TBARS法评价其抗脂质过氧的能力，使用Ferrozine法测试其螯合金属离子的能力，使用CUPRAC法衡量其还原特性。[b]3 小结[/b]本文在DS法的基础上应用Ti(IV)-H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]显色原理，建立了一种新的测定H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]清除能力的抗氧化方法—钛盐比色（TSS）法。另结合第三章内容，对19种抗氧化测试的方法学特征进行了综合考量，小结如下：（1）TSS法测试分为清除和显色两步，清除步骤的反应体系：适量VPE（1.0 mL, 0~400μg/mL）、H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]（0.5 mL, 10 mM）及PBS（1.5 mL, 60 mM pH 7.4），反应温度37°C，反应时间30 min。显色步骤参数：Ti(SO[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]（0.1 mL, 50 mM）和H[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub]（2.0 mL, 1.2 M）。反应体系终体积5.1 mL。最佳检测波长404 nm。（2）方法验证结果：线性范围1.7~33.3 mg/mL，摩尔吸光系数1030.6 L/M cm，检测限0.11 mg/L，定量限0.35 mg/L，精密度（RSD）0.58~3.36%，回收率84.3~96.1%。TSS法可成功用于评价VPE和多种标准物质的H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]清除能力，且灵敏度高于DS法近23倍，同时精密度、重复性、准确度均优于DS法。（3）所有VPE在测试浓度范围内均能有效清除H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]，且量效关系明显，平均清除力约为标准物质Trolox和Vc的2.3倍，但低于Catechin和TBHQ。不同品种间的清除能力存在差异，最强和最弱的分别为VT和PN。（4）相关性研究显示TSS法与PMS/NADH、TBA、EB及Ferrozine法之间存在极显著或显著正相关关系（[i]P[/i] 0.01或0.05），而与ABTS、RNO、Crocin/ABAP、CUPRAC及TBARS法间无相关性或呈弱相关。综合考量19种抗氧化测试的方法学特征，推荐使用ABTS、PMS/NADH、TBA、TSS、Crocin/ABAP、RNO、TNB、EB、TBARS、Ferrozine及CUPRAC等11种用于系统研究冬剪枝条的抗氧化特性。

  • 【转帖】抗氧化水果排行榜

    [em25] [em25] [em62] [em62] 抗氧化水果以吸收自由基的能力从大到小排列：1 梅干 2 葡萄干 3 蓝梅 4 黑梅 5 草莓 6 木梅7 李子 8 橙子 9 黑葡萄10羽衣甘蓝 11菠菜 12球牙甘蓝13花椰菜 14 甜菜根 15辣椒16洋葱 17甜玉米 18樱桃希望能对你的日常饮食起到作用哦！

  • 【求助】做某种子油的抗氧化活性实验问题？

    有关油脂抗氧化清除自由基的实验问题请教各位大侠：我最近做某种子油的抗氧化活性实验，采用的是Fenton法测定油脂清除羟自由基的活性，邻苯三酚自氧化法测定油脂清除超氧阴离子的活性，但均未重复出文献中的实验结果。我是用乙醇配制的油脂溶液。不知道我的问题出在哪里，请有经验的大侠支支招。谢谢

  • 气相做抗氧化剂

    想问问各位做过抗氧化剂的前辈，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]做抗氧化剂，假如按照国标上来操作，就需要过凝胶，但是操作过程就相对的麻烦，大批量的时候完全不够。有没有方便一点的处理方式，能够完成大批量的操作！??????

  • 抗氧化剂检测的常见问题及解决方案

    抗氧化剂检测的常见问题及解决方案一、案例背景及具体问题描述　　抗氧化剂是指能防止或延缓食品氧化，提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。常用的有丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）等人工合成的油溶性抗氧化剂，能对油脂和含油脂的食品起到良好的抗氧化作用。在脂溶性抗氧化剂的日常检测中，常见问题主要集中在样品前处理过程中。　　目前常用检测方法：GB/T 23373-2009《食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）与特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定》，适用于各类食品；NY/T 1602-2008《植物油中叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2，6－二叔丁基对甲酚（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定高效液相色谱法》，适用于植物油；SN/T 1050-2014《出口油脂中抗氧化剂的测定高效液相色谱法》，适用于色拉油和人造奶油等油脂。虽然适用范围各不相同，但是最终检测物都是油脂，不同之处在于前处理过程，日常检测样品类型分为以下几类：　　(1)液体油，如大豆油、玉米油。　　(2)固体油，如人造奶油、黄油、氢化油。　　(3)各类食品，如糕点、膨化食品、各类坚果。

  • THF中的抗氧化剂

    GPC常用的流动相是THF，不知各位有没有注意过其中的抗氧化剂，我使用紫外-折光串联检测器，注意到一个现象（可能熟手都知道，当我嫩吧），用不太新鲜的THF或者重新蒸馏过的THF，主峰后面中有一个固定时间和峰高（前提是样品浓度不变，进样量不变），这是不是THF中的抗氧化剂？图片：不知道如何上传。。。。。。。

  • 【求助】抗氧化剂相关求助！！！谢谢

    大家好： 我们公司最近开展了抗氧化剂的检测，使用的方法是NY/T1602-2008，方法挺简单的 ，但是该方法中对分析结果的描述我不是很清楚，麻烦哪位高人指教指教，不胜感谢！方法：准确称取植物油约5g，至于15ml具塞离心管中，加入8ml甲醇，离心，取出上清液于25ml容量瓶中，残余物每次用8ml甲醇提取两次，清液合并于25ml容量瓶中，用甲醇定容，过滤进样。 计算公式是X=(A*V1*D*1000)/(V2*M) 式中：X-样品中抗氧化剂的含量（单位mg/kg) A-将样品所得峰面积带入工作曲线，计算所得进样体积中抗氧化剂的数值（单位为ug） V1-加入流动相体积的数值（单位为uL) V2-进样量的数值（单位为uL) D-稀释倍数 M-样品质量的数值（单位为g）

  • 食品类抗氧化剂需要满足哪些要求？

    [color=#666666][font=arial, helvetica, sans-serif][color=#000000][b]什么是抗氧化剂？[/b][/color][/font][/color][color=#666666][font=arial, helvetica, sans-serif][color=#000000]抗氧化剂是阻止氧气不良影响的物质。它不仅可以延长食品的贮存期、货架期，给生产者、消费者带来良好的经济效益，而且给消费者带来更好的食品安全。[/color][/font][/color][b]食品类抗氧化剂需要具备哪些条件？[/b][font=arial, helvetica, sans-serif][size=16px]1、本身及分解产物都无毒无害；[/size][/font][color=#666666][font=arial, helvetica, sans-serif][color=#000000]2、稳定性好，与食品可以共存；[/color][/font][/color][font=arial, helvetica, sans-serif][size=16px]3、具有优良的抗氧化效果；[/size][/font][font=arial, helvetica, sans-serif][size=16px]4、对食品的感官性质无影响；[/size][/font][font=arial, helvetica, sans-serif][size=16px]5、使用方便，价格便宜。[/size][/font]

  • 香辛料在肉类 食品中抗氧化效应

    香辛料是一类传统的肉类调味品。现代研究表明:除了调味功能以外,香辛料中丰富的天然成分还有很好的抗氧化活性,在油脂和富含脂肪的肉类食品中能起到抑制脂肪氧化,延长保质期的功效。

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