利妥昔单抗

[align=left][/align]【作者】：崔靖 韩冬梅 徐隆昌 韦薇【题名】：曲妥珠单抗生物类似药质量"相似性评价标准"探讨【期刊】：药学学报【年、卷、期、起止页码】：2021-01-01【全文链接】：10.16438/j.0513-4870.2021-0998

大家说说单抗的杂质分析，该分析些什么，该怎么分析呢？[em0806][color=#DC143C][size=4]单抗是什么？请楼主说明，谢谢。[/size][/color]

关于动物免疫，在多抗制备一部分里有一些讲解（点击这里查看），这里只简要讲述一下单抗制备中需要注意的几个问题。在概述部份已经讨论过，用来制备单抗的动物主要有小鼠、大鼠和兔，由于小鼠易饲养、小鼠单抗技术成熟、路线简单，因此是制备单抗使用的主流动物，这里主要以小鼠单抗制备展开讲述。免疫途径和周期：单抗制备中，免疫动物的方式一般第一针采用皮下免疫，后面的加强免疫采用腹腔免疫、腘内免疫、皮下免疫或者脾内直接免疫。首次免疫和加强免疫结束后，在融合前三天一般还要进行一次冲击免疫，以增加脾脏内浆细胞的数量。下面这张表列出了常见的免疫途径和周期：http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384840870png_small.jpg 说明：FCA，弗氏完全佐剂；FIA，弗氏不完全佐剂；Quickantibody，北京康碧泉公司研制的佐剂。上表中第四种免疫方法产生的抗体大部份都为IgM，存在亲和力弱等缺点，慎用。关于操作的问题，这里只作一下简单的介绍，具体如何进行，需要在有相关经验的实验员指导下进行，也可以在网上找到相关视频进行学习。（1）皮下注射。皮下注射的操作有点像给人接种疫苗，即挑取动物的皮肤，将混好佐剂的抗原直接注射。一般皮下注射每个注射点注射30-50ul左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点为宜。（有的资料上称这种方法为皮内免疫，造成这种概念上的混淆可能是由于早期工作者们的翻译过程出了问题），皮下操作一般由两人进行，一个协助固定小鼠，另一个进行免疫操作。（2）腹腔注射。腹腔注射比较简单，只需要一人操作，操作者由左手抓住小鼠尾巴和颈部皮肤，将小鼠翻转过来，腹部向上，将抗原直接注射到腹腔。如果抗原混有弗氏佐剂，建议注射在左侧腹腔，如果采用右侧腹腔注射，则在免疫过程中，很容易导致小鼠脾脏与腹膜粘连的情况，造成后期取出脾脏麻烦。（3）尾静脉注射。个人觉得尾静脉注射是技术要求最高的一种注射方式，操作者需要固定小鼠，然后将抗原注射到小鼠尾部静脉（正中间那根血管）。小鼠尾静脉比较细小，一般新手很难操作成功，需要在其它小鼠身上多次尝试才可以进行免疫操作（站长自己尝试了十多次都未成功）。静脉注射抗原对抗原的要求更高，抗原必须不含去垢剂和其它有毒成份，否则极容易引起动物死亡，而且免疫剂量也不宜过大。（4）脾内注射。脾内注射是效果最好的免疫方式，因为这种方式使得脾细胞直接与抗原接触，所以很容易引起免疫应答反应。但是很多人都认为这种方式操作复杂，而且死亡率高，但是参考了一些文献，加上自已实践操作，站长自己总结出了一套比较好的办法，成功率基本上在百分之百。具体操作方法：先用乙醚或戊巴比妥钠进行麻醉，乙醚麻醉过程比较简单，技术含量低，对于初学者比较适用，推荐。事先准备一块棉花，将少量乙醚倒在棉花上，用一烧杯倒扣住，将小鼠也扣在烧杯下，一般在一分钟内小鼠就可以晕到，此时将小鼠取出，用胶带固定在木板或实验台上（腹部向下，背面向上。无需无菌），用手术剪刀剪开背部左侧皮肤（大至就是脾脏所在的位置，不要剪开内膜），剪开小口后，用手将剪口撕大看到腹膜内脾脏即可将用注射器刺穿腹膜，插入脾脏，直接注射抗原，抽出注射器。然后用胶水（推荐AB胶，五金店有卖的）将剪口周围的毛粘好，胶干后在伤口周围涂上抗生素即可，无需要无菌操作。由于需要用到胶水，所以手术前不要用酒精消毒。（5）小腿肌肉注射。这是康碧泉公司的Quickantibody佐剂独有的免疫方法，具体操作是：先抓紧小鼠，用无名指固定一只后腿，将小腿部分用酒精消毒，将混好佐剂的抗原（根据佐剂说明书抗原与佐剂等体积混合）直接注入到小腿肌肉，稍稍停顿后拔出注射器即可。完成首次免疫和加强免疫后，可以取出少量血清进行效价检测（参见多抗制备中的血清采集与检测），达到足够高的效价后即可进行冲击免疫，冲击免疫完成后，应在96小时内完成细胞融合，否则相应的B细胞数量会下降到未冲击前的水平。在单抗制备过程中，除了通过免疫动物得到可分泌抗体的B细胞外，还可以将未免疫的小鼠脾脏取出，在体外进行免疫，从而大大加快制备周期，其基本方法是：取出未免疫小鼠的脾脏，处理成为单个细胞，然后在完全培养基中培养，同时加入一定浓度的抗原刺激其产生抗体。需要注意的是，这种方法由于不存在完整的免疫应答路径，所以只能产生出亲和力不成熟的IgM型的抗体，大部分实验中基本不能使用这种抗体（除非是专门研究IgM抗体特性）。

做毛细管电泳的新手，求能够有效分离单抗轻重链并进行回收的实验方法，商品化的试剂盒最好。现在在做的一个单抗异质性很多，希望能将轻重链分离后再检测

对于未来单抗仿制药市场发展值得期许，主要原因包括：　　首先，仿制药相对于原研药价格较为低廉，市场竞争力强，尤其是在需求潜力巨大的当下，对于很多消费者来说，价格高企是导致单抗不能成为主流抗肿瘤或者抗自身免疫性疾病以及其他一些疾病的主要制约因素，随着专利到期（根据相关统计，2014-2019年，美国有四个、欧洲及其他国家有6个单抗产品专利将到期。），一大批仿制药的上市，单抗将走下神坛，虽然短时间内不能实现平民化，但市场规模的大幅增长已经可以基本确定。　　其次，随着我国医药企业研发能力的不断提升，单抗仿制药在临床应用效果上也将较原研药进一步缩小。价格相对低廉、较好的用药疗效将势必带来单抗用药比率的提升。　　第三，虽然目前国家还没有明确的生物仿制药研发指导原则和相关法规，但根据相关部门透漏，目前药品监管部门已经在加紧完善相关法规了，预计政策年内就会出台。另外，国家已经正式启动了生物类仿制药监管准则的编制，预计年内就将向企业发布技术指南。前瞻产业研究院认为，国产仿制药在专利解禁期来临后尽快上市，将极大提高生物药对普通百姓的可及性，从目前国内单抗仿制药的研发进展来看，更是如此。

[center]近日英国NICE建议应用阿达木单抗治疗银屑病[/center]近日，英国国家卫生与临床评价机构(NICE)公布一份指南草案：对符合一定条件的严重银屑病成人患者，可以用阿达木单抗 (adalimumab )作为一种选择治疗方法。 该指南草案限制对标准全身治疗无应答或对这类治疗不耐受或有禁忌证的患者使用阿达木单抗。标准治疗包括环孢素(ciclosporin)、甲氨蝶呤(methotrexate)及补骨脂素(psoralen)加紫外线照射。NICE的指南草案建议，第16周仍对治疗无应答的患者应停止阿达木单抗的治疗。 在以往的相关指南中，NICE向同类人群推荐依那西普(etanercept)。在最近的评价中，该机构委员们称，不做出依那西普优于阿达木单抗的推荐建议，医生可根据临床情况在这两种产品中进行选择。 阿达木单抗治疗患者应是适用抗肿瘤坏死因子的治疗人群，此类患者病情严重，NICE定义为银屑病区严重指数(PASI)达到10或超过10，皮肤病生活质量指数(DLQI)超过10； 对阿达木单抗有明显应答的银屑病定义为，治疗期间PASI数值降低75%，或PASI值降低50%且DLQI减少5个点。卫生专业人员采用DLQI数值制定治疗方案时要考虑患者的身体残疾情况或者语言或沟通困难程度。 信息来源:中国医药123网

如题，用CE-SDS方法分析单抗，做了一段时间，也有了一些数据，但不知道该怎样准确理解这些数据。首先Becman提供的一个文献里（见附件），作者测了一个已知NG（non-glycosilation)含量为9%的IgG,分别在reduced和Non-reduced条件下测定。结果是，两个条件下测出的NG含量基本一致，接近理论值，并且重链和轻链的比例也是接近2.而我现在做的那个抗体，在reduced条件下和在non-reduced条件下测得的NG含量差异较大，reduced条件下的要明显低于non-reduced的。并且重链和轻链的比值不是接近2，而是2.5。我用PNG酶切过之后，NG出峰位置含量明显增加。另外我还做了几个stressed的样品，比如双氧水氧化的，比较明显的是在Intact-mAb(non-reduced条件）和重链前（reduced)出现很大的峰。下面是几个问题：1. 理论上，reduced条件下测得的NG含量应该是和Non-reduced条件下测得的接近（同文献）还是说其实这是CASE BY CASE的？因为是和UV吸收有关，如果几个有紫外吸收的氨基酸在轻重链上的分布不均衡，比如在轻链上更多，那轻链的响应值就会比较高，这样轻重链的比值就不是简单的1:2了。而NG的含量在两个条件下也就不一定相关了。2、双氧水处理之后产生了Mw不一样的峰，可能是什么东西，是破坏了什么键产生的？3.为什么单抗的CE-SDS分析通常都做还原和非还原的条件，二者所得的数据是怎样互补的？谢谢大家的答疑解惑，欢迎交流！补充一个疑问，是关于还原和非还原条件的。还原条件用的是巯基乙醇，打开二硫键；非还原条件用的是250mM的碘乙酰胺。我经常在文献上看到是这么说的：还原时先用巯基乙醇打开二硫键，然后再加烷化剂碘乙酰胺保护已生成的巯基，避免重新生成二硫键。然后我就很纳闷，那为什么再做CE-SDS的时候，还原时用了巯基乙醇后不再加烷化剂保护巯基，而非还原的时候为什么要加碘乙酰胺，是要保护单抗中的游离巯基么（没理由啊？？）

[font='Segoe UI'][color=#05073b]当您购买抗体时，需要考虑很多因素。比如，抗体是否能在您的细胞或组织模型中发挥作用？是否在您要使用的应用中经过测试？有时候，由于您的选择有限，很难找到所需的东西，但在其他情况下，可能有几种试剂似乎可以在您的实验中使用。[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#05073b]如果您正在寻找针对同一靶点的单克隆、多克隆或重组抗体，那么它们之间的区别是什么呢？哪一个更优越呢？还是它们都是为不同目的而设计的？这是一个复杂的问题，但绝对值得一问。[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#05073b][font=Segoe UI]多克隆抗体是由不同[/font]B淋巴细胞群体产生的抗体的异质混合物，这些细胞可以识别同一免疫原内的不同表位。多克隆抗体通常在兔中产生，但也可以在其他动物如绵羊、山羊、马和啮齿类动物中产生。多克隆抗体的产生通常涉及收集被免疫动物的血液，分离免疫球蛋白级分，并进行亲和纯化以去除非特异性抗体群。[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#05073b][font=Segoe UI][url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体[/b][/url]是由单个[/font]B细胞克隆产生的同质抗体，这种抗体可以识别免疫原内的单个表位。所有的单克隆抗体都是从多克隆抗体库中筛选和克隆而来的。单克隆抗体通常由啮齿类动物、兔和骆驼科动物产生，并根据所需抗体的种属和类型通过各种方法进行生产。传统上，单克隆抗体是通过永生化B细胞的稳定克隆产生的，这些细胞是在小鼠中注射和收集腹水或培养表达抗体的B细胞的过程中获得的。[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#05073b]总的来说，单克隆抗体和[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体[/b][/url]在产生方式及应用上都有一定的区别。在选择使用哪种抗体时，需要根据具体的实验需求和应用场景进行决定。同时，无论使用哪种类型的抗体，都需要在预期的应用场景中进行正确的验证，以确保实验结果的准确性和可靠性。[/color][/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333] [/color][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]多克隆抗体[/color][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]单克隆抗体[/color][/font][/b][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]开发和生产成本[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]开发和生产便宜[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]开发昂贵，生产费用不高[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]开发和生产的技术专长[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]低[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]高[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]开发时间[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]短（在四个月内免疫纯化的多克隆抗体）[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333][font=微软雅黑]长（需要多轮克隆[/font][font=微软雅黑]/选择才能分离到同质）[/font][/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]验证时间[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]初步验证后，必须重新验证每个新取血或批次以确保一致性[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]生产方法可确保更高的一致性，但强烈建议在生产运行之间进行重新测试[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]寄主种属[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]兔、绵羊、山羊、马、鸡[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]小鼠、大鼠、兔、豚鼠、羊驼、美洲驼[/color][/font][/td][/tr][tr][td=1,2][b][font=微软雅黑][color=#333333]生产方式[/color][/font][/b][/td][td=1,2][font=微软雅黑][color=#333333]从血清中收集和纯化[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#616161]从腹水或培养的细胞上清液中收集和纯化[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#616161]重链和轻链在哺乳动物细胞系中的重组表达[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]敏感度[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于识别多个表位而提高了灵敏度，是低丰度蛋白的理想选择[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]灵敏度取决于抗体对目标表位的亲和力，大多数克隆是根据亲和力和功能性选择的[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]特异性[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于多价而可能导致脱靶反应[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于单价相互作用，特异度更高[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]一致性[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于免疫原性漂移和其他因素而导致批次间差异的风险[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于选择和生产方法，批次间高度一致[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]亲和力[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于抗体的异质性只能估算[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]由于表位和抗体的单价性质，可测量[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]能够与染料和其他官能团结合？[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]Yes[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]Yes[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]应用[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]WB、IP、IF/IC、IHC、流式、ChIP、ELISA[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]WB、IP、IF/IC、IHC、流式、ChIP、ELISA[/color][/font][/td][/tr][tr][td=1,3][b][font=微软雅黑][color=#333333]稳定性[/color][/font][/b][/td][td=1,3][font=微软雅黑][color=#333333]高[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333] [/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#616161]兔单克隆抗体：高[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#616161]小鼠单克隆抗体：中等[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]用作伴随或临床诊断？[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]很少[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]Yes[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]用作治疗剂？[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]很少[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]Yes[/color][/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#333333]能够在遗传水平上工程化抗体（人源化等）？[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]否[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#333333]Yes[/color][/font][/td][/tr][/table][font=Calibri] [/font][font=宋体]义翘神州提供单抗和多抗全方位服务，单抗包含[/font][font=宋体]①快速鼠单抗制备服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]从免疫动物到获得阳性克隆，仅需[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]天。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②标准鼠单抗制备服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]提供具有高特异性和高亲和力的小鼠单克隆抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③兔单克隆抗体制备服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]能识别人、小鼠和大鼠的新型靶点表位，具有高特异性和高亲和力。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④重组抗体制备服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]多种类型：全长抗体、嵌合、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]和双抗等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体开发服务[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞高通量筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥定制磷酸化抗体服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与非磷酸化多肽的交叉反应[/font][font=Calibri]1:256,000[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri][font=Calibri]②[/font][font=宋体]快速兔多克隆抗体开发服务[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]周期[/font]: 45[font=宋体]天[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri][font=宋体]周期短，使用快速免疫方案，保证[/font]ELISA[font=宋体]效价[/font][font=Calibri]1:256,000[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri][font=Calibri]③WB/IHC[/font][font=宋体]保证型兔多克隆抗体服务[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]周期[/font]: 15-19[font=宋体]周[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri][font=宋体]保证交付满足[/font]WB/IHC[font=宋体]应用的兔多抗。[/font][/font][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][u][font=宋体][color=#0000ff][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services[/font][/color][/font][/u][/url][font=Calibri] [/font][font=宋体]单抗：[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][u][font=Calibri][color=#0000ff]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/color][/font][/u][/url][font=Calibri] [/font]

[center]研究称贝伐单抗导致静脉血栓栓塞风险增加[/center]一项新的荟萃分析结果显示，一种目前正在广泛使用的新一代抗癌药物贝伐单抗（商品名Avastin），可能会导致患者腿部或肺部静脉血栓栓塞风险增加。 此项研究由美国纽约Stony Brook大学的Shobha Rani Nalluri博士及其同事完成，其结果发表在11月19日出版的《美国医学会杂志》上（JAMA，2008,300（19）：2277-2285）。 贝伐单抗是一种血管生成抑制剂类抗肿瘤药，它能阻止和延缓新生血管的生成，阻碍肿瘤的生长及转移。由于贝伐单抗具有较好的肿瘤靶向性，以及对许多类型的实体瘤，如结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌和非小细胞肺癌（NSCLC）等均有良好的治疗效果，因此这种新一代抗癌药物在临床上得到了广泛的应用。 静脉血栓栓塞是癌症患者的一种常见并发症和致死因素，同时，越来越多的证据表明，多种抗癌药均能够明显增加癌症患者血栓形成的风险。以往的一些临床研究显示，贝伐单抗也有增加癌症患者血栓形成的倾向，但是由于这些研究涉及的病例数较少，所以一直都无法得出具有统计学意义的结论。为此，Stony Brook大学的研究人员对目前已完成的共纳入7956名不同类型晚期实体瘤患者的15项随机对照临床试验数据进行了荟萃分析，以期解开贝伐单抗是否会导致静脉血栓栓塞风险增加这一谜团。 最终，此项研究的结果显示： 1. 接受贝伐单抗治疗的患者中，有11.9%出现不同程度的静脉血栓栓塞，其中有6.3%属于严重的具有临床意义的静脉血栓栓塞。 2. 与未接受贝伐单抗治疗的患者相比，接受贝伐单抗治疗的患者出现静脉血栓栓塞的风险相对增加33%。 3. 与未接受贝伐单抗治疗的患者相比，接受贝伐单抗治疗的患者出现各种类型静脉血栓栓塞的总风险以及出现严重静脉血栓栓塞的风险均有明显增加。 4. 大剂量（5mg/kg/wk）和小剂量（2.5mg/kg/wk）贝伐单抗治疗，均可导致静脉血栓栓塞风险增加。 5. 贝伐单抗导致各类型静脉血栓栓塞的风险高低与癌症种类有关。 6. 各类癌症患者应用贝伐单抗后出现静脉血栓栓塞的风险排序为：结肠直肠癌（19.1%），NSCLC（14.9%），乳腺癌（7.3%）和肾癌（3.0%）。 研究者得出最终结论，认为贝伐单抗可使癌症患者静脉血栓栓塞风险明显增加，这种风险不仅来自于严重程度较低的静脉血栓栓塞，而且还来自于更为严重的具有临床意义的静脉血栓栓塞。研究者同时认为，此项研究将有助于临床医生和患者进一步认清贝伐单抗导致静脉血栓栓塞的危险性。虽然临床医生和患者无须因此而停止使用贝伐单抗，但在今后的使用过程中应对可能出现的血栓形成症状保持更高的警惕性。信息来源:医药经济报

如题，我做的一个单抗A用碘乙酰胺封闭二硫键，混合后产生了沉淀；用其他的单抗B样品就没事。而且其他的单抗样品B溶于单抗A的溶剂后再加碘乙酰胺也是澄清的。求问这是什么原因，有没有别的烷化剂或者别的合适的方法来封闭二硫键呢

各位好，想求助一下，做单抗的还原CE-SDS分析时，重链峰出现裂峰情况，是什么问题呢？更换人配样，热处理温度也换过，没改善。

1. 为什么免疫后没有效价或免疫后效价低？答：可以从这几个方面一一考虑：（1）设计的抗原与被免疫的动物内源蛋白有极高的同源性或者抗原是免疫原性极差的小分子物质。对于前一种情况应该重新设计抗原，设计抗原时尽量选取目标蛋白特异性的序列，可以设计为短肽然后再与载体蛋白偶联之后免疫；对于后一种情况，首先确认小分子物质是否已经正确地和载体蛋白偶联，如果偶联没有问题，可以更换其它的载体蛋白，一般来说KLH是所有载体中较为优先考虑的蛋白。（2）免疫的周期不正确。免疫周期过长或过短，各免疫步骤之间的间隔过长或过短都有可能影响免疫效果，详细请参考本站有关动物免疫的部份，实际操作中的相关程序与本站推荐的程序相差尽里不超过50%的偏差。（3）免疫佐剂不合适。TiterMax等佐剂在免疫时，对于某些抗原可能效果不佳，弗低佐剂也不能保证完全有效，此时可以考虑更换佐剂尝试。（4）免疫剂量不合理。过大的免疫剂量可能导致免疫耐受，过少的免疫剂量可能无法激活免疫应答。一般来说，实际免疫剂量与本站所推荐的剂量不要相差两倍以上。（5）免疫途径不合理。对于有些免疫原性弱的抗原，可以考虑脾内免疫方法，具体操作本站上也有详细的讲解。（6）测效价的过程存在错误操作，尤其考虑包被是否成功或二抗使用是否正确。同时，一抗（即血清）稀释梯度尽量放宽，一般建议从1：500或1：1000开始作梯度稀释。对于小分子物质，效价达到1：2000仍可视为免疫成功。2. 为什么融合后细胞不长或者融合后克隆很少？答：可以从这几个方面考虑：（1）免疫用的动物品系不正确或者品系不纯。免疫用的动物一般应该与骨髓瘤来源的动物是相同品系，例如使用SP2/0骨髓瘤细胞时应该选用Balb/C小鼠，同时必须使用品系纯正的小鼠。（2）培养基中加入了过高浓度的HAT，或者仅A的浓度过高或HT的浓度过低，建议用纯的骨髓瘤和已有的杂交瘤作HAT浓度筛选。（3）培养基不正确或血清浓度不正确或使用了劣质血清。（4）未正确制备饲养层细胞。参见本站有关饲养层细胞制备的部份。（5）接种杂交瘤细胞的培养板过多。一般在5-20块96孔板为宜。（6）融合后，未及时转移或稀释细胞。有人在做融合后喜欢把融合的细胞先放在培养瓶中培养，然后再滴到96孔板上。如果在培养瓶中培养的时间过长，也可能出现克隆利率少的情况。（7）细胞被污染。在显微镜下仔细观察是否有明显的微生物污染。即使看不到有明显的微生物，也应该考虑是否有支原体污染，有条件的可以做支原体检测。（8）细胞培养条件不正确，确保细胞培养在恒定的37度较湿的环境，同时保证CO2浓度在4-5%左右。（9）其它与融合条件相关的不恰当的因素。详见本站有关细胞融合的部份。3. 为什么融合后得不到阳性克隆？答：可能的原因：（1）动物未免疫成功就进行了融合。具体解决方法参照本页面第1个问题。（2）融合后得到的克隆较少，故得到阳性克隆的机率也较小。具体解决方法，请参照本页面第2个问题。（3）筛选克隆手段不正确。例如有些小分子物质不可以直接包被到酶标板上，再如使用了不适当的二抗等诸多因素，也有人直接不使用ELISA作为筛选方法的，成功率也有待商榷。（4）抗原成份与细胞培养条件中的物质相同或类似，或者与筛选过程中有同抗原结构相同或类似的物质产生了竞争反应。举个简单的例子，如果需要制备抗BSA的单抗，则养杂交瘤的培养基中不可以使用牛血清，否则牛血清中的BSA直接与抗体相结合，最后做ELISA筛选的时候无法得到阳性结果。解决的办法只有使用其它的动物的血清或者使用无血清培养基。再如，如果需要制备酪蛋白的单抗，则做ELISA筛选时，二抗的稀释液不可以使用脱脂奶粉。（5）其它所有能影响ELISA等相关筛选手段的因素。这一部份详见本站有关ELISA实验的讲解与讨论。4. 为什么我的细胞生长很慢？答：可能的原因：（1）使用了劣质的培养耗材、培养基、血清、HAT或HT。建议新手使用知名厂商的试剂或耗材。对于血清，可能需要从多个厂家选用多个批次试用，选择出比较好的批次进行实验。在试用血清的时候，一般可以使用相对较低浓度的血清进行骨髓瘤细胞培养实验，根据骨髓瘤细胞的倍增速度确实血清质量。（2）使用的血清或培养基浓度不正确。仔细检查配方是否正确。（3）制备饲养层的方法不正确。参见本页面第二个问题。（4）其它问题，可以参考本页面第二个问题。5. 我的克隆原来是阳性的，为什么后来转为阴性了？答：首先要注意的是，正常情况下，杂交瘤也不是绝对稳定的，确实容易发生染色体丢失的情况，尤其是当细胞移到新环境中生长，如从小孔扩大到大孔，或者复苏操作时，更容易发生阳性变为阴性。但是也有一些办法尽量减少阳性变为阴性的办法。一般可以从这几个方面加以注意：（1）永远保证细胞处在最佳的生长环境中。尤其是培养基不能长期不换，一般来说，当细胞增长到一定密度的时候，培养基就开始变颜色，这个时候就要准备换培养基了，除了换培养基，同时应该控制好细胞的密度，可以吹走过多的细胞，使新加入的培养基不至于很快被消耗。（2）对于重要的细胞株，每一步都把阳性的细胞保种。（3）不要过于频繁操作细胞，当细胞生长密度不是很大的时候，不要频繁操作，否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。（4）对于传代次数较多的细胞株需要经常进行亚克隆，并将每一次的亚克隆株也作冻存。（5）当细胞被支原体等微生物污染，也会发生由阳性转为阴性的情况。6. 为什么我做亚克隆后长不出克隆来？答：亚克隆失败的原因和克隆不长的原因类似，但是除此之外，也还有一些独特的原因。（1）亚克隆时，原始孔里的细胞状态不好，经过有限稀释或其它手段亚克隆的细胞活性很差，以至于长不出克隆。（2)亚克隆时，没有按照正确的数量取出细胞，在本站有关亚克隆操作的页面上提到过，亚克隆的过程服从泊松分布，如果取出的细胞远远低于平均每孔一个细胞，或有效细胞远远低于平均每孔一个细胞，则也可能出现长不出克隆的结果。（3）未添加饲养层细胞。单个细胞在完全培养基中极难培养，如果不添加饲养层细胞，则它们很可能很快就死亡，最终就长不出克隆。（4）使用的HAT中HT失效或A的浓度过高，或者未添加HT。 虽然HT对杂交瘤的生长并不是必须的，但是HT确实可以加快细胞生长，改善细胞生长状态。（5）使用无血清培养基。这一点是很冷僻的一个因素。虽然很少有人使用无血清培养基制备单抗，但是在某些血清可能干预筛选步骤的实验的时候，可能会选用无血清培养基来培养杂交瘤，但是需要注意的是，在很多种无血清培养基中，单个细胞是很难长成克隆的。最好的解决办法就是先用含有血清的培养基培养它们，等克隆长出后再把培养基彻底更换为无血清培养基。7. 为什么我冻存的细胞很难复苏或者复苏不活？答：这个问题要从两个方面来回答，一是冻存方面，二是复苏问题。 对于冻存过程，需要注意：（1）冻存液的配方。这个问题很关键，一个良好的冻存液配方可以使细胞保存得非常好，而一个不好的冻存液配方可能会让细胞倾刻死亡。目前认为比较好的配方有：10%DMSO+90%胎牛血清和10%DMSO+90%养过杂交瘤的培养基，不管是哪一种，冻存保护剂DMSO的含量非常重要，如果这个浓度过低，则起不到保护作用，冻存的细胞最终会死于冰晶形成时的张力，如果浓度过高，则细胞中毒而亡。如果使用第二个配方，注意一定要用养过杂交瘤的培养基，而尽量不要用一般的完全培养基，而且一定是配养需要冻存的那一株的培养基。文献中也有提到用甘油作为冻存保护剂的，站长自己没有亲自试过，不发表评论。如果新手确实对这个没把握，市场上也有商品化的冻存液，买回来按照说明书操作就OK了。（2）冻存过程中，不可用力过大，在冻存液中重悬细胞的时候更是要轻柔，因为在DMSO存在的条件下，细胞膜变得非常脆弱，如果用力过猛，则细胞膜很容易破，复苏成活的机会就明显会下降。（3）冻存的程序也非常重要。实践表明，以每分钟1 ℃的速度下降冻存细胞是最理想的。如果条件简易，可以把细胞放在4 ℃半小时左右，然后再在-20 ℃放置1-2小时，最后转入-80 ℃放置过夜，最终转入液氮保存。需要短期保存的，直接放-80 ℃也行。现在市场上有比较贵的冻存盒，把需要存放的细胞放进去，然后直接放-80 ℃就行，等时间够长后直接转至液氮中即可。（4）细胞需要保存在液氮的气相中，而不是泡在液相里。否则液氮很容易进入冻存管。这一点很多人都没有注意，大部份人都是直接往液相里放，其实这是错误的。有人认为，普通的液氮中可能含有微生物或者孢子什么的，如果放在液相中，这些微生物或孢子就有机会进入冻存管，最终可能造成细胞污染。（5）保证被冻存的细胞处于良好的生长状态，并且没有被污染。对于复苏过程，需要注意：（1）快速。为了防止升温中细胞内产生冰晶，强烈建议加快融化过程。一般都要用用足够体积的37 ℃热水复苏，并不断晃动冻存管。（2）复苏过程不要把冻存管全部泡入水中，也不要把盖子弄湿，否则热水有可能污染管口，造成复苏的细胞被污染。（3）有的人复苏细胞时，没有去掉冻存液，

[font='calibri'][size=13px]融合蛋白[/size][/font][font='calibri'][size=13px]是什么？[/size][/font][font='calibri'][size=13px]融合蛋白和单抗的区别[/size][/font][font='calibri'][size=13px]及优势？[/size][/font]融合蛋白是指将目标蛋白与免疫球蛋白融合而产生的新型重组蛋白，其中，目标蛋白可以是细胞因子、受体、抗原肽或者其他具有生物学活性等功能蛋白质。融合蛋白具有较强的生物活性，还具有一些抗体性质，可以用于疾病治疗，可以通过延长血浆半衰期，加强其治疗能力，同时，降低肾小球清除率，可以提高药物在体内的药物浓度。单抗即单克隆抗体，是由单一的B细胞克隆产生的抗单一表位的抗体，具有多个优点，包括高度的特异性：能够特定的针对单一的抗原表位，选择性的杀伤靶细胞，具有更强的疗效；安全性：由于单抗只针对靶细胞，对机体的其他细胞影响不大，相比其他药物不良反应少；多样性：不同的单抗结合，不同的抗原表位作用机制各不相同，可以针对不同的疾病选择相应的单抗。融合蛋白和单抗具有各自的优点和作用特点，近年来，对这两种相关药物的研究越来越多，对于一些恶性肿瘤等相关性疾病的治疗得到了较大的提高。因此，融合蛋白和单抗具有上述区别，但用于疾病的治疗各自有优势。单克隆抗体定制服务推荐：义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商，目前已成功交付了数以万计的抗体项目，客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。针对定制单克隆抗体，义翘神州提供了一套全面的解决方案。我们将与您通力合作，完成从抗原设计、纯化和抗体验证的完整过程。义翘神州拥有包括杂交瘤、噬菌体抗体库和单B细胞在内的抗体发现平台， 我们可根据您感兴趣的靶点、抗体应用和时间表等，来选择最合适的技术平台。 此外，义翘神州还提供ELISA、WB、流式细胞术、IHC、基于细胞的筛选、亲和力检测等多种表征和筛选技术，确保最终鉴定到最佳的抗体，以满足研究、诊断和治疗领域等应用。单克隆抗体定制服务：https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services

从人类发明这个技术开始，单抗制备已经有37年的历史了，这37年以来，主流单抗制备的基本主线几乎没有什么改变，也就是下面这个流程： 抗原制备 动物免疫 细胞融合 克隆筛选 克隆化（亚克隆） Large-scale生产、纯化以及鉴定 但是不同的研究人员从不同的角度和细节对整个流程有了独到的视角，这里我简单地总结一下近十年以来的发展和前人的经验，基本都是站长自己道听途说，加上参阅一些文献总结出来的， 十年以前的技术革新择重点简要提一提。 抗原制备进展 抗原，基本上分三类： 蛋白、多肽和小分子化合物。 一般的制备过程没什么好说的了， 主要说多肽和小分子连载体的事。 多肽和小分子因为免疫原性弱，所以必须连接载体才能诱发免疫应答。 最常用的基本上就是KLH, BSA,OVA和GST， 但是觉得近几年以来，用多肽复合抗原肽（MAP）的比较多。其原理是把多肽或小分子连在多聚赖氨酸的骨架上，而多聚赖氨酸因为其结构具有高度重复性，所以不会像KLH等载体一样使动物产生抗体，这样就不会浪废有限的免疫系统资源。 毛病是这种形式的抗原在制备成本上贵许多，我记得一个MAP的制备报价大约在1500元人民币左右。 从获取方式来看，对于蛋白质类抗原，不仅可以重组表达（原核和真核）， 还可以直接从天然组织或细胞中分离。早期的时候人们经常干这种事，那是因为当时没有现在这么普及的分子生物学技术，很难得到重组蛋白。 但是最近20年以来，基本上都用重组蛋白了，重组蛋白生产技术非常成熟，而且生产也简单，容易扩大规模，但是慢慢地很多人意识到重组蛋白和天然的蛋白在结构上有时候有着极大的差异，所以不少人认为确实是天然蛋白免疫得到的抗体是最好的，有兴趣可以看看这篇文章：Generation and Characterization of a Panel of Monoclonal Antibodies Against Distinct Epitopes of Human CD146，一个典型的从天然组织中纯化出蛋白作为抗原制备单抗的例子。 在抗原的形式上，也是各式各样，根据自己的需要有不同的喜好，大部份人都推荐接近天然构象的蛋白，即使是重组蛋白，buffer 也尽量gentle， 另一些人则喜欢跑胶然后切胶打动物，还有的转膜后剪膜免疫动物（这一个通常和从天然组织中纯化的方法联用）。 还有人喜欢用过表达的细胞或转化的细菌作为免疫原（当然也有全细胞或者细胞组份裂解液作为免疫原的，此乃后话）。对于做免疫组化用的单抗制备，则还有更特殊的处理手段。 另一些人则认为，用DNA直接免疫也许更好。其方法是把cDNA连到真核表达载体中，然后直接注射动物，在佐剂的作用下载体就带着cDNA进入动物细胞，然后在动物细胞就有目的蛋白表达出来，这些蛋白从细胞释放出来后就可以引起免疫应答（整个理论还没有建立完整，一切都在YY中）， 这种方法免疫中，现在缺少有效的佐剂，所以免疫效果很难保证，不过在比较低的效价下，很多人也可以得到阳性克隆。 说了这么多，还是很沮丧，虽然看起来选择很多，但是能真正用到工作中的选择并不多，有时候是条件问题，有时候则是成本和精力问题。第一个话题就写这么多吧。 动物免疫 动物免疫故事比较多，简单点说。 实验动物的选择： 做单抗的动物最开始是小鼠，后来又有像epitomics这样的公司用兔子的，还有一些人用大鼠神马的，当然其它的动物的也有，据不完全统计，现在能用传统方法制备单抗的动物已经有二三十种了。 但是最主流的还是小鼠和兔子了。兔子不讨论，epitomics对其有特殊的专利，这个基本上和咱们没关系。小鼠，用得最多的还是Balb/C了，因为大多数骨髓瘤细胞（SP2/0, X63, Ag8.653,FO和NSO）都来自于Balb/C小鼠，为了使hybridomas稳定，所以实验小鼠基本上还是Balb/C。 不过有文献提到了用NZB/W小鼠制备高同源性单抗的，原因是NZB/W小鼠是一种容易发生自身免疫疾病的小鼠模型，一般在5个月以下时基本不会发病，但是对自身的蛋白仍然有潜在的排斥反应。 免疫佐剂： 这一个方向在近十几年以来倒是发展得很快。 最开始的时候Sigma的弗氏完全佐剂和不完全佐剂一直是黄金组合（铝盐佐剂也用得比较多），但是后来人们发现CFA/IFA毛病很多，诸如不利于动物健康、刺激免疫应答周期过长等等，于是各种新式佐剂层出不穷，几乎每家试剂公司都有自己独特的佐剂。而且有效成份也多种多样，如脂质体，CpG，细胞因子，分子伴侣，特殊化学药物（如左旋咪唑）， 细菌或病毒的全部组份或部份（如LPS，肽聚糖），甚至还有一些是中草药提取物（如蜂胶、皂甙，当归多糖）…… 在形式上，大部份还是延用了CFA/IFA的油乳性质，但是这两年来免乳化佐剂在国内发展比较快，如我们现在使用的Quickantibody就是，武汉这边还有另一个产品叫赛弗诺的也与其类似，同时这些新型的佐剂对抗原的使用量要求很低，而且免疫周期也短，所以比较受欢迎，毛病是商家对机理保密，用户无法获知其可能潜在缺点。 总之最后就变成了一种根据个人喜好而选择的产品。 当然另外还有人说佐剂不是必须的，不加佐剂也可以免疫得不错，站长自己没尝试过。 免疫部位：这个没什么好说的了，也基本上是根据喜好来的，皮下、腹腔、脾内、肌肉、腋下、脚垫、静脉，各种地方免疫都说得过去，而且大家都能成功，所以这个就没什么好选择的了，不过大部份人还是认为皮下是最有效的，因为皮下含有大量的DC细胞，而DC细胞是重要的APC。 这里需要提出的是有一种叫作RIMMS的免疫方式极少人用到，但是据说效果不错。 RIMMS即多位点重复免疫（repetitive immunizations multiple sites），意思是在相同的地方低剂量短间隔重复免疫，一般是在小鼠背上皮下选择四五个点，每三天左右在这些点进行低剂量免疫，一般十几天就可以完成免疫。 大家可以看这篇文献：Rapid development of affinity matured monoclonal antibodies using RIMMS和这篇：Shorter development of immunoassay for drugs application of the novel RIMMS technique enables rapid production of monoclonal antibodies to ranitidine， 不过成功的实例中，很多人都是取小鼠的淋巴结而非脾脏进行融合的，淋巴结不好取啊。 免疫周期和间隔： 大部份人基本都同意免疫周期和免疫间隔尽量长一点比较好，这样得到的抗体亲和力更高（除了上述的RIMMS外）。 甚至有人打完第一针后，再过九个月才打第二针的，作者说效果很好，这个方法显然不适合大规模免疫，不然动物管理的压力咱们是承受不起的。另外，一些新型的佐剂则强调短周期也可以得到高亲和力的抗体的， 市场上有很多佐剂宣称两周内即可完成免疫并得到高效价的血清的，实在是太快了。另外最近有文献还对白天免疫动物还是晚上免疫动物更好这一问题作出了探讨，比如这篇：The Circadian Clock Controls Toll-like Receptor 9-Mediated Innate and Adaptive Immunity ， 作者认为一些调控免疫的分子也有生物节律性，它们的表达水生是跟随生物钟有规律变化的，在这些调节分子表达水平比较高的时候进行免疫或许可以得到更好的免疫效果。

CE－MS联用用于单抗药物的表征，不知道有人有兴趣吗？北美做了一些研究工作，单国内没有看到有人研究。也没有人讨论啊……先发资料分享

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[font=宋体]【作者】：[/font][font=&][size=16px][color=#5b616b][/color][/size][/font][font=&][font=BlinkMacSystemFont, -apple-system, &][size=16px][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#3e3e3e]李思鹏，张仲理，许圣昌，张磊[/color][/font][font=BlinkMacSystemFont, -apple-system, &][size=16px][/size][/font][/font][font=&][size=16px][color=#333333][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#5b616b][/color][/size][/font][font=宋体]【题名】：[/font][font=&] [/font][b][b]单抗生物类似药与原研药质量相似性研究解析[/b][/b][font=宋体]【期刊】：[/font][font=&][size=16px][color=#333333][/color][/size][/font][url=https://jpharmsci.org/article/S0022-3549(22)00208-8/abstract][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=12px][color=#3e3e3e]《中国新药杂志》 2022 年第31 卷第6 期[/color][/size][/font][/url][font=&][size=16px][color=#333333][/color][/size][/font][font=宋体]【年、卷、期、起止页码】：[/font][font=&][/font][list][color=#0071bc][/color]2022[/list][font=宋体]【全文链接】：[url=https://jpharmsci.org/article/S0022-3549(22)00208-8/abstract][font=BlinkMacSystemFont, -apple-system, &][size=16px][/size][/font]单抗生物类似药与原研药质量相似性研究解析--《中国新药杂志》2022年06期 (cnki.com.cn)[/url][font=BlinkMacSystemFont, -apple-system, &][size=16px][/size][/font][/font]

各位大咖：　　由中国蛋白药物质量联盟主办的“2016中国蛋白药质量与技术创新研讨会” 于2016年3月，在太仓召开。关于生物药前沿进展及发展趋势的报告引发了来自生物药研发、生产、检测及 CRO企业和科研机构等参会人员的热烈讨论。而作为生物药之中的明星，单抗药物更是引来高度关注。 仪器信息网行业应用栏目，对截止到2016年3月底，仪器厂商发布在本栏目的单克隆抗体药物解决方案进行了遴选，并根据厂商解决方案的数量和质量，评选出“单抗药解决方案”排行榜。希望此榜单能够为各位仪器用户在选购相关解决方案和仪器设备时提供一定参考。此项工作会持续进行，榜单每月定期更新一次，欢迎大家持续关注。同时，我们也会在相关合作学会、协会、联盟等举办的各种学术活动上对本活动进行宣传推广。 想知道谁排第一名么？请点击“单抗药解决方案”排行榜链接：http://www.instrument.com.cn/zt/dankangyaophb 欢迎各位大咖吐糟评论！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gif

国药重大发现：德尔塔等变异毒株治疗或迎来特效药，单抗对德尔塔变异株有效；

什么是流式细胞仪器的单抗CD3和CD8？？？？同学实验室要采购这个流式细胞仪，但是从来没接触过。各位大虾给点意见啊！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09508.gif

最近在做一个中性单抗的cIEF方法，用的是贝克曼PA800plus。在对标准品进行分析的时候发现，不同时间检测的结果，各峰的相对丰度会有变化，最高峰有时候是第二个，有时候是第四个。样品、仪器、人员、缓冲体系等条件都是一样的。各峰的pI值也很稳定。这种情况是正常的吗，这样的结果很不利于对各峰制定标准，不知道大家都是怎么做的？我采用的方法和体系基本都与贝克曼提供的一致，尿素浓度采用6M，聚焦时间是12.5min.对聚焦时间进行过优化，分别考察了10min，12.5min，15min，17.5min和20min，除了10min分离度不好外，其他结果图谱基本一致，考虑到节省时间选了12.5min。最近对结果进行分析的时候，发现各时间的电流图有点差异。聚焦结束时，17.5min电流降到最低大概1.5uA，15min 大概1.6uA，而12.5min大概1.7，1.8uA这样。是不是我选择的聚焦时间不够导致了相对丰度会有变化？如何判断聚焦时间，是电流降到最低表示聚焦充分吗？急等大神回答

应该是USP 36-NF31版，求找到原文，谢谢

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191652_630209_1632253_3.gif【在线讲座51期】 Titanium生物液相及其在单抗等生物制药领域的应用主讲人：刘晓达 戴安公司生物液相专家 活动时间：2011年3月18日 下午 2：00http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191652_630209_1632253_3.gif1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、参加及审核人数限制：限制报名人数为150人，审核人数75人。 (由于会议室空间限制，报名成功后需经过审核。我们会按照用户报名顺序，根据用户提供信息进行审核~审核人数满后将不再接受报名）3、报名方式：http://simg.instrument.com.cn/meeting/images/20100414/baoming.jpg4、参与互动：本次讲座采取网络讲堂直播模式，欢迎大家积极发言提问。5、环境配置：只要您有电脑、外加一个耳麦就能参加。6、参加奖励：报名且参与讲座的人将每人奖励5--50分不等的奖励。7、提问时间：现在就可以在此帖提问啦，截至2011年3月18日8、会议进入：2011年3月18日13:30点就可以进入会议室9、开课时间：2011年3月18日14:0010、特别说明：报名并通过审核将会收到1 封电子邮件通知函(您已注册培训课程)，请注意查收，并按提示进入会议室!为了使您的报名申请顺利通过，请填写完整而正确的信息哦~http://simg.instrument.com.cn/webinar/20110223/images/zb_11.gif注意：由于参会名额有限，如您通过审核，请您珍惜宝贵的学习交流机会，按时参加会议。如您临时有事无法参会，请您进入报名页面请假。无故不参会将会影响您下一次的参会报名。快来参加吧：我要报名》》》快来提问吧：我要提问》》》

2009年甲型H1N1流感大流行给人类社会造成了巨大的生命和财产威胁。流感病毒广谱中和性抗体可以对抗多种亚型的流感病毒，在流感治疗和疫苗开发领域占有重要地位，并且日渐成为当前流感研究的热点。 中科院上海巴斯德研究所分子病毒学研究组孙兵研究员指导博士研究生胡伟斌和陈爱中等展开了甲型流感病毒广谱中和性全人抗体的研究：以CD19、IgG和流感病毒血凝素HA蛋白为特异性标志物，从接种2009年甲型H1N1流感病毒裂解疫苗志愿者体内获取了识别HA蛋白的特异性记忆B细胞，使用单细胞RT-PCR技术进行抗体可变区基因克隆，获得全人单克隆抗体。全人单抗不存在鼠源异种蛋白的抗原性，不会被人体免疫系统攻击，可直接可以用于临床医疗，具有出色的安全性。 研究发现，其中7株抗体具有广谱中和不同亚型（H1，H3，H5，H7，H9）甲型流感病毒的活性（图1）。表位分析表明，此7株具有广谱中和活性的抗体识别表位均在HA的杆状区域HA2蛋白上（图2A），包括位于HA2融合肽区域的线性表位以及与HA2整体结构相关的构象表位（图2B）。机制研究表明，这些中和性抗体可以抑制由HA2介导的病毒和细胞膜融合作用，从而抑制病毒进入细胞。本研究对流感治疗性抗体和流感通用疫苗研发具有重要参考价值。 该项成果由上海巴斯德研究所和上海生科院生物化学与细胞生物学研究所抗体研究中心合作完成，近日以Fully human broadly neutralizing monoclonal antibodies against influenza A viruses generated from the memory B cells of a 2009 pandemic H1N1 influenza vaccine recipient为题，在国际学术期刊《病毒学》上在线发表。本研究工作得到了国家自然科学基金、国家科技重大专项、“863”计划以及科技部等部门的经费支持。 http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121116628712880136.jpg图1. 七株全人单克隆抗体对于不同亚型流感病毒具有广谱中和活性http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121116628712897823.jpg图2. (A) 七株全人单克隆抗体都识别HA2区域(B) 三株全人单克隆抗体识别位于HA2融合肽区域的线性表位，其余四株识别构象表位

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_646695_2507958_3.gif新一代单抗分析用SW色谱柱介绍及SW色谱柱使用常见问题与故障排除主讲人：张琳 东曹（上海）生物科技有限公司 技术部主任活动时间：2013年5月14日 上午 10:00 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_646695_2507958_3.gif1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、参加及审核人数限制：限制报名人数为120人，审核人数100人。3、报名截止时间：2013年5月14日上午10:004、报名参会：http://simg.instrument.com.cn/meeting/images/20100414/baoming.jpg5、参与互动：本次讲座采取网络讲堂直播模式，欢迎大家积极发言提问。 *参会期间您还可以将有疑问的数据通过上传的形式给老师予以展示，并寻求解答* 每次会议从提问的用户中随机抽取出一名幸运之星，奖励一个价值150元的耳机。6、环境配置：只要您有电脑、外加一个耳麦就能参加。建议使用IE浏览器进入会场。7、提问时间：现在就可以在此帖提问啦，截至2013年5月13日8、会议进入：2013年5月14日9:30点就可以进入会议室9、开课时间：2013年5月14日10:0010、特别说明：报名并通过审核将会收到1 封电子邮件通知函(您已注册培训课程)，请注意查收，并按提示进入会议室!为了使您的报名申请顺利通过，请填写完整而正确的信息哦~http://simg.instrument.com.cn/webinar/20110223/images/zb_11.gif注意：由于参会名额有限，如您通过审核，请您珍惜宝贵的学习交流机会，按时参加会议。如您临时有事无法参会，请您进入报名页面请假。无故不参会将会影响您下一次的参会报名。快来参加吧：我要报名》》》快来提问吧：我要提问》》》

已做出大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、福氏志贺菌、副溶血弧菌、单核细胞增生性李斯特菌共6种菌单抗的细胞株，效价高，无交叉反应

[align=center]抗肿瘤单克隆抗体药物的研究进展[/align][align=center] [/align][align=center]摘　　要[/align][align=center] [/align]　通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程技术制备单克隆抗体药物,已经成为生物制药领域的一个重要方面,特别是对抗肿瘤单克隆抗体药物的研究已获得了重要进展。多年来,许多研究证实了抗肿瘤单克隆抗体药物的作用,为其应用于肿瘤治疗提供了重要依据。这类药物的特异性强，疗效显著。本文主要就近年来抗肿瘤单克隆抗体药物的研究进展进行了综述，并对抗肿瘤单克隆抗体药物的发展前景进行了展望。[align=left] [/align][align=left]关键词：抗肿瘤；单克隆抗体；研究进展[/align][align=center] [/align][align=center] [/align][b]一 引言[/b]抗肿瘤单抗药物因与烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、铂类配合物、植物药等抗肿瘤药物相比,具有高效价、高特异性、血清交叉反应少等特点与优点,在肿瘤治疗中起着不可替代的作用。单抗药物是当前生物技术药物领域甚为活跃的部分。针对特定的分子靶点(抗原),单抗有高度特异性。针对各种不同的抗原,可以制备为数众多的、各不相同的单抗；因此,作为药物来源,单抗又具有高度多样性。由于其特异性和多样性,研制单抗药物有巨大的潜力。单克隆抗体药物治疗恶性瘤主要机制有两种[sup][/sup]:一是利用单克隆抗体本身来阻断癌细胞生长的信号,单克隆抗体在癌细胞膜外与生长因子竞争结合受体,阻断信号传递过程,从而阻止癌细胞的生长和扩散,诱导细胞凋亡或者间接激活宿主的抗肿瘤免疫反应；二是利用单克隆抗体作为药物载体的靶向治疗,如将有细胞毒性的药物或有放射性的药物靶向性的运送到肿瘤细胞,从而杀伤肿瘤细胞。目前,国际上与肿瘤治疗相关的抗体研究主要集中在将抗体与耦联物作用后直接杀伤肿瘤细胞,利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。此外，研究表明静脉内注射抗肿瘤单抗,在肿瘤部位的浓度较高,显示特异性定位；单抗与药物的偶联物通常仍保留原来单抗的分布特征,在靶肿瘤的浓度较高[sup][/sup]。[align=center]二　　单克隆抗体药物作用靶点[/align]特定受体或特定的基因表达蛋白可能作为单抗药物的靶点。Rituxan是以B细胞的CD20分子作为靶点的人鼠嵌合抗体,对非霍奇金氏B细胞淋巴瘤有疗效,是第一个获美国FDA批准用于治疗恶性肿瘤的单抗。Herceptin是抗HER-2/neu癌基因编码蛋白的单抗,临床研究对乳腺癌有效,与化疗药物联合有更显著的疗效。Mylotarg是由抗CD33单抗与calicheamicin构成的偶联物,已获批准用于治疗急性复发性髓性白血病[sup][/sup]。表皮细胞生长因子受体(EGFr)在人的鳞癌、乳腺癌和脑胶质瘤等均有较高的表达。有报道,抗EGFr单抗与长春碱衍生物的偶联物在裸鼠体内试验,显示良好的抗癌效果。抗EGFr的人鼠嵌合抗体已进入临床研究。血管内皮生长因子(VEGF)在血管生成中有重要作用。据报道,抗VEGF的中和性单抗具有广谱的抗肿瘤作用,对移植于裸鼠的人体癌瘤有显著疗效[sup][/sup]。[b]三 单抗诱发肿瘤细胞凋亡[/b][align=left] 3.1 通过免疫细胞表面抗原的交联作用而诱导恶性肿瘤细胞的凋亡[/align]用于治疗血液系统恶性肿瘤的单克隆抗体药物大多是通过免疫细胞表面抗原的交联作用诱导恶性肿瘤细胞凋亡而起作用的,如目前用的抗-CD20的单克隆抗体——美罗华。其单克隆抗体的作用机制是通过诱导CD20分子在B细胞膜上的脂筏区聚集,再在一系列激酶的作用下使脂筏信号传导区域的CD20分子亲和性增强,从而形成CD20交联形式；交联的CD20分子启动了细胞内凋亡信号的传导通路,使线粒体释放出细胞色素C,激活下游的caspase级联反应,最终导致细胞凋亡[sup][/sup]。3.2 作用于恶性肿瘤细胞膜上的生长因子及其受体而诱导细胞凋亡许多生长因子及其受体通过作用于细胞的存活途径、刺激细胞的有丝分裂、促进细胞的生长增殖来阻止细胞凋亡。与正常细胞中生长因子信号传导的严格调控相比,肿瘤细胞中的失控则导致细胞的恶性增殖,从而使恶性细胞获得“永生”。单克隆抗体通过作用于恶性肿瘤细胞膜上的生长因子及其受体可阻断存活信号传导通路,从而导致其凋亡,同时还能对化疗和放疗有正协同作用。目前主要集中在对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体、表皮生长因子受体(EGFR)等的研究。美国FDA于2006年批准了第一个用于治疗头颈部鳞状细胞癌的单克隆抗体药物——Cetuximab,它为一种IgG1单克隆抗体,主要通过干扰癌细胞表面EGFR的生长,从而减少癌细胞进入正常组织的概率,控制癌细胞的转移,达到抗癌目的[sup][/sup]。最初想到制备针对恶性肿瘤凋亡相关分子的单克隆抗体药物时,虽然从理论上来说无疑是给人们注入了一针兴奋剂,但在实际应用中则并不然,所以在通过单克隆抗体药物诱导恶性肿瘤细胞凋亡的研究和治疗中,还有待进一步开发新的、更经济、更有效地药物。[b]四　 单克隆抗体耦联物[/b]4.1 抗体与化疗药物耦联目前,国内外研究较多的与单克隆抗体耦联的化学药物有平阳霉素、柔红霉素、丝裂霉素、多柔比星(阿霉素)、顺铂以及长春碱类衍生物等。同时还可以通过脂质体靶向制剂作为化疗药靶向治疗肿瘤,利用脂质体制剂将药物导向靶标进行有选择性地杀伤癌细胞和抑制癌细胞的繁殖,以达到提高疗效和高度定向作用。目前已上市的脂质体有复方氟脲嘧多相脂质体、喜树碱多相脂质体、阿霉素脂质体和紫杉醇脂质体等。4.2 抗体导向酶耦联利用抗体与肿瘤细胞表面抗原的特异性结合,将前体药物的专一性活化酶与单抗耦联,导向输入到靶细胞部分,再注入前体药物,使其在酶的作用下转化为活性药物,进而杀伤肿瘤细胞[sup][/sup]。目前这种用作前体药物的抗癌药有苦杏仁苷、氮芥、鬼臼乙叉苷、阿霉素、丝裂霉素等。而作为活化前体药物的导向酶有碱性磷酸酶、青霉素V或G酰胺酶、羧基酶肽、胸腺嘧啶核苷酶、β葡萄苷酶等。临床研究表明，单抗耦联物对于抗药性肿瘤细胞仍显示较强的杀伤活性。对由于长期使用氨甲蝶呤而出现抗药性的成骨肉瘤细胞,单抗氨甲蝶呤耦联物仍显示较强的杀伤作用。对于具有多药抗药性(MDR)的肿瘤细胞,抗P-170糖蛋白单抗构成的免疫毒素可显示选择性杀伤作用[sup][/sup]。这说明,单抗药物有可能用于克服肿瘤细胞抗药性。[b]五　　单克隆抗体靶向药物[/b]单抗靶向药物是利用单抗对肿瘤表面相关抗原或特定的受体特异性识别,从而把药物直接导向肿瘤细胞,提高药物的疗效,降低药物对循环系统及其他部位的毒性。研究表明,单抗靶向药物具有很好的疗效,在免疫偶联物对移植于裸鼠的相应人体肿瘤生长有抑制作用。免疫偶联物与相应的游离物比较,具有更高更好的疗效和较低的细胞毒性[sup][/sup]。单克隆抗体体积小,能更有效地透入肿瘤；分子小、消除快、累积毒性小；所携带的弹头脱离后,可较快被清除 循环中免疫靶向结合物对靶细胞的竞争作用小；半衰期短；穿透性好；能穿过血脑屏障[sup][/sup],因而还可以作为新一代靶向载体。与化学药物、毒素、放射性核素、生物因子、基因、分化诱导剂、光敏剂、酶等物质构成单克隆抗体靶向药物,把杀伤肿瘤细胞的活性物质特异的输送到肿瘤部位,利用单抗对肿瘤表面相关抗原或特定的受体特异性识别,从而把药物直接导向肿瘤细胞,提高药物疗效,降低药物对循环系统及其他部位的毒性。近年来,随着医学、药学和生物工程学及技术的进步,临床对肿瘤的根治和对癌细胞的攻击锁定于表皮生长因子和血管内皮生长因子等靶位,使药物治疗的切入点由细胞水平提升到分子和抗体水平,从而提高了肿瘤综合治疗的效果。[align=center]六　　人源化单克隆抗体[/align]单克隆抗体是近年竞相开发的品种,自1997年第1个单克隆抗体rituximab通过食品与药物管理局(FDA)批准应用于临床以来,目前已经上市的单克隆抗体靶向药物的疗效令人瞩目,在抗肿瘤、类风湿性关节炎和自身免疫系统缺陷治疗领域得到了有力的推广,其以独特的作用优势,在肿瘤的治疗中不但能够选择性杀伤癌细胞,且在体内表现出特异的分布特性,具有高效、低毒的特点,从而在生物技术产品领域中占据了1/3的市场[sup][/sup]。目前用于治疗肿瘤的单克隆抗体药已有多个,包括伊珠单抗奥加米星、帕尼单抗、曲妥珠单抗等。伊珠单抗奥加米星又名CMC-544，是以人源化抗CD22的抗体伊珠单抗与 CalichDMH偶联形成的ADC药物，用来治疗复发性或难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤（B cell-NHL）和急性淋巴细胞白血病（ALL），目前已经进入临床 III期试验[sup][/sup]。帕尼单抗是一种IgG2单克隆抗体完全人源化可以与EGFR高度特异性地结合，进而阻断配体诱导的信号激活，从而抑制肿瘤生长。有临床研究选择既往未治疗过的ⅢB或Ⅳ期非小细胞肺癌患者比较卡铂(AUC=6，每3周)，加紫杉醇(200mg/m21次/3周) 联合或不联合帕尼单抗(2.5 mg/m2，1次/周) 化疗的疗效及其安全性。研究结果显示，单纯化疗组与帕尼单抗联合化疗组之间在PFS(5.3个月对比4.2个月、P=0.55)和总生存( Overall survival，OS)(8.0个月对比8.5个月，P =0.81)上均无显著差异。结果提示帕尼单抗联合一线化疗方案可能对晚期非小细胞肺癌无明显疗效[sup][/sup]。曲妥珠单抗是一种抗Her2的单克隆抗体，他可以和肿瘤细胞的HER2/neu特异性地结合，从而阻断细胞内生长信号的转导，同时曲妥珠单抗还可以诱导体内巨噬细胞以及自然杀伤细胞攻击肿瘤细胞，以达到抑制和杀伤肿瘤细胞的目的。比较用或不用曲妥珠单抗联合一线化疗方案用以治疗ⅡB/Ⅲ期HER2/neu阳性的 NSCLC患者差异的两项大型的随机Ⅱ期临床试验，其结果显示两个试验结论相似，曲妥珠单抗不能提高化疗的疗效,但也不加重化疗的不良反应。试验中HER2/neu值为3+的患者对曲妥珠单抗治疗的反应性较好，提示曲妥珠单抗对这一较少见类型的NSCLC效果要更好[sup][/sup]。在临床治疗中使用鼠派生单抗的主要障碍之一是产生人抗鼠抗体(HAMA)反应,通过基因工程技术制备嵌合抗体的I-IPdVIA反应率较鼠源性单抗低,但完全的人源抗体才是单抗药物的发展目标。噬茵体抗体库技术和转基因小鼠技术是制备完全人源单抗的两种方法[sup][/sup]。因此,只有不断地完善单克隆抗体人源化的技术,才能更好地将完全人源化的单克隆抗体用于肿瘤分子靶向治疗中,从而使医学界迈向更高的台阶。[b]七　　问题与对策[/b]在限制单克隆抗体临床治疗效果的因素有:(l)循环免疫复合物导致的肝肾功能损害。(2)可溶性肿瘤抗原释放造成的体液中的封闭作用。(3)异种蛋白反应。(4)特异性还不够专一,引起了正常细胞的伤害。(5)天然免疫功能低下(如补体介异的细胞毒,网状内皮系统清除和ADCC作用等)。(6)主要的问题还在这种免疫疗法会导致靶细胞(肿瘤细胞)上抗原的转换。为了解决这些问题,今后的研究应着重:(1)制备对肿瘤抗原有高度特异性的单克隆抗体。(2)选择不易诱导抗原转换的单克隆抗体。(3)研究副作用较少,既安全疗效又高的偶联制剂。单抗（Mab）药物存在的一个最关键问题就是人抗鼠抗体反应（HAMA）。由于用于临床研究的Mab药物一般使用鼠源Mab,这不可避免地会引起HAMA反应,所以尽量避免HAMA反应这一副作用才是Mab药物能否真正适合治疗肿瘤性疾病的重点[sup][/sup]。近些年来,Mab药物的研究主要是向减轻宿主对外源抗体的排斥,促进抗体人源化,改变抗体的氨基酸序列而增加或降低该抗体的生物学效应,加抗体的亲和力,制备双特异性抗体,改造抗体重链恒定区以增强抗体功能,以及寻找新的分子靶点(相对特异的肿瘤抗原)等方向发展[sup][/sup]。Mab药物的不断更新,必将为全球的肿瘤患者带来更大的希望。[align=center]八　　总结与展望[/align]目前肿瘤治疗中使用最广泛的仍是化疗以及放射性疗法,其毒副作用较大。随着基因工程技术和DNA重组技术的兴起,利用单克隆抗体治疗肿瘤已经日渐取代副作用较大的传统疗法而成为新的发展趋向。所以,如何研制更多的单克隆抗体以及怎样更好的利用单克隆抗体治疗肿瘤,将成为肿瘤治疗研究中的又一艰巨任务。同时,生物技术以及抗肿瘤化学药物的发展也必将推动单抗药物的发展与进步,单克隆抗体药物将在各种肿瘤的治疗中发挥越来越重要的作用。在未来10年内,单克隆抗体药将成为国内、外生物药品发展的主旋律。此外，利用与肿瘤细胞相关抗原的特异结合力,相应的单克隆抗体可以用于肿瘤早期诊断和预后判定。例如用放射标记抗体能够确定肿瘤存在的位置,扩散的部位和范围,以便确定手术时机和化疗方案。通过测定抗体结合白血病细胞的增减,可以检查白血病的化疗效果[sup][/sup]。利用单克隆抗体检测某些癌的特异性产物,如前列腺癌产生的酸性磷酸酶,绒毛膜上皮癌产生的促性腺激素,结肠癌产生的癌胚抗原及肝癌产生的甲胎蛋白等,有助于癌肿的早期诊断[sup][/sup]。单克隆抗体在肿瘤的治疗中的作用功不可没，但同时也面临着巨大的挑战，例如如何选择优势人群、进一步提高疗效、降低不良反应的发生都是需要进一步解决的。如贝伐单抗的突出不良反应是出血，在NCCN指南中特别指出贝伐单抗仅适用非鳞癌的[sup][/sup]，既往无咯血史的患者，限制了贝伐单抗的临床应用。而其他大部分单克隆抗体均需与其他化疗药物联用，单独应用的疗效仍有限，选择合适的指标以及合适人群应用单克隆抗体仍任重而道远。[b]参考文献[/b] 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IMS：2011年最畅销的10种抗癌药物作者：snakecard http://img.dxycdn.com/cms/upload/userfiles/image/2012/05/18/1337231222_small.jpg肿瘤药物的研制十分火热。揭开大多数主流制药商的面纱，各个药厂都处于不同的发展阶段。通常对药物需求量的增加有以下原因：像中国这样的国家医疗开支不断增长；越老越多的中产阶级能够更好地享受到印度和其他新兴市场的医疗保健；高龄人口对美国和日本等大的药品市场的贡献。但人们对抗癌药物的需求有其自身的特点。这些药物用于治疗一些致命疾病，这就使得患者哪怕花费天价也要购买这些药物。如果不是制药公司漫天要价，像英国国家健康与临床高级研究院这样锱铢必较的守门员还是非常乐意将新药用于绝症患者的治疗。许多最近获批和正在研制的新型抗癌药物旨在治疗特定基因变异引起的癌症。这些药物可以有针对性地使部分患者受益，这种益处为抬高价格提供了理由。最终，癌症的生物治疗药物不会像传统药物一样面临过多的的竞争压力，所以有些制药商不惜低成本仿制赫赛汀这种相对比较老的药物。美国有关生物药品仿制的若干规定承诺将改变这种局面，但至今仍未有任何改变。三个最畅销的抗癌药物：B细胞单克隆抗体，阿瓦斯丁和赫赛汀，分别在1997年，2004年和1998年获得批准。对于其开发者，美国罗氏公司（ RHHBY ）的子公司基因泰克公司来说，这些药物是长期卖点。最新上榜药物特罗凯是该公司另一个产品，于2004年11月获得了FDA的批准。根据IMS市场研究公司得到的数据，去年因为这10种药物给美国带来的销售额达5.64亿美元到30亿美元不等。应当指出，获得FDA批准的药物并不一定代表能够获得其他药政机构的批准。2011年最畅销的10种抗癌药物英文名商品名通用名适应症Rituxan美罗华利妥昔单抗非霍奇金淋巴瘤Avastin安维汀贝伐珠单抗转移性结直肠癌Herceptin赫赛汀曲妥珠单抗HER2过度表达的转移性乳腺癌Gleevec格列卫甲磺酸伊马替尼慢性髓性白血病和恶性胃肠道间质肿瘤Eloxatin乐沙定奥沙利铂氟脲嘧啶治疗无效的结直肠癌Alimta力比泰培美曲塞胸膜间皮瘤Erbitux爱必妥西妥昔单抗直肠癌Velcade万珂硼替佐米多发性骨髓瘤Xeloda希罗达卡培他滨片晚期或转移性结直肠癌、胃癌Tarceva特罗凯盐酸厄洛替尼片非小细胞肺癌