淋巴细胞株

受访专家：　　欧阳学农，南京军区福州总医院肿瘤科主任、主任医师，国家中西医结合肿瘤重点学科主任、国家药物临床试验机构(肿瘤专业)主任、全军中医药学会副会长、全军肿瘤专业委员会常委，《临床肿瘤学杂志 》编委、《肿瘤学杂志 》编委，从事肿瘤临床工作近30年。　　牵头或参与国际和国内药物临床试验项目20项，与美国 M.d. Anderson 癌症研究中心、加拿大UBC 大学、日本爱知癌症中心、中国医科院肿瘤医院、军事医学科学院等国内外著名肿瘤研究机构保持广泛合作。　　“40%—50%的淋巴癌患者病因是病毒感染，但现在九成食品中含有添加剂，这也可能是淋巴瘤发病的重要原因之一。”国家中西医结合肿瘤重点学科主任欧阳学农主任医师日前告诉记者，加工食品中滥用的非法食品添加剂已经成为导致淋巴癌发病重要因素之一。　　食品添加剂或可导致淋巴细胞变异　　“在长期过量食用食品添加剂的不良影响下，有可能促使淋巴细胞在生长过程中发生变异，增加患上淋巴瘤的风险。”欧阳学农说。　　据了解，淋巴癌是发生于淋巴结的恶性肿瘤，除了我们平时所知道的颈部、腋窝、腹股沟等处会长肿块之外，还可能存在于全身各处，比如脑淋巴瘤、肺淋巴瘤、胃淋巴瘤、口腔淋巴瘤等。　　“人越年轻，淋巴细胞就越有活力，也就越容易得淋巴癌。恶性淋巴瘤多发生在20岁到40岁的青壮年。”欧阳学农说，淋巴癌的产生原因仍然不明确，与人自身免疫防御系统缺陷、病毒感染、化学物质、射线、基因突变等有关，如今，当人类的食物97%都含有添加剂时，几千种添加剂充斥我们的生活时，对于癌症的重新认识，应当谨慎考虑添加剂这一风险因素。　　食品添加剂是人为添加到食品中的天然物质或人工合成的化学物质，在使用标准范围以下，人体的代谢能力可以降解出去，是相对安全的，但是一旦超过标准，过量的添加剂就会沉积在体内伤害各个器官，造成病变甚至致癌。尽管尚未有人类肿瘤的发生和食品添加剂有关的直接证据，但许多动物实验已证实大剂量的食品添加剂能诱使动物发生肿瘤。　　“淋巴系统是身体重要的防御系统，就像人体的‘军队’，它可以帮助身体抵抗各种病原体，像细菌、霉菌等，让我们免于疾病的侵害。和这新病原体‘作战’的淋巴细胞容易在食品添加剂的不良影响下，有可能发生变异，直接或间接影响淋巴瘤的形成。”欧阳学农说。　　动物实验多证实添加剂有致淋巴瘤作用　　“许多动物实验已证实大剂量的食品添加剂能诱使动物发生淋巴瘤。”欧阳学农说。　　如亚硝酸钠是食品添加剂亚硝酸盐的一种，国外试验证实，同时服用乙胺丁醇和亚硝酸钠，小鼠淋巴瘤的发生率提高，而单用乙胺丁醇对淋巴瘤发生率无影响。　　作为人造甜味剂之一的蔗糖素，常用于食物和饮料。然而，美国食品药品管理局(FDA)在批准蔗糖素的报告中明确指出：在一个老鼠淋巴瘤突变试验中，科学家发现蔗糖素具有轻微的诱变性，根据检测致癌物的一种标准方法——艾姆斯试验结果，蔗糖素被消化时分解的物质也有“轻微的诱变性”。　　“一些非法的添加剂致癌作用就更不用说了。”欧阳学农告诉记者，苏丹红作为一种非法食品添加物，对人体具有潜在致癌性，国际癌症研究机构将苏丹红一号归为三类致癌物，主要基于体外和动物试验的研究结果：苏丹红一号在特定存在的条件下，对小鼠淋巴细胞具有致突变作用。　　此外，有的食品添加剂本身即可致癌，作为牛奶酸化剂的花楸酸、淀粉变性剂的琥珀酐、面包防硬剂的聚氧化乙烯乙醇硬脂酸等，在动物实验中都具有致癌活性 有的添加剂可在使用过程中，与食品中的存在成分发生作用转化为致癌物质，如能保持肉色鲜嫩的亚硝酸盐，会与蛋白质代谢后产生的胺类物质结合，形成亚硝胺，具有很强的致癌性。其他种类的防腐剂如苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸等，经毒理研证，较多剂量的摄入，也会影响人体的正常机能，削减人的免疫力，这就为人体细胞的变异提供了前提。　　加工食品多含添加剂 自己动手最健康　　“食品添加剂最主要的作用是为了让快速生产出的食品，看起来更鲜亮、闻起来更香，吃起来可口、保质期更长，同时由于它大多来自边角边料，所以有可能价格更便宜。”欧阳学农说，食品加工商为了让食品在经历漫长的运输和保存之后仍旧色彩诱人、香气扑鼻，绞尽脑汁的合成和添加各种食品添加剂。　　如加入次亚氯酸钠可以给切过的蔬菜杀菌，让蔬菜更鲜亮 加入苯甲酸钠可以让碳酸饮料保持新鲜口感 加入碳酸氢钠可以使曲奇饼干膨松可口 加入环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)能增加蛋糕和饮料的甜度 加入胭脂红，可以让食物的颜色红亮诱人。　　“一个三餐都通过这些食品解决的成年人，每天添加剂摄入量约为10克左右，种类高达六七十种。”欧阳学农说，“要想远离他们，最好自己购买新鲜食品原料，亲自烹饪。”　　“购买的食物加工度越高，使用的添加剂也越多。如果一味追求方便快捷，必然要牺牲健康，甚至是生命。”欧阳学农说。　　———————— ■相关链接 ——————————　　发热、消瘦、盗汗 或是淋巴瘤症状　　淋巴癌临床早期症状不痛不痒、隐匿不易察觉，很多患者会将发烧等症状与感冒病症混淆。因此，有三种常见并发症要注意：　　发热，体温长期徘徊在38℃—39℃之间，有持续高热，也有间歇低热，少数有周期热。消瘦，多数病人有体重减轻的表现，在短时期内减少原体重的10%以上。盗汗，夜间或入睡后出汗。　　欧阳学农强调，并不是所有的淋巴结肿大都是癌，其中不少是炎症或良性病变等正常反应。此外，直径超过一厘米大小的肿块才有临床检查的意义，所以，发现异常时要警惕，及时就医，但不要过分紧张。　　早期的淋巴瘤，通过以放疗为主的治疗手段就能治愈，到了中晚期的时候，需要用化疗为主的手段。欧阳学农主任指出，确诊患了淋巴瘤不必害怕，大量临床实验证实，50%—60%早期患者使用免疫化疗可以被治愈，晚期也有30%—40%的治愈率，疾病能否治愈的关键是首次治疗是否成功。　　他提醒，工作压力大的白领、经常熬夜的人、长期过度疲劳者、经常处于电子辐射或射线环境者，都需要定期自查，触摸身体表层是否有肿大的淋巴结。平时，多接受日照，生活规律 尽量不要在新房装修好后即入住 购买新车后，进行甲醛测试，并保持较长时间开窗通风。此外，常吃葡萄、茶叶、海带、大豆、红萝卜、番茄、香蕉、橘子、菠菜等碱性食物，防止酸性废物的累积。

p　　2017年7月31日，清华大学生命学院刘万里研究组在《eLife》期刊在线发表了名为《蛋白激酶Cβ(PKCβ)和黏着斑激酶协同调控B淋巴细胞的免疫活化对呈递抗原的基质硬度的敏感性》(Substrate stiffness governs the initiation of B cell activation by the concerted signaling of PKCβ and focal adhesion kinase)的研究论文，报道了机械力感知能力调控B淋巴细胞免疫活化的精细分子机制。清华大学生命学院巴基斯坦籍博士生萨明娜(Samina Shaheen)，北京大学、清华大学和北京生命科学研究所联合培养博士研究生项目博士生万政鹏和生命科学学院本科生李宗昱是本文的共同第一作者，刘万里研究员为本文的通讯作者。br//pp　　本研究需要大力整合分子免疫学、细胞生物学、生物化学、新型材料科学、高精度活细胞成像和生物物理学等不同学科的交叉优势，涉及基因修饰小鼠脾脏B细胞和自身免疫疾病病人外周血B细胞等实验材料的广泛使用，在研究过程中得到了国内外同行的大力支持。/pp　　B淋巴细胞作为抗体免疫应答过程中的重要参与者，维系着人类的健康，B淋巴细胞的免疫活化进程在其质膜表面的B细胞受体(BCR)识别外来病原体抗原后启动。该课题组之前的工作揭示B淋巴细胞具有灵敏的机械力感知功能，利用B细胞受体(BCR)来精确地识别抗原的理化性状。该论文结合不同刚性抗原呈递基质系统和基于全内反射、共聚焦荧光显微镜的高速高分辨率成像系统，对机械力感知调控B淋巴细胞免疫活化的分子机制进行系统而全面的研究。该论文发现B淋巴细胞感受机械力调控其活化依赖于B细胞受体(BCR)下游信号分子。由佛波酯(PMA)诱导的蛋白激酶Cβ(PKCβ)激活可以绕过B细胞通常需要的酪氨酸激酶(Btk)和磷脂酶Cγ2(PLCγ2)信号分子来区分底物刚度。然而，这一过程依赖于由蛋白激酶Cβ(PKCβ)介导的黏着斑激酶(FAK)激活，进而表现出黏着斑激酶(FAK)介导的B细胞扩散和粘附反应的增强。黏着斑激酶(FAK)失活或缺陷将导致B细胞丧失鉴别基底刚性的能力，而粘附分子可以大大增强B细胞的这种能力。最后，该研究利用类风湿性关节炎患者的样品进行研究，发现与健康人相比，类风湿性关节炎患者的B细胞对基底刚度表现出不同的活化反应。这些发现更系统的提供了B细胞如何通过蛋白激酶Cβ(PKCβ)介导黏着斑激酶(FAK)激活的方式区分底物刚度并作出不同活化反应的分子解释。这些研究成果为B淋巴细胞的免疫识别、免疫活化和免疫调节研究提供了新的研究思路，帮助人们进一步理解自身免疫疾病，从而对探索相关疾病的致病机理、以及药物疫苗研发等重要工作提供新的理论依据。/pp　　刘万里研究员课题组一直致力于使用新型的高速高分辨率的活细胞单分子荧光成像技术结合传统的分子免疫学、生物化学和生物物理学研究手段，对B淋巴细胞的免疫活化及相关疾病的分子机制进行研究。继2013年在《免疫学杂志》(Journal of Immunology)，2015年在《欧洲免疫学杂志》(European Journal of Immunology)和《eLife》上发表B淋巴细胞的免疫活化受到机械力调控的相关论文后，这一新成果是他对该领域的又一贡献。该研究由国家自然科学基金委、科技部和青年千人计划提供经费支持。萨明娜(Samina Shaheen)受到中国政府奖学金项目的支持。(来源：清华大学生命科学学院)/pp　　论文链接：a href="https://elifesciences.org/articles/23060" _src="https://elifesciences.org/articles/23060"https://elifesciences.org/articles/23060/a /pp style="text-align: center "img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201708/noimg/e71fa001-dac6-4706-bca7-5f946b9f1f18.jpg" title="1.jpg"//pp　　蛋白激酶Cβ(PKCβ)和黏着斑激酶(FAK)协同调控B淋巴细胞的免疫活化对呈递抗原基质硬度的敏感性/ppbr//p

血液肿瘤是起源于造血系统的恶性肿瘤，其发病机制复杂，环境因素、遗传因素、免疫因素等都被认为与疾病的发生、进展密切相关。淋巴细胞亚群中的T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤淋巴细胞及淋巴细胞功能亚群调节性T细胞是细胞免疫检测的常用指标，广泛用于血液肿瘤患者的免疫状态评估、疾病复发或转移风险预测及治疗指导等。为了更加深刻认识淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中的作用，加强其检测过程的质量管理，促进其规范地应用于临床，由中国医药质量管理协会医学检验质量管理专业委员会牵头组织国内血液肿瘤和临床检验领域多位专家，制定了该专家共识。该共识介绍了淋巴细胞亚群的检测方法，归纳总结了其对血液肿瘤筛查、复发转移预警及预后评估、合并感染风险预警、造血干细胞移植后免疫重建监测与移植物抗宿主病预防、嵌合抗原受体T细胞免疫治疗后监测、用药指导与疗效监测等方面的应用，并对血液肿瘤患者的监测方案与随访时机选择做出了推荐。淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识中国医药质量管理协会医学检验质量管理专业委员会通信作者：杨再林，E-mail:804728092@qq.com武坤, E-mail:wukun@ydyy.cn 刘耀, E-mail:liuyao77@cqu.edu.cn本文已被本刊录用并于5月9日在中国知网发表，转载、引用请注明出处。知网首发网址：https://kns.cnki.net/kcms/detail/50.1176.R.20230508.1716.002.html原文阅读：淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识血液肿瘤是起源于造血系统的恶性肿瘤，具有高度异质性。2022版《造血与淋巴组织肿瘤WHO分类》根据肿瘤细胞的来源，将血液肿瘤主要分为髓系增殖和肿瘤、髓系/淋系肿瘤和其他谱系未定白血病、组织细胞/树突状细胞肿瘤、B淋巴细胞增殖性疾病和肿瘤、T淋巴细胞增殖性疾病和肿瘤、NK细胞肿瘤、淋巴组织间质源性肿瘤、遗传性肿瘤综合征8个大类。血液肿瘤的发生、发展和转归与其患者机体的免疫功能，尤其是细胞免疫功能密切相关[1-2]。随着疾病的发生发展，免疫微环境也随之发生相应变化，进而引起外周血中各种免疫细胞亚群的改变。淋巴细胞是构成人体免疫系统的主要细胞，根据淋巴细胞表面的标记物和功能，淋巴细胞可以分为许多不同的群体。临床上常用流式细胞术（FCM）对外周血中的不同群体的淋巴细胞进行鉴别和计数，包括CD3+T淋巴细胞，CD3+CD4+辅助/诱导T淋巴细胞，CD3+CD8+抑制/杀伤T淋巴细胞，CD3-CD19+B淋巴细胞，CD3-（CD16+CD56）+NK淋巴细胞，简称为TBNK，及CD3+CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞（Treg）[3]等。本共识中将TBNK和Treg统称为淋巴细胞亚群。血液肿瘤作为造血干细胞异常的恶性肿瘤，疾病的多种因素会影响免疫细胞的产生、增殖及分化，使外周血的淋巴细胞数量与功能产生异常[4]，导致免疫功能失调[5-6]，因此对血液肿瘤患者进行规范的淋巴细胞亚群检测十分必要。为了规范淋巴细胞亚群检测中的实验方案、技术操作，使更多相关领域的临床、科研和实验室技术人员认识到淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤患者诊断、预后评估、治疗指导中的作用及注意事项，进一步促进其在血液肿瘤中的应用，中国医药质量管理协会医学检验质量管理专委会结合文献学习和多家医疗机构的临床工作实践制定了本专家共识。 1淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中的意义 1.1 血液肿瘤的发生、进展、预后与免疫功能的关系正常情况下，免疫系统对肿瘤细胞有监视和清除作用，维持机体内环境的稳定。免疫功能异常可能会导致细胞免疫和体液免疫失调，从而为肿瘤的发生和发展提供条件[7-9]；在病原体感染时免疫系统也会受到影响，当免疫功能下降时，肿瘤发生的风险增加[10-11]。文献报道急性白血病、B细胞淋巴瘤等患者常见外周血T细胞数量及CD4+/CD8+比值下降，并伴免疫功能紊乱[12-13]。Treg的主要功能是抑制自身免疫应答，维持免疫平衡，避免过度的炎症反应和自身免疫性疾病的发生，在免疫系统中发挥重要的负向调控作用。在血液肿瘤中，Treg一方面可以通过抑制对肿瘤细胞的免疫反应来促进肿瘤生长；另一方面也可通过抑制炎症和防止可能导致肿瘤发展的自身免疫反应而发挥保护作用。研究发现，多种类型的血液肿瘤患者Treg数量呈现上升趋势，可能会导致肿瘤免疫逃逸的发生[14-15]。此外，一些淋巴细胞产生的细胞因子，如白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等，在血液肿瘤患者中异常表达，进一步说明了机体免疫功能异常和血液肿瘤之间关系密切[16-18]。近年来，一些新型的免疫治疗策略也在血液肿瘤的诊疗中发挥日益重要的作用，例如采用免疫检查点抑制剂、嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）治疗、双重特异性抗体治疗等[19-22]，这些治疗手段主要是通过增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，来达到治疗目的。1.2 淋巴细胞亚群在血液肿瘤中的临床意义淋巴细胞亚群在血液肿瘤中的临床应用主要包括以下方面。（1）部分血液肿瘤的筛查。血液肿瘤包括多种类型，其中一些类型可表现为特定淋巴细胞亚群的增殖和分化异常，通过淋巴细胞亚群检测可以对这些类型的血液肿瘤进行初筛。如急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性淋巴细胞增殖性疾病（CLPD）等[23]。（2）肿瘤复发及转移预警及预后评估。Treg在多种血液肿瘤中比例增加，可以通过抑制免疫细胞杀伤作用来帮助肿瘤细胞逃脱免疫监视，并且与恶性程度、转移倾向、复发率等预后指标密切相关[24-26]。（3）合并感染风险预警。（4）造血干细胞移植治疗患者的免疫重建评估与移植物抗宿主病（GVHD）预防。Treg可以作为急性和慢性GVHD的生物标志物[27-29]。（5）CAR-T治疗患者的规范化管理和评估。（6）靶向药物、免疫抑制剂和化疗药物的疗效监测，治疗指导[30-31]。 2 淋巴细胞亚群检测的主要方法和结果报告 2.1 外周血淋巴细胞亚群检测的主要方法淋巴细胞亚群主要通过FCM进行检测。根据中华人民共和国卫生行业标准（WS/T 360-2011）《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》[32]，FCM检测淋巴细胞亚群时，可以采用双平台法或单平台法。首选乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝真空管进行外周静脉血标本采集，并在24 h内进行检测。送检时间超过30 h应该采用肝素钠或枸橼酸钠抗凝，可在室温下稳定保存至48 h，若用双平台法，应采用同一标本进行白细胞计数和分类，则应该选择EDTA-K2作为抗凝剂。若送检时间超过48 h，应该使用流式细胞检测专用的样本保存液或样本保存管，可稳定保存至14 d。TBNK检测推荐的单抗为CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56，Treg检测的单抗为CD4、CD25、CD3、CD127。CD3+T细胞标记为CD3+，CD4+T细胞标记为CD3+CD4+，CD8+T细胞标记为 CD3+CD8+，B细胞标记为CD3-CD19+，NK细胞标记为CD3-（CD16+CD56）+，Treg细胞的标记为CD3+CD4+CD25+FoxP3+或CD3+CD4+CD25+CD127low/-。T细胞表面CD127的低表达与T细胞质内FoxP3的高表达具有良好的相关性[33-35]，且以CD127为标志进行检测方法明显优于以细胞质内FoxP3为标志的检测方法[36-38]，因此也可以使用CD127替代FoxP3进行Treg细胞的分析。上机检测前应采用配套的标准微球对仪器进行全程质控。推荐每管获取淋巴细胞数应不小于10 000个，得到的检测数据可通过调整荧光补偿、圈门等将各种不同表型的淋巴细胞亚群区分开[39-41]，进而得到各群细胞的相对比例及计算绝对数。推荐同时报告淋巴细胞亚群的百分比和绝对计数结果。2.2 外周血淋巴细胞亚群检测的结果报告通常应报告以下内容：CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞的相对计数（百分比）和绝对计数（绝对值）、CD4+/CD8+比值、Treg细胞占CD4+T细胞的百分比。2.2.1 外周血淋巴细胞亚群检测的参考区间近年来已有多篇文献发布了我国不同地区、年龄、民族健康人群的TBNK、Treg细胞参考区间[42-46]。在2023年2月中华医学会健康管理学分会发表的《TBNK淋巴细胞检测在健康管理中的应用专家共识》中公布了一项对我国九省（湖北、河南、广东、吉林、山东、山西、江苏、浙江、四川）20~60岁健康成人TBNK淋巴细胞参考区间的研究结果[45- 47]，可供参考，见表1。在2017年一项研究中发布了健康成年人外周血Treg细胞参考区间[48]，可供参考，见表2。由于Treg在多种疾病的临床治疗与疗效观察方面具有重要探讨价值，近年来许多国内实验室均报告了疾病观察组与健康对照组中外周血Treg细胞占CD4+T细胞的参考区间，如张宁等[49]报道了健康对照组参考区间为（4.52 ± 0.50）%，陈赛英等[50]报道了健康对照组参考区间为（6.85 ± 1.86）%，XU等[51]报道了健康成人的参考区间为（5.52 ~ 7.70）%，QIU等[52]报道了健康对照组参考区间为（5.70 ± 1.43）%。淋巴细胞亚群参考区间的建立受年龄、性别、种族、地域及仪器试剂等众多因素影响[47]，建议有条件的实验室可以针对本地区、本实验室检测体系等建立自己的参考区间及评价体系。调查健康人群淋巴细胞亚群的参考范围，建立95%可信区间的参考值区间，应满足每组至少120例健康样本数量[53]。此外，鉴于人员、仪器、试剂、方法、环境等诸多变化因素，实验室应对已建立的参考区间定期进行验证，每次验证应不少于20例健康样本，分布在参考区间外的测定值应不超过10%[32, 53]。若分布在参考区间外的测定值超过10%，则需要重新验证或考虑实验室分析程序、人群差异等其他因素。2.2.2 外周血淋巴细胞亚群检测报告的审核和发布进行淋巴细胞亚群检测的实验室都应该参加国家卫生健康委员会或省市级临检中心组织的室间质评，从而保证本室检测结果的准确性。在检测患者样品前，实验室人员应确认仪器状态正常和室内质控在控。在报告结果时，实验室人员要审核数据采集阈值的设置、抗体的组合方案、与实验结果相关的所有设门等，以排除样本异常和实验操作导致的检测结果异常。实验室人员还应根据检测结果的内部关系初步判断结果的可靠性。例如，数据应满足：CD3+% + CD19+% + （CD16+CD56）+% ≈（100 ± 5）%；CD4+% +CD8+% ≈ CD3+% （变化范围为5%~10%）[32]。若不满足，则需充分检查，必要时重复实验，在排除仪器、样品、操作等问题后如实报告检测结果，并需要重点分析该样本中是否存在异常表型的淋巴细胞，并用该样本制作血涂片镜检及进一步进行免疫分型对异常细胞进行鉴定，并及时与临床进行沟通。目前，由于国内没有针对Treg细胞检测项目的室间质评，因此应进行实验室间比对。 3 淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤患者中的应用 3.1 血液肿瘤的筛查当出现以下情况：（1）B或NK淋巴细胞显著增高；（2）CD3+CD4+CD8+T淋巴细胞或CD3+CD4-CD8-T淋巴细胞明显增高；（3）CD4/CD8比值大于10:1或小于1:10；（4）CD3+%+CD19+% +（CD16+CD56）+%明显大于或小于（100 ± 5）%、CD4+%+CD8+%明显大于或小于CD3+%（变化范围为5%~10%），在排除标本、仪器、设门、试剂及反应性改变等因素后，需要考虑标本中存在异常淋巴细胞，并结合临床进行血液肿瘤的筛查。血液肿瘤常见的淋巴细胞亚群改变见图1，血液肿瘤淋巴细胞亚群筛查与随访路径见图2。注：A表示T淋巴细胞群比例增高；B表示B淋巴细胞群比例增高；C表示NK细胞群比例增高；D、E表示同一患者T、B、NK三群淋巴细胞比例之和小于95%，存在不表达CD3、CD19、CD16和CD56的淋巴细胞；F表示CD4+T、CD8+T淋巴细胞群比例大致正常；G表示CD4+T淋巴细胞群比例降低，CD8+T淋巴细胞群比例增高；H表示CD4+T淋巴细胞群比例增高，CD8+T淋巴细胞群比例降低；I表示中CD4+CD8+T淋巴细胞群比例增高；J表示CD4-CD8-T淋巴细胞群比例增高。图1 血液肿瘤常见的淋巴细胞亚群改变注：A表示T淋巴细胞群比例增高；B表示B淋巴细胞群比例增高；C表示NK细胞群比例增高；D、E表示同一患者T、B、NK三群淋巴细胞比例之和小于95%，存在不表达CD3、CD19、CD16和CD56的淋巴细胞；F表示CD4+T、CD8+T淋巴细胞群比例大致正常；G表示CD4+T淋巴细胞群比例降低，CD8+T淋巴细胞群比例增高；H表示CD4+T淋巴细胞群比例增高，CD8+T淋巴细胞群比例降低；I表示中CD4+CD8+T淋巴细胞群比例增高；J表示CD4-CD8-T淋巴细胞群比例增高。注：MICM表示形态学、免疫学、细胞遗传学及分子生物学分型。图2 血液肿瘤淋巴细胞亚群筛查与随访路径3.2 血液肿瘤的复发、转移风险预警及预后评估当血液肿瘤患者外周血中出现CD4+和CD8T细胞减少，CD4+/CD8+比值降低，而Treg细胞明显增加时，提示肿瘤复发和转移的风险增加；CD3+、CD4+、CD8+T细胞的数量和比例与患者的完全缓解（CR）率、无复发生存期（RFS）和总生存期（OS）呈正相关，而Treg的数量和比例与CR率、RFS和OS呈负相关[54-58]。在急性髓系白血病（AML）患者中，NK细胞数量和比例与CR率、RFS、OS呈正相关[59]，NK细胞数量减少的AML和多发性骨髓瘤（MM）可能有更差的预后[60-61]3.3 血液肿瘤合并感染风险预警感染是血液肿瘤患者的常见并发症[62]，CD4+T淋巴细胞在免疫防御中发挥关键作用。当CD4+T淋巴细胞绝对计数＜500个/μL时，血液肿瘤患者机会性感染风险会大幅升高[63]。CD4＋T、CD8＋T淋巴细胞数量低下的淋巴瘤患者，化疗后感染风险明显升高[64]。初诊时Treg细胞比例升高的血液肿瘤患者，其住院期间感染率明显增加[65]。3.4 造血干细胞移植后免疫重建监测及GVHD预防3.4.1 移植患者免疫重建监测造血干细胞移植（HSCT）后造血能力持久恢复与免疫系统功能调节密切相关，主要表现为免疫细胞数量的增加和细胞功能状态的恢复[66-67]。免疫重建受移植物来源、移植物数量与组分、预处理方案、胸腺功能等众多因素影响，但自体造血干细胞移植和异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）患者外周血中TBNK、Treg细胞的重建规律基本相似。NK细胞恢复较快，一般移植后2~3周可恢复。CD3+CD8+T淋巴细胞一般移植后1~3月逐渐恢复，CD3+CD4+T淋巴细胞恢复通常需1年以上。CD3-CD19+B淋巴细胞移植后恢复时间不定，短至3个月，长至1年半以上。Treg细胞在移植早期通常比例非常低，移植晚期逐渐增多。3.4.2 移植患者GVHD预防GVHD是allo-HSCT患者需要面临的重要挑战。发生GVHD的患者，其疾病及移植相关死亡率大幅上升，尽早判断是否发生排异反应及抢先治疗是决定移植成败的关键。高炎症状态是GVHD的主要特点[68-69]。具有负调控炎症反应功能的Treg细胞随GVHD等级的增加呈下降趋势，有望成为预测急性GVHD（发生于移植后100 d内）和慢性GVHD（发生于移植100 d后）的特异性指标[70-71]。同时，植移后NK细胞迅速增加会促使炎症因子的大量分泌，从而促进急性GVHD发生[72-73]。因此allo-HSCT患者在早期植入阶段（输注后2~4周）、移植后早期阶段（输注后1~3月）、移植后晚期阶段（输注后3月以后）都建议行淋巴细胞亚群检测。3.5 CAR-T治疗患者的规范化管理和评估3.5.1 CAR-T细胞增殖监测CAR-T细胞免疫治疗目前已被用于治疗复发/难治性的血液肿瘤。定期监测CAR-T治疗患者体内的CAR-T细胞水平、肿瘤负荷、免疫功能（主要包括淋巴细胞亚群的比例和数量）和相关不良反应（细胞因子释放综合征、神经毒性等），是治疗后病情评估的重要手段[74-75]。患者回输CAR-T细胞后，可通过FCM监测外周血中CAR-T细胞的比例和数量，结果报告中一般包括总CAR-T细胞（占淋巴细胞）、CD4+CAR-T细胞（占T淋巴细胞）和CD8+CAR-T细胞（占T淋巴细胞）的比例和数量。有条件的实验室还可开展荧光定量聚合酶链反应法（qRT-PCR）监测CAR-T细胞增殖水平。多项临床试验数据显示，体内CAR‑T细胞增殖水平与疗效显著正相关[76-78]。3.5.2 淋巴细胞亚群监测淋巴亚群检测也被推荐与CAR-T细胞监测同时进行[75]。有研究通过检测患者CAR‑T细胞回输后第15天的外周血淋巴细胞水平，发现低水平的淋巴细胞数（0.67×109/L）是患者的不良预后因素，显著影响病情缓解[79]。也有研究发现缓解患者CAR-T细胞回输2年后的CD4+T淋巴细胞数仍低于0.20×109/L[80]。有研究者提出，具有中央记忆T细胞和干细胞样记忆T细胞表型的CAR-T细胞，在体内有更强的增殖能力及更持久的抗肿瘤效应[80-81]。对于CAR-T细胞治疗的患者，有条件的情况下，可以进行CART细胞的精细亚群分析和长期随访。3.6 血液肿瘤患者药物治疗指导3.6.1 CD20单抗CD20单抗可靶向治疗B淋巴细胞型非霍奇金淋巴瘤，单次输注CD20单抗后3 d内，患者外周血B淋巴细胞可减少90%[82]，多数患者这种剂量依赖性B细胞减少状态将持续2~3个月，一般6个月后患者外周血B淋巴细胞恢复[83-85]。B细胞是否完全清除可用于评估CD20单抗的治疗反应和疗效[86-88]。若患者在使用CD20单抗治疗后，外周血B细胞计数未出现明显减少或无剂量依赖，提示患者对CD20单抗治疗低反应，则可考虑更换治疗方案[89]。3.6.2 免疫调节药物（1）对于免疫功能严重受损的患者（经过放化疗治疗或合并HIV感染等）[90-91]，患者在治疗过程中严重感染的频率显著增加。当患者CD4+T细胞绝对计数小于100个/μL时，建议停用免疫抑制药，使用胸腺五肽[92]等免疫增强剂，待患者免疫功能恢复后在进一步治疗。当小于200个/μL时，需注意免疫抑制药剂量。（2）对于移植及个体化免疫治疗患者，当CD4+/CD8+细胞比值出现小于0.2时，建议停用免疫抑制药，而CD4+/CD8+细胞比值小于0.5时，需谨慎用药，并密切关注患者免疫功能状态及感染情况。（3）对于治疗期间合并感染的患者，NK细胞或CD8+T细胞绝对值及比例较治疗前明显升高[93]，提示可能伴有病毒感染，可为抗病毒药使用提供参考。3.7 动态监测与随访时机的选择3.7.1 建立基线，动态监测淋巴细胞亚群检测结果受疾病状态、药物等因素影响，采用健康人群参考区间可能不能有效评估血液肿瘤患者免疫功能，建议建立患者个体化的淋巴细胞亚群检测结果的基线，并规律、动态的监测其变化趋势。有条件的单位，可在报告中呈现结果动态变化的趋势图。3.7.2 初诊时患者的淋巴细胞亚群检测血液肿瘤患者常伴有免疫功能失衡，细胞免疫功能往往处于免疫抑制状态，对突变细胞的识别和杀伤能力下降[94-95]。检测初诊时患者的淋巴细胞亚群，能有效判断患者免疫功能的初始状态。3.7.3 放化疗、免疫治疗及靶向治疗患者的淋巴细胞亚群监测与随访放化疗、免疫治疗及靶向治疗期间患者可呈周期性改变[96]，可通过检测患者每个周期治疗前后的淋巴细胞亚群变化，来评估患者治疗期间免疫功能恢复情况及肿瘤复发和转移的风险。建议有条件的情况下，可在治疗结束后半年内每3个月跟踪检测，半年后每6个月进行随访。3.7.4 造血干细胞移植患者的淋巴细胞亚群监测与随访建议造血干细胞移植后患者的淋巴细胞亚群检测时间可在移植后第14天、第21天、1个月、2个月、3个月、6个月、1年、2年随访[97-101]。3.7.5 CAR-T治疗患者的淋巴细胞亚群监测与随访建议连续监测患者CAR-T细胞回输前1天、回输后第4天、第7天、第14天、第28天外周血淋巴细胞亚群变化情况，及治疗后2个月、3个月、6个月随访。见图3。图3 血液肿瘤淋巴细胞亚群检测与随访路径图 4 结语随着流式细胞术的广泛应用，用于免疫功能评价的淋巴细胞亚群检测在临床已广泛开展，通过TBNK、Treg这些指标，可以评估血液肿瘤患者免疫状况，为疾病诊断、分型，治疗方案的选择、化疗后感染预防，疾病转归等提供实验室依据，以及为血液肿瘤患者的个性化治疗提供参考。机体免疫功能是动态变化的，由于受年龄、药物、感染、营养、生理等众多因素的影响，存在较大的个体差异。不同疾病状态下淋巴细胞亚群检测结果也可能呈现出较大的差异，因此在参考范围的建立、报告结果解读等方面依然存在挑战。针对血液肿瘤患者，临床工作中需要建立患者个体化的淋巴细胞亚群基线水平，动态监测淋巴细胞亚群结果的变化趋势，并结合多种免疫功能检测指标，综合分析患者的免疫状态，为临床决策提供更加全面的参考。淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中具有重要的临床意义和广泛的应用前景，本共识的发布将有助于推动淋巴细胞亚群检测临床实践中的应用，促进血液肿瘤的诊断、治疗和预后评估水平的提高，期望能够为我国血液肿瘤的精准诊疗做出贡献。专家组组长：杨再林（重庆大学附属肿瘤医院）、武坤（昆明医科大学第一附属医院）、刘耀（重庆大学附属肿瘤医院）执笔人（按姓氏汉语拼音排列）：陈双（重庆大学附属肿瘤医院）、程沈菊（昆明医科大学第一附属医院）、蒋亭亭（重庆大学附属肿瘤医院）、李轶勋（昆明医科大学第一附属医院）、刘耀（重庆大学附属肿瘤医院）、彭余（重庆大学附属肿瘤医院）、武坤（昆明医科大学第一附属医院）、杨再林（重庆大学附属肿瘤医院）专家组成员（按姓氏汉语拼音排列）：陈曼（北京陆道培医院）、陈朴（复旦大学附属中山医院）、池沛冬（中山大学肿瘤防治中心）、蒋能刚（四川大学华西医院）、李力（南部战区总医院）、李珍（南方医科大学南方医院）、李国盛（山东大学齐鲁医院）、李智伟（新疆维吾尔自治区人民医院）、刘耀（重庆大学附属肿瘤医院）、刘艳荣（北京大学人民医院）、马骁（苏州大学附属第一医院）、毛霞（华中科技大学同济医学院附属同济医院）、倪万茂（浙江省人民医院）、冉隆荣（重庆大学附属肿瘤医院）、任方刚（山西医科大学第二医院）、王卉（河北燕达陆道培医院）、王慧君（中国医学科学院血液病医院）、王剑飚（上海交通大学附属瑞金医院）、翁香琴（上海交通大学附属瑞金医院）、吴丽娟（西部战区总医院）、吴雨洁（江苏省人民医院）、武坤（昆明医科大学第一附属医院）、徐翀（上海市临床检验中心）、杨军军（温州医科大学检验医学院）、杨顺娥（新疆医科大学附属肿瘤医院）、杨再林（重庆大学附属肿瘤医院）、岳保红（郑州大学第一附属医院）、张爱梅（中国科学技术大学附属第一医院/安徽省立医院）、张会来（天津医科大学肿瘤医院）、赵明宇（重庆大学附属肿瘤医院）、朱杰（大连医科大学附属第二医院）、朱莉（华中科技大学同济医学院附属同济医院）、朱明清（苏州大学附属第一医院）、朱明霞（北京大学第三医院）、郑金娥（华中科技大学同济医学院附属协和医院）、周辉（湖南省肿瘤医院）利益冲突声明所有作者声明无利益冲突

课程主题：【小贝开讲】流式应用实例分享之儿童急性淋巴细胞白血病课程时间：2021/06/08 14:00课程简介：急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童常见血液病，其中B-ALL 约占85%，T-ALL约占15%。ETP-ALL占T-ALL的15%，即约占儿童ALL的2.25%，临床少见，是一类具有独特免疫表型的高危疾病。本文介绍一例儿童ETP-ALL，并回顾分析我院2006年-2020年的T-ALL病例，讨论国内国际ETP-ALL采用标准不同，ETP-ALL在T-ALL的比率存在差异。王维维 上海交通大学医学院附属新华医院副主任检验技师医学博士，临床检验副主任技师* 目前担任流式细胞术组组长，上海市医学会成员，上海市医学会检验分会形态诊断工作组学组秘书，上海市医学会检验分会流式和细胞分析学组成员。* 目前主要研究方向为肿瘤免疫和血液学诊断，主要从事流式细胞术在血液系统疾病如白血病、淋巴瘤和儿童实体肿瘤、及免疫缺陷等疾病中的检测及诊断工作，主持国家自然科学基金课题1项，获得人才培养项目2项，参与国家级及省市级课题多项，目前共发表及参与发表SCI论文20余篇，发表中文核心论文多篇。

研究背景T-LGLL是一种罕见的慢性淋巴细胞增生性疾病（Chronic Lymphoproliferative Disorder, CLPD），其特征是血液或组织中的成熟细胞毒性T细胞，如大颗粒T淋巴细胞（T- Large Granular Lymphocytes, T-LGL）的克隆性增生。由于缺乏特异性基因标志物，其表现（绝对计数变化、形态、免疫表型特征等）又常常与反应性扩增相似，因此，在T-大颗粒淋巴细胞白血病（T-Large Granular Lymphocytic Leukemia, T-LGLL）的诊断检测中，证明扩增的 T-LGL 的克隆性仍然是一个挑战，特别是在没有淋巴细胞增多（lymphocytosis）的情况下。利用流式细胞术（Flow cytometry, FCM）分析T细胞受体β链恒定区1（Constant region 1 of T-cell receptor β chain, TRBC1）的表达（后续用TRBC1-FCM表示），已被证明是评估Tαβ细胞克隆性的一种有效、简单、快速和特异的方法。然而，由于更为成熟的Tαβ细胞相较于总Tαβ细胞，往往显示出更为宽泛的TRBC1+/TRBC1 -比值，TRBC1-FCM方法对于诊断T-LGLL 克隆性的实用价值，还有待进一步证实。研究目的研究者希望通过直接比较正常 Tαβ-LGL 与T-LGLL中 TRBC1+ 和 TRBC1-Tαβ 细胞的相对分布和绝对计数，验证TRBC1-FCM方法在诊断T-LGLL中特异性T细胞克隆的实用性。研究方法研究纳入了54例样本（EDTA抗凝的全血），样本分别来自17例正常对照（HD），8例反应性 Tαβ 淋巴细胞增多症，5例HDc（有T-LGL克隆的HD），及24例Tαβ-LGLL 患者（18 名 TαβCD8-LGLL、5 名 TαβCD4-LGLL 和 1 名 Tαβ 双阴性 LGLL）。利用Cytek Aurora全光谱流式细胞仪，研究者设计了两组免疫分型方案（Panel I 和Panel II）对样本进行检测分析，整个过程严格遵循EuroFlow SOP进行。Panel I ，主要为TRBC1+细胞成熟标记（如CD27, CD28, CD45RA and CD62L等） Panel II，包括12个骨架抗体（TRBC1、成熟标记、LGL常见异常表型标记），4个主要系别标记（CD3, CD4, CD8 和 TCRγδ），TCRVβ和CD45。两组光谱流式免疫分型方案详细信息如下图1：图1-基于光谱流式的免疫分型方案结论利用Panel I，研究者比较了含有多克隆（n = 25）和单克隆（n = 29） LGL的血液中TRBC1+和TRBC1−的Tαβ-LGL的分布和绝对计数。总体而言，多克隆性TRBC1+或TRBC1− 的Tαβ-LGL细胞数量（百分比）在0.36 ~ 571细胞/μL之间（3.2 ~ 91% TRBC1+细胞），而单克隆性LGL的细胞数量（百分比）在51 ~ 11,678细胞/μL之间（0.9%或96% TRBC1+细胞）。因此可以认为，通过总Tαβ细胞群体中TRBC1表达谱鉴定的病理性T-LGL的绝对计数不能作为检测Tαβ克隆性的通用（单一）标准，特别是在没有淋巴细胞增多和/或血液中携带相对较少（2000 个细胞/μL）的TαβCD4-LGL或 TαβCD8-LGL 克隆的 T-LGLL 例中。相反，一旦将EM 和 TE Tαβ 细胞中的 TRBC1+ 细胞的百分比纳入考虑，所有携带单克隆细胞的T-LGLL和HDc例可以被明确识别，并可与仅有多克隆细胞的例区分开来。图2-TRBC1+和TRBC1−细胞的绝对计数和相对分布（多克隆vs.单克隆）接下来，研究者将TRBC1-FCM方案结合TCRVβ库和异常表型检测（Panel II），以进一步验证 TRBC1-FCM 方法在临床环境中对 T-LGLL 中 T 细胞克隆性进行高灵敏度评估的实用性，并提高其检测（小）LGL 克隆的特异性。一共有12个例的样本被纳入此步研究（6 个 HD、2 个 TαβCD8-HDc 和 4 个 TαβCD8-LGLL）。结果发现，T-LGLL 和 HDc 例中克隆性 TRBC1+ 或 TRBC1-的 Tαβ 和 TαβCD8 细胞的绝对计数（32-5,515 个细胞/μL） ，显著高于来自正常/反应性例的多克隆 TRBC1+ 和 TRBC1- 的总 Tαβ（0-25 个细胞/μL）和 TαβCD8（0-21 个细胞/μL）细胞（图 3A&C）。但对TRBC1+ 细胞百分比的分析却并未观察到显著差异。提示，基于表达单个 TCRVβ 家族的细胞中 TRBC1 的表达模式识别 Tαβ-LGL 的克隆性，应该基于（表达单个TCRVβ 家族的克隆性 TRBC1+ 或 TRBC1- Tαβ 和 TαβCD8 细胞）绝对细胞计数和/或异常表型表达的综合评估。图3- TCRVβ 家族中 TRBC1+ 细胞的绝对计数和相对分布（多克隆vs.单克隆）讨论利用光谱流式技术，研究者验证了 TRBC1-FCM 方法的临床实用性，并进行了拓展。值得特别指出的是，得益于Cytek全光谱流式仪器的高参数和高灵敏的检测能力，研究者可以将多种免疫标记（TRBC1, TCRVβ 库，异常表型标记，成熟相关标记等）同时检测和分析，详细了解TRBC1 表达谱和不同 TCRVβ 家族在正常/反应性 CD28-EM 和 TE Tαβ 中的分布情况。研究数据显示，在存在LGL 淋巴细胞增多症的患者血液中， T-LGLL的 TRBC1+ Tαβ 细胞百分比有显著改变（增加或减少）（大约 0 或 100%），因此研究者认为该方法可用于快速和简便地评估这类患者血液中的T 细胞克隆性。相反，在没有淋巴细胞增多（或者怀疑 TαβCD4-LGLL）的情况下，检测 T 细胞克隆性，需要在TRBC1-FCM 方法的基础上增加检测表达单个 TCRVβ 家族的 T-LGL 亚群的绝对细胞计数。由于样本数量有限，研究者也提出，如果需要进一步比较 TRBC1 -FCM方法与传统的 T 细胞克隆性检测方法，则需要进行更大的样本研究以验证本他们的发现。#参考文献：Muñoz-García, N. Morán-Plata, F.J. Villamor, N. Lima, M. Barrena, S. Mateos, S. Caldas, C. van Dongen, J.J.M. Orfao, A. Almeida, J. High-Sensitive TRBC1-Based Flow Cytometric Assessment of T-Cell Clonality in Tαβ-Large Granular Lymphocytic Leukemia. Cancers 2022, 14, 408. https://doi.org/10.3390/cancers14020408.关于CytekAbout Cytek /Cytek Biosciences, Inc.（Nasdaq: CTKB）作为一家全球技术领先的生命科学技术公司，通过其受专利保护的全光谱分析（Full Spectrum Profiling™ ，FSP™ ）技术，提供高分辨率、高参数和高灵敏度的新一代细胞分析工具。Cytek的创新技术通过检测荧光信号的完整光谱信息，以实现更高水平更高灵敏度的多参数检测。Cytek的FSP™ 平台包括其核心仪器 —— Aurora和Northern Lights™ 分析系统、Aurora CS分选系统、试剂、软件和服务，为客户提供全面和完整的解决方案。Cytek总部位于美国加利福尼亚州Fremont，在全球设有分部和分销渠道。更多的相关信息，请登录Cytek的官方网站：www.cytekbio.com和www.cytekbio.com.cn。注：Cytek, Tonbo Biosciences, cFluor, Full Spectrum Profiling™ , FSP™ 和Northern Lights™ 是Cytek Biosciences, Inc. 的商标或注册商标。Cytek全光谱检测技术相关专利包括但不限于：US10739245B2，US11169076B2，US10788411B2。 /

肿瘤浸润淋巴细胞（Tumour-infiltrating lymphocytes, TIL）具有天然的肿瘤特异性和抗原多样性，因此具有良好的实体肿瘤杀伤能力，其疗效依赖于分选得到的TIL细胞的高效恢复和扩增能力。然而，肿瘤中TIL细胞稀少、有效分离困难，限制了TIL疗法的进一步优化。　　近期，来自西北大学和多伦多大学的研究团队基于微流控技术和免疫磁珠技术研发了新型高通量细胞分选方法，实现TIL的高效识别与分选。研究成果发表于《Nature Biomedical Engineering》，标题为：Efficient recovery of potent tumour-infiltrating lymphocytes through quantitative immunomagnetic cell sorting。研究人员设计了MATIC （magnetic affinity targeting of infiltrating cells）的细胞分选方式，将微流控设备夹在永磁体中间，通过平衡磁力和流体拖拽力，对标记了磁性纳米颗粒的TIL细胞进行分选，实现了每小时处理32亿细胞的高通量，以及90%的捕获效率和95%的分选纯度。与常规细胞分选方法相比，该免疫磁性细胞分选方法可恢复多达30倍数量的TIL细胞，高数量和多活性的TIL细胞加速了TIL细胞扩增，增强了抗肿瘤效果。该分选方法还可识别和分选细胞亚群，在小鼠结肠癌细胞（MC-38）模型中，研究人员基于膜外三磷酸腺苷二磷酸水解酶-1（CD39）表达程度，对TIL细胞进行了进一步的分选，研究证明TIL细胞中CD39中等表达亚群具有最佳的肿瘤治疗效果。　　研究为增强TIL疗法的治疗效果提供了新的方法和思路，但是否普遍存在TIL细胞中CD39中等表达亚群具有更高抗肿瘤效果的现象，还需在更多模型和样本中深入验证。 　　注：此研究成果摘自《Nature Biomedical Engineering》杂志，文章内容不代表本网站观点和立场，仅供参考。　　原文链接：https://doi.org/10.1038/s41551-021-00820-y

2024年4月1日，卫健委发布WS/T360-2014《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》，本标准于2011年首次发布，本次为首次修订。与WS/T360-2011相比除结构调整和编辑性改动外，主要技术内容变化如下:【1】增加了流式细胞仪性能验证内容(见5.1)；5.1流式细胞仪的性能验证5.1.1 验证时机当新仪器启用前、搬移后、仪器发生重大维修(如更换激光、光纤、光电倍增管或流动室等)后、仪器软件系统更新后、仪器性能出现问题或环境严重失控时，需对流式细胞仪进行性能验证，所用流式细胞仪应符合医疗器械注册要求。荧光通道线性应在流式细胞仪常规使用过程中每年至少进行1次验证。5.1.2 验证参数验证参数应包括灵敏度、分辨率、荧光通道线性、仪器稳定性和携带污染率等。5.1.2.1 灵敏度5.1.2.1.1 散射光灵敏度采用己知大小的校准微球检测仪器的FSC和SSC。在散射光FSC/SSC散点图上，应检测出直径0.5μm或更小的微球，或满足制造商声明的要求。5.1.2.1.2 荧光灵敏度即流式细胞仪能检测到标准荧光微球上的最少荧光分子数，可用等量可溶性荧光分子(MoleculesfEquivalent Soluble Fluorochrome，MESF)表示。可采用2~4种不同荧光素校准微球针对所用激发光源进行检测，其中FITC、PE及APC等通道的平均荧光强度(x)与其荧光分子数(y)分别进行双对数线性回归，得公式y=a+bx，其截距a的反对数值即为流式细胞仪的荧光灵敏度。FITC的荧光灵敏度应≤200MESF、PE的荧光灵敏度应≤100MESF、APC≤200MESF，或满足制造商声明的要求。5.1.2.2 分辨率5.1.2.2.1 散射光分辨率采用EDTA盐或肝素抗凝全血，取适量样品稀释后直接上机测定，标本在FSC/SSC散点图可将红细胞和血小板清晰地区分开 取适量样品裂解红细胞后上机测定，标本在FSC/SSC散点图可将淋巴细胞、单核细胞、粒细胞清晰地区分开，即认为散射光分辨率符合要求。示意图参见附录A。5.1.2.2.2 荧光通道分辨率采用校准微球上机测定，各荧光通道的分辨率CV值应符合制造商声明的要求。5.1.2.3 荧光通道线性可采用含有不同荧光强度的校准微球(已知其相应荧光素的可溶性荧光分子数)进行检测，计算每-种荧光微球的MFI，MFI与己知理论值的相关系数r应≥0.98，此方法适用于校准微球上的荧光素可被定量检测的荧光通道。亦可同时使用两种荧光强度不同的微球，在待测荧光通道下，通过改变光电检测器的电压，使两种荧光微球的实际MFI检测值由低到高分布,两种荧光微球的荧光强度比值应保持不变。此方法适用于流式细胞仪所有荧光通道。5.1.2.4 仪器稳定性连续开机条件下，采用荧光微球在开机稳定后0h和8h各检测一次FSC及各荧光通道的IFI，以第一次检测时间点测定的各通道MFI值作为基线值，荧光微球8h上机测定的每一通道的MFI变化范围均应在基线值土10%范围内。5.1.2.5 携带污染率使用浓度为5000个/HL~10000个/HL的校准微球上机进行测定，获取至少100000个颗粒，连续测定3次，计算检测通道内设定区域的颗粒数，分别记为H1、H2、H3:再使用空白溶液上机测定，获取颗粒303，连续测试3次，计算该检测通道内设定区域的颗粒数，分别记为L1、L.2、L3。按照此步骤重复循环3次。按携带污染率公式[(L1-L3)/(H3-L3)]X100%进行计算，取最大值。携带污染率应≤0.5%。【2】完善了仪器质量控制和项目性能验证内容(见5.2、7.2.2)；5.2外周血淋巴细胞亚群检测系统的性能验证5.2.1 验证时机及验证内容淋巴细胞亚群检测项目临床开展初期、更换试剂品牌、更换检测系统或仪器的重大部件维修后，应对检测项目的精密度、稳定性、线性范围、可比性和正确度等参数进行验证。5.2.2 验证方法建议使用配套试剂盒时开展性能验证，使用自选试剂时实施性能确认:需要分别描述性能验证和性能确认的方法和评价标准。5.2.2.1 精密度5.2.2.1.1 批内精密度选取至少5个新鲜全血样品，样品的淋巴细胞亚群细胞计数应覆盖低中高水平。每个标品从荧光染色到上机检测重复3次，并确保所有测试都在同一台仪器的同一批内测定，整个操作过程由同一个操作人员完成。先计算每个样品重复3次后检测结果的CV,然后计算所有样品的平均CV，所有样品的平均C宜10%，最大不超过20%。实验室可根据不同水平的淋巴细胞亚群细胞计数设定不同程度的可接受Q标准。5.2.2.1.2 日间精密度宜使用正常和异常两个浓度水平的全血质控品，每天从荧光染色到上机测定重复操作3次，至少市复4天，整个操作过程可由不同操作人员完成。先计算每天每个全血质控品重复3次检测结果的CV值，然后据此计算每个全血质控品4天的平均CV，最后得出两个全血质控品检测结果的平均CV。结果判定同本标准第5.2.2.1.1条。5.2.2.2 稳定性5.2.2.2.1 样品稳定性验证样品在确定的抗凝及处置条件下的稳定性。采集健康人或患者的样品至少5份，即刻染色-裂晖-固定并上机测定，以此结果作为基线参考水平，按照实验室的具体环境温度控制条件和预期的样品待检时间，在抗凝剂保存时间内，设置不同的时间点对上述样品进行重复处理和上机测定，获取检测结果，并与基线水平结果进行比较以相对偏差或绝对偏差表示,检测结果应符合实验室制定的验证要求。险证要求的制定应考虑不同水平的淋巴细胞亚群计数设定不同程度的偏差值，淋巴细胞亚群计数过低者，宜以绝对偏差进行验证:亦可对试剂说明书声明的稳定性条件进行验证。5.2.2.2.2 处理后标本稳定性旨在明确处理后标本的最长待检时间。采集健康人或患者的样品至少5份，对完成染色-裂解-固定后的标本即刻上机检测结果作为基线水平。按实验室获得检测结果的最长可接受时间为期限，设置不回的时间点对固定后标本进行上机检测。结果判定同本标准第5.2.2.2.1条。亦可对试剂说明书声明的稳定性条件进行验证。5.2.2.3 线性范围适用于淋巴细胞亚群绝对细胞计数。根据试剂说明书声明的线性范围，取一份淋巴细胞计数或亚群计数接近线性范围上限的临床样品，采用样品稀释液按照比例制备5~9个不同浓度的标本(如0、25%、50%、75%、100%等)，浓度范围应覆盖临床医学决定水平:通过染色-裂解-固定后，上机测定，每个标本重复测定4次，取均值。分析实际测定的亚群细胞数量均值与理论值之间的相关性，相关系数应≥0.975。5.2.2.4 可比性5.2.2.4.1 不同检测系统间的可比性验证宜使用至少5份新鲜全血样品(样品的淋巴细胞亚群细胞计数应覆盖低中高水平)和2份不同浓度水平的全血质控品，完成染色-裂解-固定后，分别采用待评价检测系统和比对检测系统进行检测。比对检测系统应为仪器性能良好、规范开展室内质量控制、室间质量评价成绩合格的淋巴细胞亚群常规检测系统，以比对检测系统的测定结果为参考，计算相对偏差或绝对偏差。检测结果应符合实验室制定的验征要求。验证要求的制定应考虑不同水平的淋巴细胞亚群计数设定不同程度的偏差值，淋巴细胞亚群计敬过低者，宜以绝对偏差进行验证。5.2.2.4.2 抗体试剂批次变更前后的可比性验证宜使用至少3份健康人的新鲜全血样品和2份不同浓度质控品采用新批号抗体试剂和当前批号抗体试剂进行荧光染色、上机检测，以当前批号试剂检测结果为参考，计算相对偏差或绝对偏差。检测结果立符合实验室制定的验证要求,验证要求的制定应考虑不同水平的淋巴细胞亚群计数设定不同程度的偏叁值，淋巴细胞亚群计数过低者，宜以绝对偏差进行验证。5.2.2.4.3 不同检测人员间的可比性验证宜使用至少5份新鲜全血样品和2份不同浓度水平的全血质控品分别由实验室内淋巴细胞亚群检测培训合格的不同检测人员完成染色-裂解-固定、上机检测和数据分析，计算不同检测人员间检测结果的相对偏差或绝对偏差。验证结果应符合实验室制定的验证要求。5.2.2.5 其他可使用室间质评回报结果验证淋巴细胞亚群项目的准确度亦可采用包含正常和异常浓度水平的具有溯源链的定值样品验证正确度，每一样品重复测定3次，每次测量值均在给定范围内且3次测量值的均值与标准值的偏倚在允许范围内为通过。选择至少20份表观健康人样品按照常规方法进行淋巴细胞亚群参考区间验证。7.2.2 仪器稳定性验证7.2.2.1 光路/液路稳定性验证检测当天宜使用校准微球进行光路/液路稳定性验证。记录每个检测通道的分辨率的变异系数(CV)，CV值应满足本标准第5.1.2.2.2条荧光通道分辨率要求。7.2.2.2 检测通道电压稳定性验证和调整应使用标准微球进行各检测通道电压验证检测通道电压的浮动应在标准微球的说明书允许范围或者实验室自建的可接受范围内。自建方法如下:在相同的电压设置下，10~20个工作日内检测标准微球20次，使用Levy-Jennings图建立每个参数的可接受范围(均值士2SD和均值士3SD)。【3】梳理和保留了检验前、检验中、检验后过程的内容及要求(见第6、7、8章)；【4】删减了标本采集和处理及临床意义内容(见2011年版的第4、10章)；【5】增加了淋巴细胞亚群六色分析方案(见4.1.3、附录C)。以下为完整内容：本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询,由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法规司负责统筹管理。本标准起草单位:中国医学科学院肿瘤医院、北京医院/国家卫生健康委临床检验中心、北京大学第一医院、中国医学科学院北京协和医院、上海市交通大学医学院附属第一人民医院、上海交通大学医学院附属新华医院、上海长征医院、苏州大学附属第一医院/江苏省血液研究所。本标准主要起草人:崔巍、彭明婷、屈晨雪、黄春梅、李莉、沈立松、周琳、朱明清、崔婵娟、李臣宾。

FDA批准艾伯维突破性抗癌药Imbruvica一线治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）美国生物技术巨头艾伯维（AbbVie）抗癌管线近日在美国监管方面传来特大喜讯，FDA已批准突破性抗癌药Imbruvica（ibrutinib）用于慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者的一线治疗。此次批准，首次为CLL群体提供了一种无化疗（chemotherapy-free）的一线治疗选择，同时也使得Imbruvica在美国的治疗适应症达到了5个之多。此前，Imbruvica已获FDA批准用于：复发性或难治性套细胞淋巴瘤（MCL）、经治慢性淋巴细胞白血病（CLL）、携带17p删除突变的CLL、Waldenstrom巨球蛋白血症（WM）。在美国，大约有11.5万例慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者，每年新增约1.5万例。CLL患者多为老年患者，平均诊断年龄为71岁。此次批准，标志着CLL临床治疗的一个重大飞跃，将为CLL群体提供除传统化疗之外的一种新的一线治疗选择。Imbruvica最初由美国医药巨头强生（JNJ）与Pharmacyclics公司共同开发，之后，强生在去年3月计划以超过170亿美元收购Pharmacyclics，但却被艾伯维以210亿美元成功抢婚。通过此次收购，艾伯维获得了这款“钱”途无量且与自身肿瘤学管线完美互补的突破性抗癌药Imbruvica在美国市场的销售权，该药在美国监管方面先后获得了突破性药物资格、优先审查资格、加速批准及孤儿药地位。去年，Imbruvica在美国已获批的4个适应症，为艾伯维带来了近10亿美元的收入。业界对Imbruvica的前景也十分看好，预计该药的年销售峰值将突破50亿美元。此次，Imbruvica一线治疗CLL新适应症的获批，是基于一项随机、多中心、开放标签III期RESONATE-2（PCYC-115）临床研究的数据，该研究在269例初治（既往未接受治疗）慢性淋巴细胞白血病（CLL）或小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）老年患者（年龄≥65岁）中开展，调查了Imbruvica相对于苯丁酸氮芥（chlorambucil）的疗效和安全性。根据独立审查委员会（IRC）的评估结果，与苯丁酸氮芥相比，Imbruvica显著延长了无进展生存期（中位PFS：未达到 vs 18.9个月），疾病进展或死亡风险显著降低84%，达到了研究的主要终点。此外，与苯丁酸氮芥相比，Imbruvica也与显著更高的IRC评估的总体缓解率相关（ORR：完全缓解+部分缓解，82.4% vs 35.3%，p＜0.0001）。Imbruvica治疗组有5例（占3.7%）实现完全缓解，苯丁酸氮芥治疗组有2例（占1.5%）实现完全缓解。Imbruvica（ibrutinib）是一种首创的口服布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂，通过抑制肿瘤细胞复制和转移所需的BTK发挥抗癌作用。Imbruvica能够阻断介导恶性B细胞不可控地增殖和扩散的信号通路，帮助杀死并降低癌细胞数量，延缓癌症的恶化。在临床试验中，Imbruvica单药及组合疗法针对广泛类型的血液系统恶性肿瘤展现出了强大的疗效，包括慢性淋巴细胞白血病（CLL）、套细胞淋巴瘤（MCL）、Waldenstrom巨球蛋白血症（WM）、弥漫性大B细胞淋巴癌（CLBCL）、滤泡性淋巴瘤（FL）、多发性骨髓瘤（MM）及边缘区淋巴瘤（MZL）等。

人NK/T细胞淋巴瘤细胞的处理方法与培养步骤！ NK/T细胞淋巴瘤（NK/T cell lymphoma）是起源于成熟NK/T细胞的淋巴系统恶性肿瘤。NK细胞和T细胞具有共同的祖细胞，两者在功能和某些抗原的表达上具有相似之处，NK/T细胞淋巴瘤因起源于这两种细胞而得名。 细胞说明信息平台编号：Bio-129794规格：1×10⁶ Cells/T25培养瓶细胞信息：SNK-6细胞名称：人NK/T细胞淋巴瘤细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。组织来源：淋巴细胞培养条件：1640培养基（GIBCO,货号11875093） +10%澳洲来源进口胎牛血清（GIBCO,货号10091148）+1%双抗形态：悬浮；淋巴母细胞样规格：1×10^6 cells/瓶用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞收到后的处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置 2-4 小时。镜下观察：未超过 80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入 6ml 完全培养基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2、加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在 1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。4、按 5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按 1：2 的比例分到新的含 5-6 ml 培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到 2ml 小管细胞，收到细胞后，用 75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至 T25 培养瓶或 6cm 培养皿，加入 5ml 左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过 80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过 80%，可直接进行传代（方法同上）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

时间：2018年11月1日 19:30 - 21:00内容简介：淋巴瘤是发生于淋巴结和/或结外淋巴组织的一组造血系统恶性肿瘤，不同类型的淋巴瘤在临床病程、治疗方案及总体预后方面具有很大的差异性，因此准确的诊断及分型至关重要。但淋巴瘤的确诊和分型则必须依赖免疫表型的检测分析。那流式细胞学是如何检测免疫表型的？在淋巴瘤诊断中具体有何应用？结果如何判读？检测过程又是怎样的呢？此次讲座，我们非常荣幸的邀请到了上海瑞金医院血液学研究所流式细胞室负责人翁香琴老师，主要围绕《流式细胞学在非霍奇金淋巴瘤诊断中的专家共识》，给我们分享一下流式细胞学在淋巴瘤检测中的应用。主讲人简介：翁香琴 上海瑞金医院血液学研究所流式细胞技术平台 助理研究员遗传学专业，助理研究员，2003年开始负责上海瑞金医院血液学研究所流式细胞技术平台。主要研究方向：多参数流式细胞术在血液系统肿瘤诊断及MRD监测中的应用，并以第一作者身份发表相关SCI论文数篇。参与执笔撰写《流式细胞学在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用专家共识》和《多参数流式细胞术检测急性白血病及浆细胞肿瘤微量残留病专家共识》。 担任中华医学会免疫学分会流式细胞学组全国委员。

上海，中国——贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司——作为一家成立百年的专门从事诊断和生命科学相关产品生产和服务的技术型公司，在流式细胞产品有着完备的流程和系统，除了有流式细胞仪的生产工厂之外，还在在全球有3家配套流式试剂生产工厂：美国迈阿密、法国马赛、印度班加罗尔，为全球临床和科研用户提供高质量的流式试剂来满足当今流式细胞实验室的需求。试剂类型除了有传统的液体试剂也有最新型的干粉试剂。适应不同实验室、不同环境对于检测试剂的要求。ClearLab LS(淋巴瘤筛选方案) P/N B74074试剂用于各种血液淋巴样细胞异常样本的筛选研究。该试剂可以帮助鉴别诊断血液淋巴恶性肿瘤。该检测主要针对T，B及NK淋系细胞进行定性，其结果可以与其他实验结果进行综合解读。*一管即用型淋巴瘤筛选方案*采用贝克曼库尔特独家干粉专利技术，常温存储*预混10色共计12个抗体*用于Navios等3L10C高端流式*简化样本制备流程*可检测外周血，骨髓及淋巴结样本，适用于EDTA，肝素及ACD等多种抗凝样本*25人份包装更适合临床研究*CE注册*WHO 2008修订分类指导方案该方案的克隆及染料搭配基于能更契合临床研究的需要，鉴别样本中所有主要淋巴瘤型别，以及在正常和肿瘤阶段中主要造血细胞系别。ClearLab Compensation Kit 多色补偿试剂盒 P/N B74074 提供即用型干粉十色补偿管，可用外周血或补偿微球进行多色的流式补偿条件设置。*每盒5套*CE注册DURACLONE IF T细胞活化检测方案如今单细胞水平的细胞因子检测可以通过更为简单、灵敏的实验流程实现。即用型干粉试剂DuraClone§ IF T活化方案消除了由于抗体移液带来的误差，并采用简单快速的PerFix-nc通透方案，为您的细胞功能分析提供一套标准化工作流程！ 细胞免疫功能测定的往往操作方法繁琐，重复性差。DuraClone IF T活化试剂无需重复的抗体移液和避免不同抗体间效期问题，并且在紫光、蓝光和红光三个激光都提供了开放的检测的通道，为检测方案增添灵活性。红激光开放通道选取串色程度最低的灵敏度最高的APC染料，确保了在该检测通道的优先用于检测弱表达标记。DuraClone RE管贝克曼库尔特联合该领域的权威专家，对血液疾病（比如B淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤）临床研究中用于稀有细胞流式检测的灵敏抗体进行优化，推出了现在的DuraClone RE§管。该方案一共包含三个独立panel，可以对B细胞发育分化的不同阶段中含量极少的异常细胞进行检测，B80393针对成熟B淋巴异常细胞，含有ROR-1抗体，被认为是区分慢淋和正常B细胞以及套白MCL的一个全新标志物。B80394针对浆细胞中异常细胞。C00163针对未成熟B细胞中的异常细胞。三个方案均留有开放通道允许外加抗体或染料如核染色SYTO41，满足研究灵活便利的需要。DuraClone RE CLB管826,000个CD45+细胞数据分析示例。异常B细胞群以红点表示（568个，0.069% CD45+），正常B细胞群以蓝点表示（16,003个）。Kaluza§雷达图通过ROR-1、CD5、CD43、CD81、CD79b和CD20的多元视角确定了布尔设门策略。数据由Navios流式细胞仪分析全血样品获得。DuraClone RE PC管2,660,000个CD45+细胞数据分析示例。异常浆细胞群以红点表示（52个，0.003% CD45+），正常浆细胞群以绿点表示（30个）。Kaluza§雷达图通过全部8个参数CD45、CD38、CD138、CD19、CD56、CD200、CD81和CD27的多元视角确定了布尔设门策略。数据由Navios流式细胞仪分析全血样品获得。DuraClone RE ALB管1,228,000个CD45+细胞数据分析示例。异常浆细胞群以红点表示（132个，0.011% CD45+），正常B细胞群以绿点表示（39，898个）。结合采用CD58、CD34、CD10、CD38、CD20分析异常细胞。数据由Navios流式细胞仪分析全血样品获得。*以上产品仅用于科研，不用于临床诊断。

p style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "目前，抗体药物已成为全球生物制药的重点。抗体药物开发也逐步成为中国制药行业关注的热点，国家十二五规划中明确提出，增强新药创制能力，加快单克隆抗体药物的研究，重点开发治疗恶性肿瘤的抗体药物，突破生物技术药物产业化的技术瓶颈，开发自主知识产权产品，抢占世界生物技术制药的制高点。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "近日，仪器信息网特别策划了“strong抗体发现及细胞株开发的高通量自动化解决方案/strong”专题，以期能够帮助生物制药领域用户了解抗体药物开发过程中的相关技术方法。并邀请美谷分子仪器（上海）有限公司技术主管徐孟杰分享了他的观点。/pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center " /pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/fb48c2e2-8422-4ec0-b8c4-d001eb137308.jpg" title="图片1.png" alt="图片1.png"//pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center "徐孟杰 技术主管/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong仪器信息网：请您谈谈目前抗体药物开发整体现状以及细胞株开发的现状。/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong徐孟杰/strong：从产品角度来看，抗体药物开发的重心在于结构创新和改造，比如双特异性抗体，以及scFv、纳米单抗等抗体片段。此外还有研究的靶点从前期的热门靶点，延伸到“相对冷门”的靶点上，一些认知相对较少的靶点。从抗体药物开发的技术角度，很多大公司都在加强或完善抗体发现平台，提高自动化程度，从而有助于发现更多优质候选分子。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "细胞株开发上，由于宿主细胞、质粒结构、筛选方法以及培养基等优化，单抗产量已经比较容易达到5 g/L及以上，因此产量已经不是最大的瓶颈。随着药企间竞争的加剧，缩短细胞株开发工作流程时间、减少人工操作、提高效率并更好地满足法规的要求，尤其是细胞株单克隆性的要求，是当下更为关注的要素。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong仪器信息网：在目前的抗体发现及细胞株开发过程中，相关方法的技术难点主要是什么？如何突破？/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong徐孟杰/strong：抗体发现技术包括杂交瘤筛选技术，噬菌体展示技术和单个B细胞技术等。作为筛选平台，最重要的还是筛选的通量和效率，从而找到更多特异性的抗体或抗体片段。目前越来越多的平台借助高通量自动化的系统来实现通量和效率的提升。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "细胞株开发阶段，产量和时间是两个重要的指标，涉及的因素比较多，包括宿主细胞，筛选体系，以及单细胞克隆等。单细胞克隆技术的选择，极大影响实验流程的时间和筛选的通量，最终也会影响到细胞株产量，因此是非常关键的一个技术环节。一轮有限稀释结合孔板成像是目前较为常见的方法，不过有限稀释的操作存在低效和人工操作时间长的不足。因此，越来越多的公司采用单细胞分离系统代替有限稀释，这不仅可以提高筛选的通量和工作效率，还可以加强细胞株单克隆性的可信度，因此单细胞分离系统加孔板成像是当下热门的技术组合。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong仪器信息网：请介绍目前在抗体发现及细胞株开发过程中，科学仪器市场对应开发产品的现状及发展趋势如何？/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong徐孟杰/strong：对于抗体发现，主要的需求在于自动化高通量的设备，市场上既有针对各个阶段的自动化设备，也有全流程的自动化解决方案。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "细胞株开发的新技术更是精彩纷呈，近几年快速孔板成像设备已成为细胞株开发的“标配”，结合一轮有限稀释，就可以达到足够的单克隆性可信度，取代了原先的两轮有限稀释，缩短了整个流程的时间。最近一两年，又出现了许多基于微流控芯片技术的产品，取代手工有限稀释或流式分选，提高单细胞接种的效率，是时下的热点。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong仪器信息网：请介绍贵公司在抗体发现及细胞株开发方面有哪些仪器产品和解决方案？请介绍相关产品的技术特点和优势？/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong徐孟杰/strong：针对噬菌体展示的抗体发现，我们公司有挑大肠杆菌克隆的QPix微生物克隆筛选系统，代替人工挑取，实现3000个克隆/小时的高速挑取，以及 98%的挑取成功率，是这个领域的标杆产品。此外，我们还可以整合上下游的设备，实现整个噬菌体展示流程的全自动化，从而进一步提高筛选的通量和效率。span style="text-align: center text-indent: 0em " /span/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 550px height: 367px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/dc8f9846-1f44-4787-8582-d85307b91c16.jpg" title="22.png" alt="22.png" width="550" height="367" border="0" vspace="0"//pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center "QPix微生物克隆筛选系统/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "对于杂交瘤筛选，我们公司有ClonePix2细胞克隆筛选系统，结合半固体培养基，可以获得高密度的杂交瘤细胞克隆，相比传统铺板的方法，不仅可以减少孔板数量及人工操作量，还可以发现更多特异性的杂交瘤细胞克隆，且后续的亚克隆时间亦可以缩短。ClonePix2系统通过白光成像和荧光成像，可以筛选出抗原特异性或者IgG阳性的杂交瘤细胞克隆，并自动精确地转移至微孔板，可用于初筛或者后续的亚克隆，提高工作效率。/pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center " /pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 400px height: 550px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/98dd2921-940d-45df-8136-459023c59578.jpg" title="图片3.png" alt="图片3.png" width="400" height="550" border="0" vspace="0"//pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center "ClonePix2细胞克隆筛选系统/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "对于细胞株开发，上面提到的ClonePix2系统也可以用于细胞株开发，借助半固体培养基的高克隆密度和ClonePix2系统的强大筛选功能与自动化挑取，可以轻松筛选上万个克隆并挑取出其中的高表达克隆。此外，我们还有CloneSelect高通量单细胞分离系统，这是一款新的设备。该系统基于微流控芯片技术和智能图像分析，可以实现 80%的单细胞接种效率和 75%的细胞活率，从而实现 60%的单克隆率。相比有限稀释，可以将每块96孔板或384孔板的克隆数量提高3倍及以上，从而扩大筛选通量。同时，单细胞分离过程采集的图像，与后续的全孔成像的图像互相佐证，可以提高单克隆性的保证。在全孔成像方面，我们有CloneSelect Imager细胞生长分析系统，专门用于细胞株单克隆性验证。该系统可以在90s内完成一块96孔板的高质量图像的采集，配套的分析软件可以出具单克隆性报告，因此可以高效地完成图像的采集、分析和报告出具。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 550px height: 332px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/d33451b0-26f4-41ad-9e84-dc73f63151c8.jpg" title="图片4.png" alt="图片4.png" width="550" height="332" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 550px height: 409px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/11a5f221-c6e1-4727-bc61-64a62a93ccd2.jpg" title="33.png" alt="33.png" width="550" height="409" border="0" vspace="0"//pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center "CloneSelect高通量单细胞分离系统/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " /pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " /pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202010/uepic/88c8c151-5f32-4977-b969-adce4e69dc32.jpg" title="图片6.png" alt="图片6.png"//pp style="margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center "CloneSelect Imager细胞生长分析系统/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong仪器信息网：请您介绍一下用于细胞株开发的新产品与传统方法以及同类型产品之间的差异。/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong徐孟杰/strong：我们的新产品叫CloneSelect高通量单细胞分离系统，它的核心在于微流控芯片和智能图像分析。第一个特点是获得更多的单个活细胞最终生长成细胞克隆，细胞克隆数目是有限稀释的4倍及以上。它利用微流控芯片柔和地产生细胞液滴，通过实时地图像分析判断细胞数目，将空的液滴或者多个细胞的液滴真空吸走，从而只接种单个细胞的液滴，以达到更高的单细胞接种效率。第二个特点是处理速度快，提高工作效率和筛选通量。单细胞分离系统只需要简单的准备就可以使用，接种一块96孔板的时间不到5min，从而提高整体的工作效率。第三个特点是记录的单细胞分离图像，可以与后续的孔板成像的数据相互补充，提高单克隆性的可信度。第四个特点是采用一次性的分离槽，细胞样品加到分离槽中，离开后直接进入微孔板，正式样品不流经其他的管路，因此省去了清洗和验证系统的麻烦。第五个特点是兼容一系列细胞，且具有荧光分选功能，可以拓展应用。除了分离CHO细胞外 ，还可以用于HEK细胞、干细胞、昆虫细胞、各种肿瘤细胞及原代细胞。绿色荧光可以用于筛选出基因编辑成功的活细胞、高表达的细胞以及高活率的细胞，拓展应用范围，配合一次性分离槽，使得不同项目之间的切换会非常方便。/p

大咖驾到 I 生物制药与细胞株开发研讨会生物药的前景美好，而竞争也日趋激烈。这对项目选择提出了更高的要求，知己知彼，避开拥挤的赛道，是成功的关键第一步。随着新技术的不断涌现，法规亦日益完善。如何在拥抱新技术、新方法的同时更好地满足法规的要求，是在与时间竞争时无法回避的问题。本次交流会，我们邀请多位生物药行业资深科学家，围绕生物药研究的现状，工程细胞株单克隆性验证，以及最新的细胞株开发流程和自动化解决方案展开讨论和交流，诚挚邀请各位踊跃参加。生物药物具有美好的前景，但是竞争也日趋激烈。如何选择项目，避开拥挤的赛道，是成功的关键一步。同时，随着新技术的不断涌现，法规亦日益完善。如何在拥抱新技术、新方法的同时，更好地满足法规的要求，是在与时间竞争时无法回避的问题。为此，佰傲谷与美谷分子仪器（上海）有限公司邀请多位生物药物行业资深科学家，将于2020年7月1日晚上七点至九点，举办生物制药与细胞株开发研讨会。本次交流会，将围绕“生物药研究的现状，工程细胞株单克隆性验证，以及最新的细胞株开发流程和自动化解决方案”，展开讨论和交流，诚挚邀请各位踊跃参加。直播时间2020年7月1日17:00-21:00直播平台Zoom+小鹅通直播平台直播安排时间安排安排19:00-19:05主持人介绍19:05-19:45自身免疫疾病的生物药研发现状曹卓晓博士先声药业执行总监19:45-20:25工程细胞株的单克隆源性问题刘大有博士创胜集团执行总监20:25-21:00细胞株开发流程探讨：细胞克隆技术的案例比较分析Dr.SteveWiltgenMolecularDevices高级产品经理嘉宾介绍曹卓晓博士，负责公司整个生物创新药的临床前开发。已有十多年丰富的生物药研发经验，负责和参与近30个不同类型大分子药物形式的开发，熟悉各类抗体药物筛选平台和生物药开发的全流程。于2004年获得美国纽约圣约翰大学药理毒理专业博士学位。之后在哈佛大学医学院从事心血管疾病及炎症免疫性疾病方面的博士后研究工作。其博士及博士后研究成果共发表在近20篇高影响力国际期刊的论文中。先后任职于诺和诺德北京研发中心和上海恒瑞医药有限公司，负责自身免疫疾病，炎症，肿瘤免疫，代谢，纤维化等广泛疾病领域方面的生物药开发，多个项目进入临床开发阶段。刘大有博士于2002年加入安进细胞株开发部门，拥有将近20年细胞株开发经验，领导了多个重要项目的分子评估和工程细胞株开发工作以及IND/BLA申报，包括已上市的EVENITY,aimovig,和Prolia/Xgeva的第二代细胞株（产量超过10g/L）。有丰富的工程细胞株的遗传学表征方面的经验，曾为Prolia/Xgeva的BLA申报工作做出重要贡献。2016年加入默沙东细胞株开发部门，是默沙东新一代业界领先的高效高速细胞株开发平台的主要设计者，现任职创胜集团细胞株开发部门执行总监。毕业于内布拉斯加大学林肯分校获数学与生物科学学士学位，后在加州大学欧文分校获神经生物学博士学位，主要应用超高分辨技术研究离子通道功能。Steve随后加入了Molecular Devices，历任应用科学家、产品经理等。参会方式方式一：点击下方按钮，即可报名立即报名方式二：扫描下方二维码报名详情请咨询美谷分子仪器（上海）有限公司。

在细胞株开发上，贝克曼库尔特生命科学部不仅提供“基因-蛋白-细胞”系统解决方案，同时还应对海量数据挑战，实现数据追踪和管理。点击以下应用，了解更多细节。 一种让你快速构建细胞株的策略 如何应对细胞株开发数据挑战 Echo如何以快速、精准、任意孔到任意孔移液加快细胞株开发 丹纳赫生命科学细胞株开发整体解决方案 点击“阅读原文”，了解更多产品信息~阅读原文

2019年11月26日，刊登在Nature communication上的研究报告指出，一种与T淋巴细胞结合的抗体衍生物，重新定向T淋巴细胞以溶解肿瘤细胞。T细胞的免疫疗法正在改变当前癌症治疗的前景。但是，缺乏合适的靶抗原，将这些策略限制在极少的肿瘤类型上。在这里，本文报道了一种T细胞结合抗体衍生物，该衍生物分为两个互补的半部分，并针对抗原组合而不是单个分子。现在，每半个部分都是半抗体，包含与抗CD3抗体的可变轻链(VL)或可变重链(VH)融合的抗原特异性单链可变片段(scFv)。当两个半抗体同时在单个细胞上结合各自的抗原时，它们会对齐并重组原始CD3结合位点以与T 细胞结合。本文表明，通过这种方法，T淋巴细胞可专门消除双重抗原阳性细胞，同时保留单个阳性癌旁细胞。这使不适合当前免疫疗法的精确靶向治疗成为可能。抗癌单克隆抗体代表了现代药物治疗中增长最快的领域之一。在临床前和临床研究中目前列出的数百种治疗性抗体和抗体衍生物中，有一些脱颖而出，其重点是将细胞毒性T淋巴细胞重新靶向恶性细胞。其中，最先进的是将嵌合抗原受体(CARs)转染到T细胞和双特异性T细胞结合抗体(BiTE)，两者均使用单特异性单链可变片段(scFv)作为靶向装置。总的来说，这些抗体衍生物所针对的靶分子是存在于恶性细胞及其未转化的对应物上的分化抗原，它们的结合常常引起严重的，甚至致命的不良事件。由于适用于基于抗体疗法的真正的肿瘤特异性抗原很少见，因此本文在这里研究一种组合方法，该方法可以解决由某些类型的白血病或淋巴瘤，实体癌和其他来源的癌干细胞异常表达的抗原组合。此外，鉴于结合T细胞疗法的临床有效性，本文以双重抗原限制的方式重定向T淋巴细胞以裂解肿瘤细胞。半抗体消除体内已建立的肿瘤为了测试半抗体的潜在治疗适用性，对免疫缺陷的NOD/SCIDγ(NSG)小鼠进行了体内免疫接种。在第1天接种萤光素酶基因标记的THP-1肿瘤细胞。在第1、22和28天，尾静脉接种HLA-A2阴性的CD4和CD8供体T淋巴细胞。在第7天植入肿瘤细胞后，每天皮下分别注射：盐水、单个半抗体、两个半抗体的组合及这是双特异性T细胞结合抗体(BiTE)对照。直到第39天。为了研究半抗体是否可以相互发现以实现靶标功能互补，将构建体彼此分开注射在较远的位置，一个在颈部，另一个在后肢上。尽管所有接受盐水或单个半抗体的小鼠疾病发展迅速，并在53天内达到了安乐死的标准，但用两个半抗体对或BiTE对照治疗的小鼠却排斥了已建立的肿瘤（下图a）。接受半抗体对或BiTE对照的小鼠的总生存期显著延长。上图：体内高精度靶向癌细胞a.通过IVIS Lumina XR实时生物发光成像，每周评估一次荧光素酶基因标记的THP-1肿瘤细胞的生长b.每天监测生存期，直到第110天半体技术的组合性质为特异性治疗开辟了新的领域。它可能选择性消除不适合当前免疫疗法的人类癌症，并且与旨在增强对靶标亲和力的其他双重或三重抗原特异性策略大不相同。尚不清楚半抗体是否会诱导细胞因子释放综合征，这是双特异性T细胞结合抗体(BiTEs)或针对抗原（例如CD19）的CAR-T细胞的主要缺陷。在这种情况下，甚至用半抗体处理单个靶分子也是合理的，以便将T细胞活化专门限制在肿瘤部位，同时减少血管内T细胞活化和全身细胞因子分泌。 综上所述，本文研究的半体技术将成为用于组合高精度免疫靶向以消除恶性细胞及其他恶性肿瘤的通用平台。

文章来源：中华检验医学杂志, 2023,46(08)：792-801.作者：国家医学检验临床医学研究中心（中国医科大学附属第一医院） 中华医学会检验医学分会 国家卫生健康委临床检验中心 中华检验医学杂志编委会摘要流式细胞术在临床血液及免疫相关疾病的精准诊治中具有重要作用。随着流式细胞仪普及程度的不断提高，临床实验室开展流式细胞术检测，服务临床诊疗的能力和水平也逐渐提升。为适应流式细胞术临床应用的进展和需求，加强质量控制，结合近年来国内外相关领域研究进展，对2013年发表的《流式细胞术的临床应用共识》进行更新，制定此共识。随着医学的进步及疾病精准化诊治需求的增加，我国临床实验室流式细胞仪的普及水平得到提高，开展流式细胞术检测服务临床诊疗的能力和水平亦不断提升。为适应流式细胞术临床应用的进展和临床检验需求的更新，我们延续2013年《流式细胞术临床应用的建议》［ 1 ］的编写初衷，并在此前版本的基础上，经专家组讨论，适时对相应内容进行修订和扩增。本共识由国家医学检验临床医学研究中心、中华医学会检验医学分会、国家卫生健康委临床检验中心及中华检验医学杂志编委会组织专家进行讨论撰写并发布。一、流式细胞仪及器材的准备（一）流式细胞仪的选择2017年12月，我国颁布《流式细胞仪》国家行业标准［ 2 ］，规定了流式细胞仪的产品分类、技术要求、试验方法及使用方法等。在临床检验工作中，应选择有临床注册证的流式细胞仪，满足检测灵敏度和收集速率等的要求；根据检测项目所需参数，确定适宜激光器和检测器，使其检测参数与临床使用的荧光抗体匹配；考虑操作的简便性和兼容性，以及未来可升级满足新检测需求的空间；兼顾临床实验室场地、仪器维护、人员培训、试剂和耗材供应稳定性、售后服务等因素。（二）流式细胞仪的设置1.仪器质控：流式细胞仪的仪器性能与检测结果准确与否密切相关。为保证仪器运转正常，每日开机流程后应运行仪器的质控微球等，保证仪器处于最佳性能状态，变异系数小于仪器软件中的可接受范围。如有可接受范围外的偏离，应及时进行校准和维修。2.仪器维护：（1）环境温湿度可影响激光器、光纤和棱镜等光学元件，使用时可参考仪器说明书推荐的温湿度，推荐室温18~25 ℃；（2）灰尘可损伤激光器和光学元件，降低检测的灵敏度，日常工作中注意仪器的整洁，清洁频率依据环境而定；（3）使用1%的次氯酸或75%医用乙醇每日清洁进样针，宜定期（或按需）清洁流动室，避免黏性大和聚集成团的细胞堵塞进样针；（4）过滤器影响荧光信号的稳定性和压缩空气的供应，在需要时排除气泡并定期更换；（5）鞘液桶、废液桶需维持密闭性，定期清洁和更换；（6）电脑数据定期备份，存储数据不超过硬盘的一定容量，避免损坏和拖慢系统性能；（7）定期对仪器性能进行全面评估、校准和保养，并应出具书面报告。3.补偿设置：传统的多色流式细胞仪存在荧光溢漏，合适的补偿是获得可靠数据的关键［ 3 , 4 , 5 ］。（1）补偿对照可以使用新鲜血细胞制品（更贴近待检测细胞）和商品化的荧光微球（操作简便）。使用荧光微球建立的补偿，宜用待检细胞进行优化；（2）如流式细胞仪具备“自动补偿”功能，可采用自动补偿进行条件设置并进一步手动优化；（3）同一通道检测的相似荧光，建立补偿时不能互相替代，如PE-Cy5、PerCP、PerCP-Cy5.5等，应分别建立补偿；（4）补偿设置的染色处理过程宜与待测项目一致，细胞膜染色和经过固定、破膜的胞浆（或胞核）染色会有不同，建议分别设置补偿；（5）补偿矩阵并非永久适用，当建立新的实验或仪器性能出现允许范围外的变化，应重新建立补偿。（三）移液器、离心机、标本前处理系统等的维护及定期校准上述仪器除日常清洁维护，应按照实验室认可标准（例如ISO15189）的相关要求，定期对不同量程的移液器、离心机和标本前处理系统的性能进行全面评估和校准，并出具书面报告。共识1 临床检测选用的流式细胞仪应有国家有关机构核发的注册证。建议根据临床实验室及流式细胞术检测项目的特点，选择技术性能符合使用要求的流式细胞仪，宜同时考虑相关技术培训及售后服务等。流式细胞仪的使用应注意每次检测过程中的仪器质量控制，应按要求进行维护保养和校准评估。流式细胞术检测相关的器材也应注意日常清洁维护和定期校准评估。推荐强度：强烈建议。二、流式细胞术检测试剂（一）荧光抗体的选择和搭配流式细胞术使用的抗体应符合国家相关标准［ 6 ］。在搭配多色抗体组合时需要考虑［ 5 ］：（1）流式细胞仪的检测通道特性：根据流式细胞仪的配置，选择可使用的荧光抗体；（2）荧光染料本身的强弱、荧光标记物的稳定性、荧光素分子大小、荧光抗体克隆号等，例如同一荧光标记物，不同克隆号抗体对某些抗原的检测效果也会出现差异［ 7 , 8 ］；（3）待测抗原表达强弱：弱表达抗原选择强荧光标记，强表达抗原可选择弱荧光标记；（4）尽量避免光谱重叠多的荧光染料搭配如PE-Cy5和APC等，对细胞共表达的抗原进行染色时，尽量避免选用串色和荧光溢漏大的通道［ 5 ］。（二）抗体的滴定设置通过抗体滴定计算染色指数（stain index，SI），判断荧光染色后阴性群和阳性群的分离效果，是确定最佳抗体使用浓度的重要方法。SI计算公式为：［中位荧光强度（median fluorescent intensity，MdFI）阳性群-MdFI阴性群］/（2× rSD阴性群）［ 5 ］。SI受荧光强度、抗原表达强度、抗体结合力及流式细胞仪设置等影响［ 5 ］。在更换抗体或抗体批号之前，宜进行抗体滴定以确定最佳浓度，避免因抗体浓度不合适，导致弱表达抗原检测不到或强抗原超出检测限。（三）对照的设置和选择选择适宜的对照是流式细胞术检测中正确获取和分析数据的基础［ 5 ］。“荧光减一”（fully stained minus one fluorochrome或fluorescence minus one，FMO）对照是目前确定阴性和阳性细胞群cutoff值的最佳对照，对于弱阳性或阳性细胞比较少的情况尤为适用，可排除交叉干扰等；同型对照可评估Fc受体或蛋白的交叉反应，排除非特异性染色。生物品对照如血液制品质控，可根据制品的cutoff值来确定检测样品的阴阳性。（四）其他试剂红细胞裂解是流式细胞术检测血液白细胞或骨髓有核细胞时不可或缺的过程［ 9 , 10 ］，宜选择相应品牌的裂解液或自行配制。由于裂解液可对粒细胞和单核细胞等造成不同的影响，也会影响染色的效果［ 9 , 10 ］，建议根据检测目的不同进行比对，择优选用。细胞的稀释、洗涤和重悬需使用缓冲液或稀释液［ 11 , 12 , 13 ］，宜依据反应的最适pH值（如中性）、副作用（如磷酸盐缓冲液会导致一些激酶反应的抑制）、可能的络合作用、对光谱的吸收以及成本等进行选择［ 13 ］。日常工作中可选用商品化的缓冲液或PBS，依据检测目的确定是否添加胎牛血清/牛血清白蛋白，以及是否加入叠氮化钠用于保存。此外，细胞培养基和医用生理盐水等也可用作稀释液和缓冲液。不同于细胞表面（细胞膜）的染色，对细胞内（细胞浆或细胞核）的分子进行染色，需要经过“固定”（如甲醛等），保持目标抗原的位点和结构，再通过“破膜”（如Triton-X）使抗体进入细胞。不同品牌破膜剂对细胞内染色有不同程度的影响，建议根据检测效果进行比对，择优选用［ 14 ］。共识2 流式细胞术检测中，建议合理选择和搭配所需荧光抗体，通过滴定确定抗体使用的最佳浓度，并合理选择和设置对照；染色过程中，选择适宜的红细胞裂解液、缓冲液以及固定破膜剂。推荐强度：强烈建议。 三、标本的采集、存储、运输及制备（一）外周血标本（1）患者准备：流式细胞术检测同其他项目外周血采集无异，因脂血等会对检测结果造成影响，采血前尽量清淡饮食；（2）抗凝剂选择：同时进行白细胞分类和流式细胞术检测时，建议使用乙二胺四乙酸盐（EDTA）抗凝真空管进行标本采集，室温保存，尽快送检［ 15 ］。如进行T细胞功能的检测如IFN-γ分泌时，因EDTA可螯合钙离子，影响T细胞激活效果，建议采用肝素钠等抗凝。（二）其他标本骨髓标本、造血干细胞采集物的抗凝剂选择可以参照外周血。脑脊液标本一般不需要抗凝剂，渗出液性质的浆膜腔积液常有凝块，建议抗凝处理。因体液标本久置会导致细胞破裂，影响细胞计数、分类等检测结果，所以需要尽快送检。一般要求在采集后立即送检［ 16 ］，如使用特殊保存剂，可以适当延长送检时间［ 17 ］。样品应离心浓缩调整细胞浓度后进行染色。对于淋巴结等组织标本，一般不需要抗凝剂，活检取材后应尽快送检。标本可经过物理研磨法和酶消化法获得单细胞悬液，调整细胞浓度后进行细胞染色。体外培养的细胞（如胞内细胞因子染色时，需刺激后加入蛋白转运抑制剂），根据细胞储存状态（冻存与否）、细胞特性（贴壁或悬浮），进行复苏或消化、洗涤，调整细胞浓度后染色。（三）标本制备流式细胞术标本的制备，需考虑新鲜度和检测项目的要求。（1）细胞浓度：一般不建议超过1×106 cells/ml（参照试剂说明书）；（2）全血体积：一般建议50~400 μl［ 18 ］；（3）活细胞染料：常规新鲜外周血可以不使用活细胞染料，但造血干细胞计数、白血病微小残留病（minimal residual disease，MRD）筛选与监测等，建议添加活细胞染料如7-AAD等，以去除死细胞的干扰；（4）细胞染色、固定与破膜：需考虑细胞膜染色、细胞浆染色和细胞核染色的区别，选择相应适宜的固定破膜剂；（5）染色温度：一般室温染色即可［ 18 ］，但造血干细胞染色、使用某些固定破膜剂时，要求在融冰或4 ℃完成；一些特殊项目（如中性粒细胞吞噬二氢罗丹明辅助诊断慢性肉芽肿）需经过37 ℃孵育；（6）染色时间：受荧光抗体和染色体积影响，一般建议10~30 min［ 18 ］。根据目的抗原的位置分布不同（细胞膜、细胞浆和细胞核），染色时间不同，可依据说明书及检测需求，探索最优染色时间。另外，如染色体积在200 μl以上，可适当延长抗体孵育时间［ 18 ］。共识3 建议根据检测标本的种类及实验需求的差异，选择适宜的抗凝剂，采样后应尽快送检；样品制备时确保细胞浓度在合理的范围内，根据检测项目的特性，选择最优的染色方法和染色条件。推荐强度：建议执行。四、流式细胞术的临床应用（一）淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析是目前流式细胞术临床应用范围最广泛的项目，可获得淋巴细胞亚群，包括CD3+总T细胞、CD3+CD4+辅助T细胞（Th）、CD3+CD8+细胞毒性T细胞（Tc）、CD3-CD19+B淋巴细胞和CD3-（CD16+CD56）+NK细胞的相对百分比（%）和细胞绝对值（cells/μl），在临床诊治中发挥了重要作用。国家卫生健康委员会发布的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》［ 19 ］（该行标处于修订过程中），以及《流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识（2019版）》［ 20 ］和《TBNK淋巴细胞检测在健康管理中的应用专家共识》［ 21 ］等，对此项目的开展及应用具有重要的指导意义。（二）免疫细胞精细分型1.淋巴细胞：（1）T细胞：对T细胞的精细分型，根据细胞表面标记区分T细胞，如调节性T细胞（Treg）、滤泡辅助性T细胞（Tfh）、Th1、Th2、Th9、Th17和Th22［ 22 ］，初始（naive）、效应（effector）、效应记忆型（effector memory）和中央记忆型（central memory）亚群、活化细胞亚群等［ 22 , 23 , 24 , 25 ］。（2）B细胞：根据CD27、IgD、CD24、CD38、CD5等表达，可以将B细胞分为不同亚群［ 23 ， 26 , 27 , 28 , 29 ］。（3）NK细胞：根据CD16和CD56表达的不同，可以将NK细胞细分为不同亚群 ［ 23 ， 30 , 31 ］。目前精细分型的方案并未统一， 表1 汇总了文献报道的常见淋巴细胞精细分型方案，可供参考。2.髓系细胞：（1）粒细胞：根据CD45和SSC，CD13和CD16以及CD66、CD123、CD203c、HLA-DR等的表达不同，可以将粒细胞分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞［ 23 ， 30 ］。（2）单核细胞：根据CD45和SSC，CD13、CD14和CD16的表达不同，可以将单核细胞分为不同亚群［ 23 ， 30 ］。（3）树突状细胞（dendritic cell，DC）：使用系列抗原（lineage：CD3、CD14、CD16、CD19和CD56）排除T细胞、B细胞、NK细胞、单核、粒细胞等，再根据CD123、HLA-DR、CD11c、CD1c、CD141等的不同表达，可以将DC细胞分为不同亚群 ［ 23 ， 30 ， 32 ］。（4）髓源抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC）：根据CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD33等指标的表达，可以将MDSC分为3个不同亚群 ［ 33 , 34 ］。 表1 汇总了文献报道的常见髓系细胞精细分型方案，可供参考。（三）白血病免疫表型分析及微小残留病监测1.白血病免疫表型分析：（1）急性白血病：对于急性白血病免疫分型，2013版《流式细胞术临床应用的建议》［ 1 ］及《四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（2015年版）》［ 35 ］均有详细介绍。在上述《建议》和《共识》中，对白血病免疫表型分析均主要推荐采取“2步法”，但对于某些跨系别表达的抗原或是混合表型的白血病，可能会因为检测抗原不足导致漏检的现象。国家卫生健康委发布的《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗规范（2018年版）》［ 36 ］和《儿童急性早幼粒细胞白血病诊疗规范（2018年版）》［ 37 ］，对于急性白血病免疫分型，建议使用多色流式细胞仪，至少检测上述《诊疗规范》提及的35个CD分子，视情况增加更多抗原检测，同时检测的CD分子越多，准确性相对越高。（2）慢性淋巴细胞白血病（Chronic lymphocytic leukemia，CLL）/非霍奇金淋巴瘤：流式细胞术检测的抗原可以参考《流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用专家共识（2017版）》［ 38 ］。但是对于B淋巴细胞，由于慢淋/非霍奇金淋巴瘤的细胞可能来源于淋巴结的多个结构部位［如DLBCL分为生发中心型GCB型、非生发中心non-GCB型和活化B细胞样（ABC）型］，需注意其免疫表型的多样性［ 39 ］；对于T细胞，如出现异常免疫表型或TCRVβ的单克隆，需要与病毒感染等鉴别。（3）霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）：对于HL，因背景含有大量表型相对正常的淋巴细胞，寻找低比例的Reed-Sternberg细胞存在一定困难。Reed-Sternberg细胞在免疫表型上可以表现为CD45-CD30+CD15+CD71+CD40+CD95+CD3-CD19-等免疫学特征，需要与其他一些表达CD30+的肿瘤细胞进行鉴别［ 40 ］，多色流式细胞术在HL中具有一定的辅助诊断价值，HL最终诊断需要结合组织病理学。2.白血病微小残留病（MRD）监测：（1）急性白血病MRD监测：基于白血病相关免疫表型（leukemia-associated immunophenotype，LAIP，根据非白血病细胞的表达背景来定义）和/或细胞“异于正常（different from normal，DFN）”的表型，可以鉴定出异常的细胞群，进行MRD细胞监测［ 41 ］。急性白血病MRD监测可以参考已发表的中国专家共识［ 42 , 43 ］。（2）慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤MRD监测：典型的CLL免疫表型为CD19+CD5+CD23+CD22+CD200+CD43+CD79blow/-且CD10-FMC7-CD103-CD20lowsIgMlow［ 44 ］，可用于CLL诊断和MRD监测。上述表型可以通过固定的MRD组合进行监测，推荐方案包括CD5/CD19/CD20/CD38/CD81/CD22/CD79b/CD43等［ 44 , 45 ］，需注意美罗华（Rituximab，利妥昔单抗）治疗会使CD20出现假阴性，鉴于CD200在CLL和其他CD5+淋巴瘤如套细胞淋巴瘤中的作用，也可推荐CD200［ 46 ］和CD160［ 47 ］作为CLL的MRD监测指标。对于免疫表型不典型的淋巴瘤等进行MRD监测，需结合其初发时的免疫表型特征。淋巴瘤的分布具有异质性（如可能涉及外周血、骨髓、淋巴结、肝脏、脾脏等），当采样不同时，MRD监测结果可能也不一致。目前，骨髓是使用最广泛的MRD监测标本，但脾脏、肝脏和淋巴结中的MRD监测亦可在疾病复发中起重要作用［ 45 ］。（3）多发性骨髓瘤MRD监测：可参考已经发表的相关共识进行检测［ 42 ］。MRD监测需要获取足够的细胞数，确定检测的最低检出限（limit of detection，LOD）和最低定量限（lower limit of quantification，LLOQ），推荐固定和规律的取样时间进行MRD监测 ［ 45 ］。（四）细胞因子检测通过流式细胞术检测细胞因子，主要包括2类方法：（1）基于流式微球阵列技术（Cytometric beads array，CBA），可检测血清、血浆或体液等标本中细胞因子水平。其原理为样品中细胞因子与细胞因子抗体预包被的微球及荧光标记检测抗体结合，形成“双抗体夹心”复合物。此方法使用标本量少，2个荧光检测通道可以同时检测多种细胞因子。（2）可检测激活后胞内细胞因子如IFN-γ等表达，用于评估免疫细胞的功能等。此方法需要新鲜肝素抗凝外周血或分离获得的外周血单个核细胞，使用刺激剂激活细胞，并用阻断剂阻断胞内蛋白质转运，使得刺激产生的细胞因子聚集在细胞内。细胞膜抗原染色后，再使用固定破膜剂固定及破膜对胞内细胞因子如IFN-γ等进行染色。（五）其他临床应用项目流式细胞术临床应用的部分项目如红细胞和血小板检测、HLA-B27检测、DNA倍体、凋亡、细胞周期和细胞增殖等已经在2013版［ 1 ］做过详尽介绍，CD34+造血干细胞计数、PNH筛选等临床项目，可以参照已经发布的应用指南或专家共识［ 48 , 49 ］。共识4 对于淋巴细胞亚群检测等项目，建议参照我国已经发布应用指南或专家共识执行；免疫细胞精细分型项目，建议实验室根据自己的仪器配置等，优化方案，依据临床需求有序开展；对于白血病/淋巴瘤免疫表型分析及MRD筛查等项目，建议依据细胞分化谱系、分化阶段的免疫表型特征和白血病相关免疫表型（LAIP）等进行检测和分析。推荐强度：建议执行。五、数据和报告（一）数据获取、分析和存储1.数据获取和分析：流式细胞术获取的文件数据量大，数据获取分析需要足够的软件和硬件支持（建议高于8GB的RAM或更高配置）［ 4 ］。细胞（或颗粒物）获取需设置合理的阈值，去除碎片及粘连等，再通过散射光及荧光信号的结合，识别不同的细胞群，基于合理的对照，并结合各系别细胞不同的特异性CD分子，手动（或自动）设门，展示出细胞的特性［ 4 ， 50 , 51 ］。随着多参数流式细胞仪和新型流式细胞仪等的出现，产生大量和高维空间数据，手工分析费时、具有一定的主观性且容易遗漏一些新的细胞参数，所以需要使用高维数据分析技术，如t分布随机邻位嵌入（t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding，t-SNE）等［ 4 ， 50 ］，以及借助人工智能分析的帮助，补充人工分析的不足。但上述高维分析方法不能取代人工分析，人工检验仍然是一种作为质量控制的良好方法［ 4 ］。2.数据存储：原始数据的保存对数据回顾分析、备查、可溯源再分析以及临床科研等具有重要意义。数据常以包含补偿矩阵（或列表）以及检测通道特征（如荧光标记）的FCS和/或LMD格式存储［ 4 ］，分析后的数据或报告以PDF或word方式存储。数据至少保存2年，或根据相关规定尽可能保存更久［ 18 ］。（二）报告书写及发放报告中应包括实验室名称、患者的姓名和门诊或住院号（唯一识别号）、年龄、性别、标本采集的日期和时间、标本类型、检测项目、参考区间等。报告和结果的发布，应准确无误，包含标本接收时间、发布者（检验者和审核者）信息、报告发布时间及适当的解释说明；标本质量不适于检验或可能影响检验结果时（如凝血、溶血、脂血等）应在报告中说明，应该遵循相应规章制度，联系医生并作相应记录［ 52 , 53 ］。共识5 流式细胞术数据的获取和分析，建议依据获取数据的类型及体量，合理选择人工和/或数字化技术进行分析，做好原始数据的储存；实验室发放的报告应信息完整，建议合理发布审核信息及结果解释说明等。推荐强度：建议执行。六、流式细胞术临床应用的质量控制要点（一）实验室质控实验室须通过内部质量保证（internal quality assurance，IQA）和外部质量保证（external quality assurance，EQA）程序进行认证。标本检测宜由具备质量保证（quality assurance，QA）、验证（verification）、能力测试（proficiency testing）、标准化技术培训以及适当基础设施的实验室来进行［ 45 ］。质量控制（quality control，QC）程序，旨在建立和监测仪器性能、试剂、方法和结果，以确保检测系统在使用当天和一段时间内正常工作。如果质量控制程序结果超出可接受范围，所采取的纠正措施应记录在案。质量保证则是从检测的三个阶段，即遵循检验前、检验中和检验后相应程序，制定相应的质量控制和质量保证程序，保证结果的可靠［ 54 ］。（二）仪器质控流式细胞仪的性能与检测结果准确与否密切相关［ 54 ］。仪器的质量控制，应使用仪器厂商等提供的质控微球，如线性/性能验证微球、补偿微球等按照相应说明完成［ 54 ］。为保证仪器运转正常，每日开机流程后，运行仪器的日常质控。仪器质控项目还包括系统和检测的灵敏度、特异性、基线评估、检测线性、校准和优化等，完成不同仪器比对，并需关注仪器光学配件的性能优化、电压和补偿设置、激光功率和电流等，并做好维护保养记录等［ 54 , 55 ］。仪器质控的运行，可确保仪器处于最佳性能状态，变异系数小于仪器软件中的可接受范围，如超出可接受范围的偏离，应及时进行校准和维修。（三）项目质控1.项目论证：需要完成对检测试剂（抗体）、用量和染色能力（染色指数）的验证；检测平台（单、双平台）的验证；方法或仪器的比对、项目相关的电压和补偿设置；参考区间的设置和验证等［ 54 , 55 ］。2.项目开展：（1）标本：标本的正确采集和及时处理是项目检测质量控制的关键步骤。外周血和骨髓等需要选择合适的抗凝剂，最常使用的有EDTA、肝素、ACD 等［ 54 ］。对于组织（如淋巴结）和穿刺标本，建议加入培养基如RPMI转运，不建议使用PBS（可导致标本细胞的快速退化），不建议使用固定剂（可对组织细胞造成毒性，抑制细胞的活性，影响检测结果）。对于脑脊液等体液标本，采集后尽快转运，也可加入培养基转运。（2）试剂：项目检测过程中涉及到的所有试剂如缓冲液、红细胞裂解液等均应事先进行验证；单克隆抗体相较其他试剂需要更严格的验证，如抗体的特异性、反应性、鉴别阴阳性细胞的能力等，可使用商品化质控品（如室内质控血）、实验室标本（如外周血）和室间质控品等进行染色，评估抗体的浓度及染色指数。为节省时间、减少加样错误、抗体量标准化等使用混合抗体（多个抗体混合在一起）时，抗体的保存时间需要实验室自行探索建立，做好初始质控和使用过程中（每几天或每周）的验证，确保检测结果无误，做好相应记录［ 54 ］。（3）项目质控：有商品化质控品（有阴阳性之分、正常异常之分或有检测值高低之分）的检测项目，应完成质控品可接受范围的测试或验证，以及质控月度回顾；无商品化质控品的项目，宜按照相关要求进行比对［ 52 ， 55 ］，比对分为3个级别：有室间质控品的项目、与其他实验室比对项目、与临床诊断符合性（回顾性的质控）项目［ 55 ］。（4）项目标准化：一些国际协作组推荐部分检测项目的标准化方案，理想情况是检测项目可以实现标准化，质量有保证，实验室间可比，结果具有重复性［ 56 ］，但由于实验室选择的流式细胞仪配置差异大，检测方案不同，且项目越复杂实验室自建比例越高，目前标准化存在一定难度［ 57 ］。（四）人员质控流式细胞术样品的检测过程，目前主要以人员手工操作为主，由检测人员分析数据、出具报告并解释说明相关结果。因此流式细胞术从业人员应进行规范化培训，获得相应的资格证书，在工作中需接受继续教育并不断学习，应至少每年一次进行人员的能力评估和人员间的比对，还需综合考虑人员的工作量，以保证检测分析质量［ 57 ］。检测结果宜由具备丰富的临床经验和知识背景的人员对结果进行解释。由于流式细胞术可受到多种因素的影响，其质量控制也应从以下方面重点考虑和执行：（1）样品和试剂处理：严格遵照SOP进行样品处理、核查试剂完整性、建立QC流程、应用滴度良好的抗体、选择合适的对照作为每一个测试的参考。（2）流式细胞仪：包括仪器维护和日常QC测试、使用相应质控微球进行校准等。（3）数据分析：建议数据分析由合格的人员执行［ 58 ］。共识6 流式细胞术检测的质量控制应贯穿始终，包括检验前的标本、试剂和仪器，检验中的染色、数据获取和数据分析，检验后的报告发放和结果解释，重视人员质控。推荐强度：强烈建议。七、生物安全1.检验前生物安全：用于流式细胞术检测的实验室应达到生物安全二级实验室的标准，配备相应的必需设施，注意实验室生物安全。因采集的标本具有潜在传染性，应将所有样品放入有盖的采样管，放置到安全、密封的容器用于转运［ 18 ］。2.检验中生物安全：流式细胞术操作过程中可能有液滴飞溅和喷洒（涡旋气溶胶、离心等），所有人员应做好生物安全防护，正确佩戴手套、穿着工作服等，离开实验室宜换手套和洗手［ 18 ］。建议所有工作都在生物安全柜（BSC I或Ⅱ级）中完成。如果条件不允许，建议可能产生液滴或气溶胶的程序（如涡旋、打开真空管等）应在生物安全柜中执行。标本离心时宜将标本置于密闭容器内，避免产生气溶胶，如出现离心意外，应遵循生物安全管理规定处理［ 18 ］。建议尽量使用仪器配置的转盘上样，使用密封罩隔绝标本和人员，如使用手动上样，应做好人员的安全防护。3.检验后生物安全：检测后标本应依据相关规定或是标本稳定性确定保存时间［ 52 ］，之后按照当地规定进行高压灭菌或焚化［ 18 ］。按照仪器维护要求，执行清洁程序，关机后废液及其他耗材按当地要求和实验室规定规范处理。共识7 流式细胞术检测的生物安全应从检验前的环境和标本运输，检验中的人员、标本染色处理、上机检测和检验后的标本保存、医疗耗材的处理等全过程考虑。推荐强度：建议执行。流式细胞术的临床应用越来越广泛，除经典的免疫功能及白血病免疫表型等相关检测外，其在生殖、移植配型、微生物等领域亦有广泛应用，限于篇幅不展开介绍。流式细胞技术的飞速发展，高端流式细胞仪的普及应用及流式细胞仪自动化程度的不断提升，使得我们能够基于流式细胞术获得多参数、多维度的数据，为临床疾病的诊治提供更多的信息和支撑。最后，专家组讨论起草的本共识，侧重于流式细胞术在临床的应用，从仪器和试剂选择、标本采集、主要项目的临床应用、数据和报告、质量控制和生物安全等7方面阐述，虽已经尽可能涵盖检测的全流程，但由于流式细胞术的应用广泛，仍不可避免存在一些疏漏和不足，请同行专家提出宝贵意见，本共识也会适时增补修订。执笔人：王维维（上海交通大学医学院附属新华医院），沈立松（上海交通大学医学院附属新华医院）专家组成员（按姓氏汉语拼音排序）：崔巍（中国医学科学院肿瘤医院），潘柏申（复旦大学附属中山医院），彭明婷（国家卫生健康委临床检验中心），尚红（国家医学检验临床医学研究中心，中国医科大学附属第一医院），沈立松（上海交通大学医学院附属新华医院），王蓓丽（复旦大学附属中山医院），王建中（北京大学第一医院），王维维（上海交通大学医学院附属新华医院），张子宁（国家医学检验临床医学研究中心，中国医科大学附属第一医院）参考文献（略）

近日，在国家自然科学基金、中国科学院和机器人学国家重点实验室的支持下，中科院沈阳自动化研究所微纳米课题组成功利用微电子机械系统(MEMS)工艺加工的微柱阵列对单个细胞进行夹持固定，并进行机器人化探测，这标志着我国纳米操作机器人在淋巴瘤分子靶向治疗方面取得了新进展。该成果发表在《物理化学学报》上。　　据介绍，该课题的研究背景来源于医院的现实需求，即在淋巴癌的靶向治疗中存在同一种药对某些患者有效，而对另一些患者无效的现象。这种情况使临床治疗中对症下“对”药变成一件极其困难的事。为此，亟须研究产生耐药性差异的分子机理，进而指导实现临床的个性化用药。　　沈阳自动化所联合北京307医院淋巴瘤科开展了此方面的探索研究，其基本出发点是利用纳米操作机器人以单细胞为对象开展研究，并获得了上述进展。　　业内专家认为，该思路相比于传统方法具有一定优势。传统的生化实验多在试管中进行，其实验结果反映的是来自许多细胞大量分子的平均活动行为，即集群平均效应。生物体自身之间的差异也由于该效应而被淹没于整体之中，这正是导致药物疗效差异的根本原因。纳米操作机器人则是对单个细胞开展探测，这对传统的集群平均是一种有益补充，更容易发现不同生物体之间的分子个性和细胞个性。　　据了解，纳米操作机器人是机器人领域的新分支。传统机器人技术以提高效率、减轻人的工作量为目的，多用来完成人有能力但不愿意干的工作，比如焊接、搬运等枯燥、高重复性劳动 而纳米操作机器人技术则以扩展和提升人的能力为目的，主要去执行极端尺度下人们无法完成的工作，如原子精度定位、分子力测量等任务。利用纳米操作机器人开展淋巴癌靶向治疗差异机理研究正是用机器人技术提升人的能力、在细胞表面进行原位探测和操作的具体表现。

2022年10月，南方医科大学南方医院郑磊教授牵头申报的“流式细胞技术应用推广”项目入选“国家卫生健康技术推广项目”，同时入选“国家卫生健康技术推广应用信息服务平台技术备选库”。为做好流式细胞技术的推广工作，中国民族卫生协会于2022年12月30日成立流式细胞临床应用推广组（简称：流式推广组）并举办流式细胞技术推广论坛。本次大会由中国民族卫生协会和广东省医学会联合举办，郑磊教授、王前教授担任大会主席，欧阳涓教授担任大会主持，著名检验专家崔巍教授、关明教授，中国民族卫生协会钱阳明副会长兼秘书长莅临大会并致辞，多位国内血液、检验等领域专家分享了流式细胞技术的发展趋势、行业标准、研究进展和临床应用。线上2500余人次点击观看。开幕式会议伊始，大会主席南方医科大学南方医院郑磊教授就流式推广组的成立背景、宗旨、组织架构、推广内容以及工作计划进行了详细地介绍。中国流式细胞技术的临床应用主要面临两大发展问题：专业技术人才紧缺、临床医生认知不足。流式推广组的宗旨是致力于流式细胞技术的人才培养、技术规范化、科研转化和临床应用推广，推动流式行业发展，服务临床诊疗工作。流式推广组的成立将打破限制发展的两大瓶颈问题，为中国流式细胞技术临床推广和应用开创新局面。大会主席南方医科大学珠江医院王前教授在致辞中指出，在国家医疗体制改革和分级诊疗政策推进的大背景下，县级诊疗水平和服务能力的提升是国家迫切需要解决的问题，此时，成立流式推广组，充分发挥协会的力量、专家的力量，将流式细胞技术推广到基层医院，帮助解决实际的问题，是非常有意义的。特邀嘉宾复旦大学附属华山医院关明教授出席会议并进行了致辞。关明教授指出，流式细胞术在临床各学科，尤其是疑难病的诊疗中，发挥重要作用，且应用价值得到不断地拓展，其具有自动化、多参数等优点，能更好地在各级医院中进行推广和应用。他坚信，流式推广组将在全国流式细胞术的发展中发挥引领和支撑的作用。特邀嘉宾中国医学科学院肿瘤医院崔巍教授出席会议并进行了致辞。崔巍教授指出流式细胞术的应用已经不限于血液系统疾病领域，在细胞亚群及功能检测需要更多的推广，所以在检验领域成立流式推广组具有重要的现实意义。流式推广组为全国流式细胞技术的发展搭建了一个很好的平台，这将有利于建立规范化的人才培养体系，推动流式细胞技术的推广和转化。特邀嘉宾中国民族卫生协会副会长兼秘书长钱阳明教授在致辞中指出，由郑磊教授牵头成立流式细胞技术临床应用推广组，聚集全国优秀的流式专家、平台和资源，专门致力于流式专业技术人才的培养、技术规范化、科研转化和临床应用推广，这将有利于促进流式行业的发展和技术下沉基层，切实提高各级医疗机构的诊疗水平，这是一项利国利民的工作。成立仪式中国民族卫生协会副会长兼秘书长钱阳明教授为推广组、推广单位、技术指导单位授牌，为推广组核心成员颁发聘书。中国民族卫生协会流式细胞临床应用推广组组长：郑磊顾问：王前、崔巍、关明副组长：欧阳涓、易斌、岳保红、谢丽、刘灿、桑圣刚、汪峰、李俊明秘书：褚帅首批推广单位南方医科大学南方医院、中山大学附属第一医院、广西医科大学第二附属医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、南昌大学第一附属医院、海南医学院第一附属医院、中南大学湘雅医院、福建医科大学附属第一医院、郑州大学第一附属医院首批技术指导单位南方医科大学南方医院、中山大学附属第一医院、广东省人民医院、中山大学肿瘤防治中心、广东省中医院、佛山市第一人民医院、广州市妇女儿童医疗中心大会报告报告题目：规范流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群报告专家：崔巍 中国医学科学院肿瘤医院 崔巍教授为我们讲授了外周血淋巴细胞亚群的流式细胞技术规范化检测。崔巍教授为我们介绍了外周血淋巴细胞亚群检测的临床意义，并分析了外周血淋巴细胞亚群检测流程中的影响因素，强调了外周血淋巴细胞亚群检测质量控制的重要性。随后崔巍教授为我们解读了2021新版《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》，与2011版相比，新版指南完善了仪器质量控制和项目性能评估的内容，增加了流式细胞仪性能评估内容，梳理了分析前、分析中、分析后的内容及要求，增加了流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的6色分析方案。报告题目：新版WHO分类浆细胞肿瘤的归属及流式克隆性分析应用报告专家：欧阳涓 中山大学附属第一医院 欧阳涓教授首先为我们讲解了第五版的淋巴浆细胞和浆细胞肿瘤的WHO分类，指出在第五版指南中浆细胞肿瘤将属于新设立的浆细胞肿瘤和其他伴副蛋白疾病这一独立类别，并且单克隆丙种球蛋白病被重新作为意义未明IgM单克隆丙种球蛋白病、意义未明非IgM单克隆丙种球蛋白病这2种疾病的上一级病名，并加入冷凝集素病CAD和有肾脏意义的单克隆丙种球蛋白病MGRS。欧阳教授还讲述了这些疾病的临床表现和实验室诊断，重点介绍了流式细胞方面的相关指标。随后，欧阳教授重点为我们介绍了浆细胞克隆性疾病的流式评估方法，分析了流式细胞术检测异常浆细胞的注意事项，综合分析前、分析中和分析后的要素为我们提出了了流式细胞术检测异常浆细胞的难点和一些可能存在的陷阱。最后，欧阳教授提出了浆细胞流式检测面临的挑战和实现检测的规范化、标准化的展望。报告题目：流式细胞术的临床应用和发展报告专家：郑磊 南方医科大学南方医院 郑磊教授为我们讲述了流式细胞术的临床应用和发展。郑磊教授首先介绍了流式细胞术临床应用发展的现状，存在基层医院开展不足、普及率低等问题，总结了流式细胞术临床应用发展两大瓶颈问题：临床医生认知落后以及专业技术人才匮乏。接着，郑磊教授指出疫情后大众对流式细胞术的认知提高，需求增大，并为我们讲解了近年来的国家对流式细胞术的扶持政策。随后，郑磊教授讲述了流式细胞术在传统领域（血液恶性肿瘤）、热门领域（细胞免疫检查）疾病的全程管理以及健康管理中的应用，并指出了技术革新、质量管理优化、临床服务创新、专业人才培养、平台支撑、产业发展等多个发展驱动要素。最后，郑磊教授提出了对流式细胞术的展望，认为流式细胞技术临床应用非常广阔，是提升临床诊疗水平的重要着力点，并且流式细胞技术发展前景良好，技术推广势在必行。报告题目：流式细胞术细胞因子测定在血液病诊疗中的应用报告专家：岳保红 郑州大学第一附属医院 岳保红教授对细胞因子的概述、历史、分类、检测方法及热点进行了讲解，重点给我们讲述了细胞因子在噬血细胞综合征的诊断与监控、细胞因子风暴的监控、PD-1治疗疗效的评估、移植物抗宿主病以及病毒感染性疾病中的应用。随后，岳教授通过案例分析为我们讲解了脓毒血症中相关细胞因子联合检测的重要性以及细胞因子检测对病毒感染转归的提示作用，并提出了对细胞因子检测在临床应用中的展望。报告题目：宿主免疫功能评估项目介绍和临床应用报告专家：汪峰 华中科技大学同济医学院附属同济医院汪峰教授首先对免疫功能评估项目进行了介绍并讲解了项目质量控制的要点，包括室内质控和室间质评等。汪峰教授指出除了细胞数量和功能检测（包括淋巴细胞绝对计数，中性粒细胞呼吸爆发试验以及CD34干细胞计数等）之外，还可以进行细胞表型的检测（如T、B细胞细分类检测，Treg细胞检测，单核细胞细分类等）。此外，汪峰教授还提出了评估方案“三位一体”和免疫状态“三位一体”两个概念。接着，汪峰教授通过临床案例为我们讲述了淋巴细胞功能检测的重要性以及免疫功能评估项目在疾病鉴别诊断与预后判断应用。最后，汪峰教授提出了对免疫功能评估的展望，除了在临床上的应用之外，还希望能在临床研究上有更好的发挥。大会总结最后，欧阳涓教授对大会进行总结：“流式细胞术在血液病、感染、肿瘤等领域有着广泛的应用价值，也是检验医学发展的热点之一。但是在发展的过程中，人才培养、技术标准化、科研转化和临床应用推广等方面还有待加强。郑磊教授牵头成立的这个中国民族卫生协会流式细胞技术临床应用推广组，召集了全国相关领域的专家，本次大会的学术环节也邀请了像崔巍教授、岳保红教授、汪峰教授这样的资深专家授课。大会会将这些专家的经验带到全国，并进一步深入基层医院进行推广。在此，我谨代表郑磊教授和流式推广组，欢迎全国各地的流式专家加入我们的推广组，也欢迎需要交流的单位积极联系我们”。回顾本次会议，多名国内相关专业的顶级专家针对流式细胞行业备受关注的热点问题献上了一场丰富的学术盛宴，剖析了流式细胞技术的发展现状、发展趋势、发展策略，解读了最新行业标准和共识，详细介绍了热点项目细胞因子检测和宿主免疫功能评估的临床应用，充分展现了推广组专家团队的临床和科研水平，让各位参会人员收获满满。流式推广组的成立，致力于推动流式细胞技术在各级医院的应用，服务于临床诊疗工作，欢迎全国范围内的流式从业人员积极与推广组联系，加入推广组，推动流式细胞技术临床应用。最后，感谢会务组辛勤的付出、感谢赞助公司的大力支持、感谢所有参会代表的积极参与！

错过了快速筛选哺乳动物细胞株的网络研讨会？下载研讨会录音和课件！ 网络研讨会: 我们很荣幸的宣布，您已经可以下载&ldquo 快速筛选哺乳动物细胞株的最新技术&rdquo 网络研讨会的录音和课件了！ 录音 课件 录音播放器主讲人: Chris Zhang, Ph.D., Research Scientist, Genetix, Molecular Devices. 张骁博士是分子仪器公司R&D部门的研发科学家；张博士在英国谢菲尔德大学攻读的生物化学；并在医学院获得了研究免疫，感染和炎症方面的博士学位。同年在皇家哈勒内姆医院的心血管部门从事研究工作。张博士于2009年加入分子仪器公司。至今，他成功的推动了很多跨平台应用的研发，热衷致力于细胞信号通路的分析和干细胞筛选技术应用的研发。摘要:随着药物供给需求的快速增长，和生物制药企业的快速发展，对快速开发出高效稳定的生产系统的需求已经越来越高。依靠试验员手工操作，在传统细胞株的生产制作工艺上占据了极大的比例。这部分传统工艺需要大量人力做重负冗繁的工作，致使产量低而且很容易受到人为错误的影响。我将在这里为您介绍新的ClonePix系统会充分填补传统工艺上的不足。ClonePix系统是一个将高通量筛选和自动化系统整合为一体，专为生物制药企业设计的，适用于快速开发，筛选，生产大分子细胞株的平台。如果您有任何问题，请联系MD中国：info.china@moldev.com获得更多Molecular Devices的活动和新闻信息，请访问我们的网站：moleculardevices.com

网络研讨会:快速筛选哺乳动物细胞株的最新技术Tuesday, June 26, 20124:00 PM Beijing TimeTuesday, June 26, 2012 | 4 pm Beijing Time主讲人:Chris Zhang, Ph.D., Research Scientist, Genetix, Molecular Devices. 张骁博士是分子仪器公司R&D部门的研发科学家；张博士在英国谢菲尔德大学攻读的生物化学；并在医学院获得了研究免疫，感染和炎症方面的博士学位。同年在皇家哈勒内姆医院的心血管部门从事研究工作。张博士于2009年加入分子仪器公司。至今，他成功的推动了很多跨平台应用的研发，热衷致力于细胞信号通路的分析和干细胞筛选技术应用的研发。 摘要: 随着药物供给需求的快速增长，和生物制药企业的快速发展，对快速开发出高效稳定的生产系统的需求已经越来越高。依靠试验员手工操作，在传统细胞株的生产制作工艺上占据了极大的比例。这部分传统工艺需要大量人力做重负冗繁的工作，致使产量低而且很容易受到人为错误的影响。我将在这里为您介绍新的ClonePix系统会充分填补传统工艺上的不足。ClonePix系统是一个将高通量筛选和自动化系统整合为一体，专为生物制药企业设计的，适用于快速开发，筛选，生产大分子细胞株的平台。如果您有任何问题，请联系MD中国：info.china@moldev.com详情请联系：美谷分子仪器（上海）有限公司E-mail: Info.china@moldev.com上海：86-21-33721088 北京：86-10-64108669台北：886-2-26567581 香港：852-81252509www.moleculardevices.com.cn | www.moleculardevices.com

时间：2017年9月14日 19:30 - 20:30内容简介：淋巴瘤是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤。根据形态特征、免疫表型、遗传学突变等特点，淋巴瘤可分为多种复杂类型。部分周围型淋巴瘤细胞易侵犯到骨髓和外周血，可通过对体液分析将这些异常细胞进行鉴别，流式细胞术是淋巴瘤诊断的重要工具，特别是在疑难亚型的淋巴瘤诊断中，具有非常重要的意义。此次讲座，我们有幸邀请了解放军总医院的王莉莉教授，为我们介绍流式细胞术在淋巴瘤诊断中的应用。主讲人简介：王莉莉 副研究员 硕士生导师解放军总医院血液科实验室负责人》中华医学会第八届血液学分会 青年委员》中国免疫学会血液免疫分会流式细胞学组 常务委员》中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会血液病理工作组 委员》中国研究型医院学会血液病精准诊疗专业委员会 委员》中国中西医结合学会血液病专业委员会 委员》北京中西医结合学会第一届血液学分会 常务委员2004年获得日本东京大学医学博士学位。一直从事血液病的实验诊断及相关基础研究，擅长免疫分型诊断、基因诊断及细胞遗传学诊断。作为第一负责人承担国家自然科学基金3项、北京市自然科学基金1项。发表SCI论文10余篇，其中第一作者单篇最高影响因子为10.89分。如需报名或索取相关资料，请在线留言，告知需要参加的讲座名称。

细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，为促进细胞生长增殖提供物质基础，是培养细胞生长和繁殖的生存环境。合成细胞培养基是用化学成分明确的试剂配制的培养基，是目前常用的一类培养基，其组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维生素、无机盐类等。培养基组分的变化，对细胞生长会产生一定影响，如细胞生长形态、分裂速度等。同时，适宜的培养基组成与优选的细胞培养工艺对于提高蛋白类药物的产率，保证细胞培养批次之间的一致性、稳定关键质量属性等因素至关重要。因此，寻求一类合适的培养基组成，对细胞培养具有重大意义。细胞生长状态的分析，除形态学观察外，还可对细胞培养上清液中细胞代谢物进行分析，通过考察细胞上清液中营养物和代谢物的变化，判断细胞在生长增殖过程中状态的优劣。鉴于此，我们开发了“细胞培养上清液方法包”，该技术可在 17 分钟内同时分析 95 种细胞培养上清液营养成份和代谢物的相对丰度变化。本文使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱 LCMS-8060 联用，结合“细胞培养上清液方法包”建立了细胞培养上清液中营养物质和细胞代谢物的液相色谱-串联质谱的同时分析方法，为相关研究人员评估细胞生长状态、改进培养基组分提供参考。岛津三重四极杆质谱 LCMS-8060 了解详情，敬请点击《利用LC-MS/MS 考察不同培养基对 CHO 细胞株培养的影响》关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。

聚光科技生命科学板块旗下杭州谱康医学科技有限公司自主研发、自主生产的SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪正式获批浙江省药品监督管理局颁发的《医疗器械注册证》（浙械注准20232222037），获准上市。谱康医学，赞16谱康医学SFLO CL系列是拥有自主知识产权、为临床用户量身定制的临床全光谱流式细胞仪。基于全光谱技术，突破传统滤光片的限制，实现在同样的激光器配置下，检测更多标志物。全光谱采集系统配合流式分析工作站，辅以高效的软件算法，减少荧光光谱重叠所导致的补偿问题，合并高精度注射泵进样和无脉动鞘流系统设计带来的高稳定样品聚焦能力，保证了临床使用的灵敏度和稳定性。SFLO CL系列临床全光谱流式仪包含SFLO CL-1、SFLO CL-2、SFLO CL-3共三个型号，支持最高3激光39荧光通道，实现分管检测向一管检测转化，提高临床检测标准化，更好地为临床服务。 丰富的临床应用SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪广泛应用于免疫学、癌症诊断和治疗、微生物学、血液学及遗传学等领域，覆盖临床常规开展的淋巴细胞亚群分析（TBNK及TBNK plus）及CD4细胞绝对计数、细胞因子检测、HLA-B27检测、白血病/淋巴瘤免疫分型、造血干细胞计数、精子检测和DNA倍体分析等检测项目，为临床检测提供更多选择。 全中文操作软件SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪采用Windows系统的全中文全光谱采集分析软件，界面设置简洁，操作简单方便，更符合中国临床医师日常操作习惯。操作软件具备高度智能化，可实现数据自动化分析，校准和参数调节简单方便，灵活性强，实验模板功能实现一键开始新一轮检测，使临床应用更加简便快捷、游刃有余，显著提升检测效率和智能化水平。依托此次SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪获批上市，谱康医学将为临床检测打造更加完善的标准化检测方案，助力临床检测实现更简便的操作、更高效的分析、更可靠的结果，为国人精准诊断提供坚实依据。聚光科技生命科学板块旗下杭州谱康医学科技有限公司成立于2020年，在原有雄厚的分析设备研发能力基础上，全面开拓生命科学领域市场。谱康医学以流式细胞检测技术为核心，提供专业化的硬件及配套试剂，同时为客户开发开展定制化服务。公司坚持流式细胞仪产业化协同发展战略，拥有高学历流式设备专业研发团队，标准化的GMP生产车间，丰富的实验室建设经验，成熟的实验室管理体系，已经全面掌握流式核心的设备制造技术及设备集成的开发能力，旨在为客户提供整套细胞解决方案。

聚光科技（300203）生命科学板块旗下杭州谱康医学科技有限公司自主研发、自主生产的SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪正式获批浙江省药品监督管理局颁发的《医疗器械注册证》（浙械注准20232222037），获准上市。　　谱康医学SFLO CL系列是拥有自主知识产权、为临床用户量身定制的临床全光谱流式细胞仪。基于全光谱技术，突破传统滤光片的限制，实现在同样的激光器配置下，检测更多标志物。　　全光谱采集系统配合流式分析工作站，辅以高效的软件算法，减少荧光光谱重叠所导致的补偿问题，合并高精度注射泵进样和无脉动鞘流系统设计带来的高稳定样品聚焦能力，保证了临床使用的灵敏度和稳定性。　　SFLO CL系列临床全光谱流式仪包含SFLO CL-1、SFLO CL-2、SFLO CL-3共三个型号，支持最高3激光39荧光通道，实现分管检测向一管检测转化，提高临床检测标准化，更好地为临床服务。　　丰富的临床应用　　SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪广泛应用于免疫学、癌症诊断和治疗、微生物学、血液学及遗传学等领域，覆盖临床常规开展的淋巴细胞亚群分析（TBNK及TBNK plus）及CD4细胞绝对计数、细胞因子检测、HLA-B27检测、白血病/淋巴瘤免疫分型、造血干细胞计数、精子检测和DNA倍体分析等检测项目，为临床检测提供更多选择。　　全中文操作软件　　SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪采用Windows系统的全中文全光谱采集分析软件，界面设置简洁，操作简单方便，更符合中国临床医师日常操作习惯。操作软件具备高度智能化，可实现数据自动化分析，校准和参数调节简单方便，灵活性强，实验模板功能实现一键开始新一轮检测，使临床应用更加简便快捷、游刃有余，显著提升检测效率和智能化水平。　　依托此次SFLO CL系列临床全光谱流式细胞仪获批上市，谱康医学将为临床检测打造更加完善的标准化检测方案，助力临床检测实现更简便的操作、更高效的分析、更可靠的结果，为国人精准诊断提供坚实依据。　　聚光科技生命科学板块旗下杭州谱康医学科技有限公司成立于2020年，在原有雄厚的分析设备研发能力基础上，全面开拓生命科学领域市场。谱康医学以流式细胞检测技术为核心，提供专业化的硬件及配套试剂，同时为客户开发开展定制化服务。公司坚持流式细胞仪产业化协同发展战略，拥有高学历流式设备专业研发团队，标准化的GMP生产车间，丰富的实验室建设经验，成熟的实验室管理体系，已经全面掌握流式核心的设备制造技术及设备集成的开发能力，旨在为客户提供整套细胞解决方案。

一年一度的临床流式盛会——泛太湖白血病/淋巴瘤流式及遗传学进展与标准化协作组研讨会（以下简称“泛太湖流式研讨会”）将于6月在苏州拉开序幕啦。 风雨兼程十数载，继往开来一脉承，在不知不觉泛太湖流式研讨会已经开到第十四届了！但无论岁月如何改变，也无论环境如何改变，泛太湖流式研讨会的宗旨依然是为了进一步交流国内白血病/淋巴瘤发病的新趋势和诊断与分型经验，完善适合国内常见病/多发病的诊断和治疗方案，促进白血病/淋巴瘤诊断和治疗水平的进一步提高。 本次泛太湖流式研讨会的内容包括流式继续教育项目、血液病新方案分享及讨论等环节，内容丰富、干货满满，参与此次研讨会还将授予继续教育I类学分。现诚邀全国医疗系统的血液科医生及从事血液病诊断工作的血液科实验室、检验科和中心实验室专业技术人员报名与会，共享学术盛宴！ 会议信息如下 丨报到时间丨 2022年6月9日-10日 丨会议时间丨 2022年6月10日-12日 丨会议地点丨 苏州石湖金陵花园酒店 （苏州市吴中区越溪街道南溪江路88 号，电话400-8888-934） 丨主办方丨 苏州大学附属第一医院 江苏省血液研究所 国家卫健委血栓与止血重点实验室 日程安排如下 本次会议注册免费，食宿交通自理。边学习流式的进展，边享受学术盛宴的同时，还能边获得继续教育学分，心动不如心动，赶快扫描下方二维码或关注“贝克曼库尔特生命科学”微信公众号查看本篇文章并点击阅读原文报名吧！报名成功后请保留相关信息，在会议期间可以凭报名成功的信息到贝克曼库尔特的展台领取DxFLEX临床流式分析仪或CytoFLEX SRT流式细胞分选的限定款冰箱贴哦！

近日，中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心发文，建议将肺外结核纳入结核病防治规划管理。肺外结核常累及多系统和多器官，病变部位分布广，临床表现复杂多样，隐蔽性强，无特异性；且样本获取困难或获取的样本含菌量少，相关实验室诊断技术较落后，不能为其快速诊断提供有效方法。这使得其早期诊断较为困难，误诊率和漏诊率较高。而淋巴结结核在肺外结核中占比最大，如何进行早期精准诊断已成为临床亟需解决的问题。一、我国淋巴结结核的流行现状淋巴结结核是结核分支杆菌侵入淋巴系统导致的淋巴结增大或坏死性炎症，好发于儿童和青壮年，女性患者明显多于男性。在肺外结核中，淋巴结结核是最常见的类型，占所有结核病的4.0％－5.1％，占肺外结核的20.3％－50.0％［1］。肺结核可与肺外结核并发，据我国的一项多中心研究显示，肺结核并发肺外结核的患者中，颈部淋巴结核并发率为1.93%，仅次于结核性脑膜炎的2.72%［2］。男性肺结核患者并发颈部淋巴结核的并发率为1.44%，低于女性［3］。儿童最常见的肺外结核依次为淋巴结核、结核性脑膜炎、支气管结核［4］。二、淋巴结结核的临床表现及危害淋巴结核一般既往有结核病史或者结核接触史，早期典型的临床表现极少，影像学缺乏特异性，多由于淋巴结肿大形成无痛包块而被发现，包块可自行消散，可继续肿大发展为干酪样病变甚至形成脓肿、破溃或窦道，严重者会出现全身中毒症状。不仅造成患者形象上的改变，还会引起疼痛、活动受限、感染灶迁延等并发症，给患者的生理和心理都带来严重不良影响。三、淋巴结结核常用的实验室诊断方法目前，淋巴结结核实验室诊断方法主要有抗酸杆菌涂片镜检、分离培养、免疫学检测、分子生物学检测和质谱检测[包括微生物质谱、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)和核酸质谱(MALDI-TOF)]等。细菌学检查是结核病诊断的“金标准”。通常情况下，淋巴结结核取其分泌物进行检测，涂片染色受分泌物质量的影响较大，而且难以取得，其灵敏度低，特异性差；细菌培养周期长，阳性率低，漏诊概率大，导致淋巴结结核的细菌学确诊异常困难［5］。随着分子生物学技术的发展，分枝杆菌的病原学诊断得到长足的发展。PCR作为一种简便、高效的基因扩增技术，已成为结核病分子生物学诊断最有力的工具，被广泛使用。但经大量临床验证，PCR的检测结果有很多不确定因素，存在一定程度的假阳性和假阴性，故目前仍不能取代现有的其他实验室检查手段。近年来，免疫学检测技术的研发也成为热点之一，γ-干扰素释放试验（IGRAs）已得到广泛应用。该方法通过采集患者外周静脉血进行检测，对刺激后产生分泌γ-干扰素的外周血单个核细胞进行定量检测，通过数量来判断患者是否感染了结核分枝杆菌，采样第二天出结果。有研究［6］显示IGRAs方法学的灵敏度在80%左右，特异性在75%-80%之间，在临床中会造成一定程度的漏诊和误诊，而且无法区分机体是新近感染还是潜伏感染或是活动性结核病，主要用于筛查结核分枝杆菌感染。因此，临床急需新的检测手段和方案帮助临床医生对淋巴结核进行精确的诊断。四、淋巴结结核的治疗及效果评估目前国内外对淋巴结核的治疗以内科保守抗痨治疗为主, 对久治不愈的进行外科手术治疗及术后抗痨，且抗痨联合手术治疗效果优于单纯抗痨治疗［7］。中药内服［8-9］、外敷［10］、局部用药［11］通过观察肿块大小、症状和副作用来判断治疗效果，高频超声［12］会监测包括结核结节大小、形态、内部回声、周边组织关系、血流分布情况、弹性成像分级等因素的变化。这些方法对患者的疗效评估具有重要指导作用，但均未涉及患者在治疗过程中体内结核菌的变化情况。五、迪澳双因子（IFN-γ和IL-2）联合检测 淋巴结结核诊断更优解决方案结核分枝杆菌特异性细胞因子检测试剂是“十三五”国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品，是目前国内首个获批的“双因子”联合检测试剂。该产品通过采集人外周血单个核细胞，与特异性抗原刺激共培养之后，检测结核特异性T细胞分泌的γ-干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）的浓度，来判断机体是否受到结核杆菌的感染。通过双因子检测，能够及时发现活动性淋巴结结核患者，同时对于非淋巴结结核患者能够进行及时、准确的排筛。其主要特点有： ○双阳结果高度警示活动性结核病通过双因子筛查，及时发现活动性结核患者，提高活动性淋巴结结核检出率，从而更好辅助临床医生制定治疗方案及防控措施。 ○菌阴结核病检出率高对于病原学检测结果为阴性，而临床又高度怀疑为结核的患者，使用双因子检测可以提高检出率的同时还可以提示活动性结核。 ○鉴别诊断特异性强淋巴结结核的临床症状通常不典型，且与其他炎症性疾病存在相同的病理细胞学特征和临床症状，“双因子”联合检测特异性更高，能够极大地提高筛查的准确性，减少漏诊误诊情况的发生。 ○能够为患者用药治疗的疗效评估提供更多的参考依据通过治疗过程中定期监测双因子，观察IFN-γ和IL-2的数值变化，为患者用药治疗效果的评价提供更多参考。【参考文献】[1] 王黎霞，成诗明，陈明亭，等. 2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J]. 中国防痨杂志, 2012(08):485-508．[2] 杨松, 王乐乐, 李同心, 严晓峰, 唐神结. 肺外结核流行病学研究进展[J]. 中华流行病学杂志, 2021, 42(1): 171-176.[3] 李敬新, 庞学文, 张丹, 等. 2015-2017年天津市肺外结核流行病学分析[J]. 预防医学情报杂志, 2019, 35(4): 407-411.[4] 唐神结, 李亮, 高文, 等. 中国结核病年鉴(2019)[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2020: 07.[5] 黄少君. 分子生物学诊断新方法在淋巴结结核诊断中的应用研究[D].北京, 北京市结核病胸部肿瘤研究所, 2016.[6] Wang L, Tian XD, et al. Evaluation of the performance of two tuberculosis interferon gamma release assays (IGRA-ELISA and T-SPOT.TB) for diagnosing Mycobacterium tuberculosis infection[J]. Data Brief. 2018，21: 2492–2495[7] 李玥莹, 李群宝. 抗痨联合手术治疗淋巴结核的疗效分析[N]. 新疆医科大学学报, 2009(6).[8] 梅英, 黄金鹏. 小柴胡汤加减方治疗颈淋巴结结核的疗效观察[J]. 中国现代医生, 2019, 57( 27 ):128-130.[9] 张亮, 梅月志, 李坤, 戴宇彪. 结核灵联合西医常规治疗颈部淋巴结结核的疗效观察[J]. 罕少疾病杂志, 2019, 26(3 ):40-42.[10] 何益平,钟骏慧. 肿意膏外敷治疗颈淋巴结核400例临床观察[J]. 中国药业, 2017,26(22).[11] 万荣, 李明武 朱惠琼, 刘永莉. 抗结核药物超声导入治疗淋巴结结核的临床观察[J]. 云南医药, 2016,37(06).[12] 戴宇彪, 李坤, 梅月志. 高频超声在颈部淋巴结核疗效评估中的价值探讨[J]. 临床医学工程，2018,25 (5): 545-546.

仪器信息网讯 罗氏制药近期宣布，旗下佳罗华（英文名：Gazyva，通用名：奥妥珠单抗）已获得中国国家药品监督管理局（NMPA）正式批准，1类创新药利司扑兰口服溶液用散获批上市。据悉这两款药物分别用于淋巴瘤、脊髓性肌萎缩症治疗！罗氏新一代单抗新药获批，助力淋巴瘤一线治疗罗氏制药中国6月3日宣布，旗下佳罗华（英文名：Gazyva，通用名：奥妥珠单抗）已获得中国国家药品监督管理局（NMPA）正式批准，与化疗联合，用于初治的II期伴有巨大肿块、III期或IV期滤泡性淋巴瘤成人患者，达到至少部分缓解的患者随后的单药维持治疗。据悉，佳罗华一线治疗方案的获批为我国滤泡性淋巴瘤（FL）患者带来了治疗新选择，作为全球首个经糖基化改造的Ⅱ型人源化抗CD20 单克隆抗体，奥妥珠单抗的创新结构和机制可加强肿瘤细胞杀伤力，以实现患者无进展生存率的提升。该项研究结果表明，经过34.5个月中位随访观察，与对照组标准治疗方案相比，奥妥珠单抗联合化疗方案可使进展/复发或死亡风险显著降低34%。近年来滤泡性淋巴瘤在中国的发病率不断升高，而这类肿瘤通常很难被治愈。大多数患者会经历反复复发，且每经复发，治疗难度即升级，越发加重身心压力影响治疗。2020年《中国滤泡性淋巴瘤患者生存状况白皮书》调查所显示，滤泡性淋巴瘤患者深受反复治疗的困扰，怀有对复发的恐惧，较难回归正常社会生活。北京大学肿瘤医院党委书记、淋巴瘤科主任朱军教授表示，“近年来，滤泡性淋巴瘤一线治疗的探索虽然在一路推进，成果却始终不如人意。基于此，奥妥珠单抗的到来不仅有望实现患者对于降低复发和死亡风险、获得更好生活的心愿；其更能为后续治疗带来积极的影响。因而对于该疾病治疗领域而言，这次批准具有里程碑式意义。”罗氏新药利司扑兰在华获批 用于治疗脊髓性肌萎缩症6月17日，国家药监局官网显示，罗氏旗下神经创新药物艾满欣（通用名：利司扑兰）口服溶液用散获批，用于治疗2月龄及以上患者的脊髓性肌萎缩症（SMA）。截至目前，利司扑兰已在包括中国在内的超过40个国家及地区获批，且在全球范围内，已有超过3000位SMA患者接受利司扑兰治疗。SMA的主要发病原因是患者SMN1基因的缺失或突变，导致全身功能性SMN蛋白表达不足，进而影响患者的运动、呼吸、吞咽以及脾脏、心脏、胰腺等多器官，甚至威胁生命。SMA是导致婴儿死亡的最常见遗传疾病之一，重症SMA患儿如不进行有效治疗，80%患儿会在一岁内死亡，很少能存活超过两岁。2018年5月，SMA被列入第一批纳入目录的121种罕见病之一。中华医学会儿科分会内分泌遗传代谢学组副组长、北京大学第一医院主任医师熊晖教授指出，SMA患者越早诊断，越早开始有效治疗，预后越好，甚至在症状前开始治疗，有希望达到同龄非患病儿童的状态。“利司扑兰的获批，意味着SMA的治疗进入了口服治疗的新阶段。”中华医学会儿科分会罕见病学组组长、复旦大学附属儿科医院主任医师王艺教授表示，通过提高全身功能性SMN蛋白水平，利司扑兰可逆转疾病的自然进程，为患者带来多重获益，包括改善运动功能、无事件生存、呼吸和吞咽等。诊断淋巴瘤的通常方法第一，要有明确的病理诊断，目前为止主要的是靠切除活检，而且尽量切除完整的淋巴结或者淋巴组织，现在的病理检查手段已经不局限于显微镜下看细胞了，还包括了流式以及分子病理等等，病理诊断的手段越来越多。第二，分期的诊断，以影像学的为主，最常用的是CT、增强CT的检查，但是对于某些特殊的类型比如弥漫大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤，它本身是可以治愈的，对PET高度敏感，所以对于这两种类型推荐在主要的治疗节点选用PET-CT的检查。第三，骨髓的检查，包括骨髓细胞学、骨髓活检等等，因为淋巴瘤的诊断还包括预后分型，所以对于乳酸脱氢酶，对于是否有结外部位受侵，需要特别注意，最常见的结外受侵的部位是胃肠道，所以对于有些特殊的病人可能还涉及到胃镜甚至肠镜的检查。脊髓性肌萎缩症检查方法1.对称性进行性近端肢体和躯干肌无力肌萎缩，不累及面肌及眼外肌，无反射，亢进感觉缺失及智力障碍。2.家族史符合常染色体隐性遗传方式。3.血清肌酸激酶（CK）：患者血清CK水平正常或少数轻中度升高。4.肌电图显示广泛神经源性损害。5.肌活检显示神经源性病理改变。6.基因检测：多重连接探针扩增法（MLPA）、实时荧光定量 PCR（qPCR）、PCR限制性酶切分析法（DHPLC）和变性高效液相色谱等检测SMNl基因第7或第7、8外显子纯合缺失突变。MLPA、qPCR和DHPLC可用于SMNl和SMN2基因拷贝数检测，酶切法可以用于sMNl基因外显子7、8的纯合缺失检测；SMNl基因测序用于检测SMNl基因内是否存在微小突变。

p style="text-align: justify text-indent: 2em "近期，仪器信息网对2019年全年流式公开招中标进行了盘点（a href="https://www.instrument.com.cn/news/20200116/520767.shtml" target="_blank"strong点击查看：span style="background-color: rgb(255, 192, 0) "2019年流式细胞仪（FCM）中标盘点/span/strong/aspan style="text-indent: 2em "），同期也对目前流式细胞仪市场中具备医疗器械注册证书的流式细胞仪进行了整理盘点，以飨读者。/span/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong临床型流式细胞仪大盘点/strong/span/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "排名不分先后，如有疏漏欢迎补充/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "1、stronga href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C26755.htm" target="_blank"BD FACSCalibur/a（点击查看报价等信息）/strong/pp style="text-align: center"a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C26755.htm" target="_blank"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/c682537a-6965-4d24-9706-148965b0e86b.jpg" title="image006.jpg" alt="image006.jpg"//a/pp style="text-align: center "a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C26755.htm" target="_blank"BD FACSCalibur常规临床型流式细胞仪/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "FACSCalibur是双激光、四色台式流式细胞仪，可同时应用于细胞分析和分选。从FACSCalibur诞生至今，经过多次改进和升级，已经广泛应用于各个临床和科研用户。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "FACSCalibur具备488nm、635nm双激光空间立体激发，四色荧光检测系统；分析速度快，可达到10,000细胞/秒的采集速度；具有专利的DDM(Doublet Discrimination Module）双粘体辨别模式，确保DNA分析的准确性；自动化程度高，配备一系列自动化的检测和分析软件；具有SFDA认证，并配备全套质控品和临床自动软件和试剂。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "2、a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C243931.htm" target="_blank"strong贝克曼库尔特DxFLEX（2015年第一代，2018年底第二代）（点击查看报价等信息）/strong/a/ppbr//pp style="text-align: center"a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C243931.htm" target="_blank"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/13f75802-f6a9-4b7d-9077-fe3f5197e1db.jpg" title="image007.jpg" alt="image007.jpg"//a/pp style="text-align: center "贝克曼库尔特流式细胞仪DxFLEX/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "贝克曼库尔特DxFLEX流式细胞仪销量占比5%排名第三。该仪器可搭载高通量自动进样器及板式进样器，提高工作效率，减少人为错误。更新的CytExpert for DxFLEX软件新增了报告和Panel等功能，更符合临床的需求。DxFLEX卓越的灵敏度和易用的软件使得流式技术更加普及，自动的质控和标准化功能使操作更规范，结果更准确。高达三激光十三色，支持全面的临床项目开展，是更高效的临床流式细胞仪 自动质控程序，全面监测仪器激光功率、激光延迟、各通道rCV，增益和平均荧光强度，具备更规范的临床流式操作；创新的光电技术，具有更高的荧光灵敏度，弱表达细胞分群更明显，可以得到更准确的流式结果。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "3、a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C192839.htm" target="_blank"strong贝克曼库尔特Navios（2013年）（点击查看报价等信息）/strong/a/ppbr//pp style="text-align: center"a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C192839.htm" target="_blank"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/72894808-7b93-4a28-bd7b-5a17b0dfd87d.jpg" title="image008.jpg" alt="image008.jpg"//a/pp style="text-align: center "a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C192839.htm" target="_blank"贝克曼库尔特Navios流式细胞仪/abr//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "Navios的流式细胞分析仪与先进的光学设计结合提高灵敏度和信号分辨率，可用于多色检测和高速数据采集。它具有三种前向角散射光(FS)检测方式，不仅可以检测常规的白细胞，血小板等，最小可区分0.4μm的颗粒；仪器内部温度控制功能，保证样本运行时不受外界干扰，实现最准确的样本检测。它还拥有稳定耐用的卡槽式设计固体激光器，配置3根激光都是由软件进行控制，延长使用寿命。Navios流式细胞分析系统可同时检测10色荧光，用户通过选择合适的单克隆抗体，可轻松完成复杂细胞群的分析。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "4、strong迈瑞BriCyte E6 （2014年）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/dc76cf3e-f2ee-4862-aa30-8aaa836608b4.jpg" title="image009.jpg" alt="image009.jpg"//pp style="text-align: center "迈瑞BriCyte E6流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "国产厂商迈瑞医疗的BriCyte E6流式细胞仪最大优势是全中文的软件操作界面，操作流程符合临床检验科室常规检测项目的操作习惯。BriCyte E6 具有双激光四色、双激光五色和双激光六色等配置，便于用户灵活选择荧光素，开展流式检测项目。另外该仪器提供淋巴细胞亚群四色分析和HLA-B27双色分析的自动化软件，可实现“生成样本单——选择检测项目——开始检测”三步一键式解决方案完成淋巴细胞亚群分析和HLA-B27检测项目。对于手动软件分析可提供自动电压和自动补偿一键式仪器设置功能，简化手动操作调节仪器分析条件的难度，提高临床用户的工作效率。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "5、strong安捷伦艾森Novocyte（2014年）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/5cc20c0e-1cb5-4ef0-8918-99ad184eec1c.jpg" title="image010.jpg" alt="image010.jpg"//pp style="text-align: center "安捷伦艾森Novocyte流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "安捷伦艾森NovoCyte智能化流式细胞仪在临床检测及科学研究领域具有以下显著优点：配置灵活，原机按需升级，支持3激光11色通道配置，充分满足用户日益拓广的使用需求；免调PMT增益电压设计，配合高达107的动态检测范围，32位浮点解析度，简化仪器操作，提高检测效率；高达亚微米级的颗粒解析度，轻松区分有效细胞和细胞碎片；一键自动流路清洗消毒功能，确保极低的交叉污染率( 0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供 15,000颗粒/秒的采样速率，配合智能化NovoExpressTM分析软件，更高效率地完成流式检测与分析。（仪器信息网）!--0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供--!--0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供--!--0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供--!--0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供--!--0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供--!--0.1%)，最大程度保证流式检测的准确性与重复性；创新的数字信号处理技术提供--/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "6、strong重庆博奥新景Cytonova（2016年）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/801ec55f-2471-4ec3-85b4-d785fca660a8.jpg" title="image011.jpg" alt="image011.jpg"//pp style="text-align: center "重庆博奥新景Cytonova流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "博奥集团于2015年由其北京研发中心开发了Cytonova流式细胞仪，配置为1-2激光3-6色，并由子公司成都博奥新景医学科技有限公司在2016年获得CFDA注册证。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "该仪器具备多种配置，采用固定光路设计，极大简化了维护和校准仪器的步骤，采用高功率固态激光器，智能控温，功率稳定，使用寿命长，可提供稳定可靠的光斑质量。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "7、strong中生医疗ZS-AE7S（2018年）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/d840a8e2-dd82-404f-9ea2-fb25c47727a7.jpg" title="image012.jpg" alt="image012.jpg"//pp style="text-align: center "中生医疗ZS-AE7S流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "ZS-AE7S流式细胞仪采用单激光5荧光通道的设计，可以满足临床90%的流式项目检测。各种技术参数都符合最新版本的流式细胞仪行业标准要求。ZS-AE7S流式细胞仪采用双侧荧光信号收集结构设计，有效提高荧光信号的灵敏度；采用新型的APD探测器替代传统的PMT探测器，荧光线性得到了很大提升；拥有高达107的动态显示范围，避免了繁琐的电压调节步骤；拥有可视化的荧光补偿工具，支持自动在线补偿，离线补偿，方便初学者上手，缩短数据分析时间；支持项目模板功能，一键调用采集和分析条件，自动获得报告结果，促进流式细胞术在临床的推广。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "8、strong赛雷纳Sparrow（2019年2月）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/a03a7ad2-06c7-4ccf-a8e3-5966bbf91b8d.jpg" title="image013.jpg" alt="image013.jpg"//pp style="text-align: center "赛雷纳Sparrow流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "Sparrow流式细胞仪配备双色高性能激光器，自主设计的光路无需调整，同步检测6个信号参数，具备绝对计数能力，并配套全自动样本处理功能、极大提高了工作效率；自主研发AISFCM全中文分析软件，傻瓜化一键操作模式，无需用户设置相关参数，仅需5分钟学习即可掌握仪器使用，降低人员的专业能力要求，使得仪器操作更方便、检测结果准确度更高、以更低的检测成本满足中国基层医院的需求。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "9、a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C370917.htm" target="_blank"strong上海厦泰Cytek Northern Lights（2019年9月）（点击查看报价等信息）/strong/a/ppbr//pp style="text-align: center"a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C370917.htm" target="_blank"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/5175d8d5-ca98-4f94-8fc8-6813edf3aee5.jpg" title="image014.jpg" alt="image014.jpg"//a/pp style="text-align: center "a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C370917.htm" target="_blank"Cytek Northern Lights全光谱流式细胞仪/abr//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "上海厦泰生物科技有限公司的全光谱流式细胞仪（Northern Lights-CLC，简称NL-CLC）获得上海药品监督管理局II类医疗器械注册证的批准，成为国内首个获批可用于临床检测的光谱流式细胞仪。Northern Lights融合了Cytek Aurora的技术，独特的光学设计和解析方法能够让使用者体会到其与众不同的灵活性，可以选用大量新的荧光染料组合而无需为每个应用重新设仪器，先进的光学系统和低噪音的电子系统带来了超强的灵敏度和分辨率。拥有专利技术的平顶光束设计，结合独特的液流系统，充份保证了高流速采集样本的出色性能。NL-CLC流式细胞仪系列，革新性的实现了配置更少的激光器获得更多的荧光通道的愿景，最高可实现3激光38个荧光通道。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strong10、/stronga href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C370925.htm" target="_blank"strongCytek Athena流式细胞仪（点击查看报价等信息）/strong/a/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 278px height: 298px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/4cac5ace-0c0e-4055-945a-b1c5ca4fde94.jpg" title="cytek athena.jpg" alt="cytek athena.jpg" width="278" height="298"//pp style="text-align: center "a href="https://www.instrument.com.cn/netshow/C370925.htm" target="_blank"Cytek Athena流式细胞仪（点击查看报价等信息）/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "DxP Athena™ 流式细胞仪由Cytek公司全新设计和研发，采用经过验证的Cytek DxP技术，能够在多色实验中有效分辨弱信号。提供2激光6色到3激光13色的灵活配置。Athena是由calibue的总设计师Eric博士等多位流式行业精英设计优化，保留了calibur的耐用、仪器稳定、操作方便等优势并结合科研现状，对仪器进行升级，可以满足常规实验室需求；Athena采用全球唯一一款可以检测流式分辨率的工具qbsure质控系统，从原理出发，即检测了仪器的背景噪音(b)和光电转换效率(Q)，又验证液流和激光的聚焦(CV)，并综合分析，给出给个荧光通道一个分辨率(R)，全面保证了仪器的性能；荧光探测器方面，Athena结合DxP技术，采用的高效的多碱阴级光电倍增管(PMT)光电转换效率比普通PMT更高，能够有效地检测出群信号群体和稀有细胞群体，不管是简单的单色实验还是复杂的8-10色实验，都可以满意临床和科研用户的需求。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "11、strong唯公科技EasyCell（2019年）/strong/ppbr//pp style="text-align: center "img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 425px height: 261px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/8901db97-0159-48e0-88f8-ec35ab49c998.jpg" title="image015.jpg" alt="image015.jpg" width="425" height="261"//pp style="text-align: center "唯公科技EasyCell流式细胞仪/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "EasyCell流式细胞仪提供全方位多角度智能化自动软件，简化临床流式操作的复杂程度，方便临床用户学习使用。提供淋巴细胞亚群四色分析和HLA-B27双色分析的自动化软件，可实现“生成样本单——选择检测项目——开始检测”三步一键式解决方案完成淋巴细胞亚群分析和HLA-B27检测临床检测项目，极大地简化操作流程，提高临床用户的工作效率；对于手动软件分析可提供自动电压和自动补偿一键式仪器设置功能，简化手动操作调节仪器。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "12、strong指真生物CytoPOC（2019年8月）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/fc468e3f-fe13-470f-8087-ccd94b3e33f2.jpg" title="image016.jpg" alt="image016.jpg"//pp style="text-align: center "指真生物CytoPOC流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "CytoPOC系列流式细胞仪标配488nm激光器，支持FITC、PE、PerCP和PE-Cy7，能够覆盖临床常规开展的淋巴细胞亚群分析（TBNK）及CD4细胞绝对计数、HLA-B27、血液病/淋巴瘤分型、DNA倍体分析、细胞因子等。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "13、strong必达科BeamCyte系列（2019年9月）/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/76477c4e-2314-47dc-9820-45b447f0f503.jpg" title="image017.jpg" alt="image017.jpg"//pp style="text-align: center "必达科BeamCyte系列流式细胞仪br//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "常州必达科生物科技有限公司专注于中高端流式细胞仪及试剂的研发、生产和销售，其自主研发的第一代产品BeamCyte系列流式细胞仪近期获国家食品药品监督管理局（NMPA）批准，取得二类医疗器械注册证，成为国内为数不多经过临床验证获批上市、拥有完全自主知识产权的流式细胞仪产品。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "产品覆盖单激光6通道至双激光8通道绝大多数的临床应用；自有激光器技术，成功应用于流式的新型光电子检测及信号处理技术；独创的荧光空间耦合技术；自主研发的通用流式分析软件技术平台，模块化开放式设计，中英文界面一键切换，简洁易懂的软件界面，不需专业操作人员，即可轻松上手。（仪器信息网）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "strongispan style="color: rgb(255, 0, 0) "如有遗漏欢迎各位大咖前来补充....../span/i/strong/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong【推荐阅读：2019年流式细胞仪市场动态】/strong/span/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/news/20190604/486444.shtml" target="_blank"strongQ2 Solutions在全球部署Cytek超30色流式细胞仪，20年来首次重大技术进步?/strong/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "2019年5月29日，全球性临床试验实验室服务组织Q2 Solutions宣布部署下一代流式细胞仪服务项目。Q2 Solutions在全球部署Cytek超30色流式细胞仪。在接下来的三年中，Q2 Solutions将完成在它全球范围内部署Cytek Aurora系统，项目开发将于2019年第三季度开始并在2020年第一季度完成部署… … （详情点击查看）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/news/20191226/519697.shtml" target="_blank"strong流式“玩家”唯公科技获数千万A轮融资，领投方曾投资华大基因/strong/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "深圳唯公科技喜获松禾资本领投、合创资本跟投的数千万元A轮融资。本轮融资的落地，将快速推动唯公科技流式荧光免疫检测平台的研发和产品布局… … （详情点击查看）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/news/20200102/520085.shtml" target="_blank"strong流式平台企业芯凯瑞生物获投数千万元A轮融资/strong/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "近日，深圳市芯凯瑞生物科技有限公司（下称“芯凯瑞”）宣布完成由幂方资本领投，深投控跟投的数千万元A轮融资… … .（详情点击查看）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/news/20190213/479986.shtml" target="_blank"strongFluidigm宣布与Indica Labs达成联合营销协议/strong/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "Fluidigm（富鲁达）宣布与Indica Labs达成联合营销协议，为成像质谱流式细胞仪数据分析提供平台，以帮助进行新型数字病理学调查… … （详情点击查看）/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/news/20200116/520767.shtml" target="_blank"span style="color: rgb(255, 0, 0) background-color: rgb(255, 192, 0) "strong【延伸阅读span style="color: rgb(255, 0, 0) background-color: rgb(255, 192, 0) text-indent: 2em "】（点击查看：2019年流式细胞仪（FCM）中标盘点）/span/strong/span/a/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.instrument.com.cn/zt/liushixibaoyi" target="_blank"更多流式市场动态，请点击下方图片“span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong进击”的流式细胞仪/strong/span专题查看更多。/a/ppbr//pp style="text-align: center "a href="https://www.instrument.com.cn/zt/liushixibaoyi" target="_blank"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202001/uepic/f340b89b-82cb-4186-9bcb-1d3bc9a87d1d.jpg" title="image018.jpg" alt="image018.jpg"//a/p

报名链接: https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icfcm2023/ 嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果，尤其是CD19-CAR-T细胞免疫治疗难治复发B细胞急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）获得了90%左右的缓解率，单独使用或者桥接异基因造血干细胞移植均极大程度地提高了患者的完全缓解率和生存率；CAR-T细胞免疫治疗其他类型白血病、淋巴瘤、骨髓瘤以及实体瘤也在不断探索并取得巨大进步。流式细胞术（flow cytometry，FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每个步骤中都起到非常重要的作用 。作为一项免疫治疗，CAR-T细胞免疫治疗相关检验中涉及的FCM与临床常规不同，体现在靶点评估需要精确设门并且同时关注正常细胞的表达，CAR-T细胞免疫治疗后微小残留病（minimal/measurable residual disease，MRD）需要考虑靶点丢失以及输入的CAR-T细胞影响，而CAR表达细胞比例和数量的检测以及免疫相关检测均缺乏规范化，给临床工作带来不确定性等。为了能使更多相关领域的科研、临床和实验室检测人员认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗中的作用和注意事项，规范在每项检验中的实验方案和技术操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家结合文献学习和多家医疗机构的临床工作实践制定了本专家共识。作为执笔人，北京陆道培血液病研究院副院长王卉主任在第五届流式细胞技术网络大会为我们详细解读《流式细胞术在嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗相关检验中的应用专家共识》。报告题目：《流式细胞术在CAR-T研究和临床治疗中应用专家共识解读》报告嘉宾：王卉 北京陆道培血液病研究院 副院长【个人简介】北京陆道培血液病研究院副院长；北京陆道培医院和河北燕达陆道培医院检验科副主任（副院长级），流式细胞室主任；信纳克（北京）生化标志物检测医学研究有限责任公司CEO，CMO；信纳克实验室主任；中国中西医结合学会检验专委会流式专委会主任委员 ；北京医学检验学会副会长 ；中国抗癌协会淋巴瘤学组委员 等众多学会常委、委员、顾问。主要研究流式细胞术临床诊断，第一发明人发明专利8个，实用新型专利2个，外观专利设计5个，作品登记3个。第一执笔人和通讯作者发表流式共识3篇，参与编写共识5篇。从事流式细胞术检测22年。独立签发50多万临床报告，累计在全国和各省市学术会议上讲座一千余场，足迹遍布全国28个省、自治区、直辖市（包括台湾）。【摘要】与CAR-T细胞治疗相关的FCM检测；FCM在CAR-T细胞治疗靶点筛查中的应用 ；MRD相关检测 免疫功能相关检测。更多精彩内容请查看会议页面： iCFCM 2023 交流群 温馨提示:1) 报名后，直播前助教会统一审核，审核通过后，会发送参会链接给报名手机号。填写不完整或填写内容敷衍将不予审核。2) 通过审核后，会议当天您将收到短信提醒。点击短信链接，输入报名手机号，即可参会。会议海报

文章来源：中华检验医学杂志, 2022,45(8) : 790-801作者：中国中西医结合学会检验医学专业委员会摘要嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果。流式细胞术（FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每一个步骤中都起到非常重要的作用，包括靶点筛查、CAR-T细胞产品成分鉴定、毒性预估、微小残留病（MRD）检测、免疫功能评价、免疫微环境研究等。为了深刻认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗这一新兴领域的作用，规范每一项应用中的操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会制定了此专家共识。嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］，尤其是CD19-CAR-T细胞免疫治疗难治复发B细胞急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）获得了90%左右的缓解率［1, 2, 3］，单独使用或者桥接异基因造血干细胞移植均极大程度地提高了患者的完全缓解率和生存率；CAR-T细胞免疫治疗其他类型白血病、淋巴瘤、骨髓瘤以及实体瘤也在不断探索并取得巨大进步［4, 5, 6, 7］。流式细胞术（flow cytometry，FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每个步骤中都起到非常重要的作用 ［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］。作为一项免疫治疗，CAR-T细胞免疫治疗相关检验中涉及的FCM与临床常规不同，体现在靶点评估需要精确设门并且同时关注正常细胞的表达，CAR-T细胞免疫治疗后微小残留病（minimal/measurable residual disease，MRD）需要考虑靶点丢失以及输入的CAR-T细胞影响，而CAR表达细胞比例和数量的检测以及免疫相关检测均缺乏规范化，给临床工作带来不确定性等。为了能使更多相关领域的科研、临床和实验室检测人员认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗中的作用和注意事项，规范在每项检验中的实验方案和技术操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家结合文献学习和多家医疗机构的临床工作实践制定了本专家共识。适用范围、术语和定义一、适用范围各类医疗机构临床实验室、商业化实验室和科研单位在使用FCM进行CAR-T细胞免疫治疗相关临床检验时，均可采用或参照使用本专家共识。鉴于CAR-T细胞生产过程中的创新性和复杂性，并且该步骤极少在临床诊断实验室中进行，本共识不涉及此研发过程。二、术语和定义1.多参数流式细胞术（multiparametric flow cytometry，MFC）：虽然MFC的术语出现于20世纪80年代，当初指代两色以上FCM，后期对此也没有明确定义，但是现在普遍建议采用三激光八色或者以上机型。2.CAR-T细胞免疫治疗：人体免疫细胞（来自自体或异体均可），在体外经过基因修饰后具备了特异性识别和杀伤表达特定抗原的肿瘤细胞的能力，输入患者体内以实现清除肿瘤细胞或者其他病态细胞的免疫治疗方法［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］。CAR-T细胞免疫治疗技术包括几个步骤：（1）从患者或者供者血液中分离出自体或者异体T淋巴细胞；（2）用CAR编码的病毒载体进行体外修饰、培养；（3）最后输入患者体内。近年来为了增强治疗效果降低副作用，已发展到第4代CAR-T细胞免疫治疗技术。3.细胞因子：细胞因子是由多种免疫细胞分泌的一类小分子蛋白质，具有介导和调节免疫过程等作用。目前已经发现的人类细胞因子有200多种。根据结构和功能一般可分为白细胞介素（interleukin，IL）、干扰素（interferon，IFN）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、集落刺激因子、趋化因子和生长因子等。4.细胞因子释放综合征：细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome，CRS）是一种发生在任何免疫治疗后，由于内源性或者输注的T细胞和/或其他免疫效应细胞活化或者聚集导致的超生理反应。症状多样，但是必须包括初发时发热，可能伴有低血压、毛细管渗漏（低氧）和终末器官衰竭。尽管没有将细胞因子检测纳入定义，而CRS分级也主要是根据临床表现，但是鼓励进行C反应蛋白、细胞因子、铁蛋白等相关检测，便于为将来的研究提供依据［8］。5.趋化因子及其配体：趋化因子是能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子，其配体很多是免疫功能检测中区分淋巴细胞亚群的重要标志物，例如半胱氨酸-半胱氨酸基序趋化因子受体（cysteine-cysteine motif chemokine receptor，CCR）系列，半胱氨酸-氨基酸-半胱氨酸基序趋化因子受体（cysteine-X-cysteine motif chemokine receptor，CXCR）系列［9］。6.抗原表达率：精确设门后，特定细胞上抗原表达的百分比。临床工作中由于受到抗体和荧光素选择、抗原抗体结合过程、温度光照和放置时间导致荧光信号改变、仪器设置、设门精确度、个体差异、细胞异质性、对照细胞群、检测目的等多种因素影响，以诊断为目标的临床实验室，一般由流式操作人员排除各种影响因素后，按照表达、部分表达、不表达进行定性描述［10］，以方便临床和实验室对目的细胞群进行简单直观的性质判断。7.抗原表达强度：与某种抗原分子在细胞上表达量的多少有关，FCM的直观体现为荧光强度。根据抗原表达强度将阳性细胞表达分为强表达（bright，bri）、中等强度表达、弱表达（dim）和异质性表达［10］，可能会随着治疗和疾病或者活化状态发生改变。8.单链可变区片段（single-chain variable fragment，scFv）：构建CAR-T细胞需要将CAR基因通过病毒载体或非病毒系统转染并整合到T细胞基因组上。CAR基因正常表达时，形成跨膜的CAR结构，细胞外域的重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸短肽连接而成的部分即为scFv。编码的scFv元件既是CAR-T细胞识别肿瘤抗原的重要成分，也可作为FCM评价CAR表达情况的检测靶点之一。9.同型阴性对照：用于检测抗体与细胞表面可结晶段受体非特异性结合导致背景信号的阴性对照。应该用与检测抗体相同标记、同种属来源、相同亚型、相同浓度的免疫球蛋白进行染色，如果是间接标记抗体，还需要做二抗的荧光素背景对照，其作用是设置仪器条件，消除背景染色。对于正常标本中不存在的未知标志或者与阴性细胞界限不清的标志，或者标本中比例极低需要精确检测的标志，同型阴性对照是普遍采用的对照。CAR-T细胞免疫治疗相关检验中的FCM项目CAR-T细胞的生产研发、临床治疗每个环节都与FCM检测密不可分，包括靶点筛查、患者选择、CAR-T细胞成分鉴定、毒性预估、MRD检测、回输物和患者标本免疫功能评价、免疫微环境和复发机制研究等。鉴于CAR-T细胞治疗这一全新领域集合了肿瘤细胞和正常细胞免疫表型、肿瘤干细胞免疫表型、免疫细胞亚群、细胞因子检测、CAR-T细胞检测、因部分病例靶点丢失甚至系别转变导致需要调整方案的FCM MRD检测、肿瘤异质性和免疫微环境检测等（表1），以及CAR-T细胞治疗设计的多样性和复杂性、临床工作中使用不同靶点或者联合靶点CAR-T细胞治疗、使用其他细胞因子或者信号分子靶向药物控制副作用等，这些都对FCM检测提出更高的要求。因此深入了解每个环节需要使用的标本类型、检测方案以及最低检测要求，将有助于进一步规范检测流程，提高检测水平，保证检测质量。FCM在CAR-T细胞免疫治疗靶点筛查中的应用随着CAR-T细胞治疗技术的不断完善，CAR-T细胞的功能和治疗的安全性都有了很大提升，并有CAR-自然杀伤（natural killer，NK）细胞、双特异性靶点CAR-T细胞等类似靶向细胞免疫治疗产品出现。但是作为特异性免疫治疗，胞外抗原识别区的设计，尤其是有效靶点的选择始终是每一种CAR-T细胞治疗相关产品的关键环节。理想的靶点应该满足下述要求：高覆盖率（某种疾病的群体中，肿瘤细胞表达该抗原的患者比例高）、高表达率（阳性个体中几乎所有肿瘤细胞都表达）、高表达强度（在肿瘤细胞表面抗原分子数量多，表现为同一种荧光标记时，荧光强度高）、高特异性（在正常细胞中不表达或者少表达，对患者不会造成严重影响）［11］。FCM作为一项快速、简便、直观、定性定量的技术，是目前实现这一目的的重要检测手段，而CAR-T细胞治疗靶点的选择虽然都是在免疫分型或者MRD的基础上进行，但是比常规临床诊断有更严格的特殊注意事项［12, 13］。一、正确设门评价肿瘤克隆在2021年中国的《急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型专家共识》［10］中已经对检测方案和设门方法作出明确推荐，对于肿瘤负荷（肿瘤占有核细胞比例）、肿瘤细胞免疫表型分析、精确设门识别小克隆肿瘤细胞，建议参考此共识。需要指出的是：（1）在CAR-T细胞治疗时代之前，免疫分型的主要目的是诊断，故出于性价比考虑和仪器条件所限，只要肿瘤为单一克隆，抗原表达的判断多为阴性阳性的定性检测，大多数标志无需给出明确的百分比数值；（2）临床工作中，由于流式细胞仪检测通道数量的限制，每个抗体组合可使用的抗体数量有限，为了尽可能在相同数量抗体的情况下获得更多临床信息，一些实验室的免疫分型方案除了CD45以外，不重复使用其他设门抗体；（3）这种普遍使用CD45/侧向角光散射（side scatter，SSC）设置肿瘤细胞门的方法，因为CD45弱表达（dim）、SSC小的区域本身就包括NK细胞、嗜碱性粒细胞、正常髓系原始细胞、正常增生B祖细胞、树突状细胞、幼稚单核细胞、浆细胞、部分有核红细胞等，导致设门精确度有限，尤其是参数较少的机型。在做不到使用标志精确设门的情况下，抗原表达的描述必然是定性的。因为目的不同，最低要求也不同。以临床诊断为目的的普通免疫分型，采用设门精确度不影响诊断即可接受的方法；而CAR-T细胞治疗时代的到来，对于设门的精确度提出了更高的要求：（1）虽然现在还缺乏靶点表达率和表达强度对于缓解率和长期存活率影响的数据［13］，但是在临床治疗的初期，希望通过选择最理想的靶点准确评价CAR-T细胞治疗效果，建议临床治疗团队与FCM团队沟通，明确告知靶点筛查目的并调整方案；（2）在全面诊断结果出来之前，肿瘤性质、存在的恶性克隆数量及精确抗原表达情况、最能够准确定义全部肿瘤细胞群的标志或标志组合（精确设门）都是未知的，只能根据覆盖大多数疾病的理念设计方案，这种方案对于CD19、CD7等在B-ALL和T-ALL中覆盖高的系别标志尚可，但是对于急性髓系白血病、淋巴瘤、实体瘤等，由于特殊靶点在每个患者肿瘤细胞群上表达存在异质性［12，14］，可能达不到精确设门要求，需要在免疫分型基础上后续进行靶点评价；（3）CAR-T细胞治疗后复发的病例，存在更大的异质性［15］，因此靶点筛查工作会根据实验室情况和诊疗过程分层次进行。共识1：CAR-T细胞免疫治疗靶点筛查与常规诊断检测目的不同，临床需要与实验室沟通告知检测目的，在临床常规免疫分型或者MRD检测的基础上，通过精确设门来准确评价潜在靶点抗原在肿瘤细胞群的表达。推荐强度：强烈建议。二、正确评价肿瘤细胞中抗原表达的百分比和表达强度目前的研究和临床应用，因为需要准确评价CAR-T细胞治疗靶点针对的肿瘤细胞，建议应在精确设门定义肿瘤细胞群之后，对潜在靶点进行定量分析。而这个定量，既包括了抗原表达的百分比，也包括表达强度。虽然目前还没有关于CAR-T细胞治疗靶点的表达百分比和表达强度的适合区间要求，而且鉴于FCM检测的多种影响因素，可能在今后一段时间内也无法作出统一要求，但是为了使研究工作规范化，从FCM角度尽可能提供客观评价，建议：（1）医疗机构（最好扩大到多中心合作研究），尽可能采用相同的方案，至少关键抗体和组合采用相似方案，包括抗体的克隆号和荧光素以及主要设门和配伍标志。（2）鉴于行 CAR-T细胞免疫治疗的患者，往往是MRD阳性的难治复发病例，免疫表型可能会随着治疗发生改变［14］，建议在CAR-T细胞回输前对免疫表型再次进行严格评价确认。（3）关于潜在靶点的表达率评价，在精确设门的基础上，强表达和中等强度表达的抗原，因为阳性细胞和阴性细胞之间有明确的界限，相对好评价；弱表达或者异质性表达抗原可能不适合采用表达百分比的方式，暂时可以采用目的细胞中位荧光强度（median fluorescence intensity，MdFI）和对照MdFI比值（MdFI ratio，MdFIR）的方法［16, 17］。（4）CAR-T细胞治疗靶点筛查报告应尽可能包含丰富的实验数据，为临床靶点筛查分级和毒副作用预判提供实验数据支撑，建议提供：①肿瘤细胞的靶点抗原表达率、表达强度；②阴性对照或者阳性对照（如果有）、肿瘤细胞的MdFI，以及MdFIR等。为了更加精确地比较抗原表达强度，对目的细胞上抗原表达进行量化会更有助于CAR-T细胞免疫治疗靶点的研究。但是目前由于技术所限，极少有实验室采用荧光定量微球进行绝对定量检测，大多数采用仪器自动生成的MdFI或者平均荧光强度。使用的时候应注意，MdFI值依赖每个实验室的仪器和试验条件设置，因此需要检测过程的标准化和对仪器的校准。有的研究中心采用与同型对照或者阴性内对照细胞MdFIR的方法，可在一定程度上缩小差异，但是不能替代FCM检测的规范化、标准化，并且需要确定阴性细胞的一致性［17］。共识2：为了尽可能给CAR-T细胞免疫治疗提供客观评价，建议一项研究或治疗过程中尽量采用相同的方案，至少是关键抗体和组合相似的方案。同一患者的随访监测尽量在同一台仪器上进行，且尽量仪器条件（包括补偿）相同，或者进行仪器间条件比对。推荐强度：建议执行。共识3：在CAR-T细胞回输前对靶点在肿瘤细胞的表达情况进行严格评价：强表达和中等强度表达的抗原，在精确设门基础上采用百分比的报告方式；弱表达或者异质性表达抗原不建议采用表达百分比的方式，可以采用目的细胞和对照细胞MdFIR方法。采用MdFI和MdFIR时注意仪器校准。推荐强度：建议执行。三、背景细胞的表达评价涉及CAR-T细胞治疗的毒副作用靶点筛查还包括抗原特异性的评价，即该标志物在正常细胞表达情况。理想靶点是只特异性表达于肿瘤细胞，或者在正常细胞的表达率低，或者这些细胞的功能可以被其他细胞或者药物替代。虽然目前除了B细胞相关抗原CD19、CD20、CD22，几乎没有抗原是绝对特异和表达率低的，但是现代基因修饰改良技术在逐渐克服这个问题，如基因敲除CD7-CAR-T细胞的出现［18］，而此过程中FCM功不可没，因为通过FCM精确分析各种潜在靶点在不同细胞上的表达情况，才能预测毒副作用。选择直接的理想靶点，或者让一些特异性差的靶点通过基因修饰技术改良而降低副作用从而满足临床需要，建议将这些信息在靶点筛查报告中也予以体现，至少以彩色图片方式。共识4：在评价肿瘤细胞的同时，应该评价CAR-T细胞免疫治疗靶点标志在正常细胞表达情况，未知新靶点筛查尤其需要抗原特异性信息，建议在靶点筛查报告中予以体现，至少以彩色图片方式。推荐强度：建议执行。MRD相关检测由于肿瘤适应性和脱靶效应的存在，CAR-T细胞治疗后的MRD检测难度增加，最重要的就是设门标志的选择和认识靶点阴性的正常细胞。一、设门标志的选择及检测方案的修订CAR-T细胞治疗之后，经过长度不等的消减期，靶点表达细胞会逐渐恢复，但是也存在正常或者肿瘤细胞靶点阴性的情况。因此CAR-T细胞治疗后的MRD检测时需要注意，如果是靶点为CD19、CD7等设门相关系别标志，需要增加设门抗体。以CD19-CAR-T细胞治疗后MRD检测为例：（1）需要增加B细胞设门标志，因为13%~60%的B-ALL病例在CD19-CAR-T细胞治疗后会出现肿瘤细胞CD19全部或者部分表达丢失或者减弱，导致CD19设门方法可能会漏诊［3，19］；（2）关于增加设门标志的选择，有的实验室选择CD22+和/或CD24+/CD66b-，但是B-ALL有10%~20%的病例不表达CD24［20］。而现在随着CD22-CAR-T细胞单独或者联合CD19-CAR-T细胞的应用越来越广泛［21］，加上CD22在幼稚细胞弱表达而后随着细胞的成熟表达逐渐增强，都决定了CD22可能更加适合于靶点筛查，不适合作为设门标志；（3）从覆盖最完整的B细胞群角度考虑，胞浆CD79a是CD19以外作为B细胞设门的相对理想选择［3］；（4）关于B-ALL MRD的其他标志选择，经过多年发展已有比较成熟的经验，一般选择CD38/CD10/CD34/CD19/CD20/CD45（和CD81和/或TdT等）［3，20］，方案详见表2。二、免疫表型与观察方法的改变选择cCD79a设门时需要注意：（1）破膜处理会导致SSC和部分抗原表达强度发生改变，如SSC和CD45的细胞间差距缩小，导致CD45/SSC组合CD45/CD19以及其他涉及CD45dim和SSC增大的组合效率降低，提高MRD检测难度；（2）认识CD19-的正常B祖细胞免疫表型，与常见的CD19+B祖细胞不同，这群细胞多为CD34+的最早期阶段，CD10表达减弱，SSC偏大，在不熟悉的情况下极易误诊为MRD［3，20，22］；（3）CD19-B祖细胞正常情况下也存在，但是因为大多数比例极低，加上使用CD19设门，所以容易被忽视。使用CD19-CAR-T细胞治疗之后，CD19+B祖细胞比例显著降低，导致CD19-B祖细胞比例相对升高，加上设门方式的改变，以及对CD19-B祖细胞的关注，使得这群细胞变得明显。鉴于肿瘤细胞的异质性在CAR-T细胞治疗之后进一步加剧，即便使用替代设门标志，仍会因标志表达减弱或者脑脊液标本不适合使用胞浆标志等原因给检测带来困难。因此应该充分利用每一个标志进行多重标志设门，如B-ALL MRD检测中使用SSC/CD10、SSC/CD34、SSC/TdT等，T-ALL中使用CD99bri/SSC、cCD3/CD45dim、CD5/CD45dim、CD34和/或CD1a/SSC、TdT/SSC等，多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）使用CD229/CD45dim、CD138/CD45dim等；CSF标本正常不存在CD45dim/SSC小/CD10+和/或CD34+/CD38+细胞，因此采用CD34和/或CD10和/或CD38组合CD45设门的方法，结合CD22表达进行鉴定。此外，还应注意ALL患者CAR-T细胞治疗后可能发生髓系转换［15］。CD7-CAR-T细胞免疫治疗后，因回输物与疾病属于同一系别，可能因回输细胞或者反应性细胞与正常细胞表型不同而影响MRD检测。三、检测时间点研究发现，CAR-T细胞治疗后靶点表达细胞在1~3个月开始恢复［1, 2, 3，18，20, 21, 22］，如果除了CAR-T细胞治疗之外没有其他治疗措施，骨髓标本的检测时间最好为前6个月内每月1次，至少前6~12个月内每3个月1次；外周血至少为前6个月内每月1次［2］；因为CAR-T细胞会进入CSF，因此建议使用FCM进行CSF的MRD和CAR-T细胞检测，时间点酌情选择［2］。共识5：鉴于CAR-T细胞免疫治疗后靶抗原丢失率高，建议增加相似覆盖率的替代设门标志物，联合使用2个及以上重要系别标志分别设门分析，并结合使用原始标志设门分析。注意CAR-T细胞免疫治疗后靶点阴性正常细胞的表型变化。推荐强度：强烈建议。共识6：CAR-T细胞免疫治疗后复发不只限于骨髓，建议CSF或者其他可取材的受累组织都应该进行MRD检测。骨髓标本的检测时间点至少为前6~12个月内每3个月1次；外周血至少为前6个月内每个月1次；CSF标本酌情检测。推荐强度：强烈建议。免疫功能相关检测广义的免疫功能检测包括所有免疫相关细胞亚群的组成比例、数量、表型及功能检测：（1）CAR表达细胞比例、绝对数以及组成成分；（2）淋巴细胞和其他免疫细胞亚群检测；（3）非常规检测或者可以由其他技术完成的检测，如免疫抑制信号和细胞因子检测等。其中既有组合同时进行检测，也有分开进行检测，这主要由检测时间点和CAR表达细胞的比例与计数决定。一般临床试验初期摸索条件时，检测参数相对较多，时间点也相对较为密集；摸索到相应规律后，根据变化规律及临床表现，选择重要的时间点进行检测，而不同时间点的检测指标也会有差别；针对CAR-T细胞回输物质量鉴定，或者在CAR-T细胞治疗早期CAR表达细胞比例相对较高、绝对数较高时，检测的指标会相对全面，后期比例降低、细胞数减少，检测的指标会相对简单；患者CAR-T细胞输注周期中，早期变化较大较快，检测点也相对密集，后期变化延缓，检测间隔拉长。一、CAR表达细胞的检测FCM检测目的多样，因此从方案设计到检测结果，都需要根据相应目标进行沟通调整，才能在现有条件下获得尽可能精确的结果，从靶点筛查到CAR表达细胞比例和绝对数及组成成分检测皆如此［11，23, 24］。（一）CAR表达细胞检测抗体目前，绝大多数CAR-T细胞治疗处于实验室开发和临床研究阶段，出于设计和工艺的多样性和创新性，以及FCM仪器、荧光素以及成本所限等原因，还不能作出适用于所有类型CAR表达细胞的统一性实验方案，尤其是针对CAR表达细胞的比例和绝对计数检测，还没有通用的商品化抗体。但是抗体使用的基本原则相同，即在同一研究（尤其是多中心研究，尽可能包括更多的类似研究）的全过程中应该尽量保持一致，以便更好地对比在生产和使用的不同阶段产生的结果。例如：从生产到临床治疗过程中，最好使用相同的试剂、荧光素、对照，以及相似的方案；对于结果判读也应事先沟通和培训，统一数据分析标准，如设门原则等，尽可能采取一致性原则；对于少数有疑问的病例，应共同讨论研究［23, 24］。在CAR-T细胞检测中，最关键的就是检测CAR表达细胞的抗体，可选择的试剂类型包括抗scFv独特型的单克隆抗体、靶点融合蛋白抗体、重组蛋白L和抗标签单克隆抗体［24］。各类试剂各有优缺点，基本上都由CAR-T细胞研发公司特制提供给检测单位。由CAR-T细胞研发公司和定制抗体生产商负责对抗体的特异性、交叉反应性、稳定性、纯度和荧光素进行评价，并做染色方法的线性范围、准确度、专属性、重复性、精密度和耐用性等质量控制，从而保证可靠标记和每一批次的CAR表达细胞检测抗体具有良好的稳定性。如有商业化的抗体或蛋白，尽量采用商业化试剂。对于临床实验室的建议：（1）鉴于CAR属于未知抗原，缺乏正常细胞作为内对照，因此建议使用同型阴性对照（必要时增加未经改造的细胞作为阴性对照）［23, 24］；（2）在建立试验方案初期，要求CAR-T细胞制造方提供阳性对照和阴性对照，尤其是CAR阳性细胞的表达强度不能达到中等和/或强表达的时候，或者与对照相比染色背景显著提高时；（3）尽可能选择PE、APC这种亮度较高、受温度光照影响较小的单纯荧光素，并且同一研究尽量避免更换荧光素；（4）尽量采用荧光素减一（fluorescence minus one，FMO）的方案排除补偿影响；（5）进行抗体的批间检测：更换抗体批号时，应该对新旧批号抗体进行MdFI或者平均荧光强度对比，建议新旧批号抗体配对比较不少于5组，变异系数控制在25%以内［24, 25］。共识7：从生产到临床治疗过程中，最好使用相同的试剂、荧光素、对照以及相似的方案，对于结果判读也应事先沟通和培训，尽可能采取一致性原则，对于少数有疑问的病例，应共同讨论研究。推荐强度：强烈建议。共识8：CAR表达细胞属于未知抗原检测，建议使用合适的阴性对照，并在建立试验方案初期，使用阳性对照；尽可能选择PE、APC荧光素，并且同一研究尽量避免更换荧光素；尽量采用FMO的方案排除补偿影响；建议进行抗体批间检测。推荐强度：建议执行。（二）检测时间点多项临床试验数据显示，体内CAR-T细胞增殖与疗效显著相关［1，13，18, 19］，因此，检测体内CAR-T细胞增殖情况是评估疗效的重要指标之一；并且还能辅助诊断治疗后早期多种急性毒副作用［8，26, 27］。因此规律性检测CAR-T细胞很重要。检测时间点与CAR-T细胞治疗方案有关，每个研究大同小异，主要包括：CAR-T细胞制备后回输前的质量检测，CAR-T细胞回输后体内追踪（不同研究时间点有差异，例如4、7、14、28 d，2、3、6个月）。鉴于FCM检测CAR-T细胞的灵敏度为10-3（目的细胞数/单个核细胞数），在连续2次检测不到CAR表达细胞后可以停止检测。有的患者可能随访两年分子遗传学方法依旧能够检测到［23, 24，28］。（三）方案设计与获取细胞数FCM（尤其是3激光8色及以上的MFC）检测CAR表达细胞，虽然灵敏度可能低于分子遗传学技术［28］，但是优势很大：（1）快速简便低成本；（2）多色和设门技术可以清楚标记出CAR表达细胞亚群，如CD4、CD8以及记忆T细胞的表型，并能进行绝对计数；（3）可以发现混杂的MRD细胞；（4）能够检测到表达CAR的B细胞以及通过对回输物中其他细胞的评价进行质量检测［9，15］。缺点是缺乏标准化，尤其是对于CAR表达细胞的检测，因此需要专家共识加强标准化进程。方案设计包括抗体与荧光素的配对（最基本的原则是识别抗原表达强度低、比例低或者未知细胞表达的抗体，尽量选择PE、APC等亮度较高的荧光素），而CAR表达细胞比例和绝对数决定了方案的复杂程度。设计目标需要明确区分表达CAR的T细胞基本组成与可能表达CAR的其他细胞，低比例或者低细胞数的时候尤其需要排除非特异性染色［2，4，6，9，23, 24］。实际工作中，虽然可能受到条件限制，但是最简单方案应包括CAR检测抗体、CD3、CD8（或者CD4）、靶点（例如CD19-CAR-T细胞选择CD19，CD7-CAR-T细胞选择CD7）。相对优化的方案建议包括：CAR检测抗体、CD3、CD4、CD8、CD14、CD19（CD7-CAR-T细胞增加CD7）、CD56、CD45（表2），用以区分T、B、NK和单核细胞。回输物检测和回输后CAR-T细胞增殖高峰时，因为细胞量相对较大，以及CAR表达细胞比例相对较高，可以做比较全面的检测，即同时加CD45RA和CD197（图1），可选择CD95、CD45RO、CD62L、CD27 等用以区分CAR-T细胞的功能性亚群。最新研究表明，CAR-T细胞治疗疗效与T细胞成分（CD4、CD8）、功能（初始、记忆、效应）、活化（表达活化标志）和其他状态有关，利用FCM测定亚群有助于鉴定细胞产品的潜能［29, 30, 31, 32］。图1 流式细胞术检测经CD19-嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗7 d后B细胞急性淋巴细胞白血病患者外周血CAR-T细胞［A为活细胞门（live）内所有细胞群；B为淋巴细胞（lym）同型对照（con）表达图；C为淋巴细胞（lym）CAR表达图；D为检测管各群细胞占比及中位表达强度；E为淋巴细胞门内B细胞（B）占比；F为淋巴细胞门内NK和T细胞占比；G为淋巴细胞门内CD4+T细胞和CD8+T细胞占比；H为CAR阳性细胞中TN、TEM、TCM、TEFF细胞占比；TN为初始 T 细胞，TCM为中心记忆性T细胞，TEM为效应记忆性T细胞，TEFF效应性T细胞；CAR表达细胞占淋巴细胞比例为86.33%，主要为CD3+T细胞，57.34%为CD4+T细胞，40.60%为CD8+T细胞。未见明显B细胞和自然杀伤细胞成分（0.1%）；图片上方显示逻辑设门］此外，来自自体成分的CAR-T细胞，虽然大多数肿瘤细胞会在体外培养过程中死亡，但是极少数病例的肿瘤细胞依旧存活，甚至脱靶存活。因此在体外培养后回输之前，如果发现可疑细胞（例如CD19-CAR-T细胞出现CD19+细胞，或者CD19-/CD45dim的原始细胞），应进行严格的MRD检测［2，9］，方案同CAR-T细胞免疫治疗后MRD检测（表2）。CAR-T细胞回输前质量鉴定时，可以采用单平台或者双平台方法进行CAR-T细胞的绝对计数，质量控制参考CD34+造血干细胞计数［25］，获取细胞数最好20万以上。而回输后检测患者标本时，尤其是在大多数时间点可能因为CAR表达细胞频度极低，建议参考MRD检测要求，最好获取100万细胞，即便处于细胞减少阶段，也建议最低获取10万细胞［9，24］。共识9：方案设计的目标为：明确区分表达CAR的细胞组成，以及其他细胞残留情况，尤其是MRD细胞。最低检测方案应包括CAR检测抗体、CD3、CD8（或者CD4）、靶点（例如CD19-CAR-T细胞选择CD19，CD7-CAR-T细胞选择CD7），相对优化的方案建议包括：CAR检测抗体、CD3、CD4、CD8、CD14、CD19（CD7-CAR-T细胞增加CD7）、CD56、CD45。如果细胞比例和计数允许，最好进行CAR-T细胞功能性亚群的组成检测。推荐强度：建议执行。共识10：来自自体成分的CAR-T细胞，在体外培养后回输之前，如果发现可疑细胞（例如CD19-CAR-T细胞出现CD19+细胞，或者CD19-原始细胞），应进行严格的MRD检测，方案同CAR-T细胞免疫治疗后MRD检测（表2）。推荐强度：强烈建议。共识11：CAR-T细胞回输前质量鉴定时，可以采用单平台或者双平台方法进行CAR-T细胞的绝对计数，获取细胞数最好20万以上；回输后检测患者标本时，最好获取100万细胞，至少获取10万细胞。推荐强度：强烈建议。二、常规免疫功能检测CAR-T细胞治疗后期随访中，随着CAR表达细胞比例降低到FCM检测阈值以下，或者桥接移植后，绝大多数时间点随访的是常规临床免疫功能检测，如淋巴细胞、粒细胞、单核细胞占有核细胞比例，T细胞、B细胞、NK细胞占淋巴细胞比例和绝对数，T细胞亚群中CD4和CD8占比，以及调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的检测。部分实验室会在此基础上增加CD28、CD45RA（和/或CD45RO）、CD197（和/或CD62L）、CD95、CD122等进一步区分功能性亚群，如初始T细胞（naive T cell，TN）、中心记忆性T细胞（central memory T cells，TCM）、效应记忆性T细胞（effector memory T cells，TEM）、效应性T细胞（effector T cells，TEFF）［29, 30, 31, 32］，甚至有的研究包括干细胞记忆样T细胞（stem cell memory-like T cells，TSCM），因为发现TN、TSCM和TCM表型与更长的体内持久性和更高的抗肿瘤疗效相关［33］。有的研究增加CD38、HLA-DR（可选择CD25、CD69等）检测活化信号，CD183（CXCR3）、CD196（CCR6）检测辅助性T细胞（T helper，Th）亚群等。不同实验室可能采用不同的指标来定义各功能性亚群，注意参加同一个多中心研究的各实验室需采用相同的定义；此外，注意冻存细胞的CD197和CD62L表达可能会减弱或者丢失［29, 30, 31, 32］。临床基本的淋巴细胞亚群是基于CD3、CD4、CD8、CD16+CD56、CD45、CD19的T、B、NK比例和绝对计数检测［34］，CAR-T细胞治疗涉及的常规免疫功能检测目前尚无规范化要求，建议包括Treg、TN、TCM、TEM和TEFF的检测，最好包括TSCM。推荐方案见表2。CAR-T细胞治疗后免疫功能改变因为不同研究差异很大，CD19-CAR-T细胞治疗弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）的研究［34］发现2年后依旧有29%的缓解患者CD4+淋巴细胞计数低于200/μl，因此建议部分患者需要长期随访。共识12：CAR-T细胞免疫治疗后期随访中，绝大多数时间点随访的是常规临床免疫功能检测。至少包括如淋巴细胞、粒细胞、单核细胞占有核细胞比例，T细胞、B细胞、NK细胞占淋巴细胞比例和绝对数，T细胞亚群中CD4和CD8占比，建议包括Treg、TN、TCM、TEM和TEFF的检测。推荐方案见表2。推荐强度：建议执行。三、可选择性的免疫相关检测（一）免疫检查点和免疫抑制微环境检测CAR-T细胞治疗最大的问题就是耐药和复发［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］，涉及多种复杂机制，其中免疫抑制信号和免疫微环境的研究是近年来关注重点［11, 12, 13，15］：（1）T细胞耗竭，效应细胞降低，抑制性受体表达增加。外周血中靶点表达细胞恢复是CAR-T细胞功能减弱的一个信号，CAR-T细胞耗竭是其中因素之一，有研究中将CD279［程序性细胞死亡蛋白1（programmed cell death protein 1，PD1）］、CD223（淋巴细胞活化基因3）、CD152（细胞毒性T淋巴细胞抗原4）、CD366（T细胞免疫球蛋白和黏蛋白域蛋白-3）等耗竭相关信号纳入CAR-T细胞检测方案，希望找到相关性，从而通过PD1单抗等靶向药物解除抑制信号，获得长期缓解。（2）免疫老化，年龄相关T细胞质量。随着免疫年龄和免疫老化学说的提出，以及研究发现年龄相关CAR-T细胞表型，研究中也开始将免疫老化相关信息标志纳入。（3）其他拮抗CAR-T细胞功能的信号研究。CD19阴性复发时肿瘤细胞可能会高表达CD123，使用CD123-CAR-T细胞治疗可能有效；可能与抗凋亡信号B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma-2，bcl-2）表达增强有关，监测肿瘤细胞bcl-2，高表达患者使用bcl-2拮抗剂治疗也许有效。（4）抑制性骨髓微环境，髓系来源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSC）、肿瘤相关巨噬细胞、Treg抑制了CAR-T细胞增殖与功能，通过FCM检测这些抑制性骨髓微环境，可以有助于CAR-T细胞治疗机制研究。共识13：CAR-T细胞免疫治疗后复发机制复杂，通过FCM方法进行T细胞耗竭、免疫老化、拮抗信号、抑制性免疫微环境的检测，可能有助于机制研究和探索进一步治疗。方案见表2。推荐强度：仅供参考。（二）细胞因子相关检测由于CAR-T细胞工艺和细胞来源不同，可能会产生不同的细胞因子，如外周血总CD3+T细胞来源的CAR-T细胞可能会导致多种细胞因子生成，CD4+T细胞相关因子有：IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、IL-17，而分选CD8+T细胞来源的CAR-T细胞主要生成IFN-γ、TNF-α、穿孔素和颗粒酶B。CAR-T细胞治疗的有效性和毒性相辅相成，最常见的毒副作用是CRS和免疫效应细胞相关神经毒性综合征。CRS由活化免疫细胞释放大量炎症因子引发，因此细胞因子检测与CAR-T细胞治疗疗效和副作用评估均有关，等级≥3的CRS与多功能性T细胞相关［26, 27］。每项CAR-T细胞治疗研究都会使用细胞因子来评价T细胞活化特性，基本包括IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-2。对于其他因子的选择不同研究存在差异，包括：IL-1RA、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL-31、IL-36、单核细胞趋化蛋白-1、穿孔素和颗粒酶B、促红细胞生成素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、可溶性CD25、铁蛋白等。虽然最初大多数研究使用酶联免疫吸附法（enzyme linked immune sorbent assay，ELISA）方法检测细胞因子，但近年来随着研究的深入，对更多细胞因子检测提出高通量要求。FCM的微球阵列技术（cytometric bead array，CBA）可同时测定多种细胞因子含量，相比于 ELISA，CBA标本需求量少（可实现CSF等微量标本检测）、快速、简便、多指标检测、灵敏度高、重复性好、灵活性大［35］。CSF标本的采集、运输与标本制备参见2021年相关共识［36］。共识14：CAR-T细胞免疫治疗后进行细胞因子检测，对于评价CRS等副作用有重要的辅助诊断价值，对于预测CAR-T细胞免疫治疗疗效有辅助参考价值。最低应该检测IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-2，其他因子酌情选择。推荐强度：建议执行。CAR-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域最大的突破，目前虽然遇到一些难题，但是随着技术的进步，可以预见在将来相当长的时间里这种技术会不断完善，成为经典的化疗和造血干细胞移植以外的重要补充治疗。FCM对于进一步发挥CAR-T细胞在肿瘤治疗中的作用，制定和改善方案，鉴定CAR-T细胞成分确保安全性，监测MRD评价疗效，监测免疫指标评价副作用，都起到举足轻重的作用。为了规范化FCM方案设计与操作分析，更好地促进其应用，本学会组织专家讨论达成此共识，希望能为同行和相关检验人员及临床医生提供参考。执笔人：王卉（河北燕达陆道培医院检验科），刘贵建（中国中医科学院广安门医院检验科）专家组成员（按姓名字母顺序排列）：艾利莎（华中科技大学同济医学院附属协和医院血液科），蔡英（美国BD公司），曹永彤（中日友好医院检验科），常英军（北京大学人民医院、北京大学血液病研究所），陈曼（河北燕达陆道培医院检验科），池沛冬（中山大学附属肿瘤医院检验科），丁丽（解放军空军特色医学中心血液科），段彦龙（国家儿童医学中心，首都医科大学附属北京儿童医院，儿童肿瘤中心，肿瘤内科），樊华（中国医科大学附属第四医院血液科），冯晨（解放军总医院儿科），高广勋（空军军医大学第一附属医院血液内科），韩露（南京北恒生物科技有限公司），韩为东（解放军总医院生物治疗科），洪国粦（厦门大学附属第一医院检验科），李力（南部战区总医院血液科），李壹（四川大学华西医院实验医学科），李永伟（河南省中医院，河南中医药大学第二附属医院检验科），李智伟（新疆维吾尔自治区人民医院临床检验中心），林欣（清华大学医学院基础医学系），刘贵建（中国中医科学院广安门医院检验科），刘敏（山东第一医科大学附属肿瘤医院检验科），刘耀（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心），陆佩华（河北燕达陆道培医院院长），马莉（贵州医科大学附属医院临床检验中心），毛霞（华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科），欧阳涓（中山大学附属第一医院检验科），钱文斌（浙江医科大学附属第二医院血液内科），全丽娜（哈尔滨医科大学附属肿瘤医院血液科），芮魏［华夏英泰（北京）生物技术有限公司］，桑威（徐州医科大学附属医院血液科），孙慧（山东第一医科大学附属省立医院临床医学检验部），孙士鹏（中国中医科学院广安门医院检验科），唐古生（海军军医大学第一附属医院血液病科），唐湘凤（解放军总医院儿科医学部儿童血液肿瘤科），唐晓文（苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所），王爱先（河北燕达陆道培医院检验科），王卉（河北燕达陆道培医院检验科），王慧君（中国医学科学院血液病医院血液病理诊断中心），王亮（首都医科大学附属北京同仁医院血液科），王茫桔（北京大学第一医院血液科），王平（陆军军医大学新桥医院血液科）、王巍（哈尔滨医科大学附属第二医院血液科），王瑶（解放军总医院生物治疗科），吴青青（贵州医科大学附属医院临床检验中心），吴雨洁（南京医科大学第一附属医院血液科），肖剑文（重庆医科大学附属儿童医院血液科），谢小兵（湖南省中医院附属第一医院检验科），徐翀（上海市临检中心）、杨曦明（中国中医药大学东直门医院检验科），杨再林（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心），岳保红（郑州大学第一附属医院检验科），詹茜（重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心），张爱梅（中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院检验科），张国军（首都医科大学附属北京天坛医院检验科），张继红（中国医科大学附属盛京医院血液研究室），张曦（陆军军医大学新桥医院血液科），张弦（河北燕达陆道培医院血液科），钟晓松（北京世纪坛医院临床基因与细胞工程中心），周剑峰（华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科），周茂华（广东省人民医院检验科，广东省医学科学院），朱杰（大连医科大学附属第二医院检验科），朱莉（华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科），朱明清（苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所）参考文献（略）