1、提取5 g 样品加5 mL 水,浸泡20 min,加入25 mL 乙腈,10000 rpm 下均质2 min。过滤混合物,滤液收集到比色管中,加入5 g 氯化钠,剧烈振荡,静置分层,上层清液(乙腈)过ProElut Na2SO43 g/6 mL (Cat.#65513),准确移取10 mL 干燥乙腈提取液,40 oC 下减压蒸馏至近干,瓶中残渣待净化。2、净化a 活化: 将0.1 g 石墨化碳黑均匀铺在ProElut Florisil 1 g/6 mL (Cat.#65006) 顶部,加入5 mL 正己烷,流出液弃去;b 上样: 6 mL 丙酮分三次洗涤蒸馏瓶,洗涤液加入小柱,收集流出液;c 淋洗: 20 mL 正己烷+ 丙酮混合液(1+1)淋洗,淋洗液并入b 中的流出液;d 重新溶解:45 ℃ 下将净化液减压蒸馏至干,1 mL 流动相定容,微孔滤膜过滤后HPLC 分析
、SPE 柱净化(Copure® HLB,150 mg/6 mL)活化:净化前用 5 mL 甲醇活化,5 mL 的水平衡。上样和洗脱:取 10 mL 进行上样,将提取液以 2 mL/min 的速度过柱,弃去滤液,依次用 5 mL 水,5 mL 甲醇淋洗,弃去淋洗液,将小柱抽干,再用 10 mL 甲醇洗脱并收集洗脱液。重新溶解:40℃缓慢氮吹至近干,加 1 mL 乙腈溶解。涡旋混合 1 min,过 0.22 µ m 有机滤膜,待上机测试。
免疫亲和柱净化(Copure® 赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱,3 mL)上样:取待净化样品 2 mL 过柱,弃掉流出的液体。淋洗和洗脱:加入 20 mL 水淋洗柱子,分两次淋洗,弃掉流出的液体,抽干小柱;加入 2 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱,流速约为 2-3 秒 / 滴。重新溶解:40℃下氮吹至近干,加 1 mL 初始流动相复溶,0.22 µ m 滤膜过滤,供 HPLC 分析。