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磷酸化蛋白质组

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磷酸化蛋白质组相关的方案

  • 内标掺入SILAC法用于小量组织的蛋白质组及磷酸化蛋白质组定量
    在这篇工作中，我们采用内标掺入 SILAC 的定量方法对大鼠胰岛进行了蛋白质组以及磷酸化蛋白质组的定量研究。通过对 SILAC 培养基的成分比例调整，我们优化了 INS-1E 细胞的标记方法。胰岛内包含多种细胞类型，如α 细胞，β 细胞，δ 细胞等，我们发现采用 INS-1E 细胞系（一种β 细胞系）已经可以较好的覆盖胰岛的全蛋白质组和磷酸化蛋白质组。若关心胰岛中的α 细胞的话，则可以标记α 细胞系来作为内标掺入胰岛。此外，我们还可以采用多种细胞系作为内标，这种称为“Super SILAC”的方法来完成对复杂组织蛋白质的全覆盖。 在磷酸化蛋白质组学流程中，我们采用了自制的基于StageTip 的TiO2萃取小柱来灵活的实现小量样品的磷酸化肽段富集。样品量始终是磷酸化以及其他一些翻译后修饰研究绕不过去的话题，一般来说只有增加样品量，并采取适当的预分级手段才能更深度的去覆盖这些翻译后修饰蛋白质组。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • 基于二氧化钛富集策略的人类磷酸化蛋白质组大规模鉴定
    在这部分工作中，我们采用了高 pH 反相色谱结合二氧化钛富集以及二氧化钛富集结合强阳离子交换分级两条技术路线来对实现对 Hela 细胞的磷酸化蛋白质组的深度覆盖。最终我们的实验一共鉴定到了 8,696 个蛋白质上的近 40,000 个磷酸化位点。 在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • 基于二氧化钛富集策略的人类 磷酸化蛋白质组大规模鉴定
    在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite在磷酸化蛋白质组学中的应用
    从上述结果可以得出，LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite检测结果可靠性高，系统稳定性高，质谱质量轴稳定性高，在短时间内可以鉴定到大量高可信的磷酸化修饰肽段以及磷酸化位点，可以很好的应用于磷酸化蛋白质组学研究，同时本次实验还说明对样本使用TiO2进行多次重复富集可以显著提高样本中磷酸化肽段的比例，提高磷酸化肽段与位点的鉴定数目。
  • 人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒
    人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗原、生物素化的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 精确修饰位点谱图库的建立与磷酸化蛋白质组的 DIA 解析
    PTM位点鉴定错误的概率较高，将位点错误的鉴定结果作为谱图库，会导致DIA解析结果的不可靠。实验使用Thermo ScientificTM Orbitrap Fusion三合一质谱仪，基于ptmRS/phosphoRS建立可靠的翻译后修饰DIA流程，突破了PTM DIA解析的瓶颈。使用phosphoRS/ptmRS筛选PTM定位准确的谱图，作为谱图库用于DIA，结果显示，具有精确PTM定位的谱图库中98.4%的磷酸化肽都获得了可靠的DIA解析(Q0.01)，峰面积CV值20%的肽段占86.9%，实现了准确可靠的大规模PTM DIA定量。
  • 通过磷酸化技术提高纳米级抗VEGFR2结合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性
    为了克服Adnectin存在的问题，本文设计了一种新型的Adnectin C，将其融合到含有Pro/Ala/Ser（PAS）重复残基的可生物降解多肽中。用标准方法比较大肠杆菌表达的重组融合蛋白和未融合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性。使用Linseis STA PT1600热分析仪器进行DSC和TG实验。动态光散射（DLS）分析表明，磷酸化Adnectin C的粒径增加了约2倍，净电荷略有变化。此外，PAS序列的融合提高了其抗热诱导聚集形式生长的稳定性。酶联免疫吸附试验（ELISA）和表面等离子体共振实验分别证实了酶联蛋白C的高受体结合和改进的结合动力学参数。药代动力学研究显示，单次静脉注射给雌性BALB/C小鼠后，Adnectin C-PAS#1（200）的最终半衰期显著增加了4.57倍。结果表明，磷酸化可以作为开发Adnectin衍生药物的一种更好的给药策略，提高患者的依从性。
  • 磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉改性的研究
    试验研究磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉物理性质的影响。比较三聚磷酸钠浓度、超声功率、超声时间、温度4个影响因素对淀粉的交联度、透明度、凝胶强度、糊化特性的影响。试验结果表明：磷酸化协同超声波处理可有效改玉米淀粉交联度、透明度，凝胶强度和淀粉糊化特性。磷酸化协同超声波可以有效对玉米淀粉进行改性。
  • 人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒
    人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗原、生物素化的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 蛋白质组学解决方案
    赛默飞为蛋白质组学研究提供包括创新的化学试剂、高效的分离产品、领先的色谱质谱技术、以及蛋白质组学数据处理软件产品的最先进和完整的解决方案，帮助科学家们大幅提高研究工作的效率，更有信心地面对蛋白质组学研究的挑战。
  • 人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒
    人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶M(PYGM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 定量蛋白质组学质谱采集技术进展
    质谱是定量蛋白组学的主要工具。 近年来随着定量蛋白质组学研究的深入,传统质谱定量技术面临着复杂基质干扰、分析通量限制等诸多问题。 而最近一系列质谱新技术的发展,包括同步母离子选择(SPS)、质量亏损标记、平行反应监测(PRM)、多重累积(MSX)和多种全新数据非依赖性采集(DIA)等,为解决目前蛋白质组学在相对定量和绝对定量分析方面的局限提供了有效途径。 本文对定量蛋白质组学目前遇到的瓶颈问题进行了分析,总结了质谱定量采集技术的最新进展,并评述了这些新技术的特点以及在定量蛋白质组学应用中的优势。
  • 人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 全球首款单细胞蛋白质组研究工具
    全球首款单细胞蛋白质表达定量分析系统单细胞组学是精准医学研究计划的首要组成部分，在国家精准医疗计划申请指南，排在第一位。之前只有基因水平的手段，现在美国ProteinSimple率先提供蛋白质水平的检测方法。
  • 不同蛋白提取液对动物组织全蛋白质组 鉴定的影响
    各种裂解液中含有的去垢剂均会影响胰蛋白酶活性，并且对质谱分析产生很大影响，因此均需要在蛋白质样品酶解前除去。不同的去垢剂也均有不同的去除方法，包括常用的超滤和丙酮沉淀等。在进行各种各样纷繁复杂的蛋白质组学实验时，我们需要根据我们具体的实验目的来选择合适的裂解液和裂解方法，才能保证我们后续实验顺利进行，并且获得可信的结果。
  • 一小时蛋白质组：基于Q-OT-qIT质谱系统的蛋白组学快速鉴定
    随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能.本文利用全新 Q-OT-qIT 三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化. 50 min 有效梯度, 单次实验分别从1 μ g和50 ngHeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和 2877 个非冗余蛋白, 而目前的文献报道至少需要 2~3 h. 同时, 本文考察了 Q-OT-qIT 碎裂模式、检测方法、最大注入时间和自动增益控制等参数对蛋白质组快速分析的影响, 证明了不同采集方法间的互补性, 阐述了不同扫描参数对鉴定结果的影响. 此外, 还讨论了Q-OT-qIT 的并列运行原理和扫描组合模式, 为不同实验目的和样本类型的蛋白质组快速分析奠定了基础.
  • 人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 高通量人蛋白质组定量分析
    Q Exactive HF， DDA，DIA，293T，定量蛋白质组学数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition， DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式(1)。DIA 扫描模式中，超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并快速地依次扫描相邻的母离子窗口内的所有碎片离子。DIA 的数据中包含了所有碎片离子的保留时间和强度信息。用非常小的质量偏差窗口（如 10 ppm）目标性地抽提同一肽段的多个子离子，计算子离子的强度，就能对该肽段进行鉴定和定量。 DIA 定量相比传统的基于母离子强度的 DDA 定量有选择性好，定量准确等优点，所以 DIA 成为定量蛋白组学新的热门发展方向 (2)。Q Exactive HF 是赛默飞世尔科技在 2014 年的 ASMS 上推出的全新静电场轨道阱超高分辨质谱仪(3, 4)。Q Exactive HF 采用了分段式四极杆技术（Advanced Quadrupole Technology，AQT）使离子传输效率至少提高了 2 倍；超高场 Orbitrap 技术，提高了 Orbitrap 扫描速度，在 15000 分辨率时，二级谱图的扫描速度是 18 Hz。这两项技术提高了 Q Exactive HF 进行 DDA、DIA 数据的采集能力。本文用 Q Exactive HF 质谱，170 min 色谱梯度对 293T 细胞蛋白质组进行 DIA 定量分析，考察 Q Exacive HF DIA 定量的能力。
  • 一种用于磷酸肽鉴定和磷酸化位点定位的新型自动化、高选择性磷酸肽富集方法
    针对 HUPO 磷酸肽挑战赛，使用 AgilentAssayMAP Bravo 平台和 LC/Q-TOF 系统进行自动化磷酸肽富集以实现定性和定量分析。执行 CID 肽鉴定实验，在“磷酸肽”样品中鉴定出 437 种特有肽段，其中包括94 种磷酸肽。鉴定出 HUPO 序列表中的所有 89 种非磷酸肽。ECD 实验基于 89个非磷酸肽序列确定了 96 种磷酸肽的磷酸化位点。还将序列表中未列出的其余肽返回给 HUPO。在富集的“磷酸肽-酵母”样品中，鉴定出 287 中特有肽段，其中包括 264 种特有磷酸肽。富集的总体选择性约为 92.0%。此外，从富集的“磷酸肽-酵母”样品中仍鉴定出加入酵母中 96 种磷酸肽中的95 种。与开展本研究中的其他实验室相比，安捷伦从富集样品中回收的磷酸肽数量最多。
  • ACQUITY UPLC M-Class在蛋白质组学纳升级应用中的性能
    ACQUITY UPLC M-Class系统能够在蛋白质组学应用中以纳升级流速运行，具有以下优势：1.出色的色谱保留时间重现性、峰容量和灵敏度2.无论是分析相对简单的样品还是较为复杂的胰蛋白酶酶切的肽混合物，都能展现优异的性能
  • Orbitrap Fusion Lumos实现蛋白质组的快速深度分析
    第二代“三合一”质谱——Orbitrap Fusion Lumos 通过诸多技术革新和性能深度优化，除解决复杂糖肽结构解析、完整蛋白Top-Down 分析等最具挑战的疑难问题外，也能够很好地进行复杂样品中的低丰度蛋白/化合物定性定量，更为高效地进行蛋白质组学深度测定，并应用于大规模临床样本等的高强度检测。
  • 基于Orbitrap Fusion Lumos质谱进行血浆蛋白质组高通量深度解析
    血液是最重要的临床检验样品来源。精准医学研究中的大队列生物标志物研究对于分析方法提出了高通量和高稳定性的要求，利用Orbitrap Fusion Lumos质谱极佳的灵敏度和稳定性，我们发展了一种快速、稳定的高通量血浆蛋白质组研究策略。简化的前处理步骤通量高、稳定性好，仅用1小时梯度即可定量700种蛋白，2.5小时梯度可定量超过1000种蛋白。基于高通量的深度血浆蛋白质组解析，我们可从大规模临床队列中发现潜在的生物标志物，助力精准医学研究。
  • 蛋白质测定仪检测奶粉蛋白质应用
    蛋白质测定仪是一种用于快速测定奶粉中蛋白质含量的仪器。在奶粉生产过程中，控制蛋白质含量是非常重要的，因为蛋白质是婴儿生长发育所必需的营养素。通过使用蛋白质测定仪，可以及时了解奶粉中蛋白质的含量，确保产品质量和婴儿的健康。
  • 使用蛋白质测序仪检测半胱氨酸和胱氨酸
    目前，在蛋白质的分析中，使用质谱仪及利用基因组数据库搜索引擎进行蛋白质鉴定的蛋白质组分析是主流的分析技术。体内表达的蛋白质经过翻译后修饰而具有各种功能，并且前体和成熟蛋白质之间可能具有不同的理论质量数。在不使用数据库的情况下，使用质谱仪鉴定氨基酸序列非常复杂和困难。另一方面，作为常规方法，使用埃德曼降解法的蛋白质测序仪所得到的氨基酸序列结果的可靠性高，即使在数据库不充分的情况下，也可以轻松地鉴定氨基酸序列。本次为您介绍使用蛋白质测序仪PPSQ™ -50A系统（等度系统和梯度系统）对含有半胱氨酸和胱氨酸的样本进行氨基酸序列分析的实例。
  • 使用ProSightPD进行top-down蛋白质鉴定
    使用ProSightPD可对复杂蛋白质混合物进行自动化的高通量top-down蛋白质组学研究。仅用5 µ g蛋白，即可鉴定到大肠杆菌核糖体蛋白复合物中超过90%的组成蛋白。得益于Orbitrap质谱的高分辨率和高质量串联谱图，ProSightPD可精准测定蛋白质序列、蛋白翻译后修饰类型及位点。这一工作流程可用于蛋白复合物的组成研究和翻译后修饰研究等，与bottom-up和native MS等蛋白质组学技术互为补充，提供更加全面的蛋白质结构信息。
  • 使用格哈特系列营养分析仪器进行添加磷酸钙的特殊医学用途配方食品中总脂肪、总膳食纤维、蛋白质的测定
    补充磷酸钙对人体胆固醇代谢的影响Cholesterol Metabolism Is Affected by Calcium Phosphate Supplementation in Humans食品总脂肪使用格哈特全自动索氏提取仪soxtherm在酸水解后进行索氏提取测定食品中总膳食纤维使用酶重量法测定 食品蛋白质含量使用蛋白质转换系数6.25计算
  • 凯氏定氮仪测定蛋白质粘胶短纤维中的蛋白质含量
    蛋白质粘胶短纤维，在粘胶液中加入蛋白质溶液，纺制成的粘胶短纤维。是人造纤维的一个类别，由从牛奶、大豆、花生、蚕蛹等自然物中提取到的蛋白质为原料，溶解于适当溶剂中所制得的纤维。天然蛋白质制成的蛋白质纤维与羊毛的性质差不多 。基本结构单元都是氨基酸，以酰胺键(肽键)结合在一起的高分子。比天然羊毛优越之处在于不易皱缩，不易虫蛀，易保存；缺点是保暖性及柔软性较天然羊毛差些。本实验参照《FZ/T 54028-2010 蛋白质粘胶短纤维》对蛋白质粘胶短纤维中的蛋白质含量进行测定。
  • 高效微流电动液相色谱系统-质谱法在线富集蛋白质
    采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统，配备ESI-MS检测器，通微 EP-100-20/30-3- C18色谱柱，通过在线富集，可以实现对低浓度蛋白质的检测。蛋白质标准品的检出限可提高20-100倍，此方法已成功应用于浓度为20 mg / mL的蛋白质的分析。结果表明我们提出的方法可能在蛋白质组学研究中发挥重要作用。
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