免疫荧光方法

[font='calibri'][size=13px]10种免疫荧光检测方法详解！从入门到专业！[/size][/font]免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，接下来的实验方法希望可以帮到您。1. 细胞固定和通透为达到蕞佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。步骤很重要，细胞和抗原需要保证蕞佳的结构，并利于抗体与抗原结合。通常情况下，2. 抗体特异性免疫荧光需要用到特异性非常强的抗体，可以避免高背景和不理想的蛋白定位结果。在大多数情况下，纯化抗体的效果很好，但是正确的对照可以帮助精-准定位抗原。使用只有二抗染色的片子作为阴性对照，有利于减少降低背景干扰。3. 合适的抗体稀释比例通过优化抗体稀释比例来优化染色，通常情况下 1ug/ml 的纯化抗体或者 1:100-1:1000 的抗血清足够达到特异性染色的结果。但在能保证低背景染色的前提下，可以通过增加浓度来提高信号强度。如果是第1次使用该抗体或测定某抗原，强烈建议浓度梯度实验。4. 优化缓冲液和封闭剂尽管很多抗原在常见的 Buffer 如 PBS 中可以很好的被染色，但是对于某些目的抗原，更换一下含有不同离子的缓冲液，比如钙、镁、钾等，可以带来很大程度上的改善。Rockland 可提供优化过的 IHC 用封闭缓冲液，同样适用于荧光染色实验。5. 选择正确的二抗如果您需要做免疫实验，我们强烈建议您选择进行过预吸附的二抗进行单染实验；如果是双重甚至是多重染色，那么必须使用预吸附的二抗。同时，请优先选择来自同一物种的二抗。6. 使用合适的细胞密度选择合适的细胞数量进行染色，当细胞数量过多时，细胞结构不好，导致染色背景深，低细胞密度，会使细胞贴壁不佳，状态不好。7. 多重染色对同一样本进行两个不同抗原的检测时，可以用各自的抗体进行同时染色，但要求两个一抗的种属来源不同，标记物不同，而二抗的种属来源需保持一致。8. 降低背景高背景是免疫荧光常见的问题，解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液，降低抗体浓度，增加洗涤次数，洗涤至少三次，每次五分钟，推荐洗涤液为 PBS+0.05%Tween。9. 封片作为免疫荧光的蕞后一步，可以提高折射率，保护样品。10. 数据分析观察整体样片时，选择具有代表性的细胞进行数据获取与分析。以上是10种检测方法，但是针对免疫荧光检测服务，推荐义翘神州，服务优势：①技术员长期从事抗体质量控制工作，经验丰富。②拥有包括Nikon A1激光共聚焦显微镜等重要仪器，可满足您对样片、活细胞等样本的静态和动态观察拍摄。③检测结果准确、重复性高，实验结果可直接用于论文发表。更多免疫荧光检测服务详情可以参看https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service

[font=宋体]免疫荧光法和免疫印迹法是生物学领域中两种常用的实验技术，它们在原理、操作过程和应用方面有着显著的区别。本文将详细探讨这两种技术的区别，以便更好地理解它们的特点和应用价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先，我们来了解免疫荧光法。免疫荧光法是一种利用荧光物质标记的特异性抗体来检测细胞内或细胞表面抗原的技术。其基本原理是抗原抗体反应，通过荧光显微镜观察荧光标记的抗原，从而实现对抗原的定位和定量分析。免疫荧光法具有高灵敏度、高特异性和定位准确的特点，广泛应用于细胞生物学、微生物学、免疫学等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相比之下，免疫印迹法则是通过检测细胞或组织提取物中特定抗原的存在和分布，以了解其在生物学过程中的作用。这种方法通常涉及到蛋白质的提取、分离、转移和检测等步骤。免疫印迹法能够检测蛋白质的分子量、表达水平以及与其他分子的相互作用，为生物学研究提供了重要的信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在操作过程上，免疫荧光法主要涉及细胞的固定、通透、抗体孵育和荧光显微镜观察等步骤。而免疫印迹法则需要进行蛋白质的提取、电泳分离、膜转移、抗体孵育和显色等复杂操作。因此，从操作难度和复杂性来看，免疫印迹法相对更为繁琐。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在结果解读和应用方面，免疫荧光法能够提供直观、定位准确的抗原分布信息，有助于研究细胞的结构和功能。而免疫印迹法则能够揭示蛋白质的表达水平、分子量和相互作用，为疾病诊断、药物研发和生物学机制研究提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外，免疫荧光法和免疫印迹法在应用领域上也有所不同。免疫荧光法广泛应用于细胞生物学、微生物学、免疫学等领域，特别是在病毒检测、细胞信号转导和细胞凋亡等研究中发挥着重要作用。而免疫印迹法则更多地应用于分子生物学、生物化学和病理学等领域，对于研究蛋白质的结构、功能和调控机制具有重要意义。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]免疫荧光法和免疫印迹法优缺点介绍：[/font][/b][font=宋体] [/font][table][tr][td][font=宋体]技术[/font][/td][td][font=宋体]优点[/font][/td][td][font=宋体]缺点[/font][/td][/tr][tr][td=1,4][align=center][font=宋体]免疫荧光法[/font][/align][/td][td][font=宋体]特异性强[/font][/td][td][font=宋体]非特异性染色问题尚未完全解决[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]敏感性高[/font][/td][td][font=宋体]操作程序较复杂[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]速度快[/font][/td][td][font=宋体]需要特殊的昂贵仪器（荧光显微镜）[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]早期诊断价值[/font][/td][td][font=宋体]染色标本不能长期保存[/font][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font=宋体]免疫印迹法[/font][/align][/td][td][font=宋体]操作简便[/font][/td][td][font=宋体]对于低丰度的抗原可能不够敏感[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]所需实验材料相对简单[/font][/td][td][font=宋体]无法提供抗原在细胞或组织中的定位信息[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]对某些特定抗原的检测具有较高的灵敏度[/font][/td][td][font=宋体]需要一定的实验技能和经验[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述，免疫荧光法和免疫印迹法是两种具有不同特点和应用领域的实验技术。免疫荧光法注重抗原的定位和定量分析，操作简便直观；而免疫印迹法则关注蛋白质的表达和相互作用，操作相对复杂但能提供深入的信息。在实际应用中，我们需要根据研究目的和需求选择合适的技术手段，以获取准确、可靠的实验结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]IF[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体]）是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合，以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化，是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原，原理相似，只是显色剂不同，免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理，即抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应确定组织细胞中的抗原，使标记有抗体的显色试剂显色，并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中，常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素，被标记在抗体或抗原上，然后与其对应的抗原或抗体结合，在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一，具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足，技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断，以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台，为客户提供高质量的免疫荧光检测服务，包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测服务和石蜡切片免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测服务，有需求的朋友可以来义翘官网进行查询，详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=59511]免疫荧光[/url]

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[font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化技术[/font] [font=Calibri](Multiplex immunohistochemical[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]mIHC) [/font][font=宋体]也称作酪氨酸信号放大 [/font][font=Calibri](Tyramide dignal amplification[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]TSA) [/font][font=宋体]技术，是一类利用辣根过氧化酶 [/font][font=Calibri](Horseradish Peroxidase, HRP) [/font][font=宋体]对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这一技术基于酪胺信号的放大效应，实现对单个细胞或组织样本上多个目标靶点的同时检测。这为全面研究细胞组成、细胞功能以及细胞间的相互作用提供了强大的工具。通过多重荧光免疫组化技术，科学家们可以更深入地了解细胞的奥秘，揭示生命现象的复杂性。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]实验原理及流程[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]技术采用 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]标记的二抗，[/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]催化加入体系的 [/font][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]衍生荧光染料，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，将信号共价结合到抗原上。之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]原理：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]带有染料标记的底物酪胺[/font] [font=Calibri](T) [/font][font=宋体]分子在过氧化氢氧化环境下，被抗体或探针固定的 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]转化为具有短暂活性的中间状态 [/font][font=Calibri](T*)[/font][font=宋体]，然后被激活的中间态分子 [/font][font=Calibri](T*) [/font][font=宋体]迅速与相接蛋白分子的富含电子区域 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]酪氨酸残基[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]进行稳定的共价结合，未被标记的酪胺分子将被洗脱，借此实现对抗原的特异性染色。由于相接的蛋白 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括 [/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]，抗体，目标抗原[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]都含有大量的酪氨酸结合位点，所以目标抗原处会富集大量标记分子，使信号被有效放大 。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]多重免疫荧光染色的步骤包括样品制备、抗原诱导、抗原解露等。[/font][/b][font=宋体]具体如下：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备：根据细胞或组织的不同，选择不同的处理方式。对于细胞样品，需要固定和渗透化处理以保持其形状和蛋白质结构。对于组织样品，需要切片并进行染色前的去脂处理。[/font][font=宋体]②抗原诱导：如果目标标记物是蛋白质，那么需要选择适当的抗体来识别目标蛋白质。抗体可以人工合成或从动物体内提取。[/font][font=宋体]③抗原解露：对于细胞样品，可以利用活液解离细胞，并将细胞固定在载玻片上。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]与 [/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]区别与联系[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]免疫组化[/b][/url]，是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性的研究。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说，[/font][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]属于 [/font][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]的升级版本！[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Tips[/font][font=宋体]：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相同点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]能够完整显现组织原位形态信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不同点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]常规免疫组化的分析属于定性分析，其判断大多依赖于经验，其分析结果会有差异。而多重荧光免疫组化属于定量分析，其利用软件可对组织中的细胞进行精准的结果分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]常规免疫组化受传统染色成像的限制，靶标少于 [/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]个，无法完整分析组分信息。而多重荧光免疫组化可实现多因子共定位，可以获取更多的生物信息，且样本需求量较少。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段，配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件，提供更优质的图像质量，收获更特异的染色结果。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]免疫组织化学[/b][/url]（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）是一种实验技术，通过使用一抗来检测组织切片中细胞内的蛋白质（抗原）。在间接检测法中，一抗常与辣根过氧化物酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）偶联的二抗结合。最后，利用如[/font][font=Calibri]DAB[/font][font=宋体]等底物来显现染色，以可视化抗原的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]辣根过氧化物酶标记的二抗通常用于如免疫印迹、酶联免疫吸附试验以及免疫组织化学等应用。然而，对于免疫荧光而言，二抗需要带有在激发光下激发的荧光基团，常用的标记物为异硫氰酸荧光素[/font][font=Calibri](FITC)[/font][font=宋体]和罗明达[/font][font=Calibri]B200(RB200)[/font][font=宋体]标记的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]因此，[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记的二抗不能直接用于免疫荧光。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]使用[/font] [font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗时，优化 [/font][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]实验的简便技巧[/font][font=Calibri]:[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]①选择合适的 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗[/font][/font][font=宋体][font=宋体]务必确保[/font] [font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗与一抗的相容性。举个例子，如果一抗在兔体内制备，则应使用抗兔 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗。如需了解更多技巧，请查看我们的二抗选择指南。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②在 [/font][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]染色过程中，如何选择 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗的初始稀释度？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗的最佳稀释度取决于一抗。我们建议在 [/font][font=Calibri]1/1,000 [/font][font=宋体]至 [/font][font=Calibri]1/100,000 [/font][font=宋体]这一范围内进行试滴定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③对于 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]标记的二抗，建议使用哪种缓冲液？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]可使用含[/font] [font=Calibri]TBS [/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]1% BSA[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]Abcam [/font][font=宋体]建议使用 [/font][font=Calibri]TBS[/font][font=宋体]，因为 [/font][font=Calibri]TBS [/font][font=宋体]的背景比 [/font][font=Calibri]PBS [/font][font=宋体]更干净。如果仍然遇到高背景染色，您可以增加 [/font][font=Calibri]BSA [/font][font=宋体]浓度或使用含 [/font][font=Calibri]5% [/font][font=宋体]牛奶的 [/font][font=Calibri]TBS[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]请注意，二抗可能与组织中的内源性免疫球蛋白发生交叉反应。用二抗种属的普通血清预处理组织，可最大限度地减少交叉反应。一抗孵育前，使用普通血清进行封闭还可避免[/font] [font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]受体与一抗和二抗的结合。加入 [/font][font=Calibri]BSA [/font][font=宋体]能够减少疏水作用引起的非特异性结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④是否需要预吸附二抗？[/font][font=宋体][font=宋体]预吸附二抗可减少非特异性背景，因为它们不太可能表现出种属交叉反应性，或与预吸附种属的内源性抗原反应。二抗应针对样本来源种属进行预吸附。例如，对人体组织或细胞进行染色时，建议使用预先吸附了抗人血清的[/font] [font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤什么是证明二抗特异性染色的良好对照？[/font][font=宋体][font=宋体]为了证明二抗与一抗发生特异性反应，我们建议进行对照试验，即添加不含一抗的[/font] [font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗。如果在对照样本中观察到染色，则结果表明 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]二抗与组织上的内源性免疫球蛋白发生非特异性反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥孵育时间[/font][font=宋体][font=宋体]室温孵育[/font] [font=Calibri]1 [/font][font=宋体]小时即可。如果信号较弱，可于 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]孵育过夜。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看优质[url=https://cn.sinobiological.com/category/secondary-antibodies-list][b]二抗[/b][/url]列表页：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/secondary-antibodies-list[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

一、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。二、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。三、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。四、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。2）免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。 本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。 免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。3）免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。五、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。六、特点 1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。七、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同 1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。

[font=Calibri][font=宋体]免疫组化技术，运用免疫学的基本原理[/font][font=Calibri]——[/font][font=宋体]抗原抗体反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。通过化学反应，使标记在抗体上的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显现颜色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质）。该技术不仅对这些抗原进行定位，还能进行定性和相对定量的研究。这种技术被称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]。[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]免疫组化，简而言之，是免疫学、组织学和化学的完美结合。它利用免疫学方法对组织进行标记，再通过化学方法进行染色，从而标记出组织中的特定蛋白或一组蛋白。这项技术目前在临床病理诊断中得到了广泛应用，并衍生出了多种技术变种，如免疫细胞化学、免疫组织荧光等，为生物医学研究提供了强大的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、免疫组化技术的基本原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂[/font][font=Calibri]DAB[/font][font=宋体]显示为棕黄色颗粒）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、免疫组织化学染色方法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）；与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗过氧化物酶（[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]）法和亲和连接，如卵白素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物（[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]）法、链霉菌抗生物素蛋白[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶连结（[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]）法等，其中[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法是最常用的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、几种常用免疫组织化学方法的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫荧光方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫酶标方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法是继免疫荧光后，于[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的当属[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、免疫胶体金技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如葡萄球菌[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]蛋白[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、免疫组化技术的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、特异性强 免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（[/font][font=Calibri]keratin[/font][font=宋体]）显示上皮成分，[/font][font=Calibri]LCA[/font][font=宋体]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、敏感性高 在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法或[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定位准确、形态与功能相结合 该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测优缺点有哪些？免疫学检测方法分享[/size][/font]免疫学检测优缺点介绍：免疫学检测具有快速、简便、高灵敏度和特异性等优点，因此在医学诊断和治疗中广泛应用。但是，免疫学检测也存在一些缺点，例如价格较高，对于某些特定的毒素可能无法检测，并且检测过程中可能会受到多种因素的干扰，例如操作不规范、实验条件不严格等。总之，免疫学检测具有很多优点，但也存在一些缺点，需要在实验设计、操作规范和质量控制等方面加强管理，以提高检测的准确性和可靠性。免疫学检测方法包括以下几种：①抗原抗体反应的相关检测，主要是免疫组化、免疫荧光、血凝抑制、放射免疫等。其中，免疫组化是应用标记的特异性抗体，在组织细胞原位，通过抗原抗体反应和酶底物的显色反应，对细胞中的抗原进行定位、定性的检测方法，是比较常用的一种方法。②免疫细胞的检测，主要包括细胞毒试验、FCM流式细胞术等。其中，细胞毒试验常用于肿瘤的免疫移植、排斥反应和病毒感染等方面的研究。③酶联免疫吸附试验（ELISA），是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上酶，抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来，根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果，其敏感度可达ng水平。④免疫金胶体技术、胶体金技术等，是将二抗标记上胶体金颗粒，利用抗原抗体间的特异性反应，最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上，此方法简单、快速、广泛应用于临床筛查。义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，义翘神州免疫学检测服务优势：? 拥有成熟的免疫检测体系；? 大量优质的蛋白和抗体产品支撑；? 先进的实验仪器，经验丰富的技术员；? 优良的实验环境，完善的实验平台，为您提供最优质的服务。同时包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。更多免疫学检测服务尽在https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测形成的原因有哪些？免疫学[/size][/font][font='calibri'][size=13px]检测包括哪些？[/size][/font]免疫学检测形成的原因：免疫学检测是基于免疫系统对外来物质或抗原的反应而产生的，可分为体液免疫学检测和细胞免疫学检测两大类。体液免疫学检测是通过血液、唾液、乳汁等体液样本中的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等成分的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗体和细胞因子等免疫反应，这些免疫反应产物可通过体液免疫学检测方法进行检测。细胞免疫学检测是通过检测机体内的免疫细胞和免疫分子的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗原提呈细胞，并引导记忆细胞和效应细胞的产生，这些记忆细胞和效应细胞可以在特定情况下识别和消灭病原体或肿瘤细胞，这些细胞和效应细胞本身也可以被检测出来。总之，免疫学检测的目的是通过检测机体的免疫反应，了解机体的免疫状态，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。免疫学检测包括哪些？免疫学检测是指通过各种方法检测机体对病原体或某些生物物质的免疫反应程度，以及机体内的免疫细胞、免疫分子和免疫活性物质的含量及其分布等情况的一种医学技术。免疫学检测广泛应用于各种疾病的诊断、治疗和预防，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫学诊断等。以下是一些常见的免疫学检测项目：体液免疫学检测：主要包括免疫球蛋白的测定，如IgA、IgM、IgE等；补体检测，如总补体溶血活性、补体C1、C2等；免疫复合物检测，如抗体-抗原复合物、补体-抗体复合物等；细胞免疫学检测：主要包括T细胞亚群分析、B淋巴细胞分化抗原检测、自然杀伤细胞抗体检测、T细胞活化抗体检测等；抗体检测：如抗药抗体、中和抗体等；细胞因子检测：如白细胞介素-2、-4、-6等；自身抗体检测：如抗核抗体、抗胰岛素抗体等；感染免疫检测：如病毒特异性抗体、细菌特异性抗体等。总之，免疫学检测是一种非常重要的医学技术，可以帮助医生判断机体的免疫状态，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原，可定性、定位和定量的检测。依托自主研发生产的优质抗体、蛋白试剂、先进的实验仪器以及经验丰富的技术人员，义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。义翘神州免疫学检测服务包含：①WB/Sally Sue高通量检测服务②[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测服务[/url]③免疫组化检测服务④多重免疫荧光和免疫组化服务⑤免疫荧光检测服务⑥HE染色及特殊染色服务⑦ELISA/ELISpot检测服务⑧IP/Co-IP检测服务⑨TMA芯片定制服务更多详情可以查看：https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

用于免疫荧光读取仪日常检查的QC质控卡怎么制备？

[font=宋体]多重免疫组化（荧光）染色技术，以其高精度描绘肿瘤微环境中肿瘤与免疫细胞状态的能力，为肿瘤的精准诊断提供了不可或缺的参考信息。该技术不仅深入揭示了免疫细胞亚群的比例和分布，还特别关注免疫细胞与肿瘤细胞间的空间关系，这些关键信息对于肿瘤预后评估和免疫治疗策略制定具有重大意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]还可通过与组织芯片、转录[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蛋白组测序、单细胞测序等技术相结合，去完成各项高通量检测技术的验证任务。根据不同的原理，有不同的方法。下面我们就来一起来了解下这[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]类常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]染色去除技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]作为[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]常用的方法之一，染色去除技术在不同的平台上被开发出来用于研究肿瘤组织样本。该技术的基本原理是清除样品中的一种标记后，再用一种新的不同标记对样品进行染色，并重复该过程，并实现在单个样品中检测多种抗原，不同的染色去除技术如图[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]荧光基团失活技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]荧光基团失活技术（[/font][font=Calibri]Fluorophore inactivation technologies[/font][font=宋体]）的技术原理与荧光去除技术的原理大体相似。差别在于，它不是通过改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]条件，变性、光漂白来去除荧光，而是通过化学灭活来消除荧光基团。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在该技术原理基础上开发的芯片式成像深度分析系统（[/font][font=Calibri]ChipCytometry[/font][font=宋体]），是一种基于成像的细胞术平台，结合了多重标志物显微成像和流式数据分析法，从根本上实现了对传统方法的各类局限的突破，并可以对细胞和组织切片的生物标志物的表达和空间分布进行成像可视化检测分析。德国柏林[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]勃兰登堡再生医学中心也借助该技术完成了人胎盘冷冻切片中原位检测间充质干细胞（[/font][font=Calibri]MSCs[/font][font=宋体]）多种表面标志物如[/font][font=Calibri]CD73/CD90/CD105/CD45/CD34/CD19[/font][font=宋体]的表达及空间分布分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]多重信号放大技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了克服检测低表达抗原的局限性，随着科技的发展，多重信号放大技术应运而生。该技术包括基于多重修饰半抗原、酰胺信号放大（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]）和纳米晶体量子点等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其中，[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]是常用的多重信号放大技术之一。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]是在传统的免疫组化染色基础上，基于信号分子沉淀原理，在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]存在时，抗体上标记的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]将荧光物质标记的底物酪胺（[/font][font=Calibri]t[/font][font=宋体]）转化为具有短暂活性的中间状态（[/font][font=Calibri]t*[/font][font=宋体]），然后被激活的底物分子迅速与相接蛋白分子的富含电子区域（酪氨酸残基）进行稳定的共价结合；由于相接蛋白（抗原、[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]等）都含有大量的酪氨酸结合位点，所以会富集大量信号，使得信号被有效放大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多轮不同种类荧光物质标记的底物酪胺的染色，即可在一张样本上实现多色免疫荧光标记。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的优点是，可通过共价结合的方式将荧光信号结合到目标样本上，不易丢失，且经[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]放大后信号更强。缺点则是由于荧光信号的交叉作用，针对一份样本染色种类较多时，容易出现串色的情况（这一点[/font][font=Calibri]ChipCytometry[/font][font=宋体]技术倒是做的很好），也因此，多色标记的数量受到了限制，最多仅能做到在一张样本切片上进行[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]色的荧光染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.DNA[/font][font=宋体]条形码技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]条形码技术（[/font][font=Calibri]DNA Barcoding Technologies[/font][font=宋体]）是利用标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段（[/font][font=Calibri]DNA barcode[/font][font=宋体]）在物种种内的特异性以及种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统，该技术利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的特性，可以达到扩展[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]能力的目的。基于[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]条形码技术开发的[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]技术种类较多，这里我们简单介绍下，空间多靶标分析技术（[/font][font=Calibri]Digital Spatial Profiling[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]DSP[/font][font=宋体]）是一种基于紫外光可切割的寡核苷酸标签，可与抗体或[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]杂交探针耦合，来检测蛋白质与[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的高复杂度空间信息的分析方法。该技术使用紫外线将抗体上的高聚寡核苷酸标签解耦，并从组织表面提取，使样品可以重复使用。寡核苷酸条形码再经过定量分析，并反应组织的空间原位信息，可以帮助研究者在复杂的疾病或是组织中快速、精准地量化其异质性，有助于生物标记的发掘及疾病致病机理的深入研究。[/font][font=Calibri]DSP[/font][font=宋体]已被成功用于分析接受检查点阻断治疗的黑色素瘤患者的肿瘤特征，并证明基线免疫浸润与治疗反应之间存在相关性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]质谱流式细胞技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]质谱流式细胞技术（[/font][font=Calibri]Mass Cytometry[/font][font=宋体]）是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。它既有传统流式细胞仪高速分析的特点，又具有质谱检测的高分辨能力。[/font][/font][font=宋体]与传统[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞技术[/b][/url]的差别在于：[/font][font=宋体]第一、传统流式使用各种荧光基团作为抗体的标签，质谱流式则使用各种金属元素作为标签；[/font][font=宋体][font=宋体]第二、传统流式使用激光器和光电倍增管作为检测手段，质谱流式则逐个通过[/font][font=Calibri]ICP[/font][font=宋体]质谱检测装置，对每个细胞中各种金属标签进行定量检测，进而得知每个细胞中各目标蛋白的含量。应用该技术所引申出的[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]成像质谱流式技术（[/font][font=Calibri]Imaging mass cytometry[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IMC[/font][font=宋体]），其实是将免疫组化方法与经过充分验证的[/font][font=Calibri]CyTOF[/font][font=宋体]（质谱流式）技术完善融合，可以生成细胞标志物、转录产物以及转导信号等多种因子的组织结构图像。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段，配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件，提供更优质的图像质量，收获更特异的染色结果。更多多重染色服务详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验法（Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA），本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后，现已引起广泛重视。 ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面： 1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 2、研究抗酶抗体的合成。 3、显现微量的免疫沉淀反应。 4、定量检测体液中抗原或抗体成份。 二、方法的基本原理和种类 ELISA的基本原理有三条： （1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。 由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。

[align=center][font='楷体']免疫微环境角度探索NSCLC患者免疫治疗标记物[/font][/align][font='楷体'][size=16px]本实验[/size][/font][font='楷体'][size=16px]纳入100例一线接受免疫治疗且临床信息完整的晚期NSCLC患者，并对其基线组织标本分别进行以下检测：多基因NGS测序、PD-L1表达、肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）多重免疫荧光（Microenvironment analysis panel，MAP）检测和T细胞炎性基因表达谱（GEP）检测；同时在整个治疗过程中密切随访，直至一线免疫治疗进展。本研究通过收集患者的临床转归资料，探讨患者肿瘤组织DNA变异情况、PD-L1表达情况、以及免疫微环境特征（包括TILs和GEP）等多维度指标与免疫联合化疗疗效之间的关系。从基因突变、TMB、PD-L1表达以及免疫微环境特征等多维度探寻潜在的生物标志物，旨在利用综合指标体现肿瘤免疫微环境的真实状态，为受益人群的精准选择提供全面准确的依据。[/size][/font][size=16px]本研究通过探讨患者肿瘤组织[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]变异情况、[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]表达情况、以及免疫微环境特征（包括[/size][size=16px]TILs[/size][size=16px]和[/size][size=16px]GEP[/size][size=16px]）等多维度指标与免疫联合化疗疗效之间的关系，从基因突变、[/size][size=16px]TMB[/size][size=16px]、[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]表达以及免疫微环境特征等多维度探寻免疫治疗潜在的生物标志物。为[/size][size=16px]NSCLC[/size][size=16px]患者精准免疫治疗提供更多参考。[/size][size=16px]从基因突变、[/size][size=16px]PD-L [/size][size=16px]表达以及免疫微环境角度探索[/size][size=16px]NSCLC[/size][size=16px]患者免疫治疗疗效标记物，构建可预测免疫治疗疗效的模型。[/size][font='楷体']创新点[/font][font='楷体'][size=16px]1[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）本研究采用靶向捕获测序的方式对520个基因进行突变筛查，其中310个基因进行全外显子捕获，210个基因进行热点区域的捕获。采用专利算法进行TMB计算和MSI状态的评估，前期经过大量临床验证，保证算法的准确性和结果的可靠性；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]2[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）采用靶向RNA测序的方式检测81个T细胞炎性基因的表达量，采用独特的链特异性建库技术和双端UMI矫正，保证90%的捕获效率，确保可利用低起始量的FFPE样品实现准确的基因表达分析；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]3[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）采用多重免疫荧光检测技术，进行组织免疫微环境相关指标的分析。在同一张组织切片上从包括肿瘤实质和肿瘤间质的维度上实现CD3+T细胞、CD8+细胞毒性T细胞、PD-1、PD-L1表达的检测。[/size][/font][font='楷体'][size=16px]1[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）通过基因芯片目标区域捕获和高通量测序对非小细胞肺癌患者进行遗传、治疗、预后及风险控制全方位信息分析；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]2[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）对非小细胞肺癌肿瘤细胞进行全面免疫微环境特征分析，包括RNA测序检测T细胞炎性基因表达谱的分析，以及多重免疫组化进行肿瘤T淋巴细胞浸润[/size][/font][font='楷体'][size=16px]分析；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]3[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）综合分析基因变异、PD-L1表达及免疫微环境特征（包括TILs和GEP）在非小细胞肺癌中表达及其与免疫治疗临床效果相关性。[/size][/font][font='楷体'][size=16px]（1）[/size][/font][font='楷体'][size=16px]小结[/size][/font][font='楷体'][size=16px]1）明确[/size][/font][font='楷体'][size=16px]NSCLC患者[/size][/font][font='楷体'][size=16px]突变特征，包含高频突变基因、突变类型等，探讨[/size][/font][font='楷体'][size=16px]NSCLC[/size][/font][font='楷体'][size=16px]临床表型-基因型相关性；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]2）明确[/size][/font][font='楷体'][size=16px]NSCLC患者[/size][/font][font='楷体'][size=16px]免疫微环境特征，包括各类型免疫细胞在该类患者中的浸润情况，探讨[/size][/font][font='楷体'][size=16px]NSCLC[/size][/font][font='楷体'][size=16px]临床表型-免疫特征相关性；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]3）将[/size][/font][font='楷体'][size=16px]患者[/size][/font][font='楷体'][size=16px]免疫治疗的疗效标记物与[/size][/font][font='楷体'][size=16px]突变[/size][/font][font='楷体'][size=16px]、[/size][/font][font='楷体'][size=16px]PD-L[/size][/font][font='楷体'][size=16px]1[/size][/font][font='楷体'][size=16px]表达以及免疫微环境特征（[/size][/font][font='楷体'][size=16px]包括TILs和GEP[/size][/font][font='楷体'][size=16px]）[/size][/font][font='楷体'][size=16px]相关联，[/size][/font][font='楷体'][size=16px]构建预后模型，用于预测NSCLC免疫治疗的疗效[/size][/font][font='楷体'][size=16px]；[/size][/font][font='楷体'][size=16px]本研究拟采用高通量测序[/size][/font][font='楷体']、[/font][font='楷体'][size=16px]多重免疫荧光平台[/size][/font][font='楷体'][size=16px]以及靶向RNA测序平台[/size][/font][font='楷体'][size=16px]研究[/size][/font][font='楷体'][size=16px]NSCLC免疫治疗疗效标记物，构建疗效预测模型，[/size][/font][font='楷体'][size=16px]为该类患者的治疗决策提供有益的理论指导。[/size][/font]

名称：酶联免疫吸附试验标准操作规程(SOP)关键词：ELISA 抗原 抗体目的：1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。2、研究抗酶抗体的合成。3、显现微量的免疫沉淀反应。4、定量检测体液中抗原或抗体成份。背景知识：ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。原理：ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。主体内容：【操作步骤】方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O•D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O•D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：　　　　　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，　　　　　　每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　　　加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔　　　　　　中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　　　于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，　　　　　　37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。[font='Helvetica Neue', Helvetica, Arial

为探讨一起食物中毒的病原菌，按照GB/T4789-2003及WS/T9-1996中食源性致病菌的检验方法，应用mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪等对所采集的食物中毒标本进行检验。结果 25件标本中检出的5株菌均为都柏林沙门氏菌，说明本次食物中毒的病原菌为都柏林沙门氏菌。

[b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光标记技术是生物学和医学领域中常用的可视化技术，其中荧光标记抗体凭借其独特的应用优势，在许多研究方向中发挥了重要作用。本文将详细介绍荧光标记抗体的原理、应用及最新进展。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、荧光标记抗体的原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光标记技术是一种利用荧光物质对目标进行标记，通过特定波长的光激发后发出荧光，从而实现可视化检测的方法。荧光标记抗体则是将荧光物质与特异性抗体结合，形成荧光标记抗体，用于对目标抗原进行特异性结合和荧光标记。常见的荧光物质有荧光素、量子点、上转换纳米颗粒等。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]三、荧光标记抗体的应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫分析：荧光标记抗体在免疫分析中具有广泛的应用，如酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）、流式细胞术、免疫荧光染色等。通过荧光标记抗体与抗原的特异性结合，可以实现对目标抗原的高灵敏度、高特异性检测。例如，利用荧光标记抗体检测肿瘤标志物，有助于肿瘤的早期诊断和治疗监测。[/font][/font][font=宋体]细胞成像：荧光标记抗体在细胞成像中具有重要作用，可以用于观察细胞内特定抗原的表达情况，了解细胞的功能和行为。例如，利用荧光标记抗体对细胞膜抗原进行标记，可以观察细胞迁移、侵袭等行为。[/font][font=宋体]组织切片染色：荧光标记抗体也可用于组织切片染色，对病理组织中的特定抗原进行标记，有助于病理诊断和组织学研究。例如，利用荧光标记抗体对肿瘤组织进行染色，有助于肿瘤类型的鉴别和恶性程度的评估。[/font][font=宋体]药物筛选：荧光标记抗体在药物筛选中具有重要应用，可以用于药物作用靶点的检测和药物作用机制的研究。例如，利用荧光标记抗体对药物作用靶点进行标记，可以观察药物对靶点的影响，评估药物的疗效和安全性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、展望[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]随着荧光标记技术的不断发展，荧光标记抗体在灵敏度、特异性和可视化效果等方面得到了显著提升。同时，新型荧光物质的开发和制备也为荧光标记抗体的应用提供了更多选择。未来，随着荧光标记技术的进一步优化和多色荧光标记技术的发展，荧光标记抗体将在更多领域发挥重要作用，为生物学、医学和其他相关领域的研究提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光检测服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

求助：哪位大侠能不能告诉我偏振荧光免疫分析仪是属于哪仪类医疗器械，还有就是有哪些厂家生产这类仪器啊，万分感谢

[font=宋体][b]免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域。[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]免疫疾病诊断[/font][/font][font=宋体][font=宋体]用免疫血清学方法对人和动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断，是免疫技术最突出的应用。尤其是酶标抗体技术，已成为多种传染病的常规诊断方法，如已有的人各型肝炎、猪瘟等[/font] [font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]试剂盒，它们简便、快速，又具有高度的敏感性和可重复性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]动物植物生理活动研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质，它们在体内含量极微少，但在调节机体的生理活动中起重要作用，因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能（如生长生殖等）。由于这些物质含量极低，用常规化验方法难以准确测出。目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出[/font] [font=Calibri]ng(10 -9 g) [/font][font=宋体]及 [/font][font=Calibri]pg(10 -12 g) [/font][font=宋体]水平的物质，它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质，研究动物、植物生理和生物防治的重要手段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]物种及微生物鉴定[/font][/font][font=宋体]各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同，物种种源越远，抗原性差异越大，因此可用区分抗原性的血清学反应进行物种鉴定、物种的分类等工作。血清学反应在细菌、病原菌等微生物鉴定和血清型及亚型的分析方面已得到广泛应用。但对动物种源，植物和昆虫分类方面还是一个新的领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]动物、植物性状的免疫标记[/font][/font][font=宋体]通过分析动物、植物的一些优良性状（如高产、优质、抗逆性等）的特异性抗原，然后用血清学方法进行标记选择育种，这是一个很有前途的方向，它比分子遗传学标记选择育种简便。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]免疫增强药物和疫苗的研究[/font][/font][font=宋体]疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果。在研究一些免疫增强药物，尤其研究肿瘤药物时，需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用。因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]发病机理研究[/font][/font][font=宋体]传染病的病原从机体特定部位感染，并在特定组织细胞内增殖，引起发病。一荧光抗体感染或免疫酶组化染色，可在细胞水平上确定发病等病原微生物的感染细胞，还可用于研究自身免疫病和变态反应性疾病的发病机理，如免疫复合物的沉积部位的分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分子生物学研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在基因工程的分离、克隆的筛选，表达产物的定性与定量分析，表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如通常用免疫沉淀方法分离[/font] [font=Calibri]mRNA [/font][font=宋体]基因，酶标抗体核酸探针（地高辛核酸探针）检测筛选克隆，免疫转印技术分析表达产物的分子量、 [/font][font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]RIA [/font][font=宋体]分析表达量、免疫亲和层析纯化表达产物，免疫方法分析表达产物的性质如免疫原性。免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Flow Cytometry[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biacore[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Octet[/font][font=宋体]等检测技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service][b]免疫学检测服务[/b][/url]类型：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][b][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化[/font] [font=Calibri](IHC) [/font][font=宋体]单染服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫荧光[/font] [font=Calibri](IF) [/font][font=宋体]单染检测服务[/font][/font][font=宋体]多重染色服务[/font][font=宋体][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色及特殊染色服务[/font][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b][font=宋体]流式细胞[/font] [font=Calibri](FACS) [/font][font=宋体]检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA/ELISpot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]技术服务[/font][/font][font=宋体]石蜡组织芯片定制服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注义翘神州免疫学检测服务[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术）是一种基于酪胺信号放大技术的染色方法，利用抗原抗体反应对样本中的多种蛋白标志物进行荧光染色标记。这种技术能在同一组织切片上实现多个靶标蛋白的共染色，最多可同时标记数十种蛋白，从而揭示组织微环境中的复杂信息。通过荧光图像分析，我们可以进行定量分析、细胞分型、以及空间关系分析等多方面的深入研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]酪酰胺信号放大（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]）技术利用辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]环境下，荧光标记的酪胺分子被[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]催化激活，产生大量酶促反应，使荧光素与抗原紧密结合部位沉积，实现信号放大。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术通过循环使用不同荧光染料，可在一张组织切片上实现多种蛋白的共染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、优势[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术能够显著增强荧光放大信号，其增强幅度大约是普通荧光的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]倍，使得检测更为敏感和准确。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术中，一抗抗体的种属来源不受限制。不同于普通荧光免疫组化共染的要求，[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术每一轮染色后可以将上一轮的一抗和二抗洗掉，对后续染色无影响。这意味着同一种属来源的一抗并不会影响实验结果，为实验提供了更大的灵活性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的实验过程中，无需严格避光。这是因为荧光素具有较高的稳定性，不易淬灭。即使在实验操作过程中没有采取避光措施，也不会对实验结果产生影响。更为便利的是，染色后的玻片可以保存数月之久而不发生淬灭，方便后续重新扫描和分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、注意事项[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①在准备染料时，要确保完全溶解并混合均匀。若试剂含有有机溶剂并出现沉淀，需先行过滤。[/font][font=宋体]②实验过程中，要防止切片干燥并注意避光，以保持荧光染料的稳定性，防止其淬灭，从而提高实验的准确性和可靠性。[/font][font=宋体]③选择高特异性的第一抗体是关键，它能更准确地识别目标蛋白，减少非特异性染色，从而提高实验的敏感性和特异性。[/font][font=宋体]④选择荧光染料时，要根据第一抗体的表达量来搭配。表达量高的应与弱光搭配，而表达量低的应与强光搭配，以平衡不同抗体间的荧光强度，使实验结果更准确可靠。[/font][font=宋体]⑤在实验前，务必制定详细的方案，包括确定染色顺序、修复条件和每一种抗体所搭配的荧光染料。通过合理的方案设计，可以确保实验的顺利进行，提高实验的一致性和可重复性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]人体免疫系统是一个复杂而精细的网络，它时刻保护着我们免受外界病原体的侵害。其中，免疫自稳、免疫监视和免疫防御是免疫系统的三大核心功能，它们各自承担着不同的任务，共同维护着我们的健康。免疫自稳负责调节和维持免疫系统的内部稳定，防止免疫反应过度或不足；免疫监视则时刻监控体内细胞的异常变化，及时识别和清除可能的癌变或感染细胞；而免疫防御则是免疫系统对外界病原体的直接抵抗，通过产生特异性抗体和细胞免疫反应来清除入侵者。本文将深入探讨这三大功能的区别与联系，帮助读者更好地理解人体免疫系统的运作机制。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]一、免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫监视是身体长期进化过程中形成的自然防御功能。这个功能似乎打开了第三个视角来监控身体的每一个动作。没有侵略者，没有异己[/font][font=Calibri]......[/font][font=宋体]免疫监测最重要的是区分敌人和我。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]监视功能有两个方面[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①自我识别[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]自我识别是指免疫系统如何识别身体内的正常细胞和组织，以避免对它们产生攻击。这是非常重要的，因为免疫系统必须能够区分自身组织和外来物质之间的差异。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异常细胞监测[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]异常细胞监测是免疫系统如何检测和识别异常细胞的过程。这些异常细胞包括被感染的细胞、突变细胞、癌细胞等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、免疫防御[/font][font=宋体]——重要保障[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御是指通过识别和消除外来病原体来保护身体免受疾病入侵的过程。免疫防御由免疫系统中的各种细胞免疫和分子共同发挥作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如何发挥免疫防御的作用？[/font][font=宋体]当免疫系统检测到外来病原体时，他将启动免疫防御机制，将免疫细胞引导到感染位置，并以各种方式消除病原体。免疫细胞包括不同类型的白细胞和淋巴细胞，其功能和特征不同。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御除了直接消除病原体外，还有另一个重要的作用，即刺激免疫细胞产生抗体，从而促进身体产生免疫记忆。当身体再次遇到同一病原体时，免疫系统可以快速、更有效地抵抗它，然后再次预防疾病。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]但免疫防御可不是绝对的！有时病菌会以各种方式避免免疫系统的攻击，使感染难以有效控制。例如，一些病菌可以通过改变其表面抗原的结构来防止被免疫细胞识别，然后避免攻击。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外，一些病原体还能通过影响免疫系统的功能来抑制免疫反应，从而获得更长的生存时间。因此，有必要不断研究和实践免疫系统的机制，以及病原体的避免策略，然后开发更有效的辅助治疗策略。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]三、免疫自稳[/font][font=宋体]——维持平衡[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是指机体免疫系统在正常状态下维持一种平衡状态，以保持免疫系统的正常功能和机体的健康。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是一个复杂而精确的调节过程，涉及多种细胞类型、分子信号和调节机制。它的目的是确保免疫系统对病原体和异常细胞的敏感性和应答能力，同时避免对自身组织的过度反应和自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是怎么发挥作用的？[/font][font=宋体]免疫自稳的关键是保持免疫系统的平衡。免疫系统需要在处理外部侵入的病原体时快速启动免疫反应，但也需要在免疫反应结束后及时关闭反应，以免损害自己的组织。通过调节免疫细胞之间的相互影响，保持免疫系统的平衡，避免过度激活或自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之，免疫细胞的三大作用机制即：免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我、免疫防御——重要保障、免疫自稳——维持平衡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫细胞在人体内起着至关重要的作用，它们是维护人体健康不可或缺的卫士。然而，随着年龄的增长，人体的免疫细胞数量会逐渐减少，这也是人体衰老的一个重要标志。为了保持免疫力的强盛，我们需要及时补充免疫细胞，让它们继续发挥守护身体的作用。只有这样，我们才能保持健康的体魄，远离疾病的侵扰。因此，重视免疫细胞的补充与养护，对于维持人体免疫力的稳定和健康至关重要。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多重染色服务，包含[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]免疫荧光和免疫组化服务[/b][/url]，更多详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

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求助写出两种用于免疫分析的荧光标记物和化学发光标记物，写出它们的标记反应。

Pribolab霉菌毒素免疫亲和柱使用方法 1.取样，处理样品。 2.过柱，样品经过PriboFast®霉菌毒素免疫亲和柱处理。 3.冲洗，清洗免疫亲和柱除去杂质。 4.洗脱，用纯甲醇清洗吸附的霉菌毒素（推荐分两次清洗，详见说明书）。 5.检测。各类毒素经免疫亲和柱处理结果均符合国内外的标准。

化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度，但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来，许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中，在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法，由于这种方法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，线性范围宽，仪器设备简单，试剂价格低廉，方法稳定、快速等优点，已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。　　化学发光免疫分析包括三大类型：即标记化学发光物质的化学发光免疫分析；标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。　　(一)　原理　　尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H２O２反应体系产生化学发光，但由于该体系的检测灵敏度不够高，不能满足酶联免疫测定的要求。因此，为了提高体系的检测灵敏度，可将HRP催化H２O２氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H２O２的化学发光反应相偶合，建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里，酶的活性是基于下列发光反应进行检测的:　 HRP　　　　　　　　　luminol＋H２O２───→产物＋hν　　　　　　　　　　　　　　　　　产　物　　　　　　　　　　　　　　　　　　↑　　　　　 　Eosin＋H２O２ ──────┘　　　　　　　　　　　　　　　HRP　二)　操作步骤　　1.　包被抗体　在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚，再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体，同时设空白对照，置4℃过夜。　　2.　洗涤　用抽滤针头吸干管内液体，加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次，每次加2ml，放置3～5min，用抽滤针头吸干管内液体。　　3.　加待检血清和阳性标准品　用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。　　4.　洗涤　同2。　　5.　加酶标抗体　 用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体，每管加入300μl，空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。　　6.　洗涤　同2。　　7.　化学发光测定　给每管加入300μl底物溶液，置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中，并置于测量位置，加入300μl 5.0×10－４M luminol。记录仪记录化学发光强度。　　8.　同时用ELISA方法进行对照，结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。　　结果判定(1)　定性　按下列公式判别阴、阳性:　　 　　　　　　　L样品－L空白　　　　 ┌≥2.1　为阳性　　　S／N ＝ ────────　＝　商│　　　　　　　L阴性对照－L空白　　　 └＜2.1　为阴性　　　(2)　定量　以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标，不同稀释倍数为横坐标，作出剂量反应曲线(标准曲线)，犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。

我想做细胞的免疫荧光定位，应该选择什么样的显微镜和摄像机，才能拍到理想的照片