免疫组化实验

[font=宋体]在生物学和医学领域，免疫组化和免疫分型是两种常用的实验技术，它们各自具有独特的应用和优势。虽然这两种技术都涉及到免疫学的原理和方法，但它们在实验目的、操作过程、结果解读等方面存在显著的差异。本文将对免疫组化和免疫分型进行详细的比较和讨论，以揭示它们之间的区别。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]定义区别：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]免疫组化（[/font][font=Calibri]Immunohistochemistry[/font][font=宋体]）是一种利用免疫学原理，通过特异性抗体与细胞或组织中的抗原进行反应，进而通过染色或标记等方法来定位和检测抗原的技术。其主要应用于组织切片或细胞涂片的染色，以观察和研究抗原在细胞或组织中的分布、定位及表达情况。免疫组化技术可以帮助我们了解细胞或组织的类型、功能状态以及病理变化，对于疾病的诊断、预后评估以及药物研发等方面具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫分型（[/font][font=Calibri]Immunophenotyping[/font][font=宋体]）是一种通过检测细胞表面或细胞内的特定抗原，来识别和分析细胞类型的技术。该技术主要应用于对免疫细胞（如淋巴细胞、巨噬细胞等）进行分型，以了解其在免疫系统中的功能和作用。免疫分型技术可以帮助我们深入了解免疫系统的结构和功能，揭示免疫细胞在疾病发生和发展过程中的作用，为疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]实验目的区别：[/font][/b][font=宋体]免疫组化主要关注抗原在细胞或组织中的定位和表达情况，而免疫分型则侧重于对免疫细胞进行分型和功能分析。从操作过程来看，免疫组化通常需要对组织或细胞进行切片、固定、染色等步骤，而免疫分型则可能涉及到细胞的分离、培养、流式细胞术等操作。从结果解读来看，免疫组化的结果主要表现为抗原在细胞或组织中的分布和表达模式，而免疫分型的结果则提供了关于免疫细胞类型、比例和功能状态的信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]应用领域区别：[/font][/b][font=宋体]免疫组化在病理学、肿瘤学、神经科学等领域有广泛应用，可以帮助医生进行疾病的诊断和预后评估。而免疫分型则更多地应用于免疫学、血液学、感染病学等领域，有助于深入了解免疫系统的功能和疾病发生机制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述，免疫组化和免疫分型是两种具有不同特点和应用领域的实验技术。虽然它们都涉及到免疫学的原理和方法，但在实验目的、操作过程、结果解读以及应用领域等方面存在显著的差异。因此，在实际应用中，我们需要根据研究目的和需求选择合适的技术手段，以获取准确、可靠的实验结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体]）是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合，以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化，是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原，原理相似，只是显色剂不同，免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理，即抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应确定组织细胞中的抗原，使标记有抗体的显色试剂显色，并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中，常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素，被标记在抗体或抗原上，然后与其对应的抗原或抗体结合，在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一，具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足，技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断，以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台，为客户提供高质量的免疫荧光检测服务，包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测服务和石蜡切片免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测服务，有需求的朋友可以来义翘官网进行查询，详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]

[font=Calibri][font=宋体]免疫组化技术，运用免疫学的基本原理[/font][font=Calibri]——[/font][font=宋体]抗原抗体反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。通过化学反应，使标记在抗体上的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显现颜色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质）。该技术不仅对这些抗原进行定位，还能进行定性和相对定量的研究。这种技术被称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]。[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]免疫组化，简而言之，是免疫学、组织学和化学的完美结合。它利用免疫学方法对组织进行标记，再通过化学方法进行染色，从而标记出组织中的特定蛋白或一组蛋白。这项技术目前在临床病理诊断中得到了广泛应用，并衍生出了多种技术变种，如免疫细胞化学、免疫组织荧光等，为生物医学研究提供了强大的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、免疫组化技术的基本原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂[/font][font=Calibri]DAB[/font][font=宋体]显示为棕黄色颗粒）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、免疫组织化学染色方法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）；与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗过氧化物酶（[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]）法和亲和连接，如卵白素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物（[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]）法、链霉菌抗生物素蛋白[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶连结（[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]）法等，其中[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法是最常用的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、几种常用免疫组织化学方法的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫荧光方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫酶标方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法是继免疫荧光后，于[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的当属[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、免疫胶体金技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如葡萄球菌[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]蛋白[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、免疫组化技术的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、特异性强 免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（[/font][font=Calibri]keratin[/font][font=宋体]）显示上皮成分，[/font][font=Calibri]LCA[/font][font=宋体]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、敏感性高 在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法或[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定位准确、形态与功能相结合 该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

一、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。二、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。三、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。四、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。2）免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。 本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。 免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。3）免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。五、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。六、特点 1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。七、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同 1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。

偶系新人最近要进实验室了，方向是免疫组化方面但是这方面的知识太缺乏了，想找点这方面的资料在这里求助了，谢谢

[quote][b]项目概况[/b]莆田市第一医院罗氏全自动免疫组化染色试剂采购项目（重新招标） 招标项目的潜在投标人应在莆田市公共资源交易中心网获取招标文件，并于2022年12月27日 10点20分（北京时间）前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：PTXH2022009-2项目名称：莆田市第一医院罗氏全自动免疫组化染色试剂采购项目（重新招标）预算金额：200.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：200.0000000 万元（人民币）采购需求：[table][tr][td][align=center]合同包[/align][/td][td][align=center]品目号[/align][/td][td][align=center]货物（服务）名称[/align][/td][td][align=center]主要技术规格[/align][/td][td][align=center]数量[/align][/td][td][align=center]最高限价[/align][align=center]（人民币：万元）[/align][/td][td][align=center]投标保证金(人民币：元)[/align][/td][td][align=center]是否办理进口产品审批手续[/align][/td][td][align=center]备注(是否核心产品)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]1-1[/align][/td][td][align=center]罗氏全自动免疫组化染色试剂[/align][/td][td][align=center]详见招标文件第五章招标内容及要求[/align][/td][td][align=center]1批[/align][/td][td][align=center]200[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]是[/align][/td][td][align=center]是[/align][/td][/tr][/table]合同履行期限：详见招标文件本项目( 不接受 )联合体投标。

[font=宋体][font=宋体]免疫组化法（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）是使用抗体检测组织切片（例如肝脏、胰腺或心脏）中细胞蛋白质（抗原）的过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当组织样本被送到实验室进行疾病检查时，有几个细节不易确定。几种疾病或疾病亚型在显微镜下可能看起来相似或看起来具有相似大小的细胞，但具有不同的行为和必要的治疗，区分它们的最佳方法是检测这些细胞上作为标记的特定分子。免疫组化法（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）是一种使用抗体（匹配分子）的技术，用于寻找、识别附着在细胞上的标记物。在显微镜下可以看到抗体本身，这有助于技术人员进行精确识别。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化法（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）已广泛应用于医学中，特别是癌症诊断。淋巴瘤是依赖于[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]进行正确诊断和治疗决策的癌症之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]免疫组化常见问题：[/font][font=宋体][font=宋体]问题一：我应该使用[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]还是[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]进行抗原修复？[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]固定过程可能会掩盖抗原，导致抗体结合无法进行。这种掩盖可以通过一种称为抗原修复[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗原去掩蔽的技术来逆转，该技术可以通过加热（[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]；热诱导抗原修复）或蛋白酶（[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]；蛋白水解诱导抗原修复）介导。后者使用蛋白酶[/font][font=Calibri]K[/font][font=宋体]、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]方法通过降解掩盖表位的肽而起作用。然而，[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]也可能导致样品形态或抗原本身的改变。因此，[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]的使用频率低于[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]，后者通过恢复表位的二级和三级结构而起作用。[/font][/font][font=宋体]为了确定是否应该进行抗原修复以及采用哪种方法，应遵循以下指南：[/font][font=宋体]进行文献检索，以确定其他研究人员如何可视化您感兴趣的抗原。[/font][font=宋体]检查抗体供应商是否推荐了特定的抗原修复方案。[/font][font=宋体][font=宋体]如果没有特定的协议可用，我们建议使用[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]而不是[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]协议。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对于[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]，总是使用中性抗原修复缓冲液，如[/font][font=Calibri]AbD Serotec[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]BUF025A[/font][font=宋体]，并与未进行抗原修复的样品进行比较。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]如果中性染色溶液没有产生良好的染色效果，则应测试碱性或酸性抗原修复缓冲液。除了[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值外，其他需要优化的参数是温度和持续时间。理想情况下，尝试各种[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、温度和时间组合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]为了排除由[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]过程引起的伪影，始终包括一个控制样品，该样品在没有[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]步骤的情况下进行染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]问题二：如何选择[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]实验的抗体，单克隆抗体还是多克隆抗体？[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体和多克隆抗体的抗体特性决定了其优缺点。单克隆抗体是针对单个表位的同种免疫球蛋白。抗体是由一个动物的单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的，因此在免疫化学上相似。多克隆抗体是针对同一抗原的各种表位的异质抗体混合物。抗体是由动物的不同[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的，因此在免疫化学上不同。多克隆混合物中的抗体可能具有略微不同的特异性和亲和力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果蛋白质靶标具有相同的氨基酸序列，单克隆抗体更合适。一旦抗原因各种原因发生构象变化，如蛋白质相互作用、翻译后修饰、温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、固定、盐浓度等，单克隆抗体和抗原的联合作用将受到严重影响。由于多克隆抗体具有多个表位，不受蛋白质构象变化的影响，一般来说，在一定范围内的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和盐浓度内，多克隆抗体之间的抗原结合比单克隆抗体更稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]问题三：一抗的孵育时间多久？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]一抗的孵育时间与温度[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]抗体浓度有关。一般情况下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]1-2[/font][font=宋体]小时左右。在室温的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]小时左右。在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]18-24[/font][font=宋体]小时左右。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多免疫组化的问题可以上义翘神州网咨询！[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

10 um厚切片) 和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。（2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。（3）Triton X-100既是一种表面活性剂，也有抗氧化作用4、封闭血清的选择原则是什么？ （1）膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！（2）封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。（3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。

[font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术）是一种基于酪胺信号放大技术的染色方法，利用抗原抗体反应对样本中的多种蛋白标志物进行荧光染色标记。这种技术能在同一组织切片上实现多个靶标蛋白的共染色，最多可同时标记数十种蛋白，从而揭示组织微环境中的复杂信息。通过荧光图像分析，我们可以进行定量分析、细胞分型、以及空间关系分析等多方面的深入研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]酪酰胺信号放大（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]）技术利用辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]环境下，荧光标记的酪胺分子被[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]催化激活，产生大量酶促反应，使荧光素与抗原紧密结合部位沉积，实现信号放大。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术通过循环使用不同荧光染料，可在一张组织切片上实现多种蛋白的共染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、优势[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术能够显著增强荧光放大信号，其增强幅度大约是普通荧光的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]倍，使得检测更为敏感和准确。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术中，一抗抗体的种属来源不受限制。不同于普通荧光免疫组化共染的要求，[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术每一轮染色后可以将上一轮的一抗和二抗洗掉，对后续染色无影响。这意味着同一种属来源的一抗并不会影响实验结果，为实验提供了更大的灵活性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的实验过程中，无需严格避光。这是因为荧光素具有较高的稳定性，不易淬灭。即使在实验操作过程中没有采取避光措施，也不会对实验结果产生影响。更为便利的是，染色后的玻片可以保存数月之久而不发生淬灭，方便后续重新扫描和分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、注意事项[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①在准备染料时，要确保完全溶解并混合均匀。若试剂含有有机溶剂并出现沉淀，需先行过滤。[/font][font=宋体]②实验过程中，要防止切片干燥并注意避光，以保持荧光染料的稳定性，防止其淬灭，从而提高实验的准确性和可靠性。[/font][font=宋体]③选择高特异性的第一抗体是关键，它能更准确地识别目标蛋白，减少非特异性染色，从而提高实验的敏感性和特异性。[/font][font=宋体]④选择荧光染料时，要根据第一抗体的表达量来搭配。表达量高的应与弱光搭配，而表达量低的应与强光搭配，以平衡不同抗体间的荧光强度，使实验结果更准确可靠。[/font][font=宋体]⑤在实验前，务必制定详细的方案，包括确定染色顺序、修复条件和每一种抗体所搭配的荧光染料。通过合理的方案设计，可以确保实验的顺利进行，提高实验的一致性和可重复性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font]

[font=宋体]多重免疫组化（荧光）染色技术，以其高精度描绘肿瘤微环境中肿瘤与免疫细胞状态的能力，为肿瘤的精准诊断提供了不可或缺的参考信息。该技术不仅深入揭示了免疫细胞亚群的比例和分布，还特别关注免疫细胞与肿瘤细胞间的空间关系，这些关键信息对于肿瘤预后评估和免疫治疗策略制定具有重大意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]还可通过与组织芯片、转录[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蛋白组测序、单细胞测序等技术相结合，去完成各项高通量检测技术的验证任务。根据不同的原理，有不同的方法。下面我们就来一起来了解下这[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]类常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]染色去除技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]作为[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]常用的方法之一，染色去除技术在不同的平台上被开发出来用于研究肿瘤组织样本。该技术的基本原理是清除样品中的一种标记后，再用一种新的不同标记对样品进行染色，并重复该过程，并实现在单个样品中检测多种抗原，不同的染色去除技术如图[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]荧光基团失活技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]荧光基团失活技术（[/font][font=Calibri]Fluorophore inactivation technologies[/font][font=宋体]）的技术原理与荧光去除技术的原理大体相似。差别在于，它不是通过改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]条件，变性、光漂白来去除荧光，而是通过化学灭活来消除荧光基团。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在该技术原理基础上开发的芯片式成像深度分析系统（[/font][font=Calibri]ChipCytometry[/font][font=宋体]），是一种基于成像的细胞术平台，结合了多重标志物显微成像和流式数据分析法，从根本上实现了对传统方法的各类局限的突破，并可以对细胞和组织切片的生物标志物的表达和空间分布进行成像可视化检测分析。德国柏林[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]勃兰登堡再生医学中心也借助该技术完成了人胎盘冷冻切片中原位检测间充质干细胞（[/font][font=Calibri]MSCs[/font][font=宋体]）多种表面标志物如[/font][font=Calibri]CD73/CD90/CD105/CD45/CD34/CD19[/font][font=宋体]的表达及空间分布分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]多重信号放大技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了克服检测低表达抗原的局限性，随着科技的发展，多重信号放大技术应运而生。该技术包括基于多重修饰半抗原、酰胺信号放大（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]）和纳米晶体量子点等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其中，[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]是常用的多重信号放大技术之一。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]是在传统的免疫组化染色基础上，基于信号分子沉淀原理，在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]存在时，抗体上标记的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]将荧光物质标记的底物酪胺（[/font][font=Calibri]t[/font][font=宋体]）转化为具有短暂活性的中间状态（[/font][font=Calibri]t*[/font][font=宋体]），然后被激活的底物分子迅速与相接蛋白分子的富含电子区域（酪氨酸残基）进行稳定的共价结合；由于相接蛋白（抗原、[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]等）都含有大量的酪氨酸结合位点，所以会富集大量信号，使得信号被有效放大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多轮不同种类荧光物质标记的底物酪胺的染色，即可在一张样本上实现多色免疫荧光标记。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的优点是，可通过共价结合的方式将荧光信号结合到目标样本上，不易丢失，且经[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]放大后信号更强。缺点则是由于荧光信号的交叉作用，针对一份样本染色种类较多时，容易出现串色的情况（这一点[/font][font=Calibri]ChipCytometry[/font][font=宋体]技术倒是做的很好），也因此，多色标记的数量受到了限制，最多仅能做到在一张样本切片上进行[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]色的荧光染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.DNA[/font][font=宋体]条形码技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]条形码技术（[/font][font=Calibri]DNA Barcoding Technologies[/font][font=宋体]）是利用标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段（[/font][font=Calibri]DNA barcode[/font][font=宋体]）在物种种内的特异性以及种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统，该技术利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的特性，可以达到扩展[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]能力的目的。基于[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]条形码技术开发的[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]技术种类较多，这里我们简单介绍下，空间多靶标分析技术（[/font][font=Calibri]Digital Spatial Profiling[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]DSP[/font][font=宋体]）是一种基于紫外光可切割的寡核苷酸标签，可与抗体或[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]杂交探针耦合，来检测蛋白质与[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的高复杂度空间信息的分析方法。该技术使用紫外线将抗体上的高聚寡核苷酸标签解耦，并从组织表面提取，使样品可以重复使用。寡核苷酸条形码再经过定量分析，并反应组织的空间原位信息，可以帮助研究者在复杂的疾病或是组织中快速、精准地量化其异质性，有助于生物标记的发掘及疾病致病机理的深入研究。[/font][font=Calibri]DSP[/font][font=宋体]已被成功用于分析接受检查点阻断治疗的黑色素瘤患者的肿瘤特征，并证明基线免疫浸润与治疗反应之间存在相关性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]质谱流式细胞技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]质谱流式细胞技术（[/font][font=Calibri]Mass Cytometry[/font][font=宋体]）是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。它既有传统流式细胞仪高速分析的特点，又具有质谱检测的高分辨能力。[/font][/font][font=宋体]与传统[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞技术[/b][/url]的差别在于：[/font][font=宋体]第一、传统流式使用各种荧光基团作为抗体的标签，质谱流式则使用各种金属元素作为标签；[/font][font=宋体][font=宋体]第二、传统流式使用激光器和光电倍增管作为检测手段，质谱流式则逐个通过[/font][font=Calibri]ICP[/font][font=宋体]质谱检测装置，对每个细胞中各种金属标签进行定量检测，进而得知每个细胞中各目标蛋白的含量。应用该技术所引申出的[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]成像质谱流式技术（[/font][font=Calibri]Imaging mass cytometry[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IMC[/font][font=宋体]），其实是将免疫组化方法与经过充分验证的[/font][font=Calibri]CyTOF[/font][font=宋体]（质谱流式）技术完善融合，可以生成细胞标志物、转录产物以及转导信号等多种因子的组织结构图像。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段，配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件，提供更优质的图像质量，收获更特异的染色结果。更多多重染色服务详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

关键词免疫组化，抗原，一抗，二抗目的：蛋白物质的定性、定位检测。背景知识：20世纪30年代，随着生物化学的发展和电子显微镜技术的应用，组织化学迎来了复兴时代。自从E. Takamatsu（高松英雄）和G. Gomori 1939年同时证明了硷性磷酸酶的组织化学方法，以后的30年间，酶组织化学得到了飞速发展，高松证明了磷酰胺酶、ATP酶；Gomori设计了酸性磷酸酶、脂酶、酯酶等组织化学证明法。 此间，金属盐法，硫化钴法，偶氮色素法，偶氮色素四唑盐法（tetrazolium salts method）以及磷酸化酶组织化学证明法等相继问世。特别是H. Scheldon和D. Brandes等人把电镜与酶组织化学结合起来，以金属沉淀法观察了酸性磷酸酶和硷性磷酸酶，奠定了电镜酶组织化学（electron microscope enzyme histochemistry）基础。后来A. M. Seligman(1967)提出锇黑化法（Osmification method）进一步阐述了电镜组织化学的基本原理和反应过程。 1950年A. H. Coons等人提出了荧光抗体法，从而把免疫学引入组织化学实验中，后来P. K. Nakane，S. Avrameas 和L. A. Sternberger等人以辣根过氧化物酶为标记物对酶进行观察，创立了酶标抗体法，从而为组织化学开辟了新途径。 随着分子生物学的发展，1969年人们把分子杂交技术应用到组织切片和细胞标本上，开始探索原位杂交技术，经过30年不断应用、完善和发展，特别是探针制备与标记物两大关键技术的突破，目前原位杂交技术已广泛应用于遗传学、病毒学、神经内分泌学、病理学、免疫学和发育生物学等各个领域，显示出巨大的应用潜力。 现代组织化学已经渗透和应用于生命科学的许多学科，经过近几十年的发展，产生了许多分支，如核酸与核蛋白、蛋白质与氨基酸、脂类与脂蛋白、碳水化合物与粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学电镜组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影技术等。总之，现代组织化学的概念已经远远超过了原有范围，无论从理论、内容、技术手段、研究范围都比过去更广泛、更深入。 原理：理论基础是基于利用放射性核素和其他标记物（荧光素，酶， 重金属离子等）作为示踪剂，通过免疫亲和（抗原-抗体特异性结合）和核酸杂交（碱基配对特异性连接）途径，在组织切片或细胞涂片上，原位显示生物大分子的动态变化而建立的一门染色技术。 主体内容（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅 （二）、试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA•2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。 5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。7）封裱剂：a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合； b、油和TBS(或PBS)配制。 8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。 [font='Helvetica Neue', Hel

免疫组化常用溶液的配制　1、 PBS：取PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、 TBS：　　2.1 Tris 缓冲液配方：(0.5M pH7.6)　　Tris (三羟甲基氨基甲烷) 60.57g　　　1N HCL 约420ml　　双蒸水 加至1000ml　　Tris缓冲液配制方法：　　先以少量双蒸水 (300~500ml)溶解Tris，加入HC1后，用HC1(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。　　2.2 TBS配方：　　Tris-HCI 缓冲液(0.5M pH7.6) 100ml　　NaCI 8.5~9g(0.15mol/L)　　双蒸水 加至1000mlTBS配制方法：　　先以少量双蒸水溶解NaC1，再加入Tris-HC1缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。3、 枸橼酸盐缓冲液 (Citrate buffer)：　　3.1 储存液：　　A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸 (C6H8O7H20) 溶于1000ml蒸馏水中。　　B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠 (C6H5Na32H20)溶于1000ml蒸馏水中。　　3.2 工作液：　　取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH 值应为6.0±0.14、 胰酶 (Trypsin)：　　4.1 胰蛋白酶消化液：　　常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶浓缩液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释)，则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05% (1:10稀释)至0.25% (1:1稀释)。　　4.2 胰蛋白酶：取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。5、 胃酶 (Pepsin)：　　0.4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。6、 DAB (3.3-二氨基联苯胺)：　　6.1 DAB Kit：使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。　　6.2 DAB：6mgDAB溶于10mlTBS (0.05M pH7.6)，再加入0.1ml浓度为3%的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。7、 AEC：4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2)，然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。8、 Triton X-100 (聚乙二醇辛基苯基醚)　　免疫细胞化学中，Triton X-100常用浓度为1%和0.3%，但通常是先配制成30%的Triton X-100储存液，临用时稀释至所需浓度。　　8.1 30%Triton X-100的配制：　　Triton X-100 28.2ml　　0.1M PBS (pH7.3) 或 0.05M TBS (pH7.4) 72.8ml双蒸水 加至1000ml配制方法：取Triton X-100 及PBS(或TBS)混合，置37~40℃水浴中2~3小时，使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度　8.2 Triton X-100 工作液的配制：Triton X-100是一种非离子型表面活性剂(或称清洁剂)，分子量为646.86 (C34H62O11)。它能溶解脂质，以增强抗体对细胞膜的通透性。1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本，0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清，配制BSA等。9、 甲醇-H2O2溶液吸取30%的H2O2 0.1ml，加入100ml纯甲醇中，充分混匀即可，使H2O2终浓度为0.3%。

[font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：sdhryw2024024项目名称：潍坊医学院附属医院免疫组化二抗试剂（024）采购项目采购方式：竞争性磋商预算金额：100.000000 万元（人民币）最高限价（如有）：100.000000 万元（人民币）采购需求：[table][tr][td][align=center]序号[/align][/td][td][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]控制价（元）人份[/align][/td][td][align=center]预估年用量（人份）[/align][/td][td][align=center]预算金额[/align][align=center]（元）[/align][/td][td][align=center]备注[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]DAB染色液[/align][/td][td][align=center]41[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]820000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]苏木素染色液[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]60000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]返蓝染色液[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]60000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]切片标签[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]60000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][/table]合同履行期限：详见文件本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求：[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；2.落实政府采购政策需满足的资格要求：详见文件3.本项目的特定资格要求：1.货物属国家强制且已开办注册登记业务的，供应商须按照《医疗器械注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第47号）的规定提供所投产品《医疗器械注册证》（如有附表，需提供附表）。供应商为制造商的，须提供《医疗器械生产许可证》；供应商为代理商的，须按照《医疗器械经营监督管理办法》（国家市场监督管理总局令第54号）的规定提供医疗器械经营许可证或经营备案凭证；2.若提供产品为进口产品的须提供产品授权（授权可追溯）；3.单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得参加同一合同项下（同一包号）的政府采购活动；[font=inherit]三、获取采购文件[/font]时间：2024年03月05日 至 2024年03月11日，每天上午9:00至12:00，下午13:00至17:00。（北京时间，法定节假日除外）地点：济南市历下区经十路13777号中润世纪广场18栋603、sdhryw@163.com方式：在获取竞争性磋商文件时间内按照网络报名方式获取竞争性磋商文件：供应商按报名登记表规定内容登记注册报名信息，会同公司有效资质、产品有效资质、竞争性磋商文件制作费汇款底单（转账必须公对公转账并备注24-024标书费+包号）发送至sdhryw@sina.com,邮件名称命名为：“项目编号，名称-包号-包名称-供应商单位名称”，并电话通知招标代理机构项目联系人查阅。开户单位: 山东华仁永旺招标有限公司 、开户银行: 中国工商银行济南高新支行 、帐 号: 1602023609200296250售价：￥200.0 元（人民币）[font=inherit]四、响应文件提交[/font]截止时间：2024年03月21日 09点00分（北京时间）地点：山东省潍坊市奎文区北宫东街262号(北宫街佳乐家)潍坊君尚假日酒店6楼会议室[font=inherit]五、开启[/font]时间：2024年03月21日 09点00分（北京时间）地点：山东省潍坊市奎文区北宫东街262号(北宫街佳乐家)潍坊君尚假日酒店6楼会议室[font=inherit]六、公告期限[/font]自本公告发布之日起3个工作日。[font=inherit]七、其他补充事宜[/font]无[font=inherit]八、凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称：潍坊医学院附属医院地址：潍坊市奎文区虞河路2428号联系方式：李主任0536-30811802.采购代理机构信息名 称：山东华仁永旺招标有限公司地　址：山东省济南市历下区经十路13777号中润世纪广场18号楼603联系方式：徐经理0531-885892373.项目联系方式项目联系人：徐希鹏、王贵民电　话：　　0531-88589237

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测优缺点有哪些？免疫学检测方法分享[/size][/font]免疫学检测优缺点介绍：免疫学检测具有快速、简便、高灵敏度和特异性等优点，因此在医学诊断和治疗中广泛应用。但是，免疫学检测也存在一些缺点，例如价格较高，对于某些特定的毒素可能无法检测，并且检测过程中可能会受到多种因素的干扰，例如操作不规范、实验条件不严格等。总之，免疫学检测具有很多优点，但也存在一些缺点，需要在实验设计、操作规范和质量控制等方面加强管理，以提高检测的准确性和可靠性。免疫学检测方法包括以下几种：①抗原抗体反应的相关检测，主要是免疫组化、免疫荧光、血凝抑制、放射免疫等。其中，免疫组化是应用标记的特异性抗体，在组织细胞原位，通过抗原抗体反应和酶底物的显色反应，对细胞中的抗原进行定位、定性的检测方法，是比较常用的一种方法。②免疫细胞的检测，主要包括细胞毒试验、FCM流式细胞术等。其中，细胞毒试验常用于肿瘤的免疫移植、排斥反应和病毒感染等方面的研究。③酶联免疫吸附试验（ELISA），是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上酶，抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来，根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果，其敏感度可达ng水平。④免疫金胶体技术、胶体金技术等，是将二抗标记上胶体金颗粒，利用抗原抗体间的特异性反应，最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上，此方法简单、快速、广泛应用于临床筛查。义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，义翘神州免疫学检测服务优势：? 拥有成熟的免疫检测体系；? 大量优质的蛋白和抗体产品支撑；? 先进的实验仪器，经验丰富的技术员；? 优良的实验环境，完善的实验平台，为您提供最优质的服务。同时包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。更多免疫学检测服务尽在https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/09/A1379405357_small.jpg1. 取出细胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。 2. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。3. 打孔液浸泡 5 分钟。4. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。注：第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原，检测细胞膜抗原时不用。5. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗体同源动物血清)处理，37 ℃，15 分钟。附：正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制)：按 1:20比例，用PBS配制，每张切片需要量按 50 μl+5 μl (10%抛洒量) 计算。6. 滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37 ℃ 2 小时(也可置于 4 ℃冰箱过夜) 。7. PBS：5 分钟，2 次(置于摇床) 。8. 滴加生物素化的二抗，37℃，40 分钟。9. PBS：5 分钟，2 次(置于摇床) 。10. 滴加三抗 (SAB 复合物) ，37 ℃，40 分钟。11. PBS：5 分钟，2 次(置于摇床) 。12. DAB 显色，镜下观察，适时终止(自来水冲终止) 。附：DAB 的配制储备液(DAB 25 mg/ml)的配制：DAB 250 mg + PBS 10 ml，待完全溶解后分装成 1 ml，100 μl，50 μl ，20 μl 等，-20 ℃，冻存。② 工作液：DAB 储备液 20 μl + PBS 1000 μl + 3% H2O2 5 μl。13. 自来水(细水)充分冲洗。14. 苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗。15. 自来水冲洗返蓝，15 分钟。16. 梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟。17. 二甲苯透明：I ，II (二甲苯)各 5 分钟18. 封片：加拿大树胶(或中性树胶)封片。

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)6. 3% H2 O2灭活内源性过氧化物酶，20 分钟，避光；7. 用 PBS 洗 2 次，每次 5 分钟；8. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 （保持组织呈湿润状态,）滴加正常山羊或兔血清 （与第二抗 体 同源动物血清）处理，37℃，15 分钟。附：正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制)：按 1:20比例，用 PBS 配制，每张切片需要量按 50μ+5μl (10%抛洒量) 计算。9．滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37℃ 2 小时（也可置于 4℃冰箱过夜） 。10．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。11．滴加生物素化的二抗，37℃，40 分钟。12．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。13．滴加三抗 （SAB 复合物） ，37℃，40 分钟。14．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。15．DAB 显色，镜下观察，适时终止（自来水冲终止） 。附：DAB 的配制① 储备液(DAB 25mg/ml)的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待完全溶解后分装成 1ml，100μl，50μl ，20μ l 等，-20℃，冻存。② 工作液：DAB 储备液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl16．自来水（细水）充分冲洗。17．苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗。18．自来水冲洗返蓝，15 分钟。19．梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟。20．二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分钟21．封片：加拿大树胶（或中性树胶）封片。

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测形成的原因有哪些？免疫学[/size][/font][font='calibri'][size=13px]检测包括哪些？[/size][/font]免疫学检测形成的原因：免疫学检测是基于免疫系统对外来物质或抗原的反应而产生的，可分为体液免疫学检测和细胞免疫学检测两大类。体液免疫学检测是通过血液、唾液、乳汁等体液样本中的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等成分的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗体和细胞因子等免疫反应，这些免疫反应产物可通过体液免疫学检测方法进行检测。细胞免疫学检测是通过检测机体内的免疫细胞和免疫分子的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗原提呈细胞，并引导记忆细胞和效应细胞的产生，这些记忆细胞和效应细胞可以在特定情况下识别和消灭病原体或肿瘤细胞，这些细胞和效应细胞本身也可以被检测出来。总之，免疫学检测的目的是通过检测机体的免疫反应，了解机体的免疫状态，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。免疫学检测包括哪些？免疫学检测是指通过各种方法检测机体对病原体或某些生物物质的免疫反应程度，以及机体内的免疫细胞、免疫分子和免疫活性物质的含量及其分布等情况的一种医学技术。免疫学检测广泛应用于各种疾病的诊断、治疗和预防，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫学诊断等。以下是一些常见的免疫学检测项目：体液免疫学检测：主要包括免疫球蛋白的测定，如IgA、IgM、IgE等；补体检测，如总补体溶血活性、补体C1、C2等；免疫复合物检测，如抗体-抗原复合物、补体-抗体复合物等；细胞免疫学检测：主要包括T细胞亚群分析、B淋巴细胞分化抗原检测、自然杀伤细胞抗体检测、T细胞活化抗体检测等；抗体检测：如抗药抗体、中和抗体等；细胞因子检测：如白细胞介素-2、-4、-6等；自身抗体检测：如抗核抗体、抗胰岛素抗体等；感染免疫检测：如病毒特异性抗体、细菌特异性抗体等。总之，免疫学检测是一种非常重要的医学技术，可以帮助医生判断机体的免疫状态，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原，可定性、定位和定量的检测。依托自主研发生产的优质抗体、蛋白试剂、先进的实验仪器以及经验丰富的技术人员，义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。义翘神州免疫学检测服务包含：①WB/Sally Sue高通量检测服务②[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测服务[/url]③免疫组化检测服务④多重免疫荧光和免疫组化服务⑤免疫荧光检测服务⑥HE染色及特殊染色服务⑦ELISA/ELISpot检测服务⑧IP/Co-IP检测服务⑨TMA芯片定制服务更多详情可以查看：https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

[font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化技术[/font] [font=Calibri](Multiplex immunohistochemical[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]mIHC) [/font][font=宋体]也称作酪氨酸信号放大 [/font][font=Calibri](Tyramide dignal amplification[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]TSA) [/font][font=宋体]技术，是一类利用辣根过氧化酶 [/font][font=Calibri](Horseradish Peroxidase, HRP) [/font][font=宋体]对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这一技术基于酪胺信号的放大效应，实现对单个细胞或组织样本上多个目标靶点的同时检测。这为全面研究细胞组成、细胞功能以及细胞间的相互作用提供了强大的工具。通过多重荧光免疫组化技术，科学家们可以更深入地了解细胞的奥秘，揭示生命现象的复杂性。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]实验原理及流程[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]技术采用 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]标记的二抗，[/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]催化加入体系的 [/font][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]衍生荧光染料，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，将信号共价结合到抗原上。之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]原理：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]带有染料标记的底物酪胺[/font] [font=Calibri](T) [/font][font=宋体]分子在过氧化氢氧化环境下，被抗体或探针固定的 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]转化为具有短暂活性的中间状态 [/font][font=Calibri](T*)[/font][font=宋体]，然后被激活的中间态分子 [/font][font=Calibri](T*) [/font][font=宋体]迅速与相接蛋白分子的富含电子区域 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]酪氨酸残基[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]进行稳定的共价结合，未被标记的酪胺分子将被洗脱，借此实现对抗原的特异性染色。由于相接的蛋白 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括 [/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]，抗体，目标抗原[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]都含有大量的酪氨酸结合位点，所以目标抗原处会富集大量标记分子，使信号被有效放大 。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]多重免疫荧光染色的步骤包括样品制备、抗原诱导、抗原解露等。[/font][/b][font=宋体]具体如下：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备：根据细胞或组织的不同，选择不同的处理方式。对于细胞样品，需要固定和渗透化处理以保持其形状和蛋白质结构。对于组织样品，需要切片并进行染色前的去脂处理。[/font][font=宋体]②抗原诱导：如果目标标记物是蛋白质，那么需要选择适当的抗体来识别目标蛋白质。抗体可以人工合成或从动物体内提取。[/font][font=宋体]③抗原解露：对于细胞样品，可以利用活液解离细胞，并将细胞固定在载玻片上。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]与 [/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]区别与联系[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]免疫组化[/b][/url]，是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性的研究。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说，[/font][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]属于 [/font][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]的升级版本！[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Tips[/font][font=宋体]：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相同点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]能够完整显现组织原位形态信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不同点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]常规免疫组化的分析属于定性分析，其判断大多依赖于经验，其分析结果会有差异。而多重荧光免疫组化属于定量分析，其利用软件可对组织中的细胞进行精准的结果分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]常规免疫组化受传统染色成像的限制，靶标少于 [/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]个，无法完整分析组分信息。而多重荧光免疫组化可实现多因子共定位，可以获取更多的生物信息，且样本需求量较少。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段，配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件，提供更优质的图像质量，收获更特异的染色结果。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

PCR................................................................................................................................. 2RT-PCR............................................................................................................................ 4琼脂糖核酸电泳............................................................................................................... 6胶回收纯化DNA.............................................................................................................. 6大肠杆菌质粒DNA的提取（碱裂解法）.......................................................................... 7乙醇沉淀DNA.................................................................................................................. 8酶 切............................................................................................................................. 8连 接............................................................................................................................... 8感受态细胞的制备............................................................................................................ 9转 化............................................................................................................................. 10重组子的筛选和鉴定...................................................................................................... 10真核细胞的转染.............................................................................................................. 11转染细胞的稳定筛选....................................................................................................... 11重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量.......................................................................... 12肿瘤细胞体外传代培养及保种........................................................................................ 13肿瘤动物模型的建立...................................................................................................... 14小鼠尾静脉注射方法...................................................................................................... 14肿瘤蛋白疫苗预防性动物实验........................................................................................ 14人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养................................................................................. 14实验动物免疫方案.......................................................................................................... 15血清制备........................................................................................................................ 16ELISA............................................................................................................................ 16血清学筛选克隆新抗原/新基因....................................................................................... 17ELISPOT........................................................................................................................ 20藻酸盐包裹实验............................................................................................................. 21重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作................................................................... 21（细菌内同源重组AdEasy System）............................................................................... 21组织病理技术................................................................................................................. 26免疫组化染色................................................................................................................. 27流式细胞仪常用的几种检测方法..................................................................................... 29Western Blot(免疫印迹法)................................................................................................ 34PVDF膜上蛋白的可逆染色............................................................................................. 37人肿瘤抗原的识别与鉴定............................................................................................... 39－免疫沉淀实验流程...................................................................................................... 39蛋白质组实验流程.......................................................................................................... 41SDS-PAGE胶染色.......................................................................................................... 44数据库搜索(Databases search)......................................................................................... 45主要的公共数据库及网址............................................................................................... 46蛋白质的序列分析流程................................................................................................... 48聚丙烯酰胺凝胶的配制................................................................................................... 49双向电泳常用溶液配方................................................................................................... 51分子生物学常用溶液配制............................................................................................... 53另外给大家推荐一个资料共享的地方http://www.yiqi120.com/zlzx.asp,好东西大家一同分享.[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=128143]国内某重点实验室分子生物学实验方法与总结[/url]

[quote][b]项目概况[/b]西安交通大学口腔医院试剂采购项目 招标项目的潜在投标人应在择优招采平台（https://c.xbgjzb.com）获取招标文件，并于2023年02月02日 09点30分（北京时间）前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：0617-2212HZ2884项目名称：西安交通大学口腔医院试剂采购项目预算金额：100.0365000 万元（人民币）采购需求：检验类试剂（病原微生物类试剂，临检类试剂，免疫类试剂，凝血类试剂，生化类试剂）；病理类试剂（二甲苯、无水乙醇、盐酸脱钙液等，免疫组化染色二抗试剂，免疫组化染色一抗试剂）。分包情况：第1包：免疫类、生化类试剂，1批，预算金额12.6255万元；第2包：临检类、微生物类试剂，1批，预算金额14.06万元；第3包：凝血类试剂，1批，预算金额27.925万；第4包：免疫组化染色一抗试剂，1批，预算金额9.62525万元；第5包：免疫组化染色二抗试剂，1批，预算金额27.84万元；第6包：病理科普通试剂耗材，1批，预算金额7.96075万元。合同履行期限：第1，2和3包交货期：按需供货，接到采购人通知后5天内送货到指定地点。第4，5和6包交货期：按需供货，接到采购人通知后2天内送货到指定地点。本项目( 不接受 )联合体投标。

[quote][b]项目概况[/b]西安交通大学口腔医院试剂采购项目 招标项目的潜在投标人应在择优招采平台（https://c.xbgjzb.com）获取招标文件，并于2023年02月28日 09点00分（北京时间）前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：0617-2212HZ2884项目名称：西安交通大学口腔医院试剂采购项目预算金额：58.0515000 万元（人民币）采购需求：检验类试剂（免疫类试剂，生化类试剂）；病理类试剂（二甲苯、无水乙醇、盐酸脱钙液等，免疫组化染色二抗试剂，免疫组化染色一抗试剂）。分包情况：第1包：免疫类、生化类试剂，1批，预算金额12.6255万元；第2包：免疫组化染色一抗试剂，1批，预算金额9.62525万元；第3包：免疫组化染色二抗试剂，1批，预算金额27.84万元；第4包：病理科普通试剂耗材，1批，预算金额7.96075万元。合同履行期限：第1包交货期：按需供货，接到采购人通知后5天内送货到指定地点。第2，3和4包交货期：按需供货，接到采购人通知后2天内送货到指定地点。本项目( 不接受 )联合体投标。

[font=宋体][font=宋体]细胞免疫和体液免疫，作为人体免疫系统的两大核心组成部分，各自承担着不同的功能，但同时又紧密相连，共同维护着人体的健康。细胞免疫主要通过[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]淋巴细胞来识别和清除被感染的细胞或癌细胞，而体液免疫则通过[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞产生抗体来中和病毒或细菌。尽管它们在机制和功能上有所区别，但两者在免疫反应中相互协作，共同应对外来的病原体。了解它们之间的区别和联系，有助于我们更好地理解免疫系统的运作机制，并为疾病的预防和治疗提供新的思路。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]一、体液免疫和细胞免疫的作用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]体液免疫：用于产生抗体来达到保护目的的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞免疫：用于清除细胞内寄生微生物和排斥同种移植物或肿瘤抗原。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、体液免疫和细胞免疫的联系[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]体液免疫和细胞免疫各自有独特的作用，又相互配合，共同发挥免疫作用。对于细胞内寄生物，体液免疫首先起作用，阻止寄生物的传播感染，当寄生物进入细胞后，细胞免疫将抗原从细胞释放出来，再由体液免疫最后清除。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]三、体液免疫和细胞免疫的区别[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、起主要作用的细胞不同[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]体液免疫：起主要作用的细胞是[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞免疫：起主要作用的细胞是[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、作用对象不同[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]体液免疫：侵入内环境中的抗原。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞免疫：被抗原入侵的细胞、自身的异常细胞和异体组织器官。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、作用方式不同[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]体液免疫：浆细胞（效应[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞）产生的抗体与相应病原体的抗原特异性结合，并使之发生进一步的变化（如形成沉淀）而被吞噬细胞吞噬，从而抑制病原体的繁殖或对人体细胞的黏附。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞免疫：效应[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞与靶细胞密切接触，并释放穿孔素使靶细胞裂解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]多重荧光免疫组化（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]mIHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]）服务[/b][/url]，更多详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[color=#ff0000][size=4][b]中科院感染免疫重点实验室成立[/b][color=#000000]来源:生物物理研究所 摘自《中国生物技术信息网》[/color][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005141004_218218_1610969_3.gif[/img][color=#000000]5[/color][size=4]月8日上午，中国科学院感染免疫重点实验室成立启动仪式在生物物理研究所举行。科技部基础司司长张先恩，基金委生命科学部主任武维华院士，中科院北京生命科学研究院院长康乐、副院长高福，中科院生命科学与生物技术局王丽萍处长、刘杰处长，计划局侯宏飞副处长，以及研究所赫荣乔、朱美玉、许瑞明副所长，所长助理孙命等职能部门负责人，重点实验室学术委员会委员和长期以来关心和指导感染与免疫实验室的中科院生命科学与生物技术局老局长王贵海研究员以及全体师生一百多人参加了启动仪式。[/size][color=#000000]启动会由许瑞明主持。康乐宣读了中科院关于成立感染免疫重点实验室的通知。赫荣乔代表依托单位宣读了关于聘任饶子和院士为主任，王大成院士、曹雪涛院士、陈志南院士等15名专家为感染免疫重点实验室学术委员会委员的决定。朱美玉宣布了唐宏研究员，范祖森、王盛典研究员为实验室正、副主任的决定。康乐、高福分别向与会的学术委员会委员和实验室主任颁发了聘书。[/color][color=#000000] [/color][/size][/color]

[color=#ff0000][size=4][b]中科院感染免疫重点实验室成立[/b][/size][/color][color=#000000][font=宋体]来源[/font][font=Times New Roman]:[/font][font=宋体]生物物理研究所[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]摘自《中国生物技术信息网》[/font][font=Times New Roman]链接地址：[url]http://www.biotech.org.cn/news/news/show.php?id=78562[/url]5月8日上午，中国科学院感染免疫重点实验室成立启动仪式在生物物理研究所举行。科技部基础司司长张先恩，基金委生命科学部主任武维华院士，中科院北京生命科学研究院院长康乐、副院长高福，中科院生命科学与生物技术局王丽萍处长、刘杰处长，计划局侯宏飞副处长，以及研究所赫荣乔、朱美玉、许瑞明副所长，所长助理孙命等职能部门负责人，重点实验室学术委员会委员和长期以来关心和指导感染与免疫实验室的中科院生命科学与生物技术局老局长王贵海研究员以及全体师生一百多人参加了启动仪式。启动会由许瑞明主持。康乐宣读了中科院关于成立感染免疫重点实验室的通知。赫荣乔代表依托单位宣读了关于聘任饶子和院士为主任，王大成院士、曹雪涛院士、陈志南院士等15名专家为感染免疫重点实验室学术委员会委员的决定。朱美玉宣布了唐宏研究员，范祖森、王盛典研究员为实验室正、副主任的决定。康乐、高福分别向与会的学术委员会委员和实验室主任颁发了聘书。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005141002_218217_1610969_3.gif[/img][/font][/color]

中国科技网讯 据物理学家组织网8月15日（北京时间）报道，一个国际研究小组获得了重大突破，他们发现了人体免疫系统放大对阿片类药物依赖性的关键机制，并证实可通过药物来阻断吗啡和海洛因成瘾，同时帮助缓解疼痛。临床试验预计将在未来18个月内进行。 澳大利亚阿德莱德大学和美国科罗拉多大学博尔德分校的科学家通过实验室研究发现，一种名为纳洛酮的药物可以选择性地阻断免疫成瘾反应。这项发表于《神经科学杂志》的新成果有望带来“二合一”型药物，既可缓解病人的剧烈疼痛症状，又能帮助海洛因成瘾者戒除药物依赖。 “我们的研究确凿地表明，我们可以通过大脑的免疫系统来阻止成瘾，而不针对大脑的神经系统。”研究论文的主要作者、阿德莱德大学医学院的马克·哈钦森说，“在成瘾过程中，中枢神经系统和免疫系统都发挥着重要作用，但我们的研究显示，只需阻止大脑中的免疫反应，就能阻断对阿片类药物的渴望。” 该团队将研究重点放在名为TLR4的免疫受体上。“阿片类药物，比如吗啡和海洛因，绑定TLR4受体的方式与免疫系统对细菌的正常反应相同，但问题是，TLR4随即变成了药物依赖性的放大器。”哈钦森说。 哈钦森表示，纳洛酮能够自动关闭对药物的依赖，它减少了对阿片类药物的需要以及与成瘾相关的行为，同时，大脑中的神经化学也在发生变化——大脑不再生产多巴胺了，这种重要的化学物质能够向大脑传递服用药物后的兴奋感。 研究论文的另一作者、科罗拉多大学博尔德分校神经科学中心教授琳达·沃特金斯说：“这项工作从根本上改变了我们对阿片类药物、奖励和上瘾机制的了解，多年来我们一直在怀疑TLR4可能是阻断阿片类药物成瘾的关键，现在我们掌握了证据。” 沃特金斯表示，用来阻止成瘾的药物纳洛酮是上世纪70年代发明的一种非阿片类镜像药物，他们相信可以将它与吗啡合用，进而开发出帮助患者缓解剧烈疼痛的同时又不至于让人上瘾的新止疼药物。（记者 陈丹） 总编辑圈点 药物成瘾是一个引人入胜的科学课题，因为对它的研究可以揭示出大脑运作是多么复杂。如哈钦森团队揭示的，药物依赖的形成不光涉及中枢神经，其关键一环是免疫受体发挥作用。相关实验不光证明，纳洛酮与吗啡共用可避免成瘾，还为今后研制戒毒新药提供了思路。或许有一天，在药物成瘾与戒断机理完全揭示之后，人类将告别毒品引发的生理痛苦。 《科技日报》（2012-08-16 一版）

[font=宋体][b]免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域。[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]免疫疾病诊断[/font][/font][font=宋体][font=宋体]用免疫血清学方法对人和动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断，是免疫技术最突出的应用。尤其是酶标抗体技术，已成为多种传染病的常规诊断方法，如已有的人各型肝炎、猪瘟等[/font] [font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]试剂盒，它们简便、快速，又具有高度的敏感性和可重复性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]动物植物生理活动研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质，它们在体内含量极微少，但在调节机体的生理活动中起重要作用，因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能（如生长生殖等）。由于这些物质含量极低，用常规化验方法难以准确测出。目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出[/font] [font=Calibri]ng(10 -9 g) [/font][font=宋体]及 [/font][font=Calibri]pg(10 -12 g) [/font][font=宋体]水平的物质，它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质，研究动物、植物生理和生物防治的重要手段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]物种及微生物鉴定[/font][/font][font=宋体]各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同，物种种源越远，抗原性差异越大，因此可用区分抗原性的血清学反应进行物种鉴定、物种的分类等工作。血清学反应在细菌、病原菌等微生物鉴定和血清型及亚型的分析方面已得到广泛应用。但对动物种源，植物和昆虫分类方面还是一个新的领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]动物、植物性状的免疫标记[/font][/font][font=宋体]通过分析动物、植物的一些优良性状（如高产、优质、抗逆性等）的特异性抗原，然后用血清学方法进行标记选择育种，这是一个很有前途的方向，它比分子遗传学标记选择育种简便。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]免疫增强药物和疫苗的研究[/font][/font][font=宋体]疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果。在研究一些免疫增强药物，尤其研究肿瘤药物时，需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用。因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]发病机理研究[/font][/font][font=宋体]传染病的病原从机体特定部位感染，并在特定组织细胞内增殖，引起发病。一荧光抗体感染或免疫酶组化染色，可在细胞水平上确定发病等病原微生物的感染细胞，还可用于研究自身免疫病和变态反应性疾病的发病机理，如免疫复合物的沉积部位的分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分子生物学研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在基因工程的分离、克隆的筛选，表达产物的定性与定量分析，表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如通常用免疫沉淀方法分离[/font] [font=Calibri]mRNA [/font][font=宋体]基因，酶标抗体核酸探针（地高辛核酸探针）检测筛选克隆，免疫转印技术分析表达产物的分子量、 [/font][font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]RIA [/font][font=宋体]分析表达量、免疫亲和层析纯化表达产物，免疫方法分析表达产物的性质如免疫原性。免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Flow Cytometry[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biacore[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Octet[/font][font=宋体]等检测技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service][b]免疫学检测服务[/b][/url]类型：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][b][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化[/font] [font=Calibri](IHC) [/font][font=宋体]单染服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫荧光[/font] [font=Calibri](IF) [/font][font=宋体]单染检测服务[/font][/font][font=宋体]多重染色服务[/font][font=宋体][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色及特殊染色服务[/font][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b][font=宋体]流式细胞[/font] [font=Calibri](FACS) [/font][font=宋体]检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA/ELISpot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]技术服务[/font][/font][font=宋体]石蜡组织芯片定制服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注义翘神州免疫学检测服务[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service[/font][/font]

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一、单向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）（2）待检血清（抗原）：人血清http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084631_small.jpg （3）参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。（4）其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。2. 方法（1）将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。（2）在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔，见图1。（3）向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10 μl，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。（4）已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。（5）测定各孔形成的沉淀环直径（mm），用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。二、双向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清：兔抗人血清（2）待测血清：人血清（3）阴性对照血清（4）其它：生理盐水、琼脂粉、载玻片、打孔器、微量进样器等。2. 方法（1）取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0 ml 加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。（2）凝固后，用直径3 mm 打孔器，孔间距为5 mm。孔的排列方式如图2所示。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084537_small.jpg（3）用微量进样器于中央孔加抗体，于周围孔加各种抗原。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。（4）加样后的琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24~48小时。（5）结果观察：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与被检样品的沉淀线发生融合，才能确定待检样品为真正阳性。（6）结果分析：琼脂扩散结果受许多因素影响。①抗原特异性与沉淀线形状的关系：在相邻两完全相同的抗原与抗体反应时，则可出现两单沉淀线的融合。反之，如相邻抗原完全不同时，则出现沉淀线之交叉；两种抗原部分相同时，则出现沉淀线的部分融合。见图3。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084538_small.jpg②抗原浓度与沉淀先导形状的关系：两相邻抗原浓度相同，形成对称相融合的沉淀线；如果两抗原浓度不同，则沉淀线不对称，移向低浓度的一边。见图4。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084539_small.jpg③温度对沉淀线的影响：在一定范围内，温度扩散快。通常反应在0~37℃下进行。在双向扩散时，为了减少沉淀线变形并保持其清晰度，可在37℃下形成沉淀线，然后置于室温或冰箱（4℃）中为佳。④琼脂浓度对沉淀线形成速度的影响：一般来说，琼脂浓度越大，沉淀线出现越慢。⑤参加扩散的抗原与抗体间的距离对沉淀线形成的影响：抗原、抗体相距越远，沉淀线形成的越慢，所以在微量玻片法时，孔间距离以0.25~0.5 cm 为好，距离远影响反应速度。当然孔距过远，沉淀线的密度过大，容易发生融合，有碍对沉淀线数目的确定。⑥时间对沉淀线的影响：沉淀线形成一般在1~3天出现，14~21天出现的数目最多。玻片法可在1~2小时出现，一般观察72小时，放量过久可出现沉淀线重合消失。

[font=宋体][font=宋体]人体免疫系统是一个复杂而精细的网络，它时刻保护着我们免受外界病原体的侵害。其中，免疫自稳、免疫监视和免疫防御是免疫系统的三大核心功能，它们各自承担着不同的任务，共同维护着我们的健康。免疫自稳负责调节和维持免疫系统的内部稳定，防止免疫反应过度或不足；免疫监视则时刻监控体内细胞的异常变化，及时识别和清除可能的癌变或感染细胞；而免疫防御则是免疫系统对外界病原体的直接抵抗，通过产生特异性抗体和细胞免疫反应来清除入侵者。本文将深入探讨这三大功能的区别与联系，帮助读者更好地理解人体免疫系统的运作机制。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]一、免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫监视是身体长期进化过程中形成的自然防御功能。这个功能似乎打开了第三个视角来监控身体的每一个动作。没有侵略者，没有异己[/font][font=Calibri]......[/font][font=宋体]免疫监测最重要的是区分敌人和我。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]监视功能有两个方面[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①自我识别[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]自我识别是指免疫系统如何识别身体内的正常细胞和组织，以避免对它们产生攻击。这是非常重要的，因为免疫系统必须能够区分自身组织和外来物质之间的差异。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异常细胞监测[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]异常细胞监测是免疫系统如何检测和识别异常细胞的过程。这些异常细胞包括被感染的细胞、突变细胞、癌细胞等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、免疫防御[/font][font=宋体]——重要保障[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御是指通过识别和消除外来病原体来保护身体免受疾病入侵的过程。免疫防御由免疫系统中的各种细胞免疫和分子共同发挥作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如何发挥免疫防御的作用？[/font][font=宋体]当免疫系统检测到外来病原体时，他将启动免疫防御机制，将免疫细胞引导到感染位置，并以各种方式消除病原体。免疫细胞包括不同类型的白细胞和淋巴细胞，其功能和特征不同。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御除了直接消除病原体外，还有另一个重要的作用，即刺激免疫细胞产生抗体，从而促进身体产生免疫记忆。当身体再次遇到同一病原体时，免疫系统可以快速、更有效地抵抗它，然后再次预防疾病。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]但免疫防御可不是绝对的！有时病菌会以各种方式避免免疫系统的攻击，使感染难以有效控制。例如，一些病菌可以通过改变其表面抗原的结构来防止被免疫细胞识别，然后避免攻击。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外，一些病原体还能通过影响免疫系统的功能来抑制免疫反应，从而获得更长的生存时间。因此，有必要不断研究和实践免疫系统的机制，以及病原体的避免策略，然后开发更有效的辅助治疗策略。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]三、免疫自稳[/font][font=宋体]——维持平衡[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是指机体免疫系统在正常状态下维持一种平衡状态，以保持免疫系统的正常功能和机体的健康。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是一个复杂而精确的调节过程，涉及多种细胞类型、分子信号和调节机制。它的目的是确保免疫系统对病原体和异常细胞的敏感性和应答能力，同时避免对自身组织的过度反应和自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是怎么发挥作用的？[/font][font=宋体]免疫自稳的关键是保持免疫系统的平衡。免疫系统需要在处理外部侵入的病原体时快速启动免疫反应，但也需要在免疫反应结束后及时关闭反应，以免损害自己的组织。通过调节免疫细胞之间的相互影响，保持免疫系统的平衡，避免过度激活或自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之，免疫细胞的三大作用机制即：免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我、免疫防御——重要保障、免疫自稳——维持平衡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫细胞在人体内起着至关重要的作用，它们是维护人体健康不可或缺的卫士。然而，随着年龄的增长，人体的免疫细胞数量会逐渐减少，这也是人体衰老的一个重要标志。为了保持免疫力的强盛，我们需要及时补充免疫细胞，让它们继续发挥守护身体的作用。只有这样，我们才能保持健康的体魄，远离疾病的侵扰。因此，重视免疫细胞的补充与养护，对于维持人体免疫力的稳定和健康至关重要。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多重染色服务，包含[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]免疫荧光和免疫组化服务[/b][/url]，更多详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一、单向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）（2）待检血清（抗原）：人血清http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084631_small.jpg （3）参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。（4）其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。2. 方法（1）将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。（2）在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔，见图1。（3）向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10 μl，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。（4）已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。（5）测定各孔形成的沉淀环直径（mm），用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。二、双向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清：兔抗人血清（2）待测血清：人血清（3）阴性对照血清（4）其它：生理盐水、琼脂粉、载玻片、打孔器、微量进样器等。2. 方法（1）取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0 ml 加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。（2）凝固后，用直径3 mm 打孔器，孔间距为5 mm。孔的排列方式如图2所示。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084537_small.jpg（3）用微量进样器于中央孔加抗体，于周围孔加各种抗原。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。（4）加样后的琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24~48小时。（5）结果观察：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与被检样品的沉淀线发生融合，才能确定待检样品为真正阳性。（6）结果分析：琼脂扩散结果受许多因素影响。①抗原特异性与沉淀线形状的关系：在相邻两完全相同的抗原与抗体反应时，则可出现两单沉淀线的融合。反之，如相邻抗原完全不同时，则出现沉淀线之交叉；两种抗原部分相同时，则出现沉淀线的部分融合。见图3。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084538_small.jpg②抗原浓度与沉淀先导形状的关系：两相邻抗原浓度相同，形成对称相融合的沉淀线；如果两抗原浓度不同，则沉淀线不对称，移向低浓度的一边。见图4。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084539_small.jpg③温度对沉淀线的影响：在一定范围内，温度扩散快。通常反应在0~37℃下进行。在双向扩散时，为了减少沉淀线变形并保持其清晰度，可在37℃下形成沉淀线，然后置于室温或冰箱（4℃）中为佳。④琼脂浓度对沉淀线形成速度的影响：一般来说，琼脂浓度越大，沉淀线出现越慢。⑤参加扩散的抗原与抗体间的距离对沉淀线形成的影响：抗原、抗体相距越远，沉淀线形成的越慢，所以在微量玻片法时，孔间距离以0.25~0.5 cm 为好，距离远影响反应速度。当然孔距过远，沉淀线的密度过大，容易发生融合，有碍对沉淀线数目的确定。⑥时间对沉淀线的影响：沉淀线形成一般在1~3天出现，14~21天出现的数目最多。玻片法可在1~2小时出现，一般观察72小时，放量过久可出现沉淀线重合消失。