内源性肽生物样品

生物样品中内源性物质——定量下限怎么算

用液质测生物样品中内源性物质，要测多个组织?方法学验证时每个组织都要做一次精密度吗？把高中低浓度对照品加入相应组织？---您好，已转到 LCMS版（如不合适请版主帮忙转移）。下次发帖记得到对应的技术版面，新手版面的浏览量小 ，可能耽误您的问题。

想请问大家关于如何确定生物组织体的内源性荧光组分，由于生物组织体有许多的能发光的内源性荧光物质，但是要如何一一区分开来呢，并且，我们对与一个单一组分的荧光物质的荧光光谱的带宽也是比较长宽的，如何说就是一个荧光物质在发光呢，请教大家了，欢迎e-mail to ：lls009663@163.com.等待大家的答案！！！

想问一下用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]定量生物样本内源性的物质，怎么选择空白基质？基质加标做标曲

[size=4] 在一定程度上，内源性的干扰一直困惑这很食品检测，在食品检测的残留级检测中更为严重，然而最为突出的就是内源性激素的干扰，很多人挠破额头皮也无法解决，回过头来发现自己的努力不过是在向着错误的方向进行，我建立不少激素方面的前处理方法，深受其苦； 原始的定义上讲来，内源性是内部本身就存在的东西，并不是外部干涉和添加，无法避免的； 然而在科学发达的今天，这个定义在部修改，人们可以通过对动物的阉割，使动物体内的雄性激素或雌性激素含量与生物界的本身产生极大的差异，从而获取利益，当然也有人给动物使用激素，例如给奶牛使用激素，使其不间断的产奶；这样的例子原来越多 听闻国家某部门宣称“圣元”奶粉中的内源性激素问题，我想问问，这些内源性真的是“内源性”吗？还是有人在“误解”这个词？大家说呢！[/size]

想请教各位前辈，刚开始做方法学就 碰到了难题，我是要测一些内源性物质，老板的意思是用同位素标记生物基质标准品配置工作曲线，那么这样的话，基质效应就会特别明显，因为标记的和未标记的是同时出峰，想请教一下各位前辈有没有什么解决办法，不胜感激！

高效液相色谱中，利用标准加入法测定内源性物质，方法学验证时，最低检测限如何确定？另外，回收率如何计算？

[size=4][color=#DC143C][font=黑体]同位素比质谱方法检测内源性类固醇雄烯二酮[/font][/color][/size]=========================================在所使用的禁用物质中，类固醇激素是较为普遍使用的一类药物。人体自身能合成与分泌的类固醇激素称为内源性类固醇激素，如攀酮。由于在检测方法上有一定难度，一些运动员选择使用内源性类固醇制剂以逃避兴奋剂检测。目前，兴奋剂检测实验室应用同位素比质谱分析方法检测内源性类固醇来源。13C和12C是碳元素在自然界中的天然同位素。有机化合物的来源不同，其同位素比(如13C与12C的比值)也不同。人体自身分泌的类固醇与相同化学结构的类固醇制剂的同位素比不同。应用同位素比质谱分析技术可以测定化合物13C与12C的比值，同位素比用δ（‰）值表示。根据仪器的分析流程和组成部分，本文方法称为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/燃烧炉/同位素比质谱([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS)方法。该方法在兴奋剂检测中的应用时间较短，文献方法较为繁琐，本文建立了快速灵敏的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS分析方法。-------------------------------------------------试验材料与方法1. 试剂和对照品试剂：β-葡萄糖醛酸酶，Sigma；其余均为国产分析纯试剂。对照品：睾酮（缩写T）、雄酮（缩写An）、本胆烷醇酮（缩写Etio）、5α-雄烷-3α，17β-二醇（缩写5α-diol）、5β-雄烷-3α，17β-二醇（缩写5β-diol）、孕二醇（缩写PD）购自Sigma公司。2. 样品两名健康志愿者，一名男性40岁，尿样为sample 1；一名女性38岁，尿样为sample 2，均没有服用任何药物。收集其晨尿为阴性对照尿。阳性尿样为世界反兴奋剂机构水平考试所用尿样来自兴奋剂检测中心。3. 仪器[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/燃烧炉/同位素比值质谱仪（HP6890/DELTA PLUS，Finnigan）；高效液相色谱仪（Waters2796，检测器：Waters2996 PAD，自动收集器：Waters Fraction Collector Ⅲ）；Anilent 5973i[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用仪。4. 方法4.I [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS操作条件色谱柱：HP5毛细管色谱柱，25m×0.2mm i.d.×0.3μm；柱流速：1mL/min（室温）；升温程序：60 ℃（2min）一50 ℃/min→255℃一2.5℃/min→280℃（6.5min）；进样口温度：260℃；燃烧炉温度:960℃；质谱离子源：EI；参考气：CO2，1.8V。4.2 高效液相色谱仪操作条件色谱柱：ZQRBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：水-乙睛，梯度洗脱（0-18min：乙睛从30%→100%）；流速1mL/min；柱温：室温。4.3 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MSD操作条件色谱柱：HP-1毛细管色谱柱，25 m×0.2mm i.d.×0.11μm；柱流速：1 mL/min （室温）；升温程序：150 ℃（1min一5℃/min→200℃一30℃/min→310℃（10min）。4.4 样品预处理取尿样2mL，加人1Ml0.2mol pH=7.0的磷酸盐缓冲液和10μLβ-葡萄糖醛酸酶（5000 IU）混匀，在55℃恒温水浴中培养3h，取出后加pH=8.8的碳酸盐固体缓冲剂约100mg 和5mL叔丁基甲醚，振荡萃取，离心后，取出上层有机溶液，在加热的情况下，用氮气吹干，加人50μL甲醇溶解残渣，备用。将上述甲醇溶液置HPLC仪上，依前述色谱条件分离，分段收集流出液，确定收集时间程序。分别将流出组分用氮气吹干，加人50μL环己烷，备用。4.5 对照品溶液的制备分别配制对照品睾酮、雄酮、本胆烷醇酮、5α-雄烷-3α，17β-二醇、5β-雄烷-3α，17β-二醇，孕二醇的甲醇溶液，浓度为1mg/mL。4.6 样品测定4.6.1 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MSD 分析依上述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MSD仪器操作条件，取样品溶液及对照品溶液进行全扫描，扫描范围m/z 20~450，选择待测物的特征离子，获得SIM图。经对样品中与对照品有相同保留时间的峰进行质谱分析，及与标准品质谱图的对比，确定待测样品的组成。4.6.2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS分析依上述CC/C/IRMS仪器操作条件，对处理后的样品进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/C/IRMS分析，测得内源性类固醇激素的δ值。

各位前辈大家好： 初来乍到请多多关照！我最近想做监测鱼体内血清中类固醇激素的实验，实验室的仪器和设备都是很齐全的，我打算用HPLC-Q/TOF去做，先定性后定量。现在有一个问题难倒我了，就是标准品因为我做内源性的激素物质的监测，雄激素、雌激素和孕激素的标准品大多是哺乳动物和人的，我有3点疑惑，请懂的人帮忙指点一下：1、有卖的雌激素、雄激素和孕激素是从鱼体内提取的吗？谁知道请帮我提供一个公司的名称被 2、如果标准品都是从人或者哺乳动物体内提取的，我在用飞行时间质谱做鱼体内监测的时候能够扫描出来吗，比如说标准品是雌二醇是从人体内提取后制成标准品的，那么我监测鱼体内的内源性雌二醇能扫描出来吗，是同一种物质吗，分子结构是否相同呢？我看一些标准中检测过外源性性激素，他们所用的标准品是怎么合成的呢，我用这种标准品能够检测我鱼体内的呢？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em34.gif（说的有点麻烦，不知道大家看懂没） 3、用过ABSciex家的5600+的仪器的高手们，请问在没有标准品的情况下是否无法进行监测，不用标准品有没有什么软件或者技术能分析出来物质，没有标准品无法进行定量吧！问题很棘手也很多！请大家给予帮助，初来乍到积分很少，努力攒积分吧！谢谢了！

除了要监控农药等有害物质的残留量，一些影响烟草品质的内源性组分如植物多酚、芳香胺等同时也要检测。植物多酚是烟草中的一类重要物质，其含量对烟草品质有重要影响，因而研究烟草及其制品中的植物多酚具有重要意义。通常的方法是用热甲醇水溶液对烟草中的多酚进行萃取，然后通过C18 SPE柱除去萃取物中弱极性脂类干扰物。①烟草样品中植物多酚的固相萃取方法烟样萃取：将烟样粉碎后过0．18 mm筛。取0．20 g，加入45 mL 80％(体积分数)甲醇水溶液，加热回流30 min。冷却后定容至50 mL。固相萃取净化SPE柱：Sep-Pak C18，Waters公司。柱预处理：30 mL甲醇，30 mL水，10 mL／min。样品过柱：5 mL上述甲水萃取液过柱，10 mL／min，弃去最初3 mL，收集后面2 mL。馏分过滤：0．45μm针头过滤器过滤，HPLC分析。②烟草中苯酚、儿茶酚固相萃取方法烟草中挥发酚在烟草燃烧后会产生不好的气味。苯酚和儿茶酚对呼吸系统有腐蚀和助癌作用。因此，近年人们开始关注并监控烟草中挥发酚的含量。以下是固相萃取方法：烟样萃取：20．00 g烟样，加入150 mL 2．5mol／L硫酸，加热回流l h，自动水气蒸馏仪以50％蒸汽量蒸馏15 min，收集其问的约230 mL馏分，加入1．7g磷酸二氢钾，调节pH至弱酸性，定容至250 mL。固相萃取净化SPE柱：Sep—Pak C18，30 mg，Waters公司。柱预处理：15 mL甲醇，30 mL 0．05 mol／L磷酸二氢钾缓冲溶液。样品过柱：50 mL上述样品过柱，10 mL／min。柱干燥：离心除水。目标物洗脱：2 mL 60％(体积分数)甲醇溶液。HPLC分析：Nova-pak C18色谱柱，流动相A-甲醇，B-0.05mol／L磷酸二氢钾缓冲溶液。梯度洗脱，0min 80％B，10 min 20％B，15 min 20％B，20 min80％&流速0.5 mL／min。检测器：DAD，进样量10mL。应用该方法对烟样进行萃取分析，回收率：苯酚91．8％～104．5％，儿茶酚89．6％～103．6％。来源：中国标准物质网

生物样品预处理方法 生物样品的前处理是体内药物分析的一个重要环节,也是整个分离分析过程中最繁琐的一个步骤。与原料药物和制剂相比,生物样品更为复杂:微量药物分布在大量生物介质中,对分析仪器的灵敏度提出了更高的要求;样品中含有大量内源性物质,不仅能与药物及其代谢物结合,而且常干扰测定。因此,生物样品中的药物必须经过分离、纯化与浓集,必要时还需对待测组分进行化学改性处理,从而为最后测定创造良好的条件。传统的样品前处理方法仍为溶剂萃取法,方法耗时、危害人体、污染环境,萃取使用大量溶剂,分析时需浓缩,会导致有效组分的损失。本文仅对近年相关文献报道的几种药物分析过程中生物样品预处理技术及应用进行综述。一、超临界流体萃取技术超临界流体萃取( supercritical fluid extraction ,SFE) 是环保型分离浓集技术,具有萃取效率和选择性高、省时、萃取溶剂(如CO2 ) 便于挥发、提取物较为“干净”、环境污染少、操作条件易于改变等特点,不仅广泛应用于食品、化妆品、环境、医药及一些天然产物的分析,在生物体内药物分析方面也显示出一定的优势。超临界流体萃取技术的原理是控制超临界流体在高于临界温度和临界压力的条件下,从目标物中萃取成分,当恢复到常压和常温时,溶解在超临界流体中的成分立即与气态的超临界流体分开。该技术对于挥发性成分、脂溶性成分、小分子萜类及热敏物质等的提取,较传统方法有很多优越性。常用萃取剂为CO2。由于超临界流体CO2是非极性溶剂,对于低极性和非极性的化合物表现出优异的溶解性能,而对于大多数无机盐、极性较强的物质几乎不溶。通过添加改性剂,如甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水等,并通过加压改善其溶解性能,使超临界流体萃取技术对生物碱类、黄酮类、皂甙类等的应用也日趋普遍。针对生物样品中通常含有不同极性组分或含有大量脂溶性成分干扰的特点[font=Times New Rom

请问各位大佬们，我测的是尿样中的内源性的物质，但我看到大部分文献需要测定尿样中的肌酐值，我想问为撒要测定肌酐呢？还有需要什么样的方法来对尿样中的肌酐值定量呢？

准备用酶促荧光法测粪便样品中的D－乳酸含量， 原理：D－乳酸在D－乳酸脱氢酶（D-LDH）的催化下生成丙酮酸，同时把NAD+转变为NADH，NADH具有荧光特性，通过测定NADH 的浓度达到间接测样品中 D－乳酸盐的浓度。已知未去蛋白的样品易受到内源性的L-LDH和D-LDH的干扰，因为NAD+是这两个酶的共同底物。为了避免非特异的NAD+转化成NADH而导致D－乳酸盐浓度的高估，对粪便样品进行前处理非常必要。查文献说，用高氯酸脱蛋白，用量与样品体积比为1：1。存在疑问：用高氯酸脱蛋白用量应怎么确定？如果用量不足，不足以除去蛋白（内源性酶），如果用量过高，可能对其后加入的酶具有破坏作用，怎样才能确定一个合适的用量，即能保证除去样品中的内源性酶，又不至于影响后来加入用来反应的酶，请各位高手帮忙解决一下这个问题？谢谢！如果不用高氯酸脱蛋白，用其它的试剂也存在同样的问题。

生物祥品分析前处理技术生物样品的前处理涉及很多方面，但主要应考虑生物样品的种类，被测定药物的性质和测定方法三个方面的问题。样品的分离、纯化技术应该依据生物样品的类型。例如，血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出；唾液样品则主要采用离心沉淀除去粘蛋白；尿液样品常采用酸或酶水解使药物从缀合物中释出，当原型药物排泄在尿中时，可简单地用水稀释一定倍数后进行测定。根据被测定药物的结构、理化及药理性质、存在形式、浓度范围等，采取相应的前处理方法。例如，药物的酸碱性（pka）、溶解性质涉及到药物的提取手段；是否具有挥发性涉及到能否采用气相色谱法测定；药物的光谱特性及官能团性质涉及到分析仪器的选择、能否制成衍生物及应用特殊检测器的可能性。药物在样品中的浓度相差很大，浓度大的样品，对前处理要求可稍低；浓度越低则样品前处理要求越高。此外，药物在体内常产生许多代谢产物，其中一些代谢物仍具有药理活性，需要与原型药分别测定，因而也要了解药物的药理学性质和药物动力学特性。样品于测定前是否需要纯化以及纯化到什么程度均与其后采用的测定方法的不同而不同。即纯化程度与所用测定方法的专属性、分离能力、检测系统对不纯样品污染的耐受程度等密切相关。一般说来，放射免疫测定法由于具有较高的灵敏度和选择性，因此当初步除去主要干扰物质之后即可直接测定微量样品；而对灵敏度和专属性较差的紫外分光光度法，分离要求就要相应高一些；至于常用的高效液相色谱法，为防止蛋白质等杂质沉积在色谱柱上，上柱前需对生物样品进行去蛋白，有时对被测组分进行提取、制备衍生物等前处理。下图大致反映了检测方法与样品前处理要求的相三关系。样品处理步骤与分析方法的选择（一）去除蛋白质在测定血样时，首先应去除蛋白质。去除蛋白质可使结合型的药物均出来，以便测定药物的总浓度；去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成，以及可以保护仪器性能（如保护HPLC柱不被沾污），延长使用期限。去除蛋白法有以下几种。1.加入与水相混溶的有机溶剂 加入水溶性的有机溶剂；可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。含药物的血浆或血清与水溶性有机溶剂的体积比为1：（1～3）时，就可以将90％以上的蛋白质除去。水溶性有机溶剂的种类不同时，析出的蛋白质形状亦不同；并且所得上清液的pH值也稍有差别，如用乙腈或甲醇时，上清液pH为8.5～9.5，用乙醇或丙酮时，上清液pH为9～10。操作时，将水溶性有机溶剂与血浆或血清按一定比例混合后离心分离，取上清液作为样品。通常分离血浆或血清用的离心机（3000r/min）不能将蛋白质沉淀完全，而采用超速离心机（10000r／min）离心1～2min便可将析出的蛋白质完全沉淀。离心时应用超速离心机专用的具塞塑料尖底管，可使析出的蛋白质牢固地粘在管底，便于上清液的吸取。2.加入中性盐 加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化。中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋白质脱水而沉淀。常用的中性盐有：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等。操作时，如按血清与饱和硫酸铵的比例为1：2，混合，离心（10000r/min）1～2min，即可除去90％以上的蛋白质。所得上清液的pH为7.0～7.7这种利用盐析的方法与有机溶剂提取法并用时，药物的回收率高，因而常常被采用。3.加入强酸 当pH低于蛋白质的等电点时，蛋白质以阳离子形式存在。此时加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶住盐而沉淀。常用的强酸有：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸-钨酸混合液及5％偏磷酸等。含药物血清与强酸的比例为1：0.6混合，离心〈10000r／min）1～2min，就可以除去90％以上的蛋白质。取上清液作为样品。因加入了强酸，上清液呈酸性（pH0～4），在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。过量的三氯醋酸可经煮沸，分解为氯仿和二氧化碳而被除去；也有用乙醚提取过量三氯醋酸的方法。过量的高氯酸可用碳酸钾、醋酸钾、氢氧化钠等中和，然后加乙醇使产生的高氯酸钾（钠）沉淀而被除去。偏磷酸及硫酸-钨酸可用同法除去。4.加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 当pH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用的沉淀剂有CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH等。离心分离后所得的上清液pH分别为5.7～7.3和6.5～7.5。5.酶解法 在测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物时，常需用酶解法。最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。它不仅可使组织酶，并可使药物析出。枯草菌溶素是一种细菌性碱性蛋白分解酶，可在较宽的pH活圈（PH7.0～11.0）内使蛋白质的肽键降解，在50～60℃具有最大活力。酶解法操作简便。先将待测组织加Tris-缓冲液（pH 10·5）及酶，60℃培育1h，用玻璃棉过滤，得澄清滤液，即可供药物提取用。酶解法的优点是：可避兔某些药物在酸及高温下降解：对与蛋白质结合牢的药物（如保泰松、苯妥英纳），可显著改善回收率；可用有机溶剂直接提取酶解液而无乳化现象生成，当采用HPLC法检测时，无需再进行过多的净化操作。酶解法的主要问题是不适用于在碱性下易水解的药物。（二）缀合物的水解尿中药物多数呈缀合状态。一些含羟基、羧基、氨基和巯基的药物，可与内源性物质葡萄糖醛酸形成葡萄糖醛酸甙缀合物；还有一些含酚羟基、芳胺及醇类药物与内源性物质硫酸形成硫酸酯缀合物。由于缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂提取。为了测定尿液中药物总量，无论是直接测定或萃取分离之前，都需要将缀合物中的药物释出。有些药物仅需较温和条件即可使药物游离，有些则需较剧烈的方法，常用酸水解或酶水解的方法。酸水解时，可加入适量的盐酸液。至于酸的用量和浓度、反应时间及温度等条件，随药物的不同而异，这些条件应通过实验来确定。对于遇酸及受热不稳定的药物，可以用酶水解法。常用葡萄糖醛酸甙酶或硫酸酯酶或葡萄糖醛酸甙硫酸酯酶的混合酶。酶水解很少使被测药物或共存物发生降解。虽然酶水解的时间较常，以及由酶制剂带入的粘液蛋白可能导致乳化及色谱柱顶部阻塞的缺点，但仍被优先选用。（三）分离、纯化与浓集不管分析目的是什么，其选择性是相当重要的。这是因为内源性物质、代谢物或其它药物的干扰能影响分析结果。对于大多数药物而言，生物样品的分析通常由两步组成：样品的前处理（分离、纯化、浓集）和对最终提取物的仪器分析。前处理是为了除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围之内；分析的专属性也有部分取决于仪器分析这一步骤，但主要仍是样品的前处理。提取法是应用最多的分离、纯化方法。提取的目的是为了从大量共存物中分离出所需要的微量组分----药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集。提取法包括液-液提取法和液-固提取法。1.液-液提取法（liquid-liquid extraction，LLE）多数药物是亲脂性的，在适当的溶剂中的溶解度大于水相中的溶解度，而血样或尿样中含有的大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。因而用有机溶剂提取一次即可除去大部分杂质，从大量的样品中提取药物经浓集后作为分析用样品。应用本法时要考虑所选有机溶剂的特性、有机溶剂相和水相的体积及水相的pH值等。对所选用的有机溶剂，要求对被测组分的溶解度大：沸点低，易于浓集、挥散；与水不相混溶以及无毒、化学稳定、不易乳化等。最常用的溶剂是乙醚和氯仿等。提取时所用的有机溶剂要适量。一般有机相与水相（体液样品）容积比为1：1或2：1。根据被测药物的性质及方法需要，可从实验中考察其用量与测定响应之间的关系，来确定有机溶剂的最佳用量。PH的影响在溶剂提取中十分重要。水相的pH随药物的理化性质的不同而异，但生物样品一般多在碱性下提取。这是因为多数药物是亲脂性的碱性物质，而生物样品中的内源性物质多是酸性的，一般不含脂溶性碱性物质，所以在碱性下用有机溶剂提取时内源性杂质不会被提取出来。曾有人将空白血清分别与pH2、pH7、及PH13的缓冲液混后用乙醚提取，提取液用RP-HPLC（UV-220nm检测）测定色谱图时（图），发现在碱性（pH13）下提取液的杂质峰最少，而在中性及酸性下杂质峰显著多而强。当一些碱性药物在碱性pH不稳定时，则在近中性pH处用氯仿和异丙醇提取。而中性药物则在pH7附近提取（愚然它可在任一pH被提取）。 提取时于水相（体液样品）中加入有机溶剂后，一般只提取一次。个别情况下（如杂质不易除去），则须将第二次提取分离出的含药有机相，再用一定pH的水溶液反提取（back extraction），然后再从水相将药物提取到有机相。液-液提取法的优点在于它的选择性，这是依赖于有机溶剂的选择；药物能与多数内源性物质分离；而且在使用非专属性的光谱法分析时，这是一个很大的优点。例如，如果一个亲脂性药物的代谢程度很大，它的代谢物与母体化合物具有同样的发色团，这些代谢物将极大地干扰测试。但如果采用一亲脂性溶剂进行提取，该药物能被选择性地提取，而将相对极性大的代谢物留在生物体液中。如果是色谱法，则可利用亲水性溶剂提取药物和代谢物，从而达到分离并共同测定的目的。但是，液-液提取法并不是适用于所有化合物。例如，极性大的药物通常不能用该法提取，但使用

准备用酶促荧光法测粪便样品中的D－乳酸含量， 原理：D－乳酸在D－乳酸脱氢酶（D-LDH）的催化下生成丙酮酸，同时把NAD+转变为NADH，NADH具有荧光特性，通过测定NADH 的浓度达到间接测样品中 D－乳酸盐的浓度。已知未去蛋白的样品易受到内源性的L-LDH和D-LDH的干扰，因为NAD+是这两个酶的共同底物。为了避免非特异的NAD+转化成NADH而导致D－乳酸盐浓度的高估，对粪便样品进行前处理非常必要。查文献说，用高氯酸脱蛋白，用量与样品体积比为1：1。存在疑问：用高氯酸脱蛋白用量应怎么确定？如果用量不足，不足以除去蛋白（内源性酶），如果用量过高，可能对其后加入的酶具有破坏作用，怎样才能确定一个合适的用量，即能保证除去样品中的内源性酶，又不至于影响后来加入用来反应的酶，请各位高手帮忙解决一下这个问题？谢谢！如果不用高氯酸脱蛋白，用其它的试剂也存在同样的问题。

农残检测版块我看大部分作品都是仪器检测方面的内容，可是农药残留现在不单单是残留本身的问题了，还有对作物本身的影响及这些受影响的作物人体摄入后又有哪些变化呢？很少提及！另外，农药残留如果单从仪器检出方面来评估的话，可能对整个地区的横断面的描述缺乏论据，如果我们能找出一个预警的信号，根据这个信号有针对性的检测，相比工作效率事半功倍，而且对这个地区农残的危害可以有一个预见作用。 因此，出于以上考虑，我把自己近期的一个课题摘要，跟大家分享一下，欢迎批评指正，也希望对大家有所启发。探讨细胞色素P450酶系作为农药残留生物标志物的可行性目的和意义农药使用范围不断地扩大，新型农药不断涌现，这必然造成对农作物和环境的污染。因此及时、准确地对污染情况进行分析、监测，减少和防止对农作物和环境的污染以及对污染情况进行评估显得刻不容缓。传统的监测和评估是利用现代化仪器和手段进行准确定量的理化分析,但有些农药代谢分解迅速不易检出，而且仅凭含量无法反映这些农药对生物的效应，要检测和评估其对生物和环境质量的影响，就要研究在农药作用下生物体内各种指标的变化。生物标志物（biological marker）就适应了这种需要。生物标志物是指生物体由于接触外源毒物后而产生可在生物介质中测定到的细胞、生物化学和生物分子的改变，主要包括机体酶系统、细胞内的DNA、蛋白质、、谷胱甘肽、抗坏血酸以及结构生理生化功能等。细胞色素P450酶系是生物体中最重要的一组代谢酶，可由许多内源性和外源性的化学物质诱导。利用P450酶系的诱导作用,可以将其作为毒物污染机体在分子水平上敏感的生物标记物。农药作为外源性毒物，生物体在遭受其污染后会诱导P450酶系进行解毒。因此，本研究项目探索细胞色素P450酶系作为农药污染生物标志物的可行性。拟用常用农药胁迫生物体，检测生物体内细胞色素P450酶系总量的变化，搞清常用农药不同浓度胁迫生物体后与生物体内细胞色素P450酶系剂量-效应关系以及细胞色素P450酶系各个家族、亚家族的诱导效应，找出农药污染后体内细胞色素P450酶系中变化较特异的家族或亚家族，作为农药污染后特异的诊断评估工具，可为我国环境质量评价、化学物毒性评价、生态风险评价与预警系统提供理论依据国内外研究进展细胞色素P450酶系是生物体中最重要的一组代谢酶，根据酶的氨基酸序列相似性,细胞色素P-450酶系被分类并命名为家族(CYP1,2,3)、亚家族(A,B,C…)、单个基因(A1,2,3…)，当前发现的P450基因超家族包括36个基因家族，其可由许多内源性和外源性的化学物质诱导。利用P450酶系的诱导作用,可以将其作为毒物污染机体在分子水平上敏感的生物标记物。目前国内外非常重视污染物监测的生物标志物研究，肝细胞色素P450酶系的诱导已被提出作为评价环境污染状况的最灵敏的生物学反应之一。国内外很多学者研究了野生动物、鱼类、蚯蚓、小麦等生物细胞色素P450酶系对多环芳烃(PAHs)、多氯联苯（PCBs）污染的指示作用，对哺乳动物和鱼类研究主要集中肝细胞色素P4501A1，因为与该细胞色素结合的EROD（乙氧基异酚唑酮）便于检测，而对于植物细胞色素P450酶研究则集中考察其总量的变化上。有关生物体细胞色素P450酶系作为常用农药污染的生物标志物的研究少见报道，有些只研究特定农药污染水体后葱属植物的EROD的指示作用。对所涉及的细胞色素P450酶系各个家族对农药污染后指示作用的系统研究未见报道。对于农药污染后体内细胞色素P450 酶系总量及各个家族亚家族含量变化较特异的指示生物的研究亦未见报道，对生物体细胞色素P450酶系作为农药污染空气、土壤、水体的生物标志物的系统研究尚属空白。技术发展趋势：1. 细胞色素P450将作为农药残留的长期生物效应的诊断工具，考察农药残留的危害性。[/

之前在自己的课题中，曾经发现过样品过滤膜之后会丢峰的现象。不知大家注意过没有？如果有的话，欢迎大家积极反馈，并注明是哪一类样品？我做的是血样，内源性代谢物。

请问专家，废水生化处理中微生物内源呼吸的“耗氧速率”怎么测？相关的仪器？

[color=#444444]请教各位大神，我在测定某内源性物质时，不连色谱柱的情况下，样品峰面积与内标的比值变化和样品浓度变化趋势一致，比如我的两个样品浓度差两倍，峰面积比值也会差差不多两倍，但是一连柱子后变化趋势就不一样，峰面积比值变化会达到十倍，这会是什么原因呢？[/color]

最近在做药物小鼠体内组织分布，每个空白组织都在8分多和10分多钟的时候出峰，干扰药物峰，药物峰也在10多钟出。摸了很久都没分出来。奇怪的是每个空白组织里都有这两个峰。怎么才能分离呢？[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001212145_198161_1695099_3.gif[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001212145_198162_1695099_3.gif[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001212146_198163_1695099_3.gif[/img]

新的遗传学技术揭示了肥胖基因的变异编译 zfyyzz00字数544 《科学日报.》在2010年11月29日报道 - 肥胖是高度遗传的，但到目前为止遗传关联研究只揭示了这种遗传本质一小部分。现在，在生物医学可以公开获取的杂志《Genome Biology》上的一项研究中，研究人员在两个神经系统基因已经证实了DNA的，它们与过高的与体重指数相关。来自美国加州大学圣地亚哥分校和斯克里普斯转化科学机构的Kelly Frazer和同事以及Sanofi - Aventis使用了一种新方法，它可能在寻找隐藏的遗传特性成为普及：在一个大量人群中重新对基因组的候选区域进行测序，然后再与该疾病有关基因区域寻找遗传标志物。Frazer说：“我们测序编码酶FAAH和MGLL的两个区间，它们是调节在大脑和周围组织内源性大麻素水平，参与能量平衡和调节食欲。这些内源性大麻素水平在参与的肥胖患者中具有高水平，这两种酶从而提供了强有力的候选基因，来解释与体重指数相关的遗传特性”。在这两个基因，研究人员能够确定四个区域与BMI相关：FAAH启动子，MGLL启动子子，MGLL内含子2和MGLL增强子。这些区域的另一项测试显示，在血浆中存在内源性大麻素水平升高有关的罕见变异，这与以往的研究结果一致。Frazer说：““这是使用新的测序技术首次研究，把诸如肥胖少见的低频变异与复杂的通路相联系，并将特别关注的是要了解更全面的肥胖遗传性的作用，一这是一个在全球日益严重严重的健康问题。”编者按：本文并非旨在提供医疗咨询，诊断或治疗。出处：http://www.sciencedaily.com/releases/2010/11/101129203332.htm

《自然-生物技术》首声明否定韩春雨基因编辑，明年1月完成调查，大家怎么看？北京时间11月29日凌晨， 在围绕河北科技大学韩春雨NgAgo实验的可重复性问题上争论达半年之久后， 发表该论文的《自然—生物技术》(NBT)终于发布声明称，其于今日发表的Toni Cathomen及同事(编注：美德韩三国的研究团队)的通信文章，可能会否定韩春雨原论文所称的有效编辑内源性基因的这一主要发现。如果一篇论文在发表后遭到批评，NBT会对各种批评进行审慎和全面的评估，其将在2017年1月底之前完成对韩春雨NgAgo实验的调查。http://www.instrument.com.cn/news/20161129/207440.shtml

大家好，我做的一个内源性物质定量，用的方法是外标法，具体讲是用待测物的标准品建立标曲，标曲样品中另加入相同量的内参物质（待测物的稳定同位素标准品），用待测物与内参的响应的比值为X轴，待测物的量为Y轴进行线性回归，建立标准曲线。样品测定时的处理相类似：在样品中加入内参，用检测出的待测物与内参的响应之比，回归到标曲上进行定量。现在想请教一下大家，建标曲时加的内参量与测样品时的内参量不一样行不行？计算时把内参的实际量考虑进去，是否可行？

研究发现,味精可以影响生长猪肠道微生物的组成和肠道整体的氧化还原状态,进而影响肠道内脂肪酸成分组成和肠道内毒素的浓度,然后影响肠道的通透性,促进脂肪酸、铁等营养物质的吸收,干扰机体内的能量平衡,并且通过内源性大麻素信号通路影响到中枢神经,引发摄食调节和能量平衡调控的基因网络,影响肝脏内的脂肪生成与降解,钝化了机体对脂肪酸的感知能力

生物安全实验室分级美国国立卫生研究所美国疾病管理中心病源操作一级屏障二级屏障P1BSL—1 —1 不会经常引发健康成人疾病标准的微生物操作不要求开放实验台、洗手池P2BSL-2人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生危险BSL—1操作加：1、限制进入2、有生物危险警告标志3、“锐器”安全措施4、生物安全手册，其中规定废物消毒和医疗观察1级、2级生物安全柜　实验服、手套、若需要则采取面部保护措施BSL-1加：高压灭菌锅P3BSL-3内源性和外源性病源，可通过气溶胶传播，能导致严重后果或生命危险BSL-2操作加：1、控制进入2、所有废物消毒3、洗涤前，实验服消毒4、有基础血清1级、2级生物安全柜保护性实验服、手套、若需要则采取呼吸保护措施BSL-2加：1、和进入走廊隔开2、双门进入，门自动关闭3、排出的空气不循环4、实验室内负压4BSL-4对生命有高度危险的危险性病源或外源性病源：致命、通过气溶胶而致实验室感染：或未知传播风险的有关病源BSL—3操作加：1、进入前换衣服2、出实验室前淋浴3、带出设施的所有材料消毒3级生物安全柜或1级、2级生物安全柜加全身、供应空气、正压防护服BSL—3加：1、单独建筑或隔离区域2、有供气系统、排气系统、真空系统、消毒系统3、其他有关要求

环境诱变剂的种类。一般来说环境诱变剂可以分为3 大类型：物理性环境诱变剂(例如，电离辐射、紫外线、电磁波等)、化学性环境诱变剂(主要是一些人工合成的化学品，包括药品、农药、食品添加剂、调味品、化妆品、洗涤剂、塑料、着色剂、化肥、化纤等)和生物性环境诱变剂(真菌的代谢产物、病毒、寄生虫等)。除了上面所说的外源性环境诱变剂之外，还有一些内源性的环境诱变剂。内源性的环境诱变剂是在人体健康异常的情况下产生的，如遗传因素、内分泌紊乱等。在各种不同的环境诱变剂中，最令人不安的是人工合成的化学物质。