牛血清

购买过牛血清的生产实验人员都知道，胎牛血清和新生牛血清价格有很大不同。胎牛血清价格很贵，新生牛血清相对便宜。同样是牛血清，为什么会产生这样大的差异呢？先来看看牛血清大体的分类：胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，而划分三者之间的是根据对不同年龄段的牛采血所得到的不同的血清产品。胎牛血清（Fetal Bovine Serum）是在母牛怀孕5-8个月时，通过胎牛心脏穿刺采血获取的血清。新生牛血清（Newborn Calf Serum）是来自刚出生~出生后2周内的新生牛静脉取血。小牛血清（Calf Serum）采自出生后2周至1年内的小牛静脉取血。牛血清作为实验室广泛推崇的天然培养被应用于细胞培养。但这三种牛血清由于取血时间不同，其成分存在着一些差异。胎牛血清含有胚胎发育所必需的生长因子。而一些生长因子到胎牛10个月时就消失了。胎牛血清和新生牛血清相比，两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同。胎牛血清因富含丰富的营养还有细胞生成必须的成分所以大多时候用来培养干细胞等一些珍贵难养的细胞，而新生牛血清和小牛血清由于其性价比高价格低廉等因素更适合大量采购使用，在生物工业和疫苗生产等领域应用更多。某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需新生牛血清即可。使用浓度一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。另需要说明的是，不同牛血清除了来源不同，处理工艺和检测指标也有区别，因此也导致了成本和价格的不同。

2009年1月15日，赛默飞世尔科技在北京国航万丽酒店举行新闻发布会，宣布将在其合资企业兰州民海生物工程有限公司投入生产高新技术产品——加强型小牛血清。 出席嘉宾有： Ken Berger 赛默飞世尔科技生命科学部 全球总裁 Cory Stevenson 赛默飞世尔科技生物工程产品部 全球总裁 Shiraz Ladiwala 赛默飞世尔科技生命科学部 亚太区总裁 张伟 赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司 总经理 马忠仁 中美合资兰州民海生物工程有限公司 总经理 仪器信息网做为特邀媒体出席了此次发布会。 新闻发布会现场 加强型小牛血清是赛默飞世尔科技的专有技术。该产品在补铁小牛血清的基础上添加促进细胞生长的纯天然特殊成分，促进细胞生长的能力远优于普通小牛血清和补铁小牛血清，在某些细胞系上的表现甚至胜过胎牛血清，尤其是对于CHO-K1及其它CHO衍生细胞。 研究人员正在使用赛默飞世尔加强型小牛血清进行细胞培养该技术产品在欧美市场上已经有近二十年历史，以高性价比赢得众多生物制药企业的信赖。1998年，美产加强型小牛血清进入中国市场，很快得到中国用户的青睐，尤其是大规模培养CHO细胞的疫苗生产企业。自美国发生疯牛病疫情后，赛默飞世尔科技开始向中国供应新西兰来源的加强型小牛血清，但是随着近几年中国市场需求的迅速扩大，公司决定在旗下合资公司兰州民海生物工程有限公司投资生产此项高尖端技术。该合资公司由赛默飞世尔科技和西北民族大学于2001年合资成立，是中国第一家生产细胞培养用动物血清的合资企业。 “我们相信在中国生产加强型小牛血清将大大推动中国血清生产行业的发展，将把中国的血清生产技术提高到世界先进的水平，”Ken Berger先生表示，“对于公司而言，更加稳定的货源和更加快捷的供应将使我们可以更好地服务广大国内的客户。另外，随着生产规模的扩大，相信我们还有望将中国的优质小牛血清出口到周边国家和地区，使中国的丰富资源得到充分的利用、创造更高的价值。” 赛默飞世尔科技生命科学部 全球总裁Ken Berger先生 关于Thermo Fisher Scientific（赛默飞世尔科技，原热电公司） Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔科技)（纽约证交所代码：TMO）是全球科学服务领域的领导者，致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。公司年销售额超过100亿美元，拥有员工约30,000人，在全球范围内服务超过350,000家客户。主要客户类型包括：医药和生物公司，医院和临床诊断实验室，大学、科研院所和政府机构，以及环境与工业过程控制装备制造商等。公司借助于Thermo Scientific和Fisher Scientific这两个主要的品牌，帮助客户解决在分析化学领域从常规的测试到复杂的研发项目中所遇到的各种挑战。Thermo Scientific能够为客户提供一整套包括高端分析仪器、实验室装备、软件、服务、耗材和试剂在内的实验室综合解决方案。Fisher Scientific为卫生保健，科学研究，以及安全和教育领域的客户提供一系列的实验室装备、化学药品以及其他用品和服务。赛默飞世尔科技将努力为客户提供最为便捷的采购方案，为科研的飞速发展不断地改进工艺技术，提升客户价值，帮助股东提高收益，为员工创造良好的发展空间。欲获取更多信息，请浏览公司的网站：www.thermofisher.com或www.thermo.com.cn

细胞在体外能够成功生长，培养基的选择及培养方法的优化十分关键。细胞在单纯的培养基中不能存活，各种类型的细胞培养中必须提供某些生长因子、黏附和伸展因子、微量元素等营养物质。传统培养基中一般会添加动物血清如牛血清等。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 血清培养的优势与局限采用天然来源的血清作为细胞培养添加物，优势在于提供丰富全面的细胞生长必需的营养，并且提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，调节其活性。结合蛋白还能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。血清还是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。但血清的使用也存在一定局限性。(1)血清可能含有细胞生长抑制因子和毒性因子，存在潜在毒性；(2)血清的获取成本高，价格较为昂贵；(3)血清由于成分不完全明确，给细胞培养的标准化带来困难，同时也给细胞表达目的产物纯化等下游操作带来困难。 无血清培养优势由于常规血清培养基存在上述问题，近年来无血清培养基越来越受到重视，其开发和应用渐成趋势。无血清培养基不含动物血清或其他生物提取液，仍可使细胞在体外较长时间生长、增殖或维持。无血清培养基可以针对特定的细胞类型配制专用的培养基，如爱必信生物研发推出的人间充质干细胞培养基，可以帮助精确地控制细胞的增殖和分化过程等。无血清培养基尤其应用于哺乳动物细胞的大规模工业培养。同时，它也是研究细胞生长、增殖、分化及基因表达调控的有力工具。无血清培养基具有以下优点：(1)其组成明确，可避免血清不同批次带来的质量变动，提高可重复性。(2)避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染风险。(3)避免血清不明组分对实验研究的影响。(4)有利于体外培养细胞的分化。(5)可提高细胞产物的表达水平并易于纯化。 所以，说了这么多，您是在进行细胞的常规有血清培养还是无血清培养呢？您更看好哪一方呢？爱必信生物提供优质、高性价比的血清产品，降低您的常规细胞培养成本！ 货号 品名 规格 价格 abs972 胎牛血清(优级) 500ml 3465 abs973 胎牛血清(优级),辐照 500ml 3675 abs974 胎牛血清(标准级) 500ml 2541 abs975 胎牛血清(标准级),辐照 500ml 2751 abs993 无外泌体胎牛血清 50ml 2478 abs976 新生牛血清(超级) 500ml 2268 abs980 澳洲新生牛血清 500ml 1155 abs981 BHK细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs983 Vero细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs985 二倍体细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs987 CHO细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685针对现今越来越旺盛的无血清培养需求，爱必信生物特研发推出无血清干细胞培养的全面解决方案：！ 产品用途 货号 品名培养基 abs9401 Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红） abs9402 Xeno-Free人间充质干细胞培养基 abs9403 人多能干细胞条件培养基 abs9404 人多能干细胞完全培养基 abs9405 人多能干细胞分化培养基 abs9419 人脐带间充质干细胞无血清培养基(无酚红） abs9420 人脂肪干细胞无血清培养基(无酚红）基质胶 abs9410 即用型基质胶潜能分化 abs9406 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒 abs9407 人间充质干细胞成脂分化试剂盒 abs9408 人间充质干细胞成骨分化试剂盒分化鉴定 abs9414 成脂检测染液 abs9415 成骨检测染液 abs9416 成软骨检测染液消化液 abs9409 人多能干细胞消化液 abs9411 Xeno-Free细胞消化液冻存液 abs9417 无血清细胞冻存液（科研级） abs9412 ES/iPS细胞冻存液 abs9413 无血清细胞冻存液（治疗级）添加物 abs9120 B27 NeuroMix (50x) abs44077956 Recombinant Human Transferrin重组人转铁蛋白更多细胞培养产品： 产品用途 货号 品名血清 abs972 胎牛血清(优级) abs973 胎牛血清(优级),辐照 abs974 胎牛血清(标准级) abs975 胎牛血清(标准级),辐照 abs976 新生牛血清(超级) abs980 澳洲新生牛血清 abs993 无外泌体胎牛血清抗生素 abs9245 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) abs9246 青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗) abs9244 青霉素-链霉素溶液(100×双抗) abs47014828 Hygromycin B(潮霉素B)消化液 abs47047375 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 abs47014935 Accutase Cell Detachment Solution abs47014937 Trypsin (0.25%), Phenol Red abs47014938 Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol RedDMSO abs9187 二甲基亚砜(DMSO)(细胞培养级)添加物 abs9156 BSA（细胞培养级） abs42019847 Insulin重组人胰岛素 abs9169 Insulin, from Bovine Pancreas abs9119 Bovine Pituitary Extract (BPE) abs80002 鸡胚提取物Absin特色产品线（全部现货）：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)... 爱必信(上海)生物科技有限公司联系邮箱：info@absin.cn公众平台：爱必信生物

血清专题：你的实验有必要做血清热灭活吗?细胞培养是很多下游实验的基础，细胞培养的好坏会直接影响后续实验的成功和稳定，而血清作为细胞培养的主要试剂对实验的重要性不言而喻！血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子、维生素、氨基酸等珍贵物质，而将它们置于56℃的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响，下面我们就对血清的热灭活来探讨探讨。血清灭活的目的是什么？ 1 血清热灭活目的主要是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。 2 研究人员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定，他们发现胎牛血清中含有的C1、C6仅达成年动物血清的1-3%，而其它补体成分仅有成年动物的5-50%，至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验，也未发现有明显的溶血现象。多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程，也对热敏的补体有灭活的作用。 3 热灭活另一个目的是为了使支原体失活。 血清使用前是否都必须热灭活？ 1 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。而对于其他大多数的细胞来说是不需要热灭活血清的。 2 很多情况下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染，从而给用户带来不必要的麻烦。 3 建议，对血清进行灭活的用户，需要通过试验来证实其必要性。 血清热灭活对细胞生长有帮助吗？细胞生物学家比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响，发现11株细胞中，热灭活对6 株细胞有负面影响（红）、3株无影响（绿）、2株有微弱正面改善（黄） 血清热灭活应该怎么操作？ 1 融化血清，并充分混匀其内容物。 2 对照瓶装等量水，插入温度计。 3 将血清瓶和对照瓶放入56℃水浴箱。 4 当温度达到56℃，立即开始计时。 5 每5分钟，旋转血清瓶一次，轻微规则摇晃，以使瓶中血清受热均匀一致。 6 56℃，30分钟后，立刻去除血清。注意事项：血清灭活时，避免接触到加热管，防止受热不均匀，导致灭活失败，血清灭活后，冷水浴冷却。 为什么血清灭活后产生大量沉淀？ 1 血清灭活后出现的沉淀大多数是纤维蛋白析出，属正常现象。灭活过程多次摇晃使血清受热均匀可以降低蛋白的析出。 2 当血清在未完全化冻状态时直接置56℃水浴、灭活过程中局部受热过高、加热时间过长就会产生胶状沉淀，这样的血清质量严重受损，是无法继续正常使用的。

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康宁旗下Cellgro澳洲胎牛血清已于2012年12月31日到货，欢迎广大经销商及用户踊跃订购！ Cellgro胎牛血清是由Mediatech公司生产。Mediatech公司总部位于美国弗吉尼亚州的赫恩登，拥有符合美国FDA（21 CFR,820）cGMP标准的生产厂房。公司创建于1984年，是一家集研发、生产、销售、技术服务为一身的生物技术公司。旗下的cellgro品牌产品遍及全球，产品种类齐全，产品质量处于行业领先地位，已被广泛应用于各大院校、科研机构、医药及生物技术企业。　　 Mediatech公司的经营理念是不仅要为客户提供优质的产品，而且要将产品质量作为对客户的一种承诺。多年来，公司始终坚持不懈的致力于创新和改进生产工艺及操作流程的标准化。Mediatech公司是全球率先通过ISO13485:2003认证的细胞培养液制造商之一。 胎牛血清是细胞培养中最常见的补充剂。特定浓度的胎牛血清可提供多种化合物，已经证实这些化合物能满足细胞培养的特定代谢要求，包括不同的生长促进因子和多种不明确的组分。

明明是一瓶优质的血清偏偏出现沉淀和血清质量有关吗？会影响细胞培养吗？如何避免沉淀？出现沉淀如何处理？ “血清沉淀，其实属于常见现象，并不会影响血清的品质，大家不必惊慌！但很多人对这一现象还不是很了解。”为此，我们对“血清沉淀”的几个常见问题进行了总结，供广大科研青年参考。 血清沉淀是什么？血清中经常会出现肉眼可见的沉淀，其成分有多种类型，产生的原因有很多，主要有纤维蛋白、磷酸钙还有一些其它成分。1. 纤维蛋白（Fibrin）血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中，血清采集、过滤（3 次 0.1 μm过滤）和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原（Fibrinogen）处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。下图是血清因反复冻融而造成纤维蛋白原的凝集2. 磷酸钙（Calcium Phosphate）这是一种常见的沉淀成分，通常会造成血清出现云雾状浑浊。当产品在 37℃保存时，这种现象尤其明显，在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动，常被误认为是微生物污染。3. 其他成分（Other） 血清中的其他成分也会形成沉淀，例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等血清沉淀会影响细胞培养吗？1. 细胞生长我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试，确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明，其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多客户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。2. 怀疑污染磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下，当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时，常将其存放在 4℃冰箱中观察，并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多，反而会使血清更加浑浊，进而误以为存在血清污染。并且，在倒置显微镜下，可在血清中观察到四处游动的小黑点（磷酸钙颗粒的布朗运动），更容易使人误以为存在微生物污染。为防止这类误解的产生，我们不建议客户培养血清来验证是否存在污染，而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养，以观察是否有细菌的增殖。并且，进行革兰氏染色，并在油镜（100 X 10 倍）下观察可直接确认是否存在微生物污染。怎样操作可以尽量避免沉淀出现？1. 正确解冻首先，应按照逐步解冻的方式正确解冻血清：从-20℃取出后，置于 4℃冰箱缓慢解冻，最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或 37 ℃水浴解冻，则非常容易产生沉淀。在解冻过程中，请注意时不时缓慢摇晃瓶子，减少沉淀的产生。为避免反复冻融，建议您将血清分装使用。2. 使用和保存注意事项血清沉淀很难预测和避免，出现沉淀后也无需担忧，这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能：1) 热灭活；2) 37℃培养；3) 反复冻融；4) 伽马射线照射； 5) 2-8℃长期保存； 6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中（温度不稳定）。血清沉淀的形成机理多种多样，具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象，这一点可以在各品牌官方网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。出现血清沉淀该如何处理？我们建议您采用2000 rpm 离心5分钟，取上清使用就好，比过滤方便，不需要另外准备滤心和针筒，又不容易污染。总 结：血清产品中出现沉淀属于常见现象，但不会影响血清的品质，对细胞培养而言也是没有任何问题的，大家可以放心使用！

血清瓶洗瓶机主要用于清洗实验室中使用的各种血清瓶和其他玻璃器皿，如试管、离心管、培养皿等。使用血清瓶洗瓶机可以减轻实验室工作人员的工作负担，降低他们的工作强度。工作人员可以将更多的时间和精力投入到其他实验工作中，提高整个实验室的工作效率。血清瓶洗瓶机的实验方法：准备清洗液：根据需要选择合适的清洗剂，可以是酸、碱、有机溶剂等，并按照清洗剂的说明进行配制。预处理：将需要清洗的血清瓶放入预处理区域，进行初步的清洁处理，如去除标签、松脱粘附物等。清洗：将准备好的清洗液加入血清瓶洗瓶机中，根据设备操作说明设定相应的清洗程序，如温度、时间、清洗方式等。漂洗：在清洗完成后，使用清水进行漂洗，以去除残留的清洗剂和污渍。干燥：漂洗完成后，使用干燥设备或自然风干的方式将血清瓶烘干，以确保无水分残留。检测与评估：对清洗后的血清瓶进行检测和评估，以确保其清洁度符合要求。可以使用显微镜、化学检测等方法进行检测。存储与使用：将清洗合格的血清瓶存储在干燥、通风的地方，并按照需要使用。

O157:H7可以引起严重的食物中毒。 　　每一周，都会有几十千克生牛肉从全美各地的肉类加工厂被送到三个联邦实验室中的一个，被撕碎、磨成粉末、培育细菌和分析。这些实验室是为美国农业部服务的，实验室的技术人员正在寻找Escherichia coli O157:H7，这是大肠杆菌的一种有毒的变种，美国从1994年就开始监控牛肉中的这种细菌。但是从2012年6月4日起，这项监控工作将进一步扩展，把另外六种大肠杆菌的子类别或血清组(一下简称“六大细菌”)纳入监控范围。 　　美国农业部部长Tom Vilsack于去年九月宣布了这项变化，说这将“防患于未然”。美国农业部说这项措施是一种降低风险的途径，但是它并没有明确地指出，究竟有多少人将因为这个变化而免于患病。 　　随着新的监控方案的执行日逐渐临近，肉类生产商开始质疑这项措施背后的理论依据，而且至少有一位直言不讳的专家支持他们的质疑。 　　“我认为这基本上是一项有缺陷的政策，而不是基于最先进的科学，”位于Griffin的佐治亚大学的食物安全中心主任、微生物学家Michael Doyle说。他说，美国农业部很可能会浪费有限的资源来检测那些对人类健康的影响尚不明朗的细菌。 　　大多数种类的大肠杆菌是无害的，甚至是有益的，比如那些在健康人的肠道中大量存在的大肠杆菌。但是有些大肠杆菌，比如O157:H7，可以产生志贺氏毒素，就是有害的。1993年有四个人食用了被污染的汉堡包后死亡，美国农业部认为与这种微生物有关，此后它开始抽检生牛肉。O157:H7很容易通过快速检测被识别出来，它有时候可以引发溶血性尿毒症，这是一种会危及生命的肾脏损伤。 　　在过去十年里，更加进步的诊断技术发现，经食物传播的疾病越来越多，与其他可能引起志贺氏毒素的大肠杆菌血清群有关，包括美国农业部最近加入检测的那些血清组。 　　佐治亚州亚特兰大疾病预防与控制中心估计，每年全美会发生173000例与致志贺氏毒素大肠杆菌有关的感染，而其中36%是O157:H7引起的，其余大部分则是与“六大细菌”有关，因此增加检测种类是一项重要的食品安全措施。 　　但是行业内人士则认为，扩大检测范围是多余的，因为现行的O157:H7检测是一种整体性的清洁和食品安全指标，而且如今工厂用来控制O157:H7的措施也能同样控制其他大肠杆菌的血清组。 　　美国肉类协会估计，新的检测每年给该行业带来的成本将在1.72亿美元到3.24亿美元之间，因为它涉及到更多的样本分析，也需要花费更多的检测时间。 　　美国农业部承认，大多数与“六大细菌”有关的感染，其根源并不是牛肉，而是其他来源，例如蔬菜。所以有人认为，这项检测根本无法降低感染大肠杆菌的风险。 　　如果谨小慎微是否能带来回报，结论还非常不明确。虽然越来越多的研究认为“六大细菌”会是致病源，但是它们的毒性往往不像O157:H7那么严重。而且这几个血清组还可以进一步细分，并不是所有的血清组都会产生毒素。科学家还在判断，究竟哪些血清组可能产生最有害的志贺氏毒素。 　　华盛顿大学的Phillip Tarr说，“我们了解得越来越多，但是这个课题太复杂了。”他说，我们希望在这个领域有所突破，但是如果肉类加工行业在法庭上质疑这项规定――它以前也质疑过美国农业部的几项措施――对大肠杆菌毒性的研究可能很快就会再次受到严格的审视，而且这次是合法的审视。

8月15日，卫生部举行的专题新闻发布会公布了“圣元乳粉疑致儿童性早熟”调查结果：患儿乳房早发育与所食用奶粉没有关联，目前市场上抽检的圣元奶粉和其他婴幼儿奶粉激素含量没有异常。不过，此事件暴露出食品检测和管理中的问题。武汉三名食用同一品牌的女婴出现性早熟，怀疑奶粉含有激素的家长想弄个明白，却送检无门。“所有的检测机构都不愿意接手。”一位不愿意透露姓名的检测专家对《科学新闻》说。 　　消费者遭遇“送检无门”，本能的知情权被无情地阻挡，对于怀疑有问题的食品，消费者究竟从何得到权威和专业的答复? 　　检测无门 　　根据《食品安全法》的相关规定，协会组织、消费者可以委托法律规定的有资质的食品检验机构对疑有问题的食品进行检验。“由于种种原因，现实中的确存在检验机构不接受个人送检的情况。比如有些检验机构不具备送检项目的检测资质或能力。一些机构担心样品的来源，担心有目的不纯的送检，还有一些机构怕承担法律责任，不想介入纠纷等。消费者如果怀疑食品有问题，可以向卫生部门举报，卫生部门接到举报应组织进行检验。”卫生部有关负责人说。 　　8月10日，卫生部责成湖北省食品安全监管领导小组办公室调查并及时公布结果，两天后，卫生部直接介入事件调查，称接受举报。随后，卫生部组织由疾控中心牵头，内分泌、儿科、妇幼、食品安全等领域专家组成的专家组对事件进行调查。 　　卫生部的迅速介入，表明了政府对此事件的高度重视。某个侧面，也许正是为了解答消费者所遭遇的送检无门的窘境。 　　对于送检无门，中国兽医药品监察所研究员王树槐告诉《科学新闻》：“对样品来源不清楚，谁都不愿意负责。此外样品量少，成本就高，如果要价高，别人还以为是敲诈，所以估计谁都不愿意接。”目前，中国的实验室管理很严格，国家认监委认证、认可之后，每3年要对实验室硬件、人员等各方面进行考核，并且实验室能做的检测也只有几项，如三聚氰胺、重金属、激素等专项都要专家现场考核认证，超出实验室检测范围的项目要申请。而这一程序申请非常繁琐，且成本高昂。 　　不仅如此，中国目前还将检测的技术方法也当标准限定。“这是阻碍科学进步的，是滞后的。以前美国和欧盟也是这样，但上世纪90年代之后，就取消了，取而代之的是出台相关技术指南，实验室按照标准操作流程操作，只要在最后的文书上签字画押负责就行。这样反而能够快速对应急事件做出反应。”前述专家这样认为。 　　北京市疾病预防控制中心、中国检验检疫科学院等检测机构负责此次检验，采用国际通行的检测方法(《动物源食品中激素多残留检测方法液相色谱-质谱-质谱法》GB/T21981-2008)，主要对乳粉中雌激素和孕激素含量进行检测。 　　“这项检测技术是国际上最为先进的，可以肯定。”王树槐说。 　　卫生部专家组成员之一、食品安全国家审评委员会检验方法委员会专家委员、北京市疾病预防控制中心研究员邵兵介绍，目前能开展类似检测的机构有国家质检总局、卫生部、农业部的一些实验室，以及北京市的质量监控中心。这些机构都可以接受个人送检。 　　但无疑具有资质的检测机构在中国可谓寥寥。同时，检测费用往往受到仪器设备、试剂成本的影响。只有同批检测样本多，成本才会有所下降。 　　“内外有别” 　　今年6月以来，中国乳业“新国标”正式实施，涉及生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳、调制乳等所有乳类和乳制品的食品安全国家标准。这是自“三聚氰胺事件”发生后，卫生部对这些标准进行的重新修订。 　　其中，《食品安全国家标准乳粉(GB19644-2010)》中，关于乳粉的要求包括原料要求、感官要求、理化指标、污染物限量、真菌毒素限量、微生物限量、食品添加剂与营养强化剂等7项要求，但并没有提及关于雌激素的检测项目。 　　卫生部在发布会上公布，在抽调的奶粉样品中，未检出己烯雌酚和醋酸甲孕酮等禁用的外源性性激素，内源性雌激素(17β-雌二醇和雌酮)和内源性孕激素(孕酮和17α-羟孕酮)的检出值分别为0.2~2.3μg/kg和13~72μg/kg，其中患儿家中存留样品雌激素和孕激素检出值分别为0.5μg/kg和33μg/kg。 　　其结论是：“检测结果符合国内外文献报道的含量范围。”文献资料显示，美国、韩国、荷兰等原料奶和市售牛乳中雌激素含量在0.16~4.4μg/kg，孕酮最高数值是98.0μg/kg(将液态奶按8:1换算为乳粉的含量)。 　　一位长期从事牛奶激素研究、小儿性早熟的临床专家告诉《科学新闻》：“卫生部给出的国内外文献标准是比较权威的，可信的。” 　　不过，奶粉中到底能不能含有雌激素?对此，卫生部新闻发言人、卫生部办公厅副主任邓海华给出的解释是：奶粉里不允许检出使用兽药残留的外源性性激素，世界上也不允许。 　　王树槐说：“对于个体来讲，其本身还有内源性雌激素。如奶牛体内天然产生的激素，这些激素人体内也含有。奶液中完全没有雌激素是不可能的。” 　　目前，国际上内源性激素的含量研究仍处于循证阶段，牛奶中激素的含量达到多少，就会对人体有影响?没有一个统一的标准和说法，还需要长期研究。也许正因为如此，所以才有了卫生部发言人邓海华的结论：“国内外都没有制定牛乳中内源性性激素限量的标准，一般情况下不作为常规的检测指标。但是在特殊情况下，比如北京奥运会期间，有关机构对于动物源性的食品中所含的激素进行检测，是为了避免运动员兴奋剂的问题。” 　　含量激增 　　2005年，日本山梨大学环境健康系医学博士Davaasambuu Ganmaa在《医学假说》(Medical Hypotheses)杂志发表文章指出，现在消费的牛奶中雌性激素含量较100年前明显增加。其原因除饲养方法和奶牛品种不同外，主要与妊娠奶牛奶有关。 　　因为，“现代奶牛生产中，奶牛在生产后三个月即可进行人工受精，替代了自然交配，几乎在整个怀孕期间持续泌乳，尤其是妊娠后期，其血清中雌激素水平显著提高，牛奶中的雌激素也随之增加。”Ganmaa指出，据估计大约75%的市售牛奶来源于妊娠奶牛奶。 　　商业化牛奶是经均一化作用和巴氏灭菌法作用后的产物，而销售前牛奶的巴氏灭菌过程不能彻底灭活这些激素，西方饮食中动物源性雌激素主要来源于牛奶和乳制品，占雌激素消费的60%~70%。因此对商业化牛奶中雌激素的评估更有价值。 　　同样来自日本山梨大学环境健康系的Li-Qiang Qin及其研究团队在检测两种商业化奶牛(Holstein和Jersey)所产牛奶中的雌激素浓度时发现，它们的浓度已显著高于20年前报道的浓度，提示近期乳制品的激素水平随着现代乳品工业的发展而快速增加。 　　而中国奶牛的饲养主要以小规模、分散型的农户饲养为主，奶源质量控制难度较大，尤其在激素使用方面，如规范使用兽药和严格执行休药期规定等监控较难，有可能造成牛奶中激素含量增加。 　　2005年9月~2006年3月期间，苏州大学附属第四医院教授徐庄剑及其同事曾对无锡市销售的部分本地和外地生产的全脂纯牛奶中的雌性激素进行检测，发现市售全脂纯牛奶中含有一定数量的雌性激素，不同品牌全脂纯牛奶中雌性激素水平有差异，同一品牌不同批号中雌性激素水平也有波动。 　　今年，徐庄剑发表在《食品科学》上的文章认为，现代市售纯牛奶与人类健康的研究仅见流行病学方面的文献，有关动物研究也较少，且有分歧。徐庄剑的课题组前期系列实验研究显示：喂食妊娠奶牛奶或以妊娠奶牛奶为主的市售纯牛奶可使雌性幼鼠24小时尿雌三醇和P4孕酮排泄增多 对雄性幼鼠睾丸生精上皮和精囊腺的发育可能有一定的影响，并可能波及血清睾酮水平 还可能降低雄性幼鼠血清总胆固醇作用和升高雌性幼鼠血清高密度脂蛋白胆固醇水平。 　　徐庄剑给出结论：妊娠奶牛奶成分复杂，除含有雌性激素外，还可能含有类雌性激素样物质和促进雌性激素分泌的物质，当然也可能含有拮抗雌性激素或抑制其分泌的物质。现代市售纯牛奶中的雌性激素对人类有无影响及如何影响，尚待进一步相关临床和动物实验研究。 　　健康隐患 　　Ganmaa分析了40个国家饮食与女性乳腺癌、卵巢癌及子宫内膜癌发病率和死亡率的相关性，其相关系数分别为0.817、0.779和0.814，最后推测，牛奶和乳制品中雌激素与乳腺癌、卵巢癌和子宫内膜癌的发生有关。也有学者指出牛奶及乳制品中的雌激素可能为前列腺癌发生的诱因之一。 　　虽然牛奶中的雌激素是否会影响儿童的生长发育和生殖系统发育等，目前研究资料甚少，但是，来自丹麦哥本哈根大学医学院教授Anna-Maria Andersson研究发现，青春期前儿童体内产生雌激素少，对于外源性激素敏感性较高，暴露于外源性性激素是极其危险的，可能使其生长加速或出现乳房发育等。 　　来自意大利和比利时的科学家研究发现，生活方式的改变和环境因素可能是性早熟的重要病因之一。虽然目前没有直接证据表明牛奶中的雌性激素可能引起上述疾病，但上海瑞金医院儿内科主任医师倪继红研究发现，人参蜂皇浆就含有相当量的雌激素，可引起儿童性早熟。 　　Ganmaa等的动物实验研究也表明，虽然并未发现现代牛奶对大鼠亲代和子代生殖功能有明显影响，但子代中有1 例出生时即死亡，3 例有骨骼异常。 　　2007年，徐庄剑发表在《国际内科学杂志》的文章指出，目前尚无直接证据证实牛奶中的雌性激素对人体有害。现代牛奶中的雌激素对人类健康是否有影响及影响有多大，是现代食品激素安全所面临的新课题。 　　目前，国际食品法典委员会(CAC)、欧盟(EC)、美国FDA等对牛奶生产的认证、包装、标识及检测试验方法等都逐一进行了规定，而对于牛奶中雌激素标准尚无明确规定。而中国目前对于牛奶的安全性管理和相关研究大多集中在食品的微生物指标、重金属指标、农药及抗生素残留指标等方面，对牛奶中激素的安全性研究甚少。 　　监管难题 　　无论是外源性激素还是内源性激素，国内外似乎都并没有一个统一的标准，有的只是零星的文献报道。而没有参考系，如何确保检测的科学性和公正性? 　　邵兵认为，此次采用的检测方法是经过北京市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心和中国检验检疫科学研究院联合攻关的实验成果。相关研究成果，通过国际专家的匿名评审，已经发表在国际专业期刊上。 　　“我们采用的是同位素稀释之后的方法，这是对国际上痕量或超痕量化合物检测的通行方法。”他说。“这次承担检测的几个单位，在奥运会期间都承担了奥运会运动员食品的检测，每个单位都检测过超过一千份样品。” 　　而针对目前奶粉激素不在检测范围之内，有专家则建议，可以将雌激素列入抽检项目。“从技术上说，我们可以把这个项目纳入到日常检测的范围。这种检测复杂，也需要检测成本，检测方法要求使用同位素，而同位素是比较昂贵的。我们可能将来会在食品安全风险监测里纳入相关的监测内容。”邵兵说。 　　王树槐透露，中国关于奶粉中激素的检测方法和标准已制定，“目前正在走相关程序，经过相关机构审核批准后，预计能够尽快颁布该项技术标准”。 　　王树槐说，美国目前也没有什么标准。1996年之后因为超标激素的检出率很低，美国国会认为，这部分投资不应该再投入了，就把残留监控计划给取消了。尽管这几年恢复了，但是也没有那么大的样本量，只要出事，企业基本破产。这一点在中国很难做到，这也是中国监管的问题之一。 　　因此，“即使出台标准，我觉得也没什么太大的作用，只会增加成本。单单靠检测、靠标准，今天解决了一个，明天还会出来其他的，永远闹不清楚。”王树槐指出，要想不出问题，“关键责任应该落实到企业上，要做良心产品。靠监管，这么大国家，总会有漏洞的。而且目前中国的终端监管也不是办法。体制上要进行改革，只有对过程进行监管方能见效。同时要对违法的企业狠狠地处理，给予严厉打击。”

有机磷农药中毒的死亡率很高,其重要原因之一是诊断不及时。日本学者Inoue等人研究验证了一种简单快速的新方法——液相色谱法-大气压电离子化-质谱测定法(LC-APCI-MS法),结果证实此方法可以有效测定进入人体血清中的10种有机磷酸盐浓度(J Phar Biomedl Anal 2007, 44: 258)。 　　“液液提取”或“固体萃取”方法是目前临床最常用的有机磷酸盐提取方法,但是对某些特殊成分的化合物如乙酰甲胺磷则无效。 　　Inoue等人采用即液相色谱-质谱联用测定法(LC-MS)研究出一种简单快速的方法用来测定急性中毒患者血清中的10种有机磷农药浓度[乙酰甲胺磷、杀扑磷、敌敌畏、倍硫磷、苯硫磷、敌匹硫磷、甲基乙酯磷(稻丰散)、马拉硫磷、杀螟硫磷、杀螟腈]。这10种有机磷农药在日本使用广泛。 　　具体操作程序如下:使用乙腈脱蛋白后,将每种需检测的生物标本注入一个XTerra MS C18不锈钢试剂盒中,采用10 mmol/L的甲酸铵-甲醇组成的溶剂进行梯度洗脱。 　　结果显示,回收提取率令人满意,绝对回收率为血清标本的82.2%~107.2%,相对回收率为60.0%~108.1%。血清的测定范围(LODs)为0.125~1.000　μg/ml,检测上限为0.25~1.25 μg/ml。从这种检测上限浓度逐渐增加到8 μg/ml时,可以观察到很好的直线相关性。在所有实验标本中,均值在期望浓度的20%范围内,而且相关系数(r2)0.9838。 　　大部分有机磷农药的分析结果显示样本内部和批间分析的精确度、准确度都是令人满意的。从对温度的稳定性角度,对所有有机磷酸盐分析可以发现,敌敌畏和马拉硫磷在室温下就可以最快溶解。杀扑磷和敌匹硫磷在整个为期4周的测定期内对所有温度都相对稳定。 　　该研究证实,将沉淀蛋白法作为样本的提纯程序,这种LC-MS方法快速可行,可以测定人体血清中的有机磷农药,并且在测定血清标本中有机磷农药时具备较高的选择性、敏感性、精确度、准确度、直线性、回归性和稳定性。因此这种简单准确的检测方法,可以成功地应用于临床急性有机磷农药中毒事件中。 　　 用于血清有机磷检测的液相色谱-质谱联用设备

血清学检测是许多健康问题诊断过程中的关键检测方法，包括器官移植筛查，交叉匹配，疾病诊断，监测等。这些检测在临床决策中起着至关重要的作用，免疫分析是目前可用的最强大，最灵敏的血清学检测方法之一，它基于抗原抗体之间的高度特异性结合，即使在低浓度下也能进行定性和定量检测。有多种免疫测定方法，以下是其中最常见两种检测方法示意图，分别是夹心法（图1A）和直接法（图1B），当选择用于夹心法检测的抗人二抗时（图1A），需要考虑一抗的种属，并使用与该物种有最小交叉反应的二抗。图1：测定方式：A.夹心法，B.直接法免疫分析在多种疾病诊断起重要作用各类免疫测定技术各有优缺点，例如，快速测定法（如胶体金侧向流动法）可在数min 内提供定性结果，可进行即时检测，而ELISA可能需要花费数小时才能完成，但可提供定量数据。而当前严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）大流行更加凸显了侧向流动分析的优势，由于该疾病具有快速传播和较高的死亡率等特征，美国FDA已采取相关措施，允许各州未经FDA批准就可开展新的SARS-CoV-2检测。该修订允许使用快速检测试剂盒，该试剂盒定性检测患者针对SARS-CoV-2产生的IgG和IgM抗体，从而显著加大了SARS-CoV-2的检测能力，尽可能地减少病毒的传播。尽管侧向流动检测具有明显的优势，但这种分析方法无法提供定量的数据。表1.几种类型的免疫测定法的优缺点，检测过程，检测的Ig类型免疫测定方法检测过程可检测免疫球蛋白亚型快速测试/横向流动（胶体金）胶体金层析试纸条主要由4个部分组成：在样品区滴加样品后，借助毛细作用，样品泳动至玻璃纤维膜，金标复合物溶解，并与样品进行抗原抗体反应，形成复合物，继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区，带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获，呈现条带。而质控线不管有无目的样本，都会与金标抗体进行结合并显色，相当于我们的阳性对照，证明金标抗体是正常的。IgG，IgM流式细胞将血清样品添加到带有抗原的细胞或磁珠中，样本中的人源抗体会捕获抗原，再加入荧光探针偶联的二抗（图1B），然后可以通过流式细胞仪分析荧光以给出定量数据。IgG，IgM，IgA流动注射分析（FIA）与流式细胞术相似，将样品注射到含有固定抗原的柱子中，样品中的人源抗体会与抗原结合（图1B），再加入荧光探针或酶偶联抗人的二抗进行检测，用比色或荧光法进行检测。IgG，IgM，IgAELISA法将一抗固定在固体介质表面上，通常是微孔板，随后会捕获抗原（图1A）或将抗原直接包被在板上（图1B），与来自血清的人源抗体结合，加入酶标记的抗人二抗，最后，添加酶底物，从而得到与分析物浓度成正比的比色读数。IgG，IgM，IgA聚合酶链反应（PCR）该过程类似于ELISA，但是第二抗体是与寡核苷酸缀合。然后通过实时PCR进行DNA扩增和检测。IgG，IgM，IgA抗人二抗是各类免疫分析中的关键试剂尽管免疫测定的功能和目的有所不同，但为了在临床上获得准确，可靠数据，开发血清学试剂盒时，高质量试剂至关重要。抗人二抗的质量是开发免疫测定试剂盒时的关键考虑因素，二抗需要谨慎选择，因为它们会结合一种一抗的多个表位上，从而增强了信号的灵敏度和选择性。表2总结了在进行免疫测定选择合适的二抗时需要考虑的多个方面。表2.在免疫分析中选择合适的二抗时的考虑因素以及我们抗体的特征考虑因素Jackson 二抗抗体来源人体样品的血清学检测应使用抗人二抗，以最大程度地减少非特异性结合，以最大程度降低背景信号和假阳性。我们可以提供多种来源的抗人二抗，包括羊驼，驴，山羊，小鼠和兔子。产品类别(完整的IgG还是片段)二抗可以是完整的免疫球蛋白（Ig）G，也可以是F（ab' ）2和Fab片段，完整的IgG分子可适用于大多数检测，而F（ab' ）2和Fab片段可用于避免与具有Fc受体的活细胞的非特异性结合。我们可以提供完整IgG形式的二抗以及F（ab' ）2和Fab片段特异性根据所需免疫测定的特异性，可以制备针对整个Ig分子的二抗，以及针对于Fc或F（ab' ）2结构域特异性的二抗。我们可以提供针对于对整个人源Ig分子的二抗，以及针对于Fc和F（ab' ）2结构域特异性的二抗。亚型大多数免疫测定均只检测IgG型抗体，这种类型抗体占总血清Ig的?75％，是次级免疫反应的一部分。但是，血清中同时也存在IgM和IgA，而且二抗只对同亚型一抗的具有特异性。我们可以提供对IgG，IgM，IgA，IgG+IgM和IgG+IgM+IgA一种或几种亚型有特异性的二抗。亲和纯化和交叉吸附由于在Ig结构域具有高度的结构保守性，建议对抗体进行亲和纯化并进行交叉血清吸附的，以减少交叉反应的可能性。免疫亲和层析可用于分离亲和纯化的抗体。我们可以选择已进行物种交叉吸附的抗体，交叉吸附相关信息会在对应产品说明括号中提供，表示为“ min X”，“X”为相关物种的缩写。偶联标记二抗通常与分子偶联，例如酶，荧光探针或有色颗粒。免疫测定的检测系统将确定标记物的种类。抗人二抗可以与多种标记物偶联，包括生物素，AP，HRP，荧光基团和胶体金纳米颗粒。

2022年06月15日，Journal of Translational Medicine（影响因子5.531）杂志在线发表题为“A dPCR-NIPT Assay for Detections of Trisomies 21, 18 and 13 in a Single-tube Reaction-Could It Replace Serum Biochemical Tests as a Primary Maternal Plasma Screening Tool?”（单管反应一次性检测21、18和13-三体的数字PCR无创检测技术（dPCR-NIPT），能否取代血清学筛查作为母体血浆筛查工具？）的文章，第一作者为郑大一附院遗传与产前诊断中心代鹏副教授，通讯作者为孔祥东教授。本研究由郑大一附院遗传与产前诊断中心与上海塔歌生物技术有限公司共同完成，同时得到河南新柏恩医疗科技有限公司和上海小海龟科技有限公司的大力支持。本研究在国际上首次建立了一管反应一次性检测T21、T18和T13的dPCR-NIPT筛查技术。该技术具备血清学筛查的便利及低成本和基于NGS(高通量测序)的NIPT的高阳性检出率的优点，可替代血清学检测方法，成为NIPT筛查之前的新筛查技术，填补了dPCR技术在胎儿染色体非整倍体筛查临床应用上的技术空白，为实现降低出生缺陷和临床筛查费用提供了可靠的技术支持。近年来，郑大一附院遗传与产前诊断中心在遗传病无创性产前筛查、产前诊断领域坚持对新技术引进、消化、吸收和创新的理念，本研究的成功标志着遗传与产前诊断中心在居安思危、不断超越自我的道路上又进一步。本研究简介：目前，T21、T18和T13产前筛查方法有：血清学筛查和基于NGS的NIPT。血清学筛查具有检测便利和成本低的优点，但阳性检出率低(60%-80%)和假阳性率较高。基于NGS的NIPT具有阳性检出率高（97%-99%）的优点，但检测周期长、技术门槛高、检测费用昂贵等缺点。针对上述不足，本研究采用灵敏度和绝对定量能力高的数字PCR（dPCR）技术，首次建立一管反应一次性检测T21、T18和T13的数字PCR无创产前筛查技术（dPCR-NIPT）。研究结果显示：1）本研究团队自配的样品处理试剂可使游离胎儿DNA（cffDNA）比例富集约2倍。2）检测灵敏度表明，dPCR能够检测到浓度低至0.2ng/μL的血浆游离DNA（cfDNA）以及cffDNA比例低至5%的cffDNA。3）本研究中，以21、18和13号染色体（Chr21、Chr18和Chr13）作为目标检测染色体以及互为参考染色体（图5）。通过本研究使用的dPCR系统以及满足检测条件的液滴数量（20000个），确定95%检测置信度的Z值切割值为1.65以及非整倍性判定法则（表4）。4）通过检测283份临床样本，统计分析显示dPCR-NIPT检测的检测灵敏度为100%，特异性为95.12%（表5），比血清学筛查具有更高的敏感性和更好的特异性。5）评估dPCR-NIPT与现有的序贯筛查（血清学筛查初筛+NGS-NIPT复筛）和直接NGS-NIPT筛查的成本效益，按照10000例样本来算，dPCR-NIPT分别可节省107,980元(7.8%)和4,422,980元(77.6%)（表7）。图5 21、18和13号染色体（Chr21、Chr18和Chr13）作为目标染色体和互为参考染色体全文链接：https://doi.org/10.1186/s12967-022-03455-y代鹏博士简介：分子生物学博士，毕业于第四军医大学，2015年就职于郑大一附院遗传与产前诊断中心，主要从事NIPT和无创单基因遗传病的检测与诊断。入职以来以第一作者发表11篇论著，主持省级和厅级科研课题3项。

大家好，本周为大家介绍的是一篇发表在Analytical Chemistry上的文章Charting the Proteoform Landscape of Serum Proteins in Individual Donors by High-Resolution Native Mass Spectrometry1，文章通讯作者是来自荷兰乌得勒支大学的Albert J. R. Heck教授。　　血清中大多数蛋白都是糖基化蛋白，这些糖蛋白对疾病诊断有着重要意义，基于质谱的糖链释放后分析和糖肽分析是目前普遍使用的糖蛋白分析方法，但仍存在一些局限，例如可能遗漏同时发生的翻译后修饰、缺乏对O-糖的研究、遗漏某些糖肽覆盖不到的糖基化位点等。高分辨非变性质谱为完整糖蛋白的分析提供了新的思路，本文开发了一种基于离子交换色谱的分离纯化方法，能够从150μL血清中分离和分析20多种血清(糖)蛋白，质量范围在30-190 kDa之间。　　图1为血清糖蛋白的分离和分析方法。150μL血清首先经过亲和柱以快速去除大量的白蛋白、IgG和血清转铁蛋白等，这一步骤使用的是作者内部制造的机器人，可以加快过柱子的速度。接着血清被送入离子交换(IEX)色谱，使用40分钟的梯度时，大多数蛋白在14-27分钟内洗脱，故作者在13-30分钟内每隔0.5分钟收集一次级分，并将每个级分缓冲液换为乙酸铵溶液，最后进行Thermo Exploris Orbitrap质谱仪分析。　　　　图1.血清糖蛋白非变性质谱分析方法　　作者使用该方法分离了大约24种血清蛋白，并在文中详细介绍了其中4种蛋白的分析过程：α-1抗胰蛋白酶、补体C3、血红素结合蛋白、铜蓝蛋白。　　(1)α-1抗胰蛋白酶(A1AT)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，在呼吸系统的功能中起重要作用，作者使用唾液酸酶和PNGase F确认了蛋白上的糖型，又通过TCEP的还原处理发现大部分血清样品的A1AT都是半胱氨酸化的，也确认了A1AT存在N端截短的特征，综上，作者共统计出了13个A1AT异质体。针对捐献者提供的血清，作者区分出了携带V237A和E400D突变的A1AT蛋白的供体。　　(2)补体C3蛋白在免疫调节过程中发挥作用，在血清中浓度相对较高，分子量为187kDa。与该蛋白共流出的还有两种约137kDa和80kDa的蛋白，在唾液酸酶处理后，只有80kDa的蛋白质量减少很多，证明其存在唾液酸，而C3和137kDa蛋白的糖型上无唾液酸。通过对级分的糖肽分析确定N糖位点在Asn 63和Asn 917。137kDa蛋白鉴定为C3缺失α链后降解而成。　　(3)血红素结合蛋白(HPX)在血清中的主要功能是结合和运输游离的血红素，进行血红素和铁的再循环。非变性质谱显示HPX质量范围在58-63 kDa，而蛋白质主链质量仅50 kDa。本文首次解析了血清HPX的蛋白型谱，证明了4-5个N-糖和1个O-聚糖的存在，共17种独特的糖型。　　(4)铜蓝蛋白(CER)负责在人体内转运大部分的铜，分子量132kDa，每个CER分子可以携带6-7个铜离子。CER在非变性质谱检测后的分子量比理论质量多409±5Da，作者将其归为6个铜离子和1个钙离子的结合所致，并发现了CER完全去糖后失去结合金属离子的能力。　　　　图2.绘制血清糖蛋白组的全貌图。观察到的血清蛋白质量范围为30-190 kDa，浓度范围为0.2-50g/L　　总结：本文开发了一种从少量人血清中分离多种糖蛋白的方法，并通过高分辨非变性质谱表征了蛋白型谱，为蛋白全貌提供完整视图。该方法的优势在于非变性质谱需要的样品处理步骤少，最大程度的还原了蛋白的生理状态，劣势在于目前通过完整质量只解析了20余种蛋白中的8种，后续需要结合自下而上或自上而下的蛋白质组学方法进行辨别。在未来的研究中，作者建议联用分子排阻色谱和离子交换色谱，实现高通量在线血清蛋白分离分析。　　撰稿：英语佳 编辑：李惠琳　　原文：Charting the Proteoform Landscape of Serum Proteins in Individual Donors by High-Resolution Native Mass Spectrometry

前 言重组腺相关病毒 (AAV) 载体由于其良好的安全性、高转导效率和在非分裂细胞中的长期基因表达，已发展成为最有前途的基因治疗技术。基于 AAV 的基因疗法对于治疗遗传性失明、肌肉萎缩或出血性疾病等遗传疾病具有很大的前景。存在多种天然存在的和工程改造的 AAV 血清型，它们的衣壳序列不同，因此在细胞嗜性上有所不同，在AAV研发工作中快速地评估不同血清型的AAV是十分重要的。# 文献解读 #https://doi.org/10.1016/j.xphs.2019.10.031在这篇文章里，作者提出使用nanoDSF 技术测量，作为确定 AAV 衣壳 Tm 的一种简单替代方法。该研究表明，nanoDSF 测量是一种简单、准确和快速的 SO-DSF 替代方案，它能够以出色的精度表征 AAV 衣壳稳定性，并且不需要任何其他染料。AAV 颗粒由 3 个结构病毒蛋白（VP1、VP2 和 VP3）和一个大约 4.7 kb 的单链 DNA 基因组组成，其中包含 2 个反向末端重复序列 (ITR) 之间的 2 个基因 Rep 和 Cap。Rep 编码多种非结构性 Rep 蛋白，这些蛋白对于病毒基因组复制和包装至关重要。Cap 包含一个开放阅读框，它以大约 1:1:10 的比例从不同的起始密码子产生 VP1、VP2 和 VP3 蛋白。不同的 AAV 血清型不仅具有不同的细胞趋向性和转导谱，而且它们的结构特性和稳定性也不同。后一个特征也反映在热稳定性上，并导致衣壳的血清型特异性解链温度 (Tm)。nanoDSF 方法基于 AAV 衣壳蛋白序列中色氨酸残基的内在荧光，其在 AAV 血清型中高度保守，其光谱特性取决于其局部环境。从疏水环境到亲水环境的变化会导致在紫外范围内激发时色氨酸的发射光谱发生红移。通过这种简单的测量，可以在 1 小时内确定不同 AAV 血清型的 Tm，检测浓度大约 2Ⅹ1011 cp/mL，样品体积仅为 10 μL。文中作者对不同血清型的AAV进行了检测，并且检测了不同生产实验室生产的AAV都是可以得到很好的区分，其中，除了AAV3/AAV8及AAV9/AAV10这两对不能很好的有效区分，作者报导对于其他AAV血清型都是可以很好的快速区分的，并且仪器的准确度与重复性都是十分优秀的。为了检测仪器的对不同血清型AAV的区分度，作者使用不同血清型的AAV进行混合后，如上图所示，不同比例混合下的AAV可以很好的在Promethus上得到区分。而检测样品的浓度可以低至2Ⅹ1011 cp/mL，样品体积仅为 10 μL，可以很好的节省实验样品进行更多地其他分析。在本研究中，使用nanoDSF方法来确定AAV衣壳的Tm，作为血清型鉴定的方法。使用nanoDSF测量Tm是一种简单、快速（30-60分钟）和高通量（48个样品/30-60分钟）的方法，用于以低成本和低材料输入（2Ⅹ1011cp/mL，10 μL）测定AAV-Tm，从最终产品和过程控制样品中很容易获得如此少量的材料。由于nanoDSF测量也允许检测与工艺相关的杂质，因此该方法是一种非常有吸引力的高通量筛选方法，用于在纯化过程中监测样品纯度和分析批次间的一致性。尽管 nanoDSF 可以快速可靠地确定 Tm，因此可以了解 AAV 衣壳的类型，但最明显的问题是具有非常相似的热稳定性水平的 AAV 衣壳，例如 AAV3 和 AAV8 或 AAV9 和 AAVrh10无法进行区分。但这一限制可以通过测量不同的缓冲液来克服，在这些缓冲液中，AAV 血清型表现出不同的热稳定性并允许区分对。除此之外，该方法很容易区分所有AAV血清型表现出不同的热稳定性并被有效区分出来。此外，可以精确测量 AAV的混合物，并且可以在 1:10 的浓度比下区分 1 个样品中的 2 种血清型。由于nanoDSF方法在常用的配方和储存缓冲液及洗涤剂中具有独特的稳定性，不会受到缓冲液成分影响，因此它为AAV血清型鉴定提供了一种快速、经济、可靠的方法。新品PR Panta蛋白稳定性分析仪

牛细小病毒（CPV）ELISA检测说明书本试剂盒仅供研究使用。 96T使用目的 ：本试剂盒用于测定牛血清,血浆及相关液体样本中细小病毒（CPV）表达。实验原理 ：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中牛细小病毒（CPV） 。用纯化的牛细小病毒（CPV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中细小病毒（CPV）抗原相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的细小病毒（CPV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中牛细小病毒（CPV）的存在与否。试剂盒组成 ：1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1/瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂 B 液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 个标本 要求 ：1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测2．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，但应避免反复冻融。3．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤 ：1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。结果判定 ：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00 阴性对照平均值≤0.15临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为细小病毒（CPV）阴性阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为细小病毒（CPV）阳性注意事项1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。保存 条件及有效期1．试剂盒保存： ；2-8℃。2．有效期：6 个月

p 　　生物医药产业是高新科技产业，随着生物医药产业的快速发展，我国生物制药产业也进入了快速上升期，而单克隆抗体药物在整个产业中无疑是最为重要的组成部分。目前生物制药产业发展面临人才短缺的挑战，而我国高等专业教育尚不能满足生物制药产业发展的需求，大部分生物医药相关专业毕业生缺乏该产业急需知识和技能而面临就业难。在职职工专业教育是生物医药产业正常运营的基础保障，更是各国药政机构监管的重点。随着新技术新方法和药政监管新政策持续涌现，生物医药技术专业教育和继续教育尤其重要。中国蛋白药物质量联盟将针对我国生物医药产业发展现状和国际产业技术的发展进步，特别是各国药政监管要求，推出生物制药产业技术系列职业培训。本期设为无血清细胞培养技术培训。 /p p 　　无血清细胞培养技术培训 /p p 　　自上世纪八十年代初期Jennie Mather博士主编出版第一部无血清细胞培养技术专著及在美国长岛冷泉港实验室举办第一届无血清细胞培养技术实验培训课程以来，无血清细胞培养技术迅速被生物医学研究机构及生物技术企业所使用，在基础研究及工业生产中起着极其重要的作用。 /p p 　　此培训旨在帮助大家了解无血清细胞培养的基本技术、思考如何选择和利用无血清细胞培养来满足基础研究及工业生产的需求，使无血清细胞培养技术在各领域得到更多更好的利用。 /p p 　　 strong 一、主办单位 /strong /p p 　　中国蛋白药物质量联盟 /p p 　　 strong 二、培训时间 /strong /p p 　　时间：2017年06月07日 PM 1:00-5:00 /p p 　　地点：上海远洋宾馆，虹口区东大名路1171号(近霍山路)多功能厅 /p p 　　 strong 三、培训目标人群 /strong /p p 　　本次培训旨为生物医药产业的技术研发负责人、细胞培养业务骨干温故知新 为职场新人、在校大学生以及对细胞培养感兴趣的相关人员夯实基础。 /p p 　　 strong 四、培训内容 /strong /p p 　　此培训班将首先由Mather博士介绍无血清细胞培养技术的发展历史，包括其在Sato博士实验室建立原代细胞无血清培养技术以及在基因泰克(Genentech)公司建立蛋白药生产CHO细胞无血清培养方法等历史回顾，其后由李荣皓博士介绍原代细胞、蛋白药表达细胞、疫苗生产细胞及细胞治疗所使用的细胞等多种不同类型细胞细胞的无血清细胞培养方法，和大家一起分析和讨论技术细节。最后中国蛋白药物质量联盟将颁发培训证书 /p p 　　 strong 五、主讲嘉宾简介 /strong /p p 　　Jennie Mather博士(美国)，珠海恺瑞生物科技有限公司共创人，是哺乳动物无血清细胞培养技术的创始人之一，1970至1978年在美国圣地亚哥加州大学(UCSD)Gordon Sato博士的实验室从事博士及博士后研究工作期间与实验室同事共同创建了无血清细胞培养技术。Mather博士在国际上首次使用F12/DMEM无血清细胞培养液从事无血清细胞培养，其后为Genentech公司创建了CHO细胞高密度无血清细胞培养方法，用来生产抗体及蛋白药物，先后为Herceptin等8个临床使用的蛋白药的工业化生产做出了重大贡献。Mather博士多年来一直活跃在无血清细胞培养技术领域，发表了多篇具有开创意义的无血清细胞培养技术的文章并组织撰写了世界上第一本无血清细胞培养技术专著，为无血清细胞培养技术的推广和和应用做出了杰出的贡献。Mather博士曾应邀于1981年在世界著名的美国长岛冷泉港实验室举办上国际上首次全面的无血清细胞培养技术讲习班，将无血清细胞培养技术迅速推广到国际生物医学研究及生物工程技术领域。Jennie与中国学术界的关系源远流长，在上世纪80年代初期通过其实验室访问学者中科院动物所庄临之教授将无血清细胞培养技术介绍到国内，并亲自于上世纪90年代至2000年代先后在北京举办了三届无血清细胞培养技术讲习班。 /p p 　　李荣皓博士，上世纪80年代师从于中国无血清细胞培养技术鼻祖庄临之研究员，其间利用无血清细胞培养技术建立了国际首例人胎盘滋养层细胞株以及国际首个无血清细胞培养麝香蛋白表达细胞株。1992年李博士加入美国Genentech公司Jennie Mather博士研究组，先后从事过细胞培养工艺开发以及蛋白新药研发工作。1996年李博士加入 Signal Pharmaceutical, Inc. (现Celgene公司)，成为该公司资深新药研发科学家，利用其无血清细胞培养技术为公司建立了数个高难度原代细胞药物筛选实验模型。数年之后李博士应Mather博士邀请，加盟Mather博士创建的Raven Biotechnologies公司，全面负责公司新药研发包括从早期的实验研究到临床试验抗体药生产的各个重要技术环节，并发明了国际首个细胞蛋白标记物高通量筛选(cell array)技术专利，为公司研发项目的顺利进行做出了杰出的贡献。 /p p 　　2006年李博士与另外两位旅美中国科学家在北京共同创办了Autekbio公司，成为中国第一家从事抗体药生产的服务公司。李博士作为公司的技术主管，负责为公司客户开发抗体生产细胞株，并为客户设计国产化的高密度无血清细胞培养基，使得抗体生产成本大为降低。2010年李博士应邀加入恒瑞，在短暂担任公司首任抗体部技术负责人职务之后离职回美，随后与Jennie Mather博士及武军先生共同创建了珠海恺瑞生物科技有限公司。 /p p 　　 strong 六、会议议程 /strong /p table border=" 0" cellspacing=" 0" cellpadding=" 0" width=" 606" tbody tr style=" height:35px" class=" firstRow" td width=" 95" style=" border-width: 1px border-style: solid border-color: windowtext padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 时间 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 报告题目 /span /strong /p /td td width=" 88" style=" border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 报告人 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height=" 35" p style=" text-align:center" strong span style=" font-size:19px font-family:宋体" 单位 /span /strong /p /td /tr tr style=" height:28px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 13:20-13:30 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 欢迎致辞 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 史晋海博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 28" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 中国蛋白药物质量联盟秘书长 /span /p /td /tr tr style=" height:37px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 13:30-14:15 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 无血清细胞培养技术的发展历史及经验 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" Jennie Mather /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 37" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际无血清细胞培养鼻祖 /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:36px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 14:15-15:00 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 原代细胞的无血清细胞培养方法 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:24px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 24" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 15:00-15:30 /span /strong /p /td td width=" 511" colspan=" 3" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 24" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:楷体" 茶歇/交流 /span /strong /p /td /tr tr style=" height:44px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 15:30-16:15 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 蛋白药表达细胞和疫苗生产细胞的无血清细胞培养方法 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:44px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 16:15-17:00 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 细胞治疗所使用的细胞的无血清细胞培养方法 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr tr style=" height:44px" td width=" 95" style=" border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family: Symbol" 17:00-17:30 /span /strong /p /td td width=" 224" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-indent: 77px" span style=" font-family:宋体" 问答讨论 /span /p /td td width=" 88" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" strong span style=" font-family:宋体" 李荣皓博士 /span /strong /p /td td width=" 198" style=" border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height=" 44" p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 国际著名细胞培养专家， /span /p p style=" text-align:center" span style=" font-family:宋体" 珠海恺瑞生物科技有限公司 /span /p /td /tr /tbody /table p 　　 strong 七、注册事宜 /strong /p p 　　培训说明：本次培训免费，证书费(自愿)500元/人，差旅食宿自理。 /p p 　　获取更多资讯，敬请联系中国蛋白药物质量联盟秘书处： /p p 　　联系人：蔡老师 /p p 　　电 话：+86-22-65378072 /p p 　　手 机：+86-18702257197 /p p 　　邮 箱：cailijuan1986@126.com /p p style=" text-align: right " 　　中国蛋白药物质量联盟 /p p style=" text-align: right " 　　2017年05月13日 /p p style=" text-align: center " 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 生物制药产业技术系列职业培训——无血清细胞培养技术培训 /span /strong /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　参会报名表 /span /strong /p p /p table border=" 1" cellspacing=" 0" cellpadding=" 0" tbody tr style=" height:38px" class=" firstRow" td style=" border-width: 1px border-style: solid border-color: rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 38" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 单位名称 /span /strong /p /td td colspan=" 2" style=" border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 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border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 联系电话 /span /strong /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td /tr tr style=" height:76px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-family:宋体" 行业类别 /span /strong /p /td td colspan=" 2" style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" p style=" line-height: 29px" span style=" font-family:宋体" 联盟单位□& nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 非联盟单位□& nbsp /span /p p style=" line-height: 29px" span style=" font-family:宋体" 学生□& nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 赞助单位□ /span /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 电子邮件 /span /strong /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 76" br/ /td /tr tr style=" height:36px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) 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7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 手 & nbsp 机 /span /strong /p /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" p style=" text-align:center line-height:29px" strong span style=" font-size:16px font-family: 宋体" 电子邮件 /span /strong /p /td /tr tr style=" height:36px" td style=" border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height=" 36" br/ /td td style=" border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 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本文来源： 柯瑞斯质谱平台摘 要目的　 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时快速检测微量血清中维生素A、维生素D(25-OH-VD2、25-OH-VD3)、维生素E(α-、β-和γ-生育酚)的方法。 方法　 血清中脂溶性维生素经甲醇-乙腈(50:50, v/v)沉淀蛋白、正己烷萃取，以Phenomenex Kinetex F5色谱柱为分离柱，2.5mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相，梯度洗脱，电喷雾电离(ESI~+)、多反应监测(MRM)模式下检测，同位素内标法定量。结果　 血清中6种脂溶性维生素线性范围内线性关系良好，相关系数r0.995；6种脂溶性维生素的检测限为0.20～1.25ng/mL，定量限为0.39～3.88ng/mL；加标回收率为86.6%～107.7%，日内精密度9.6%，日间精密度9.3%。NIST标准参照品SRM 968f验证方法准确度，结果偏差均在5%以内。结论　 本方法准确度高、重现性好、用血量少，适于婴幼儿等采血困难者微量血样中多种脂溶性维生素的同时快速检测。正 文维生素在人体生长代谢过程中发挥着重要作用，是人体必须的微量营养素，缺乏或过量都会对人体健康产生不利影响。维生素A、D、E是脂溶性维生素，研究表明缺乏这些维生素会增加患夜盲症、骨质疏松、心血管疾病及免疫系统相关疾病的风险[1],婴幼儿及未成年人缺乏其对生长发育的影响则更为明显[2-4]。目前维生素检测的方法主要有高效液相色谱法[5-7]、液相色谱-串联质谱法[8-14]等，其中液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、重现性好、可同时快速检测多种维生素已成为很多临床实验室的首选方法。但是目前的液相色谱-串联质谱方法血液需求量较大[10,13],检测项目单一[8-9,14]或检测时间较长[11],不能满足临床同时快速检测多个项目的需求，特别是婴幼儿采血困难采血量很难满足需求。虽然已有部分学者建立微量检测方法用于维生素检测，但是这些方法需要衍生化过程，前处理复杂耗时较长[8-9,14]。因此，建立能够用微量血液同时快速检测多种维生素的方法满足临床不同年龄段的检测需求显得尤为必要。此外，视黄醇，维生素D的代谢产物25-OH-VD2、25-OH-VD3,α-生育酚是脂溶性维生素A、D、E在血液循环中的主要存在形式，常作为脂溶性维生素检测的首选指标[15-18]。γ-生育酚是维生素E主要的饮食摄入形式，但其与α-生育酚转移蛋白(α-TTP)的亲和力较低，在体内含量较α-生育酚低，但是，近年来文献报道其在人体健康活动中也扮演着重要角色[19]。本文建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时快速检测微量血清中视黄醇，维生素D(25-OH-VD2、25-OH-VD3)和α-、β-、γ-生育酚的方法，满足临床各年龄段尤其是对婴幼儿同时快速检测多种维生素的需求。１实验部分１.１　 仪器与试剂　液质联用仪；高速冷冻离心机；涡旋振荡仪；超声波振荡器；氮吹仪(Agela)；紫外分光光度计。视黄醇、25-OH-VD2、25-OH-VD3、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚均购自美国Sigma-Aldrich；视黄醇-d6标准品购自上海谱芬生物；25-OH-VD2-d3购自美国IsoSciences、25-OH-VD3-d6、α-生育酚-d6标准品购自加拿大TRC 血清质控样品购自美国NIST 收集安徽省第二人民医院近期健康体检正常儿童血液样本17份，避光保存。LC-MS级甲醇，色谱级乙腈、正已烷及甲酸均购自美国Fisher；甲酸铵、牛血清白蛋白(BSA)购自美国Sigma-Aldrich；色谱级乙醇购自国药集团。实验用水由Milipore纯水仪(美国密理博)提供。１.２　 标准溶液和内标溶液的配制　 用无水乙醇配制视黄醇标准品储备液100μg/mL；α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚标准品储备液各1000μg/mL，并用紫外分光光度计对其浓度进行校正[18,20]。用甲醇配制25-OH-VD2标准品储备液25μg/mL和25-OH-VD3标准品储备液100μg/mL，视黄醇-d6标准品储备液100μg/mL，25-OH-VD2-d3标准品储备液50μg/mL，25-OH-VD3-d6标准品储备液50μg/mL，α-生育酚-d6标准品储备液1000μg/mL。将各目标化合物标准储备液用复溶液(初始流动相)稀释混匀，配制成混合标准溶液(视黄醇2.50μg/mL、25-OH-VD2 0.20μg/mL、25-OH-VD3 0.40μg/mL、α-生育酚50.00μg/mL、β-生育酚5.00μg/mL、γ-生育酚 5.00μg/mL)；将各同位素标品储备液用甲醇稀释混匀，配制成混合内标工作液(视黄醇-d6 2.00μg/mL、25-OH-VD2-d3 0.10μg/mL、25-OH-VD3 0.20μg/mL、α-生育酚-d6 20.0μg/mL)。取4g BSA溶解于100mL水中配成4% BSA溶液。１.３　 样本前处理　 取血清样品20μL至2mL离心管中，加入10μL同位素内标工作液，80μL水，2000r/min涡旋振荡30s后加入200μL甲醇-乙腈(50∶50,v/v)，2000r/min混匀60s；加入800μL正己烷，2000r/min，混匀5min，然后4℃，12000r/min离心5min；吸取600μL上清液至1.5mL离心管中，室温下氮气吹干；加100μL初始流动相复溶，涡旋振荡60s，4℃，12000r/min离心5min，上清液转移至进样瓶中待分析。１.４　 色谱 － 质谱条件　 采用Phenomenex Kinetex F5(100mm × 2.1mm, 2.6μm)色谱柱，柱温35℃，流动相A含2.5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸的水溶液；流动相B含2.5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸的甲醇溶液，梯度洗脱程序：0～2.0min，70%B，2.0～2.5min，70%～88% B，2.5～3.5min，88% B，3.5～3.51min，88%～81%B，3.51～11.0min，81% B，11.0～12.0min，81%～70%B，流速0.5mL/min。进样量：20μL。采用多反应监测(MRM)、电喷雾正离子模式(ESI+)，离子源温度 150℃，脱溶剂温度500℃，毛细管电压3kV，脱溶剂气流速1000L/h；6种脂溶性维生素的MRM 离子参数见表1。２　 结果与讨论２.１　 前处理条件优化　 对血清前处理过程中蛋白沉淀剂(甲醇、乙腈、乙醇)的选择及萃取溶剂正己烷的用量(400μL、600μL、800μL)进行了优化，结果表明，甲醇-乙腈(50∶50,v/v)，沉淀效果最好，色谱图杂峰明显减少；正己烷用量较大时萃取更完全，信号值更高。另外，考察了不同复溶液体系：甲醇-水(50∶50,v/v)、甲醇-水(70∶30,v/v)、甲醇均含2.5mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸对色谱分离的影响，结果如图1所示，使用b组复溶液即初始流动相时视黄醇响应值较a组增加1倍以上，c组视黄醇峰宽变大且峰形不对称。同时b组中25-OH-VD3和25-OH-VD2响应值是a组的2倍、c组的4倍以上，且峰形明显改善有利于25-OH-VD3和 25-OH-VD2的分离检测。最终，采用血清样加水混匀后用200μL沉淀剂(甲醇：乙腈(50∶50,v/v)沉淀蛋白，800μL正已烷液液萃取，取600μL上清液氮吹，初始流动相复溶进样。２.２ 　 液 相 色 谱 条 件 优 化 　 Kinetex F5色谱柱可以实现所有组分包括β、γ-生育酚的分离。此外，25-OH-VD3同分异构体3-epi-25-OH-VD3在婴幼儿体内含量较高，对维生素D含量测定影响较大[21]，该色谱柱可以实现25-OH-VD3和3-epi-25-OH-VD3的分离，减少3-epi-25-OH-VD3对检测结果的影响。故采用Kinetex F5色谱柱进行所有组分的分离(见图2)。研究发现在流动相中加入甲酸铵后其促进目标化合物离子化的效果较加入乙酸铵好，响应值增加明显，故在水相和有机相中均加入2.5mmol/L甲酸铵。２.３　 线性范围、检出限和定量限　 将混合标准溶液用复溶液逐级稀释，得到一系列标准工作液，各取20μL，分别加入10μL内标工作液和80μL 4% BSA溶液，其余操作同样本前处理。由于人血中存在内源性脂溶性维生素，故在标曲制作中加入4% BSA。以各目标化合物的色谱峰与其相对应的同位素内标色谱峰的峰面积比值-浓度比值作图，得到各目标化合物的标准系列工作溶液的直线拟合方程，并计算相应的线性相关系数。6种脂溶性维生素的标准曲线和线性范围见表2。结果表明，6种脂溶性维生素在对应的浓度范围内线性关系良好，相关系数0.995，标准溶液色谱图如图3所示。每个浓度重复检测6次，满足相对标准偏差20%且信噪比S/N≥3的最低浓度值定为检测限，满足相对标准偏差20%且信噪比S/N≥10的最低浓度值定为定量限。6种脂溶性维生素检测限为0.20～1.25ng/mL，定量限为0.39～3.88ng/mL(见表2)。２.４　 方法精密度　将低、中、高三个浓度标准品溶液加入4% BSA混合血清样本经本法处理后进行检测，每个浓度重复6次，连续检测三天，计算日内精密度为0.9%～9.6%，日间精密度为3.0%～9.3%(见表3)。该方法同时测定6种脂溶性维生素的日内精密度和日间精密度均在15%以内，方法精密度满足检测需求。２.５　 方法准确度　 将低、中、高浓度的标准品溶液加入混合血清样本中按本法进行前处理后进行检测，每个浓度重复6次，计算加标回收率，3个水平的加标回收率为86.6%～107.7%，相对标准偏差(RSD)为1.46%～9.39%(见表4)。该方法加标回收率均在80%～120%以内，方法准确度高满足检测需求。２.６　 方法验证　 采用建立的UPLC-MS/MS方法对美国国家标准技术研究所(NIST)制定的标准参照品SRM 968f进行检测，每个水平重复2次取平均值，验证方法准确度。结果表明，除25-OH-VD2含量较低未能检出外，其它检测结果与靶值偏差均在5%以内，该方法检测结果准确可靠(表5)。２.７　 实际样品测定　 使用本方法对17份健康儿童血液样本进行检测，其中视黄醇含量为0.22～0.43μg/mL，25-OH-VD2含量为未检出～5.19ng/mL，25-OH-VD3含量为6.83～49.21ng/mL，α-生育酚含量为5.63～12.73μg/mL，β-生育酚含量为0.03～1.37μg/mL，γ-生育酚含量为0.11～1.68μg/mL。本法适用于微量临床血液样本6种脂溶性维生素的同时快速检测。３结　 论本研究建立了超高效液相色谱串联质谱法同时测定微量血清样本中多种脂溶性维生素的方法，并对前处理过程中的蛋白沉淀试剂、萃取液用量，复溶液等进行了优化，以减少色谱图中噪音干扰，改善色谱峰形，提高检测灵敏度。并比较了不同色谱柱对多种脂溶性维生素尤其是不同类型维生素E的分离效果，最终选择Phenomenex Kinetex F5色谱柱，该色谱柱可以实现β-生育酚和γ-生育酚的有效分离。本研究中只需20μL血清就能够快速完成6种脂溶性维生素的测定。该方法测定样本需求量少、操作简单、检测结果准确快速可实现大量临床样本的同时检测，尤其对采血较为困难的婴幼儿可以实现少量血液样本检测多数项目的需求。参考文献（略）本文引用来源： 李雪梅,吴慧慧,陈竞,赵盼,唐玉菲.超高效液相色谱-串联质谱法同时快速检测微量血清中6种脂溶性维生素[J].现代预防医学,2022,49(07):1297-1302.

数以万计的外源性暴露物在人体中蓄积和代谢，不仅种类繁多，而且化学性质各异，难以实现人体中暴露物的高覆盖筛查。近日，中国科学院大连化学物理研究所研究员许国旺团队，在血清中外源暴露物的高覆盖筛查方面取得新进展。团队利用二维液相色谱结合高分辨质谱信息非依赖采集技术，提出了一种可以同时进行血清中1210种农药、兽药（部分人畜共用药物）、其他化学污染物及其代谢物的高覆盖筛查的方法。相关成果发表在《环境污染》上。目前，一维色谱—质谱是暴露组学分析的主流方法，但是面临着单根色谱柱的分离性能有限、单次分析只能局限于某几类暴露物等挑战，往往需要多种方法、多次分析才能实现人体中上千种暴露物的筛查。因此，需要发展高覆盖筛查的新技术。针对上述难题，团队提出了一种基于二维液相色谱，结合高分辨质谱信息非依赖采集的非靶向筛查策略。研究人员通过预分离色谱柱，将目标分析物切割为具有不同极性的两组馏分，每组馏分再通过相应的定制极性的色谱系统进行分离检测，该方法将暴露物中的油水分配系数范围扩大到了-8至12。并且，结合自建数据库中的一级母离子、二级特征碎片离子和保留时间，实现了对血清中1210种农、兽药（部分人畜共用药物）、其他化学污染物及代谢物的高覆盖筛查。研究证实，该方法稳定可靠，适用于大规模血液样本的暴露组筛查。

第2轮感染高峰为何预测在3到5月？华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科主任医师邢铭友1月31日在接受采访时分析，从病毒学的角度和流行病学的角度来看，“阳康”后体内抗体水平会维持3到6个月比较高的峰值，短时间内再感染的人只有2%的概率。但是我们国人口基数非常大，从去年12月开始，再过3到6个月，我们的抗体水平慢慢下降以后，这时候如果有新的病毒变异株，我们再次感染后出现临床症状的可能性非常大，仍有可能出现高峰。邢铭友教授预测，第二轮感染高峰可能会在3-5月到来，但这次高峰民众可能感觉不那么明显。由于大家感染的时间先后有差异，再加上我们第二次感染以后，由于有一个基础抗体水平的存在，第二轮感染的人数、感染症状的轻重，以及时间集中的幅度都会比第一次要弱得多。德国华裔病毒学家、埃森大学医学院病毒研究所教授陆蒙吉也在2月1日在接受采访时表示，预计从今年3月下旬开始，随着人群免疫力的下降，人群感染风险会增加，五六月份时，疫情变化会非常明显，到时候可能会面临第二波的冲击。但第二波疫情会出现在三月份还是五六月份，取决于是否会出现一种冲击力非常大的新毒株。两类人群未来或受影响大1.还在恢复身体的老人陆蒙吉教授谈到，现在很多感染过的老人正处于身体恢复期，很多体质差的人再感染一次，后果可能非常严重。这个阶段，没发生感染的部分有免疫缺陷的高危人群，也可能面临下一波疫情的冲击。2.尚未感染的人群目前受疫情影响最大的是尚未感染人群，估计在15%到20%。这和此前整体人群都易感的情况相比，影响程度已有所减少，但鉴于我国人口基数，涉及的人群规模还是很大的。我们能做什么？做好两点每个人做好自己健康的第一责任人，保持社交距离，养成良好的卫生习惯，很大程度上还是可以预防感染和二次感染。1.保持戴口罩的习惯邢铭友教授提醒，特别是在人群较密集的公共场合，必须规范佩戴口罩。普通民众常规出行规范佩戴医用外科口罩就足够。从事一些高风险岗位和环境下，感染概率增加需要佩戴N95口罩。2.三类人群优先接种疫苗由于“阳康”后6个月，我们第一次感染以后产生的抗体已经消失殆尽，这时候补种加强疫苗非常有必要。接种后可以推迟感染的时间，或者说减少感染的概率。三类人群建议优先接种：一、从事高风险岗位工作如医生、快递员等；二、有基础疾病的老年患者如糖尿病、高血压、有肿瘤或者是透析做过移植的这些患者；三、在第一次感染中出现了肺炎的表现，症状较重住院治疗过的人群，在第一次“阳康”以后6个月一定要接种加强疫苗。北京将开展人群血清抗体调查专家详解日前，北京市疾控中心副主任王全意接受媒体采访时介绍，北京市目前已建立临时人群免疫，近期发生新冠病毒感染疫情流行风险较小。为全面评估新冠病毒感染情况，了解社区人群血清抗体水平，北京市即将开展人群血清抗体调查。何为血清抗体调查？据王全意介绍，北京市人群血清抗体水平调查计划于今年2月至3月完成。该调查采取多阶段分层随机抽样调查方法，从16个辖区和经开区中选取约5000名社区人群，进行问卷调查和血清学标本采集。他表示，该研究将为未来优化资源配置和新冠防控提供参考。早在2020年，中国疾控中心就已组织完成全国新冠肺炎血清流行病学调查和分析。该调查涵盖三类地区，包括武汉市、湖北武汉之外市州、以及湖北之外六个省份（北京、辽宁、上海、江苏、广东和四川），采用抽样调查设计选取社区人群3.4万余人，通过检测调查对象的血清新冠病毒抗体，估计人群中新冠病毒的感染水平。中国疾控中心在2020年发布的《科学认识人群新冠病毒抗体流行率——全国新冠肺炎血清流行病学调查结果问答》中解释，血清流行病学调查是采用血清学方法和技术开展的流行病学调查，通过对人群血清中特异性抗原或抗体的分布规律及其影响因素的分析研究，阐明传染性疾病的发生与流行的规律，评价预防接种的效果等。为何要开展血清抗体调查？中日友好医院呼吸与危重症医学科医生王一民向中新网介绍，新冠血清抗体检测包括特异性IgM抗体和IgG抗体，发病1周内阳性率较低，恢复期IgG抗体滴度较急性期升高4倍以上可作为新冠病毒感染回顾性诊断依据。王一民还表示，抗体检测可能存在假阳性，如疫苗接种者，既往类风湿关节炎等免疫性疾病患者等，因此临床一般不单独以血清学抗体作为诊断依据，仍要结合临床表现、流行病学史及抗原或核酸检测综合判断。王一民指出，目前监测的血清IgG和IgM抗体不完全等同于感染新冠病毒后的保护性中和抗体，因此不能认为抗体滴度高度就与“保护力”有关，如果有条件的机构可以开展中和抗体检测，这一指标的高低对于指导疫苗接种，评判全体免疫保护水平及反复感染风险有一定作用。对于北京此次开展的人群血清抗体调查，王全意也表示，考虑到随着时间推移，抗体水平也会自然下降，将来根据需要，可能开展动态评估。

电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）是测定血液样品中微量元素的最常用工具。但是，血液和血清基质复杂，含有水、蛋白质、葡萄糖、矿物盐、性激素和红白血细胞等，ICP-MS分析时经常遇到由基体引起的质谱干扰；血液和血清中的某些微量元素的正常浓度水平极低，要求ICP-MS的检测灵敏度极高。因此，血液样品中微量元素的分析给ICP-MS带来了挑战。在血液和血清样品微量元素的ICP-MS分析中，您一定会遇到很多问题… … 可以不使用微波消解处理样品，仅需稀释后进样分析吗？使用何种样品稀释剂使得测量结果更真实？如何选择合适的干扰消除方法，确保实现优异的低浓度水平分析？血液中的常量元素与微量元素能同时检测吗？样品多，时间紧，想提高检测通量怎么办？样品基质复杂，且样品量很大，我需要耐受性好，维护简单的仪器… … 珀金埃尔默公司NexION® 系列ICP-MS是测定血液样品中微量元素的理想工具，它所带来的解决方案会帮助您顺利解决遇到的上述问题。配合独特的四级真空系统、固态射频发生器、三锥接口和四极杆离子偏转器，使得NexION ICP-MS的基体耐受性非常高，且保障仪器开机快速，运行稳定，维护方便简单频次低。血液和血清样品仅需简单稀释后就可以进样分析。NexION ICP-MS通用池系统具有标准 (Standard)、碰撞 (KED) 和反应 (DRC) 三种模式，可选择的碰撞/反应气体种类丰富，真正有效消除各种质谱干扰。NexION ICP-MS通用池系统具有电子稀释功能，可选择性地稀释高浓度元素，轻松实现血液和血清样品中常量元素和微量元素的同时检测。如果将NexION ICP-MS与相关高通量和快速进样设备相搭配，通过Syngistix软件可以实现无缝集成，可以大大提高检测实验室的工作效率。欲了解详情，请扫描下方二维码，即可获取《NexION ICP-MS电子稀释技术直接测定血清中微量元素的含量》和《NexION 2000：用于测定血液和血清中微量元素的理想工具》的相关资料。《ICP-MS电子稀释技术直接测定血清中微量元素的含量》《NexION 2000：用于测定血液和血清中微量元素的理想工具》

炎症因子是炎症反应及其介导的疾病中参与免疫调控的一类重要细胞因子，包括肿瘤坏死因子（TNF）、白介素（IL）、转化生长因子（TGF）等。目前已经证实炎症因子与多种临床疾病的发展密切相关，包括细菌感染、新生儿败血症、心血管疾病、类风湿性关节炎等各种急性和慢性炎症疾病，甚至在肿瘤的发生发展中也起到了重要作用。因此，血清炎症因子是监控疾病进程的核心指标，通过对炎症因子的检测可以更好的评估患者免疫状态，为临床管理提供重要参考。然而，这些炎症因子在血清中的含量极低，现有的一些常规技术由于受到灵敏度的限制无法达到检测需求，难以及时预测疾病的转归。 图1 基于ZIF-8@Ag NWs 复合纳米材料的电化学传感芯片结构图以及免疫传感策略验证结果近期，上海大学的张源课题组提出了一种合理有效的电化学免疫传感器件设计策略。该团队以ZIF-8@Ag NWs为电极材料，结合3D 打印（NanoArch S140，摩方精密）和丝网印刷技术，开发了一种多通道的电化学免疫传感芯片，用于血清中炎症因子IL-6和IL-8的联合检测。该传感芯片可同时检测pg/mL至ng/mL浓度范围内的IL-6和IL-8，即使在复杂的BSA环境中也可达到10 pg/mL的检测限。临床血清样本分析表明该传感检测方法对18例炎症疾病患者组和18例对照组表现出良好的区分结果。相关成果以In-situ formation of “electron conductive wires” threaded ZIF-8 membrane for multiplexed immunoassay of human interleukins为题发表在《Nano Research》期刊上。图2 临床血清样本的检测分析结果。(a) 固定有Anti-IL-6的工作电极对血清的检测结果 (b) 固定有Anti-IL-8的工作电极对血清的检测结果 蓝色柱为健康对照组，橙色柱为患者 (c) 基于IL-6、IL-8检测结果的主成分分析数据。

p 　　生物医药产业是高新科技产业，随着生物医药产业的快速发展，我国生物制药产业也进入了快速上升期，而单克隆抗体药物和细胞免疫治疗技术在整个产业中无疑是最为重要的组成部分。目前生物制药产业发展面临人才短缺的挑战，而我国高等专业教育尚不能满足生物制药产业发展的需求，大部分生物医药相关专业毕业生缺乏该产业急需知识和技能而面临就业难。在职职工专业教育是生物医药产业正常运营的基础保障，更是各国药政机构监管的重点。中国蛋白药物质量联盟将针对我国生物医药产业发展现状和国际产业技术的发展进步，特别是各国药政监管要求，推出生物制药产业技术系列职业培训。本期设为无血清细胞培养技术应用培训。 /p p style=" text-align: center " 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 无血清细胞培养技术应用培训 /span /strong /p p 　　无血清培养技术的出现是生物制药发展历程上的一个里程碑，其培养基一般是在合成培养基的基础上，引入成分完全明确的或部分明确的血清替代成分，使培养基能满足动物细胞培养的要求，又可有效的克服因使用血清所引发的问题，保证了产品质量，降低了细胞培养成本，对推动细胞生物学发展有着重大的意义。无血清培养是生物制药产业和细胞免疫治疗技术发展的方向。无血清培养技术也将成为生物制药产业和细胞治疗技术中的基本技能之一。 /p p 　 strong 　一、主办单位 /strong /p p 　　中国蛋白药物质量联盟 /p p 　　 strong 二、培训时间 /strong /p p 　　时 间：2017年09月15日 PM 1:30-5:00 /p p 　　地 点：北京兴基伯尔曼饭店，北京亦庄荣华南路12号(三楼巴黎厅 ) /p p 　　(晚餐：下午5:00-8:00 北京兴基伯尔曼饭店 四楼明熙餐厅) /p p 　　 strong 三、培训目标人群 /strong /p p 　　本次培训旨为生物医药产业和精准医疗/细胞免疫治疗的技术研发负责人、细胞培养业务骨干温故知新 为职场新人、在校大学生以及对细胞培养感兴趣的相关人员夯实基础。 /p p 　　 strong 四、培训内容 /strong /p p 　　李荣皓博士从1984年开始使用无血清细胞培养技术，曾涉足CHO细胞培养及重组蛋白生产工艺优化、多种原代细胞及干细胞等无血清细胞培养，在无血清细胞培养技术应用方面具有很深的造诣。 /p p 　　此次培训班李博士将重点介绍其在美国Genentech等公司工作期间所积累的CHO细胞培养液开发以及其它细胞无血清培养技术的应用经验，并与听众互动，共同探讨听众有关重组蛋白表达细胞、干细胞、T细胞、疫苗生产细胞以及原代细胞等多种类型细胞的无血清培养技术问题。和大家一起分析和讨论技术细节。 /p p 　　 strong 五、嘉宾简介 /strong /p p 　　主讲嘉宾：李荣皓博士，上世纪80年代师从于中国无血清细胞培养技术鼻祖庄临之研究员，其间利用无血清细胞培养技术建立了国际首例人胎盘滋养层细胞株以及国际首个无血清细胞培养麝香蛋白表达细胞株。1992年李博士加入美国Genentech公司Jennie Mather博士研究组，先后从事过细胞培养工艺开发以及蛋白新药研发工作。1996年李博士加入 Signal Pharmaceutical, Inc. (现Celgene公司)，成为该公司资深新药研发科学家，利用其无血清细胞培养技术为公司建立了数个高难度原代细胞药物筛选实验模型。数年之后李博士应Mather博士邀请，加盟Mather博士创建的Raven Biotechnologies公司，全面负责公司新药研发包括从早期的实验研究到临床试验抗体药生产的各个重要技术环节，并发明了国际首个细胞蛋白标记物高通量筛选(cell array)技术专利，为公司研发项目的顺利进行做出了杰出的贡献。 /p p 　　2006年李博士与另外两位旅美中国科学家在北京共同创办了Autekbio公司，成为中国第一家从事抗体药生产的服务公司。李博士作为公司的技术主管，负责为公司客户开发抗体生产细胞株，并为客户设计国产化的高密度无血清细胞培养基，使得抗体生产成本大为降低。2010年李博士应邀加入恒瑞，在短暂担任公司首任抗体部技术负责人职务之后离职回美，随后与Jennie Mather博士及武军先生共同创建了珠海恺瑞生物科技有限公司。 /p p 　　主持人：杭海英博士，中科院生物物理所流式平台首席科学家、抗体药研发专家，1994年于美国科罗拉多州立大学获博士学位，1994年始在哥伦比亚大学医学中心做博士后，2000年任中心助理教授(tenure track)，2004年入选中国科学院& quot 百人计划& quot 。多年来从事肿瘤分子生物学研究和流式开发与应用研究。2008-2009年到德克萨斯大学奥斯汀分校国际著名抗体专家、美国三院院士George Georgiou实验室做访问教授，从事抗体研究。多年来一直从事肿瘤发生机理、抗体和流式技术研究。 /p p 　　1.建立了生物物理所流式平台，一直任该平台首席科学家至今。开发了多种流式技术及应用。 /p p 　　2.发展抗体/蛋白质设计、人工进化技术，开发了多个抗肿瘤融合蛋白和人源化抗体和试剂抗体。 /p p 　　3.发现Rad9参与多个途径的DNA损伤修复。 /p p 　　4.与生物物理所研究员梁伟研究员开发成功纳米胶束输送肿瘤药物，该工作发表在JNCI，被科学和工程院士会评为“2007年中国十大科技进展”之一。 /p p 　　5.参加航天返回式卫星 “实践十号”项目，担任其中“微重力对基因组遗传效应的研究”课题组长，直接指挥空间细胞培养器研发、实验设计、空间飞行 /p p 　　中国蛋白药物质量联盟China Protein Drug Quality Alliance /p p 　　调控和回收样本分析。2016年圆满完成“实践十号”卫星升空、飞行实验操作和样本回收分析。 /p p 　　 strong 六、会议议程： /strong /p p /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201709/insimg/39dcb1a3-cdc6-4082-b7f7-7e1f9a998c1f.jpg" title=" 无标题_副本.jpg" / /p p 　　 strong 七、注册事宜 /strong /p p 　　培训说明：本次培训免费，中国蛋白药物质量联盟证书(自愿)500元/人。获取更多资讯，敬请联系中国蛋白药物质量联盟秘书处： /p p 　　联系人：蔡老师 /p p 　　手 机：+86-18702257197 邮 箱：18702257197@163.com /p p br/ /p

近日，中国科学院大连化学物理研究所生物技术研究部生物分子高分辨分离分析及代谢组学研究组(1808组)许国旺研究员团队在血清中外源暴露物的高覆盖筛查新方法研究方面取得新进展，利用二维液相色谱结合高分辨质谱信息非依赖采集技术，提出了一种可以同时进行血清中1210种农药、兽药(部分人畜共用药物)、其他化学污染物及其代谢物的高覆盖筛查的方法。 　　数以万计的外源性暴露物在人体中蓄积和代谢，不仅种类繁多，而且化学性质各异，难以实现人体中暴露物的高覆盖筛查。一维色谱—质谱是目前暴露组学分析的主流方法，但是仍面临单根色谱柱的分离性能有限，单次分析只能局限于分析极性范围较窄的某几类暴露物等挑战。常常需要多种方法、多次分析才能实现人体中上千种暴露物的筛查。因此，需要发展高覆盖的筛查新技术。针对上述难题，该团队提出了一种基于二维液相色谱结合高分辨质谱信息非依赖采集的非靶向筛查策略。团队通过预分离色谱柱将目标分析物切割为具有不同极性的两组馏分，每组馏分再通过相应的定制极性的色谱系统进行分离检测。该方法将可筛查暴露物的油水分配系数范围扩大到-8至12，结合自建数据库中的一级母离子、二级特征碎片离子和保留时间，实现对血清中1210种农、兽药(部分人畜共用药物)、其他化学污染物及代谢物的高覆盖筛查。该方法稳定可靠，适用于大规模血液样本的暴露组筛查。作为应用示例，团队在各由6人血清混合的24个样品中检测到58种外源性残留物。 　　相关工作以“Screening strategy for 1210 exogenous chemicals in serum by two-dimensional liquid chromatography-mass spectrometry”为题，发表在《环境污染》(Environmental Pollution)上。第一作者是该组的博士生王宇婷。 　　上述工作得到国家重点研发计划、国家自然科学基金、中国科学院青年创新促进会、大连化物所创新基金等项目的资助和安捷伦科技的技术支持。

大家好，本周为大家分享一篇发表在Journal of the Ameican Society for Mass Spectrometry上的文章，Top-Down Characterization and Intact Mass Quantitation of a Monoclonal Antibody Drug from Serum by Use of a Quadrupole TOF MS System Equipped with Electron-Activated Dissociation1，通讯作者是来自美国宾州葛兰素史克的John F. Kellie博士。　　最近，SCIEX开发了一种新的Q-TOF质谱系统，该系统具有允许调节的电子能量，能够将快速ECD作为电子激活解离(EAD)技术的一种操作模式，并能实现灵敏的大蛋白检测和定量。此外，通过采用一种新的trap-and-release特性，促进TOF加速器(Zeno阱)中心离子的空间质量聚焦，提高了碎片离子检测的占空比和信噪比(S/N)。本研究使用这个新型质谱仪器，对从血清中提取的一种生物治疗性单克隆抗体(mAb)进行了LC-MS分析，并进行了完整质量的检测、定量和亚单位表征实验。　　样品处理和数据分析的流程如图1所示。简单来说，将研究的治疗性单抗药物注射到恒河猴中，使用自动免疫亲和试剂盒从猴血清中免疫捕获抗体。完整的单抗和还原的轻、重链进行LC-MS分析，并选择重链和轻链进行MS/MS分析和片段离子测定。在SCIEX OS软件中使用完整单抗和还原轻链的MS1数据进行定量。通过ProteoWizard文件转换处理亚基的片段离子数据，然后使用MASH软件套件中的THRASH脱同位素算法进行处理。最后将去卷积质量列表导入ProSight PC进行表征。　　图1. 从血清中免疫捕获GSKmAb的LC-MS样品分析及数据处理流程。治疗性单抗轻链的Top-down MS示例数据如图2所示。抗体亚基达到电荷态分辨率 ，通过去卷积计算平均质量为23197 Da。对于碎片离子，实现了同位素分辨率，从中可以确定碎片离子质量(图2C)。在图2B中，使用SCIEX的内部研究软件，MS/MS谱显示了可能匹配的片段的叠加。图2C展示了去卷积后的片段离子的代表性数据。为了确定匹配的片段离子，使用THRASH脱同位素算法生成了高达30000 Da的精确质量。　　　　图2. 从血清中免疫捕获和TCEP还原后GSKmAb轻链的表征分析示例。该Q-TOF仪器同时配备了EAD和CID功能，虽然两种解离方式可以在一次注射中进行，但作者进行了两次单独的注射。一次注射用于ECD MS/MS，第二次注射用于CID MS/MS。亚基的MS/MS覆盖率如图3A所示。ECD和CID结合时，轻链有49%的氨基酸残基被裂解。对于重链(图3B)，获得了21%的残基覆盖率。　　　　图3. 使用CID和EAD的组合对(A)轻链和(B)重链的表征结果。在这里，b-和y离子用蓝色钝角表示，c-和z离子用红色直角表示。接着，作者介绍了使用提取离子色谱图累积面积和去卷积质谱图累积面积两种方式的完整抗体定量研究。这里，将不同水平的mAb作为标准物质添加到血清中，建立2 ~ 50 μg/mL范围内的浓度与测定面积的线性关系。选取了两个电荷态的离子提取色谱和去卷积质量峰进行面积的累积(图4A, B)。MS数据显示，定量下限时(LLOQ=2 μg/mL)，观察到完整的单抗电荷态分布的S/N约为4。对于定量上限(HLOQ=50μg/mL)，观察到的S/N约为50(图4C, D)。在这里，校准曲线显示出良好的线性响应(所有数据的r2≥ 0.97)，完整单抗定量的准确度和精密度值在15%以内。　　　　图4. 完整单抗定量示例数据，使用基于XICs和去卷积数据的两种不同的定量方法。　　本文介绍了自上而下的数据处理工作流程，这对于从MS/MS数据中获取信息至关重要。在XIC或去卷积质量水平上的生物分子定量也得到了证明，并表明这两种方法都足以从血清中测定单抗浓度。最后，作者预期这类能够实现完整蛋白质表征的多功能质谱系统将被更广泛地用于生物样本分析。　　撰稿：夏淑君　　编辑：李惠琳　　文章引用：Top-Down Characterization and Intact Mass Quantitation of a Monoclonal Antibody Drug from Serum by Use of a Quadrupole TOF MS System Equipped with Electron-Activated Dissociation

同位素内标-气相色谱-高分辨双聚焦磁质谱法检测血清中多溴联苯醚背景介绍　　多溴联苯醚(PBDEs),是一种持久性有机污染物(POPs),根据苯环上溴原子的取代个数和位置的不同,共有10类209种同系物。由于其阻燃性能良好,被广泛应用于纺织品、玩具、建筑材料和电子设备等产品中。PBDEs的化学结构稳定,亲脂性强,容易释放到环境中,并通过食物链对生物体产生生物蓄积与生物放大作用,产生甲状腺毒性、神经毒性、内分泌毒性、生殖毒性、肝脏毒性、细胞毒性、致癌性等。　　PBDEs对人体健康的影响已成为世界范围内高度关注的问题,目前针对多溴联苯醚人群暴露情况的研究,分析样本主要为血液、母乳和各种组织(脂肪、胎盘等)。由于多溴联苯醚是脂溶性化合物,在尿液中含量较低且多以羟基化代谢物的形式存在,脂肪组织的采样具有侵害性,且母乳和胎盘的采样仅限于一部分特殊人群,而血液样本相对较易获得,所以血液样本的测定是研究多溴联苯醚对人群健康影响的主要途径。　　人体血清基质复杂,PBDEs含量较低,因此需提高富集效率并尽可能降低基质干扰,提高检测灵敏度。目前,液液萃取法、固相萃取法和加速溶剂萃取法是样品提取时较常使用的方法,样品净化主要使用凝胶色谱法和固相萃取柱净化法,检测方法主要有液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)、气相色谱-负化学源质谱法(GC-NCI/MS)和气相色谱-高分辨双聚焦磁质谱法(GC-HRMS)。　　LC-MS前处理步骤相对简便,但对PBDEs分辨能力较弱、灵敏度较低,更适合易热降解的高溴代多溴联苯醚的测定；GC-MS/MS、GC-NCI/MS选择性、灵敏度较高,对复杂基质抗干扰能力强,适用于痕量PBDEs的测定,但样本需求量较大,需采集2~5 mL血清样本；GC-HRMS同时备有静电场离子分析器和磁场质量分析器,因而使仪器同时具有能量聚焦和方向聚焦的双聚焦功能,灵敏度高、检出限低,适用于小体积样本中痕量和超痕量PBDEs的测定。　　目前常用的GC-HRMS样品前处理步骤中主要采用凝胶色谱和酸性硅胶柱对样品进行净化,其中凝胶色谱法样本需求量较大(2 mL),酸性硅胶柱对实验人员填装操作要求较高,且无法同时测定多种PBDEs组分(如BDE-209等),批量样品检测时效率较低。　　本方法探索使用少量血清(0.5 mL),采用GC-HRMS结合液液萃取和硅胶柱净化的方法,建立了人血清中14种PBDEs的测定方法,并用该方法对某地区15份青少年人群血样进行了检测,以期了解该地区青少年人群PBDEs的暴露水平。　　样品前处理　　血清样品解冻后移取0.5 mL于12 mL玻璃离心管中,分别加入200 μL硫酸、0.5 mL甲醇和20 μL内标使用溶液后混匀。先加入6 mL正己烷充分摇振后,以3500 r/min离心10 min,收集上层有机相；再加入6 mL甲基叔丁基醚,重复萃取,合并两次萃取液,于40 ℃、5 Pa氮吹25 min至0.5 mL。依次用2 mL甲醇和2 mL正己烷活化硅胶固相萃取柱,将浓缩液转移到硅胶柱上,先收集流出液,再用10 mL二氯甲烷-正己烷(1:1, v/v)溶液洗脱,合并流出液与洗脱液,40 ℃氮吹30 min至近干。向试管中加入10 μL正己烷复溶,振荡混匀,转移至棕色进样小瓶中,待测。　　色谱条件　　色谱柱:Rtx-1614毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.1 μm)；进样方式:不分流进样；进样口温度:290 ℃；传输线温度:320 ℃；升温程序:初始温度150 ℃,保持2 min,以15 ℃/min升温至250 ℃,保持1 min,再以25 ℃/min升温至290 ℃,保持3 min,然后以25 ℃/min升温至320 ℃,保持12.5 min；载气:氦气,恒定流量1.0 mL/min；进样量为1 μL。　　质谱条件　　电子轰击(EI)离子源,源温:280 ℃；电子能量:35 eV；电压选择离子检测(VSIR)；分辨率:10000。14种PBDEs及其同位素内标的质谱参数见原文表1。　　质量控制　　样品前处理环境应在每次实验开始前和结束后进行清理,避免有目标物残留。实验过程中所用玻璃离心管、试剂、进样小瓶、固相萃取柱、枪头均做空白对照实验,未检出14种待测PBDEs。　　文章信息　　色谱, 2022, 40(4): 354-363　　DOI: 10.3724/SP.J.1123.2021.10017　　王梦梦, 谢琳娜, 朱英*, 陆一夫*　　中国疾病预防控制中心环境与人群健康重点实验室, 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所, 北京 100021

近日，中国科学院合肥物质科学研究院健康与医学技术研究所研究员杨良保团队、王宏志团队，与中科院合肥肿瘤医院药学中心合作，在抗肿瘤药物血药浓度的定量检测方面取得进展。科研团队利用收缩组装的液态3D热点矩阵作为微反应器，建立了高稳定、高灵敏的表面增强拉曼光谱（SERS）定量检测血药浓度新方法。相关研究成果发表在Analytical Chemistry上。　　表面增强拉曼光谱（SERS）是一种分子光谱，具有快速、高灵敏和指纹识别的特性。杨良保团队致力于SERS方法原理与检测应用方面的研究工作，并取得了一系列成果。定量检测是SERS方法的终极目标之一，但在控制热点的均匀性和使目标分子进入热点区域等方面存在难题。该研究利用液体三相平衡原理控制液滴的收缩，不仅形成高密度、高稳定的液态3D热点矩阵（图1），而且使抗肿瘤药物能够自主进入热点区域。结合该团队自主研发的手持式拉曼光谱仪，能够实现对肿瘤病人血清中抗癌药物在线定量检测（图2）。　　该方法对抗癌药物5-氟尿嘧啶表现出50 ppb灵敏度和50-1000 ppb的定量检测范围（图2）。与传统的固体纳米阵列和胶体聚集SERS方法相比，收缩组装的液态3D热点矩阵可以增强分析物在等离子体热点空间的富集能力，实现高灵敏度和高稳定的SERS定量检测。这种收缩组装的3D热点矩阵在定量检测复杂样品（如血清、生物体液）中的分析物、动态监测抗癌药物代谢过程和生化反应动力学方面颇具潜力。　　研究工作得到中科院科研仪器设备研制项目、国家自然科学基金、安徽省重点研究与开发计划等的支持。图1.3D热点矩阵形成原理图图2.手持式拉曼光谱仪检测血清中的5-氟尿嘧啶

单四极杆型GC-MS具有出色的色谱分离能力，测定稳定，因此，广泛用于进行生物体内代谢物全面性解析的代谢组学解析。但是，生物样品含有较多的代谢物与多种基质，使用单四极杆GC-MS有时难以实施分离。而的MRM在四极杆Q1和四极杆Q3进行2次MS分离，因此，较使用一个四极杆进行MS分离的扫描模式测定，可以除去由干扰成分造成的峰重叠影响，获得高灵敏度且准确的定量结果。 本应用方案使用岛津三重四极杆气质联用仪 GCMS-TQ8030，利用GC/MS代谢成分数据库Ver.2中的扫描及MRM方法测定了人标准血清中的代谢物，并比较了测定结果。 岛津三重四极杆型气相色谱质谱联用仪GCMS-TQ8030集结了最尖端UF技术， 实现「更迅速」、「更准确」、「更顺畅」分析 了解详情，请点击《基于GC-MS/MS的人标准血清中代谢物的分析》 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以&ldquo 为了人类和地球的健康&rdquo 为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。 更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn/an/ 。

对SARS-CoV-2患者免疫反应的表征，是了解COVID-19疾病进展或者疫苗功效的关键。SARS-CoV-2抗原例如刺突蛋白（Spike Protein），S1和S2亚基，S1受体结合域（S1 RBD）以及病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein）均可以刺激机体产生体液免疫应答，产生相应抗体。因此，不同抗原的反应性可能揭示了疾病进展的不同阶段。例如，与核衣壳的反应性可能是病毒早期感染的敏感性指标，而与S1 RBD和刺突蛋白的其他部分的反应性可能与病毒的中和有关。血清学免疫检测的常见方法是酶联免疫吸附测定（ELISA）法。但这种方法会面临：每个孔只检测一个抗原，所以提供针对SARS-CoV-2的复杂免疫学信息受限；因为抗原信息提供有限，容易产生假阳性；手动操作时间长，数据重现性较差。为了克服这些局限，全自动Western多抗原血清学检测试剂盒已上市！！全自动Western多抗原血清学检测试剂盒的特点：一份样品可检测5个抗原血清反应性指标：刺突蛋白（Spike Protein）、S1亚基、S2亚基、S1受体结合域（S1 RBD）、病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein）；提供5个抗原的分子量信息，且不影响灵敏度；通过相对峰面积定量抗原反应性，提供SARS-CoV-2病人的复杂免疫学反应信息；血清样品量可低至1μl；全自动Western，无人为操作误差；检测速度快，3小时出结果。检测原理：应用举例：一份样品提供多种抗原信息为了测试血清样品对这些抗原的反应性，对聚合酶链反应（PCR）确认为COVID-19阳性的4位患者的血清样品以及2份阴性样品进行全自动Western的血清学检测。结果显示，PCR阳性血清样品与试剂盒中包含的抗原具有高度反应性，PCR阴性血清样品没有反应性发生。其中PCR阳性3号样品中，可以显示出该血清样本对5个抗原（刺突蛋白（Spike Protein）、S1亚基、S2亚基、S1受体结合域（S1 RBD）、病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid Protein））均有反应性。一份样本提供多种体液免疫学表征当对相对峰面积进行定量时，结果显示了与患者血清样品中的5种抗原中的每一种的IgG反应性的高度可变性。例如，患者4的血清样本与核衣壳的反应性高（占总峰面积的68％）。而患者1、2、3的血清样本与核衣壳的反应性低得多（分别为7％，3％和34％），但与Spike蛋白反应性增加。这预示着患者4血清样本中显示其对早期感染的指标敏感，而患者1、2和3的血清样本中可能已产生与靶向刺突蛋白上的表位相结合的中和抗体。良好的稀释线性对PCR阳性血清样品从1：40到1：138240进行稀释系列，一式两份，并使用SARS-CoV-2多抗原血清学检测模块进行分析。结果显示，信号随着血清样品浓度的降低而降低（图A-C），并且该测定法显示出良好的线性，在3.5 log滴定系列中，五个抗原中的四个抗原的R2≥0.99，第五个抗原的R2≥98％（图D）。高重复性超过检测极限或≥1：69120的血清稀释液的CV小于15％，这表明该方法在重复测量中具有极好的可重复性。结论：随着SARS-CoV-2入侵机体的发展，可能会出现几种不同的抗原，这些抗原会导致体液免疫反应异常，而针对这些抗原的抗体的出现可能表明了疾病进展和病毒中和的不同阶段。因此，传统ELISA检测仅用一种抗原包被的蛋白只能捕获非常有限的免疫学反应信息。但借助适用于全自动Western（Jess/Wes）的SARS-CoV-2多抗原血清学检测试剂盒，可以同时分析COVID-19中常见的多达5种不同抗原在人血清或血浆样品中的IgG反应性。这使得能够对体液反应进行更深入的分析，并且揭示了血清反应性之间的差异，而这种差异是传统ELISA试剂盒无法获取的。参考文献：

侵袭性真菌感染高发于器官移植、血液系统肿瘤、艾滋病等人群，死亡率极高，其诊断和治疗已成为世界性难题。　　中国工程院院士、海军军医大学第二附属医院(上海长征医院)廖万清4日接受采访时直言：“在血清学检测技术方面，中国的生物科技企业已经掌握了关键技术，全国各大医院用的基本都是中国自主开发的产品，产品销售到全球各个国家。近年来，中国企业还开发了真菌血清学化学发光法检测等新平台；曲霉菌抗体等新靶标也逐步在临床应用，帮助慢性曲霉病以及曲霉过敏症精准诊断。”　　据全球抗真菌病行动基金会(GAFFI)统计，曲霉菌、隐球菌、念珠菌、肺孢子菌等常见真菌病原体每年导致1490万人感染，170万人死亡，已成为全球重大公共卫生的挑战之一。专家呼吁要加强真菌病的早期精准诊断，以提高临床救治率。　　廖万清院士介绍，精准的检测是遏制抗生素滥用的关键，可以为患者带来获益。快速、精准、低成本的临床诊断技术，对于启动早期精准治疗、遏制病原传播有着重要的意义。“以往真菌感染难以诊断。很多不明原因感染而病死的患者，经过尸检才确诊真菌感染。”廖万清院士指出，“随着真菌病诊断技术的进步，这一情况已大为改善，大部分患者入院第二天，甚至当天就用上了对症的抗真菌药。”　　如今，真菌病分子诊断技术速度快、精度高，是真菌诊断未来发展方向。今年三月，中国药监局批复了真菌多联检荧光PCR三类注册证。上海长征医院皮肤病科专门从事真菌病分子诊断研究的方文捷医生告诉记者：“这标志着中国临床真菌病诊断进入了‘分子时代’”。　　上海长征医院皮肤病科主任潘炜华教授认为，要积极开发真菌识别的AI模型。真菌菌种在显微镜下及培养基中有较为鲜明的特征，通过大量图形进行AI训练，可形成很好的识别模型，辅助基层医院医生进行诊断。据悉，他所在的上海长征医院皮肤科团队正在攻克这一方向的技术难题。　　记者当日了解到，廖万清院士、潘炜华教授团队从传统诊断技术、分子诊断技术以及AI技术在真菌诊断上的进展等方面，系统性阐述了国内外真菌感染诊断领域的重要研究成果。相关研究成果发表在国际生物医药领域权威期刊《生物医药科学杂志》上。在采访中，记者了解到，抗击真菌感染，需要临床学科协同防控。《侵袭性肺部真菌病诊断路径中国专家共识》在上海启动撰写。该共识由廖万清院士发起，邀请国内医学真菌学、血液科、感染科、重症医学科领域逾30位知名专家共同撰写，将以临床思维串联最新的检验技术进展，拟形成针对侵袭性肺真菌病临床诊断路径的中文和国际共识。廖万清表示，这一成果将有力地促进侵袭性肺部真菌病的规范化诊治。