水解蛋白

我的硕士研究课题是乳制品中非乳蛋白的检测，主要针对于研究植物水解蛋白和动物水解蛋白，想请教有谁做过皮革，羽毛等动物水解蛋白的蛋白质成分分析，这方面的文献很少，希望得到大家的帮忙！正在焦急中[em30] [em06] [em53]

我们用紫外做革皮水解蛋白，曲线很不好，不知道是哪里出错了？谢谢[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/04/202204072126007561_7839_4193820_3.png[/img]

浙江金华晨园乳业生产的牛奶中被查出使用皮革水解蛋白，以增加产品中蛋白质的含量。想问问这方面的高手，目前国内外有没有皮革水解蛋白的检测方法，可否给个标准号？谢谢了

有没有哪位兄台能告诉我下，水解蛋白中的铬离子（六价铬）检测方法有哪些，有没有现行存在或者是常规的检测办法呢？？[em09509][em09509][em09509][em09509]

有没有哪位兄台能告诉我下，水解蛋白中的铬离子（六价铬）检测方法有哪些，有没有现行存在或者是常规的检测办法呢？？[em09509][em09512]

乳制品中水解蛋白的测定有没有现成的分析方法，请各位同仁指点指点。

“三聚氰胺毒奶”的阴影尚未从消费者的心中散去，“皮革毒奶”又开始威胁消费者的生命安全。在三聚氰胺成为严打对象后，又有不法企业为提高乳制品中的蛋白质含量，在乳制品中混入皮革水解蛋白，制造出“皮革毒奶”。 皮革水解蛋白就是利用已经废弃的皮革制品或动物毛发，水解之后制成粉状，因其氨基酸或者说蛋白含量较高，故人们称之为“皮革水解蛋白粉”。 “皮革水解蛋白粉”中含有的有毒物质被人体吸收、积累，可导致中毒，使关节疏松肿大，甚至造成儿童死亡。 为此，中国农业部2月12日下发2011年度生鲜乳制品质量安全监测计划，其中除要检测三聚氰胺外，还要检测“皮革水解蛋白”和碱类物质。据称，皮革水解蛋白的检测难度比三聚氰胺更大，因为它本来就是一种蛋白质。当前，国内多数参考1978年版《ISO：3496-1978肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定》使用分光光度法测定乳品。主要检测方法是检查牛奶中是否含有羟脯氨酸，这是动物胶原蛋白中的特有成分，在乳酪蛋白中则没有，所以一旦验出，则可认为含有皮革水解蛋白。 已经在消费者心中树立起“食品安全卫士”形象的岛津公司，长期关注中国的乳制品安全问题，为中国用户提供了一系列的乳制品检测解决方案。其中，岛津上海分析中心结合岛津独特的氨基酸分析系统和欧洲药典收录的氨基酸分析方法，率先开发出柱后衍生液相色谱分析乳制品中L(-) - 羟脯氨酸的检测方法。 该方法使用岛津氨基酸柱后衍生系统锂型分析柱建立了牛奶制品中24种氨基酸的高效液相色谱柱后衍生分析方法，柱后衍生及样品测定为全自动完成，消除了柱前衍生不同操作人员引入的人为误差，大大简化了样品前处理步骤，节约了时间，是一种可靠快速的检测方法。本方法可以直接用于检测牛奶中24种氨基酸。

往往食品安全事件爆发就会有相应的试剂盒出售，此次皮革奶事件爆发水解蛋白检测应该也会有试剂盒吧？哪位大侠能说说其原理和操作方法？请勿发布广告，谢谢

请问哪位前辈有下表中的乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。这个文本啊！附件1食品中可能违法添加的乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。非食用物质名单（第二批） 序号名称主要成分可能添加的主要食品类别可能的主要作用检测方法1皮革水解物皮革水解蛋白乳与乳制品含乳饮料增加蛋白质含量乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。联系方式： Wkzhong@21cn.com）2溴酸钾溴酸钾小麦粉增筋GB/T 20188-2006 小麦粉中溴酸盐的测定 离子色谱法3β－内酰胺酶（金玉兰酶制剂）β－内酰胺酶乳与乳制品掩蔽抗生素液相色谱法（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。联系方式： Wkzhong@21cn.com）4富马酸二甲酯富马酸二甲酯糕点防腐防虫气相色谱法（检测方法由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所提供）

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法1 主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2 引用标准GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。 4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3 氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。5.1 实验室常规设备。5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3 恒温水浴。5.4 试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5 分光光度计。 6 试样处理：6.1 方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2 方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋白质含量而定）或加入12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚（3.3）3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解24h后（如加入12mol/L盐酸，水解时间可缩短至6h）后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。 7 分析步骤7.1 测定7.1标准曲线的绘制吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。7.2 试样测定从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。8 分析结果的计算C•V1•AX= ───————×100m×1000式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,％;C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg;m——称取试样的质量,g;V1——样液体积,mL。A——稀释倍数当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01％。9 允许差同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。10 判定方法因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分，其含量占10%以上；而乳蛋白中不含有此成分，如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸，可判定添加了动物水解蛋白。

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法1 主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2 引用标准GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。 4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3 氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。5.1 实验室常规设备。5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3 恒温水浴。5.4 试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5 分光光度计。6 试样处理：6.1 方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2 方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋白质含量而定）或加入12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚（3.3）3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解24h后（如加入12mol/L盐酸，水解时间可缩短至6h）后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。7 分析步骤7.1 测定7.1标准曲线的绘制吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。7.2 试样测定从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。8 分析结果的计算C•V1•AX= ───————×100m×1000式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,％;C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg;m——称取试样的质量,g;V1——样液体积,mL。A——稀释倍数当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01％。9 允许差同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。10 判定方法因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分，其含量占10%以上；而乳蛋白中不含有此成分，如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸，可判定添加了动物水解蛋白。

[align=center][b][font=宋体][/font][/b][/align][align=center]换个角度再聊聊掺假实验之动物水解蛋白检验过程的注意事项[/align][align=center][/align][font=宋体]概述[/font][font=宋体]一说到蛋白质，大家总是想到三聚氰胺这个永远的痛点。那什么是[/font][font=宋体]动物水解蛋白[/font][font=宋体]呢？[/font][font=宋体]水解蛋白是一种被处理过的蛋白质，[/font][font=宋体]其目的[/font][font=宋体]是为了增加膳食补充剂的吸收率以及促进肌肉生长而被广泛使用。然而，水解蛋白的摄入对身体会产生一定的不良影响。它可能引起肠胃不适，长时间过量的摄入水解蛋白会导致肝脏和肾脏的负担加重，产生肝肾疾病的风险。此外，水解蛋白含有谷氨酸和天冬氨酸等氨基酸，如果过度摄入，会使脑内谷氨酸的含量过高，产生神经性问题。[/font][font=宋体]需要注意的是，水解蛋白虽然有一定的营养价值，但对于大部分人来说，摄入水解蛋白的必要性并不大，完全可以通过摄入其他蛋白质而满足身体所需。如果需要补充蛋白质，可以选择天然蛋白质来源，比如肉类、鱼类、豆类等食物。此外，如果您已经在使用水解蛋白补充剂，[/font][font=宋体]个人认为十分有必要。[/font][font=宋体]用硝酸汞沉淀方法除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，并与饱和的苦味酸溶液会产生沉淀反应。[/font]这个方法我们再前期和大家讨论过了。今天在说说[font=Arial, Verdana, 微软雅黑, 宋体][size=16px][color=#323232]L-羟脯氨酸的方法.[/color][/size][/font][font=宋体][/font][b]1.测定原理[/b]试样经酸水解后，过滤，用稀盐酸溶解，注入氨基酸分析仪进行测定。采用外标法定量。[b]2 试剂与材料[/b]2.1除非另有规定，应选用优级纯试剂和符合GB/T 6682规定的一级水。2.2 盐酸7.8mol/L，将650mL优级纯的浓盐酸小心倒入350mL超纯水中，混匀。2.3 配制茚三酮显色液，方法如表1所示。2.4 配制苯酚水溶液（5.0%，w/v）：称取苯酚5.0g，溶于100mL水中。2.5 配制盐酸溶液（0.1 mol/L）：量取盐酸（7.8mol/L）16.6mL，倒入1000mL水中。2.6 L-羟脯氨酸标准品，纯度≥99%。2.7 配制L-羟脯氨酸标准储备液：称取100mg（精确到0.1mg）羟脯氨酸标准品，用盐酸溶液（0.1mol/L）溶解并定容至100mL容量瓶中。该溶液的浓度为1000mg/L，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。2.8 准备苯酚溶液。2.9 L-羟脯氨酸标准工作液：准确吸取L-羟脯氨酸标准储备液1.00mL于100mL的容量瓶内，用盐酸溶液（0.1mol/L）定容。该溶液的浓度为10.00mg/L，于4℃冰箱内贮存，有效期1周。[b]3 仪器与设备[/b]L-8900氨基酸自动分析仪、电热恒温干燥箱、配有聚四氟乙烯密封盖的水解管、电子天平（精确到0.0001g）、定量滤纸、0.45μm水性样品过滤器（直径13mm）、氮吹仪。[b]4 分析步骤4.1 样品处理[/b]称取1～2g（精确至0.001g）牛奶样品于水解管中，加8.00mL盐酸，滴入3滴苯酚溶液，用一级水补足10.00mL，充氮后封管，置于110℃烘箱中保持22～24h，冷却后经滤纸过滤。取0.400mL滤液于氮吹仪上吹干，残留物用2.00mL盐酸溶液（0.1mol/L）溶解，过0.45μm滤器，备用。同时做空白对照。[b]4.2 样品测定[/b]4.2.1 氨基酸分析仪条件①分离柱：6 0 m m×4.6 m m（i.d）不锈钢柱，交换树脂为氨基酸分析专用树脂；②柱温：反应柱57℃、分离柱135℃；③泵流速：泵10.400mL/min、泵20.350mL/min；④进样体积：20μL；⑤检测波长：440nm；⑥茚三酮显色液：可按表1配制，也可根据仪器自身要求配制；⑦流动相缓冲液：可按照表2配制，也可根据仪器自身要求配制。4.2.2 定量测定按照外标法进行定量计算。[b]5 结果计算和表述[/b]试样中L-羟脯氨酸的含量X，以质量分数mg/kg表示，单点校正按下式计算：式中：V1— 加入稀盐酸溶液定容的体积，mL；V2— 水解液的定容体积，mL；V3—水解样液的取样量，mL；AS—L—羟脯氨酸标准溶液对应的色谱峰面积响应值；A — 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；CS— L—羟脯氨酸标准溶液的浓度，Hg/mL；m — 试样质量，g。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。[b]6 重复性[/b]在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的2个平行测定的相对偏差不大于10%。

用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

目前，想要用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]分析牛奶中皮革水解蛋白。但试过加乙腈沉淀，不行。不知可否用SPE柱解决问题。敢请哪位高手解疑。

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法1主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2 引用标准GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。 4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3 氢氧化钠(GB629) 1mol/L、10mol/L溶液。4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。 5.1 实验室常规设备。5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3 恒温水浴。5.4 试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5 分光光度计。6 试样处理：6.1 方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2 方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋白质含量而定）或加入12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚（3.3）3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解24h后（如加入12mol/L盐酸，水解时间可缩短至6h）后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。7 分析步骤7.1 测定7.1标准曲线的绘制吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。7.2 试样测定从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。8 分析结果的计算 C• V1• AX= ───————×100 m×1000式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,％ C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg m——称取试样的质量,g V1——样液体积,mL。A——稀释倍数当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01％。9 允许差同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。10 判定方法因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分，其含量占10%以上；而乳蛋白中不含有此成分，如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸，可判定添加了动物水解蛋白。(资料来源：网络下载)

原理 用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

请教一下各位：用氨基酸分析仪能检测皮革水解蛋白吗？

生乳中皮革水解蛋白的封管技巧与注意事项

谁有乳制品中动物水解蛋白的检测方法？急急急

检测皮革水解蛋白的方法有哪些？目前找不到一个国家标准或行业标准，大家知道吗？楼下是我收集到的文献，检测时有哪些问题？有奖讨论，只要参与，有积分奖励。

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法

如今要开展项目，找以下标准，是卫生部指定的[color=#f10b00][size=3][font=FangSong_GB2312]乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定-L(-)-羟脯氨酸含量测定[/font][/size]（[color=#000000]食品中可能违法添加的非食用物质名单（第二批）中规定由检测方法由[color=#f10b00]中国检验检疫科学院食品安全[/color]所提供[/color]）[/color]

[em09507][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=189941]序号65-乳制品中水解蛋白.doc[/url]我们研究出来的快检方法没有派上用处。

昧着良心，太可恶了！浙江晨园乳业牛奶中又被检出一种名为“皮革水解蛋白粉”的物质，这种物质为可疑致癌物，达人介绍一下“皮革水解蛋白粉”。

在前处理中，内脏组织大多杂质很多，需要沉淀蛋白质，沉淀后离心，提上清夜再萃取，但内源性物质中的待检物同时也会和蛋白质成结合状态，需要水解，再萃取。所以请问如果我先沉淀了蛋白，那么会不会把成结合状态的待检物一同沉淀，损失待检物。在运用中如何处理蛋白质杂质和蛋白质结合物的前处理问题？

如题做过调味品中三氯丙醇的检测的朋友来说一下你所用方法吧。先说说我自己做三年了一直沿用GB/T5009.191-2006的方法自己买硅藻土填料装柱子，正己烷-乙醚（9:1）净化，乙醚洗脱浓缩后衍生化。处理起来繁琐耗时且成本高有机溶剂用量大对身体也不好。最近打算用商品柱，但试了几种柱子后发现以下几个问题。首先做水解蛋白粉称样溶解有问题，方法要求用氯化钠溶液溶解，但调味粉中本身含盐量很高，导致其不溶于氯化钠溶液，上柱后会堵住商品柱不能进行后续处理。其次参考一些地方质检所检测方法，减少正己烷-乙醚用量会导致结果偏差很大，含量为20ug/kg的样品处理后检测结果能达到200ug/kg，定量离子253有杂质干扰，即使改用其他离子也有干扰。再有就是有的文献采用乙酸乙酯洗脱，我也尝试了干扰更大。发现只有加大正己烷-乙醚用量才能净化完全。最后提一下空白试验问题，天冷空白值低，天一热就高了。结果从2-15ppb不等。我们产品要求在20ppb以下，这空白值太高且找不到原因很揪心！有没有朋友遇到这样的问题啊？是不是调味粉比较复杂，商品柱开发时没有考虑这些情况在内啊？希望有经验的朋友提出自己的宝贵意见。

用分光光度法测定水解动物蛋白咋不显色，有沉淀？

有些公司使用蛋白粉－水解动物蛋白－生产乳饮料，如何在产品的检测中检验产品是否含水解动物蛋白？是不是很难检出？若有方法检出，成本是不是很高？谢谢：）

如题，想让水解乳清蛋白变性后得到澄清的溶液，但是试了很多方法都不行，比如加入酸、碱、加热都不变性，过滤（0.22um滤膜）也无法得到澄清液体。请教各位大侠，还有什么办法可以使其凝结成絮状物沉淀过滤出来啊？

水解动物蛋白（HAP）是一种优质蛋白源，蛋白质含量高达90%以上。它是明胶、干酪素、鱼粉等原料的酸、碱、酶水解产物，主要成分为低分子多肽。它所含的18种氨基酸中，有7种是人体必需的；还含有人体必需的多种微量元素。它是良好的天然生理活性物质，水溶性好，营养价值高，不含胆固醇，极易被人体消化吸收。　　用于乳品工业中替代乳蛋白　　HAP应用于乳品工业中，是一种很好的乳蛋白质替代物。HAP分子量较低，蛋白质含量高，婴幼儿容易吸收利用，可以利用它开发出低乳蛋白的婴幼儿乳粉（参考用量5%-8%）。HAP用于果奶饮料，像椰奶、花生杏仁露和各种乳酸饮品中（参考用量为0.2%-1.0%）。其乳化能力强，且可保持果汁等原有营养风味不变，稳定性好，不易沉淀。　　用于调整食品的结构和口感　　在火腿肠、香肠等肉制品中添加HAP（用量为0.5%-2%），能提高制品营养价值，并且可调整食品结构，使产品细腻，增强食品风味，使之易包装成型，延长保质期。用在汉堡包、烧卖等食品中（使用量为0.2%-1.0%），增强产品营养，而且有使口感醇厚、细腻的效果，有效改善产品风味。　　用于生产高级调味品　　日本等发达国家很重视新型高级调味品的开发，而使用天然风味调味品能更好地体现食品的自然风味。由HAP、核苷酸增鲜剂及酵母提取物等复合制成的天然调味料，将成为调味食品工业的主要支柱。近二十年来，在发达国家，高档调味品和汤料均使用了HAP，从而使其呈现出强烈的肉汁风味，增加了鲜度。添加HAP的天然氨基酸型调味料如酱料、鸡精，广泛用于各种加工食品和烹调。如与化学调味剂并用，则可形成各种独特风味。它可作为味精的填充底料，用量为10%-70%。