糖精钠含量

如题，想请教一下各位老师，测定白酒中的糖精钠，使用的方法是GB5009.28-2016，配置的标液浓度是1ug/mL，5ug/mL，10ug/mL，20ug/mL，50ug/mL，100ug/mL，但是现在测定的样品的结果是，能找到峰，并且显示找到糖精钠的峰，但是不显示含量，我初步判定应该是样品中的糖精钠含量太低导致现在的结果，并且应该是低于了该方法的检出限，我出报告的图谱可以直接按下图吗？[img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221402329335_5664_3194371_3.jpg!w690x517.jpg[/img]另，下面是我该方法使用的标准曲线，以及标准曲线方程以及样品处理的结果，各位能否帮我分析一下样品目标峰没有显示含量的原因？感谢。[img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221405427165_9035_3194371_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221405538506_4759_3194371_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/03/201803221406079510_9908_3194371_3.jpg!w690x517.jpg[/img]

[align=center][/align][align=left][font='calibri'][size=13px]CNS[/size][/font][font='calibri'][size=13px]-[/size][/font][font='calibri'][size=13px]19.001糖精钠[/size][/font][/align][align=left][font='宋体'][size=18px]李一辰[/size][/font][/align][align=left][/align][align=center][font='宋体'][size=18px]二〇[/size][/font][font='宋体'][size=18px]二一[/size][/font][font='宋体'][size=18px]年[/size][/font][font='宋体'][size=18px]七[/size][/font][font='宋体'][size=18px]月[/size][/font][font='宋体'][size=18px]二十二[/size][/font][font='宋体'][size=18px]日[/size][/font][/align]1、 [size=18px]概述及理化性质[/size]糖精钠（Saccharin Sodium），学名邻苯甲酰磺酰亚胺钠，化学式C[font='calibri'][size=13px]7[/size][/font]H[font='calibri'][size=13px]4[/size][/font]NO[font='calibri'][size=13px]3[/size][/font]SNa，结构式见右图。糖精钠是糖精的钠盐，又被称可溶性糖精，颜色呈无色或略带白色，无臭或有微弱香气，呈结晶性粉末，干燥样品熔点为226℃-230℃，易溶于水，略溶于乙醇，水溶液呈微碱性，其在水溶液中的热稳定性优于糖精。因其甜度较高，约为蔗糖的400倍，故而应用较为广泛。糖精钠于1879年开发，是最早应用的人工合成非营养型甜味剂。1879年，约翰霍普金斯大学的研究生康斯坦丁法尔伯格正在进行甲苯系列衍生物合成的研究，他在午餐的时候偶然间发现手中的面包特别的甜，于是对实验过程中合成的一系列甲苯化合物进行了分析研究，最后发现了糖精。1886年，康斯坦丁 法尔伯格迁居到德国，进入一家从煤焦油中提炼糖精的工厂进行工作研究和产品推广，此后糖精作为人工甜味剂被人们广泛使用，自此正式进入人类的生活之中。[font='calibri'][size=13px][1][/size][/font]在甜度方面，糖精钠分解出来的阴离子有强甜味，而在分子状态下没有甜味，反感到苦味，故糖精钠的稀溶液显强甜味，浓度高时显苦味。在酸性条件下，加热会使糖精钠分解成带有苦味的[font='arial'][size=13px][color=#333333]邻氨基磺酰苯甲酸[/color][/size][/font]，使溶液甜味消失；在弱碱性条件下，加热会使糖精钠分解为邻磺酰胺苯甲酸，但溶液甜味不变。2、 [size=18px]糖精钠的应用[/size]1. [size=16px]代糖[/size]糖精钠[font='arial'][size=13px][color=#333333]是最早应用的人工合成非营养型甜味剂[/color][/size][/font][font='arial'][size=13px][color=#333333]，[/color][/size][/font][font='arial'][size=13px][color=#333333]只提供甜味，不提供热量，只要使用很少的量即可获得目标的甜味，被广泛使用于食品及医药生产中。糖精钠的成本在合成甜味剂中相对很低，某些非法商家可能会在生产时超量投入，以代替天然甜味剂，以牟取更大的利润。这种行为侵犯了消费者的合法权益，是不可取的。[/color][/size][/font]2. [size=16px]电镀光亮剂[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027054694_9905_1608728_3.png[/img]随着国民经济的发展和人民生活水平的提高，要求电镀镀层兼具功能性和装饰性，向镀液中加入一定成分的光亮剂，能有效提高镀层的光泽度，改善镀层的装饰效果。糖精钠作为最常用的电镀镍基合金镀层的初级光亮剂，不仅能提高镀层的平整性和光泽度，还能提高镀层的耐蚀性。这是因为糖精钠的加入降低了镀层沉积过程中形成的内应力，使镀层表面裂纹减少；同时，随着糖精钠的质量浓度的增加，阴极极化作用增强，阴极过电位提高。阴极过电位越高，形核率越大，电结晶越细密。分析糖精钠的质量浓度对阴极极化曲线的影响（如右图），可知：向镀液中加入糖精钠，阴极极化曲线负移，并且随着糖精钠的质量浓度的增加，阴极极化曲线负移的程度增大，阴极极化作用增强，沉积过电位提高。沉积过程中，糖精钠微粒吸附在阴极表面，阻碍金属离子还原沉积。同时，部分糖精钠还能与金属离子发生配位反应，使金属离子的放电变得困难，阴极极化作用增强，有利于形成致密、光亮的镀层。分析糖精钠的质量浓度对镍基镀层的沉积速率及阴极电流效率的影响（如下右图）。可知：随着糖精钠的质量浓度的增加，镀层的沉积速率和阴极电流效率均降低。一方面，糖精钠微粒选择性地吸附在阴极表面，减小了反应的有效表面积，起到封闭作[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027056568_157_1608728_3.png[/img]用，抑制金属离子在阴极的还原沉积；另一方面，增加糖精钠的质量浓度，使阴极极化增强，析氢副反应加剧，析氢消耗的电能增大。[font='calibri'][size=13px][2][/size][/font]3. [size=16px]其他[/size]因为糖精钠热量为0，不易被细胞吸收，但可以随大小便排出体外，所以也被用作血液循环测定剂等用途。3、 [size=18px]糖精钠的限量标准[/size]糖精钠作为人工合成甜味剂，对于人体的影响无法忽视，并认为由于会改变尿液理化性质，可能存在致癌风险。所以各国对糖精钠的使用进行了限量。根据GB1886.18-2015，我国对糖精钠的使用进行了如下限制。[font='calibri'][size=13px][3][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027057164_3811_1608728_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027058052_2948_1608728_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=left][/align][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027059384_1653_1608728_3.png[/img]使用五种人工甜味剂（糖精钠、三氯蔗糖、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜）处理Caco-2细胞 24 h后，测定细胞的增殖活力削减程度，结果如下图。由图可知，五种甜味剂的细胞抑制率均表现出剂量正相关性，且糖精钠对Caco-2细胞的活力影响更大，说明糖精钠的使用确实会对肠胃造成一定的影响，对糖精钠使用的限量具有其必要性。[font='calibri'][size=13px][4][/size][/font]4、 [size=18px]糖精钠的检测方法[/size]1. [size=16px]液相色谱-质谱连用法[/size]根据国标GB5009.28-2016，可以使用液相色谱法，通过外标法对糖精钠的含量进行分析，分析步骤如下：1）标准溶液配制糖精钠(以糖精计)标准储备溶液(1000mg/L):准确称取糖精钠0.117g(精确到0.0001g),用水溶解并定容至100mL。于4℃贮存,保存期为6个月。苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)标准中间溶液(200mg/L):准确吸取糖精钠标准储备溶液10.0mL于50mL容量瓶中,用水定容。于4℃贮存,保存期为3个月。糖精钠(以糖精计)标准系列工作溶液:准确吸取糖精钠标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度分别为 0 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、 50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的标准系列工作溶液。临用现配。2） 材料：水相微孔滤膜:0.22μm； 塑料离心管:50mL。3） 仪器和设备：高效液相色谱仪:配紫外检测器 ；分析天平:感量为0.001g和 0.0001g； 涡旋振荡器 ；离心机:转速8000r/min ；匀浆机 ；恒温水浴锅 ；超声波发生器。[align=left][font='fzhtk--gbk1-0'][size=12px][color=#000000]试样制备[/color][/size][/font][/align]4） 试样制备取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合 非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆 固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀 奶酪、黄油、巧克力等采用50 ℃~60 ℃加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中,密封,液体试样于4 ℃保存,其他试样于-18 ℃保存。5）试样提取[font='宋体']①[/font]一般性试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中,加水约25mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20min,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于8000r/min离心 5min,将水相转移至50mL容量瓶中,于残渣中加水20mL,涡旋混匀后超声5min,于8000r/min离 心5min,将水相转移到同一50mL容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过0.22μm 滤膜,待液相色谱测定。[font='宋体']②[/font]含胶基的果冻、糖果等试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中,加水约25mL,涡旋混匀,于70℃水浴加热溶解试样,于50 ℃水浴超声20min,之后的操作同[font='宋体']①[/font]。[font='宋体']③油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样[/font][font='宋体']准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中,加正己烷10mL,于60℃水浴加热约5min,并不时轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液(1+99)25mL,乙醇1mL,涡旋混匀,于50 ℃水浴 超声20min,冷却至室温后,加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于8000r/min离心 5min,弃去有机相,水相转移至50mL容量瓶中,残渣同①再提取一次后测定。[/font]6）[font='宋体']仪器参考条件[/font][font='宋体']①色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效色谱柱。 [/font][font='宋体']②流动相:甲醇+乙酸铵溶液=5+95。[/font][font='宋体']③流速:1mL/min。[/font][font='宋体']④检测波长:230nm。[/font][font='宋体']⑤进样量:10μL。[/font][font='宋体']注:当存在干扰峰或需要辅助定性时,可以采用加入甲酸的流动相来测定,如流动相:甲醇+甲酸-乙酸铵溶液= 8+92。[/font]7） 标准曲线的制作将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准系列工作溶液的 质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。8）试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱仪中,得到峰面积,根据标准曲线得到待测液中糖精钠(以糖精计)的质量浓度。9）分析结果的表述试样中苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)的含量按式（1）计算:[align=left][size=13px]…………………………………………（1）[/size][/align]式中:X ———试样中待测组分含量,单位为克每千克(g/kg) ρ ———由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L) V ———试样定容体积,单位为毫升(mL) m ———试样质量,单位为克(g) 1000———由 mg/kg转换为g/kg的换算因子。结果保留3位有效数字。10） [color=#000000]精密度[/color][color=#000000]在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。[/color]11） [color=#000000]其他[/color][color=#000000]按取样量2g,定容50mL时,糖精钠(以糖精计)的检出限为0.005g/kg,[/color][color=#000000] [/color][color=#000000]定量限为0.01g/kg[/color][color=#000000].[/color][font='calibri'][size=13px][5][/size][/font]2. [size=16px]滴定法[/size]根据国标GB1886.18-2015，可以用滴定法测定样品中糖精钠的含量。1） 试剂和材料冰乙酸；乙酸酐；结晶紫指示液 5g/L 高氯酸标准滴定溶液：c(HClO[font='calibri'][size=13px]4[/size][/font])=0.1mol/L。2） 分析步骤称取约0.3g干燥后的试样，精确至0.0002g，加入20mL冰乙酸和5mL乙酸酐，溶解后，加2滴结晶紫指示液，用高氯酸标准滴定液滴定至溶液呈蓝绿色。3） 结果计算糖精钠含量的质量分数[font='宋体']ω[/font][font='calibri'][size=13px]1[/size][/font][font='calibri']，按式（2）计算：[/font][align=left]………………………………（2）[/align][font='cambria math']式中：[/font][font='cambria math']V——消耗的高氯酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；[/font][font='cambria math']M——1mL 0.1mol/L高氯酸标准滴定溶液相当于0.02052g的糖精钠（C[/font][font='cambria math'][size=13px]7[/size][/font][font='cambria math']H[/font][font='cambria math'][size=13px]4[/size][/font][font='cambria math']NNaO[/font][font='cambria math'][size=13px]3[/size][/font][font='cambria math']S) [/font][font='cambria math']m——试样的质量，单位为克（g）。[/font][font='cambria math']取两次平行测定结果的算数平均值为测定结果，平行测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的0.2%。[/font]3. [font='cambria math'][size=16px]其他定性检测方法[/size][/font][font='cambria math']根据国标GB1886.18-2015，还有以下定性检测样品中是否含有糖精钠的方法：[/font]1) [font='cambria math']溶液变色反应[/font][font='cambria math']取约20mg试样，加约40mg间苯二酚，混合后加硫酸10滴，用微火加热，至显深绿色，放冷，加10mL水与10mL的氢氧化钠溶液，即成绿色有荧光的溶液。[/font]2) [font='cambria math']焰色反应[/font][font='cambria math']取铂丝，用盐酸溶液湿润后，蘸取试样，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。[/font]3) [font='cambria math']苯甲酸盐和水杨酸盐试验[/font][font='cambria math']称取0.5g试样，溶于10mL水，加5滴乙酸，再加3滴氯化铁试液，若无沉淀或紫色出现，则试样中不含糖精钠。[/font][font='calibri'][size=13px][6][/size][/font]5、 [size=18px]糖精钠的工业合成[/size]糖精钠生产工艺有多种，按生产采用的主要原料划分可分为甲苯法、苯酐法、邻甲基苯胺法和苯酐二硫化物法，其中甲苯法和苯酐法更常在实际生产中使用，故不详述另两种方法。[size=16px]1.甲苯法[/size]甲苯法是糖精发明者 Fakllerg 最早采用的方法，后人进行了多次改进，成为生产糖精钠较简便的方法，也是我国较早生产糖精钠的方法。其主要生产原料有无水甲苯、氯磺酸、氨水、活性炭、液体氢氧化钠、盐酸、高锰酸钾、亚硫酸钠和碳酸氢钠等，包括氯磺化、胺化、氧化、酸析、中和等化学反应。此法的一种生产方法列举如下：将无水甲苯逐渐加入装有氯磺酸的氯磺化锅中，低温反应，加完后反应 3 h，反应完毕，冷却，使氯磺酸完全分解，放出酸液，然后将所得的磺酰氯油状物进行水洗，于-15～-20℃冷冻12 h，滤出对位异构体结晶，液体即为邻甲苯磺酰氯。在氨化锅内预先放入氨水，加入邻甲苯磺酰氯，在 60℃反应 2 h，冷却，过滤，滤饼经活性炭脱色，在精制锅中分别用盐酸和氢氧化钠溶液精制，得邻甲苯磺酰胺。将邻甲苯磺酰胺、水和液体氢氧化钠加入氧化锅内，于25～35℃将高锰酸钾分次投入，加毕，保温反应 7 h，降温至 25℃，慢慢加入亚硫酸钠溶液至氧化溶液呈无色为止，过滤，含二氧化锰滤饼水洗至无甜味时，合并滤液，加稀盐酸至 pH 为 3，析出未氧化物，过滤，滤液中加入浓盐酸至完全析出沉淀，过滤，滤饼用微酸水洗涤，最后得不溶性糖精。在盛有水的中和锅内交替投入不溶性糖精和碳酸氢钠，加热溶解反应，在反应温度达 70℃时调节反应液至中性，趁热过滤，滤液经结晶、干燥即得糖精钠成品。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027060753_1124_1608728_3.png[/img]该法的生产流程如下图：该法的主要特点是原料来源广泛、工艺成熟、反应简单、生产技术易于掌握。有采用铬酸氧化邻甲苯磺酰胺的，也有采用电解法将邻甲苯磺酰胺进行电解的，从而达到节约原料、减少污染、降低劳动强度的目的，但总体来讲污染性产物较多且不易治理，且产率相对较低，总收率通常不足40%。[size=16px]2.苯酐法[/size]苯酐法为我国独创，所用原料有苯酐、甲醇、氨水、液体氢氧化钠、液氯、盐酸、硫酸、亚硝酸钠、硫酸铜、液体二氧化硫、甲苯、碳酸氢钠、活性炭等，包括酰胺化、霍夫曼降级、酯化、重氮、置换、氯化、胺化、酸析、中和等化学反应。此法的一种生产方法列举如下：将苯酐和冷冻的氨水依次加入酰胺化反应锅内，升温后缓慢加入氢氧化钠溶液，调 pH=11～12，保温 0.5 h 反应，再排氨3.5 h，得邻甲酰胺苯甲酸钠溶液（简称酰胺化液）。在酯化锅内将酰胺化液降温后，加入冷冻的甲醇和次氯酸钠溶液，在 0℃下反应 45 min 后升温至 30℃，以淀粉碘化钾溶液测试呈无色反应，然后加入适量的亚硫酸氢钠溶液，料液转稀后，再加入热水溶解，静置后分离、过滤，分取油层得邻氨基苯甲酸甲酯（简称甲酯）。先将由水、硫酸与盐酸配制好的混酸置于重氮锅内，冷却后开始缓加甲酯和亚硝酸钠溶液的混合液，重氮温度保持在 25℃以下，反应终点时淀粉碘化钾溶液显淡紫色，产物为邻硫酸（盐酸）重氮苯甲酸甲酯溶液（简称重氮液）。在置换锅内将重氮液降温至 10℃，加入硫酸铜，通二氧化硫进行置换，析出邻亚磺酸苯甲酸甲酯，约 1 h 后用 H 酸测试反应终点应褪色。然后加入甲苯，通氯气氯化，以 2% 联苯胺乙醇溶液测试显深墨绿色为终点，静置分层，有机层为邻甲酸甲酯苯磺酰氯甲苯溶液（简称磺酰氯）。依次将磺酰氯和水加入胺化锅，在 10℃时加氨水胺化，温度可达70℃，pH 值9以上，静置后取下层铵盐液为邻甲酰苯磺酰亚胺铵溶液（简称胺化液）。将胺化液放入酸碱化锅内，加入甲苯和30%的盐酸到 pH 值为 1，酸析后降温至20℃，取甲苯层水洗去氯化铵得不溶性糖精甲苯溶液。将此溶液加热，加入碳酸氢钠中和，调 pH 值至 3.8～4，静置后取水层，加活性炭脱色、过滤，调滤液pH值至7，在70～75℃减压浓缩，趁热过滤，滤液经结晶、干燥得糖精钠。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262027061659_4297_1608728_3.png[/img]该法的生产流程如下图：该法的主要特点是产品收率高、产品质量稳定且有保证、污染能治理、生产周期比甲苯法短等。生产过程中还可以根据市场需要随时调整生产工艺，采用不用甲苯进行氯化反应或酸析反应，可以得到固体邻甲酸甲酯苯磺酰氯或不溶性糖精，两者都可以用作农药中间体。[size=16px]3.邻甲基苯胺法及苯酐二硫化物法[/size]邻甲基苯胺法采用邻甲基苯胺先在酸性条件下与亚硝酸钠发生重氮反应，然后通二氧化硫进行置换，用液氯进行氯化，从而得到邻甲苯磺酰氯，然后与甲苯法相同，经过胺化、氧化、酸析和中和反应，得到糖精钠。苯酐二硫化物法中苯酐先与氨水和氢氧化钠进行酰胺化反应，之后在碱性条件下与次氯酸钠进行霍夫曼降级反应制得邻氨基苯甲酸，邻氨基苯甲酸与亚硝酸钠在酸性条件下进行重氮反应，接着与二硫化钠进行置换反应得到邻二硫二苯甲酸，邻二硫二苯甲酸与甲醇酯化反应后再被液氯氯化，其后与苯酐法相同，进行胺化、酸析和中和反应，生成糖精钠。上述邻甲基苯胺法受到原料邻甲基苯胺来源限制，原料成本较高，因而不适合于工业化生产。苯酐二硫化物法由于邻二硫二苯甲酸结构上的空间障碍，与甲醇酯化需在高压釜中进行，反应条件较苛刻，对反应设备要求太高，也不适合于工业化生产。[font='calibri'][size=13px][7][/size][/font]6、 [size=18px]参考文献[/size][1] 朱利杰.人工甜味剂糖精钠生产废水处理实验研究.天津工业大学.2020.01[2] 孟庆波,齐海东,卢帅,郭昭,杨海丽.糖精钠对脉冲电沉积Ni-Sn-Mn合金镀层性能的影响[A].电镀与环保,2019，39(1)，40-44[3] GB1886.18-2015[4] 张丽颖.山梨酸钾和糖精钠联合对小鼠小肠细胞生长发育的影响.2020.01[5] GB5009.28-2016[6] GB1886.18-2015[7] 李美菊，蒲帅天，张万青，苏鸿钧.糖精钠生产工艺评述.广东化工,2007,34(1),70-72

摘要糖精钠是有机化工合成产品，是食品添加剂。是一种甜味剂。除了在味觉上引起甜的感觉外，对人体无任何营养价值。相反，当食用较多的糖精时，会影响肠胃消化酶的正常分泌，使食欲减退。因此，糖精钠的含量的控制很有必要。为此南京科捷应用LC-600液相色谱仪器对糖精钠的分析方法进行了研究，可同时应用高效液相色谱法对橙汁、碳酸饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量进行检测，检测快速，结果准确可靠。关键词：食品添加剂 饲料添加剂饮料 糖精钠中山梨酸 苯甲酸 橙汁 甜味剂 液相色谱法1.苯甲酸、山梨酸、糖精钠（0.04mg/mL）高效液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105311535_297105_2242538_3.jpg2.本方法的应用范围　　1） 食品：冷饮、饮料、果冻、凉果、蛋白糖等　　2） 饲料添加剂：猪饲料、香甜剂等　 3） 日化行业：牙膏、嗖口水、眼药水等　　4） 电镀行业：电镀光亮剂3.仪器配置检测项目苯甲酸、山梨酸、糖精钠本项目实验单位南京科捷分析仪器应用研究所实验仪器型号及配置LC-600液相色谱仪P600宝石恒流泵 1台UV600紫外检测器 1台7725i六通进样阀 1只WS600色谱工作站 1套[

高效液相色谱法测定白酒中糖精钠的方法探讨摘要 本文主要参照GB5009.28-2016标准从三个方面：改变流动相配比、改变色谱柱、改变液相色谱的检测器，运用高效液相色谱法将白酒特别是酱香型白酒中存在的干扰糖精钠检测的物质：糠醇、糠醛得以分离，以达到对白酒中糖精钠准确测定的目的。关键词 白酒；参照GB 5009.28-2016标准；糖精钠；糠醇；糠醛[b]1 前言[/b]白酒是深受人们喜爱的一种饮料，近年来有一些不法商家为了改善白酒的口感，会人为的添加糖精钠等非法甜味剂，糖精钠在GB2760-2014[sup][/sup]中明确规定为不得使用。因此，国抽、省抽等监督指令性任务中有要求检测白酒中是否有违规添加糖精钠的项目。糖精钠的检测依据为GB5009.28-2016[sup][/sup],依此法检测白酒这类样品时，常常会在糖精钠标准溶液的出峰时间附近出现“假的色谱峰”而液相色谱法是根据保留时间进行定性的，由此造成误判。由于白酒为粮食类原料经微生物发酵、酿造而成，成分复杂。有的酒中含有香味物质：糠醛、糠醇，特别是酱香型白酒[sup][/sup]。糠醛、糠醇与糖精钠结构相近，均为带呋喃环类的物质，极有可能产生干扰糖精钠定性的色谱峰。下面通过三个方面：改变流动相配比、改变色谱柱、改变液相色谱的检测器来将糠醛、糠醇与糖精钠得以有效的分离，并通过PDA检测器来验证白酒中确实存在着糠醇、糠醛，从而提高糖精钠检测结果的正确性。[b]2 实验方法与材料2.1 标准物质、样品[/b] 糖精钠标准溶液浓度：1.00mg/mL，（中国计量科学院，证书号： GBW（E）10080）；糠醛、糠醇，分析纯，购于安谱公司；色谱纯甲醇、优级纯乙酸铵，购于国药集团；密理博超纯水：自制；酒样品（监督抽样，有清香型，浓香型，酱香型，兼香型白酒）[b]2.2 仪器及设备[/b]电子天平：AL-204； 恒温水浴锅：上海精密科学仪器有限公司； Waters e2695 HPLC（配紫外检测器及PDA检测器）；色谱柱A：ZORBAX SB-C18：4.6mm×250mm， 5um；色谱柱B：Sunfire C18：4.6mm×250mm， 5um[b]2.3 实验方法 [/b]酒样经水浴加热去除酒精度后，补足蒸发去除的水份，然后直接进色谱分析。色谱条件A：依GB 5009.28-2016 《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》：液相色谱条件：流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵=5：95； 色谱柱A ；流速：1.0mL/min；进样量：10uL；检测器：紫外检测器，230nm；色谱条件B：将方法A中的流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵=5：95调整为甲醇：0.02mol/L乙酸铵=3：97；其余条件一样； 色谱条件C：将方法A中的色谱柱A改为色谱柱B，其余条件一样； 色谱条件D：将方法C中的紫外检测器改为PDA检测器，其余条件一样，主是是对糠醛、糠醇、糖精钠进行光谱扫描，看它们的光谱图是否相似，以利于对它们进行准确定性；[img=,690,223]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011345_01_2166779_3.png[/img][img=,690,307]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011345_02_2166779_3.png[/img]图2 糠醇、糠醛、糖精钠混合标准溶液色谱图（色谱条件A）[img=,690,253]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011351_01_2166779_3.png[/img][img=,690,265]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011351_02_2166779_3.png[/img][img=,690,254]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011351_03_2166779_3.png[/img][img=,690,276]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011351_04_2166779_3.png[/img][img=,690,253]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011351_05_2166779_3.png[/img][img=,690,267]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011351_06_2166779_3.png[/img] 图3 酱香型白酒测定色谱图（色谱条件A）[b] 从图2可以看出：糖精钠、糠醛、糠醇在色谱条件A下，它们的保留时间非常接近，前言中也提到白酒为粮食类经微生物发酵酿造、蒸馏而成的，成分复杂，极有可能产生微量的糠醇、糠醛干扰糖精钠的测定，因此本文通过改变色谱条件，尝试着将糠醇、糠醛、糖精钠得以有效分离，以达到对白酒中糖精钠的准确测定。3.2 改变色谱条件 [/b]在现有的实验条件下，采用色谱条件B，通过改变流动相中的甲醇比例，来尝试糠醇、糠醛、糖精钠能否达到基线分离，由于甲醇在流动相中的比例越高的话，糠醇、糠醛、糖精钠在C18柱反相色谱中应该是出峰时间更快的，因此为了尽量使三者分离，应该减少流动相中的甲醇比例，采用色谱柱耐受甲醇的极限比例：甲醇：0.02mol/L乙酸铵=3：97进行实验，结果见图4~5。[img=,690,289]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011354_01_2166779_3.png[/img][img=,690,288]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011354_02_2166779_3.png[/img][img=,690,289]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011354_03_2166779_3.png[/img][img=,690,291]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011354_04_2166779_3.png[/img] 图4 糠醇、糠醛、糖精钠混合标准溶液色谱图（甲醇：0.02mol/L乙酸铵 = 8：92 ）[img=,690,253]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011356_01_2166779_3.png[/img][img=,690,227]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011356_02_2166779_3.png[/img] 图5 糠醇、糠醛、糖精钠混合标准溶液色谱图（色谱条件B即甲醇：0.02mol/L乙酸铵 = 3：97 ）从图5可以看出：该方法虽然也能将糠醇、糠醛、糖精钠三者实现基线分离，由于流动相中缓冲盐的比例高，运行时间长了，会极大地缩短色谱柱的使用寿命，为此根据实验室的条件， 尝试更换色谱柱及检测器，根据GB 5009.28-2016 及色谱条件C、D进行实验，其结果见图6及图7。[img=,649,416]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011358_01_2166779_3.png[/img][img=,672,538]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011358_02_2166779_3.png[/img][img=,286,129]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011359_03_2166779_3.png[/img] 图7 酱香型白酒样品的测定结果从图6可以看出：在色谱条件C下糠醇的出峰时间为18.15min、 糠醛的出峰时间为19.207min、而糖精钠的出峰时间则为24.875min；因此比较色谱条件A及色谱条件C，色谱柱A与色谱柱B同样为C18柱，但是由于它们之间填料的差异，虽然再同样的流动相下，还是会造成各化合物在色谱柱中有不同行为的。通过PDA检测器对三者进行光谱扫描，它们三者的光谱图也有明显的区别，因此在色谱条件C或D下能对白酒中的糖精钠进行准确定性，从图7可以看出白酒中的确存在着不同量的糠醇、糠醛这两种物质，干扰着白酒的糖精钠的测定。4 结论 本文主要参照GB 5009.28-2016标准从三个方面：改变流动相配比、改变色谱柱、改变液相色谱的检测器，运用高效液相色谱法将白酒特别是酱香型白酒中存在的干扰糖精钠检测的物质：糠醇、糠醛得以分离，以达到对白酒中糖精钠准确测定的目的。参考文献 GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准[s] . GB 5009.28-2016 食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定[s] . 许汉英. 白酒中糠醛含量与香型之间关系的研究. 酿酒. 2002, 29 (5) : 37—39.[/s][/s]

去年十二月份，公司因为新申请添加剂项目，当时能力验证早就结束了，于是选择了测量审核。当时我在外地做农残快检的竞标，并没有指导操作，只问了平行样品的精密度和回收率，精密度1.4%，回收率90%，都还可以，最后由检测部负责人审核结果后提交。[img=,221,269]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241436510324_9919_3295053_3.png!w221x269.jpg[/img]过了一天，那边客服MM打电话给我说，你们的结果可能有点问题，你们核对一下再提交吧。于是让他们在30和31两天重复对样品进行复核，见下图，结果偏差不大。[img=,216,286]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241437036284_6468_3295053_3.png!w216x286.jpg[/img][img=,219,277]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241437105901_5579_3295053_3.png!w219x277.jpg[/img]我当时仍旧因为竞标的事忙的灰头土脸，抽空打电话过去问客服MM：“能说下结果偏大还是偏小不？”得到的是甜甜的声音：“不能。”到了31号截止日期，检测人员并没有找出原因，就按上次的结果申报了。得到的是下面的结果：[img=,550,338]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241443174131_8651_3295053_3.png!w550x338.jpg[/img]究竟是怎么出错的呢？竞标失败的我回到实验室，火气很大的一边要求重新申报这个项目的测量审核，一边核查原因。[img=,552,147]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241437471784_7329_3295053_3.png!w552x147.jpg[/img]因为人员比对也做过，重复性及回收率也做过。所以首先核查的还是标准品，[img=,503,30]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241437396824_7565_3295053_3.png!w503x30.jpg[/img]而我们在chemical book 上找到的标准品有两个，一个是标准上要求的无水糖精钠，一个是带两个水的糖精钠。[img=,690,449]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241438089571_8588_3295053_3.png!w690x449.jpg[/img]我们认真核查了标准品，发现我们购买的糖精钠CAS号并没有问题。然后翻看标准，看配制记录，发现其中注：糖精钠含结晶水，使用前需在120℃烘4h，干燥器中冷却至室温后备用。[img=,690,85]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241438193344_7164_3295053_3.png!w690x85.jpg[/img]什么情况？？？要买的标准品为不含结晶水，为什么标准上写着糖精钠含结晶水呢？到底标准品有没有买错呢？我们换算出来的结果有没有错误？后来才想明白，无论买的标准品是哪个，都是烘干结晶水才称重，所以标准上其实应该表述为“糖精钠[b]易[/b]含结晶水，使用前需在120℃烘4h，干燥器中冷却至室温后[b]称重[/b].”不知道我的理解有没有偏差。到底是不是标准品的问题呢？这个标准品是才买回来的，证书齐全，按道理是没有问题的。为了确认，想着换种方法，就参考GB/T23746-2009做了一个非水滴定。[img=,646,252]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241438282004_6665_3295053_3.png!w646x252.jpg[/img]给标准品提供商点个赞，没问题。然后核查的是仪器，找到开始测量审核之前的留样用液相进行复测，结果与上次结果对比相对偏差3.6%，还可以，糖精钠标准品配制的中间点浓度的工作液也用之前的标曲跑了一遍，也没问题。目前为止，人员没问题，培训过，比对过。仪器没问题，方法没问题，都是按照国标来的。测试的过程也是按照国标要求做的。标准品没问题。环境恒温恒湿，再说环境的话我认为不可能对糖精钠的测试造成这么大的影响。就剩下耗材和试剂了，这个标准上没什么耗材，试剂的话影响会这么大吗？不可能啊，大部分只在做本身产品为试剂或者邻苯、重金属的时候，试剂才会有这么大影响吧，再说买的试剂在检测其他产品的时候也没出过什么问题。不可能有人往试剂里添加糖精钠玩吧。拒绝了重新购买试剂验证的要求后，还是得仔细研究标准。 最后把标准和测量审核的指导书放在一起看，终于(T*M*D)的找到了问题。[img=,505,76]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241439384461_2655_3295053_3.png!w505x76.jpg[/img][img=,447,123]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241438441411_8682_3295053_3.png!w447x123.jpg[/img]标准上的结果是以糖精计，而测量审核的指导书上是以糖精钠（含两个结晶水）计，这么大的字，居然没有人看到。原因是检测人员在拿到指导书后并没有按照指导书进行操作，而是直接按照国家标准进行检测，结果也按标准的出具，后来也没人去看指导书进行核查，导致了这样的后果：[img=,545,132]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810241438524311_9016_3295053_3.png!w545x132.jpg[/img]