脱氧核苷酸钠

[color=#444444]最近在建立液相质谱测细胞内脱氧核苷三磷酸，但是响应值特别低。最开始试的时候用的是500 ng/mL的标准品，MRM都有 10^3左右，结果后来氮气用完了新的一直没来，中间断气了三天之后就一直响应值特别低，autotune后，其他人用ESI positive都正常了，结果我这个用ESI negative的还是只有一百多，提高了十倍浓度照样只有两三百，最开始试的时候用连接柱不上色谱柱都有10^3的。已经试过不同pH的流动相，从sigma买了新的标准品，换过配样品的溶剂等等，一直没啥改善，求各位大侠指点迷津！谢谢！[/color][color=#444444]用的是Agilent 6410，ESI negative，Phenomenex Luna Aminopropyl做HILIC，流动相是20mM NH4Ac pH 9.45和乙腈，流速0.2 mL／min，Gas Temp 300 C，Gas Flow 10L/min，Nebulizer 25 psi，Capillary Negative 3000V。[/color]

[color=#444444]最近在建立液相质谱测细胞内脱氧核苷三磷酸，但是响应值特别低。最开始试的时候用的是500 ng/mL的标准品，MRM都有 10^3左右，结果后来氮气用完了新的一直没来，中间断气了三天之后就一直响应值特别低，autotune后，其他人用ESI positive都正常了，结果我这个用ESI negative的还是只有一百多，提高了十倍浓度照样只有两三百，最开始试的时候用连接柱不上色谱柱都有10^3的。已经试过不同pH的流动相，从sigma买了新的标准品，换过配样品的溶剂等等，一直没啥改善，求各位大侠指点迷津！谢谢！[/color][color=#444444]用的是Agilent 6410，ESI negative，Phenomenex Luna Aminopropyl做HILIC，流动相是20mM NH4Ac pH 9.45和乙腈，流速0.2 mL／min，Gas Temp 300 C，Gas Flow 10L/min，Nebulizer 25 psi，Capillary Negative 3000V。[/color]

求助，以磷酸二氢钾为流动相洗脱核苷酸主要是哪个离子在发挥作用，是钾离子吗

[align=left][color=black]核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同，分别有胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）、[/color]鸟嘌呤核苷酸（GMP）及次黄嘌呤核苷酸（IMP）等。由于核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相C18色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。[/align][align=left][b]第一部分[color=red]CAPCELL PAK C18 AQ[/color]检测方法[/b][/align][align=left][/align][align=left][b]C[color=black]APCELL PAK C18 AQ[/color][/b][color=black]色谱柱可耐受纯水条件，适用于极性较大物质的高水相条件下的分析，因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》。[/color][color=black]按照国标方法，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果；对30个样品进行前处理后进行分析，样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好，且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。[/color][/align][align=left][b][color=red] [/color][/b][/align][align=left][b]《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调[/b][/align][align=left][img=,600,248]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051502543279_7587_2222981_3.jpg!w813x337.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051503129151_4402_2222981_3.jpg!w776x226.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left] 下表为样品定量浓度结果[/align][align=left][img=,600,126]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051455159701_7741_2222981_3.jpg!w900x190.jpg[/img][/align][align=left][img=,600,221]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456000129_1190_2222981_3.jpg!w844x311.jpg[/img] 上图为核苷酸样品与标准品的对比谱图[/align][align=left][/align][align=left]基于个别样品分析时遇到的CMP与其前杂质未得到良好分离的情况，通过对洗脱条件进行调整，可实现CMP与其前杂之间的良好分离。[/align][align=left][img=,600,215]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456501881_4082_2222981_3.jpg!w843x303.jpg[/img][img=,600,175]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051456507871_7358_2222981_3.jpg!w900x263.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left][b]第二部分[color=red]CAPCELL PAK ADME[/color]色谱柱的分析[/b][/align][align=left][color=black]CAPCELLPAK ADME[/color][color=black]键合了笼状金刚烷基团，兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。[/color]在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。[/align][align=left]值得注意的是，ADME色谱柱的溶出顺序与常规反相C18色谱柱不尽相同，再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于C18色谱柱的老师来说，具有独特溶出模式的CAPCELL PAK ADME色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。[/align][align=left][img=,500,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051457304991_1509_2222981_3.jpg!w758x525.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸标准品的分析结果[/color][/align][align=left][/align][align=left][img=,500,347]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903051458490969_9562_2222981_3.jpg!w758x527.jpg[/img][/align][align=left][color=black] 上图为CAPCELL PAK ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果[/color][/align]

[size=4]请教各位，近期俺要设计一个实验，但经过4、5天反复思考和查资料都没有找到太好的方案，遂进来赐教！是这样的，有一个混合样品，已知里面含有蛋白质（少量）、多肽和游离氨基酸（占绝大部分≥50%）、核苷酸（可能有三种存在形式：核苷、核苷酸、碱基）、还有其他可溶性化合物质。要求：检测样品当中核苷酸的含量。疑难：由于样品中多肽和游离氨基酸含量较多，遂不能用紫外分光光度计法测量（蛋白质和核苷酸的吸光峰值很相近，只有在蛋白质含量（包括蛋白质、多肽和游离氨基酸）较少的情况下用此法才准确）。 我的思路是，先把多肽和游离氨基酸与核苷酸分离开，然后再用紫外分光光度计法测量核苷酸含量。但本人才疏学浅，不知用什么方法才能把两者分离开。请各位赐教~~[/size]

目前想用安捷伦的三重四级杆质谱做三磷酸脱氧核苷酸分析。因为化合物都是三磷酸形式，所以想用阴离子模式来做。但是经过色谱分离之后，两个核苷酸怎么都分不开 （母离子分别为467和482；但是子离子都选择检测那脱掉的三个磷酸（m/z = 159）以期待得到更好的灵敏度）。像这种情况相同迁移时间，相同子离子，不同母离子能做MRM定量不？？以前用质谱的时候只用了全离子扫描(TIC),然后用它的萃取离子图（Extracted ion chromatography）做的定量。现在的疑问是MRM图上的峰是由一组离子对（母/子离子对）构成的，还是只是由子离子构成的？如果是前者，那就算是相同迁移时间也应该没啥问题吧；但如果是后者是不是就必须先要用色谱分开两个化合物了？（这两个三膦核苷酸裂解后，只有一个可以得到很好的阳离子碎片。另一个只能检测三个磷酸）。先谢谢大家的热心帮助

核苷酸检测的标准品谁有啊？联系一下啊，我们现在需要做核苷酸的检测，谢谢

鸡精中测核苷酸钠含量用什么紫外分光光度计合适(波长在200-400nm).方法:QB/T 1500-92

做寡核苷酸合成，50个碱基，部分硫代。用HPLC纯化制备，做了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]结果是好的。然后做了乙醇沉淀。再做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]，发现样品脱硫了。不知道是哪里出现了问题。哪位大佬知道吗？

[font=&]求助：[/font][font=&] 1. 需要分析一种有机盐（核苷酸钠盐）中的偏磷酸类的含量，应该用什么方法较合适？[/font][font=&] 2.偏磷酸无紫外吸收，本人没有用过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]（电导检测器），哪位高兄建议一下[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法对此分析的前景！[/font]

大家有做过核酸的红外吗，我做的寡核苷酸药物，需要买仪器建分析方法，在网上查不到相关资料，不知道核酸类药物和普通化药对仪器要求一样吗，还有仪器设置和样品配置啥的，最关键的是谱图怎么分析，有没有做过的大神支支招，或者手里有相关文献，谢谢啦

Folin酚试剂法测蛋白含量中用到的脱氧胆酸钠和三氯乙酸的作用分别是什么？

求助：GB5413.40 核苷酸标准品中有5种核苷酸的标准品要购买，不知道应该买哪里的。请教各位，能具体告知下购买的品牌和货号吗？胞嘧啶核苷酸 CMP：标准品，C9H14N3O8P，纯度≥99%次黄嘌呤核苷酸 IMP：标准品，C10H13N4O8P，纯度≥99%鸟嘌呤核苷酸 GMP：标准品，C10H14N5O8P，纯度≥99%尿嘧啶核苷酸 UMP：标准品，C9H13N2O9P，纯度≥99%腺嘌呤核苷酸 AMP：标准品，C10H14N5O7P，纯度≥99%

求助： 1. 需要分析一种有机盐（核苷酸钠盐）中的偏磷酸类的含量，应该用什么方法较合适？ 2.偏磷酸无紫外吸收，本人没有用过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]（电导检测器），哪位高兄建议一下[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法对此分析的前景！

各位老师好，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]检测核苷酸，新换的柱子，第一针峰型还行，第二针就开始飘了，流动相配制有什么注意事项吗，求帮忙

食品企业，用液相法做核苷酸，前处理样品用淀粉酶酶解，用高氯酸沉淀蛋白，然后用氢氧化钠调PH到6.75～6.85，标液五种核苷酸分离度很好，但是样品杂质峰很多，基质干扰很明显，只有一个UMP没有干扰。色谱柱是安捷伦的EC-C18，150mm*4.6，4μm，流动相就是国标法的磷酸盐＋甲醇=1000+40，波长254。有没有老师提供一点思路，怎么能更好的去除杂质或者减小基质干扰。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111031701224266_3925_4230434_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111031701224510_8643_4230434_3.png[/img]

请做过核苷酸的老师们给予帮助，标准中说核苷酸的标准品（每个组分称取的质量都要校正水分和钠盐含量，以酸型计）是什么意思，应该怎么处理呀，很急，请大家帮助！

脱氧管的替代者--脱氧仪在色谱载气、半导体研究、制取高纯气体等应用场合，特别在毛细管气相色谱系统中，以及在使用TCD或ECD检测器时，为提高色谱柱和检测器使用寿命，使气路稳定地工作和使分析结果更准确，载气的氧含量都要求必须严格控制，最好能控制在0.1PPM以内。目前，常用的脱氧设备是脱氧管，主要分为可再生的不锈钢管和不能再生的透明玻璃管两种类型，均在常温下工作，体积小，价格也便宜（基本在千元内，少数千元以上），脱氧效果基本上也能满足应用要求。不过，客户在使用脱氧管过程中也遇到了越来越多的棘手问题：第一，脱氧量少。一支脱氧管用于高纯氮（99.999％）脱氧最多脱5瓶，而用于纯氮（99.99％）脱氧不到1瓶，由于脱氧量少，一般几个月甚至几周就须寄回厂家再生或更换脱氧管，因此增加了很多繁琐的更换工作。第二，性价比低。尽管脱氧管只有几百元，但每支脱氧管用于高纯氮（99.999％）脱氧最多脱5瓶，按每支脱氧管最少500元价格计算，脱一瓶高纯氮至少100元。第三，气密性差。由于脱氧量少，因此经常需要更换脱氧管，而脱氧管的更换是一项技术活，每次更换时难免会带入一些空气，但如带入较多的空气，会使脱氧管很快失效，严重的会影响到色谱仪的灵敏度甚至破坏仪器。针对脱氧管市场的“少低差”现状，诞生了一款脱氧仪。该设备不但脱氧效果远好于脱氧管，脱氧深度可达0.01PPM，而且还能除水和二氧化碳等杂质。不仅如此，最大的优点是彻底克服了市场上脱氧管的“少低差”缺陷：第一，脱氧量多。一台脱氧仪用于高纯氮（99.999％）脱氧至少脱300瓶，用于纯氮（99.99％）脱氧至少脱30瓶，而且对进气气源的纯度要求也远低于脱氧管。第二，性价比高。一台脱氧仪售价4500元左右，按一支脱氧管可以脱300瓶高纯氮计算，脱一瓶高纯氮至多15元。第三，气密性好。由于脱氧仪脱氧量多，一旦接入气路，几年甚至十几年都不用更换。因此不存在气密性差的问题，也不用担心对用气仪器有影响。

目前想用Thermo Fisher的四级杆－静电轨道离子阱质谱做一个药物单，二，三磷酸核苷酸分析。文献报道是用同位素做内标，是他们实验室自己合成的，买不到现成的。用阴离子，MRM模式来做。想问，如果没有内标的话，只有该药物的单，二，三磷酸核苷酸的标准品的话，能够定量吗？第一次发帖求助，先谢谢大家的热心帮助！

问题: 有没有做核苷酸的大神呀？ 就是有的扫不出来， 不稳定回复: 核苷酸我们就是按照标准做的 全都跑出来了。 安捷伦的C18柱。 安捷伦的C18柱[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707081357_01_3114888_3.jpg[/img]

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]跑了一种特殊的核苷酸，也没有标品，目前用的磷酸盐跑，不能做质谱，所以能用什么方法鉴定我用磷酸盐跑的这个峰是什么

我最近用液相测定核苷酸，国标用的核苷酸基准试剂要在120度烘4h，但是我烘IMP和CMP后均发黄和结块，而GMP和UMP正常。我又在103度烘IMP和CMP，大概半小时又出现发黄和结块的现象，上网都没有找到相关的资料，不知道该在多少度烘才适合，求帮手

5’-呈味核苷酸二钠的命名，为什么5上面要有那一撇？

HPLC检测奶粉中核苷酸，出现标品没有问题，或偶尔有杂峰样品开始没有问题，后来出现A腺嘌呤峰分裂，柱子，机子都已经换过，请问是什么问题

请教奶粉中核苷酸的测定样品前处理方法，最好是用SPE方法的，急！

PCR技术是重要的分子生物学技术，对现代分子生物学的发展起到非常重要的作用。⑴PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此为起始点，沿模板5′→3′方向延伸，合成一条新的DNA互补链。PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。　　⑵PCR的反应动力学：PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA扩增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”，这种效应称平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多数情况下，平台期的到来是不可避免的。　　⑶PCR扩增产物：可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间，是需要扩增的特定片段。短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的，以一个原始模板为例，在第一个反应周期中，以两条互补的DNA为模板，引物是从3'端开始延伸，其5'端是固定的，3'端则没有固定的止点，长短不一，这就是“长产物片段”。进入第二周期后，引物除与原始模板结合外，还要同新合成的链(即“长产物片段”)结合。引物在与新链结合时，由于新链模板的5'端序列是固定的，这就等于这次延伸的片段3'端被固定了止点，保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形成长短一致的“短产物片段”。不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加，而“长产物片段”则以算术倍数增加，几乎可以忽略不计，这使得PCR的反应产物不需要再纯化，就能保证足够纯DNA片段供分析与检测用。

婴幼儿配方食品和乳粉 核苷酸检测中，配制核苷酸标准品时要求每个组分的浓度都要校正水分和钠盐含量，采用酸型表示，校正水分这个没问题，就是纯品的含量，这个校正钠盐含量并采用酸型表示，这个是什么意思？不太明白，请知道的大侠详细解释一下，谢谢！