未衍生化氨基酸

DABS衍生化氨基酸的快速简单分离--很好的资料[color=red]【由于该附件或图片违规，已被版主删除】[/color][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=34384]DABS衍生化氨基酸的快速简单分离[/url][color=red]【由于该附件或图片违规，已被版主删除】[/color]

[color=#444444]看了很多文献的报道，使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]分析体液中未衍生化的氨基酸时，他们都使用离子对试剂全氟酸（例如全氟庚酸、全氟丁酸等），但是我现在希望不使用任何离子对试剂的帮助，通过反相液相色谱柱进行分离氨基酸，并通过质谱进行定性定量分析。我想问的问题就是我的方案的可行性有多大，有意义吗？（因为如果我的想法可行的话，国外为什么很多报道还是使用离子对试剂呢？）[/color][color=#444444]希望大家帮我多提宝贵意见，谢谢。[/color]

想咨询一下，0.1mol/L的PITC乙腈溶液取0.5ml，衍生化氨基酸溶液，氨基酸最好含多少mg啊？

本人最近用区带毛细管电泳分离氨基酸，因为大部分氨基酸没有紫外吸收，所以需要衍生化，可是我用的19对氨基酸对映体混合溶液（每种氨基酸的浓度均为3mM)衍生出来的分却非常小，试了很多次都不行。不知哪位大虾有经验能指教一二，万分感谢！

各位专家好。我们实验室使用venusil的氨基酸测定方法，该方法是将样品水解液氮吹后再用0.1mol/L的盐酸溶解，然后进行衍生化。这样来看，PITC衍生化应该是在酸性条件下进行的。但是在蛋白质分析中的艾德曼降解法，使用PITC和氨基末段残基作用，是在碱性条件下进行的。这个地方就有些矛盾了。是不是我忽略了什么因素？我一个猜测是Venusil方法里衍生化过程中还加入了三乙胺，是不是三乙胺使体系保持了碱性。还有一个现象，测定过程中发现，如果样品的消解液是碱性的，直接做衍生化，测出来的氨基酸内标相比酸性消解液会降低。还请各位专家解惑。谢谢。

遇到一个很怪的实验结果。测定细菌细胞内氨基酸和有机酸的含量，细胞提取液真空干燥后衍生生化，第一步是做methoximation(25mg/ml methoximine reagent 溶解在吡啶中),第二部做silylation(BSTFA:TMCS=99:1)，然后gc-ms分析。以前一直使用这个方法测定，氨基酸和有机酸信号稳定。但是从5月份开始，突然无法从提取样品中测到氨基酸（氨基酸峰完全消失了），但是有机酸还可以检测到。更换色谱柱，清晰inlet等，问题依旧存在，实在不知道原因，怀疑是衍生化过程引进了水，但是试剂一直保存很好。请达人帮忙！！谢谢了！

遇到一个很怪的实验结果。测定细菌细胞内氨基酸和有机酸的含量，细胞提取液真空干燥后衍生生化，第一步是做methoximation(25mg/ml methoximine reagent 溶解在吡啶中),第二部做silylation(BSTFA:TMCS=99:1)，然后gc-ms分析。以前一直使用这个方法测定，氨基酸和有机酸信号稳定。但是从5月份开始，突然无法从提取样品中测到氨基酸（氨基酸峰完全消失了），但是有机酸还可以检测到。更换色谱柱，清晰inlet等，问题依旧存在，实在不知道原因，怀疑是衍生化过程引进了水，但是试剂一直保存很好。请达人帮忙！！谢谢了！

[b][font=宋体]问题描述：使用液相色谱紫外检测器测定氨基酸，发现使用[/font]AQC[font=宋体]衍生测定时[/font]AMQ[font=宋体]峰很高，但是氨基酸的峰很低，此时氨基酸的浓度已经很大，浓度为[/font]100mg/kg[font=宋体]。降低了[/font]AQC[font=宋体]的量，基线漂移很严重，有什么方法可以改善？有没有更好的衍生化试剂？[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]氨基酸的结构决定了本身的紫外吸收很弱，因此用液相色谱[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]紫外检测器测定氨基酸含量时需要用到衍生试剂，增大其紫外吸收以满足灵敏度要求。用于紫外检测器分析氨基酸的柱前衍生试剂主要包括[/font]PTC[font=宋体]、[/font]PTH[font=宋体]和[/font]AQC[font=宋体]等。[/font][font=宋体]（1）[/font]PTH[font=宋体]（苯乙内酰硫脲）：[/font]PTH[font=宋体]是最早一批用于氨基酸衍生的试剂，衍生物稳定，缺点是不能同时衍生所有氨基酸（如[/font]Arg[font=宋体]、[/font]His[font=宋体]等需要单独处理），这就导致衍生步骤复杂且时间长，已经逐步被[/font]PTC[font=宋体]法取代。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font]PTC[font=宋体]（苯氨基硫甲酰）：[/font]PTC[font=宋体]是[/font]PTH[font=宋体]衍生法的中间产物，与[/font]PTH[font=宋体]法相比，该方法衍生步骤简单、快速（室温条件下只需[/font]20min[font=宋体]），衍生产物稳定，且都能和一、二级氨基酸反应，试剂、副产物等干扰因素可通过快速蒸发去除，紫外检测灵敏度相对较高（可达[/font]1pmol[font=宋体]），是目前氨基酸柱前衍生分析方法的主要试剂之一。[/font][font=宋体]（3）[/font]AQC[font=宋体]（[/font]6-[font=宋体]氨基喹啉基[/font]-N-[font=宋体]羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯）：[/font]AQC[font=宋体]是一种具有反应活性的杂环氨基甲酸酯，能与一、二级氨基酸反应迅速生成脲。该衍生物性质十分稳定，具有强紫外吸收。该方法使用时要注意[/font]AQC[font=宋体]的加入量要适当，如果在组氨酸峰后和甘氨酸峰前分别出现一个较小和较大的峰，则可能是[/font]AQC[font=宋体]量不够，导致含有两个氨基的赖氨酸形成单衍生化的两个异构体。如果色谱柱上出现一个很大的试剂峰而影响目标物检测，则可能是[/font]AQC[font=宋体]过多水解为[/font]AMQ[font=宋体]。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

[color=#444444]不太懂衍生化，我现在要测氨基酸，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液相色谱质谱联用仪[/color][/url]，是否一定要经过衍生化，可不可以直接测定？[/color]

我用液相想做氨基酸的分析，衍生化需要OPA和FMOC分离试剂，请各位大侠帮忙或在哪里能买得到，谢谢。QQ69667150

请教各位专家。在使用盐酸消解，并用异硫氰酸苯酯（PITC）衍生化测定样品氨基酸含量。因为仪器使用人数较多，不能每次消解完以后就立即测定。所以需要考虑氨基酸在样品放置过程中稳定性的问题。主要是两个问题（1）消解液不做衍生化，过滤定容以后，直接冷冻保存。待上机之前再做衍生化，做完马上上机测定。（2）消解液过滤定容以后，立即衍生化，衍生化的产物冷冻保存。等待上机测定。这两种方法那种比较合理，氨基酸的损失比较小。谢谢。

OPA衍生氨基酸的条件，本人最近在做氨基酸，衍生效果不好，请教各位大侠！

我用MSTFA衍生氨基酸，18种氨基酸都可以测出来，但是谷氨酰胺和精氨酸测不出来，有文献说他们会转化成别的物质，的确测出来转化的物质了，但是不知道如何防止转化，求大神指点

我用酸水解+异硫氰酸苯酯衍生矿物药可以测定氨基酸，但是为什么同样的方法却测不了其配方颗粒的氨基酸，辅料会影响吗？那我该怎么办？

我看了一篇关于D,L-氨基酸检测的文章，用c-18柱子和柱前衍生的办法能分析某些氨基酸，衍生剂是OPA和Boc-L-Cys，我的衍生剂配法是两种衍生剂各0.1g用1mL无水乙醇溶解，加入100μL的巯基乙醇做还原剂，再用pH6.5的硼酸盐缓冲液定容至10mL，在线的柱前衍生。流动相是磷酸盐：乙腈：四氢呋喃（A:92:5:3,B：45:50:5,V:V）线性洗脱。柱温40℃，荧光检测，激发和放射波长为334和443。我做的标样是0.1g/L的D-Arg和L-Arg，但是同一个样品跑出来的峰毫无重现性，也看不出什么规律，有时2分钟就出峰，有时20多分钟出峰，峰形也很怪。请教我的衍生剂配法有没有问题，问题可能出现在哪里呢，还有什么要注意的吗？我第一次用液相，求教啊

各位大虾，做过氨基酸分析的请帮帮忙，用2,4－二硝基苯氟、FMOC-Cl、邻苯二甲醛来衍生氨基酸的条件，是否可在水相中进行？这两天用邻苯二甲醛、巯基乙醇来衍生L-谷氨酸钠（在硼酸钠缓冲液进行），流动相XDB AAA色谱柱上的说明进行配制，L-谷氨酸钠浓度为20ppm，按色谱柱上的说明做不出来，不知那里出错了？安捷伦1200，检测器：DAD,色谱柱:XDB AAA，柱温相，四元泵。邻苯二甲醛和巯基乙醇是上海出的，巯基乙酸是不是比巯基乙醇效果好？

一般厂家氨基酸前处理衍生方案都会有正己烷萃取这一步，请问这个步骤的目的是什么？

[b][font=宋体]问题描述：液相色谱测氨基酸，用[/font]2,4-[font=宋体]二硝基甲苯衍生以后放入棕色容量瓶中，冰箱冷藏保存。[/font]4[font=宋体]天后进样发现单标中多出来几个小峰，目标峰也变小了，且峰型分叉，是不是衍生物发生了降解？[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）液相色谱测氨基酸，建议衍生产物现配现用，如果是荧光检测，大部分氨基酸在衍生[/font]2h[font=宋体]后荧光响应会逐渐下降，下降到一定程度后稳定；但是有几种氨基酸衍生产物的荧光响应值下降的非常明显。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）液相色谱测氨基酸通常采用在线柱后衍生的方式进行。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）针对做一个对照品溶液的稳定性实验，即以第一天配制的对照品为样品，每天配制一组新的相同浓度的对照品来测定第一天配制的对照品的含量，看其情况就可以知道稳定性。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

哪位高手做过氨基酸柱前衍生分析，急切求教！我用2，4-二硝基氟苯衍生鸟氨酸，图谱上除了认为的鸟氨酸和衍生试剂的峰外，还有两个峰存在，不知是什么情况？有做过鸟氨酸分析的吗？你的图谱也是这种情况吗？HPLC条件：ODS柱250*4.6mm ，360nm检测波长，pH=6的醋酸钠：乙腈=60：40衍生化方式：0.5mg/ml鸟氨酸1ml+0.5M碳酸氢钠（pH=9)1ml+0.1%2.4-二硝基氟苯乙腈溶液1ml，80度水浴加热30分钟急盼回复，万分感谢！

氨基酸分析有柱前衍生也有柱后衍生方法，柱前衍生又有不同的衍生方案如OPA ACCQ-TAG法 以及DBFB 法等，柱后衍生也有不同的衍生仪器及方案。本人现使用的柱前衍生方案，但对结果的准确性一直表示怀疑。

waters 2695如何做在线氨基酸衍生

OPA衍生测定氨基酸，衍生反应时间对结果的影响，我做衍生反应时，时间越长，峰面积越大，在两小时后比较稳定，标准的检测方法规定在2min后进样分析，但2min时只有很小的峰，请问各位专家，这是怎么回事啊？谢谢。

氨基酸分析仪柱后衍生池跑5针样品就堵了，每次都要冲好长时间才能接着跑样，今天索性就堵住了，费了好大功夫也没有重开，色友们平时你们怎么维护衍生池的。

各位大虾，氨基酸柱前衍生试剂怎么选择？用哪种试剂实验操作比较简单，并且毒性小，价格也便宜？

本人在做氨基酸分析，用的是黄酒中氨基酸的测定方法行业标准编制说明 标准，十八种氨基酸混标进样，由于仪器限制，使用的是二元梯度，标准是三元，两者的区别只是峰的分离度。但是实验中总是有杂质峰，而且重复性很好，保留时间、峰面积是一致的，怀疑是衍生副产物。单标进样仍然有，而且几乎是一个单标对应一个杂质峰。并不是所有杂质峰都出现，说明不是样品、流动相的问题。认为问题就出在衍生过程中，有做过的是否也由这些杂质峰？

柱前柱后衍生法，荧光检测器测氨基酸

[size=4][color=#000080]　　使用waters的AQC衍生氨基酸的人注意了[/color][/size][size=4][color=#000080]　　脯氨酸与γ-氨基丁酸采用上述方法时，很难分离，从而对脯氨酸的测定产生一定影响。而γ-氨基丁酸又是人体内常见的神经递质，可由谷氨酸脱羧基生成，故广泛存在。对于来自生物提取物(工艺较滥时)，这种情况尤为明显。[/color][/size][size=4][color=#000080]　　另外，用大连伊利特的DNFB(2，4-二硝基氟苯)衍生氨基酸，结果脯氨酸和γ-氨基丁酸分离度也不好，大家注意一下。[/color][/size]

最近要测试溶液中的16种氨基酸，没有氨基酸测定仪，只有岛津的高效液相色谱仪。以前没有测过这些，故求助一下。首先，我现在头疼的是AQC衍生剂去哪里买，Waters的不考虑，太贵了。请问大家有没有推荐的别的可以用的衍生剂？