无菌检查

本帖子已参加活动：【嗨！11月】免费拿时尚帅气实验服，实验仪器不寂寞~http://bbs.instrument.com.cn/topic/5997471_1?order=threadid~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~1. 目的： 规范无菌检查操作2. 范围：无菌检查操作3. 责任： 无菌检验员4.无菌检查依据GB/T14233.2—2005 成品无菌试验方法，中国药典2010年版附录无菌试验方法

[size=4]做限度检测和无菌检查，只知道如何做，但是不明白为什么2个选择的方法不同。[/size][size=4]并且，限度检查的结果如果为0，是否可以说等同于无菌检查的结果？如果不能，为什么呢？[/size][size=4]限度检查又为什么检查出来是0呢，不知道这个0说明了什么？[/size]

我想请问2010版的药典上的无菌中的灵敏度的检查，说到了金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 、枯草芽孢杆菌 、生孢梭菌 、白色念珠菌 、 黑曲霉这5种菌，在实际操作中难道都要做吗？还是选择一个革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌就可以了呢？ 我公司的产品是无菌。

药典2010无菌检查

依据《中国药典》2005年版二部附录无菌检查法进行试验，建立适合于纳米银敷料的无菌检查方法。采用直接接种法，对14批纳米银敷料进行无菌方法学验证，结果表明使用规格40mL的培养基、每管培养基接种量为1cm×3cm时，纳米银敷料无明显抑菌作用，可按此方法进行无菌检查。

刚从药品转到食品，药品里有个无菌检查，对于一些药品生物制品医疗器械的要求。食品里貌似没有无菌检查这个要求吧？还是有？ 直觉觉得食品不可能要求这么严格的呀？

2010年版无菌检查法 增修订内容简介1、增加了对进行无菌检查人员的要求：必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。2.增加了菌悬液制备后的有效使用期限：菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉也可制成稳定的孢子悬液保存在2～8℃，在验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=118531]2010年版无菌检查法[/url]

药典附录中规定的无菌检查方法中化学制剂和生物制品的检查方法不同，其中生物制品无菌要求样品分三份，过滤后一份加改良马丁，另两份加硫乙醇酸盐，一份30-35度培养，一份硫和一份改25-28度培养。而二部无菌只需要各做一份，分两种温度培养。为什么呢？生物制品多做个硫，有什么意义吗？

药品GMP指南的征求意见稿中这么描述：无菌操作室的环境洁净度条件不应低于无菌生产操作区，以降低无菌检查出现假阳性的风险。无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。用于无菌检查和微生物限度检查的洁净操作室应配有属于“人流净化”的更衣室及属于“物流净化”的缓冲间或传递窗（柜），使进入洁净操作室的实验人员和试验物品分别经适当净化后进入实验操作间。但是正式出版以后改了：无菌检查应在环境洁净度B级下的局部洁净度A级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。--------------------------------------------------------------------------------------这么一改，要求提高很多啊。

2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容

无菌检查法和微生物限度检查是一回事吗

无菌为一相对概念,大输液无菌检查结果为无菌时,指在一定灭菌工艺条件下,对最终灭菌品相对于抽验样本数量的微生物存活率低于10 - 6 [ 1 ] 。笔者在按照中国药典2000 年版二部对大输液进行无菌检查时,认为需要注意以下环节。1 　环境无菌试验区应为净化区,尽可能除去微生物污染,试验区应定期检测其无菌符合程度,并在使用前采取有效的方法进行无菌处理。若使用开放式薄膜过滤器,要更加严格注意操作区环境,避免外界引入微生物对实验结果造成影响。2 　培养基2. 1 　培养基灵敏度检查　利用不同菌株生长试验来评价培养基灵敏度,只有培养基灵敏度符合要求时,在一定体积范围内才能够检测出大输液中微量残存的活菌,做大输液无菌检查前一定要做培养基灵敏度检查。2. 2 　培养基的pH 值和澄清度　不同微生物生长有相对适宜的pH 值范围,培养基配制后调节到相应的pH 值范围,创造一个最有利于微生物生长的pH 值条件,同时也保证实验的平行性。配制后的培养基应最好通过4 层以上纱布进行过滤后再分装灭菌,这样处理过的培养基细腻、澄清,无杂质和异物,有利于最终结果判断。2. 3 　培养基灭菌时间与温度　中国药典2000 年版二部规定无菌检查用培养基制备时均以115 ℃灭菌30 min ,从灭菌法角度讲,既保证培养基无菌程度,同时又防止营养成分流失。过高的灭菌温度、过长的灭菌时间,会破坏培养基中的葡萄糖成分,使培养基颜色变深,同时需氧菌、厌氧菌培养基中红色厌氧环高度加大,影响无菌检查用培养基的质量。2. 4 　培养基临用前检查　大输液无菌检查中的需氧菌、厌氧菌培养基在使用之前,应做培养基检查。培养基上部红色厌氧环高度为培养基高度的1/ 10～1/ 5 时可以使用,若红色厌氧环超过1/ 5 高度时,说明培养基中厌氧环境发生变化,应在保证培养基无菌程度情况下对培养基做水浴加热处理,除去培养基中游离氧后再使用,加热仅限一次[ 2 ] 。3 　对照实验3. 1 　阳性对照实验　阳性对照实验为无菌结果判定标准参考依据之一,若阳性菌对照管中无菌生长,则对应样品无菌检查结果无效。大输液无菌检查用对照菌株为金黄色葡萄球菌[CMCC( 26003 ][ 2 ] 。加入阳性对照菌液时,只有确认此对照菌液为新近配制,并且活菌数为10～100 个/ ml - 1时,才能保证阳性对照实验结果的有效性。3. 2 　阴性对照实验　阴性对照实验一般能够反映培养基灭菌程度、使用器具无菌程度、操作区域的无菌环境和操作人员的无菌技术等情况,用于对检查结果发生疑问时溯源的依据和问题环节的排除。4 　结果判断4. 1 　浑浊程度变化　大输液无菌检查的培养期为7 d ,若有微生物生长,培养基会因生长代谢而使培养基变浑浊。对于需氧菌、厌氧菌的培养,正常加入阳性对照菌液的培养基,一般在培养第2 天有菌生长,培养基变浑浊,随着培养时间的延长,浑浊程度加大至最后出现沉积现象。有极少量微生物的大输液供试品,接种在需气菌、厌气菌培养基中,其微生物生长一般比阳性对照管缓慢,由于某些细菌经过高压灭菌后,可能以休眠状态、亚致死状态或缺陷状态存在,需要一个恢复期后才能生长繁殖。实验中发现有的微生物在培养的第5 天、第6 天才有生长现象,培养基才发生浑浊,因而对培养基变化情况要逐日观察,及时记录。同时,需氧菌、厌氧菌培养基中为保证厌氧环境加入的少量琼脂在培养过程中,会使培养基本身产生轻微浑浊现象,浑浊程度虽每日略有变化但不发生突然改变时,也不认为有微生物生长。若无法确定,可与阴性对照做平行比对,也可按照中国药典2000 年版二部附录中无菌检查法中要求进行下一步操作。真菌的结果判断相对容易,真菌培养基澄清度大,培养过程中培养基本身几乎无变化,有真菌生长时,可见培养基浑浊,或培养基中出现菌团。4. 2 　颜色变化　真菌培养基颜色均一,结果容易判断。需氧菌、厌氧菌培养基在有微生物生长时,培养基上部红色厌氧环消失,整个培养基发生浑浊并变成浅黄色或黄白色。在培养过程中也出现下面几种情况:红色厌氧环扩散至培养基高度1/ 2 左右 整个培养基颜色变为淡红色 培养基上下部分为淡红色,中部为培养基正常颜色。笔者建议,对无菌结果判断要在保证无外界环境因素及人为因素影响情况下,结合培养基浑浊程度变化和颜色变化共同进行。参考文献:[1 ] 　马绪荣,苏德模主编. 药品微生物学检验手册[M] . 第一版. 北京:科学出版社,2000. 8.[ 2 ] 　中国药典. 二部[ S] . 化学工业出版社,2000 :附录89～91.[收稿日期]2001203205

中国药典2005年版无菌、微生物限度及细菌内毒素检查方法学验证内容简介[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=117279]无菌、微生物限度及细菌内毒素检查方法学验证[/url]

有做大输液的朋友吗你们在大输液的每天在做无菌检查中是每批做阳性对照吗？那也就是每批取30瓶进行无菌检查了？还有就是细菌内毒素项目中供试品阳性对照也是按批进行的吗？如果一天就生产一个品种，也需要每批做供试品阳性吗？

问: 做无菌验证时阳性对照菌是怎么加入的？可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入吗？答:严格的说是要在最后一遍冲洗液中加入阳性对照菌的,这主要是考量滤膜对于阳性菌的截留性～但是滤器如果可以提供滤膜对于阳性菌的充分截留的话在最后的培养体系中加入阳性菌也是未尝不可的. 如果供试品没有抑菌作用,可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入,摇匀如果供试品有抑菌作用,正如安哥洛卡所讲,在最后一次冲洗液中加入阳性对照菌,摇匀,抽虑,加培养基. 无菌检查，加入阳性的方法可以有许多种，可以根据个人的习惯。只是注意：1、避免人为污染。2、阳性菌加入数量，符合“2005版中国药典XIJ微生物限度检查法”的规定。关键词:阳性对照菌 问: 离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么? 答:原理:利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离; 操作:取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量. 注意事项:真菌由于沉降系数比较小, 500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%,因此其检查不适宜用低速离心沉淀法. [col

药品无菌检查薄膜过滤法验证需要6种菌全做吗

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=34459]无菌检查法分析方法验证方案 幻灯片[/url]自己看吧!!!!

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=26327]无菌微生物细菌内毒素检查方法学验证[/url]欢迎交流

2005版药典无菌检查法方法验证及操作要点 http://www.instrument.com.cn/download/shtml/039923.shtml

药典规定无菌检查的检验量，出厂产品当批产量大于500支（装量≤100ml）的注射剂，所需的检验量是每种培养基不得少于20支，阳性对照另外增加1/2的检验量，也就是说做一批无菌检查所需的供试品应该是60支，且按照GMP的要求，注射制剂的无菌检查，应按照如果每批产品分不同消毒柜消毒，取样也要按每一消毒柜分别取，也就是说如果一批产品分10个消毒柜消毒，就要取10批，做10个无菌的样。我不知道各位做无菌的检验是否都按照上述的要求做的，也想请教各位，你们的检验量是多少？是否每批次都是按柜取样并做样的？

[em06] 最近在做一批公司的混悬液的注射液的无菌检查(低温间歇灭菌),开始是按照薄膜过滤法做的 做了很多批 都不合格 尤其最近2批 把样品滤到滤筒后一加入培养基 立刻混浊..培养到第二天也没沉淀下来 无法判断 培养了14天后吸出用平皿法再培养 阳性对照长菌了 可样品没有长菌...现在怀疑是样品的成分干扰..想采用直接接种法再检验 标准要求加入0.5%的吐温-80 但是我不知道吐温-80是什么时候加入?加的量只多少?怎么灭菌??或者怎样排除样品成分的干扰呢?请高手赐教...感激不尽

2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容 杜平华

在2020版药典中，1101无菌检查法，我们家是做口罩的，应该取样多少mg?两种培养基（硫乙醇酸盐培养基和胰酪大豆胨培养基），各做多少平行样品？谢谢各位老师指导[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010241426170393_393_3112968_3.png[/img]

无意间在某网站发现一些无菌及微生物检查方面的视频，看了下感觉挺好，转来让大家看看1.[url]http://player.56.com/v_14249594.swf[/url]2.[url]http://player.56.com/v_14249605.swf[/url]3.http://player.56.com/v_14249620.swf4.http://player.56.com/v_14249630.swf5.http://player.56.com/v_14249641.swf

中国药典无菌检查的培养基装量和适用性检查装量不同， 是不是试管规格有规定大小？

吐温80作为药用辅料内控标准要求检查无菌，但是根据2010版药典附录并没有找到相关检验量和检验数量的规定，具体该去多少样品进行检查呢？请各位高数指点一下。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=157531]药品微生物限度与无菌检查方法验证实验的要点及体会[/url]

本人在深圳一个普通公司的检测中心（非官方组织），打算组织一次草根比对，涉及检测项目为药品细菌数、化妆品菌落总数、医疗器械生物负载、无菌检查中的一种或多种。1、样品为安瓿瓶或塑料袋装。2、收取的费用仅为快递费（样品快递到付）。3、开展的时间初步定为12月初。4、样品含菌种类可能较少、偏简单。5、出具的报告为加盖本中心检测报告专用章（电子扫描版）。现调查下：有多少实验室愿意参加？参加什么项目?

中国药品生物制品检定所－－－药品微生物限度与无菌检查方法验证实验的要点及体会　　2007年1月[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=49203]验证实验要点及体会[/url]

我发现在做冻干粉针剂的无菌检查时，用0.9%氯化钠溶液溶解药品，后薄膜过滤？有一次，同事错用了pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，结果药粉都没溶解。在做一种药品的原料药的微生物限度检查时，一种用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，然后薄膜过滤。请问微生物无菌检查和限度检查时用的冲洗液，为什么有时候用0.9%氯化钠溶液，有时候用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液？如何去选择？依据是什么？谢谢！