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细胞迁移实验

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细胞迁移实验相关的论坛

  • 【转帖】石榴汁的成分能抑制癌细胞迁移

    石榴汁的成分能抑制癌细胞迁移 在美国细胞生物学会于费城召开的第50届年会上公布了这项研究根据今天在美国细胞生物学会(American Society for Cell Biology)于费城举行的第50届年会上公布的一项研究,加州大学里弗赛德分校(UCR)的科研人员发现石榴汁中的一些成分似乎能够抑制癌细胞的运动并且削弱它们被一种化学信号吸引的能力,这种信号已经被证明能够促进前列腺癌向骨的转移。加州大学里弗赛德分校(UCR) Manuela Martins-Green博士实验室的科研人员打算在一个前列腺癌体内模型中进行进一步的测试,从而确定这两种成分的剂量依赖性效应和副作用。石榴汁对前列腺癌恶化的作用即便存在,也是有争议的。在2006年的一项针对每天饮用一杯8盎司石榴汁的前列腺癌患者的研究中,加州大学洛杉矶分校(UCLA)的科研人员检测到了前列腺特异性抗原(PSA)水平的下降,这提示癌症恶化可能减缓。加州大学洛杉矶分校(UCLA)的科研人员并没有设法描述该研究中石榴汁效应背后可能的生物机制。

  • 克隆形成实验及划痕实验、流式细胞术操作步骤

    [size=16px]克隆形成实验[/size][size=16px]及划痕实验[/size][size=16px]、[/size][size=16px]流式细胞术[/size][size=16px]操作步骤[/size]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力软琼脂克隆形成实验适用于悬浮生长的细胞。1. 配胶液:用蒸馏水和琼脂糖粉配制浓度为 0.3% 的琼脂糖液,高压灭菌,置于42℃ 水浴锅中,目的是为了使其保持融化状态。2. 配制含 20% FBS 的 2×1640 培养基,用 0.22 ?m 的滤器过滤除菌。3. 铺下层胶:将 0.6% 的琼脂糖胶液与 2×1640 培养基等体积混合,以每孔 1.5mL 加至 6 孔板中,室温等其凝固。4. 细胞计数:将细胞用 PBS 洗一遍,离心,加入新的培养基混匀稀释,计数。H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 均以 1×104/孔铺入 6 孔板。5. 铺上层胶:将 0.3% 的琼脂糖胶液与 2× 培养基 1:1 混合,加入 100 μL 细胞悬液,混匀后,每孔加入 1.5 mL 混合液。6. 放入 37℃,5%CO2 培养箱培养,约 2-3 周后终止培养。7. 比较细胞克隆形成能力的差异,利用 Graphpad prism5 作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。平板克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力平板克隆形成实验适用于贴壁生长的细胞。1. 细胞处理:将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞,用 PBS洗一遍,用胰酶消化并计数。2. 接种细胞: 将细胞接种于 6 孔板中, SW1271-NC 、SW1271-shMSI1-1 、SW1271-shMSI1-2 接种密度为 3×103/孔,注意一定让细胞均匀分布。于 37℃,隔离CO2 静置培养 2-3 周(终止培养时间以不小于 2 周且克隆之间不发生融合为标准)。3. 出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去旧培养基, 用 PBS 清洗 2 次,用 4% 多聚甲醛固定液固定 20 min,吸除固定液,用蒸馏水清洗 2 次后加适量结晶紫染色15-20 min,用蒸馏水洗去结晶紫,自然风干,用扫描仪扫描成图片。4. 在低倍镜下计数大于 50 个细胞的克隆数。5. 计算克隆形成率。细胞划痕实验1. 用记号笔在 12 孔板底部划两条平行线做为标记。2. 将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞接种至 6 孔板。3. 待细胞汇合度为 90% 左右时,用 10μL 枪头垂直于两条平行标记线进行划痕。4. 吸除培养基,1xPBS 漂洗 2 次,并换用无血清培养基培养。5. 分别在划痕后培养 0h,12h,24h,48h,72h 观察细胞迁移情况并拍照。流式细胞术1. 收集 H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组细胞(包括培养上清中的细胞),收集 1 - 10 ×105 个细胞,用预冷 PBS 离心洗涤。用双蒸水稀释 5 ×Binding Buffer为 1 × 工作液,取 500 μl 1 × Binding Buffer 重悬细胞。2. 每管加入 5 μl Annexin V-APC 和 10 μl 7-AAD。3. 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育 5 分钟。4. 上机进行分析。

  • 单细胞凝胶电泳 标准操作规程(

    关键词:单细胞凝胶电泳目的:为便于各室单细胞凝胶电泳试验结果的可比性背景知识:略原理:在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离受到限制,因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。主体内容:操作步骤见下文主要参考文献:略操作步骤:1. 分离制备单细胞悬液:(1) 体外培养的细胞株:用胰酶消化,吹打成单细胞悬液(2) 体内脏器细胞:处死动物,取出脏器,于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。2. 胶板制备:(1) 取20~50μl于56℃水浴中保温的0.5%普通熔点琼脂糖,铺于磨沙载玻片上,形成底胶。(2) 取100~150μl 0.5%普通熔点琼脂糖加在底胶上,再于其上加盖玻片,4℃冷凝10分钟。(3) 取下盖片,取50~100μl于37℃水浴中保温的1.0%的低熔点琼脂糖与50~100μl细胞悬液(105个细胞/ml)混匀,立即铺片,加上盖玻片,4℃冷凝10分钟。(4) 去掉盖玻片,取70~100μl于37℃水浴中保温的0.5%的低熔点琼脂糖铺片,加盖玻片,4℃冷凝。3. 细胞裂解与电泳:(1) 将制备好的胶板去掉盖玻片后,浸于4℃预冷的细胞裂解液中,4℃裂解1小时。(2) 取出胶板,放入电泳槽中,浸泡在电泳液中解旋20分钟。(3) 4℃电泳20分钟(25V,300mA)。4. 中和与染色:(1) 电泳结束,将胶板浸泡于中和液中,每次15分钟,共中和两次,注意更换中和液。(2) 取出胶板,置于染色架上,滴加5μg/ml的PI,暗处染色20分钟。(3) 蒸馏水脱色15分钟。5. 镜检和分析:(1) 在荧光显微镜下观察,绿光激发吸收滤片590nm。必要时照相记录。(2) 记数观察的细胞,记录彗星细胞出现的频率,用目镜测微尺测头长与全长,计算核DNA迁移距离。* * * * *使用两层凝胶法,经裂解、DNA解旋、电泳和中和得到湿琼脂糖凝胶片。将湿琼脂糖凝胶片置于冰冷无水乙醇中脱水10分钟,后置于空气中自发干燥。每人制备2张琼脂糖凝胶片。全部操作在采血后8小时内完成,操作过程中注意避光。脱水干燥的琼脂糖凝胶片装于含有干燥剂的载片盒中运回实验室。使用50μl 30μM的溴乙锭溶液染色、照相。使用单细胞凝胶电泳软件分析所有照片,每人随机测量100个以上细胞的尾长和olive尾矩,以尾长和olive尾矩的算术均数代表个体DNA损伤情况。

  • 土柱迁移实验

    土柱迁移实验

    本人现在做土壤中有机污染气体迁移实验,在室内做了一根柱子,污染源是液相挥发形成的气体,经过土柱向上迁移,土柱顶端开口与大气连通,实验测试柱底和顶部浓度(顶部可以测出气体的),但是看文献里面的实验,都假设柱子顶端与大气连通,顶部浓度被空气稀释,浓度为0,那么我这个实验顶部能测出浓度是不就与别人的假设矛盾呢,我的实验有没有问题呢,请各位老师帮忙分析一下,谢谢。[img=,257,313]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907091523384642_8244_3230500_3.jpg!w257x313.jpg[/img]

  • 光镊技术成功捕获活体动物细胞

    为活体研究和临床诊断提供了一种全新的技术手段2013年05月09日 来源: 中国科技网 作者: 吴长锋 最新发现与创新 中国科技网讯 中国科学技术大学光学与光学工程系李银妹课题组,近日与上海交通大学魏勋斌教授合作,采用活体动物内的细胞,发展了动物体内细胞三维光学捕获技术。日前,国际著名学术期刊《自然·通讯》在线发表了这项研究成果,网站还以《医学研究:用光清除血管被堵塞的血管》为题对该研究工作进行报道。 在活的动物体内研究细胞生长、迁移、细胞及蛋白质间相互作用等生物学过程,对生命科学、医学研究及临床诊断具有重大意义,因此体内研究技术一直是活体研究热点之一。 李银妹课题组利用光镊技术,首次对活体动物内的细胞实现光学捕获。研究表明,光镊可以直接深入到活体内,对细胞进行有效操控。研究人员用光镊穿过小鼠耳朵真皮层,到达深度约50微米毛细血管中,捕获和操控血管中的红细胞。将光镊固定在血管中心,血管中快速流动的细胞经过光阱时被逐渐减速,直到一个细胞停留在光阱中,光镊将细胞捕获,并实现了三维操控。 课题组还利用光陷阱的作用聚集红细胞,人为制造出血管堵塞;针对血管中已聚集的细胞团簇,拖拽其中一个细胞引导疏通,使聚集的细胞逐渐疏散开,恢复正常血液流动,从而实施非接触手术式的血管疏通。 过去,光镊技术在生物医学领域的应用仅限于体外的单分子和细胞研究。李银妹课题组的这项研究技术能直接深入到动物活体内,对细胞进行实时观察、操控与测量,实施非接触式手术的实验取证,从而开拓了光镊技术研究活体动物新领域,为活体研究和临床诊断提供了一种全新的技术手段。(记者 吴长锋) 《科技日报》(2013-5-9 一版)

  • 细胞凋亡实验步骤及注意事项

    一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征   2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使坏死细胞着色,凋亡细胞和活细胞不着色。而一些活细胞染料由于为亲脂性物质,可跨膜进入活细胞,因而可进行活细胞染色。Hoechst33342是一种活性荧光染料且毒性较弱,它是双苯并咪唑的一种衍生物。与DNA特异结合(主要结合于A-T)碱基区),显示凋亡细胞和活细胞。凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。三、实验用品1、试剂:三尖杉酯碱(HT),300μg/ml,100mmol/L Tris-HCl(pH7.5),5mol/L EDTA缓冲液、碱性裂解液:0.2mol/L NaOH, 1%SDS、醋酸钠:3mol/L KAc(pH4.8);异丙醇;70%乙醇;溴酚蓝,蔗糖指示剂。TBE电泳缓冲液,1%琼脂糖,溴乙锭。PI母液:500μg/ml;Ho33342母液:2mmol/L。   2、仪器设备:荧光显微镜,电泳仪,电泳槽,微量加样器(1ml,100μl)0.5、1.5ml离心管,载玻片,盖玻片。四、实验材料人早幼粒白血病HL-60细胞,用含10%小牛血清的RPMI1640培养基在37℃,5%CO2条件下培养。五、方法步骤 1、三尖杉酯碱诱发HL-60细胞凋亡   (1)实验前约24小时,接种两瓶HL-60细胞,标记①、②,每瓶含约6ml培养液,置37℃,5%CO2培养箱培养。   (2)实验前约2.5小时,当细胞密度达到70%,①号瓶加入三尖杉酯碱200μl,使终浓度为1μg/ml,②号瓶中加入同等量PBS(pH7.4)作对照。共同放入培养箱中继续培养2.5小时。2、Ho33342和PI双重染色鉴别三种细胞   (1)染色:将瓶中的细胞摇匀取200μl于1.5ml的离心管中,加入Ho33342母液2μl,PI 20μl,染色15分钟。   (2)滴片:取一载玻片用双面胶围成一小室,从离心管中各取以上染色后的细胞悬液10μl,加入小室内盖上盖玻片,荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察,区别三种细胞,并注意三者比例。六、注意事项1、诱导培养HL-60细胞时间要准确;  2、荧光显微镜下观察细胞时,由于荧光易碎灭,观察时要尽量快。

  • 【求助】橄榄油迁移实验

    橄榄油迁移实验做完后,后续处理该怎么样?怎么计算迁移量是多少?样品从油中取出,怎么清理样品本身粘有的油呢?

  • 干细胞研究或迎来“黄金时代”

    10多年来,干细胞疗法一直被认为能够给那些遭受遗传和退行性疾病折磨的人带来希望。而就在几天前,随着两个研究团队在于日本横滨召开的国际干细胞研究学会(ISSCR)年会上宣告了他们在人类临床研究中取得的成果——一项聚焦于罕见的遗传神经病,另一项则着眼于老年人的视力丧失,这一希望又朝着现实迈出了一步。  美国加利福尼亚州纽瓦克市干细胞公司报告了用人体神经干细胞治疗梅氏病(PMD)所取得的鼓舞人心的研究成果。PMD是一种渐进式的致命疾病,该病通过基因突变抑制了髓鞘的正常生长,后者是大脑中包裹神经纤维的一种保护物质。缺乏髓鞘,神经信号便会流失;病人,通常是婴儿,便会经历运动协调能力退化以及其他神经病症状。据干细胞公司负责研究的副总裁Ann Tsukamoto介绍,该公司之所以选择PMD来测试其神经干细胞技术,缘于目前尚没有这种疾病的治疗方法,且通过基因检测和磁共振成像能够确诊这种疾病。她说:“这便为最有效的早期介入创造了一个机会。”  该公司建立了一个从成熟神经组织中分离出的高度纯化的神经干细胞库。研究人员将这些神经干细胞注入啮齿动物体内后,它们并没有形成肿瘤,事实上,这些细胞在小鼠的大脑中游走,并分化成不同类型的神经细胞,其中就包括分泌能够保护神经纤维的髓鞘的细胞。Tsukamoto介绍说,当神经干细胞被注入小鼠后,它们表现出了“强大的移植和迁移能力,并形成新的髓鞘”。  该公司如今正赞助对4名PMD婴幼儿患者进行该技术的初期安全试验。加利福尼亚大学旧金山分校的研究人员,向每位患者大脑中的4个区域中的每一个区域移植了7500万个神经干细胞,并随之进行了免疫抑制治疗,这样受体才不会排斥外来的细胞。Tsukamoto报告说,在试验过程中并没有出现安全隐患。此外,在18个月后进行的磁共振成像显示,在轴突周围形成了新的髓鞘,并且对患者进行的临床观察表明,他们的运动机能保持稳定或出现了小幅提升。干细胞公司如今正计划进行更大规模的试验。Tsukamoto表示,一旦这种疗法被证明是有效的,它将带来多发性硬化、大脑性麻痹和阿尔茨海默氏症的神经干细胞新疗法。  在这次会议上,神户市日本理化研究所(RIKEN)发育生物学中心的干细胞研究人员Masayo Takahashi,报告了她的研究小组在针对与年龄相关的黄斑变性(AMD)的临床前研究所取得的进展。在AMD中,视网膜色素上皮(RPE)细胞的生长出现了问题,并且位于视网膜下部的血管出现了渗漏。这些情况导致眼睛中心部位的视力下降。Takahashi的研究小组研制出一种方法,即用外科手术摘除有问题的血管,同时用源自病人自身细胞的新RPE细胞替代受损的RPE细胞。利用被称为细胞再编程的一项技术,研究人员采集了病人的皮肤细胞,并将其转化为所谓的诱导多能干(iPS)细胞,这种细胞能够分化成人体中的所有细胞。研究人员随后将iPS细胞转化为RPE细胞。由于iPS方法使用的是病人自身的细胞,因此避免了对免疫抑制药物的需求。  由Takahashi小组生成的RPE细胞表现出了真正人体RPE细胞的特征结构和基因表达模式。她报告说,将它们注入小鼠并没有引发肿瘤,并且这些细胞在移植到猴子体内后存活了6个多月。Takahashi希望在得到必要的批准后,能够在1年内开展人体试验。  英国剑桥研究学院癌症中心的干细胞研究人员Fiona Watt指出,在ISSCR上发表的这些研究结果将帮助该领域“积攒力量”。而美国哈佛医学院的干细胞科学家George Daley则更为乐观。他说,记住这次年会上报告的这些进展;并表示对明年在波士顿召开的2013年ISSCR年会充满期待。

  • 实时无标记全自动细胞分析仪让您的实验如鱼得水

    iCELLigence全自动细胞分析仪让您远离MTT实验不断重复还无法得到统一结果的烦恼,让您不再因只看到其中的一个点而损失了其它的细胞生物学信息而无计可施,因为它可以清楚的记录下细胞完整的一生! 一:全自动细胞分析仪仪器原理 iCELLigence实时无标记全自动细胞分析仪是一款新型的细胞分析平台,具有实时监测、高信息量、无需标记、全自动化、高灵敏度和高准确性等独特优点。该细胞分析仪通过嵌在E-plate板上孔底的微电子感应器阻抗变化去感受细胞的有无以及贴壁、黏附和生长程度的改变。在细胞毒性检测中,可实时、直观的反应细胞增殖、存活、凋亡、形态变化等细胞生物学变化。 二:全自动细胞分析仪仪器优势 iCELLigence全自动细胞分析仪的传感器阻抗技术在细胞分析中具有其独特的优势:它为整个的细胞毒性检测分析过程中提供了全程无损伤的监控,实时、连续显示的数据让您可以更加自信更加清楚的进行细胞毒性检测操作和其它的细胞分析,而不是假定细胞处于合适的处理阶段。一连串实时获取和显示的数据让您处理每一步结果都可以通过机理来预测,同时也可以结合全自动细胞分析仪实时的读数来决定传统终点细胞毒性检测分析的最佳时间点。只需几个简单的操作步骤您就可以获得高信息量的、直观的、准确的结果,就可以让您的细胞实验变得更加省时高效。 三:全自动细胞分析仪的应用领域基于iCELLigence全自动细胞分析仪的技术优势,该系统在基础生命科学领域具有广泛的应用,如细胞质量控制、细胞毒性检测、细胞粘附和细胞伸展等。

  • 【求助】色迁移试验中的石蜡疑问

    在包装材料中,需做色迁移相关的试验,如石蜡、酒精、水浸泡等。在这里问下各位达人,石蜡做迁移试验到底是模拟什么?其与食品接触材料中橄榄油的迁移试验有何区别?谢谢大家

  • 综述:细胞外泌体颗粒表征测量技术新进展

    何为细胞外泌体?  外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中,是细胞主动分泌的大小较为均一,直径为40~100纳米,密度1.10~1.18 g/ml的囊泡样小体。细胞外泌体携带多种蛋白质、mRNA、miRNA,参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程并且有可能成为药物的天然载体,应用于临床治疗。  然而,测量技术手段的局限限制了外泌体在这些领域的研究进展。所以,在这篇文章中,作者总结了外泌体的纯化方法(离心法、过滤离心法、密度梯度离心法、免疫磁珠法以及色谱法),比较了现存各种外泌体测量技术(电子显微镜、动态光散射技术及纳米微粒追踪分析术)在外泌体尺寸和表征研究中的应用。原文点击——综述:细胞外泌体颗粒表征测量技术新进展

  • GB31604国标中的迁移试验条件如何选择?双酚A的迁移量测定

    本人所在实验室正准备对食品接触材料及制品中的双酚A迁移量扩项;之前没有做过包装材料领域,对迁移试验不是很理解,希望得到指导!具体可参见GB31604.10-2016;如果说针对客户实验材料特定的接触对象选择食品模拟物,特定的储存条件选择试验时间及温度,那么关于迁移试验的试验如何做到?不是很明白迁移测试法、制袋法、全浸入法。。。

  • 【原创大赛】浅谈体内哺乳动物红细胞微核实验的疑难点

    [align=center]浅谈体内哺乳动物红细胞微核实验的疑难点[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心:闫敏[/align] 本人长时间从事毒理学研究和安全评价工作,主要负责一般毒理和遗传毒理,微核试验属于遗传毒理实验中的一项重要研究,在不断的摸索和实验过程中,总结了几点经验和摸索出的关键点并做以下讨论: 红细胞微核实验经过前几次的失败,总结了存在的问题和可能的影响因素如下: 1.阳性结果不明显 阳性对照使用环磷酰胺,环磷酰胺的水溶液不稳定,配制好后2-3h后有可能就会失效,并且要避光2-8℃保存。有时候实验使用的阳性对照溶液配制时间过长,可能已经失效。一般的阳性对照组溶液均为现配现用,不宜长时间放置,容易变质。 2.取材,制片过程存在问题 a.取骨髓时,肌肉组织未完全剥离,导致挤出骨髓时所含杂质太多;可以用纱布进行擦拭并剔除多余组织和肌肉,得到干净的股骨; b.取骨髓的方式有两种,用止血钳挤或者用注射器捅出骨髓,但是两种方法都不能将股骨损坏,导致取出量少,没有代表性,用小牛血清推片后,镜下阅片细胞量很少,达不到阅片效果。止血钳挤骨髓:剪去股骨大骨一端,用止血钳平行夹住股骨,然后轻轻挤压,骨髓会像牙膏一样挤出来,然后放在玻片上。注射器捅骨髓:剪去股骨两端,用镊子镊住股骨,置于小牛血清上,用注射器来回捅骨髓腔,让骨髓释放在血清中,混匀,推片。 c.推片方法:推片一定要和玻片呈角度,一般为45°,推片向内侧倾斜,向外推片,使小牛血清平铺在载玻片面上。 3.染色问题 a.染液配比浓度高,染色时间过长。一般可采用1:9的比例来配制姬姆萨染液,染色10min,染液使用的PBS缓冲液的ph很重要,保持在6.8,ph偏酸或者偏碱都有可能导致红细胞染色效果不好,无法分辨成熟红细胞和嗜多染红细胞。 b.冲洗染液时一定要彻底,及时,不能让染液残留较多。用流水沿玻片磨砂端冲洗,直至洗出的流水为无色。 以上是在做红细胞微核试验时遇见并解决的问题,科研实验和研究就是在不断的失败和改正中获得成功。

  • 流式细胞胞仪的分析及分选原理

    流式细胞胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中,每秒钟能测量数千个至数万个细胞,能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析,带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞,用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使其具有了更好的单色性与激发[/

  • 【原创大赛】食品包装容器中重金属迁移实验

    【原创大赛】食品包装容器中重金属迁移实验

    食品包装容器中重金属迁移实验 迁移实验的实质是模拟材料与食品接触的过程,因此原则上迁移试验条件应尽可能地接近材料使用的实际条件。但实际上使用条件多种多样,不可能一一试验。因食品的成分比较复杂,不同食品的基体成分可能影响测定结果,国际上普遍用一定的化学试剂来模拟食品,这种化学试剂就称为“食品模拟物”。 为了便于模拟,通常将食品分为4种类型,即非酸性、酸性、含醇及油脂类食品,我国国家标准规定分别用水、体积分数为4%的乙酸、体积分数为20%或65%的乙醇和正己烷来模拟非酸性、酸性、含醇类及油脂类食品。影响迁移试验的主要因素除食品模拟物外,便是迁移试验所选择的包装材料和食品模拟物接触的时间与温度。因此,为了寻找影响重金属析出迁移量的主要因素,以不同食品模拟物、不同pH值、不同浸提温度以及浸泡时间,分别研究各实验条件对迁移实验结果的影响。一、样品的一致性研究 虽然取样的同等规格包装容器均是同一批样品,但也可能会存在玻璃瓶、陶瓷瓶之间的个体差异性,因此,以瓶1、瓶2、瓶3为对象,随机抽取3个,以相同的浸泡条件,检测其重金属的迁移量。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251023_562708_1613776_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251024_562709_1613776_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251024_562710_1613776_3.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 从上表看出,除了同一规格的玻璃瓶、陶瓷瓶中重金属迁移量稍有差异。因此,后续迁移试验将以3批次同一规格玻璃瓶,取其平均值来进行。二、玻璃瓶、陶瓷瓶中重金属迁移量的影响因素1. 不同食品模拟物 不同食品模拟物存在着不同的迁移水平,由于食品的成分是十分复杂的,有些物质成分的存在可能会影响迁移物微量的测定,所以就需要选择较为简单的、但又能精确地反映产品特性的食品模拟物。以瓶4为研究对象,分别以水、4%乙酸溶液、50%的乙醇溶液作为食品模拟物,在其他相同的浸泡条件下,检测其中重金属的迁移量。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251025_562711_1613776_3.png http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 从上表看,在4%乙酸溶液介质下,砷、锑、锡重金属的迁移量均是最大值,汞的含量太低,相对于水、乙醇、基酒介质,在乙酸介质下,重金属的溶出量最多,这也正说明国家标准方法上采用4%乙酸进行。2. 不同乙酸浓度 以瓶5为研究对象,分别以不同的乙酸浓度,1%乙酸(pH2.7)、4%乙酸(pH2.4)、10%乙酸(pH2.2)、40%乙酸(pH1.9)浸泡,在其他相同条件下,检测其重金属迁移量的变化情况。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251027_562714_1613776_3.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 从上表看出,重金属迁移量并不完全是随着浸泡液乙酸浓度的升高而升高,这与很多文献中报道的不太一致,有可能与溶出饱和度有关。3. 浸泡时间 以瓶6为对象,使用4%的乙酸溶液浸泡,分别浸泡不同时间,在其他相同条件下,检测其中重金属的迁移量。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251028_562715_1613776_3.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 随着浸泡时间的不断延长,各重金属迁移量也随之升高。4. 浸泡温度 以瓶7为对象,使用4%的乙酸溶液浸泡,分别浸泡不同温度,在其他相同条件下,检测其中重金属的迁移量。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508251028_562716_1613776_3.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 从上表看出,随着浸泡温度的升高,容器中重金属的迁移量也随之升高。温度的升高加快了溶出速率,使氢离子(或水合氢离子)与陶瓷中重金属离子的离子交换反应加速,进而加快了重金属迁移速率。

  • 迁移(溶出)试验的必要性

    比如一个指甲大小的橡胶密封圈装在一个5L的容器上。就算这个密封圈全部溶解到5L的食物中,算这个迁移量,也低于标准限值,还有必要做迁移(溶出)试验吗?

  • 实验室菜鸟的细胞培养心得

    作为一只刚进实验室的菜鸟把自己遇到的东东总结一点发出来,抛砖引玉吧,为即将进实验室的朋友些资料,同时欢迎老鸟们指正。1、在实验室登记领试剂和药品pbs 1640 Gbico的FBS 台盼蓝 计数板 酒精灯 胶塞 封口胶 消毒的喷剂 记号笔 镊子 标签 饭盒 消毒时包饭盒的布 冻存管 冻存剂 离心管 培养瓶 6孔板 96空板 吸管 吸球。pbs 1640 Gbico的FBS 我都是买的现成的,就是那些实验室老师用原料配好了来卖的那种,我是害怕自己本来就是一个新手,为省那钱自己配,别污染了多的事情都来了,当然很多老鸟都自己配,别鄙视我哈。2、换液a 开瓶盖的时候,网上的视频里是用镊子开的,但是现在用的瓶塞多是新的,稍微一使劲,胶塞就会被扯破(我这周换了好多塞子了),扯破了的塞子把瓶子包不住,有污染的危险,特别是冰箱里试剂装得很拥挤的时候。方法:切忌男生像我一样用力过猛,如果实在要扯烂,干脆就用手去扯塞子,不过严格按照翻起塞子-烧-扯-再烧就是了,完全没有污染的顾虑b 加液体的时候很很容易就吸到赛棉花那一截去了(很多熟练的都不塞棉花了,他们力度控制得好,只要不吸过头,完全ok的),这时候,就不要再吝惜你的培养基了,全部甩到废液缸里去吧,毕竟吸球没有消毒(我们这里是这样的哈),浸湿过了棉花就可能沾到吸球。c 往培养瓶里加pbs、FBS等液体时候,手抖得厉害。不是滴在瓶口,瓶壁上,就是滴在超净台上。方法:滴在瓶口的一定要烧干,不然小心污染,瓶壁和台子上的可以用消毒后的干净纱布擦拭;另外就是自己找个空瓶子,自己练习加液体,熟能生巧。3、传代a 消化细胞的时间真的是不同细胞就不同,我的细胞是消化5分钟,还是在孵箱里放着的,拿出来以后还要又拍又晃的,朋友的一分钟就全飘起来了,如果你是第一次做,或者你们实验室没有做过这个细胞,您就最好一直在镜下看着细胞,摸一下时间(用表记录时间,不光是“摸”哈),消化过头的细胞,长得不好,如果你是外面买的细胞,就又可能浪费经费了。另外,认真分析了一下,我的癌细胞稍微比朋友的正常组织的细胞消化得慢,他的细胞长得慢,细胞少(毕竟正常细胞不能和癌细胞比),3天才传第一代,我的都2代的瓶子了都铺满60%,他的贴的也不怎么紧。b 离心离心的时候,因为忙着把刚终止了消化的细胞拿去离心,很容易忘记在您的离心管上标记,配平完了,机子都转到1000转了,才想起来,也没法子了。方法:实在是忘记了标记,用于配平的管子里的液体没有你刚做完消化的液体清亮,你反正选最清亮的那个就是了。c 分装的时候,我一传3,加上离心管的盖子,满桌子都是瓶盖,很容易搞错,尤其是在和别个拼台子做实验的时候,更是拥挤,千万要放好,不然空间一拥挤,你取东西的时候很容易从这些面朝上的盖子塞子上面经过,就有可能污染了,虽然盖盖子的时候还要过火烧,但是说实话,烧那几下,连手指都烧不烫,咱还是从不污染的角度做起吧。4、我犯其他的傻a 进细胞间去照台子(说实话,是去抢台子,别人要是紫外照起了,就只能等他们做完再照,就又要等半小时),结果口罩帽子都忘记了带,挨了顿批评。b 吸管在酒精灯上过火烧几次的时候,吸管尖碰在了灯芯旁的酒精瓶铜的那部分。c 倒老的培养液的时候才发觉,废液缸没拿进细胞间。跑出去再拿。记得重新消毒手,而且我离开台子的时候,很怕其他人经过污染我已经打开了的各个试剂的瓶子。不放心的只有盖好再走,再进来时再从头弄,浪费时间。5、其他要注意的问题a 我看见也是个新进实验室的女生,双手悬在空中费劲的塞胶塞(估计也是新胶塞,太紧了,塞不大进去),结果手一滑,整瓶胰酶倒在超净台上。(还好不是加GbicoFBS的1640,呵呵),倒了记得把台子擦干净,上次不知道是谁把什么有机溶剂都倒在台子上了,我一去,还沾手,郁闷,自己做好自己分内的,别让实验室里其他的人说你是个污染源或者细胞杀手。b 某天朋友准备换液,结果就把培养基pbs胰酶全都放在37摄氏度水浴里,结果后来有事走了,只把照台子时候放那的东西收拾了,5个小时后才突然想起,只好暂时不用那个培养基了,重新再用新的。养到后面细胞多了,不怕细胞死的时候,还是可以试验着用用那瓶培养基的。

  • 【原创大赛】顺铂的细胞毒性实验及细胞形态学观察

    [font='times new roman'][size=18px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]顺铂的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]细胞毒性实验及细胞形态学观察[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])当[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H1299[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞融合到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]80%-90 %[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]左右,消化处理细胞并计数。将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H1299[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞以[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔的比例接种到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中,保证细胞分布均匀,培养过夜使细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]贴[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]壁。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])分别配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]M[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]含顺铂[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基,沿着侧壁加入到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中,每孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],每个浓度设置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个复孔。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板外围加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]缓冲液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],防止边缘效应[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板放入培养箱培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]天后,用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MTS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]法测定细胞活力,每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] MTS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]试剂,全程避光,继续培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。利用酶标仪[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]490 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]波长检测各孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值。用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODtreat[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODcontrol[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表征细胞活力,计算细胞活力。细胞活力测定数据是基于三次独立的实验。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在细胞迁移过程中,细胞内上皮间充质转化([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])相关蛋白的表达量会发生相应的变化。为了检测外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体与细胞孵育时间对[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白的影响,实验[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]测定了加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]个外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体颗粒后[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]第[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白的表达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]量[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]变化[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。如图所示,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白的表达量在第[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天逐渐减少至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]最初[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.7[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]倍。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]N-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Vimentin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白在第[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天的表达量分别增加了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]倍和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]倍。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以上结果说明[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与细胞共培养[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天后,细胞内[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白变化更为显著。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012221112395_9347_5111497_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']外[/font][font='times new roman']泌[/font][font='times new roman']体与[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞孵育时间对[/font][font='times new roman']EMT[/font][font='times new roman']相关蛋白的影响[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]为了进一步在蛋白水平上验证外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以促进细胞迁移,我们提取共育[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天的细胞蛋白质,检测[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白的表达变化。实验结果显示,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]随着外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体浓度的增加,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白表达降低,而[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]N-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Vim[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]en[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]tin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白表达增加。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]上述[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结果可进一步证明捕获的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以诱导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]迁移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]具有良好的生物活性。[/size][/font]

  • 实验室糗事——复苏细胞

    一天,我准备做细胞培养实验, 中午安排个师妹去准备下复苏细胞。晚上她就告诉我复苏好了, 我就奇怪了, 血清4度化冻怎么这么快?就问她怎么操作的。原来她直接把血清从-20度丢到37度的水里化冻的, 结果复苏的细胞一瓶也没活……http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

  • 广州永诺生物科技有限公司刚刚发布了细胞技术员职位,坐标广州市,速来围观!

    [b]职位名称:[/b]细胞技术员[b]职位描述/要求:[/b]岗位职责:1.完成细胞培养、增殖、迁移、侵袭等常规细胞功能实验;2.完成慢病毒、腺病毒包装实验;3.完成Crispr cas9细胞敲除技术;4.协助销售、项目部同事解决客户项目相关售前售后疑问;5.完成上级安排的其它任务。岗位要求:1.生物医药专业本科及以上;2.有慢病毒包装或Crispr cas9细胞敲除技术经验优先;3.能针对技术出现的问题主动查询资料并解决问题;4.良好的沟通表达抗压能力。[b]公司介绍:[/b] 公司简介 广州永诺生物科技有限公司成立于2010年,总部位于广州国际生物岛,旗下有广州永诺医学检验所、广东顺德永诺生物科技有限公司等子公司,是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积3000m2,硕、博士以上学历员工占比近40%,团队骨干曾参与多项国家973、863肿瘤研究项目,具备丰富的科研和产品开发经验。目前与华南地区包括中山大学附属各...[url=https://www.instrument.com.cn/job/user/job/position/49351]查看全部[/url]

  • 细胞样品前处理

    因做细胞吞噬微球的实验,样品处理过程中会用到乙醇脱水步骤,又因我们的微球遇乙醇会变性,请问还有可代替乙醇的脱水剂吗?请各位同行前辈指教!

  • GB 4806.7-2016食品接触用塑料材料及制品 总迁移量的“迁移试验条件”该如何选择

    如题,GB 4806.7-2016《食品接触用塑料材料及制品 》中总迁移量限量≤10mg/dm2,采用方法为GB 31604.8,那么总迁移量的“迁移试验条件”该如何选择??是不是不能从GB 31604.1-2015《食品接触材料及制品迁移试验通则》中“5.1“特定迁移试验条件”中选择,只能从“5.2 总迁移试验条件”选择。麻烦做过的同仁帮忙解答下,迁移试验的条件有点晕,不知道该怎么选择。。。GB 31604.1-2015中“特定迁移试验条件”和“总迁移试验条件”有什么区别,适用范围又是什么?

  • 【转帖】流式细胞仪实验方法

    流式细胞仪实验方法[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=39453]流式细胞仪实验方法[/url]

  • 细胞培养实验室常用的基本仪器设备-离心机

    [b][font=宋体]细胞培养实验室组建的基本要求[/font]:[/b]1[font=宋体]、细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。[/font]2[font=宋体]、细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。[/font]3[font=宋体]、细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,为[/font]10[font=宋体]万级洁净环境的洁净室。而洗刷消毒工作设在洁净室外,避免物品污染洁净室内环境。细胞洁净室需要一个空调系统并对外界保持一定的正压。[/font]4[font=宋体]、解剖实验室主要用于对器官组织的分离,需要有无菌操作台、解剖显微镜、各种手术器材等。[/font] [align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/2018-10-12/301.html][img=实验室离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/luodishigaosulengdonglixinji/2019-05-14/4b60dacaa256bcc4fe665e2eb3536c0a.jpg[/img][/url][/align][align=center][b]智能台式高速冷冻实验室离心机 3H24RI[/b][/align][font=宋体]组织细胞培养室除一般实验室的普通常规设备外,尚有一些特殊需要的设备。基本可分为两大类:[/font][font=宋体]第一类为常用的基本设备;[/font][font=宋体]第二类为较高级的特殊设备。[/font][b]1. [font=宋体]细胞培养实验室常用的基本仪器设备[/font]1.[font=宋体]显微镜:[/font][/b][font=宋体]倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一,便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。[/font][b]2.[font=宋体]培养箱:[/font][/b][font=宋体]体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,大多数情况下,最适温度是[/font]37[font=宋体]℃,温差变化一般不应超过±[/font]0.5[font=宋体]℃,细胞在温度升高[/font]2[font=宋体]℃[/font] [font=宋体]时,持续数小时即不能耐受,[/font]40[font=宋体]℃以上将很快死亡。因此需要有能控制温度的培养箱,如具有较高灵敏度的恒温培养箱及[/font]CO2[font=宋体]培养箱。[/font][b]3.[font=宋体]干燥箱:[/font][/b][font=宋体]用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。[/font][b]4.[font=宋体]水纯化装置:[/font][/b][font=宋体]细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水:即使是用于玻璃器皿的冲洗,也应使用二次以上蒸馏水。[/font][b]5.[font=宋体]冰箱:[/font][/b][font=宋体]细胞培养室必须配备。[/font]a[font=宋体]、普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水等培养用的物品及短期保存组织标本。[/font]b[font=宋体]、低温冰箱([/font]-20[font=宋体]℃)——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂,如酶、血清等。[/font][b]6.[font=宋体]细胞冷冻储存器:[/font][/b][font=宋体]储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小,取放使用方便及液氮挥发量(经济)三种因素。[/font][b]7.[/b][font=宋体][url=http://www.hexiyiqi.com/][b]离心机[/b][/url][b]:[/b]进行细胞培养时,常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作,通常需要使用[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/]实验室离心机[/url]。一般可常规配置[/font]4000rpm[font=宋体]的国产台式离心机,例如细胞沉降,使用[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/]低速离心机[/url]即可,离心力过大有时可能引起细胞的损伤。[/font][align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/69.html][img=低速离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/0e080cd46b2ee061b55caabaaee8cbf2.jpg[/img][/url][/align][align=center][b]台式低速离心机TD5A[/b][/align][b]8.[font=宋体]天平:[/font][/b][font=宋体]常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。[/font][b]9.[font=宋体]消毒器:[/font][/b][font=宋体]一般为高压蒸汽灭菌锅,直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。[/font][b]10.[font=宋体]滤器:[/font][/b][font=宋体]目前细胞培养工作中采用的培养用液,包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。目前常使用的滤器有玻璃滤器和微孔滤器,各种滤器有其使用原理和特点。[/font][b][font=宋体]常用的培养器皿:[/font][font=宋体]培养用器皿[/font][/b][font=宋体]是[/font][font=宋体]供细胞接种、生长等用的器皿,可由透明度好、无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。[/font][font=宋体]细胞培养中需要的各种耗材[/font],[font=宋体]各类细胞培养板,细胞培养瓶,平皿移液管等。[/font][b][font=宋体]培养瓶[/font][/b][font=宋体]:由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量([/font]ml[font=宋体])表示,如[/font]250ml[font=宋体]、[/font]100ml[font=宋体]、[/font]25ml[font=宋体]等;进口培养瓶则多以底面积([/font]cm2[font=宋体])表示。[/font][b][font=宋体]培养皿:[/font][/b][font=宋体]由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有[/font] 10cm[font=宋体]、[/font]9cm[font=宋体]、[/font]6cm[font=宋体]、[/font]3.5cm[font=宋体]等。[/font][font=宋体]多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大量样本,易于进行无菌操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:[/font]96[font=宋体]孔、[/font]24[font=宋体]孔、[/font]12[font=宋体]孔、[/font]6[font=宋体]孔、[/font]4[font=宋体]孔等。[/font][b][font=宋体]培养操作有关的器皿[/font][font=宋体]贮液瓶:[/font][/b][font=宋体]常见的为蓝盖瓶,主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格,如[/font]1000ml[font=宋体]、[/font]500ml[font=宋体]、[/font]250ml[font=宋体]、[/font] 100ml[font=宋体]、[/font]50ml[font=宋体]、[/font]5ml[font=宋体]等。[/font][b][font=宋体]吸管:[/font][/b][font=宋体]主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有[/font]1ml[font=宋体]、[/font]2ml[font=宋体]、[/font]5ml[font=宋体]、[/font]10ml[font=宋体]等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。[/font][b][font=宋体]加样器([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url])[/font][/b][font=宋体]:分为微量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]电动[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。可保证实验样品(或试剂)含量精确,重复性良好。[/font][b][font=宋体]其他用品:[/font][/b][font=宋体]尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的试管,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管顶部的橡胶吸头,封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗,超净工作台使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。[/font][b][font=宋体]器械[/font][/b][font=宋体]主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),用于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料;眼科虹膜小剪(弯剪或直剪),用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、眼科镊(弯、直),用于持取无菌物品(如小盖玻片)夹持组织等;口腔科探针或代用品,用以放置原代培养之组织小块。[/font][b]2[font=宋体]、细胞培养实验室特殊设备[/font][/b][font=宋体]细胞培养实验室除了应配备上述的常用基本设备以外,如有条件,可添置一些特殊或先进的设备仪器,以便更有效、更精确、更深入地进行实验室工作。例如:[/font][font=宋体]([/font]1[font=宋体])酶联免疫检测仪——可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。[/font][font=宋体]([/font]2[font=宋体])[/font] [font=宋体]超低温冰箱([/font]-80[font=宋体]℃)——便于储存某些试剂及标本。[/font][font=宋体]([/font]3[font=宋体])旋转培养器——用于某些特殊细胞或需要收获大量细胞的培养。[/font][font=宋体]([/font]4[font=宋体])[/font] [font=宋体]荧光显微镜——进行荧光染色样本的观察。[/font][font=宋体]([/font]5[font=宋体])[/font] [font=宋体]流式细胞仪——可更精确及快速检测细胞。[/font][font=宋体]([/font]6[font=宋体])用于检测细胞培养条件的各种仪器,例如专门为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培养分析仪、手提式[/font]CO2[font=宋体]浓度测定仪等。[/font][b][font=宋体]其余仪器[/font][/b][font=宋体]对于细胞实验还可能需要振荡器及磁力搅拌器用于混匀液体;还有一些沾满细胞的难清洗的不锈钢类或玻璃类器皿,则需要超声波清洗机的帮助;如果涉及免疫实验,肯定需要冰浴,碎冰的需求量大的话,则需要购买制冰机;另外破碎细胞可能会需要超声波细胞破碎仪;[/font]

  • 基于阻抗方法实时无标记、长时间细胞分析系统

    基于阻抗方法实时无标记、长时间细胞分析系统

    [align=center][font='Segoe UI', sans-serif] -[/font]基于阻抗方法实时、无标记、长期监测细胞表型[/align][align=center]([color=#333333]可用于[/color][b][font=宋体][color=#F76464]细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464](GPCR/CFTR)[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、细胞间相互作用[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464] ([/color][/font][font=宋体][color=#F76464]屏障功能[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464])[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、病毒学研究及细胞迁移[/color][/font][/b][color=#333333]等细胞表型研究。[/color])[/align][font=等线][size=16px]细胞表型是涉及基因和蛋白表达的多个细胞过程的集合体,这些过程导致细胞特定的形态和功能。细胞表型检测主要类型有:[b]细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭、活力、信号通路及屏障功能[/b]等。[/size][/font][font=等线][/font][align=left][b][font=宋体][color=#333333]基本原理:[/color][/font][/b][font='Segoe UI',sans-serif][color=black] [/color][/font][font=宋体][color=black]将细胞样本置于[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=black]CytoView-Z[/color][/font][font=宋体][color=black]阻抗板中(底部埋入电极的[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=black]96[/color][/font][font=宋体][color=black]孔培养板)进行培养,当细胞贴附于电极并伸展开后,将微小的电信号施加于电极上,细胞间形成的联接将阻挡这些电信号的通过,导致阻抗值的读数增加,而细胞结构形态上的细微改变(比如源于受体介导的信号传递或细胞形态学变化)也会影响阻抗值。也就是说,细胞的贴壁、黏附、增殖及形变等过程都会引起阻抗的变化,细胞的增殖数量与阻抗呈现一个正相关的关系。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black][img=,553,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/12/202112291044022777_5012_4146479_3.jpg!w553x180.jpg[/img][/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]阻抗检测会计算有多少电信号(上图中青色箭头所示)被电极-细胞的界面所阻挡。当电极未被覆盖时,电信号能轻松穿过,这时阻抗值比较低。当细胞盖住电极时,能够通过的电信号就变少了,相应的阻抗值就会增大。当细胞死亡或者脱离电极时,阻抗值就会恢复到基线水平。[/color][/font][/align][font=等线][/font][align=left][font=宋体][color=black]阻抗方法相比于传统的标记方法,具有[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]1.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]灵敏度高[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]能够检测出成像技术难以捕捉的、微小的细胞形态、构象变化;[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]2.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]长时间持续监测[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]不会错过药物反应时间框,在给药前可通过增殖曲线判断细胞状态;[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]3.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]无标记、原位[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]测量过程完全不会影响细胞生物学特性,无需优化抗体用量、染料浓度;[/color][/font][/align][align=left][b][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464]4.[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]孵育时间等参数[/color][/font][/b][/align][align=left][font=宋体][color=black]自动采集数据,中间无需手动操作。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]目前阻抗平台可用于[/color][/font][b][font=宋体][color=#F76464]细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464](GPCR/CFTR)[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、细胞间相互作用[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464] ([/color][/font][font=宋体][color=#F76464]屏障功能[/color][/font][font='Segoe UI',sans-serif][color=#F76464])[/color][/font][font=宋体][color=#F76464]、病毒学研究及细胞迁移[/color][/font][/b][font=宋体][color=black]等细胞表型研究。[/color][/font][/align]

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