细菌菌落

今天出报告时遇到一个这样的问题，我用1000-2018做细菌总数，但地下水的标准钟又叫菌落总数，我想问这个是不是相同的，是不是只是叫法不同而已，我看地下水上的方法也是平皿计数法，那我测出来的是叫细菌总数还是菌落总数呢？我们资质附表中只有细菌总数，客户指明要测菌落总数，那我能不能出这个报告呢？

细菌和菌落总数的区别

菌落总数跟细菌总数是一个意思吗

各位同仁大家好： 小女子我刚进入食品检测这一行业，还望大家多多指教! 昨天我们实验室在做菠萝丁的微生物检测，发现检测细菌总数的培养皿中出现大量的红色菌落，想请问下，这红色菌落是什么物质，你们有没有遇见过这样的情况呢？ 微生物实验会不会有被感染之类的危险呢？望大家多多指教！谢谢！

[size=4][font=黑体]我们都知道：菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？水质：若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。食品：若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

求孟加拉红培基上酵母菌与细菌菌落的鉴别方法，最好附图说明，谢谢各位了先

一、菌落总数介绍：　　菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。　　菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。　　菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。二、检验方法　　菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。　　基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。　　国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。　　检验方法参见：　　GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》　　SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：　　1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。　　固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。　　用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。　　另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。　　2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。　　操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。　　3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。　　4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。　　在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。　　为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。　　5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。（二）倾注培养　　1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。　　将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。　　待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。　　2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。　　倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。　　3．为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过[

细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。转

食品中检出的菌落总数，就是否代表该食品上所有的细菌数？为什么？

请问一下坛里的老师们，菌落是一块一块的，要做染色镜检，如何碾碎，用接种环碾碎不了，各位亲用什么办法弄碎后，涂片均匀了？ 有没有这方面的 设备。

[align=center][b]卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度评定[/b][/align][align=center]贾 亮[/align][align=center]山西省产品质量监督检验研究院山西太原030012[/align][align=center][/align][align=left]1 引言[/align][align=left]测量不确定度是与测量结果相关联的参数，用以表征合理赋予被测量值的分散性[sup][/sup]。本文适用于卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度的评定，这里的卫生纸是采用标准GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》生产的产品。[/align][align=left]2 测量参数概述[/align][align=left]主要仪器：电子天平（220g）、量筒（250mL）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url](1mL)、恒温培养箱。[/align][align=left]参数：细菌菌落总数。[/align][align=left]3 原理及方法[/align][align=left]依据GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》中附录A.3.1细菌菌落总数的检测进行卫生纸中的细菌菌落总数的检验。在超静工作台上用无菌方法开启4个小包装，从中称量样品10g，剪碎后加入到200mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。待上述样液自然沉降后取上清液做菌落计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂20mL，倒入平皿中，充分混匀。待琼脂凝固后翻转平皿，置36℃培养温箱内培养48 h。然后计算平皿上的细菌菌落数目[sup][/sup]。[/align][align=left]5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数A，稀释度为[img=,17,17]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]，卫生纸中的细菌菌落总数X按下式计算：[/align][i][/i][align=left][i]X[/i]=[i]A[img=,20,41]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][/i][/align][align=left]式中：X----细菌菌落总数，单位为CFU/g；[/align][align=left]A----5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数, 单位为CFU/g；[/align][align=left][img=,17,17]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]----稀释度，此处稀释度为20。[/align][align=left]4 结果与讨论[/align][align=left]4.1测量不确定度的来源[/align][align=left]依据前述卫生纸中细菌菌落总数的检测原理及测量模型，结合检测经验，分析卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度来源主要有：[/align][align=left]4.1.1由卫生纸中细菌菌落总数测量的重复性引入的不确定度。[/align][align=left]4.1.2由天平称量时引入的不确定度。[/align][align=left]4.1.3由量筒量取生理盐水时引入的不确定度。[/align][align=left]4.1.4由[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]移取样液时引入的不确定度。[/align][align=left]以上不确定度来源，第一种来源可以用Ａ类不确定度评定，后三种来源可用B类不确定度评定。[/align][align=left]4.2测量不确定度评定[/align][align=left]4.2.1 A类不确定度评定[/align][align=left]卫生纸在检测细菌菌落总数时，每个试样需要检测5份，计算其平均值后报出细菌菌落总数。本次报告中，由同一人员对15个样品进行重复性检测。用菌落总数的平均值直接计算标准偏差，因其数据的发散性较大，计算出的样本标准差会很大，不符合正态分布规律，所以对检验结果取其对数，然后计算出样本检验结果对数值的均值和重复性标准偏差，其数据处理过程见下表1：[/align][align=left]检验结果对数值平均值：[img=,48,29]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] =2.74[/align][align=left]检验结果对数值的重复性标准偏差为：[/align][align=left]S=[img=,152,49]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] =0.058[/align][align=left]检验结果对数值平均值的重复性标准偏差为：[/align][align=left]S‘= S/[img=,28,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] =0.0151[/align][align=left][/align][align=left][b]表1： 卫生纸中细菌菌落总数检测结果[/b][/align][align=left] [/align][table=789][tr][td] [align=center]序号[/align] [/td][td] [align=center]A[sub]1[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]2[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]3[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]4[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]5[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center][i]X[/i][/align] [/td][td] [align=center][img=,50,22]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][/align] [/td][td] [align=center]（[img=,44,19]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] -[img=,44,19]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]）[sup]2[/sup][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]32[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]34[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]126[/align] [/td][td] [align=center]504[/align] [/td][td] [align=center]2.70[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]29[/align] [/td][td] [align=center]24[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][td] [align=center]21[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]120[/align] [/td][td] [align=center]480[/align] [/td][td] [align=center]2.68[/align] [/td][td] [align=center]0.0036[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]34[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]135[/align] [/td][td] [align=center]540[/align] [/td][td] [align=center]2.73[/align] [/td][td] [align=center]0.0001[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]32[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]26[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]143[/align] [/td][td] [align=center]572[/align] [/td][td] [align=center]2.76[/align] [/td][td] [align=center]0.0004[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]20[/align] [/td][td] [align=center]26[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]153[/align] [/td][td] [align=center]612[/align] [/td][td] [align=center]2.79[/align] [/td][td] [align=center]0.0025[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] 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[align=center]2.78[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]42[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]121[/align] [/td][td] [align=center]484[/align] [/td][td] [align=center]2.68[/align] [/td][td] [align=center]0.0036[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]27[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][td] [align=center]46[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][td] [align=center]139[/align] [/td][td] [align=center]556[/align] [/td][td] [align=center]2.75[/align] [/td][td] [align=center]0.0001[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]11[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][td] [align=center]53[/align] [/td][td] 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0.0001/[img=,19,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]=0.00058g、1.0/[img=,19,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]=0.58mL。初始液向平皿转移过程中，使用1mL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]量取1mL初始液至平皿中，根据JJG646-2006《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]》其容量允许差分别为0.015mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为0.015/[img=,19,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]=0.0087mL。[/align][align=left]稀释过程中相对标准不确定度：[/align][align=left]u[sub]B[/sub]=1/2 =0.0100[/align][align=left]4.3 合成不确定度[/align][align=left]合成相对标准不确定度：u [sub]cr[/sub]= ［0.01512+ 0.01002 ］1/2=0.10[/align][align=left]合成标准不确定度：u [sub]C[/sub]=2.74×0.10= 0.27[/align][align=left]4.4测量不确定度报告[/align][align=left]为保证置信概率达95%，取包含因子k=2，扩展不确定度为：U=ku[sub]C[/sub]=2×0.27=0.54。依据RB/T151-2016《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》规定，本次测量结果报告为：（2.74 log10±0.54 log10）CFU/g（包含因子k=2），转换成自然值取整数为200 CFU/g ~ 1900CFU/g（包含因子k=2）。[/align][align=left]5 结论[/align][align=left]影响卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度的因素比较多，除上述不确度来源外，还有培养基试剂、样品、次级取样、基质、随机误差等方面的来源，但它们对合成标准不确定度的贡献较少[sup][/sup]，所以本文主要对4.1中提到的不确定度来源进行分析。经过上述结果与讨论可以得出，重复性不确定度产生的主要原因是试验操作，因此在平常检验过程中要注意人员操作的规范性。[/align]

菌落总数的快速测定方法1 适用范围：可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理：将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑（TTC）显色剂等加载在试纸片，经加样、培养后，细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑，通过计数报告结果。3 操作方法3.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇（均质）做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的纸片上，轻轻将上盖膜放下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。4 结果判断与计数：4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10个～100个）的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升）样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见下表中例次1）。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告（见下表中例次2和例次3）。4.2.3若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数（见下表中例次4）。4.2.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值（见下表中例次5和例次6）。 例次稀释度两稀释 度之比选定计数 稀释度报告方式 （个/g或 个/mL）10-110-210-31 2 3 4 5 6158 208 265 98 8 295

[align=center][b]卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度评定[/b][/align][align=center]贾 亮[/align][align=center]山西省产品质量监督检验研究院山西太原030012[/align][align=center][/align][align=left]1 引言[/align][align=left]测量不确定度是与测量结果相关联的参数，用以表征合理赋予被测量值的分散性[sup][/sup]。本文适用于卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度的评定，这里的卫生纸是采用标准GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》生产的产品。[/align][align=left]2 测量参数概述[/align][align=left]主要仪器：电子天平（220g）、量筒（250mL）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url](1mL)、恒温培养箱。[/align][align=left]参数：细菌菌落总数。[/align][align=left]3 原理及方法[/align][align=left]依据GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》中附录A.3.1细菌菌落总数的检测进行卫生纸中的细菌菌落总数的检验。在超静工作台上用无菌方法开启4个小包装，从中称量样品10g，剪碎后加入到200mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。待上述样液自然沉降后取上清液做菌落计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂20mL，倒入平皿中，充分混匀。待琼脂凝固后翻转平皿，置36℃培养温箱内培养48 h。然后计算平皿上的细菌菌落数目[sup][/sup]。[/align][align=left]5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数A，稀释度为[img=,17,17]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]，卫生纸中的细菌菌落总数X按下式计算：[/align][i][/i][align=left][i]X[/i]=[i]A[img=,20,41]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][/i][/align][align=left]式中：X----细菌菌落总数，单位为CFU/g；[/align][align=left]A----5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数, 单位为CFU/g；[/align][align=left][img=,17,17]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]----稀释度，此处稀释度为20。[/align][align=left]4 结果与讨论[/align][align=left]4.1测量不确定度的来源[/align][align=left]依据前述卫生纸中细菌菌落总数的检测原理及测量模型，结合检测经验，分析卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度来源主要有：[/align][align=left]4.1.1由卫生纸中细菌菌落总数测量的重复性引入的不确定度。[/align][align=left]4.1.2由天平称量时引入的不确定度。[/align][align=left]4.1.3由量筒量取生理盐水时引入的不确定度。[/align][align=left]4.1.4由[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]移取样液时引入的不确定度。[/align][align=left]以上不确定度来源，第一种来源可以用Ａ类不确定度评定，后三种来源可用B类不确定度评定。[/align][align=left]4.2测量不确定度评定[/align][align=left]4.2.1 A类不确定度评定[/align][align=left]卫生纸在检测细菌菌落总数时，每个试样需要检测5份，计算其平均值后报出细菌菌落总数。本次报告中，由同一人员对15个样品进行重复性检测。用菌落总数的平均值直接计算标准偏差，因其数据的发散性较大，计算出的样本标准差会很大，不符合正态分布规律，所以对检验结果取其对数，然后计算出样本检验结果对数值的均值和重复性标准偏差，其数据处理过程见下表1：[/align][align=left]检验结果对数值平均值：[img=,48,29]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] =2.74[/align][align=left]检验结果对数值的重复性标准偏差为：[/align][align=left]S=[img=,152,49]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] =0.058[/align][align=left]检验结果对数值平均值的重复性标准偏差为：[/align][align=left]S‘= S/[img=,28,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] =0.0151[/align][align=left][/align][align=left][b]表1： 卫生纸中细菌菌落总数检测结果[/b][/align][align=left] [/align][table=789][tr][td] [align=center]序号[/align] [/td][td] [align=center]A[sub]1[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]2[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]3[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]4[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[sub]5[/sub][/align] [/td][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center][i]X[/i][/align] [/td][td] [align=center][img=,50,22]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][/align] [/td][td] [align=center]（[img=,44,19]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img] -[img=,44,19]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]）[sup]2[/sup][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]32[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]34[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]126[/align] [/td][td] [align=center]504[/align] [/td][td] [align=center]2.70[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]29[/align] [/td][td] [align=center]24[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][td] [align=center]21[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]120[/align] [/td][td] [align=center]480[/align] [/td][td] [align=center]2.68[/align] [/td][td] [align=center]0.0036[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]34[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]135[/align] [/td][td] [align=center]540[/align] [/td][td] [align=center]2.73[/align] [/td][td] [align=center]0.0001[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]32[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]26[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]143[/align] [/td][td] [align=center]572[/align] [/td][td] [align=center]2.76[/align] [/td][td] [align=center]0.0004[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]20[/align] [/td][td] [align=center]26[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]45[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]153[/align] [/td][td] [align=center]612[/align] [/td][td] [align=center]2.79[/align] [/td][td] [align=center]0.0025[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]34[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]40[/align] [/td][td] [align=center]26[/align] [/td][td] [align=center]152[/align] [/td][td] [align=center]608[/align] [/td][td] [align=center]2.78[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]33[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][td] [align=center]130[/align] [/td][td] [align=center]520[/align] [/td][td] [align=center]2.72[/align] [/td][td] [align=center]0.0004[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]37[/align] [/td][td] [align=center]32[/align] [/td][td] [align=center]29[/align] [/td][td] [align=center]150[/align] [/td][td] [align=center]600[/align] [/td][td] [align=center]2.78[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]42[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]121[/align] [/td][td] [align=center]484[/align] [/td][td] [align=center]2.68[/align] [/td][td] [align=center]0.0036[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]27[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][td] [align=center]46[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][td] [align=center]139[/align] [/td][td] [align=center]556[/align] [/td][td] [align=center]2.75[/align] [/td][td] [align=center]0.0001[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]11[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][td] [align=center]53[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]153[/align] [/td][td] [align=center]612[/align] [/td][td] [align=center]2.79[/align] [/td][td] [align=center]0.0025[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]12[/align] [/td][td] [align=center]26[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]36[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]150[/align] [/td][td] [align=center]600[/align] [/td][td] [align=center]2.78[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]14[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]33[/align] [/td][td] [align=center]103[/align] [/td][td] [align=center]412[/align] [/td][td] [align=center]2.61[/align] [/td][td] [align=center]0.0169[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]14[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]34[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]40[/align] [/td][td] [align=center]126[/align] [/td][td] [align=center]504[/align] [/td][td] [align=center]2.70[/align] [/td][td] [align=center]0.0016[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]15[/align] [/td][td] [align=center]23[/align] [/td][td] [align=center]19[/align] [/td][td] [align=center]35[/align] [/td][td] [align=center]16[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]110[/align] [/td][td] [align=center]440[/align] [/td][td] [align=center]2.64[/align] [/td][td] [align=center]0.0100[/align] [/td][/tr][/table][align=left][/align][align=left][/align][align=left]4.2.2 B类不确定度评定[/align][align=left]样品初始液制备过程时，使用220g的电子天平称取10g的样品，加入到用250mL量筒量取的200mL灭菌生理盐水中。根据JJG 1036-2008《电子天平》和JJG196-2006《常用玻璃量器》，220g电子天平最大允许误差为0.0001g， 250mL量筒的容量允许差为1.0mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为 0.0001/[img=,19,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]=0.00058g、1.0/[img=,19,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]=0.58mL。初始液向平皿转移过程中，使用1mL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]量取1mL初始液至平皿中，根据JJG646-2006《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]》其容量允许差分别为0.015mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为0.015/[img=,19,30]http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img]=0.0087mL。[/align][align=left]稀释过程中相对标准不确定度：[/align][align=left]u[sub]B[/sub]=1/2 =0.0100[/align][align=left]4.3 合成不确定度[/align][align=left]合成相对标准不确定度：u [sub]cr[/sub]= ［0.01512+ 0.01002 ］1/2=0.10[/align][align=left]合成标准不确定度：u [sub]C[/sub]=2.74×0.10= 0.27[/align][align=left]4.4测量不确定度报告[/align][align=left]为保证置信概率达95%，取包含因子k=2，扩展不确定度为：U=ku[sub]C[/sub]=2×0.27=0.54。依据RB/T151-2016《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》规定，本次测量结果报告为：（2.74 log10±0.54 log10）CFU/g（包含因子k=2），转换成自然值取整数为200 CFU/g ~ 1900CFU/g（包含因子k=2）。[/align][align=left]5 结论[/align][align=left]影响卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度的因素比较多，除上述不确度来源外，还有培养基试剂、样品、次级取样、基质、随机误差等方面的来源，但它们对合成标准不确定度的贡献较少[sup][/sup]，所以本文主要对4.1中提到的不确定度来源进行分析。经过上述结果与讨论可以得出，重复性不确定度产生的主要原因是试验操作，因此在平常检验过程中要注意人员操作的规范性。[/align]

1．菌落总数的测定：是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

本人在深圳一个普通公司的检测中心（非官方组织），打算组织一次草根比对，涉及检测项目为药品细菌数、化妆品菌落总数、医疗器械生物负载、无菌检查中的一种或多种。1、样品为安瓿瓶或塑料袋装。2、收取的费用仅为快递费（样品快递到付）。3、开展的时间初步定为12月初。4、样品含菌种类可能较少、偏简单。5、出具的报告为加盖本中心检测报告专用章（电子扫描版）。现调查下：有多少实验室愿意参加？参加什么项目?

在营养琼脂平板上如何区分细菌,放线菌,酵母菌和霉菌的菌落?

各位同仁，新的地下水标准14848-2017，细菌总数改成了菌落总数，大家在做的时候是培养24小时呢还是48小时呢

做菌落总数时,平板上有些很小的点看起来不是圆形的,算不算一个细菌?

[align=center][font='calibri light'][size=21px]浅谈水中菌落总数的检测方法[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]之前在研究奶中菌落总数的检测方法的时候，偶然看到了水中菌落总数的方法，就想到既然都是液体，那是不是可以尝试用检测水中菌落总数的方法去检测牛奶中的菌落总数。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]我们先来看看水中菌落总数检测的方法。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]第一种：平皿计数法[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]这个计数法是通过数菌落，一个单菌落就代表原样品中的一个单细胞。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]方法：样品10倍稀释→1ml稀释样品+15ml营养琼脂（45℃）混合→冷却凝固→37℃，48h培养。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]之后根据稀释倍数和取样接种量换算样品含菌数。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]第二种：酶底物法[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]原理：不同细菌分泌的不同产物可分解不同底物产生同一种信号——荧光，此信号可以在366nm的紫外灯下显示，数对应荧光孔数查MPN表得结果，稀释水样范围＜738MPN/mL。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]方法：1mL待测水样+9mL无菌水摇匀（培养基）→倒入定量盘，水平摇晃将液体充满孔槽→竖盘，棉条吸取多余水分→反向放置→37℃，48h培养→用366nm紫光灯照射，数带有荧光孔的数量。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]当时看到这个方法之后，就想到是不是能用这个方法检测牛奶的细菌总数，然后询问了一下师傅，才知道平皿计数法可以用于牛奶细菌总数的检测，但是酶底物法不太合适。因为水中除了细菌分泌产生的东西外，没有其他的物质。但是牛奶不一样，牛奶中含有脂肪，蛋白质，乳糖，矿物质等其他的物质，如果使用酶底物法会产生较大的误差，不适合牛奶的细菌总数的检测。[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px]虽然没有发现新的检测牛奶中细菌总数的方法，但是也学会了水中菌落总数的方法，希望能够对各位朋友提供帮助。[/size][/font][/align]

测定菌落总数便于判明样品被污染的程度，是对化妆品进行卫生学总评价的综合依据。化妆品菌落总数检测所用到的培养基是卵磷脂、吐温80——营养琼脂培养基，并且需要在培养基里添加TTC（2,3,5-三苯基氯化四氮唑）。首先我们先聊聊为什么要用到卵磷脂、吐温80——营养琼脂培养基，而不是营养琼脂NA（培养细菌用的培养基），化妆品中一般含有防腐剂，防腐剂能够抑制细菌的生长，而卵磷脂能够中和防腐剂，能将潜在的被抑制的细菌复苏，这样才能真正体现化妆品被污染程度。另外我们还需要添加显色剂TTC（2,3,5-三苯基氯化四氮唑），因为很多化妆品本身就带有颜色，不加TTC的话很难看出是否有菌生长，便于区别化妆品中的颗粒与菌落，一般每100ml卵磷脂、吐温80——营养琼脂培养基加入1ml 0.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。注意的是，添加TTC溶液的时候不能过多，过多可抑制细菌生长。对于要做菌种鉴定的，尽可能不使用含有TTC的菌落来进行鉴定。

本课内容：菌落总数测定的一些要点根据食品卫生标准要求和对样品污染情况的估计，选择2~3个稀释度。加入样品时要注意外来的污染。培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。（倾注的温度：一般35~45℃，温度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡。厚度：直径9cm的平皿一般要求15~20mL培养基，若培养基太薄，在培养过程中可能因水分蒸发而影响细菌的生长）。为防止细菌增殖及产生片状菌落，在加入样液后，应在15min内倾注培养基。检样与培养基混匀时，可先向一个方向旋转，然后再向相反方向旋转。旋转中应防止混合物溅到皿边的上方。l培养基凝固后，应在尽快将平皿翻转培养，保持琼脂表面干燥，尽量避免菌落蔓延生长，影响计数。l为控制污染，在实验过程中，应在工作台上打开一块琼脂平板，其暴露时间应与检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长时间相当，然后与检样一同培养，以了解检样在操作过程中有无受到来自外界的污染。培养温度:每种不同样品中的细菌都有一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及生理条件可能得出不同的结果，因而应根据检测标准的要求选择适当的培养温度和培养时间。l食品：36±１℃，48±2h 。l饮用水：36±１℃，48h 。l水产品：30±１℃，72±3h。(36℃培养和30℃培养结果差别较大，同样水产品48h结果和72h也有差别。对照试验：l检样的稀释液中往往带有食品颗粒，在这种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作一检样对照，不经培养，置4℃环境放置，在计数时用于对照。l或可选用TTC营养琼脂作培养基。菌落计数：l如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度平板上的菌落数高，则说明检验过程中可能出现差错或样品中含抑菌物质，这样的结果不可用于结果报告。l如果平板上出现链状菌落，菌落间没有明显的界限，这可能是琼脂与检样混匀时，一个细菌块被分散所造成的。一条链作为一个菌落计。若培养过程中遭遇昆虫侵入，在昆虫爬行过的地方也会出现链状菌落，也不应分开计数。l如果平板上菌落太多，不能计数时，不能用多不可计作报告。应在最高稀释度平板上任意选取2个1cm2的面积，计算菌落数，除2求出每cm2面积内平均菌落数，乘以63.6(皿底面积cm2数)。l如果检样是微生物类制剂（酸牛奶、酵母制酸性饮料等），在进行菌落计数时应将有关微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可并入检样的菌落总数内作报告。每个样品从开始稀释到倾注最后一个平板的时间不得超过15min,目的是为了使菌落能在平板上均匀分布，否则，时间放长了，样液可能由于干燥而贴在平板上，倾注琼脂后不易摇开，容易产生片状菌落，影响菌落计数。另外，琼脂凝固后不要在室温长时间放置，应及时将平皿倒置培养，可避免菌落的蔓延生长。检验过程中应用稀释液做空白对照，用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。同时，检验过程中应在工作台上打开一块空白的平板计数琼脂，其暴露时间应与检验时间相当，以了解检样在检验过程中有无受到来自空气的污染。检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌发生混淆，可以作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4℃冰箱放置，以便在计数时用作对照。另外也可以在已熔化而保温在45℃水浴内的平板计数琼脂中，按100ml加1ml0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培养后食品颗粒不变色，细菌为红色。

一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。

[img=,690,112]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404091628166498_4458_5519762_3.png!w690x112.jpg[/img]1、给定一个洁净室，对其进行浮游菌采样，采样后TSA平皿按上述标准培养，请问培养后菌落里是否可能有致病菌？因为采样器是不分辨空气中细菌种类（全量采集），谁也不知道空气中是否有致病菌，是不是培养后有可能有致病菌。2.还有TSA培养基限制致病菌繁殖吗？3.还有菌落计数后的样品，是否不管其是否潜在涉及致病菌，都要高温灭菌后，当危险废物处理，还是确认不涉及致病菌后，计数后不高温灭菌，当危废处理？不太懂微生物，求教。

一、细菌的分布： 微生物种类繁多，繁殖迅速，分布广泛，不论自然界的空气、土壤、水，生活中的食物、各种物体和器械表面，以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微生物，其中以细菌、放线菌最多。因此，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。 （一）空气中细菌的检查（设计性实验选题） （二）水中细菌的检查（设计性实验选题） （三）人体皮肤表面细菌的检查（设计性实验选题） 【附录】细菌菌落的计数方法 ①选择生长均匀，无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察，用记号笔在平板底上进行点数（以免遗漏），然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。 ②如菌落多而密集，可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线，分为http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123705956.gif四区，再分别选择菌落密集和稀疏的两个区，再做平分线，使每一小区为平皿面积的1／8 或1／16，然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数，所得数乘以8或16，即为该平皿的菌落总数。（图４-1） ③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上，计算10个小方格内的菌落数，如为30个，则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米，则半径为4.5厘米，整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×（4.5）2=191个菌落。二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系，当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖；当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境，来抑制或杀灭微生物，以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。 （一）物理因素对细菌的影响 1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验 （二）化学因素对细菌的影响 化学消毒剂的杀菌作用（三）生物因素对细菌的影响 噬菌体的特异性裂解细菌试验 【材料】大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。 【方法】 （1）将琼脂平板划分成三等份，注明1、2、3。 （2）分别以接种环取菌后，在1、3处涂布痢疾杆菌，2处涂布大肠杆菌。http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123903343.gif（3）分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央，（注意不要交叉污染），另取一接种环的肉汤放于3处中央。 （4）置37℃孵育24小时后取出，观察噬菌斑出现的位置（见图4-2），并记录之。 （四）细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法 　　又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌圈。测量抑菌圈的大小，即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。 【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18～24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子；含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 【方法】 （1）将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。 （2）将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面，相互间应间隔一定距离。 （3）37℃培养24小时后，观察结果。 【结果】 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见表4-1 （五）中草药对细菌的抑菌作用测定

各位专家们，今天做的微生物菌落总数实验，培养基在培养48h后，出现培养基表面出现细菌生长，但是在倾注培养基的时候，我有在凝固的培养基表面又覆盖了一层培养基，请教这是什么原因造成的？

一固体样品作菌落总数测定，其中10-1平板菌落数多不可计，10-2平板菌落数为271,10-3平板菌落数为60，则该样品菌落总数( )个/g。 A、27000 B、27100 C、60000 D、43550

1．固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后，单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团，称为菌落（colony）。(1)菌落的形态特征：大小、形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等）、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。据细菌菌落表面特征不同，可将菌落分为3型： ①光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型，如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征：菌落溶血有下列3种情况。①α溶血：又称草绿色溶血，菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致；②β溶血：又称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环，是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致；③γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化，红细胞没有溶解或缺损。(3)色素：有些细菌产生水溶性色素，使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色，产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味：某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味，如铜绿假单胞菌（生姜气味）、变形杆菌（巧克力烧焦的臭味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）、白色假丝酵母菌（酵母味）和放线菌（泥土味）等。