线性质粒

质粒提取失败可能由多种因素引起，这些因素可以大致分为三个类别：细菌培养条件、提取操作步骤以及使用的试剂和工具。识别并解决这些问题，有助于优化实验流程，确保质粒DNA提取的成功。

质粒DNA提取可以：（1）快速纯化质粒；（2）用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

二、实验原理：重组子的建立：采用双酶切 质粒 载体pBR322和pUC18,酶切后产生了互补的粘性末端,在T4 DNA 连接酶的作用下,两个质粒片段连接.感受态细胞(Competent cells)：受体细胞经过一些特殊方法(如：CaCl,RuCl等化学试剂法)的处理后, 细胞膜 的通透性发生变化,成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) .转化(transformation)：是将异源DNA分子引入一 细胞株 系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段,是基因工程等研究领域的基本实验技术.电转化法：使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞,通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞.克隆的筛选：主要用不同 抗生素 基因筛选.常用的 抗生素 有：氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素等；重组质粒克隆的鉴定：鉴定带有重组质粒克隆的方法常用的有α -互补、小规模制备质粒DNA进行酶切分析、插入失活、PCR以及杂交筛选的方法.最常用的方法是小规模制备质粒DNA进行酶切分析,对于带有LacZ基因的载体还可以结合α -互补现象来筛选.

在质粒提取实验中，如果无法检测到质粒DNA，可能是因为质粒没有成功提取或者提取的质粒DNA受到了污染。

有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此，不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落，另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。

质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。

本文使用生物惰性液相色谱仪分析质粒三种构型，通过优化色谱柱温度，使3种状态质粒分离度均大于1.5，实现基线分离。质粒样品重复分析6次，保留时间RSD小于0.1%，峰面积RSD小于1.80%，重复性结果佳。此方法适用于质粒样品的分析。

质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA 片段( ＜10kb) 且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆，从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段，然后体外使两者相连接，再用所得到重组质粒转化细菌，即可完成。但在实际工作中，如何区分插入有外源DNA 的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA 片段和载体DNA 的浓度比例，可以将载体的自身环化限制在一定程度之下，也可以进一步采取一些特殊的克隆策略，如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化，还可以利用遗传学手段如α 互补现象等来鉴别重组子和非重组子。

不同公司的质粒提取试剂盒中溶液成分可能有所差异，比如P1中可以去除掉葡萄糖，溶液PE甚至可以直接用水来代替等等。质粒提取实验是分子生物学中的基本且重要的实验，尽管实验本身简单，但其原理还是有些复杂的。只要清楚实验的原理，当实验出现问题之时，会能够更容易找到原因并给予纠正。

以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管

质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀，从而可通过低速离心加以分离（实例请见Kondo et al. 1991)。

过调节中空纤维TFF操作条件，包括膜截留分子量（MWCO）、跨膜压（TMP）、洗滤缓冲液离子强度以及料液载量，成功对RNA进行了清除处理，而无需额外添加RNase A或长时间孵育。此外，结合添加CaCl2，可获得更高纯度的质粒溶液。

实验方法原理:1、碱变性法提取质粒DNA：细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭（EB）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。2、琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳技术（Agarosegelelectroghoresis）是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。凝胶分辨率决定于使用材料的浓度，并由此决定凝胶的孔径。琼脂糖凝胶可分辩0.1——6.0kb的双链DNA片段。琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。它首先利用琼脂糖的分子筛效应，此外，在弱碱性条件下，DNA分子带负电荷，从负极向正极移动。根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同，它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。借助溴化乙锭（EB）能与双链DNA结合的作用，利用EB染色，并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。

闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA（cccDNA）、线性质粒DNA（L-DNA）和开环质粒DNA（ocDNA）。

不同植物带土壤颗粒分布及粘性、理化性质是有差异的，对所选地段土壤颗粒组成进行粒度分析，以便进行后续养分含量的测定。Fritsch激光粒度仪Analysette 22测量重复性和再现性好，准确度和精度高，很好的满足了试验的需求。

制备了多壁碳纳米管修饰玻碳电极(MWN T sö GC) , 并研究了杨梅酮在MWN T sö GC 上的电化学性质。方法:采用循环伏安法对杨梅酮的浓度进行测定。结果: 氧化还原峰电流与杨梅酮的浓度呈线性关系。结论: 多壁碳纳米管对杨梅酮有良好的催化活性,MWN T sö GC 对于测定杨梅酮呈现良好的响应特性和较高的测定灵敏度, 该传感器应用于杨梅酮的分析。

在pH = 4. 0 的Britton2Robinson (B2R) 缓冲体系中,应用循环伏安法、示差脉冲伏安法和紫外光谱法对大黄酚与牛血清白蛋白(BSA) 相互作用的电化学/ 光谱性质进行研究. 结果表明,二者结合生成了一种非电活性的超分子化合物.BSA 的存在导致大黄酚氧化还原峰电流降低,峰电位基本不变,峰电流的下降值同所加入的BSA 浓度在一定范围内呈线性关系. 线性范围为5. 0 ×10 - 6～1. 0 ×10 - 7 mol/ L ,检出限为3 ×10 - 7 mol/ L.

在pH 4. 0 的Britton - Robinson (B - R) 缓冲体系中,应用循环伏安法和示差脉冲伏安法对大黄酚与牛血清白蛋白(BSA) 相互作用的电化学性质进行研究. 结果表明,二者结合生成了一种非电活性的超分子化合物,同时对结合反应的机理进行了探讨.BSA 的存在导致大黄酚氧化还原峰电流降低,峰电位基本不变,峰电流的下降值同所加入的BSA 浓度在一定范围内呈线性关系. 线性范围0.000005mol/ L～0.0000001mol/ L ,检出限0.0000003mol/L.

本文主要参照文献合成了杂多酸盐K6[P2W18O62]14H2O（简称POM-1），研究了它的电化学性质及其对H2O2、NaNO2、KBrO3和KIO电催化性质，并基于静电之间的相互作用在玻碳电极的表面进行了杂多离子P2W18O626-和PDDA（聚二烯丙基二甲基铵）包裹的Fe3O4（以下简Fe3O4纳米粒子）的(layer-by-layer)组装，具体内容主要包括以下几方面1.依据文献报道，合成了Dawson结构杂多酸盐：K6[P2W18O62]14H2O并对它进行了红外和紫外光谱表征。2.研究了K6[P2W18O62]14H2O的电化学性质，并考察了它对H2O2、NaNKBrO3和KIO3的电催化性质。3.依据文献报道，合成了PDDA包裹的Fe3O4纳米粒子，并用扫描电镜对进行了形貌研究。4.依据文献报道的方法，在石英玻璃的表面进行了P2W18O626-杂多阴离和Fe3O4纳米粒子的层层（layer-by-layer）自组装，并用紫外光谱监控多层膜的生长过程和膜的均一性。同时用X光电能谱考察了石英基底面多层膜的主要元素成分。5.利用杂多阴离子P2W18O626-和Fe3O4纳米粒子在玻碳电极的表面进行了层自组装，并对它在溶液中的电化学性质进行了一定的研究。

使用光反应评价装置Lightway可以观测P型和T型光致变色化合物在光线照射后出现的光学物理性质变化。P型会因为光线照射而发生可逆性变化，T型在因光线照射发生光学物理性质变化后，通过受热恢复原状。T型光致变色化合物 ，复原所需的时间取决于因光线照射而发生变化的结构。

摘要：针对高真空度用皮拉尼计和电离规信号的非线性和线性两种输出规格，为改进高真空度的测量和控制精度，本文提出了线性化处理的解决方案。解决方案的关键是采用多功能超高精度的真空压力控制器，具体内容一是采用控制器自带的最小二乘法多点拟合功能来进行高真空区间的非线性处理，二是采用控制器的数值转换功能对真空度对数线性输出进行相应测试量程转换。此解决方案还可以推广应用于其他具有非线性输出性质的传感器中。

用线性扫描极谱法研究盐酸西替利嗪的电化学行为。在0.20mol/LHOAc- NaOAc(pH4.43)缓冲溶液中, 盐酸西替利嗪于- 1.74V(vs.SCE)处产生一灵敏的吸附波, 在1.6～24mg/L 范围内峰电流与其浓度呈良好的线性关系, 相关系数r=0.9952,检出限为1.2mg/L。对4mg/L 盐酸西替利嗪溶液进行6 次平行试验, 相对标准偏差RSD 为0.62%, 回收率在98.6%～100.7%之间。该法可用于片剂中盐酸西替利嗪含量的方便准确测定。

溶剂分子性质与界面内层微分电容变化特性 依照前文设立的偶极取向分布模型，利用模拟的C1(б)假想曲线阐析溶剂分子性质对电极/溶液界面内层微分电容的影响趋势。理想的C1(б)拟合曲线表现出单峰或双峰的两种基本式样，而溶剂分子的极化，各态偶极取向的差别以及偶极间的相互作用均将导致C1(б)曲线明显形变。据此，可从分子的性质预测各类电极/溶液界面体系C1(б)曲线变化特性。

本研究中的结果涉及所选无机玻璃中Pr3+离子的可见光和近红外发射，即具有Ga2O3和BaO的硼酸盐基玻璃、具有Ga2O3的磷酸铅玻璃、由BaO/BaF2改性的锗酸镓玻璃和基于InF3的多组分氟化物玻璃。玻璃在蓝色、红橙色和近红外光谱范围内呈现多个发射带，对应于Pr3+的4f–4f电子跃迁。发射带的轮廓及其相对强度比强烈依赖于玻璃基质。Pr3+离子的可见光发射从硼酸盐基玻璃的红色/橙色调谐到基于InF3的多组分氟化物玻璃的近白光。1G4对应的光通信窗口处的近红外发光带的位置和光谱线宽→ 1G4 → 3H5, 1D2 → 1G4,和3H4 → 3F3,3F4→ Pr3+的3F3，3F4跃迁取决于玻璃基质和激发波长。基于InF3的低声子氟化物玻璃和具有BaO/BaF2的锗酸镓玻璃是宽带近红外光学放大器的优秀候选者。比较和讨论了Pr3+掺杂玻璃的光谱性质及其潜在的光学应用。

展示BioAccord?系统在非变性条件下分析抗体偶联药物(ADC)的性能。药物/抗体比率(DAR)是ADC的一种关键质量属性(CQA)，因为它直接影响ADC的治疗效果和药代动力学。在ADC开发过程和商业化生产运营中，DAR的测定（和监测）至关重要。 非变性电喷雾质谱（非变性质谱）已成为分析共价复合蛋白质治疗药物和非共价蛋白质复合体的有力工具。在非变性质谱条件下，使用兼容MS的非变性缓冲体系对蛋白质进行电喷雾电离。这些LC-MS分析条件使许多蛋白质能够保持折叠状态，这些状态表现出特征性低电荷态，与分析变性蛋白相比，需要在更宽和更高的质荷比(m/z)范围内具有出色的灵敏度。非变性质谱面临多种独有的难题，包括在尝试使用注入式MS时，需要在分析前进行大量样品净化，并要求操作人员拥 有更高的技术水平以获得并解析实验结果。 之前，我们致力于通过将在线SEC与现有MS 技术联用来简化非变性质谱数据的采集，促进样品脱盐和缓冲液交换，以研究半胱氨酸偶联ADC药物。

通过SPM-Nanoa的高速力学性质成像，在21分钟的短时间内实现不同物理性质的高分子材料的物理性质测定，实现高像素可视化。通过高速物理性质成像可以实现您“想观察”的愿望。

酸奶杯产品多采用六连杯、八连杯等多连杯方式，其外部常使用热收缩膜包裹，以求达到紧致美观的效果，防止酸奶杯散落或损坏。热收缩膜在使用过程中是否具有较好的贴合效果及紧致力，需要监测其收缩率、收缩力等指标。本文采用多功能薄膜热缩性能测试仪，结合ISO 14616标准验证了酸奶八连杯外部热收缩膜各项收缩性能，详细介绍了设备的测试原理、参数及测试过程，可为收缩膜生产及应用行业提供技术参考。

本文研究了麦芽糊精添加量对喷雾干燥桃全粉水分含量、色译、粒径分布、微观结构、玻璃化转变温度、流动行为及水分吸附特性等物理性质的影响。结果表明:麦芽糊精对喷雾干燥桃全粉物理性质具有显著影响,当麦芽糊精添加量从4%增至16%时,桃全粉的水分含量降低35.28%,玻璃化转变温度升高4.84℃,基本流动能降低29.24%,水分吸附量降低23.53%。此外,色泽、粒径分布、微观结构等均随之改变。综合桃全粉的物理性质,选择麦芽糊精添加量为12%,在该比例下生产的桃全粉品质较好。本试验为桃全粉的加工提供参考数据。加工品质仇良的桃全粉必须严格控制麦芽糊精的添加量。

在表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 存在下,利用N2H4 H2O 还原H2SeO3 合成出单质硒纳米管,然后以硒纳米管为模板,与Pb(NO3 ) 2 和N2H4 H2O 在常压低温下反应,制备了PbSe 纳米棒。采用电子透射电镜、X射线衍射等方法对产物进行了表征。探讨了PbSe 纳米棒的形成机理和制备反应的影响因素。测定了产物的荧光性质,并利用电位扫描伏安法研究了所得PbSe 纳米棒的电化学性质。结果表明,所得产物在碱性介质中电化学活性较高,在循环伏安曲线上出现明显的氧化峰和还原峰。

Schiff碱及其过渡金属配合物具有抗病毒、抑制细菌生长等生物活性。桥联多核配合物的研究位于生命与材料科学的交汇点，特别是多核偶合体系的研究是设计分子材料的基础。具有酚氧桥基的多核配合物的研究已成为配位化学家关注的热点之一。3-羧基水杨醛胺类Schiff碱及其配合物已得到深入的研究，如果在3-羧基水杨醛上引入一个供电子甲基，则必将改变Schiff碱的碱性和配位场强，从而引起配合物性质的改变。鉴于以上原因，本文设计并合成了5-甲基-3-羧基水杨醛，并合成了它的二胺Schiff碱及其配合物，同时对这些化合物进行了结构表征和性质研究，主要内容如下：(1)通过自组装的方法得到了单核配合物Cu(OS)?H2O，其中H2OS为N,N’(双水杨醛)缩邻苯二胺Schiff碱配体，并用元素分析、IR光谱和X射线单晶衍射对其结构进行了表征。结果表明该晶系属三方晶系，空间群R-3，晶胞参数：a＝3137.41(2)pm，b＝3137.4 1(2)pm，c＝918.100(10)pm，α＝90°，β＝90°，γ＝120°，Z=18，R1=0.0425，wR2＝0.1044，Cu原子位于轻微变形的平面四方场中并偏离其最小二乘平面0.80pm，并通过π-π堆积作用形成了雪花状结构。(2)以3-羧基水杨醛缩甘氨酸Schiff碱H3GS为配体，合成了单核配合物Cu(HGS)?2H2O，用元素分析，IR光谱和X射线单晶衍射对其结构进行了表征。结果表明该晶系属单斜晶系，空间群P2(1)/c，晶胞参数：a＝848.46(3)pm，b＝681.54(3)pm，c＝1967.16(8)pm，α＝90°，β＝95.8210(10)°，γ＝90°，Z=4，R1=0.0279，wR2＝0.0724，Cu原子位于轻微变形的四方锥场底心，底面被氮原子、酚氧原子、甘氨酸羧基的一个氧原子和一个水分子氧原子占据，而甘氨酸羧基的另一个氧原子占据相邻分子的锥顶，因而形成一维链状结构；合成了单核双聚配合物Na2[Cu2(GS)2]?2H2O，铜三核配合物Cu3(GS)2?5H2O和铜锌异三核配合物ZnCu2(GS)2?5H2O，并用元素分析，IR光谱，电子光谱和磁化率测定对配合物的组河南大学2003级无机化学专业硕士论文张武成和结构进行了表征，磁性测定表明，铜三核配合物的铜离子间存在较强的反铁磁性自旋交换作用。(3)以N,N’-二(3-羧基水杨醛)缩环己二胺Schiff碱H4DS为配体，合成了双核配合物Cu2DS?2H2O和Ni2DS?4H2O，用元素分析，IR光谱和1H NMR对配体的组成及结构进行了表征，用循环伏安法测定了配合物Cu2DS?2H2O的电化学性质。(4)合成了5-甲基-3-羧基水杨醛，并用元素分析，IR光谱，1H NMR和MS对其组成和结构进行了表征，并用它与二胺反应得到三种Schiff碱配体：H4EMS(N,N’-二(5-甲基-3-羧基水杨醛)缩乙二胺Schiff碱)，H4TMS(N,N’-二(5-甲基-3-羧基水杨醛)缩丙二胺Schiff碱)，H4MEMS(N,N’-二(5-甲基-3-羧基水杨醛)缩1,2-丙二胺Schiff碱)，用元素分析，IR光谱，MS，1H NMR，13C NMR对其组成及结构进行了表征，并得到了6种双核配合物：Cu2EMS、Ni2EMS、Cu2TMS、Ni2TMS、Cu2MEMS、Ni2MEMS，用元素分析，IR光谱，紫外光谱研究了其组成及结构，并用热重分析和变温磁化率研究了其性质。(5)合成了三元配合物[Cu(phen)(L-phe)0.75(CH3CH2OH)]ClO4，(其中phen为邻菲咯啉，L-phe为L-α苯丙氨酸)，用元素分析，IR光谱，X射线单晶衍射测定了其结构，结果表明：该晶系属单斜晶系，空间群P2(1)，晶胞参数：a＝584.92(2)pm，b＝2038.04(5)pm，c＝966.68(3)pm，α＝90°，β＝94.276(2)°，γ＝90°，Z=2，R1=0.0521，wR2＝0.1354，Cu原子位于变形的四方锥场底心并偏离其最小二乘平面23.08 pm；合成了Na[Cu(phen)(ssal)]?2.5H2O，Na[Cu(Nphen)(ssal)]?3H2O，(其中ssal为磺基水杨酸，Nphen为5-硝基邻菲咯啉)，用元素分析，IR光谱，紫外光谱表征了其组成及结构，用热重分析研究了其性质。